O silenciamento gênico tem sido utilizado extensivamente para facilitar a investigação de eventos da biologia vegetal. Ele pode ser induzido de diferentes modos, sendo que o passo chave para sua ocorrência é a presença de RNA fita dupla (dsRNA). A fim de avaliar um método rápido de obtenção de silenciamento para análise funcional em larga escala, foi inoculado dsRNA ou siRNA diretamente em folhas de plantas de arroz e de Nicotiana benthamiana. Os dsRNAs de seqüências do gene pds e do gene codificante da ferritina foram obtidos através da síntese in vivo e in vitro e o siRNA de PDS de arroz, derivado somente de síntese in vitro. O gene pds codifica a enzima fitoeno desaturase (PDS), uma enzima chave na biossíntese de carotenóides, que protege a clorofila das plantas contra o foto-branqueamento. O silenciamento deste gene mostra um fenótipo visível, claramente demonstrado através do uso de um inibidor químico da síntese desta enzima. No presente estudo, plantas de arroz e de N. benthamiana inoculadas com dsRNAs derivados do gene pds não apresentaram mudanças fenotípicas. Para avaliação de um outro método foi adaptado um vetor de silenciamento estável, no qual foram inseridos fragmentos de cDNA nas orientações senso e antisenso do gene de ferritina de arroz. O papel da ferritina, segundo experimentação in vitro, pode estar ligada à tolerância de certos cultivares de arroz às altas concentrações de ferro. O aprimoramento das metodologias de silenciamento e de transformação poderá resultar em uma ferramenta mais útil para a análise funcional em larga escala de genes de arroz. / Gene silencing has been used extensively to facilitate the investigation of different events in plant biology. It can be induced through different ways. The key step for its occurrence is the presence of double strand RNA (dsRNA). In order to evaluate a fast method to obtain silencing for functional analysis in a wide scale, either dsRNAs or siRNAs were directly inoculated in the leaves of rice and N. benthamiana plants. The dsRNAs the sequences of the pds gene and of the coding region of the ferritin gene were obtained through in vivo or in vitro synthesis, the siRNA PDS of rice were derived from synthesis in vitro. The pds gene codifies for the enzyme phytoene desaturase (PDS), a key enzyme in the biosynthesis of carotenoids, which protects the clorophil from the plants against photo-bleaching. The silencing of this gene shows a visible phenotype, clearly demonstrated through a chemical inhibition of PDS synthesis. However, no phenotypical changes were observed in either rice or N. benthamiana plants inoculated with dsRNA of the pds gene. In the present study, it was also adapted a vector for stable transformation, in which were inserted cDNA fragments of both, sense and antisense, orientations of the rice ferritin gene. In vitro experiments show that ferritin could be connected to the tolerance to high concentrations of iron of certain cultivars of rice. The improvement of silencing and transformation methodologies could result in a more useful tool for the functional analysis of rice genes in a wide scale.

