Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-03T09:09:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-03T09:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) Previous issue date: 2010-04-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A invasão de plantas exóticas representa uma das maiores ameaças para a biodiversidade do planeta. Muitos países enfrentam situações graves com invasões biológicas promovidas por plantas nativas do Brasil que, depois de introduzidas a partir de seu centro de origem, livres de seus inimigos naturais, passaram a invadir ecossistemas naturais ameaçando a sua integridade e processos ecológicos fundamentais. A utilização das medidas de controle convencionais, utilizadas na agricultura é, nesses casos, contra- indicada ou inviável. O controle biológico clássico pela introdução de inimigos naturais específicos provenientes do centro de origem da planta é a única opção que apresenta exemplos de sucesso duradouro e é reconhecidamente sustentável. Fungos associados a três espécies de plantas invasoras (Rottboellia cochinchinensis capim-camalote, Tradescantia fluminensis trapoeraba branca e Schinus terebinthifolius aroeira) foram estudados no contexto do controle biológico clássico com o propósito de contribuir para a mitigação de invasões nos EUA e Nova Zelândia e os resultados são aqui apresentados. Um hifomiceto foi descoberto atacando R. cochinchinensis no Brasil e sua identidade foi esclarecida como sendo Bipolaris chloridis. Este fungo nunca havia sido antes relatado no Brasil e nem sobre este hospedeiro. Ele se mostrou capaz de atacar outras gramíneas além de R. cochinchinensis, milho e capim de Rhodes (seu hospedeiro originalmente conhecido). As implicações desta descoberta para o controle biológico foram discutidas. Sobre T. fluminensis foram encontrados nove espécies de fungos durante o levantamento: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp.nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. e Uromyces commelinae. A taxonomia da nova espécie Kordyana brasiliensis foi esclarecida por exames morfológicos e estudos moleculares (com a utilização dos primers NL1 e NL4) e o fungo se mostrou promissor como agente de biocontrole, sendo específico para T. fluminensis (entre 69 espécies testadas de 32 famílias botânicas) e capaz de causar uma doença severa sobre este hospedeiro. Sob condições de infecção natural o fungo apresentou uma incidência de doença na ordem de 70% e causou severidade média de 42% em 200 folhas avaliadas. Os levantamentos da micobiota de S. terebinthifolius, revelaram uma grande diversidade de fungos potencialmente fitopatogênicos. Dentre estes, no presente trabalho, examinou- se com atenção os fungos coletados reconhecidos como pertencentes à família Meliolaceae e também, considerando-se o seu aparente potencialpara o controle biológico,um isolado de Corynespora cassiicola causador de doença severa sobre S. terebinthifolius. Três espécies de fungos causadores de míldio negro (uma doença de pequeno impacto sobre S. terebinthifolius) foram encontradas colonizando S. terebinthifolius em várias regiões do Brasil: Irenopsis schini-terebenthifolii sp. nov, Meliola chilensis e Meliola rhois var. africana. A primeira espécie foi reconhecida como nova e descrita enquanto que as duas demais foram reconhecidas como representando novas associações patógeno-hospedeiro, pois os fungos não eram conhecidos ainda sobre S. terebinthifolius. A morfologia de um hifomiceto associado a manchas e queimas foliares de S. terebinthifolius foi reconhecida como equivalente à dos fungos da espécie C. cassiicola e confirmada por métodos moleculares envolvendo a utilização dos primers ITS1 e ITS4. Além disso, foi realizado um teste de especificidade envolvendo 23 espécies de plantas de diferentes famílias botânicas, inclusive Anacardiaceae, e o patotipo se mostrou especifico a S. terebinthifolius, sendo proposto o seu reconhecimento como C. cassiicola f. sp. schinii e também o seu potencial para utilização como agente de controle biológico para infestações de S. terebinthifolius na Flórida e Havaí (EUA). / Invansions of natural ecosystems by exotic plants represent one of the greatest threats to biodiversity. Many countries face serious problems with such biological invasions involving plants that are native from Brazil. After its having been introduced from their center of origin and free from their natural enemies they invade natural ecosystems and threaten the integrity of ecological processes. The conventional control measures used in agriculture, in ssuch cases, are not viable nor recommended. The classical biological control involving the introduction of specific natural enemies from the center of origin of the plant is the only option that provides examples of success and is widely recognized as the sole sustainable alternative. Fungi associated with three weed species (Rottboellia cochinchinensis - Itchgrass, Tradescantia fluminensis - wandering jew and Schinus terebinthifolius - brazilian pepper tree) were studied in the context of biological control with the aim of contributing to the mitigation of invasions in the U.S., New Zealand and Brazil and the results are presented herein. A hyphomycete was discovered attacking R. cochinchinensis and identified as Bipolaris chloridis. This fungus has never been reported before from Brazil nor on this host. This fungus was able to attack other grasses besides R. cochinchinensis, namely corn and rhodes grass (its original host ). The implications of these finding for biological control were discussed. In T. fluminensis, nine species of fungi were collected during the survey: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp. nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. and Uromyces commelinae. The taxonomy of the new species Kordyana brasiliensis was clarified by examinations of morphological characters and molecular studies (using the primers NL1 and NL4). This fungus was regarded as showing a high potential for use in biocontrol agent. It was specific to T. fluminensis (among 69 species tested from 32 botanical families) and capable of causing severe disease on this host. Under conditions of natural infection bu this fungus an incidence of 70% and a level of 42% of disease severity was reached. Surveys of the mycoflora S. terebinthifolius showed a great diversity of potentially pathogenic fungi among which are fungi belonging to a poorly known group of ascomycetes causing