Orientador: Raimundo Souza Lopes / Coorientador: Antonio Claudio Tedesco / Banca: Regina Kiome Takahira / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Aureo Evangelista Santana / Banca: Adivaldo Henrique da Fonseca / Resumo: A terapia fotodinâmica se apresenta como uma opção clínica promissora para o tratamento de tumores e, de infecções causadas por vírus e bactérias por meio do uso de fotossensibilizadores não tóxicos. A ftalocianina, quando associada à luz visível, possui propriedades fotofísicas vantajosas apresentando alta absorção na faixa de espectro luminoso vermelho. A borreliose aviária é uma doença aguda e septicêmica, causada pela bactéria Borrelia anserina, transmitida pelo carrapato Argas miniatus, podendo levar a morte. A enfermidade possui grande importância econômica para a avicultura, por causar alto índice de mortalidade em aves. O estudo teve como objetivo verificar se o soro parasitado com Borrelia anserina, tratado com luz visível associada à ftalocianina de cloro-alumínio, quando inoculado in vivo, é capaz de provocar a enfermidade, e quando in vitro, mantém sua capacidade de crescimento em meio Barbour-Stoenner-Kelly. Foram utilizados 11 frangos doadores de soro parasitado e 42 galinhas receptoras, separadas em sete grupos experimentais, in vivo e in vitro, para ambas as etapas. Grupo controle, grupo doença parasitado com B. anserina, grupo Imunossupressão, grupo luz visível, grupo nanoemulsão, grupo ftalocianina e grupo tratado realizado com luz visível associada à emulsão de ftalocianina de cloro-alumínio. O acompanhamento foi realizado a cada cinco dias, durante 45 dias após a inoculação, com realização de exame clínico, espiroquetemia, reação em cadeia da polimerase quantitativa, dosagem de Imunoglobulina Y, colesterol, triglicerídeos, fosfatase alcalina, alanina aminotransferase e aspartato aminotransferase, volume globular e proteína plasmática total. Foi possível concluir que a associação de luz visível e ftalocianina de cloro-alumínio tem efeito favorável no controle da enfermidade, redução da carga parasitária e taxa de mortalidade / Abstract: Photodynamic therapy is presented as a promising clinical option for the treatment of tumors, viruses and bacteria through the use of nontoxic photosensitizers. When the phthalocyanine is combined with visible light, have advantageous on the photophysical properties presenting high absorption in the red light spectrum range. Avian Spirochetosis is an acute and septicemic disease, caused by the bacterium Borrelia anserina, transmitted by Argas miniatus and can lead to death. The disease has great economic importance to the poultry industry, because this causes a high mortality in aviculture. The study had as objective to determine the serum infested with Borrelia anserina, treated using visible light associated with chloro-aluminum phthalocyanine, when inoculated in vivo, is capable of causing illness, and when in vitro, retains its capacity for growth amid Barbour-Stoenner-Kelly. Were used 11 chicken serum donors parasitized and 42 receiving chickens, in seven separate experimental groups, in vivo and in vitro for both steps. Control group, parasitized disease group B. anserina, immunosuppression group, light group visible, nanoemulsion group, phthalocyanine group and treated group conducted with visible light associated with emulsion chloro-aluminum phthalocyanine. Follow-up was conducted every five days, for 45 days after inoculation with conducting clinical examination, spirochetemia, quantitative polymerase chain reaction, Immunoglobulin Y dosage, cholesterol, triglycerides, alkaline phosphatase, alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase, Globular volume and plasma total protein. It was concluded that visible light association and chloro-aluminum phthalocyanine has a favorable effect on the control of the disease, reduction in parasite burden and mortality rate / Doutor

Orientador: Ana Gabriela Sálvio / Coorientador: Natália Myumi Inada / Banca: Luciana Patrícia Fernandes Abbade / Banca: Cristia Kurachi / Resumo: O câncer de pele é o tipo mais frequente de câncer no Brasil, correspondendo a 25% de todos os cânceres registrados no País. Queratoses actínicas (QAs) são lesões pré-malignas comuns, com uma incidência estimada em 60% dos pacientes com idade acima de 60 anos, as QAs podem evoluir para carcinoma espinocelular (CEC) que é um tipo de câncer de pele não melanoma agressivo, podendo ser responsável por 34% das mortes por câncer de pele em todo mundo. A terapia fotodinâmica (TFD) em QAs com o ácido 5- aminolevulínico (ALA) ou aminolevulinato de metila (Metil-ALA) é uma opção de tratamento aceita para esta doença, devido à sua eficácia e excelentes resultados estéticos. O objetivo deste trabalho foi Avaliar e comparar a dor referida pelos pacientes, durante o tratamento de TFD utilizando o medicamento ALA e Metil-ALA a15%. Foram selecionados 40 pacientes com QAs em membros superiores, e realizado a divisão de dois grupos de 20 pacientes, grupo I administrado o medicamento ALA e no grupo II administrado Metil-ALA, em seguida os membros foram ocluídos permanecendo por 3 horas, após o curativo foi removido e realizado a iluminação da área por 40 minutos, com fluência de 36 Jzcm", no protótipo Kerato PDT a base de emissores de LED. Durante a iluminação e a cada 5 minuto foi aplicada uma escala visual numérica (EVN) para mensurar a dor referida. As lesões foram quantificadas e fotografadas antes e 30 dias após o tratamento. Os valores obtidos foram submetidos a análise estatística pelo teste t de Student, teste t pareado, teste de Friedman e teste de Tukey. Os