Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4615.pdf: 2688296 bytes, checksum: 18c8fbe6fb83004856a32c02827d70f5 (MD5) Previous issue date: 2011-11-22 / Universidade Federal de Sao Carlos / Rabies is a zoonotic viral disease caused by a virus of the genus Lyssavirus that affects several species of mammals. Rabies remains a global public health threat that kills more than 55,000 people per year mainly in developing countries, this disease once established do not have a specific treatment. The RV envelope is composed of a glycoprotein, known as a unique antigen capable of conferring immune response against the rabies, and therefore, is the focus of research for development an efficient and safe recombinant vaccine based on this viral antigen. Cell line stably transfected S2 Drosophila melanogaster have been used in the production of many heterologous proteins and has been studied for the production of the rabies virus glycoprotein (RVGP) in our laboratory. This approach involves the selection of high producing cell populations; procedure that requires considerable periods of time (months), increasing management and costs of production. In this sense, in recent decades, many systems focused on the expression of heterologous proteins by transient expression of genes, were analyzed because they allow obtaining significant quantities of recombinant protein in a short period of time (weeks). For the use of transient transfection technology can be found a variety of methods and available agents, such as electroporation, cationic lipids, cationic polymers and calcium phosphate precipitated. The choice and optimization of each of them depends mainly on the cell type and protein being expressed. Thus, the objective of this study was to evaluate the transient expression of the glycoprotein gene of rabies virus (RVGP) in insect cells of Drosophila melanogaster S2 lineage, evaluating the vehicles transfection: calcium phosphate, cationic lipid (Cellfectin) and cationic polymer (ExGen500 and JetPEI). In order to determine the most efficient transfection agent, experiments were performed in 6 well plate and bottle of 100 mL of culture, which analyzed the influence of cell density, the concentration of DNA and transfection reagent volume on the expression of RVGP assessed by ELISA and fluorescence microscopy. Yields ranging from 50-90 ng/107cel were obtained in different experiments on multiwell plate, suggesting strong effect of ratio DNA: transfection agent used. Comparison of transfection agents showed no significant differences. In transfections made in suspension culture was analyzed the effect of the plasmid (whether or not the signal of BiP cell secretion) on the expression RVGP. When we used the plasmid containing the signal BiP (pMTiRVGP) were obtained 160 ng/107cel of RVGP production, and 200 ng/mL of volumetric production without significant differences between the different transfection agents. However, significant differences were found when we used the plasmid not containing the signal BiP (pMTRVGP), with the RVGP production was 60 ng/107cells in cells transfected with Cellfectin, ExGen500 and calcium phosphate, except in cells transfected with JetPEI was reached a production of 120 ng/107cells. In preliminary experiment bottle type "spinner" with a working volume of 60 mL were achieved expressions of 140 ng/107cel of RVGP in cells transfected with JetPEI and calcium phosphate. This suggests that optimization of culture conditions and transfection are possible to increase recombinant protein expression in cultured on a large scale. / A raiva é uma enfermidade causada por um vírus do gênero Lyssavirus que afeta várias espécies de mamíferos. Esta doença apresenta um alto custo social e econômico principalmente em países em desenvolvimento. Na superfície do vírus da raiva está localizada a glicoproteína do vírus, reconhecida como antígeno capaz de conferir resposta imunológica contra a raiva, sendo, o foco de pesquisas no desenvolvimento de uma vacina recombinante. Células da linhagem Drosophila melanogaster S2 estavelmente transfectadas têm sido usadas na produção de muitas proteínas heterólogas e tem sido estudada para a produção da glicoproteína do vírus da raiva (RVGP) em nosso laboratório. A abordagem para a obtenção de linhagens recombinantes estáveis envolve a seleção de populações celulares altamente produtoras; sendo um processo que requer consideráveis períodos de tempo (meses), uma elevada manipulação e altos custos de produção. Neste sentido, nas últimas décadas, muitos sistemas focados na expressão de proteínas heterólogas através da expressão transiente de genes foram analisados, porque eles permitem a obtenção de quantidades consideráveis de proteína recombinante em um curto período de tempo (semanas). Para o uso da tecnologia de transfecção transiente pode ser encontrada uma variedade de métodos e agentes disponíveis, tais como eletroporação, lipídeos catiônicos, polímeros catiônicos e fosfato de cálcio. