Orientador: Suzely Adas Saliba Moimaz / Banca: Doris Hissako Sumida / Banca: Cesar Augusto Casotti / Resumo: A fluoretação das águas de abastecimento público tem ocasionado significante redução na prevalência da cárie em diferentes populações, entretanto, a exposição ao flúor pelo uso de diferentes métodos tem trazido preocupações quanto ao aumento na prevalência de fluorose dentária. Por isso, estudos sobre os fatores de risco associados à fluorose são necessários, além do acompanhamento contínuo e efetivo da exposição ao flúor, por diferentes meios, incluindo mais recentemente os marcadores biológicos para esse íon, como a unha, que também reflete o nível de exposição crônica, desde que um indivíduo tenha uma ingestão de flúor relativamente constante. Assim, objetivou-se analisar o teor de fluoreto das águas de abastecimento público em diferentes áreas de um município, uma abastecida por poços profundos e outra pela estação de tratamento de água (ETA), e verificar se os teores de fluoretos encontrados refletem diferenças nas concentrações de flúor observadas nas unhas das crianças de 12 anos e na prevalência de fluorose dentária. Para isso, foram selecionados 43 pontos para coleta de amostras de água, abrangendo as 17 fontes de abastecimento existente no município. A população de estudo foi constituída por 60 crianças, de 12 anos de idade, nascidas e moradoras permanentes nas duas áreas de estudo, seguindo os critérios de inclusão, sendo uma com excesso e outra sem excesso de flúor nas águas de abastecimento público. As amostras de água, coletadas mensalmente nos pontos previamente estabelecidos, foram analisadas em duplicata no período de janeiro a dezembro de 2009, utilizando-se um analisador de íons acoplado a um eletrodo específico para flúor. Coletas e análise do flúor nas unhas das crianças foram realizadas, utilizando-se a técnica da microdifusão facilitada por HMDS. Para verificação da fluorose... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fluoridation of public water supply has caused a significant reduction in the prevalence of caries in different populations, however, exposure to fluoride by using different methods has brought concerns about the increasing prevalence of dental fluorosis. Therefore, studies on the risk factors associated with fluorosis are needed, besides the efficient and continuous monitoring of fluoride exposure by various means, including most recently the biological markers for this ion, such as fingernail, that also reflects the level of chronic exposure, as long as an individual has a relatively constant intake of fluoride. The objective was to analyze the fluoride content of public water supply in different areas of a district, one served by deep wells and one by the water treatment station (WTS), and check if the levels of fluoride found reflect differences in the concentrations of fluoride observed in nails of 12 years old children and the prevalence of dental fluorosis. For this, 43 points were selected to collect water samples, covering the 17 existing sources of supply in the municipality. The study population consisted of 60 children, 12 years old, born and permanent residents in both areas of study, following the inclusion criteria, one with and one without too much fluoride excess in public water supply. Water samples collected monthly in points previously established, were analyzed in duplicate in the period from January to December of 2009, using an ion analyzer coupled to a specific electrode for fluoride. Sampling and analysis of fluoride in children nails were done, using the technique of facilitated microdiffusion HMDS. For verification of dental fluorosis we used the modified DEAN index .Of the total samples studied (n=512), 44% (n=224) had adequate levels and 56% (n =288) inadequate levels, and 10% (n=49) lower levels and 46% (n=239) higher... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Suzely Adas Saliba Moimaz / Resumo: O leite materno é, indiscutivelmente, o alimento ideal para os primeiros meses de vida da criança, mas existem situações que impossibilitam ou dificultam seu consumo. Nestes casos, fórmulas infantis, leite de vaca integral diluído e leite de soja podem ser oferecidos. Este trabalho pretende avaliar o leite como contribuinte para a ingestão diária de flúor em crianças e como fator de risco para o desenvolvimento de fluorose dentária. A primeira parte procura estimar esta contribuição, partindo da concentração de flúor no leite humano, leite de vaca, leite em pó e fórmulas infantis, encontrada em pesquisas publicadas. Os resultados indicam que os leites materno e de vaca in natura não oferecem risco ao desenvolvimento de lesões de fluorose dentária esteticamente inaceitáveis em dentes decíduos ou permanentes, o mesmo ocorrendo para a ingestão de leite em pó quanto aos dentes permanentes. Já as fórmulas infantis e o leite em pó, comercializados no Brasil, preparados em água com concentração ótima de flúor (0,7 mg/L), podem contribuir com uma ingestão diária de flúor acima do limite considerado seguro, podendo provocar o aparecimento de lesões de fluorose em dentes decíduos. A segunda parte deste trabalho teve como objetivos determinar os teores de flúor de fórmulas infantis (n=7), leites (n=10) e leites de soja (n=3), em pó, produzidos em território nacional e adquiridos em Araçatuba-SP e avaliar a possibilidade de desenvolvimento de fluorose dentária, esteticamente inaceitável, com o consumo destes produtos. As amostras de pó foram reconstituídas em água deionizada e analisadas em duplicata pelo método eletrodo específico, após difusão facilitada por hexametildisiloxano... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mother's milk is, unquestionably, the ideal food for children's first months of life, however, there are situations that make its consumption impossible. In these cases, infant formulas, cow's diluted whole milk and soy-milk can be offered. This paper intends to evaluate milk as a contributor for children's daily fluoride ingestion and as a risk factor to develop dental fluorosis. The first part estimates this contribution by the fluoride concentration of human milk, in natura cow's milk, powder-milk, infant formulas obtained from publications specialized on the subject. The results indicate that that human milk and in natura cow's milk do not offer risk to the development of esthetically unacceptable lesions of dental fluorosis in deciduous or permanent teeth, the same occurring with powder-milk ingestion for the permanent teeth. The infant formulas and powder-milk commercialized in Brazil, prepared in water with optimal fluoride concentration (0.7 mg F/L) can contribute to daily fluoride ingestion above the limit considered as safe for the development of fluorosis in deciduous teeth. The second part of this paper had the purpose to determine the fluoride content in infant formulas (n=7), powder-milk (n=10) and soy-milk (n=3) produced in the national territory and acquired in Araçatuba - SP, and evaluate the possibility to develop esthetically unacceptable dental fluorosis by consuming these products. The powder samples were reconstituted in deionized water and doublechecked through the potentiometrical method after hexametyldisiloxane facilitated diffusion... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: Suzely Adas Saliba Moimaz / Banca: Doris Hissako Sumida / Banca: Renato Moreira Arcieri / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Banca: Natanael Barbosa dos Santos / Resumo: A primeira infância é uma fase importante para instituição de hábitos alimentares saudáveis que irão influenciar a qualidade da saúde bucal dos futuros adultos. Nessa fase a ingestão excessiva de flúor pode resultar no desenvolvimento de fluorose dentária e o consumo descontrolado de açúcares aumenta o risco de desenvolvimento de cárie precoce de infância. Nesta pesquisa os objetivos foram estudar a ingestão de flúor por crianças com até 36 meses de vida, matriculadas em duas creches públicas de municípios com diferentes concentrações de flúor na água de abastecimento, no período de permanência na creche, e a prevalência de cárie e sua relação com algumas variáveis. Amostras das refeições servidas para 80 crianças foram coletadas durante uma semana. As concentrações de flúor das amostras de alimentos sólidos e leite foram determinadas por eletrodo específico (Orion 9409BN) combinado a eletrodo de referência (Accumet 1362079) após difusão facilitada por hexametildisiloxano. Os alimentos líquidos adicionados com igual volume de total ionic strenght adjustment buffer (TISAB II) foram analisados por um eletrodo combinado (Orion 9609BN). Os resultados foram comparados por meio do teste Mann-Whitney. Para se determinar a prevalência de lesões de cárie dentária com cavidade (LCC) e cárie precoce de infância (CPI), e a contribuição de algumas variáveis, um total de 68 crianças foram examinadas, utilizando-se os códigos e critérios preconizados pela OMS e pela ADA (American Dental Association). Os pais das crianças foram entrevistados. O teste exato de Fisher (p<0,05) foi aplicado. Quanto à concentração de flúor, as refeições continham em média 0,204 ± 0,179 e 0,322 ± 0,242 μgF/mL (p<0,05), respectivamente nos municípios com teor reduzido... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The early childhood is an important phase to establish healthy eating habits that will influence the quality of the oral health for the future adults. At this phase, excessive fluoride intake may result in dental fluorosis development and uncontrolled consumption of sugar increases the risk of developing early childhood caries. This survey aimed to study the fluoride ingestion by children up to 36 months of life, registered in two public daycare centers from municipalities with different fluoride concentrations in the water supply, during the period of stay in daycare, and the caries prevalence and its relationship with some variables. Samples of meals served to 80 children were collected during one week. The fluoride concentrations of solid foods and milk were determined by a specific electrode (Orion 9409BN) combined with a reference electrode (Accumet 1362079) after diffusion facilitated by hexamethyldisiloxane. The beverages added with an equal volume of total ionic strength adjustment buffer (TISAB II) were analyzed by a combined electrode (Orion 9609BN). The results were compared using the Mann-Whitney test. In order to determine the prevalence of cavitated caries lesions (CCL) and early childhood caries (ECC), and the contribution of some variables, a total of 68 children were clinically examined using the same codes and criteria established by the WHO (World Health Organization) and ADA (American Dental Association). Their parents were interviewed. Fisher's exact test (p<0.05) was applied. Mean fluoride concentrations of the meals were of 0.204 ± 0.179 and 0.322 ± 0.242 μgF/mL (p<0.05) in the municipality with low fluoride content (LFC) and in the municipality with adequate fluoride content (AFC), respectively. Daily fluoride intake in the former