resultados mostraram que não houve diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos, e que ambos os medicamentos utilizados mostraram-se eficazes no tratamento de QAs. Comparando a dor referida pelos pacientes durante o tratamento, não houve diferença estatística entre o sexo feminino e o masculino, e nem entre os dois grupos, porém para o ... / Abstract: Skin cancer is the most common type of cancer in Brazil, accounting for 25 % of all cancers registered in actinic keratoses country (AKs) are common precancerous lesions , with an estimated 60% of patients over the age incidence 60 years, AKs can progress to squamous cell carcinoma (SCC ) is a type of aggressive skin cancer melanoma, may be responsible for 34 % of deaths from skin cancer in the world. Photodynamic therapy (PDT) for AK with 5 - aminolevulinic acid ( ALA ) or methyl aminolevulinate ( Methyl- ALA ) is an accepted treatment option for this disease , due to its effectiveness and excellent cosmetic results . The aim of this study was to evaluate and compare the pain reported by the patients during the treatment of PDT using the medicine Methyl- ALA and ALA a15 %. AK 40 patients were selected for the upper limbs, the division performed and two groups of 20 patients, the drug administered group I and group II ALA administered -ALA methyl , then the remaining members were occluded for 3 hours, after curative was removed and held the lighting in the area for 40 minutes with a fluence of 36 J / em 2 , the prototype Kerato PDT -based LED emitters . During the lighting and every 5 minutes a numerical visual scale (NVS) was applied to measure referred pain . The lesions were imaged and quantified before and 30 days after treatment. Data were statistically analyzed by Student's paired t-test, Friedman test and Tukey 's t testo The results showed no statistically significant difference between the two groups, and that both drugs used were effective in the treatment of AKs . Comparing the pain reported by the patients during treatment , there was no statistical difference between the female and the male , nor between the two groups, although for males the pain scale was statistically higher when used Methyl- ALA . We conclude that both drugs may be indicated for the treatment of AKs scattered in the upper limb, and more studies focused ... / Mestre

Orientador: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: Eloi Dezan Júnior / Banca: Mário Tanomaru Filho / Banca: Marco Antonio Húngaro Duarte / Resumo: Introdução: A terapia fotodinâmica (TFD) se baseia em um conjunto de processos biológicos, físicos e químicos que ocorre por meio da ativação de um fotossensibilizador (FS) com luz (laser ou LED) para destruir as células alvo. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e a resposta tecidual da TFD incluindo a produção de citocinas (IL - 1β e IL - 6). Métodos: 1) Para o teste de citotoxicidade os grupos foram divididos em: hipoclorito de sódio 5%; hipoclorito de sódio 2,5%; clorexidina 2%; solução salina; TFD (curcumina + luz Led azul); e controle (meio de cultura). As soluções foram diluídas em meio de cultura DMEM (1x104 células) e colocadas em placas de 24 poços, com linhagem de fibroblastos de camundongos (L-929). Depois de 6, 24 e 48 horas, o ensaio de MTT foi utilizado para avaliar a viabilidade celular e o ensaio de ELISA foi utilizado para avaliação de citocinas no sobrenadante. 2) Para o teste de resposta tecidual, os grupos foram divididos em: controle (solução salina); hipoclorito de sódio 2,5%; hipoclorito de sódio 5%; clorexidina 2%; TFD (curcumina + luz Led Azul). As soluções foram colocadas em tubos de polietileno e foram implantadas no tecido conjuntivo dorsal de ratos Wistar por 7, 15, 30, 60, e 90 dias. Os tubos com tecido circundante foram removidos e divididos ao meio e uma das metades foi corada com hematoxilina e eosina e a outra metade utilizada para avaliação das citocinas por ELISA. A análise estatística foi realizada utilizando ANOVA, Kruskal Wallis ou teste de Tukey (p < 0,05). Resultados: Quanto ao estudo in vitro, a TFD e a solução salina apresentaram baixa citotoxicidade semelhante ao do grupo controle (p> 0,05), menor que o hipoclorito de sódio (2,5% e 5%) e a clorexidina 2% (p < 0,05) em todos os períodos de tempo. Todas as soluções liberaram citocinas em quantidade similar... / Abstract: Introduction: Photodynamic therapy (PDT) is based on a set of biological, physical and chemical processes that occurs through the activation of a photosensitizer (PS) with light (laser or LED) to destroy target cells. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity and tissue response of PDT including the production of cytokines (IL - 1β and IL - 6). Methods: 1) For the cytotoxicity test groups were divided into: 5% sodium hypochlorite; 2.5% sodium hypochlorite; 2% chlorhexidine; saline; PDT (curcumin + Led blue light); and control (culture medium). The solutions were diluted in DMEM culture medium (1x104 cells) and placed in 24 -well plates with mouse fibroblast line (L929). After 6, 24 and 48 hours, the MTT assay was used to assess cell viability and ELISA assay was used to assess cytokine in the supernatant. 2) To test the tissue response, the groups were divided into: control (saline); 2.5%; sodium hypochlorite, 5% sodium hypochlorite; 2% chlorhexidine; TFD (curcumin + Led blue light). The solutions were placed into polyethylene tubes and implanted in the dorsal tissue of Wistar rats for 7, 15, 30, 60, and 90 days. The tubes were removed with surrounding tissue and divided in half and one half was stained with hematoxylin and eosin and the other half used to assess cytokine by ELISA. Statistical analysis was performed using ANOVA, Kruskal Wallis or Tukey test (p < 0.05). Results: For the in vitro study, PDT and saline showed low cytotoxicity similar to the control group (p > 0.05) , less than sodium hypochlorite (2.5% and 5%) and 2% chlorhexidine (p < 0.05) at all time periods. All solutions released cytokines similar to control (p > 0.05) amount. As for the in vivo study, all solutions caused severe inflammatory reaction after 7 days, which decreased with time. No inflammation was observed at 90 days in the PDT group similar to the control (p > 0.05) . All materials... / Doutor