black mildews, the Meliolaceae. Three species were found on this host: Irenopsis schini- terebenthifolii sp. nov., Meliola chilensis and Meliola rhois var. africana. The first species was described as new whereas the other two were new host-pathogen associations. The potential for practical application in biological control of an isolate of Corynespora cassiicola found causing a severe disease on S. terebinthifolius. was investigated. Its identity was confirmed as C. cassiicola by a combination of morphology studies and molecular methods involving the use of primers ITS1 and ITS4. In addition, we performed a specificity test involving 23 species of plants of different botanical families, including several Anacardiaceae. The isolate from S. terebinthifolius was shown to be host- specific and the new forma specialis C. cassiicola f. sp. schinii was proposed. Its potential for use as biological control agent for infestations of S. terebinthifolius in Florida and Hawaii (USA) was regarded as high.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-07T17:49:19Z No. of bitstreams: 1 2014_MarcellaTelesdosReis.pdf: 3786731 bytes, checksum: 10325c274157e8e088a67c87d434c89c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-05-15T14:34:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MarcellaTelesdosReis.pdf: 3786731 bytes, checksum: 10325c274157e8e088a67c87d434c89c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-15T14:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MarcellaTelesdosReis.pdf: 3786731 bytes, checksum: 10325c274157e8e088a67c87d434c89c (MD5) / O Brasil se destaca no cenário mundial como um dos principais produtores de feijão. Entretanto, vários problemas fitossanitários contribuem para redução da renda líquida auferida na exploração da cultura, entre os quais, o mofo branco e a podridão de escleródio, causadas pelos fungos Sclerotinia sclerotiorum (SS) e Sclerotium rolfsii (SR), respectivamente, reconhecidas como principais doenças do feijão. O controle biológico, pelo uso de Trichoderma tem sido proposto como um dos métodos de manejo das doenças. Espécies desse gênero possuem grande importância agronômica e atuam como decompositores primários de matéria orgânica, destacando-se também pela produção de metabólitos e enzimas com propriedades antifúngicas. Em face disso, o trabalho foi conduzido com o objetivo de identificar isolados de Trichoderma com potencial de uso contra SS e SR. Cento e quarenta e nove isolados foram testados in vitro e 50 destes foram pré-selecionados e identificados com base no seqüenciamento das regiões ITS e TEF do rDNA. Dentre esses, foram identificadas sete espécies do gênero Trichoderma: T. harzianum, T. stromaticum, T. koningiopsis, T. asperellum, T. tomentosum, T. spirale e T. erinaceum. Vinte isolados foram testados em casa de vegetação. Resultados desse estudo mostram que, in vitro, 10,6% dos isolados testados contra SS e 14% contra SR apresentaram nota 1 no pareamento de cultura; 15,33% dos isolados para SS e 4,6% para SR mostram níveis elevados de antagonismo quanto a inibição micelial do patógeno por metabólitos não-voláteis. Dos 20 isolados selecionados para os estudos em casa de vegetação, quatro se destacaram: CEN207 (T. koningiopsis), CEN188 (T. spirale), CEN200 (T. koningiopsis) e CEN189 (T. spirale) sobre os demais quanto a promoção de crescimento. A técnica de identificação por MALDI TOF MS foi utilizada com oito dos isolados de Trichoderma previamente identificados com base no sequenciamento de fragmentos do DNA, agrupando-se de acordo com as espécies, conforme o esperado e formando clados no dendograma. Metabólito bruto extraído do isolado CEN277 (T. asperellum) foi analisado em HPLC e mostrou grande potencial quanto à inibição do crescimento micelial de S. sclerotiorum. As técnicas utilizadas com cromatografia líquida e MALDI TOF MS, embora iniciais, proporcionaram resultados interessantes e necessitam de mais dedicação para a obtenção de resultados conclusivos na identificação das moléculas envolvidas. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil stands out in the global scenario as one the leading producers of beans. However, many phytossanitary problems contribute to a reduction of yield, including white mold and sclerotia rot, caused by the fungi Sclerotinia sclerotiorum (SS) and Sclerotium rolfsii (SR) respectively, whith are recognized as major bean diseases. Biological control using Trichoderma has been proposed as a method of managing these diseases. Species of this genus are, of great agronomic interest and act as primary decomposers of organic material and are, also highlighted by the production of enzymes and metabolites with antifungal properties. For this reason, this study was conducted in order to identify Trichoderma isolates able to implement the biocontrol of these diseases. One hundred forty-nine isolates were tested in vitro and 50 of these were pre-selected and identified based on sequencing of the TEF and ITS regions of rDNA. Seven species of Trichoderma have been identified based on molecular characterization: T. harzianum, T. stromaticum, T. koningiopsis, T. asperellum, T. tomentosum, T. spirale and T. erinaceum. Among fifty isolates, 20 were tested under greenhouse conditions. Results of this study show that, in vitro, 10.6% of the isolates tested against SS and 14% against SR reached note 1 in paired culture; 15.33% of the isolates for SS and 4.6% for SR show elevated levels of antagonism regarding pathogen mycelial inhibition by non-volatile metabolits. From 20 isolates selected for studies under greenhouse conditions, four stood out compared to others, as promoting growth: CEN207 (T. koningiopsis), CEN188 (T. spirale), CEN200 (T. koningiopsis) and CEN189 (T. spirale). The technique of identification by MALDI TOF MS was used with eight isolates of Trichoderma previously identified based on DNA sequencing, grouped according to the species, as expected forming a clade on the dendrogram. Crude metabolite extracted from the CEN277 (T. asperellum) was analyzed by HPLC and showed great potential for the inhibition of mycelial growth of S. sclerotiorum. The techniques used in liquid chromatography and MALDI TOF MS, although preliminars, have provided interesting results and motivate further studies to identils the involved molecule.