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão transiente do gene da glicoproteína do vírus da raiva (RVGP) em células de inseto da linhagem Drosophila melanogaster S2, avaliando os veículos de transfecção fosfato de cálcio, lipídeo catiônico (Cellfectin) e polímero catiônico (ExGen500 e JetPEI). A fim de determinar o agente de transfecção mais eficiente, foram feitos experimentos em placa de 6 poços e frasco de cultivo de 100mL, onde foram analisados a influência da densidade celular; a concentração de DNA, o volume do reagente de transfecção sobre a expressão da RVGP analisada através do método de ELISA. Quantidades de RVGP que variaram entre 50-90 ng/107cel foram obtidas nos diferentes experimentos feitos em placa, sugerindo um efeito da relação DNA: agente de transfecção. A comparação entre os agentes de transfecção não mostrou diferenças significativas. Nas transfecções feitas em cultura em suspensão foi analisado o efeito de transfectar o plasmídeo para expressão de RVGP contendo ou não o sinal de secreção celular BiP. Quando foi usado o plasmídeo contendo o sinal BiP (pMTiRVGP) foram atingidas valores de RVGP de 160 ng/107cel e produções volumétricas de 200 ng/mL, porém sem diferenças significativas entre os diferentes agentes de transfecção. Entretanto, foram encontradas diferenças quando foi usado o plasmídeo não contendo o sinal BiP (pMTRVGP), onde a produção de RVGP foi de 60 ng/107cells nas células transfectadas com Cellfectin, ExGen500 e fosfato de cálcio, porém as células transfectadas com JetPEI obtiveram uma produção de 120 ng/107cels de RVGP. Em experimento em frasco de cultivo tipo spinner com volume de trabalho de 60 mL, foram atingidas expressões de RVGP de 140 ng/107cel para células transfectadas com JetPEI e fosfato de cálcio, sugerindo que otimizações nas condições de cultivo e transfecção ainda podem ser testadas visando aumentar a expressão da proteína recombinante em cultivos em larga escala.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:36:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2100606 bytes, checksum: 5e91a2b8b12b7ee39c9e424e7736aa78 (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The main objectives in this work were: i) to find the optimum conditions to disinfect tomato seeds (Solanum lycopersicum Mill.) and eggplant seeds (Solanum melongena L.); ii) to evaluate the influence of the type of sealing in the obtained seedlings and explants; iii) to evaluate the effect of sonication in the morphogenesis in vitro of the tomato explants and in the viability of Agrobacterium tumefaciens cells; iv) to establish the parameters that allow the genetic transformation mediate by A. tumefaciens aiming the genetic silencing mediate by RNAi from myo-inositol-phosphate synthase, using the GmMPIS1 gene. It was checked that the use of deionized water was more efficient to disinfect eggplant seeds than 0.13% v/v chlorine solution. The use of dry disinfection in chlorine cameras is not appropriate to clean the tomato and eggplant seeds due to the gas toxicity and that it also compromises their germination. It was observed that gas exchange helps the seedlings development and leads to a bigger number of explants and with better quality to be used in the genetic transformation via Agrobacterium tumefaciens. Using the SAAT technique (Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation), the explants and the bacteria suspensions were exposed to ultrasound for 0, 3, 6 and 9 seconds. It was verified that the immersion time from 3 to 6 seconds was appropriate to be used in genetic transformation, since it shown the biggest transient expression areas evaluated by in situ histochemical analysis of the GUS gene, the biggest number of regenerated structures and less mortality in the A. tumefaciens cells. The process was optimized when the immersion of the A. tumefaciens suspension was made 24 hours after the exposition to ultrasound. To make possible to select the transformed plants it was established the dependence of the hygromycin agent lethality and the found concentration of the non-transformed selected cells was 7.5 mg.L-1 in cotyledonary hipocotyledonary and leaf tomato explants. It was found that concentrations above this value were toxic, showing chlorotic and necrotic areas in the explants. A genetic transformation in tomato and eggplant plants was successfully made to check the relation between the MIPS gene and the seeds development by A. tumefaciens containing plasmids with silencing construction by siRNA to the MIPS gene using a conserved sequence of the soy gene GmMIPS. The transgenic nature of the primary regenerators was confirmed by in situ histochemical tests of GUS and by PCR analysis with specific oligonucleotides initiators. The analysis of the genetic expression confirmed the MIPS gene silencing and the morphologic analysis of the fruits confirmed the hypothesis of the relationship between the myo-inositol- phosphate synthase and the seeds development. However, as shown by flow-citometry technique, the process of regeneration in vitro used in the tomato plants transformation protocol changed some transgenic plants to polypoids. This was not observed in eggplant plants. / Este trabalho teve como objetivo: i) a otimização das condições de desinfestação de seentes de tomateiros (Solanum lycopersicum Mill.) e berinjela (Solanum melongena L.); ii) a avaliação da influência do tipo de vedação sobre a qualidade das plântulas e explantes oriundos destas; iii) a avaliação do efeito da sonicação sobre a morfogênese in vitro de explantes de tomateiros e sobre a viabilidade de células de Agrobacterium tumefaciens; iv) o estabelecimento de