was 0.013 ± 0.003 mg/kg body weight/day and 0.012 ± 0.001 mg/kg body weight/day in the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com a introdução do flúor como o principal agente anticariogênico e, talvez, um aumento do flúor na nossa cadeia alimentar, a fluorose dentária tornou-se um problema mundial. Os mecanismos que conduzem à formação do esmalte fluorótico são desconhecidos, mas devem envolver modificações nas reações físico-químicas básicas de desmineralização e remineralização do esmalte dentário. O aumento daquantidade de flúor no cristal apatita resulta no aumento dos parâmetros de rede. O objetivo deste trabalho é caracterizar o esmalte dentário humano saudável e fluorótico usando difração de raios X com luz síncrotron. Todos os perfis de espalhamento foram medidos na linha de difração de raios X (XRD1) do Laboratório Nacional de Luz Síncrotron, Campinas SP. Os experimentos foram realizados usando amostras em pó e em lâminas polidas. As amostras em pó foram analisadas a fim de obter a caracterização do esmalte dentário saudável. As lâminas foram analisadas em áreas do esmalte específicas identificadas como fluoróticas. Todos os perfis foram comparados com amostras de esmalte de controle e também com a literatura. A evidente similaridade entre os perfis de difração mostraram a analogia entre as estruturas do esmalte dentário e a hidroxiapatita padrão. Fica evidente que os perfis de difração do esmalte dentário das amostras em lâmina são diferentes daqueles obtidos para o esmalte em pó. As diferenças encontradas incluem variação na cristalinidade e orientação preferencial. Os valores encontrados para as distâncias interplanares para o esmalte de controle e fluorótico das amostras em lâmina não apresentaram diferenças estatisticamente significativas. Isto pode ser explicado pelo fato que a hidroxiapatita e a fluoropatita formam cristais com a mesma estrutura hexagonal, mesmo grupo de simetria e têm parâmetros de rede muito próximos, os quais a habilidade do sistema não foi suficiente para resolver. Finalmente, este trabalho mostra que a difração de raios X usando radiação síncrotron é uma técnica poderosa para o estudo da cristalografia e microestrutura do esmalte dentário e, ainda, pode ser igualmente aplicada no estudo de outros tecidos biológicos duros e de biomateriais sintéticos. / With the introduction of fluoride as the main anticaries agent used in preventive dentistry, and perhaps an increase in fluoride in our food chain, dental fluorosis has become an increasing world-wide problem. The mechanisms that conduct the formation of fluorotic enamel are unknown, but should involve modifications in the basic physical-chemistry reactions of demineralisation and remineralisation of the enamel of the teeth. The increase of the amount of fluoride inside of the apatita will result in gradual increase of the lattice parameters. The aim of this work is to characterize the healthy and fluorotic enamel in human tooth using technique Synchrotron X-ray diffraction. All the scattering profile measurements were carried out at the X-ray diffraction beamline (XRD1) at the National Synchrotron Light Laboratory - LNLS, Campinas. X-ray diffraction experiments were performed both in powder samples and polished surfaces. The powder samples were analyzed to obtain the characterization of typical pattern healthy enamel. The polished surfaces were analyzed in specific areas that have been identified as fluorotic ones. X-ray diffraction data were obtained for all samples and these data were compared with the control samples and also with the literature data. The evident similarities of the diffraction patterns point out the analogy between the structures of the human enamel and standard hydroxyapatite (HAp). According to our analysis, it is clear that the X-ray diffractogram f r powder enamel for enamel in the flat samples are different. The differences found include varied crystallinity and crystal preferred orientation. The values found for the interplanar distances for the control and fluorotic enamel in the flat samples revealed no significant statistical differences. It can be explained because of hydroxyapatite and fluorapatite have the same hexagonal structures and lattice parameters too close, which the ability of the system cannot resolve. Finally, we have shown through this work that synchrotron X-ray diffraction is a powerful technique in the study of the crystallography and microstructure of dental enamel and it could be equally successful in the study of other biological hard tissues and in the study of synthetic biomaterials.

Análise proteômica da matriz do esmalte nos estágios de secreção e maturação em camundongos susceptíveis ou resistentes à fluorose dentária, expostos cronicamente ao fluoreto através da água de beber. Os mecanismos pelos quais a ingestão excessiva de fluoreto (F) durante a amelogênese levam à fluorose dentária ainda não são precisamente conhecidos. Tem sido demonstrado que determinadas linhagens de camundongos são mais susceptíveis que outras à fluorose dentária, o que faz destas linhagens o modelo ideal para se estudarem os fenômenos moleculares envolvidos nesta patologia. No presente estudo, foi empregada uma abordagem proteômica para avaliar alterações na expressão de proteínas da matriz do esmalte dentário nos estágios de secreção e maturação, em duas linhagens de camundongos com diferentes susceptibilidades à fluorose (A/J, susceptível e 129P3/J, resistente). Camundongos de ambos os gêneros, representantes das linhagens 129P3/J (n=200) e A/J (n=200) foram distribuídos em dois grupos para cada linhagem, que receberam ração com baixa concentração de F e água de beber contendo 0 (controle) ou 50 mg/L F por 6 semanas. A concentração de F foi analisada no plasma e no esmalte dos incisivos. Para a análise proteômica, foi realizada a raspagem da matriz do esmalte dos incisivos, nos estágios de secreção e maturação. Para a extração das proteínas do esmalte, foram pesados 15 mg de pó da matriz do esmalte, aos quais foi adicionado 1 mL de tampão de lise contendo uréia 7 M, tiouréia 2 M, CHAPS 4 %, DTT 1 %, anfólitos carreadores 0,5 % pH 3-10 e um coquetel de inibidores de proteases. As proteínas do esmalte extraídas para cada grupo foram separadas pela técnica de eletroforese bidimensional e posteriormente submetidas a LC-ESI-MS/MS. A concentração média (±DP) de F encontrada no plasma dos camundongos foi de 0,023±0,010 e 0,019±0,007 mg/L para os animais do grupo controle, das linhagens A/J e 129P3/J, respectivamente, e de 0,151±0,043 e de 0,252±0,060 mg/L de F para os animais das linhagens A/J e 129P3/J, respectivamente, tratados com água contendo 50 mg/L de F. A ANOVA a 2 critérios revelou que houve diferença significativa entre os tratamentos (F= 658,0, p<0,0001), mas não entre as linhagens (F=3,3 p=0,075), tendo havido interação significativa entre estes critérios (F=16,50, p=0,0002). Já a concentração média (±DP) de F incorporado no esmalte dos incisivos dos camundongos foi 471,4±215,8 mg/kg e 151,7±58,8 mg/kg para os animais do grupo controle das linhagens 129P3/J e A/J, respectivamente, e 2711,2±1019,2 mg/kg, 1756,9±921,6 mg/kg para os animais das linhagens 129P3/J e A/J, respectivamente, tratados com água contendo 50 mg/L de F. A ANOVA a 2 critérios encontrou diferença significativa entre as linhagens (F=11,36, p=0,0016) e entre os tratamentos (F=103,50, p<0,0001), sem interação significativa entre ambos (F=2,82, p=0,1004). Os resultados proteômicos mostraram redução na abundância de proteínas no estágio de maturação, quando comparado com o de secreção. Foi observado que o tratamento com F aumentou consideravelmente o número de spots proteicos detectados em ambos os estágios, sendo que este aumento foi maior para os animais da linhagem A/J, indicando uma tentativa de se combater os efeitos deletérios do F e reforçando a maior susceptibilidade aos seus efeitos desta linhagem. A identificação das proteínas com expressão diferencial revelou que tanto a linhagem quanto o tratamento com F levaram à expressão diferencial de proteínas pertencentes a todas as categorias funcionais. / The mechanisms by which excessive ingestion of fluoride (F) during amelogenesis leads to fluorosis are still not precisely known. It has been shown that certain strains of mice are more susceptible to dental fluorosis than others, which turns these strains the ideal model for studying the molecular phenomena involved in this pathology. In the present study, we employed a proteomic approach to identify and evaluate changes in protein expression of secretory and maturation-stage enamel matrix in two strains of mice with different susceptibilities to dental fluorosis (A/J, susceptible and 129P3/J, resistant). Mice of both genders, from 129P3/J (n=200) and A/J (n=200) strains were divided into two groups for each strain. They received a low-F diet and drinking water containing 0 (control) or 50 mg/L F for 6 weeks. The F concentration was analyzed in plasma and enamel incisors. For proteomic analysis, the enamel matrix of secretory and maturation stages (incisors) was scrapped. For the extraction of enamel proteins, 1 ml of lysis buffer containing 7 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS, 1% DTT, 0.5% ampholytes carriers pH 3-10 and a cocktail of protease inhibitors was added to 15 mg of enamel matrix powder. The enamel proteins extracted for each group were separated by two-dimensional electrophoresis and subsequently subjected to LC-ESIMS/ MS. The mean (± SD) F concentrations found in plasma were 0.023 ± 0.010 and 0.019 ±0.007 mg/L for the control group, A/J and 129P3/J strains, respectively; and 0.151 ± 0.043 and 0.252 ± 0.060 mg/L F for A/J and 129P3/J mice, respectively, treated with water containing 50 mg/L F. Two-way ANOVA revealed significant differences between treatments (F = 658.0, p <0.0001), but not between strains (F = 3.3 p = 0.075), with was significant interaction between these criteria (F = 16.50, p = 0.0002). The mean (± SD) F concentrations in the enamel of the incisors were 471.4 ± 215.8 mg/kg and 151.7 ± 58.8 mg/kg for the control group of 129P3/J and A/J strains, respectively; and 2711.2 ± 1019.2 mg/kg and 1756.9 ± 921.6 mg/kg for 129P3/J and A/J mice, respectively, treated with water containing 50 mg/L F. Two-way ANOVA detected significant differences between the strains (F=11.36, p=0.0016) and between treatments (F=103.50, p <0.0001), without significant interaction between these criteria (F=2.82, p=0.1004). The proteomic results revealed a reduction in the abundance of proteins in the maturation stage, as compared with the secretory stage. Treatment with F greatly increased the number of protein spots detected in both stages. This increase was greater for A/J mice, indicating an attempt to fight the deleterious effects of F and, thus, reinforcing the susceptibility of this strain to the effects of F. The identification of differentially expressed proteins revealed that both the strain and the treatment with F led to differential expression of proteins belonging to all functional categories.