Orientador: Alvaro Francisco Bosco / Coorientador: Juliano Milanezi de Almeida / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Michel Reis Messora / Banca: Maria José Hitomi Nagata / Resumo: Objetivo: O propósito do presente estudo foi realizar uma avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica do efeito do hidrocloreto de tetraciclina (TTC) e da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), usados isoladamente ou em associação, como adjuvantes à raspagem e alisamento radicular (SRP) no tratamento da doença periodontal (DP) experimental induzida. Materiais e métodos: Foram utilizados 168 ratos, nos quais a DP foi induzida através da adaptação de fio de algodão ao redor do primeiro molar inferior esquerdo. Após 7 dias, a ligadura de todos os animais foi removida e o primeiro molar inferior esquerdo foi submetido à SRP. Os animais foram então divididos randomicamente em 7 grupos experimentais de diferentes tratamentos adjuvantes à SRP: SRP-SS - irrigação com solução salina (SS); SRP-MB - irrigação com azul de metileno (MB); SRP-TTC - irrigação com TTC; SRP-MB/TTC - irrigação com solução de MB e TTC; SRP-aPDT - irrigação com MB e, após 60 s, irradiação com Laser em baixa intensidade (LLLT) (660 nm); SRP-TTC/LLLT - irrigação com TTC e, após 60 s, irradiação com LLLT (660 nm); SRP-TTC/aPDT - irrigação com solução de MB e TTC e, após 60 s, irradiação com LLLT (660 nm). Os animais foram eutanasiados aos 7, 15 e 30 dias após o tratamento da DP. Foi realizada uma análise histométrica da área de perda óssea (PO) e das características histopatológicas e imunoistoquímicas da região de furca. Resultados: Aos 7 dias pós-tratamento, os grupos SRP-TTC, SRP-MB/TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT e SRP-TTC/aPDT exibiram menor área de PO que os grupos SRP-SS e SRP-MB (p<0,05). Aos 15 dias pós-tratamento, os grupos SRP-TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT e SRP-TTC/aPDT exibiram menor área de PO que o Grupo SRP-SS (p<0,05). Os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aim: The purpose of the present study was to perform a histomorphometric and immunohistochemical assessment of the effect of tetracycline hydrochloride (TTC) and antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), used alone or in combination, as adjunct to scaling and root planing (SRP) in the treatment of experimentally induced periodontal disease (PD). Materials and methods: One-hundred-and-sixty-eight rats were used, in which PD was induced by tying cotton thread around the left mandibular first molar. After 7 days, ligatures were removed from all animals, and left first molar was subjected to SRP. The animals were then randomly divided into 7 experimental groups receiving different treatments adjuvant to SRP: SRP-SS - irrigation with saline solution (SS); SRP-MB - irrigation with methylene blue (MB), SRP-TTC - irrigation with TTC; SRP-MB/TTC - irrigation with TTC and MB solution; SRP-aPDT - irrigation with MB and afterwards 60 s irradiation with low-level laser therapy (LLLT) (660 nm); SRP -TTC/LLLT - irrigation with TTC, and afterwards 60 s, LLLT irradiation (660 nm); SRP-TTC/aPDT - irrigation with TTC and MB solution and afterwards 60 s, irradiation with LLLT (660 nm). Animals were euthanized at 7, 15 and 30 days after treatment of PD. Histometric evaluation of bone loss (BL), and of histopathological and immunohistochemical characteristics of the furcation region, was performed. Results: At 7 days postoperatively, SRP-TTC, SRP-MB/TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT and SRP-TTC/aPDT groups exhibited less BL than SRP-SS and SRP-MB groups. At 15 days postoperatively, SRP-TTC, SRP-aPDT, SRP-TTC/LLLT and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Laura Conceição (laurinha.to@gmail.com) on 2014-11-20T17:10:58Z No. of bitstreams: 1 2014_VictoriaMonge-Fuentes.pdf: 23020579 bytes, checksum: a66067c217cb35530ce2a94f3ce20d91 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-24T13:31:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_VictoriaMonge-Fuentes.pdf: 23020579 bytes, checksum: a66067c217cb35530ce2a94f3ce20d91 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-24T13:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_VictoriaMonge-Fuentes.pdf: 23020579 bytes, checksum: a66067c217cb35530ce2a94f3ce20d91 (MD5) / O melanoma é um tipo de câncer de pele que tem origem nos melanócitos. Embora o melanoma seja responsável por apenas 4% de todos os tipos de câncer de pele, ele é o mais agressivo, uma vez que possui um alto potencial metastático, causando a morte de 80% dospacientes portadores dessa doença. Perante a necessidade de desenvolver terapias maiseficazes, estudos propõem a Terapia Fotodinâmica (TFD) como uma promissora modalidade terapêutica que utiliza três elementos essenciais: um fotossensibilizante (FS), luz em um comprimento de onda específico e oxigênio, reagindo conjuntamente para produzir espécies reativas de oxigênio que em última instância causam a morte celular