parâmetros para possibilitar a transformação genética mediada por A. tumefaciens visando ao silenciamento gênico mediado por RNAi da sintase do mio-inositol-fosfato, utilizando-se o gene GmMIPS1. Na desinfestação das sementes de berinjela, comprovou-se que tratamentos utilizando imersão em água deionizada são mais eficientes que imersão em solução de 0,13% v/v de cloro. A utilização de desinfestação a seco, em câmara de gás cloro, não é indicada para a assepsia de sementes de tomate e berinjela, pela toxicidade do gás às sementes, comprometendo sua germinação. Observou-se que as trocas gasosas favorecem o desenvolvimento das plântulas e geram explantes em maior número e de melhor qualidade para utilização de transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. Ao se utilizar a técnica de SAAT ( Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation ), os explantes e a suspensão bacteriana foram expostos a tempos de exposição ao ultra-som (0, 3, 6 e 9 segundos). Verificou-se que o intervalo de 3 a 6 segundos é o indicado para se utilizar em transformação genética, pois resultou nas maiores áreas de expressão transiente avaliada pela análise histoquímica in situ do gene GUS, maior número de estruturas regeneradas e menor mortalidade nas células de A. tumefaciens. O processo foi otimizado quando a imersão em suspensão de A. tumefaciens foi realizado após 24 horas de exposição ao ultra-som. Para ser possível a seleção de transformantes foi estabelecida a curva de letalidade ao agente higromicina e a concentração encontrada para seleção de células não transformadas foi de 7,5 mg.L-1 em explantes cotiledonares, hipocotiledonares e foliares de tomateiro. Dosagens acima de 7,5 mg.L-1 mostratam-se tóxicas, resultando em explantes com áreas cloróticas e necróticas. A fim de verificar a relação do gene MIPS com o desenvolvimento de sementes, a transformação genética foi realizada com sucesso em tomateiro e berinjela, via A. tumefaciens contendo plasmídeo com construção de silenciamento por siRNA para o gene MIPS, utilizando uma seqüência conservada do gene de soja GmMIPS. A natureza transgênica dos regenerantes primários foi confirmada mediante o teste histoquímico in situ de GUS e análise de PCR com oligonucleotídeos iniciadores específicos. A análise de expresão gênica confirmou o silenciamento do gene MIPS, e a análise morfológica dos frutos confirmou a hipótese do relacionamento da mio-inositol-fosfato-sintase com o desenvolvimento de sementes. Porém, conforme detectado pela técnica de citometria de fluxo, o processo de regeneração in vitro adotado no protocolo de transformação de tomateiro, ao contrário de berinjela, induziu poliploidia em algumas plantas transgênicas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 466360 bytes, checksum: e0d21936cd393cfb2e58f6a6e09e5149 (MD5) Previous issue date: 2007-03-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this work was to evaluate the impact of the herbicides ametryn and trifloxysulfuron-sodium, singly or combined, and 2,4-D, on the soil microrganisms and the mineral nutrition of the sugar-cane plants. In the first trial, it was evaluated the activity of inorganic phosphate-solubilizing microorganisms and the numbers of fungi and bacteria in the rhizosphere of sugar cane and, in the second, the respiratory rate, microbial biomass, metabolic quotient, and total C-CO2 evolved from the soil. In the third trial, the growth and the macro and micronutrients concentrations were evaluated in the foliar tissues of the sugar-cane plants after the herbicide application. In the three trials, foliar tissue samples and rhizospheric and non-rhizospheric soil samples were collected and immediately analyzed at 15, 30, 45, and 60 days after spraying (DAS). At 15 DAS, all herbicides tested led to reductions in the numbers of fungi in the soil. 2,4-D caused a reduction in the densities of bacterial populations in the rhizosphere at all times of evaluation, evidencing a higher sensitivity of bacteria to this compound. The soil microbial biomass was sensitive to ametryn applied singly or combined, especially up to 30 DAS. These treatments resulted in the highest values of metabolic quotient at 45 and 60 DAS. The foliar concentrations of N, P and Mg were not affected for the herbicide use. At 60 DAS, trifloxysulfuron-sodium lead to increase of 22.10% in the biomass accumulation of shoots sugar cane plants. Trifloxysulfuron-sodium and 2,4-D led to higher inorganic phosphate solubilization at 15, 30, and 45 DAS, and 15 and 30 DAS, respectively, without affecting the microbial biomass. This work evidences that herbicide application in the shoots of sugar cane affects the foliar concentrations of macro and micronutrients and the soil microorganisms in the rhizosphere. / Objetivou-se neste trabalho avaliar a microbiota do solo e a nutrição mineral da cana-de-açúcar após aplicação dos herbicidas 2,4-D, ametryn, trifloxysulfuronsodium e ametryn+trifloxysulfuron-sodium. No primeiro ensaio, avaliou-se a atividade e a densidade populacional dos microrganismos solubilizadores de fosfato inorgânico (MSFI) e totais no solo rizosférico da cana-de-açúcar e, no segundo, foram avaliadas a taxa respiratória, a biomassa microbiana e o quociente metabólico do mesmo solo. No terceiro ensaio, avaliaram-se o crescimento e as concentrações de macro