Este estudo comparou a ingestão de flúor (F) de crianças de 2 a 6 anos residentes em área fluoretada (Bauru-SP, 0,6-0,8 ppm F) e não fluoretada (Pirajuí-SP), avaliada através do método da dieta duplicada associado à escovação simulada e do Questionário de Freqüência Alimentar semi-quantitativo (QFAsq) associado a questionário para estimativa de ingestão de F a partir do dentifrício. Inicialmente, o QFAsq foi aplicado em 398 crianças residentes no município de Pirajuí-SP. Posteriormente, foram avaliadas subamostras de 25 crianças residentes em Bauru e 24 residentes em Pirajuí. Nestas subamostras, a quantidade de F ingerida através da dieta foi determinada pelo QFAsq e também pela dieta duplicada, considerando seus diferentes constituintes (água, outros líquidos e sólidos). A ingestão de F através do dentifrício foi determinada pelo questionário para estimativa da ingestão de dentifrício e pela escovação simulada. O F foi analisado por eletrodo, depois de difusão facilitada por hexametildiloxano ou após tamponameno com TISAB. A analise estatística foi feita utilizando o software GraphPad InStat, aplicando os testes t pareado, t não pareado, Wilcoxon pareado, Mann-Whitney e estatística de correlação (p<0.05). O QFAsq aplicado à amostra de 398 crianças de Pirajuí encontrou valores de ingestão total de F significativamente menores que os relatados previamente para crianças residentes em Bauru (Miziara, 2006). Na subamostra de crianças avaliadas, a média (±DP, mg) da ingestão de F estimada a partir do QFAsq e da dieta duplicada, considerando-se a dieta total foi de 0,420±0,087 e 0,805±0,190 (Bauru) e 0,227±0,072 e 0,144±0,050 (Pirajuí), sendo a diferença entre os métodos significativa em ambos os municípios. Somente foi obtida uma correlação significativa entre os dois métodos no caso dos sólidos, para ambos os municípios. Considerando a estimativa da ingestão de F a partir do dentifrício obtida pela aplicação do questionário e pela escovação simulada, as médias (±DP, mg) compiladas (Bauru mais Pirajuí) foram 0,611±0,452 e 0,784±0,737, respectivamente, não havendo diferença e nem correlação significativas entre os métodos. Através da utilização dos questionários, foi possível detectar diferença significativa na ingestão total de F entre Bauru e Pirajuí. Entretanto, o mesmo não ocorreu quando se utilizou o método da dieta duplicada associado à escovação simulada. Face aos resultados obtidos, o QFAsq associado a um questionário para estimativa da ingestão de F a partir do dentifrício parece ter um bom potencial para utilização a nível epidemiológico, para se avaliar o risco de grupos de crianças à fluorose dentária. Alguns parâmetros do QFAsq podem ser melhor trabalhados para uma análise mais fidedigna, principalmente com relação à freqüência de ingestão de água e outros líquidos. Em adição, a aplicabilidade desses questionários a nível individual para detecção de risco à fluorose dentária ainda precisa ser melhor estudada. / This study compared the fluoride (F) intake of 2-6-year-old children, living in fluoridated (Bauru-SP, 0,6-0,8 ppm F) and non-fluoridated (Pirajuí-SP) areas. The methods used were the duplicate diet associated to simulated toothbrushing and the semi-quantitative food frequency questionnaire (sqFFQ) associated to a questionnaire for estimation of F intake from dentifrice. Initially, the sqFFQ was applied to 398 children living in Pirajuí. In another phase, subsamples of 25 children living in Bauru and 24 living in Pirajuí were evaluated. In these subsamples the F intake from diet was determined using the sqFFQ as well as the duplicate diet method, considering the different constituents of the diet (water, other liquids and solids). The F intake from the dentifrice was determined using the questionnaire for estimation of F intake, as well as simulated toothbrushing. F was analyzed with the electrode, following hexamethyldisiloxanefacilitated diffusion or after buffering with TISAB. For statistical analysis, the GraphPad InStat software was used. The applies tests were paired and unpaired t tests, paired Wilcoxon test, Mann-Whitney test and correlation analysis (p<0.05). The sqFFQ, when applied to the sample constituted by 398 children living in Pirajuí, found values of total F intake significantly lower when compared to previous data reported by Miziara (2006) for children living in Bauru. In the subsample of evaluated children, the mean (±SD, mg) F intakes estimated by the sqFFQ and duplicate diet (total diet) were 0.420±0.087 and 0.805±0.190 (Bauru) and 0.227±0.072 and 0.144±0.050 (Pirajuí), respectively. The difference between the methods was significant for both municipalities. For both municipalities, a significant correlation between the methods was obtained in the case of solids only. Considering the estimation of F intake from dentifrice obtained by the application of the questionnaire and simulated toothbrushing, the compiled (Bauru plus Pirajuí) means (±SD, mg) were 0.611±0.452 and 0.784±0.737, respectively. The difference as well as the correlation between the methods were not significant. By using the questionnaires, it was possible to detect a significant difference in the total F intake between Bauru and Pirajuí. However, the same did not occur when using the method of duplicate diet associated with simulated toothbrushing. Due to the results obtained, it seems that the sqFFQ associated to a questionnaire for estimation of F intake from dentifrice has a good potential for use at epidemiological level in order to evaluate the risk of groups of children to dental fluorosis. Some parameters of the sqFFQ need to be better addressed for a more precise analysis, mainly with respect to the frequency of water and other liquids intake. In addition, the applicability of these questionnaires at the individual level for the detection of risk to dental fluorosis requires further studies.