das células e tecidosalvo. Considerando as propriedades terapêuticas e o potencial fotoquímico do óleo de açaí, este foi usado como fotossensibilizante. Porém, a sua natureza hidrofóbica dificulta sua aplicação biológica, portanto foi usada uma abordagem nanotecnológica para permitir seu uso no tratamento contra o câncer. No presente trabalho objetivou-se desenvolver uma nanoemulsão contendo gotículas de óleo de açaí (NanoA) como fotossensibilizante para investigar os efeitos da TFD in vitro e in vivo no tratamento do melanoma. Uma vez preparada a NanoA, foi feita a sua caracterização físico-química, fotofísica e fotoquímica. A irradiação (λ=660) do óleo de açaí livre e em nanoemulsão mostrou que ambos possuem capacidade de geração de espécies reativas de oxigênio, comprovando a sua atividade fotoquímica. A caracterização físico-química da NanoA mostrou um diâmetro hidrodinâmico médio de 117,5 nm para cada nanogotícula, índice de polidispersão de 0,144 e potencial zeta de -0,536 mV, evidenciando características desejáveis para seu uso biológico. Os espectros de absorbância e de fluorescência apontaram que a NanoA apresenta pico de absorção em 666 nm (região do vermelho) e de emissão em 670 nm. Microscopia eletrônica de transmissão mostrou gotículas com diâmetro médio de 74 nm, morfologia esférica e baixa polidispersão. Para os testes in vitro foram utilizadas duas linhagens celulares imortalizadas: NIH/3T3 (fibroblasto murino não tumoral) e B16F10 (melanoma murino). Em ensaios de citotoxicidade sem irradiação, utilizaram-se diversas concentrações da NanoA, com vários tempos de exposição, com o objetivo de identificar as condições que inibem 10% da viabilidade (CC10) de células não tumorais, mostrando uma CC10 equivalente a 617,00 μg/mL pelo tempo de exposição de 15 minutos. Citotoxicidade sem irradiação, avaliada por ensaio colorimétrico de MTT, foi tempo e dose dependente. Para testar os efeitos da TFD, as células foram expostas à NanoA na concentração de 617,00 μg/mL por 15 minutos e irradiadas com as fluências de 12,9 J/cm2, 25,9 J/cm2 e 51,8 J/cm2. Resultados mostraram que as células tumorais tratadas com NanoA na concentração de 617,00 μg/mL e irradiadas com fluência de 25,9 J/cm2 apresentaram as menores porcentagens de viabilidade (15%), enquanto que as células não tumorais sob as mesmas condições mantiveram uma viabilidade de 70%. Análises de citometria de fluxo determinaram que a maioria das células que perderam a sua viabilidade devido ao tratamento com TFD mostraram dupla marcação, com anexina V e iodeto de propídeo, indicando possível morte por apoptose tardia/necrose, dado corroborado pela externalização da fosfatidilserina e pelas mudanças de tamanho e granulosidade observadas. Experimentos in vivo em camundongos C57BL/6 mostraram que a TFD aplicada cinco vezes com concentração de NanoA de 50 mg/mL e fluência de 25,9 J/cm2 teve redução do volume tumoral dos animais equivalente a 82%, mostrando grandes áreas de necrose no tecido tumoral, quando comparado com o volume tumoral e histopatologia dos animais do grupo controle com tumor. Diante do exposto, o óleo de açaí contido na NanoA apresentou características fotofísicas, fotoquímicas e físico-químicas favoráveis para o seu uso como FS para a TFD com aplicação em sistemas biológicos. O tratamento com TFD in vitro mostrou uma redução de 85% na viabilidade celular das células de melanoma, enquanto manteve uma alta viabilidade (70%) das células normais, e no caso de camundongos com tumor tratados com TFD foi observada uma redução de 82% no volumen tumoral, mostrando a eficácia in vivo do tratamento investigado. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Melanoma is a type of skin cancer that originates in the melanocytes. Even though melanoma accounts for only 4% of all dermatologic cancers, it remains responsible for 80% of deaths from skin cancer due to its high metastatic potential. Regarding this, there is the need to develop new and more efficient types of therapies. Photodynamic Therapy (PDT) is a promising new cancer treatment that makes use of three essential elements: photosensitizer (PS), light of a particular wavelength, and oxygen, which react ultimately causing cell death. Considering the therapeutic properties and photochemical potential already described in other studies, açaí oil was explored as a PS for PDT. However, high hydrophobicity characteristic of açaí oil difficults its efficient biological application. For this reason, nanotechnological solutions were explored, incorporating açaí oil in nanoemulsions (NanoA) to be used along with PDT for in vitro and in vivo melanoma treatment. Once the NanoA was formulated, we proceeded to its physicochemical, photophysical and photochemical characterization. Free and nano-incorporated açaí oil were irradiated (λ=660) showing their capacity to generate singlet oxygen, proving their photochemical activity. NanoA physicochemical characterization showed an average hydrodynamic diameter of 117.5 nm, polydispersity index of 0.144 and zeta potential of -0.536 mV, exhibiting desirable characteristics for its biological application. Absorbance and fluorescence spectra showed absorbance peak at 666 nm (red region of spectrum) and emission at 670 nm. Transmission electron microscopy showed spherical and similar sized nanodroplets (average diameter of 74 nm), confirming low polydispersity. In vitro tests were performed using two immortalized cell lines: NIH/3T3 (normal murine fibroblast) and B16F10 (murine melanoma). Dark cytotoxicity studies used several NanoA concentrations with different exposition times in order to determine the