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-22T19:45:47Z No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:53:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:59:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-23T14:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) Previous issue date: 2010-08-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Guaran´a is one of the most important crops in the state of Amazonas. Commercially, their use is as refrigerant, however, the industry of Guaran´a has been growing and diversifying its products, including the foreign market. The main disease that affects the culture of guarana is anthracnose, and its etiologic agent, is the pathogen Colletotrichum guaranicola. The main form of anthracnose control is the use of chemical fungicides, but in some regions, which have gained the recognition of organic agriculture, this control measure is not appropriate to the needs of production. Several species of genus Trichoderma, are antagonists used effectively in biological control of some plant pathogens, including the genus Colletotrichum. The presence of dsRNAs is common in fungi, being reported in the literature many studies associating them with various aspects of these hosts: hipovirulence morphological changes, the phenotype “ killer”in yeast, and others changes in these microorganisms. The main objective of this research was investigate the presence and influence of dsRNA on the antagonistic potential of Trichoderma spp. against C. guaranicola. We analyzed 100 isolates of Trichoderma spp., and only one presented dsRNA. The species was determined by sequencing the ITS region of rDNA and its micromorphological aspects (optical and electron microscopy) as Trichoderma asperellum. We proceeded to purify this material by column chromatography on cellulose and digestion with nucleases (DNase I and nuclease S1). To analyze the possible interference of these particles in the antagonistic potential of Trichoderma, the dsRNA was eliminated with sodium deoxycholate, added to PDA medium at a concentration of 200 mg / mL. Tests of antagonism in vitro (by the method of pairing in Petri dishes), showed a difference between inbred strains (with and without dsRNA) against the pathogen. In vivo tests, in plants of Mucuna aterrima, showed no statistical difference between the isolates with and without dsRNA. Morphological alterations were observed betweem isolates with and without dsRNA, the absence of dsRNA showed higher mycelial growth and higher production of spores. Based on these results it was concluded that dsRNA present in T. asperellum interfere in its potential antagonist in vitro tests, but not to its performance in vivo tests. / O guaran´a (Paulinia cupana) ´e uma das mais importantes culturas do Estado do Amazonas. Comercialmente, sua utilizac¸ ˜ao ´e maior nos refrigerantes gaseificados, no entanto, a ind´ustria do guaran´a vem crescendo e diversificando seus produtos, inclusive no mercado internacional. A principal doenc¸a que afeta a cultura do guaran´a ´e a antracnose, sendo seu agente etiol´ogico o fitopat´ogeno Colletotrichum guaranicola. A principal forma de controle da antracnose ´e o emprego de fungicidas qu´ımicos, por´em, em algumas regi˜oes, que adquiriram o reconhecimento de cultura orgˆanica, esta medida de controle n˜ao se adequa `as necessidades da produc¸ ˜ao. As esp´ecies do gˆenero Trichoderma, s˜ao antagonistas utilizadas eficazmente no controle biol´ogico de algumas esp´ecies fitopatogˆenicas, incluindo o gˆenero Colletotrichum. A presenc¸a de dsRNAs ´e frequente em fungos, sendo relatada na literatura muitas pesquisas associando-os com v´arios aspectos nestes hospedeiros: fen´otipos hipovirulentos, alterac¸ ˜oes morfol´ogicas, o fen´otipo “killer” em leveduras, ou ainda, a nenhuma alterac¸ ˜ao nestes microrganismos. Esta pesquisa teve por objetivos investigar a presenc¸a e influˆencia de dsRNA sobre o potencial antagˆonico de Trichoderma spp. contra C. guaranicola. Foram analisados 100 isolados de Trichoderma spp., sendo que apenas um apresentou dsRNA. A esp´ecie foi determinada por sequenciamento da regi˜ao ITS do rDNA e seus aspectos micromorfol´ogicos (microscopia ´optica e eletrˆonica de varredura) como Trichoderma asperellum. Procedeu-se a purificac¸ ˜ao deste material por meio de cromatografia em coluna de celulose e a digest˜ao com nucleases (DNAse I e nuclease S1). Para analisar a poss´ıvel interferˆencia destas part´ıculas no potencial antagˆonico dos isolados de Trichoderma, eliminou-se o dsRNA do isolado infectado com a substˆancia desoxicolato de s´odio, adicionada ao meio BDA na concentrac¸ ˜ao de 200 mg/mL. Testes de antagonismo in vitro (pelo m´etodo de pareamento em placa), revelaram diferenc¸a entre as linhagens is´ogenas (com e sem dsRNA) contra o fitopat´ogeno. O teste in vivo, pelo m´etodo de adic¸ ˜ao de esporos de antagonista e fitopat´ogenos em plantas de Mucuna aterrima, n˜ao apresentou diferenc¸a estat´ıstica entre as li-nhagens. Morfologicamente houve alterac¸ ˜oes entre os isolados com e sem dsRNA, sendo que os sem dsRNA, apresentaram maior crescimento micelial e maior produc¸ ˜ao de esporos. Diante dos resultados obtidos concluiu-se que o dsRNA presente em T. asperellum interfere no seu potencial antagonista em testes in vitro, mas n˜ao no seu desempenho em testes in vivo.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:19Z No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-23T14:58:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) Previous issue date: 2016-03-10 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Paullinia cupana (guarana) is a tropical plant originated from the forest of the Brazilian Amazon. However, guarana production has been declining in the state of Amazonas, in comparison with the production of the State of Bahia. The main limiting factor of production and expansion in the state of Amazonas is anthracnose, caused by Colletotrichum guaranicola, which is considered the most serious disease of guarana culture. This study aimed to characterize the isolates of C. guaranicola pathogenic and endophytic, from guarana, considering cultural, morphological, molecular, enzymatic and histological aspects, in order to determine differences between pathogenic and endophytic. In the present work, 9 endophytic and 14 pathogenic isolated from C. guaranicola were obtained through indirect isolation of healthy leaves and guarana anthracnose symptoms. The isolates were characterized by morphological and cultural characteristics. The molecular identification involved PCR analysis using primers GACA4, GTG5 and M13. The enzyme activity, the