O flúor é um elemento natural encontrado em diversas concentrações tanto na água como no solo. É considerado um nutriente benéfico quando presente em níveis ótimos. Apesar de ser utilizado como medicamento em pacientes com osteoporose, sendo capaz de aumentar a densidade óssea, sua eficácia na redução de fraturas ainda apresenta muitas controvérsias, e a exposição a altos níveis e por tempo prolongado, pode levar à fluorose esquelética. Dessa forma o objetivo deste trabalho foi estudar in vitro o efeito do flúor no processo de mineralização por osteoblastos de duas espécies de camundongos com maior e menor densidade óssea, C3H/HeJ (C3) e C57BL/6J (B6) respectivamente. Os osteoblastos isolados da calvária através da digestão enzimática de animais recém nascidos foram expostos a diferentes doses de NaF, e os resultados mostraram que B6 foi mais suscetível ao NaF, apresentando redução da área mineralizada a partir da dose de 10M, enquanto que com C3, a dose significativa foi a partir de 50M, demonstrando que os osteoprogenitores mais diferenciados de C3, são mais resistentes à ação inibitória do flúor. Os testes de unidades formadoras de colônias indicaram um aumento do número de colônias de osteoprogenitores e do número de nódulos mineralizados com a exposição ao NaF. A atividade da metaloproteinase de matriz 2 (MMP-2) também foi aumentada no período de 7 dias em B6 e reduzida nos períodos de 14 e 21 dias em C3, evidenciando que a ação da MMP-2 nestes osteoblastos estão acopladas de forma distinta a diferentes pontos de restrição durante a progressão da diferenciação celular. A dualidade das respostas ao flúor apresentadas pelos modelos experimentais indica que a influência da ação anabólica do flúor, depende do número de alvos em potencial (quantidade de osteoprogenitores presentes na calvária, de células mesenquimais presentes na medula), da atividade intrínseca destes osteoblastos e do estágio de maturação dessas células. Desta forma, a abordagem in vitro fornece insights sobre as bases celulares e moleculares, o que permitirá um melhor diagnóstico e avaliação dos alvos terapêuticos. / Fluoride is a natural element found at varying concentrations in drinking water as well as in soil and it is considered a beneficial nutrient at optimal levels. However, although it is well recognized that the fluoride therapy is effective in increasing bone density and it has been used as therapeutic agent to treat osteoporosis, the efficacy in fracture reduction is highly controversial, and exposure to high levels and prolonged time can lead to skeletal fluorosis. The purpose of this study was to investigate the in vitro effects of fluoride exposure during mineralization of two inbread strains, C3H/HeJ (C3) and C57BL/6J (B6), with high and low bone mass respectively. The osteoblasts isolated from newborn mouse calvaria were exposed to several fluoride doses, and the results showed that B6 was more susceptible to NaF, as a reduction in the mineralized area with 10M was already seen; while in C3, the significative dose was with 50 M, indicating that more differentiated osteoprogenitors cells of C3 are more resilient to inhibitory fluoride action. The colony forming unit assays indicate an increase of colony numbers of osteoprogenitors cells and mineralized nodules with NaF treatment. The MMP-2 activity was up-regulated after 7 days of NaF exposure in B6 e down-regulated after 14 and 21 days in C3, showing the distinct coupled action of MMP-2 in different restrictions point during development sequence. The bifasic nature of fluoride responses present by these experimental models indicate that the anabolic action of fluoride is associated to the number of the potential targets (numbers of calvarial osteoprogenitors cells, mesenchymal stem cells), the intrinsic osteoblast activity and the maturation stage of these cells. The cell culture systems can provide molecular and cellular insights, and have the prospective to disclose potential targets and/or better efficacy and safety profile.