concentration that kills only 10% (CC10) of normal cells. Results revealed CC10 equivalent to 617 μg/mL when exposed for 15 minutes. Cytotoxity in the dark evaluated by colorimetric MTT assay was a time and concentration dependent event. In order to test PDT in vitro, cells were exposed to NanoA in the concentration of 617 μg/mL for 15 minutes and then irradiated with fluence values of 12.9 J/cm2, 25.9 J/cm2 and 51.8 J/cm2. MTT results revealed that melanoma cells treated with 617 μg/mL and irradiated with 25.9 J/cm2 presented viability results of 15%, while normal cells treated under the same conditions mantained a 70% viability. Flow cytometry results showed that most cells that lost their viability due to PDT treatment were double marked by annexin V and propidium iodide, event that occurs when cells die by late apoptosis/necrosis. This was evidenced by externalization of phosphatidylserine and morphological changes in cell size and granulosity as seen by light scatter flow cytometry. In vivo experiments with C57BL/6 mice showed that tumor bearing animals treated five times by PDT with NanoA concentration of 50 mg/mL and fluence of 25.9 J/cm2 showed a tumor volume reduction of 82% with considerable number of necrotic areas in tumor tissue, in comparison to animals in control group. Overall, açaí oil in NanoA presented favorable photophysical, photochemical, and physico-chemical, characteristics for its use as PS for PDT with application in biological systems. PDT treatment with NanoA in melanoma cells showed an 85% cell viability reduction, while maintaining normal cell viability high (70%), and an 82% tumor volume reduction in tumor bearing mice treated with PDT, proving the in vivo efficacy of the investigated treatment.

As Ceratoses Actínicas (CA) são lesões hiperceratóticas, displásicas de pele. Estão comumente localizadas em áreas expostas ao sol como couro cabeludo, face e antebraços. Acredita-se que a radiação ultravioleta (RUV) cumulativa seja o maior fator etiológico, considerando-se, também, a imunossupressão e infecção pelo papilomavírus humano(HPV) fatores contribuintes importantes. Existe o potencial de uma CA se transformar em Carcinoma Espinocelular (CEC) e, dessa forma, indica-se tratamento para as referidas lesões. Terapias tradicionais como crioterapia, curetagem e eletrocoagulação, medicações tópicas como 5-fluorouracil (5-FU) são ainda habituais. Porém novas opções como terapia fotodinâmica, diclofenaco e imiquimod 5% creme apresentam boa eficácia e perfil menor de efeitos colaterais, embora possam representar custo maior. A Terapia Fotodinâmica (TFD) envolve o uso de um agente fotossensibilizante, oxigênio e luz de comprimento de onda específico para causar morte celular. O fotossensibilizante geralmente utilizado é o ALA (ácido aminodeltalevulínico) ou seu éster metilaminolevulinato (MAL). No tecido lesionado, esses são convertidos em porfirinas fotoativas (PFAs) por enzimas da via biossintética do heme. A ativação é realizada por meio de luzes de comprimentos de onda que variam de 405 nm a 635 nm. Células displásicas ou neoplásicas produzem maior quantidade de porfirinas que os queratinócitos normais, sendo destruídas durante a aplicação da luz. O imiquimod 5% creme é um imunomodulador que estimula a resposta imune inata através da indução, síntese e liberação de citocinas. Isso resulta em efeitos antitumorais e antivirais indiretos. Seu uso tópico é eficaz e liberado para o tratamento de CA, Carcinoma Basocelular (CBC) superficial, Doença de Bowen (DB) e verrugas vulgares. Este trabalho tem como objetivo comparar duas recentes opções de tratamento para CA, a Terapia Fotodinâmica com metilaminolevulinato e o imiquimod 5% creme, por não existirem, na literatura atual, estudos comparativos dessas duas opções de tratamento. Foram selecionadas 12 pacientes com CAs que foram submetidas primeiramente à 1 sessão de TFD com MAL num lado da face e, 1 mês após, iniciaram o tratamento com imiquimod 5% creme aplicado no lado contralateral, duas vezes na semana, durante 16 semanas. A randomização foi realizada para determinar a hemiface para cada tratamento. Na primeira semana após a realização da TFD e mensalmente durante o tratamento com imiquimod, as pacientes foram avaliadas em relação aos efeitos colaterais dos tratamentos. Seis meses após entrarem no estudo, ambos os tratamentos foram analisados por um investigador cego para sua eficácia, tolerabilidade e seu resultado cosmético. Previamente ao tratamento as pacientes apresentaram um total de 245 lesões de CAs, sendo 120 lesões no lado submetido à TFD e 125 no lado tratado com imiquimod. Após o tratamento o número total de lesões diminuiu para 34 no lado tratado com TFD e para 30 no lado tratado com imiquimod, respectivamente. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas na eficácia de ambos os tratamentos e na frequência de efeitos colaterais. Entretanto, os pacientes, significativamente preferiram o tratamento com a terapia fotodinâmica, talvez pela rapidez do método, comparado com a aplicação tópica do creme de imiquimod a 5%. / Background: Actinic keratosis (AK) represents an initial process that may lead to in situ or invasive squamous cell carcinoma. The importance of its early diagnosis and treatment is well-established. There are several effective options available for the treatment of actinic keratosis, including topical imiquimod 5% cream and photodynamic therapy (PDT). Objetive: To compare the efficacy and patient preference between topical MAL-PDT and imiquimod 5% cream for the treatment of AK. Methods: Twelve patients, with a total of 245 lesions, underwent treatment with MAL-PDT and imiquimod 5% cream. Randomization was performed to determine the hemiface (right or left) for each therapy. First, patients were submitted to MAL-PDT. After one month, they started to use imiquimod on the opposite side of the face, twice a week, for 16 weeks. Six months after entering the study, both treatments were analyzed by a blinded investigator for their effectiveness, tolerability and cosmetic result. Results: Both treatments showed a good therapeutic response. 