e micronutrientes nos tecidos foliares das plantas de cana-de-açúcar após a aplicação dos herbicidas. Nos três ensaios foram realizadas avaliações aos 15, 30, 45 e 60 dias após a aplicação (DAA) dos herbicidas. Todos os herbicidas provocaram redução na densidade populacional fúngica do solo somente no período inicial de avaliação. O 2,4-D foi mais tóxico às bactérias do solo até aos 60 DAA. Analisando o quociente metabólico, ressaltaram-se condições estressantes para a microbiota do solo quando este foi tratado com ametryn isolado e em mistura com trifloxysulfuronsodium. A atividade dos MSFI foi favorecida pela aplicação do 2,4-D até os 30 DAA e o trifloxysulfuron-sodium estimulou essa atividade por todo período de avaliação. As concentrações de N, P e Mg nos tecidos foliares não foram afetados pela utilização dos herbicidas. Em plantas tratadas com trifloxysulfuron-sodium observou-se acréscimo de 22,10% no acúmulo de massa seca da parte aérea das plantas aos 60 DAA. Este trabalho evidenciou que a aplicação dos herbicidas na parte aérea de plantas de cana-de-açúcar afetou a concentração dos nutrientes foliares, a densidade populacional de microrganismos, atividade de solubilização de fosfato, a taxa respiratória, a biomassa e o quociente metabólico na rizosfera.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 568781 bytes, checksum: e6beb96802418d9a09f3cb5c6661297e (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use P solubilizing microorganisms are an alternative for a sustainable use of P against a backdrop of depletion of high-grade ores. Nevertheless, the chemical characteristics of rock phosphates (RP), particularly the level of toxic elements, can affect the efficiency of microbial solubilization. Fluoride (F-) released from fluorapatites has been shown to significantly inhibit P solubilization by Aspergillus niger, stimulating the search for alternatives to overcome F- toxicity. Thus, the aim of this study was to select A. niger mutants efficient at P solubilization in the presence of F-. Three selected mutants were also characterized as to their P solubilization mechanisms and the solubilization potential of different P sources. Twenty-nine mutants were obtained that presented changes in their phosphate solubilization activity in comparison to the wild type (WT). The mutant FS1-331 showed higher solubilization of Araxá RP, while FS1-555 promoted higher soluble P when grown in media with calcium phosphate supplemented with F- and in those with pure P sources. These mutants also showed higher tolerance to F- than the WT and displayed changes in the production of organic acids. The higher production of oxalic acid by FS1-331 and FS1-555 correlated with their improved capacity of Araxá RP solubilization. A mutant with decreased P solubilization capacity showed lower production of organic acids, corroborating the importance of these compounds for RP solubilization. FS1-331 was more efficient at solubilizing Araxá, Catalão, and Patos de Minas RPs than the WT and FS1-555. The variation in P solubilization capacity of the mutants obtained in this work may help clarify the RP solubilization mechanisms by A. niger. Moreover, the mutants with better performance selected in this work show potential for use in microbial RP solubilization systems with P sources rich in fluoride. / O uso dos micro-organismos solubilizadores de fosfato (P) é uma alternativa para o uso sustentável do P tendo em vista a diminuição das reservas fosfáticas de alta qualidade. As características químicas dos fosfatos de rocha (FR), em especial o nível de elementos tóxicos, podem influenciar a eficiência de solubilização microbiana. O fluoreto (F-) liberado de fluorapatitas inibi significativamente o processo de solubilização por Aspergillus niger FS1. Assim, o objetivo deste estudo foi selecionar mutantes de A. niger eficientes na solubilização de fosfato na presença de F-. Três mutantes selecionados foram também caracterizados quanto aos mecanismos de solubilização de fosfato e ao potencial de solubilização de diferentes fontes de P. Vinte e nove mutantes com alterações na solubilização de fosfato foram obtidos. O mutante FS1-331 demonstrou maior potencial de solubilização de fosfato de Araxá, enquanto que o mutante FS1-555 aumentou o P solubilizado em meio de cultura com fosfato de cálcio suplementado com F- e naqueles com fontes sintéticas de P. Os mutantes avaliados mostraram maior tolerância ao F- do que o tipo selavagem e tiveram a produção de ácidos orgânicos alterada. A maior produção de ácido oxálico pelos mutantes FS1-331 e FS1-555 relacionou-se com o melhor desempenho dessas estiprpes na solubilização de fosfato de Araxá. Um mutante com solubilização de P diminuída (FS1-375) apresentou menor produção de ácidos orgânicos quando comparado ao tipo selvagem, corroborando a importância desses compostos para o processo de solubilização de FRs. O mutante FS1-331 foi o mais eficiente na solubilização dos FRs de Araxá, Catalão e Patos de Minas. A variação na solubilização de P das estirpes fúngicas estudadas pode contribuir para a melhor compreensão do processo de solubilização de fosfatos por A. niger. Além disso, os mutantes mais eficientes obtidos apresentam alto potencial de aplicação em sistemas microbianos de solubilização de fosfatos com fontes de P ricas em fluoreto.