A fluorose dentária é uma patologia que ocorre durante a formação dos dentes na presença de doses excessivas de fluoreto (F-). Os mecanismos pelos quais o F provoca a fluorose ainda são poucos conhecidos. A influência de fatores genéticos tem sido considerada na suscetibilidade/resistência do indivíduo em desenvolver a fluorose. Duas linhagens de camundongos (A/J e 129P3/J) com diferença na resistência ou suscetibilidade à fluorose dentária foram utilizadas para determinar se a suscetibilidade à fluorose pode ser explicada pela diferença no metabolismo e se há diferença no perfil protéico dos rins e urina destes animais. Para isso, um estudo metabólico foi conduzido com 18 camundongos A/J (suscetível) e 18 129P3 / J (resistente) após o desmame. Cada amostra foi dividida em 3 grupos, com diferentes concentrações de F- na água de beber (0, 10 e 50 ppm F). Uma vez que um estudo piloto revelou que os camundongos A/J ingeriam um maior volume de água quando comparado com o 129P3/J, a concentração de F- na água dada aos camundongos A/J foi ajustada semanalmente a fim de fornecer doses semelhantes de F- para ambas linhagens. Os animais foram mantidos em gaiolas metabólicas (n = 2/gaiola) por 7 semanas, com livre acesso à água e dieta de baixa ingestão de F- (0,95 ppm). A ingestão e excreção de F- foram calculadas, bem como os níveis de F- no plasma, no fêmur e no rim. O grau de fluorose dentária foi avaliado usando análise de fluorescência quantitativa (QLF) e exame clínico. Os perfis proteômicos renal e urinário foram examinados utilizando 2D-PAGE e coloração com azul de Coomassie.. Os dados do estudo metabólico foram testados para diferenças significativas pela ANOVA a 2 critérios (p <0,05). As imagens dos géis e as diferenças estatísticas (ANOVA, p<0,05) foram analisadas pelo programa Image Master Platinum 7.0. Os camundongos da linhagem A/J submetidos à alta concentração de fluoreto apresentaram um grau de fluorose significativamente maior quando comparado com a linhagem 129P3/J. A ingestão total de F- não diferiu significativamente entre as linhagens. A excreção total de F- foi significativamente maior para os camundongos A/J, devido à maior excreção urinária de F-. As duas linhagens não diferiram em relação à absorção F-, mas os animais 129P3/J retiveram significativamente maiores quantidades de F-, que foi consistente com níveis mais elevados de F- no fêmur, no entanto, os níveis de F- no plasma não diferiram significativamente entre as linhagens. Para os rins, a análise quantitativa de intensidade detectou, entre as linhagens A/J e 129P3/J, 122, 126 e 134 spots diferencialmente expressos nos grupos controle, e que receberam baixa e alta concentração de F-, respectivamente. Para a urina, 84 spots diferencialmente expressos foram observados para o grupo controle, 68 para o grupo que recebeu baixa concentração de F- e 66 para o grupo que recebeu alta concentração de F-. Os dados mostraram que há diferenças metabólicas e no perfil de expressão protéica renal e urinária intrínsecas a estas linhagens e que a exposição ao F- é capaz de alterar estes padrões. / Dental fluorosis occurs during tooth formation when excessive doses of fluoride (F) are ingested. The mechanisms that underlie the pathogenesis of dental fluorosis are not known so far. The influence of genetic factors has been considered in individual susceptibility/resistance to develop fluorosis. Two inbred mice strains (A/J and 129P3/J) have been reported to have different susceptibilities to dental fluorosis. They were used in the present study to determine if the susceptibility to dental fluorosis can be explained by alterations in F metabolism and to evaluate if there is difference in the profile of protein expression in kidney and urine of these animals. For this, a metabolic study was conducted with 18 A/J (susceptible) and 18 129P3/J (resistant) weanling mice. Each strain was divided into 3 groups, with differed according to the F concentration given in the drinking water (0, 10 and 50 ppm F). Since a pilot study showed that the A/J mice drank a higher volume of water when compared with the 129P3/J, the F concentration in the water given to the A/J mice was weekly adjusted in order to provide similar F intakes for both strains. The mice were housed in metabolic cages (n=2/cage) for 7 weeks, with free access to water and low-F diet (0.95 ppm). F intake and excretion were calculated, as well as plasma, femur and kidney F levels. The degree of dental fluorosis was assessed using QLF and clinical examination. Renal and urinary proteome profiles were examined using 2D-PAGE and coomassie brilliant blue staining. Data were tested for significant differences by 2-way repeated-measures ANOVA (p<0.05). The gels images and statistical differences (ANOVA, p <0.05) were analyzed by the Image Master Platinum 7.0 software. Significantly higher QLF scores were observed for the A/J mice submitted to 50 ppm F. The total F intake did not significantly differ between the strains. The total F excretion was significantly higher for the A/J mice, due to the higher urinary F excretion. The two strains did not differ in respect to F absorption, but the 129P3/J mice retained significantly higher amounts of F, which was consistent with their higher femur F levels. Plasma F levels, however, did not significantly differ between the strains. For kidney, quantitative intensity analysis detected, between strains A/J and 129P3/J, 122, 126 e 134 spots differentially expressed in the control group, in the group receiving low and high F concentrations, respectively. For urine, 84 spots differentially expressed were detected for control group, 68 for the group receiving low F concentration and 66 for the group receiving high F concentration. Data showed that intrinsic differences occur in the metabolism of F and profile of protein expression between these strains and that these profiles can be altered in the presence of F.

A co-exposição ao chumbo e ao flúor pode alterar o grau de fluorose dental, uma vez que ambos se depositam nos tecidos dentais. Ratos Wistar foram separados em 4 grupos: controle e 3 grupos que recebiam água contendo 100ppm de flúor (F), 30ppm de chumbo (Pb), ou 100ppm de F mais 30ppm de Pb desde a gestação. Análise do esmalte e determinação das dosagens de F no esmalte, dentina e osso foram realizadas nos animais com 81 dias. Defeitos nos incisivos dos ratos foram usados como escores em um índice que discriminou lesões na superfície como bandas, ilhas e cavidades. Não houve diferenças nas concentrações de F nos tecidos calcificados entre os grupos F e F+Pb. Os grupos controle e chumbo apresentaram esmalte normal. O grupo F+Pb apresentou defeitos de esmalte mais severos quando comparados com o grupo F (P<0.001). Este estudo mostrou que o Pb exacerbou a fluorose dental em roedores, sugerindo que a co-exposição ao PB pode explicar as diferenças na prevalência de fluorose. / Co-exposure to lead and fluoride may alter the degree of dental fluorosis, since both accumulate in calcified tissues. Wistar rats were allocated in four groups: control, and 3 groups that received water containing 100 ppm of fluoride (F), 30 ppm of lead (Pb), or 100 ppm of F and 30 ppm of Pb (F+Pb) since gestational age. Enamel analysis and F determinations in enamel, dentine, and bone were performed in 81-day-old animals. Incisor defects were scored using an index that discriminated surface lesions as bands, islets, and pits. There were no differences in the F concentration in calcified tissues between the F and F+Pb groups. The control and the Pb groups presented normal enamel. The F+Pb group presented more severe enamel defects compared with the F group (P<0.001). This study shows that Pb exacerbates dental fluorosis in rodents, suggesting that co-exposure to Pb may explain differences in fluorosis prevalence.