Resumo: Em estudo anterior realizado em nosso laboratório ratos expostos à fumaça de cigarro apresentaram menor mortalidade após infarto agudo do miocárdio em relação ao grupo controle. Entretanto a mortalidade aumentou nos ratos fumantes quando receberam β-caroteno. Não se sabe qual o mecanismo da diminuição de mortalidade nos animais fumantes. Formulamos a hipótese de que a fumaça de cigarro induziria estresse oxidativo que causaria efeito tipo precondicionamento cardíaco. O efeito tipo precondicionamento diminuiria a comunicação intercelular pelas junções comunicantes. A suplementação da dieta com β-caroteno inibiria os efeitos provenientes da exposição à fumaça de cigarro. Foram estudados ratos Wistar, distribuídos em 4 grupos: grupo controle (C) - formado por 30 animais, que receberam a dieta usada de rotina em nosso laboratório; 2) grupo β-caroteno (BC) - composto por 28 animais que receberam β-caroteno (na forma de cristal adicionado e misturado à dieta) na dose de 500 mg de β-caroteno/kg de dieta; 3) grupo exposto à fumaça de cigarro (EFC) composto por 28 animais, que receberam a dieta usada de rotina em nosso laboratório e foram expostos ao cigarro; 4) grupo β-caroteno/EFC (BC/EFC) - formado por 28 animais que receberam o β-caroteno na mesma forma que o grupo BC e foram expostos à fumaça de cigarro. A suplementação com β- caroteno e a EFC foram realizados simultaneamente, até que ratos, com peso inicial de 100g, 82 atingissem peso corpóreo de 200-250g. / Abstract: In previous study performed in our laboratory, we observed which the mortality rates were lower in exposure to tobacco smoke rats than in control rats. Moreover, when the exposure to tobacco smoke rats received β-carotene supplementation this reduction of mortality was abolished. The mechanisms of lower mortality in smokers are unknown. In this context we formulated the hypothesis of that the exposure to tobacco smoke produces oxidative stress which would induce precondictioning-like effect. This effect would cause reduction of gap junctional intercellular communication. The supplementation with β-carotene would abolish the effect of the tobacco smoke. Male Wistar rats were allocated in four experimental groups: 1) Control group (C), n=30: control rats were fed a standard diet without exposure tobacco smoke; 2) β-carotene group (BC), n= 28: rats fed the same diet supplemented with 500 mg of β-carotene/kg diet (Sigma) milled in the feed; 3) Exposure to tobacco smoke group (ETS), n=28: rats exposed to tobacco smoke; 4) BC/ETS group (BC/ETS), n=28: rats exposed to tobacco smoke plus BC supplementation. The BC supplementation and tobacco smoke exposure were performed simultaneously until the rats weighed 200 to 250 g (approximately 5 weeks). After this period of treatment the rats were killed and the serum, livers and hearts storaged to -80°C for study of: 1) intercellular communication by immunohistochemistry and western blotting for Cx43; 2) oxidative stress by dosages of reduced glutathione (GSH), oxidized glutathione (GSSG) and lipid 85 hidroperoxides; 3) cardiac remodeling by morphometrical and histological (picro sirius red and hematoxilin-eosin) analyses; 4) biochemical study by BC analysis in serum end tissues. The statistical analysis was performed by t students test for BC levels and two way ANOVA for the rest of variables. / Orientador: Sergio Alberto Rupp de Paiva / Coorientador: Leonardo Antônio Mamede Zornoff / Banca: Thomas Prates Ong / Banca: Alceu Afonso Jordão Junior / Banca: Katashi Okoshi / Banca: Luis Shiguero Matsubara / Doutor

O presente ensaio clínico comparou a resposta dos parâmetros clínicos supragengivais e subgengivais durante o controle da placa supragengival em 25 pacientes que fumam (F), com média de 46 anos de idade (variando de 33 - 57), 19,44 + 11,63 cigarros por dia durante 24,84 + 8,50 anos, e 25 pacientes que nunca fumaram (NF), com média de 46,80 anos de idade (variando de 34 - 59). Os exames, baseline, 30, 90 e 180 dias, foram realizados por uma examinadora calibrada, que avaliou o Índice de Placa Visível (IPV) e de Sangramento Gengival (ISG), Profundidade de Sondagem (PS), Nível de Inserção Clínica (NIC) e Sangramento Subgengival (SS). O controle da placa supragengival consistiu inicialmente de raspagem, alisamento e polimento coronário, limitado ao ambiente supragengival seguido por sessões semanais, por um período de seis meses, de instrução e monitoramento individualizado do controle de placa. As médias por indivíduo foram analisados pelo Teste de Friedman e pelo Teste de U de Mann-Whitney (p≤0,05). Foram observadas reduções significativas em todos os parâmetros para fumantes e nunca fumantes. O IPV reduziu de 90,96% para 8,29% (NF) e de 88,09% para 6,10% (F), sem diferenças entre os grupos. O ISG foi reduzido de 78,95% para 2,12% e de 70,48% para 0,28% nos mesmos grupos, porém com diferenças significativas entre os grupos a partir dos 30 dias. Reduções do SS também foram significativas, para nunca fumantes de 94,05% para 21,75%, e em fumantes de 94,05% para 23,71%, sem diferenças entre os grupos. Significativas reduções na PS foram observadas para nunca fumantes de 3,67mm para 2,60mm e em fumantes de 3,93mm para 2,77mm. Alterações no NIC foram significativas, de 3,43mm para 3,02mm (NF) e de 4,20mm para 3,68mm(F). Houve uma significativa redução do percentual de sítios com PS inicial maior ou igual a 7mm e um aumento no percentual de sítios de 0-3mm. Conclui-se que o controle de placa supragengival executado reduziu significativamente os sinais clínicos da doença periodontal em paciente que fumam e que nunca fumaram.