Made available in DSpace on 2016-12-08T15:56:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gisele Dalmonico.pdf: 8818399 bytes, checksum: 54cd754bf0a330bb5a3710ceaea2c8ed (MD5) Previous issue date: 2015-11-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Treatments for bone loss are research topics and involve different areas of scientific knowledge, engineering, physics, chemistry, biology and biomedicine. The biomaterials that stand out as replacement in bone structure treatments are hydroxyapatite, β and α calcium phosphate, biphasic hydroxyapatite/calcium phosphate β and α and hydroxyapatite matrix nanocomposite biomaterials. These biomaterials stand out as bone substitutes because they present a crystallography similar to that of human skeleton bone apatite, being bioactive and biocompatible. Nanostructured biphasic bioceramics are researched and show potential to be bone substitutes in surgical repairing procedures and reconstruction of bone tissue. This project was developed based on research of biomaterials of calcium phosphates, involving the synthesis of two matrices of calcium phosphates: β-calcium phosphate (β-TCP) and hydroxyapatite (HA) and the preparation of microporous granular biomaterials of β-TCP, HA and biphasic compositions HA/β-TCP. All biomaterials were characterized by different techniques: X-ray diffraction, infrared spectroscopy in Fourier transform (FTIR), Raman spectroscopy, specific surface area for BET, particle size by laser diffraction, density of helium pictometria, porosimetry mercury and hydrostatic porosity by Arthur, differential scanning calorimetry, dilatometry, scanning electron microscopy, atomic force microscopy, confocal microscopy, optical microscopy, polarized light microscopy. The interest of this research was to evaluate the performance of biomaterials in in vivo tests for the time periods of 90 and 180 days, in relation to osseointegration and the formation of neoformed bone tissue and determine which biomaterials presented potential as bone replacement for biomedical applications. The results found are encouraging and demonstrate that the granulated microporous biomaterials of calcium phosphate proves to be ability to repair and bone reconstruction for the two test times in vivo evaluated, revealing the osseointegration and bone formation similar between the compositions. / Os tratamentos de perdas ósseas são temas de pesquisa que envolve diferentes áreas do conhecimento científico, engenharia, física, química, biologia e biomédica. Os biomateriais que se destacam como substitutos em tratamentos da estrutura óssea são a hidroxiapatita, os fosfatos de cálcio-β e α, os bifásicos hidroxiapatita/fosfato de cálcio-β, α e os biomateriais nanocompósitos de matriz hidroxiapatita. O destaque destes biomateriais como substitutos ósseos, se deve, por apresentarem cristalografia similar à da apatita óssea do esqueleto humano, por serem bioativos e biocompatíveis. As biocerâmicas bifásicas nanoestruturadas são pesquisadas e demonstram ser promissoras como substitutos ósseos em procedimentos cirúrgicos de reparação e reconstrução do tecido ósseo. Este projeto se desenvolveu com base na investigação de biomateriais de fosfatos de cálcio, envolvendo a síntese de duas matrizes de fosfatos de cálcio: Fosfato de cálcio-β (TCP-β) e hidroxiapatita (HA) e elaboração de biomateriais granulados microporosos de TCP-β, HA e bifásicos HA/TCP-β. Todos os biomateriais granulados foram caracterizados por diferentes técnicas: difratometria de raios X, espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), espectroscopia Raman, área superficial específica por BET, tamanho de partícula por difração a laser, densidade por pictometria de hélio, porosimetria de mercúrio e hidrostática com método de Arthur. Com relação ao comportamento térmico utilizou-se a calorimetria exploratória diferencial, dilatometria. A caracterização microestrutural foi realizada com a microscopia eletrônica de varredura, microscopia de força atômica, microscopia confocal, microscopia óptica, microscopia de luz polarizada. Esse projeto de pesquisa envolveu a elaboração de biomateriais granulados microporosos de fosfatos de cálcio, o interesse foi avaliar o desempenho destes em teste in vivo, para os tempos de 90 e 180 dias em tíbia de ovinos, em relação ao desempenho dos mesmos sobre a osseointegração e a neoformação do novo tecido ósseo. Os resultados encontrados são animadores e demonstram que todas as composições de biomateriais granulados microporos de fosfatos de cálcio, demonstraram capacidade de reparação e reconstrução óssea para os dois tempos de teste in vivo avaliados, revelando a osseointegração e a neoformação óssea semelhante entre as composições.