Orientador: Marcelo de Castro Meneghim / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T18:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_AngelicaCristianeBulio_M.pdf: 2263332 bytes, checksum: 625fc2eb8144f20319b71ce9123c4337 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Este estudo objetivou estimar a prevalência e severidade da cárie e fluorose dentária aos 12 anos de idade na cidade de Piracicaba/SP e relacionar os dados encontrados com fatores sociais e comportamentais. Foi realizada amostragem probabilística aleatória simples para a seleção das escolas púbicas e dos voluntários. A amostra constituiu de 1104 escolares, provenientes de 21 escolas, que foram examinados de acordo com a metodologia proposta pela OMS (1997), por dois examinadores previamente treinados e calibrados. No presente estudo, foram analisadas as variáveis dependentes (CPO-D e Fluorose) e as variáveis independentes (Socioeconômicas e Comportamentais). A média do Índice CPO-D encontrada foi de 0,7 e a prevalência de cárie foi de 31,5%. O número total de dentes examinados foi de 27949 dos quais 97,22% (n=27173) estavam hígidos, 0,68% (n=190) estavam cariados, 0,06% (n=16) foram perdidos e 2,04% (n=570) estavam obturados revelando que apenas 2,7% do total de dentes examinados apresentou experiência de cárie (CPO-D>0). Somente 7,5% das crianças apresentou Fluorose dentária (T-F?1), valores considerados muito baixos segundo classificação da OMS. Considerando-se a série histórica desde 1973 quando se iniciou a fluoretação da água de abastecimento público em Piracicaba/SP até o ano de 2013, houve redução linear do índice CPO-D de 92% (R2=0,9895). A prevalência de Fluorose Dentária foi reduzida de forma não linear em 63% (R2=0,7883) no período de 1991 a 2013. A análise dos dados com emprego de Regressão logística Múltipla revelou que pertencer à classe socioeconômica mais alta, possuir alta renda per capta mensal, iniciar a escovação dentária precocemente quando da erupção dos primeiros dentes decíduos e realizar consultas preventivas com o cirurgião-dentista diminui pela metade as chances de apresentar cárie dentária. Concluiu-se que houve melhora significativa nos indicadores de saúde bucal nos últimos 40 anos no município de Piracicaba-SP. Cerca de 70% das crianças aos 12 anos de idade estavam livres de cárie e o índice de cárie dentária é 12 vezes menor se comparado ao encontrado no início da fluoretação da água de abastecimento público do município. A fluorose dentária, cuja prevalência e severidade encontradas são consideradas baixas, não se caracteriza como um problema de saúde pública no município estudado / Abstract: This study aimed to evaluate caries experience and fluorosis prevalence in 12-year-old schoolchildren from Piracicaba/SP and its relationship with socioeconomic and behavioral factors. Simple random probability sampling was conducted for selection of public schools. The sample consisted of 1104, from 21 schools, whose were examined according to the methodology proposed by WHO (1997), by two previously trained and calibrated examiners. Dependent variables (DMFT and T-F Indexes, caries and fluorosis experience) and independent variables (socioeconomic and behavioral) were analyzed. The mean of the DMFT index was found to be 0.7 and caries prevalence was 31.5 %. The total number of examined teeth was 27949 of which 97.22% (n=27173) were healthy, 0.68% (n = 190) were decayed, 0.06% (n = 16) were missing and 2.04 % (n=570) were filled revealing that only 2.7 % of the teeth examined had caries experience (DMFT>0). Only 7.5% of children had dental fluorosis (TF?1), values considered very low according to the WHO classification. In a historical series since 1973 when fluoridation of public water supply in Piracicaba/SP it began until the year 2013, there was 92% (R2=0.9895) of the linear reduction in the DMFT index. Prevalence of Dental Fluorosis was non-linearly reduced by 63% (R2=0.7883) between 1991-2013 period. Multiple logistic regression was performed which revealed that belong to higher socioeconomic class, have high monthly per capita income, starting tooth brushing since the eruption of the first deciduous teeth and perform preventive visits to dentist decreases by half the Odds Ratio of having tooth decay. It was concluded that there was significant improvement of the oral health indicators in the last 40 years in Piracicaba-SP. Around 70% of 12-year-old schoolchildren was caries free and DMFT Index was found 12 times lower than at the beginning of water fluoridation. Dental fluorosis prevalence and severity are found to be very low and was not considered as a public health problem in the city studied / Mestrado / Saude Coletiva / Mestra em Odontologia