72% of the lesions treated with MAL-PDT were completely cleared, and 76% of those treated with imiquimod. The mean size of the residual lesions after the treatments was similar. Ten patients (83%) preferred MAL-PDT rather than imiquimod. (p: 0.03). Conclusions: Both MAL-PDT and imiquimod are effective in clearing AKs. Our results showed similar efficacy and good cosmetic outcomes with both treatments. However, a significant percentage of the subjects preferred MAL – PDT.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-05-03T22:43:49Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Luiza Beatriz de Medeiros Santos.pdf: 1572136 bytes, checksum: 8355a6d8912ee942f0bf2ede8ac0ebb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-03T22:43:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Luiza Beatriz de Medeiros Santos.pdf: 1572136 bytes, checksum: 8355a6d8912ee942f0bf2ede8ac0ebb0 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPES / A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma alternativa de tratamento para o câncer e para infecções microbianas e parasitárias. Na TFD, a luz, o oxigênio e um agente fotossensibilizador (FS) são combinados produzindo espécies reativas capazes de induzir danos e morte celular. Como exemplos de substâncias FS tem-se as zincoporfirinas e o azul de metileno (AM) que demonstram um grande potencial para TFD, sendo objetos deste estudo. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo preparar um sistema de aplicação tópica capaz de carrear os FS (Zn(II) meso-tetrakis (N-etilpiridinio-2-il) porfirina - ZnTE-2-PyP4+ e azul de metileno) para uso em terapia fotodinâmica e avaliar a capacidade de geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) antes e após a incorporação, como também a caracterização do sistema através de análise de pH, espalhabilidade e viscosidade. Para isso, foi utilizado o gel Carbopol, comumente empregado em preparações farmacêuticas. A detecção de ROS dos FS foi então avaliada antes e após incorporação ao gel, através do método químico indireto, bem como através de caracterização por espectroscopia de absorção e emissão eletrônica. Foi observado que a ZnTE-2-PyP4+ e o azul de metileno, ainda em solução (5 µM), apresentaram boa resposta na produção de espécies reativas de oxigênio (36 e 52%, respectivamente). Ao analisar a formulação em gel contendo ZnTE-2-PyP4+, detectou-se um aumento em torno de 6% na produção de ROS se comparado à solução, enquanto que, para o gel contendo AM, houve redução em torno de 25% na geração de ROS e os resultados são discutidos em termos da interação dos FS com a estrutura do polímero formador do gel. O conjunto de resultados evidencia que existe um potencial para aplicação destes FS em gel carbopol para uso em TFD, devido à capacidade de geração de ROS. Por outro lado, como o mecanismo fotodinâmico envolve não somente a sinergia da interação da luz, do oxigênio e propriedades do fotossensibilizador, mas também o local de aplicação da formulação, mais estudos são necessários para se avaliar a aplicabilidade desses sistemas no tratamento fotodinâmico. / Photodynamic Therapy (PDT) is an alternative treatment for cancer and microbial and parasitic infections. In PDT, light, oxygen and a photosensitizer agent (PS) are combined producing reactive species capable of inducing damage and cell death. As examples of substances PS there are zinc-porphyrins and the methylene blue (MB) which demonstrate a great potential for PDT. In this context, this study aimed to prepare a topical application system capable of carrying the PS (Zn(II) meso-tetrakis (N-ethylpyridinium-2-yl) porphyrin ZnTE-2-PyP4+ - and Methylene Blue) for use in photodynamic therapy and evaluate the generation capacity of reactive oxygen species (ROS) before and after the incorporation, as well as the characterization of system by electronic absorption and emission spectroscopy, analysis of pH, viscosity and spreadability. Carbopol gel a commonly employed pharmaceutical preparations in was used for the semisolid formulation. The PS were then evaluated before and after incorporation into the gel by indirect chemical method for ROS detection and characterization of optical properties of the final systems. It was observed that aqueous solutions of 5 µM ZnTE-2-PyP4+ or MB showed a good response in the production of reactive oxygen species (36 and 52% respectively). The gel formulations containing ZnTE-2-PyP4+ displayed 6% increase in the ROS production when compared to the solution. On the other hand, the gel containing MB, showed a 25% reduction in the generation of ROS and the overall results are discussed in terms of the interaction of the FS with the polymer forming gel. The results show that there is a potential for the application of these PS in carbopol gel for use in PDT due to the ability of ROS generation. On the other hand, the photodynamic mechanism involves not only the synergistic interaction of light, oxygen and photosensitizing properties but also the application site of the formulation, and therefore, more studies are required to evaluate the applicability of these systems in topic photodynamic treatment.