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA130.pdf: 1998964 bytes, checksum: 145e149b4c0a26553d621c120349c867 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / New techniques for bone replacement have continuously been searched, to find new alternatives for treatment of fractures, bone tumors or any orthopedic disease requiring transplants or bone grafts. With that proposal, we performed surgical procedures in both sheep s tibia to evaluate the osteoregenerative capacity of biomaterials of different compositions. Eight female, mongrel sheeps, 12 months old, weighting on average 30kg were obtained for the animal study. Three bone defects, in both tibias of each animal, a total of six bone defects each, were produced, being four of them treated with four different types of biomaterials and two with autogenous bone grafts, as a control group. The biomaterials implanted were: hydroxyapatite (HA), beta-tricalcium phosphate (TCP-β), hydroxyapatite/beta-tricalcium phosphate 60:40 (HA/TCP-β 60:40) and the nanocomposite hydroxyapatite and alumina (HA/Al2O3 5%). The animals were allocated in two groups: Group 60 (n=04), in which the animals were euthanized sixty days after the implantation of the biomaterials and Group 90 (n=04), in which the animals were euthanized ninety days after the procedure. Were performed radiograph images on the preoperative period, on the immediate postoperative and at 30, 60 and 90 days of postoperative period, to excluded any previously disease or postoperative complications that could compromise this research. After euthanasia, the tibias were collected for macro and microscopic evaluation, which was accessed by scanning electron microscopy (SEM) and optic microscopy. The results suggest that HA, TCP-β and HA/TCP-β present a great osteoregenerative capacity. The last one seems to be the best for a long-term outcome, due its best control in the solubilization and releasing of calcium and phosphates ions through the biological environment during the bone formation. The nanocomposite HA/Al2O3 5% didn t show a good response on this study, and we suggest new researchs to better evaluate the potential and applicability of this new biomaterial / Novas técnicas para substituição de tecido ósseo têm sido continuamente pesquisadas, buscando novas alternativas para o tratamento de fraturas, tumores ósseos ou qualquer enfermidade ortopédica que indique o uso de transplantes ou enxertos ósseos. Com este intuito, foram realizados experimentos cirúrgicos em tíbias de ovinos, objetivando avaliar a capacidade osteoregenerativa de biomateriais em diferentes composições. Foram utilizadas oito ovelhas mestiças texel, com 12 meses de idade e peso médio de 30 kg. Foram produzidos três defeitos ósseos em ambas as tíbias dos animais, totalizando seis defeitos, sendo que quatro foram preenchidos por biomateriais, e dois por fragmentos ósseos retirados do próprio animal, funcionando como controle. Os materiais implantados foram: hidroxiapatita (HA), tricálcio fosfato-β (TCP-β), hidroxiapatita/tricálcio fosfato-β (HA/TCP-β 60/40) e o nanocompósito hidroxiapatita/alumina a 5% (HA/Al2O3 a 5%). Os animais foram alocados em dois grupos: Grupo 60 (n=04), em que os animais foram eutanasiados após 60 dias da colocação dos implantes e Grupo 90 (n=04), em que a eutanásia ocorreu 90 dias após a colocação dos implantes. Foram realizadas radiografias nos períodos pré-operatório, imediatamente após o procedimento e aos 30, 60 e 90 dias de pós-operatório, a fim de excluir qualquer alteração prévia ou complicação pós-operatória, capaz de comprometer a pesquisa. Após a eutanásia, foram coletadas as tíbias para avaliação macro e microscópica, por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia óptica. Os resultados encontrados sugerem uma boa capacidade de neoformação óssea com a HA, o TCP-β e o composto bifásico HA/TCP-β 60/40. Este último apresenta o melhor resultado a longo prazo, devido ao melhor controle na solubilização e liberação dos íons cálcio e fosfatos para o meio biológico durante o processo de neoformação óssea. O biomaterial nanocompósito HA/Al2O3 a 5% não apresentou resultados promissores neste estudo, e sugerem-se novas pesquisas a fim de investigar melhor o potencial e aplicabilidade deste novo biomaterial

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA177.pdf: 755005 bytes, checksum: d47e1b3be9b01d28494b49fd777da7f7 (MD5) Previous issue date: 2015-07-20 / The nanostructured calcium phosphate bioceramics have shown importance in bone repair biomaterials for its chemical and crystallographic similarity with bone tissue crystalline structure, increasing their relevance in orthopedics, dentistry and bone healing. These biomaterials have interconnected microporous nanostructure, made of thin grains and micropores, which favor their use as synthetic matrix in recuperation of injure bone. In vitro cell culture is a value tool for studying the mechanisms whereby biomaterials can cause adverse reactions in cell level, indicating their potential use at medical practice. The aim of this study was to evaluate the biocompatibility of porous calcium phosphate bioceramics with different morphology of grains and microporous by MTT assay, cell growth curve and cell-material interaction study by scanning electron microscope (SEM). The cell-material interaction study by SEM showed fibroblasts adhesion and proliferation in the biomaterials surface. In the results of MTT assay and cell growth curve it was found that the