following enzymes were tested: lipase, amylase, protease, polyphenoloxidase, cellulase and pectinase. The pathogenicity test was conducted in order to select one isolated pathogenic and one isolated endophytic for analysis of the pre-penetration process and colonization of the pathogen in the tissues of susceptible leaves (clone 300) of guarana. About the Morphocultura characterization, pathogenic and endophytic isolates presented great variability. The color of the colony and size of conidia differed between endophytes and pathogens. It was not possible to make a correlation with Morphocultural and molecular analysis with pathogenic and endophytic isolates. Genotyping confirmed that all isolates belong to the genus Colletotrichum, however, it was not possible to identify the isolated species level to the genre. There was no difference between the enzyme and endophytic pathogens, it is not possible to find correspondence with the infection process in guarana leaves. The period of 48 hours after inoculation allowed to verify 100% germination and appressorium formation in the isolated pathogenic, in addition to colonization in tissues of the plant, by contrast to the endophyte which showed lower percentages for germination and formation of appressoria, and it was not observed colonizing tissues 48 hours after inoculation. / Paullinia cupana (guaranazeiro), é uma planta tropical que se originou a partir da floresta da Amazônia brasileira. No entanto, a produção de guaraná tem vindo a diminuir no Estado do Amazonas, quando comparado com a produção do Estado da Bahia. O principal fator limitante da produção e expansão no Estado do Amazonas é a antracnose, causada por Colletotrichum guaranicola, que é considerada a doença mais grave da cultura do guaraná. Este trabalho teve como objetivo caracterizar os isolados de C. guaranicola patogênicos e endofíticos, provenientes de guaranazeiro, quanto aos aspectos culturais, morfológicos, molecular, enzimático e histológico, visando determinar diferenças entre o patogênico e o endofítico. Neste trabalho, nove isolados endofíticos e quartoze isolados patogênicos de C. guaranicola foram obtidos através do isolamento indireto de folhas de guaranazeiro sadias e com sintomas de antracnose. Os isolados foram caracterizados por meio das características morfológicas e culturais. A identificação molecular compreendeu a análise de PCR utilizando os primers GACA4, GTG5 e M13. Quanto a atividade enzimática, foram testadas as seguintes enzimas: lipase, amilase, protease, polifenol-oxidase, celulase e pectinase. Foi realizado o teste de patogenicidade com a finalidade de selecionar um isolado patogênico e um isolado endofítico para análise do processo de pré-penetração e colonização do patógeno nos tecidos das folhas suscetíveis (clone 300) de guaranazeiro. Quanto à caracterização morfocultural, os isolados patogênicos e endofíticos apresentaram alta variabilidade. A coloração da colônia e tamanho dos conídios diferenciou entre os endofíticos e os patógenos. Não foi possível fazer uma correlação com as análises morfocultural e molecular com os isolados patogênicos e endofíticos. A genotipagem permitiu confirmar que todos os isolados pertencem ao gênero Colletotrichum, entretanto, não permitiu identificar os isolados a nível de espécie para o gênero. Não houve diferença enzimática entre os endofíticos e patogênicos, não sendo possível encontrar correspondência com o processo de infecção nas folhas de guaranazeiro. O período de 48 horas após inoculação permitiu verificar 100% de germinação e formação de apressórios no isolado patogênico, além da colonização nos tecidos da planta, ao contrário do endofitico que apresentou porcentagens inferiores quanto a germinação e formação de apressórios, e não foi observado colonização dos tecidos 48 horas após inoculação.

Lippia alba (mill) N. E. Br. ex Britt l Wilson - Verbenaceae - é relatada como uma planta medicinal com efeito fungitóxico para vários fungos fitopatogênicos e entre esses Colletotrilhum gloeosporioides (penz), causador da doença"queda de frutos jovens de citros". Testes realizados a partir de duas formas de L. alba - forma 1 (F1) e forma 2 (F2) mantidos em contato com gotas de suspensão de conídios de C. glocosponcides, sobre superfície de poliestireno durante diferentes períodos de tempo, demonstraram que substância(s) presente(s) em folhas secas das duas formas de L. alba altera(m) o padrão de germinação dos conídios, aumentado o comportamento e a largura do tubo germinativa e impedindo a formação do apressório. A não formação de apressórios pelos conídios foi também demonstrada a partir do contato de extratos acetônicos, etanólicos e hexânicos com gotas de suspensão de esporos em lâminas de poliestireno. Utilizando-se esses extratos, sobre meio BDA em placas de Petri, verificou-se também o efeito dos mesmos sobre o crescimento micelial de C. gloeosporioides. O extrato etanólico mostrou-se como e mais eficiente na redução do crescimento micelial, enquanto que o extrato aquoso não exibiu efeito algum nesse sentido. Através de bioensaios para frações fungitóxicas, pelo uso de placas de cromato-grafia delgada, demonstrou-se também o efeito fungitóxico dos extratos provenientes das duas formas de L.alba. Com o aparecimento de diferentes zonas de inibição do crescimento de L. gloeosporioides, comprovando-se o efeito fungitóxico de todos os extratos inclusive o aquoso, para as duas formas de L. alba. A quantificação de proteínas e carboidratos totais, bem como análise de macro e micronutrientes realizadas nas folhas secas das duas formas de L. alba não forneceram evidências para se efetuar correlações sobre o papel desses compostos na atividade fungistática apresentada / not available