O silenciamento gênico tem sido utilizado extensivamente para facilitar a investigação de eventos da biologia vegetal. Ele pode ser induzido de diferentes modos, sendo que o passo chave para sua ocorrência é a presença de RNA fita dupla (dsRNA). A fim de avaliar um método rápido de obtenção de silenciamento para análise funcional em larga escala, foi inoculado dsRNA ou siRNA diretamente em folhas de plantas de arroz e de Nicotiana benthamiana. Os dsRNAs de seqüências do gene pds e do gene codificante da ferritina foram obtidos através da síntese in vivo e in vitro e o siRNA de PDS de arroz, derivado somente de síntese in vitro. O gene pds codifica a enzima fitoeno desaturase (PDS), uma enzima chave na biossíntese de carotenóides, que protege a clorofila das plantas contra o foto-branqueamento. O silenciamento deste gene mostra um fenótipo visível, claramente demonstrado através do uso de um inibidor químico da síntese desta enzima. No presente estudo, plantas de arroz e de N. benthamiana inoculadas com dsRNAs derivados do gene pds não apresentaram mudanças fenotípicas. Para avaliação de um outro método foi adaptado um vetor de silenciamento estável, no qual foram inseridos fragmentos de cDNA nas orientações senso e antisenso do gene de ferritina de arroz. O papel da ferritina, segundo experimentação in vitro, pode estar ligada à tolerância de certos cultivares de arroz às altas concentrações de ferro. O aprimoramento das metodologias de silenciamento e de transformação poderá resultar em uma ferramenta mais útil para a análise funcional em larga escala de genes de arroz. / Gene silencing has been used extensively to facilitate the investigation of different events in plant biology. It can be induced through different ways. The key step for its occurrence is the presence of double strand RNA (dsRNA). In order to evaluate a fast method to obtain silencing for functional analysis in a wide scale, either dsRNAs or siRNAs were directly inoculated in the leaves of rice and N. benthamiana plants. The dsRNAs the sequences of the pds gene and of the coding region of the ferritin gene were obtained through in vivo or in vitro synthesis, the siRNA PDS of rice were derived from synthesis in vitro. The pds gene codifies for the enzyme phytoene desaturase (PDS), a key enzyme in the biosynthesis of carotenoids, which protects the clorophil from the plants against photo-bleaching. The silencing of this gene shows a visible phenotype, clearly demonstrated through a chemical inhibition of PDS synthesis. However, no phenotypical changes were observed in either rice or N. benthamiana plants inoculated with dsRNA of the pds gene. In the present study, it was also adapted a vector for stable transformation, in which were inserted cDNA fragments of both, sense and antisense, orientations of the rice ferritin gene. In vitro experiments show that ferritin could be connected to the tolerance to high concentrations of iron of certain cultivars of rice. The improvement of silencing and transformation methodologies could result in a more useful tool for the functional analysis of rice genes in a wide scale.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-24T01:59:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 200873.pdf: 16409018 bytes, checksum: 14c4832cec80b7845b877f234cde409d (MD5) / O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a força de união entre dentina contaminada pela fumaça do cigarro e resina composta. A metodologia utilizada foi o teste de microtração. Foram utilizados dez terceiros molares humanos, dos quais seis foram destinados ao teste de microtração, e os quatros dentes restantes tiveram suas superfícies dentinárias analisados com o MEV. Mediante a realização de cortes seqüenciais, cada dente teve sua