tested biomaterials were biocompatible, making them suitable candidates as bone substitutes. The biomaterial composed by 80% TCP-β/20% HA (1,67M/1100 °C/2h) showed cell viability less than 70% and descendant growth curve, indicating certain level of cytotoxicity / As biocerâmicas nanoestruturadas de fosfato de cálcio tem se destacado na área de biomateriais de reconstituição óssea pela sua semelhança química e cristalográfica com a apatita óssea do esqueleto humano, reforçando sua importância na ortopedia, odontologia, fixação de implantes e reparação do tecido ósseo. Estes biomateriais apresentam micro e nanoestruturas microporosas interconectadas, formada por finos grãos e microporos, características estas que favorecem seu uso como matriz sintética na recuperação de tecido ósseo lesado. O cultivo de células in vitro é uma valiosa ferramenta para se estudar os mecanismos pelos quais os biomateriais podem produzir reações adversas em nível celular, indicando seu potencial para uso na prática médica. Este trabalho teve como objetivo avaliar a biocompatibilidade das cerâmicas porosas de fosfato de cálcio em condições diferenciadas de morfologia de grãos e de microporos por meio do teste de citotoxicidade MTT, análise da curva de crescimento celular e estudo da interação célula-material por microscopia eletrônica de varredura (MEV). A análise da interação célula-material por MEV mostrou a adesão e proliferação dos fibroblastos na superfície das diferentes biocerâmicas de fosfato de cálcio testadas. Nos resultados obtidos por meio do ensaio colorimétrico MTT e curva de crescimento constatou-se que os biomateriais testados se mostraram biocompatíveis, possuindo grande potencial como substitutos ósseos. O biomaterial composto por 80% TCP-β/20% HA (1,67M/1100 °C/2h) apresentou viabilidade celular abaixo de 70% e curva de crescimento descendente, demonstrando grau de citotoxicidade

Made available in DSpace on 2016-12-08T17:19:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parte 01 - Revisao Bibliografica.pdf: 888360 bytes, checksum: 212c15e8818de6b2dfa60bb2cd835592 (MD5) Previous issue date: 2009-12-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The loss of an organ or a part of the body generates, besides the loss of function, social and psychological disorders. The materials used to replace bone fall into a class called biomaterials and should have physical and biological properties compatible with living tissue hosts. The objective of this study is to optimize the method of synthesis and characterization of a bone matrix of calcium phosphate nanostructured and nanocomposite calcium phosphate /SiO2n at concentrations of 1%, 2%, 3% and 5% by volume. Were carried out morphological characterization of nanoparticles, nanostructured mineral powders and biomaterials obtained by sintering at 1200 C/2h. Finally, studies were performed on the mechanical behavior of nanostructured biomaterials. The process of synthesis of nanostructured powders proved to be efficient and optimized, allowing to obtain the matrix of calcium phosphate and nanocomposites with silica gel. Silica gel influence the surface energy of the matrix of calcium phosphate and this phenomenon has influenced the particle size of the nanocomposites, phase transformation and sinterability of the matrix of calcium phosphate. Tests of mechanical properties showed that the increase in percentual silica gel in the phosphate matrix tends to reduce the mechanical strength (hardness, strength and fracture toughness). Only the nanocomposite with 1% silica showed improvement in mechanical properties after annealing. / A perda de um órgão ou de uma parte do corpo humano gera, além da perda da função, transtornos sociais e psicológicos. Os materiais utilizados na substituição de ossos enquadram-se em uma classe denominada de biomateriais e devem apresentar propriedades físicas e biológicas compatíveis com os tecidos vivos hospedeiros. Esse trabalho tem como objetivo otimizar o método de síntese e caracterização de uma matriz óssea de fosfato de cálcio nanoestruturada e de nanocompósitos fosfato de cálcio/SiO2n, nas concentrações de 1%, 2%, 3% e 5% em volume. Foram realizadas caracterizações morfológicas das nanopartículas, mineralógica dos pós nanoestruturados e dos biomateriais obtidos da sinterização a 1200ºC/2h. Por fim, foram realizados estudos sobre o comportamento mecânico dos biomateriais nanoestruturados. O processo de síntese de pós nanoestruturados mostrou-se eficiente e otimizado, permitindo a obtenção da matriz de fosfato de cálcio e dos nanocompósitos com sílica gel. A sílica gel influenciou na energia de superfície da matriz de fosfato de cálcio e esse fenômeno influenciou no tamanho de partícula dos nanocompósitos, transformação de fase e sinterabilidade da matriz de fosfato de cálcio. Os ensaios de propriedades mecânicas mostraram que o aumento do percentual de sílica gel na matriz de fosfato tende a reduzir a resistência mecânica (microdureza, flexão e tenacidade à fratura). Apenas o nanocompósito com 1% de sílica apresentou melhora nas propriedades mecânicas após o recozimento.