Este estudo teve como objetivos: investigar o método mais adequado para detecção de fungos associados às sementes de cana-de-açúcar; fazer o levantamento dos fungos associados às sementes e incidência; correlacionar a incidência fúngica nessas sementes e o ambiente onde foram produzidas; efeitos que fungos associados às sementes têm em sementes e plântulas; patogenicidade dos fungos mais freqüentes e sintomas que podem causar; determinar a sensibilidade dos principais fungos a fungicidas; determinar a fitotoxicidade de sementes e plântulas a fungicidas e propor o tratamento fungicida mais adequado para produção de plântulas vigorosas, sem sintomas, para os programas de melhoramento. Para avaliar o método mais adequado de detecção dos fungos, realizaram-se análises sanitárias utilizando combinações entre recipientes, substratos e regimes de luz. Para levantamento dos fungos associados e da incidência em sementes, realizaram-se análises sanitárias das sementes de 29 amostras e as incidências fúngicas obtidas foram comparadas com os dados climáticos do local onde foram produzidas as sementes. Os possíveis efeitos dos fungos às sementes e plântulas foram estudados por testes de sanidade e germinação de sementes, observando-se quais condições se apresentavam as sementes e plântulas que haviam incidência fúngica. A patogenicidade dos fungos, encontrados com maior freqüência, foi avaliada por inoculação de sementes através do contato com cultura em meio colonizado pelo fungo, posterior distribuição das sementes em substrato estéril e avaliação da emergência de plântulas e total de plântulas com sintomas e tipos de sintomas. Por meio de ensaios de fungitoxicidade in vitro , estudou-se a sensibilidade dos fungos, mais freqüentemente detectados em sementes, a nove fungicidas nas doses de 1, 10 e 100 ppm e determinação da ED50. Os fungicidas mais eficientes foram avaliados, in vivo, quanto a sua fitotoxicidade por meio da pulverização, em diferentes doses, em sementes distribuídas em substrato estéril. Foram avaliados: emergência, altura da parte aérea e comprimento da raiz das plântulas, total de plântulas com sintomas de fitotoxicidade e outros tipos de sintomas. Ao final, realizou-se validação, pulverizando-se o fungicida eficiente in vitro e não fitotóxico em sementes de cana-deaçúcar. Os resultados encontrados foram: a) o método escolhido para realização das análises sanitárias foi o de placas de Petri de plástico com papel de filtro como substrato e incubação a 28 ± 2°C sob regime de luz alternada (12h luz branca fluorescente/ 12h escuro); b) os gêneros fúngicos mais freqüentemente presentes nas sementes de cana-de-açúcar foram Bipolaris, Cladosporium, Curvularia, Fusarium e Phoma; c) não foi constatada relação entre incidência fúngica e ambiente de produção das sementes; d) a condição de semente de cana-de-açúcar mais comumente encontrada com presença de fungos associados foi a não germinada, independentemente do fungo avaliado. Houve baixa porcentagem de sintomas necróticos na parte aérea e raiz, no entanto, quando ocorreram, estavam associados às incidências dos fungos Bipolaris sacchari, Curvularia GM1, Fusarium verticillioides e Phoma herbarum; e) os gêneros considerados altamente patogênicos foram Bipolaris e Curvularia, considerando-se os demais medianos, pouco/ não patogênicos; f) os fungicidas de maiores eficiências de inibição, principalmente dos fungos patogênicos, foram triadimenol e fludioxonil + metalaxil-M; g) o fungicida não fitotóxico e que apresentou efeito estimulante nas doses utilizadas foi o fludioxonil + metalaxil-M. Quando esse fungicida foi aplicado na validação, as doses avaliadas não foram suficientes para se detectar diferença significativa benéfica, de acordo com as variáveis analisadas. / The present study had as objectives: to investigate the most adequate method to detect sugarcane seedborne fungi; to do the survey of the seedborne fungi and of the incidence; to correlate the fungi incidence in the seeds and the conditons where they were produced; to evaluate the possible effects that seedborne fungi have on seeds and seedlings; to verify the pathogenicity of the most frequent ones and the symptoms that they can cause; to determine the sensitivity of the main fungi to fungicides; to determine the seeds and seedlings phytotoxicity to fungicides and to propose the most adequate fungicidal treatment to the production of vigorous seedlings, without symptoms, to the breeding programs. To assess the most adequate method to detect seedborne fungi, health tests using different combinations between containers, substrates and light regimen, were done. To do the survey of seedborne fungi and their incidence on seeds, seed health tests of 29 samples and the fungical incidence obtained were compared with the climatic data from where the seeds were produced. The effects that seedborne fungi have on seeds and seedlings were studied by health and seed germination tests and the conditions of seeds and seedlings with fungi incidence were observed. The fungi pathogenicity, found in a higher frequency, was assessed by seed inoculation through contact with medium colonized by the fungi, than the seeds were distributed on sterilized substrate and the seedlings emergency and total seedlings with symptoms and kind of symptoms were assessed. By in vitro fungitoxicity assays, the sensitivity, of the most frequently detected fungi, to nine fungicides in the doses of 1, 10 and 100 ppm, was studied and ED50. The phytotoxicity in vivo, of the most efficient fungicide was done by spraying different doses on seeds distributed on sterilized substrate. Emergency, seedling height of aerial part and length of the root, total of seedlings with phytotoxicity symptoms and other kind of symptoms were assessed. A validation, in vitro, was done by spraying the efficient and non phytotoxic fungicide on sugarcane seeds. Obtained results were: a) the chosen method for health tests was the plastic Petri plates with filter paper as substrate and incubation at 28 ± 2°C under 12h alternating cycles of light and darkness; b) the fungi genera most frequently present on sugarcane seeds were: Bipolaris, Cladosporium, Curvularia, Fusarium and Phoma; c) the relation between fungical incidence and seed production conditions had not been noticed; d) the most commonly sugarcane seed conditon found with seedborne fungi was the not-germinated, independently of the assessed fungi. Low percentage of necrotic symptoms on aerial part and root where observed, however, when occurred, it was associated to the incidence of the fungi Bipolaris sacchari, Curvularia GM1, Fusarium verticillioides and Phoma herbarum; e) the genera considered highly pathogenic were Bipolaris and Curvularia. The other fungi were considered of median pathogenicity or little/not pathogenic; f) the fungicides with a higher inibition efficiency to most pathogenic fungi, were triadimenol and fludioxonil + metalaxil-M; g) fludioxonil + metalaxil-M was not a phytotoxic fungicide and presented stimulant effect on used doses. When this fungicide was applied on the validation, the assessed doses were not enough to detect beneficial significant differences, in agreement with the analyzed variables.