O tratamento convencional para lesões de cáries dentinárias tem sido baseado na remoção mecânica da dentina desmineralizada, utilizando instrumentos cortantes manuais ou rotatórios. Como uma alternativa à remoção dos microrganismos responsáveis pela lesão com o desgaste da estrutura dental, a proposta deste estudo é eliminá-los por meio da fotossensibilização promovida pela irradiação da lesão com um laser de baixa potência, associado a um corante específico. Se as bactérias presentes na lesão cariosa puderem ser eliminadas, o tecido desmineralizado poderia ser preservado, evitando-se a ocorrência de exposição pulpar, principalmente no caso de lesões profundas. A terapia envolve a utilização de um agente fotossensibilizante que, ao ser ativado por uma fonte de luz visível comprimento de onda compatível com o corante, induz a formação de espécies reativas de oxigênio, como o oxigênio singleto e radicais livres, responsáveis pela morte celular. Com o objetivo de avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica in vivo, lesões de cárie profundas em molares permanentes (n=26) foram tratadas com corante azul de metileno 0,01% e irradiadas com laser diodo em baixa intensidade (= 660 nm) por 90 segundos. Amostras de dentina cariada da parede pulpar das lesões foram coletadas com micropunch e mantidas no meio de transporte VMGA III para a análise microbiológica. Após o processamento, as amostras foram semeadas nos meios, Ágar Mitis Salivarius Bacitracina, Ágar Rogosa e Ágar sangue, para as contagens de estreptocoos do grupo mutans, Lactobacillus spp. e total de bactérias viáveis, respectivamente. Passado o período de incubação, foi realizada a contagem de unidades formadoras de colônias das amostras coleadas para cada grupo, antes e após a terapia, e a porcentagem de redução microbiana em cada grupo de bactérias estudadas foi calculada. O testes de Wilcoxon demonstrou haver redução estatisticamente significante (p<0,0001) tanto para estreptococos do grupo mutans (78.07%), como para Lactobacillus spp. (78.0%) e para o total de bactérias viáveis (76.03%). De acordo com o teste de Mann-Whitney, não houve diferença estatisticamente significante para as porcentagens de redução entre os três grupos (p>0,05). A terapia fotodinâmica pode ser considerada uma técnica efetiva para a eliminação das bactérias presentes na dentina de lesões de cárie profundas, assegurando a preservação de estrutura dental durante o tratamento. / The traditional treatment of dentinal caries lesions has been based on the mechanical removal of all demineralized dentine, using hand or rotatory instruments. As an alternative to removal of the cariogenic organisms by drilling, the purpose of this study was to eliminate them through photosensitization promoted by irradiation with a low power laser associated with a specific dye. If bacteria in carious lesion could be eliminated, demineralized tissue could be retained and pulpal exposure could be avoided, particularly in case of deep carious lesions. Photodynamic therapy involves the use of photoactive dye that is activated by irradiation with light of an adequate wavelength causing the generation of cytotoxic species, such as singlet oxygen and free radicals. In order to evaluate in vivo the effectiveness of the therapy, remaining carious dentine of deep cavitated lesions on permanent molars (n=26) were treated with 0.01% methylene blue dye and irradiated with a low power diode laser (= 660 nm) for 90 seconds. Samples of dentine from pulpal wall were collected with a micropunch immediately before and after the therapy and kept in VGMA III transport medium for microbiological analysis. Samples were then cultured in Brucella blood agar, Mitis Salivarius Bacitracin agar and Rogosa agar plates to determine the total viable, S. mutans and Lactobacillus spp. counts, respectively. After incubation, the number of colony-forming units was counted and the percentage of microbial reduction was calculated for each group of bacteria studied. Wilcoxon and Mann-Whitney tests showed that there was a statistically significant reduction (p<0,0001) of the dentin microflora after photodynamic therapy for the total of viable bacteria (76.03%), S. mutans (78.07%) and Lactobacillus spp. (78.0%) and that there was no statistic differences for its efficiency between groups (p>0,05). Photodynamic antimicrobial therapy can be considered an effective technique to kill bacteria present in dentine from deep carious lesions.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-27T13:48:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Lais Alonso - 2014.pdf: 1036179 bytes, checksum: 00c1f5a2f54a88c96f3bdeeb4d860fb2 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-28T11:34:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Lais Alonso - 2014.pdf: 1036179 bytes, checksum: 00c1f5a2f54a88c96f3bdeeb4d860fb2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T11:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Lais Alonso - 2014.pdf: 1036179 bytes, checksum: 00c1f5a2f54a88c96f3bdeeb4d860fb2 (MD5) Previous issue date: 2014-04-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Photodynamic therapy (PDT) is a technique that has been increasingly used in cancer treatment. It consists in introduce a photosensitizer (PS) in cancerous tissue and irradiate it with light in the visible range. Targeting a more effective treatment of