This study aimed to evaluate the effect of the use of phytase exoenzyme and other mineral sources on the bioavailability of phosphorus , increased dietary energy and nutrient digestibility . The treatments were : sorghum with inorganic phosphate ( SFB ) , maize with inorganic phosphate ( MFB ) , sorghum meal, meat and bone meal ( SFco ) , sorghum with phytase ( SFV ) and without energy recovery and amino acids ( SFNV ) . 1400 birds were for performance reviews , which were determined feed intake , body weight , feed conversion real and traditional and viability . For the analysis of digestibility at 15 days were used 80 birds , which were subjected to total collection , now for carcass composition and mineralization of tibia were used 6 birds per treatment , where we proceeded to determine the dry matter , crude protein , ether extract , ash , gross energy housing , and calcium and phosphorus of tibia and carcass. Data were subjected to analysis of variance and means were compared by Tukey test at 5 % and viability Kruskal-Wallis test . There were no statistical differences in performance at 7 days of age and only 14 live weight was lower for the MFB , however at 42 days , body weight was greater for the SFB compared to the MFB . Digestibility at 15 days there was no statistical difference. For carcass composition, the SFV showed higher percentage of ether extract. The percentage of calcium MFB FCS and were lower compared with the SFNV and equal to SFco and SFV , and the phosphorus content of the SFV and SFNV showed higher values. The exogenous phytase enzyme is able to hydrolyze phytate and release phosphorus from vegetable source for assimilation by animals , thus acting as a substitute for vegetable sources of phosphorus. / Objetivou-se avaliar o efeito da utilização da exoenzima fitase e de outras fontes minerais sobre a biodisponibilização do fósforo, o incremento de energia da ração e a digestibilidade de nutrientes. Os tratamentos foram: Sorgo com fosfato bicálcico (SFB), milho com fosfato bicálcico (MFB), sorgo com farinha de carne e ossos (SFCO), sorgo com fitase com (SFV) e sem valorização de energia e aminoácidos (SFNV). Foram 1400 aves para as análises de desempenho determinou-se o consumo de ração, peso vivo, conversão alimentar real e tradicional e a viabilidade. Para as análises de digestibilidade aos 15 dias foram utilizadas 80 aves, que foram submetidas a coleta total de excretas, já para a composição de carcaça e mineralização das tíbias foram utilizadas 6 aves por tratamento, onde procedeu-se a determinação dos teores de matéria seca, proteína bruta, extrato etéreo, matéria mineral, energia bruta da carcaça, e cálcio e fósforo das tíbias e carcaça. Os dados foram submetidos a análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey 5% e a viabilidade pelo teste Kruskal-Wallis. Não houve diferenças estatísticas para o desempenho aos 7 dias de idade e aos 14 somente o peso vivo foi menor para o MFB, já aos 42 dias, o peso vivo foi maior para o SFB comparado com o MFB. A digestibilidade aos 15 dias não houve diferença estatística. Para a composição da carcaça, o SFV apresentou maior valor da porcentagem de extrato etéreo. A porcentagem de cálcio do SFB e MFB foram menores comparado com o SFNV e iguais para SFCO e SFV, e para o teor de fósforo, o SFV e SFNV apresentaram maiores valores. A enzima fitase exógena é capaz de hidrolisar o fitato de origem vegetal e liberar o fósforo para assimilação pelos animais, atuando assim como substituta de fontes vegetais de fósforo. / Mestre em Ciências Veterinárias

The refinement of the coronary portion of the intraradicular post cemented constitutes in routine in the clinic. However, the effects of the action of the diamond burn in high rotation on the cement agent are little argued. This study is tested the hypothesis of that the refinement with high rotation an the passed time between the cementation and the accomplishment of the refinement have negative effect in the tensile strength of the intraradicular post cemented in bovine roots. Forty eight bovine roots have been parted with 15mm of length, endodontically treated, confectioned in Cu-Al league, cemented with cement zinc phosphate and divided in 4 experimental groups (n=12). Group A: Without refinement; Group B, C e D submitted the refinement 15, 60 minutes and 24 hours respectively, after the cementation. The assay was carried through in universal machine (EMIC) with speed of 0,5mm/min for all the groups 24 hours after the cementation. The data of tensile strength had been analyzed by the analysis of the variance and test of Bartlet (α=1%). Verified that it did not have significant difference between the groups. Inside of the limitation of this study it can be concluded that the refinement with high rotation and the factor passed time between the cementation and assay did not produce effect of the resistance of the intraradicular posts. / O acabamento da porção coronária do retentor intra-radicular fundido após cimentação constitui-se rotina na clínica odontológica. Entretanto, os efeitos da ação da ponta diamantada em alta rotação sobre o agente cimentante são pouco avaliados. Este estudo testou a hipótese de que o tempo decorrido entre a cimentação e a realização do acabamento com alta rotação tenha efeito negativo na resistência à tração dos retentores intra-radiculares fundidos. Quarenta e oito raízes bovinas foram seccionadas com 15 mm de comprimento, tratadas endodonticamente e divididas aleatoriamente em quatro grupos (n=12): n=A: não submetidos ao acabamento; n=B, C e D submetidos ao acabamento com os tempos de 15, 60 minutos e 24 horas respectivamente, após a cimentação. Os condutos foram moldados pela técnica direta para a obtenção de retentores com 11 mm de comprimento intra-radicular, fundidos em cobre-alumínio, jateados com óxido de alumínio e cimentados com fosfato de zinco. O ensaio de tração foi realizado em máquina universal (EMIC) com velocidade de 0,5mm/min para todos os grupos 24 horas após a cimentação. Os resultados foram submetidos à análise de variância e teste de Bartlet (α=1%). Não houve diferenças estatisticamente significantes na resistência à tração nos grupos controle e os grupos com acabamento após a cimentação, independente do período de espera. Dentro das limitações deste estudo concluiu-se que o acabamento com alta rotação e o tempo decorrido entre a cimentação e o ensaio não produziu efeito sobre a resistência dos retentores intra-radiculares fundidos em cobre-alumínio. / Mestre em Odontologia