Frente à recente detecção em território brasileiro de Monilina laxa, que assim como M. fructicola, é causadora da podridão parda do pessegueiro, e à falta de informações sobre a epidemiologia dos patógenos causadores da doença em regiões subtropicais, surgiu a necessidade deste trabalho, que teve por objetivos determinar as melhores condições de temperatura e molhamento para o desenvolvimento de M. fructicola e M. laxa in vitro e para a infecção e colonização pêssegos por conídios dos patógenos. Quatro isolados de M. fructicola e um isolado de M. laxa, provenientes de plantios do Estado de São Paulo e mantidos no laboratório de Epidemiologia da ESALQ, foram estudados. Foram avaliados os efeitos da temperatura e da duração do molhamento na germinação dos conídios in vitro e o efeito da temperatura no crescimento micelial e na esporulação dos patógenos. Ensaios para determinar a sensibilidade dos patógenos ao fungicida iminoctadina também foram conduzidos. Adicionalmente, pêssegos maduros foram adquiridos, feridos, inoculados com suspensão de conídios e incubados em diferentes temperaturas sob diferentes períodos de câmara úmida. Diariamente incidência e severidade foram avaliadas. A esporulação foi avaliada ao final de cada tratamento. A faixa ótima de temperatura para germinação de conídios de M. laxa, de 5 a 30ºC, é maior que a de M. fructicola, de 10 a 30ºC. O período de molhamento não teve influência na germinação dos conídios. A melhor faixa de temperatura para crescimento micelial tanto de M. fructicola quanto M. laxa de foi de 20 a 25ºC. A esporulação de M. laxa foi inversamente proporcional à temperatura de incubação. Não houve relação entre temperatura e produção de esporos em M. fructicola. Ambas as espécies mostraram-se sensíveis, in vitro, à molécula iminoctadina. A incidência da podridão parda foi superior a 80,9% em todos os tratamentos, para as duas espécies fúngicas. A 10ºC os períodos de incubação e de latência foram menores para M. laxa que para M. fructicola. A faixa ótima de temperatura para o desenvolvimento de lesões variou de 15 a 25ºC para os dois patógenos. A esporulação dos patógenos não mostrou relação com a temperatura nos ensaios in vivo. Diferenças nos sinais da espécie do patógeno foram observados nas lesões. / Due to the recent detection in Brazil of Monilinia laxa, that similar to M. fructicola causes the brown rot of peaches, and the lack of information about the epidemiology of the causal agents of this disease from subtropical regions, raised the need of such a study, which the aims were to determine the best temperature and wetness duration conditions to the development of M. fructicola and M. laxa in vitro and to infection and colonization of peaches by conidia from both pathogens. Four M. fructicola isolates and one M. laxa isolate, collected from infected fruit of São Paulo orchards and maintained at the Epidemiology Laboratory at ESALQ, were studied. Temperature and wetness duration effects on conidia germination in vitro and temperature effects on mycelial growth and sporulation of pathogens were evaluated. Trials to evaluate the sensitivity of isolates to the fungicide iminoctadine were also conducted. Furthermore, mature peaches were wounded on the surface, inoculated with a conidia suspension and incubated at different temperatures during different wet chamber periods. Incidence and severity of the disease were evaluated daily. Sporulation was evaluated at the end of each treatment. The favorable range of temperature to conidia germination of M. laxa, from 5 to 30ºC, was greater than M. fructicola range, from 10 to 30ºC. The wetness duration showed no influence on conidia germination. The best range of temperature for mycelial growth of both M. fructicola and M. laxa was from 20 to 25ºC. Sporulation of M. laxa showed an inverse relationship to the incubation temperature. No relationship between temperature and conidia production was found for M. fructicola. Both species were sensitive to the iminoctadine fungicide in vitro. Incidence of brown rot was greater than 80.9% in all treatments, for both species. At 10ºC incubation and latency periods were shorter for M. laxa than for M. fructicola. The best temperatures for lesion development varied between 15 and 25ºC for both pathogens. Sporulation of the two species showed no relationship to the temperature on the in vivo trials. Visual differences were observed on pathogen symptoms on fruit.