PDT, currently there are several studies on the efficacy of these PS. In this work, we studied the photodynamic efficiency seven PS: meso-tetrametilpiridil, meso-tetrasulfonatofenil and carboxiftalocianinas with their base free or metallated with zinc atom in its center ring and protoporphyrin IX. Erythrocytes suspended in 2 to 10% hematocrit were treated with or without 25 μM of PS were exposed to light from a halogen lamp, and measured the time required to obtain 50 % hemolysis (T1/2). To examine whether the photodynamic efficiency is related to the affinity of PS by membrane, we performed measurements of the octanol/water partition coefficient (PO/W) of each PS. Our results indicated that the PS studied were very hydrophilic and showed a trend for greater photodynamic efficiency the PS with higher Log PO/W. To better understand the mechanism of action of the studied PS the degree of lipid peroxidation in erythrocyte membranes irradiated with PS was assessed by measuring the formation of malondialdehyde (MDA) and a correlation between the rate of peroxidation and hemolytic potential was found. The ability of PS to degrade proteins was assessed using bovine serum albumin (BSA), monitoring the fluorescent signal of this protein into solution and under irradiation in the presence of PS. / A terapia fotodinâmica (PDT) é uma técnica que tem sido cada vez mais utilizada no tratamento de câncer. Consiste em introduzir um fotossensibilizador (FS) no tecido cancerígeno e irradiá-lo com luz na faixa do visível. Visando um tratamento de PDT mais eficaz, atualmente existem vários estudos da eficiência desses FS. Neste trabalho, estudamos a eficiência fotodinâmicas de sete FS: meso-tetrasulfonatofenil, meso-tetrametilpiridil e carboxiftalocianinas em suas formas de base livre bem como metaladas com átomo de zinco em seu anel central e a protoporfirina IX. Eritrócitos em suspensão no hematócrito de 2 ou 10%, tratados ou não com 25 μM do FS, foram expostos à luz de uma lâmpada halógena e medido o tempo necessário para se obter 50% de hemólise (T1/2). Para examinar se a eficiência fotodinâmica está relacionada com a afinidade do FS por membrana, realizamos medidas do coeficiente de partição octanol/água (PO/W) de cada FS. Nossos resultados indicaram que os FS estudados foram muito hidrofílicos e demonstraram uma tendência para maior eficiência fotodinâmica os FS com maior Log PO/W. Para compreender melhor o mecanismo de ação dos FS avaliamos o grau de peroxidação lipídica nas membranas de eritrócito irradiado com FS, medindo a formação de malondialdeído (MDA) e encontramos uma correlação entre o índice de peroxidação e potencial hemolítico. A capacidade dos FS degradarem proteínas foi avaliada usando albumina de soro bovino (BSA), monitorando o sinal fluorescente desta proteína em solução e sob a irradiação na presença do FS.

O tratamento da doença periodontal consiste na remoção mecânica do biofilme, sendo que terapias complementares como a terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) podem melhorar os resultados obtidos. Este trabalho avaliou in vitro o efeito dos corantes azul de toluidina e azul de metileno com distintos parâmetros de laser (70; 100mW) e LED em Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a) em suspensão. O primeiro experimento avaliou efeito bactericida de diferentes concentrações dos dois corantes sozinhos (0,05; 0,1; 0,5, 1,0; 2,0; 5,0; 10 mg/ml). O segundo foi dividido nos seguintes grupos: controles positivo e negativo (gentamicina), grupos somente com luz aplicada, grupos com três concentrações (0,05; 0,1; 10 mg/ml) de corante sozinhos ou associados ao laser de baixa intensidade (660 nm; 2,91 e 4,16 W/cm2; 70 e 100mW; 45 J/cm2; 0,024 cm2; 12 e 18s) e LED (627 ± 10 nm; 150mW/cm2; 10,5 mW; 20 J/cm2; 0,07cm2; 123s). Os dados foram analisados pelo teste ANOVA complementado por Tukey (p<0,05). Os resultados demonstraram que ambos os corantes na concentração de 10 mg/ml sozinhos ou associados com laser (ambas as potências) ou LED causaram 100 % de morte bacteriana semelhante ao controle negativo (p>0,05). Com isso, pode-se concluir que aPDT pode eliminar o A.a. de forma dependente da concentração do corante. / The main treatment of periodontal disease is the mechanical removal of biofilm. Adjuvant therapies as antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer better results. The aim of this in vitro study was to evaluate the effect of toluidine and methylene blue dyes, associated to red laser (70; 100mW) and LED on elimination of a suspension of Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a). A first test evaluated the bactericidal effect of various concentrations of both dyes (0.05; 0.1; 0.5, 1.0; 2.0; 5.0, 10 mg/ml) in absence of light. In the second test, the experimental groups consisted of positive and negative (gentamicin) controls, groups with three concentrations (0.05; 0.1,10 mg/ml) of dyes alone of associated to low level laser (660 nm; 2.91 and 4.16 W/cm2; 70 and 100mW; 45 J/cm2; 0.024 cm2; 12 and 18s) and LED (627 ± 10 nm; 150mW/cm2; 10.5 mW; 20 J/cm2; 0.07cm2; 123s). Data were analyzed by ANOVA complemented by Tukeys test (p<0.05). The results showed that both dyes, with 10 mg/ml, alone or associated to laser and LED caused 100% of death as the negative control (p>0.05). It can be concluded that aPDT is capable of eliminate A.a depending of the dye concentration.