A ramulose, causada por Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides, é uma das mais importantes doenças do algodoeiro no Brasil. O fungo é transportado e transmitido pela semente, que se constitui fonte de inóculo inicial. Os objetivos do presente trabalho foram i) estudar o efeito de inibidores de germinação sobre a germinação, comprimento da radícula e incidência do patógeno nas sementes; ii) avaliar o efeito de níveis de incidência na semente e do controle químico da parte aérea sobre o progresso da ramulose; iii) estudar a transmissão do patógeno planta-semente em função da incidência da doença. Com base nos resultados observou-se que os solutos Manitol e NaCl no potencial osmótico de -0,8 MPa reduziram a germinação, o comprimento da radícula e não interferiram na detecção do patógeno. A área abaixo da curva de progresso da incidência e severidade da ramulose foi maior, quanto maior foi o nível de incidência nas sementes, independente do número de pulverizações no ano de 2006. No ano de 2007, a área abaixo da curva de progresso da ramulose foi dependente do número de pulverizações, sendo maior, quanto maior foi o nível de incidência nas sementes, mas sendo reduzida de acordo com o número crescente de pulverizações. Não houve efeito da quantidade de doença sobre a produção nos anos estudados, mas no ano onde foi registrada maior intensidade de doença, a produção de algodão em caroço foi mais baixa. Houve correlação positiva e significativa entre o nível de inóculo inicial, 40 dias após a emergência, e a incidência da ramulose quando 70% das maçãs estavam formadas. Também houve correlação positiva e significativa entre a incidência da doença no campo e a incidência do patógeno nas sementes. / The ramulosis, caused by Colletotrichum gossypii var.cephalosporioides is one of the most important disease of cotton in Brazil. The fungus is transported and transmited by seeds and is an important initial inoculum source. The objectives of this research were i) to study the effect of germination inhibitors on the germination, length of radicle and incidence of the pathogen in the seeds; ii) to evaluate the effect of incidence levels in the seeds and the chemical control of canopy on the progress of ramulosis; iii) to study the transmission of the pathogen from plant to seeds in function of incidence of disease. Based on results it was observed that the Manitol and NaCl in the osmotic potential of -0,8 MPa reduced the germination, the length of radicle and did not caused decrease in the incidence of the pathogen in the seeds. The area under curve of progress of incidence and severity of ramulosis was higher, as much as the level of incidence in the seeds, independent of sprays number in the 2006 year. In the 2007 year the area under curve of progress of incidence and severity of ramulosis was dependent of sprays number. It was higher as much as the level of incidence in the seeds, but it was reduced according to the number of sprays was increased. There was not effect of disease intensity on the yield in the studied years, but in the year which the disease was more severe, the cottonseed yield was reduced. There was positive and significant correlation between the level of initial inoculum at 40 days after seedling emergence and the incidence of ramulosis when 70% of bolls were completely developed. There was positive and significant correlation between the incidence of disease in the field and the incidence of the pathogen in the seeds.

O carvão é uma das doenças mais importantes da cana-de-açúcar. Grande parte dos Programas de Melhoramento Genético dessa cultura utiliza inoculações artificiais para selecionar e caracterizar as variedades quanto a sua resistência a doenças. Assim o conhecimento das condições favoráveis para infecção torna-se indispensável. Neste trabalho foram estudadas as condições que afetam a infecção de gemas pelo fungo Sporisorium scitamineum. Do ponto de vista do hospedeiro foi avaliada a incidência de chicotes para diferentes idades das gemas e das brotações das variedades NA56-79, SP71-1406 e SP84-2066. As gemas mais novas mostraram-se mais suscetíveis que as medianas e velhas, porém na variedade mais suscetível, a SP84-2066, não houve diferenças na taxa de infecção das gemas mais novas e velhas. Gemas sem prébrotação e com pré-brotação de 1 dia foram infectadas pelo fungo enquanto que gemas pré-brotadas com 4, 6, 8 e 10 dias não foram infectadas. Para o patógeno, foi avaliada a concentração de teliósporos para a inoculação. As concentrações de 1x106 e 1x 108 foram as únicas que produziram sintomas e sinais, não diferindo a incidência da doença entre elas. Como condições de pós inoculação foram testadas as variáveis temperatura de 25, 28 e 32 °C, umidade de 65, 80 e 95% e períod o de incubação de 24, 48 e 96 horas. Foram realizados dois experimentos em tempos diferentes, sendo que no primeiro foram utilizadas as variedades NA56-79, SP71-1406 e SP84-2066 e no segundo, além das citadas, foram acrescentadas as variedades SP79-2312 e IAC66-6. O tratamento de 28°C, 65% de umidade por um período de 24 horas foi o que promoveu maior índice de infecção, para todas as variedades, exceto a SP84-2066 que foi favorecida por umidade de 95%. Além desses parâmetros foi avaliado o método de inoculação por aspersão de teliósporos e do ferimento seguido por aspersão de teliósporos. A inoculação por ferimento proporcionou maior índice de infecção para as variedades NA56-79, RB72-454, IAC66-6, SP70-1143, mas não teve interferência nas variedades SP79-1011, SP80-185 e SP86-155. Um segundo objetivo do trabalho foi validar um método de diagnose precoce para o carvão. Para isto foram desenvolvidos iniciadores específicos para a detecção de S. scitamineum. Esses iniciadores foram avaliados quanto a sua especificidade e sensibilidade e demonstraram bons resultados. Para a validação prática, plantas de 12 variedades inoculadas tiveram suas folhas amostradas aos 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 135 e 150 dias após o plantio. Todas as plantas que apresentaram o chicote puderam ser diagnosticadas precocemente com o método criado. As datas de diagnóstico precoce foram de no mínimo 30 dias e no máximo 120 dias antes do aparecimento do sintoma/sinal. Este é um método que pode ser incorporado para os testes de quarentena reduzindo a permanência de plantas na casa de vegetação e reduzindo os custos de manutenção dessas plantas. / Smut is one of the most important diseases of sugarcane. Most part of genetic breeding programs from this culture use artificial inoculation in order to select and characterize the varieties regarding their resistance to diseases. Therefore knowledge of favorable conditions for infection becomes indispensable. This work studied conditions that affect bud infection by the fungus Sporisorium scitamineum. From the standpoint of the host it was assessed the whip incidence for different bud ages and shoot of the varieties NA56-79, SP71-1406 and SP84-2066. The younger buds were more susceptible than median and older ones, but in the susceptible variety, SP84-2066, there were no differences in the younger and older bud infection rates. Buds with and without shoots of 1 day were infected with the fungus while pre-sprouting buds with 4, 6, 8 and 10 days were not infected. For the pathogen it was evaluated teliospore concentration for inoculation. The concentrations 1x106 and 1x 108 were the only ones that produced symptoms and signs, not differing disease incidence among them. As pos-inoculation conditions the variables tested were temperature of 25, 28 and 32 °C, humidity of 65, 80 and 95% and incubation period of 24, 48 and 96 hours. Two experiments were performed at different times, the first one were used NA56-79, SP71- 1406 and SP84-2066 varieties and the second one, besides those mentioned, it was added SP79-2312 and IAC66-6 varieties. The treatment of 28 °C, 65% humidity and for a period of 24 hours was the one that promoted the highest infection rate, for all varieties, except for SP84-2066 that was favored by 95% of humidity. Besides these parameters, it was evaluated the inoculation method by teliospore spraying and wound followed by teliospore spraying. Inoculation by wounding provided higher infection rate for the NA56-79, RB72-454, IAC66-6, SP70-1143 varieties, however it had no interference in SP79-1011, SP80-185 and SP86-155 varieties. A second objective was to validate a method of early diagnosis of smut. Thus, it was developed specific primers to detect S. scitamineum. These primers were evaluated for their specificity and sensibility and showed good results. To practice validation, plants of 12 varieties inoculated had their leaves sampled at 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 135 and 150 days after planting. All the plants that presented whip could be early diagnosed by the created method. The dates of premature diagnosis were of at least 30 days and a maximum of 120 days before symptom/sign onset. This method can be incorporated for quarantine tests, reducing permanence of plant in greenhouse and reducing maintenance costs of these plants and varieties selection.

Foram feitas comparações morfológicas, patogénicas, serológicas e eletroforéticas, de isolados de Exserohilum turcicum (Pass.) Leonard & Suggs. de diferentes hospedeiros (milho, sorgo e capim). Morfologicamente, os conídios dos isolados de capim apresentaram-se significativamente maiores do que os dos isolados de milho e sorgo em relação aos diâmetros. Testes de patogenicidade em milho, sorgo e capim massambará, mostraram que: isolado de milho dos Estados Unidos com lesão somente no milho, pode ser classificado como Exserohilum turcicum f.sp. zeae; e que isolados de sorgo, virulentos ao milho, sorgo e capim massambará podem ser classificados como Exserohilum turcicum f.sp. complexa; entretanto isolados de milho do Brasil, patogênicos ao milho e ao sorgo; e isolados de capim virulentos ao capim, fracamente virulentos ao milho e avirulentos ao sorgo não podem ser enquadrados em nenhuma formae speciales descritas. Os testes de dupla-difusão em ágar de antígenos extraídos de conídios e\ou micélios não conseguiram detectar qualquer distinção serológica entre os isolados. No teste de ELISA o antissoro do isolado de milho distinguiu os isolados de milho e sorgo dos isolados de capim. O antissoro do isolado de capim distinguiu isolados de capim dos de milho e sorgo, sendo que aparentemente os de sorgo apresentaram-se como intermediários. Análises eletroforéticas isoenzimáticas envolvendo esterase e peroxidase permitiram diferenciar os isolados entretanto, somente foi possível associar os resultados de serologia com a eletroforese-esterase. Através da extração do DNA, digestão com enzima de restrição HpaI e análise eletroforética com coloração por prata, foi possível observar que o tamanho dos DNAs de todos os isolados foram iguais. Os resultados sugerem que testes serológicos e eletroforéticos podem auxiliar no estudo taxonômico para análise de variação inter-específica (ou inter-forma especial). / Morphological, pathogenic, serological and electrophoretic comparisons were made among isolates of Exserohilum turcicum (Pass.) Leonard & Suggs. from maize, sorghum and Johnson grass. Concerning morphology, it was observed that diameters of conidia of Johnson grass isolates were significantly larger than those of maize and sorghum. In laboratory and greenhouse conditions, plants from maize, sorghum and Johnson grass inoculated with isolates of Exserohilum turcicum showed: isolate of maize from the United States produced lesions only in maize stating that this isolate can be considered as Exserohilum turcicum f. sp. zeae; isolates of sorghum were virulent to sorghum, maize and Johnson grass stating that these isolates can be considered as Exserohilum turcicum f. sp. complexa; iso1ates of maize from Brazil were pathogenic to maize and sorghum; isolates of Johnson grass were virulent only to Johnson grass, inducing flecks to maize and a virulent to sorghum. These observations concerning isolates of maize from Brazil and of Johnson grass suggest that they can not be treated of formae speciales. Serological reactions in agar double diffusion tests with antigens extracted from conidia and mycelium did not distinguish any isolate from the others. In the DAS-ELISA test it was observed that antiserum produced against isolates of maize distinguished isolates of maize and of sorghum from isolates of grass. The antiserum produced against isolates of Johnson grass distinguished isolates of Johnson grass from isolates of maize and sorghum, and revealed that apparentely isolates of sorghum are intermediaries. Electrophoretic analysis with the isoenzimatic variation (peroxidase and esterase) differentiated the isolates however only the results from electrophoretic-esterase could an be associated with serological results. DNA extraction, digestion with HpaI enzyme, electrophoretic analyses and silver coloration demonstrated that the sizes of DNA from all isolates are the same. The results suggest that serological and electrophoretic tests can help the taxonomic studies in the analyse of inter-specific (or inter-formae speciales> variations.