porção radicular eliminada e a parte coronal dividida em duas, no sentido mésio-distal. Assim, foram obtidas vinte metades das dez partes coronais. O substrato para adesão foi dentina profunda através de acesso apical. Para a confecção dos corpos-de-prova, cada metade dental foi incluída em resina epóxi através de uma matriz metálica bipartida. Os vinte corpos-de-prova foram distribuídos em dois grupos experimentais (FC e SFC), de maneira que cada dente foi controle de si mesmo ao destinar uma metade a cada grupo. Os corpos-de-prova pertencentes ao grupo FC sofreram escovação simulada diária por meio de um dispositivo desenvolvido para esta pesquisa e exposição à fumaça do cigarro em uma câmara simuladora do ato de fumar por um regime de trinta cigarros por dia durante dezessete dias. Os corpos-de-prova pertencentes ao grupo SFC somente sofreram escovação simulada diária. A análise no microscópio eletrônico de varredura (MEV) revelou a presença de contaminantes nas superfícies dentinárias dos corpos-de-prova do grupo FC antes e após o condicionamento ácido. Para o teste de microtração, foi de forma incremental confeccionada uma base de resina composta Z250 (3M ESPE) de seis milímetros utilizando-se o sistema adesivo Scotchbond Multipurpose Plus (3M ESPE) na superfície dentinária de cada corpo-de-prova. Os corpos-de-prova foram mantidos em água destilada a 37 ºC por 24 horas e seccionados longitudinalmente nos eixos x e y para a obtenção de filetes retangulares com área de secção transversal de aproximadamente 0.45 mm2. O filetes foram tracionados à velocidade de cruzeta de 0,5 mm/min até o registro da carga necessária para ruptura. Os padrões de fratura foram analisados em um microscópio estereoscópio (25 x). A análise estatística (teste t) demonstrou a existência de diferença significante entre as médias dos grupos testados, com o valor de p = 0.001. O grupo FC (49.58 MPa) apresentou inferior resistência de união quando comparado ao grupo SFC (58.48 MPa). De acordo com os resultados, conclui-se que a contaminação pela fumaça do cigarro diminui a resistência de união entre dentina e resina composta.

Este trabalho foi conduzido em Arvorezinha, Rio Grande do Sul, em áreas de Cambissolo háplico sob lavoura de fumo numa pequena bacia hidrográfica rural. O objetivo foi verificar o efeito de sistemas de manejo e do seu tempo de adoção nos atributos do solo, na movimentação de sedimentos sobre a encosta e na exportação de carbono orgânico da área de lavoura para o ambiente. O carbono total e suas frações foram determinados no solo e nos sedimentos. Os sistemas de manejo avaliados foram plantio convencional (PC), cultivo mínimo (CM) e plantio direto (PD) com diferentes tempos de adoção e em situação de início de cultivo e conversão de áreas anteriormente sob PC para CM e PD. Como testemunha utilizou-se uma área de vegetação nativa. Avaliou-se também o efeito do formato da encosta na movimentação de sedimentos. O menor conteúdo de carbono foi verificado nos solos mais degradados, aqueles que estão a 40 e 25 anos sob PC. Estes solos também apresentaram a maior movimentação de sedimentos sobre a encosta. A conversão para os sistemas CM e PD elevou a qualidade do solo, aumentou o conteúdo de carbono, principalmente da fração particulada, e reduziu a movimentação de sedimentos. O efeito do formato da encosta na movimentação de sedimentos foi mais percebido nas áreas sob PC e em seguida sob CM. No PD, devido a elevada taxa e cobertura do solo, não houve efeito do formato da encosta. As maiores perdas de solo e exportações de carbono orgânico foram verificadas nas áreas sob PC, seguida das áreas sob CM e as mais baixas foram verificadas no PD. A fração carbono particulado proporcionalmente foi mais exportada que as demais e foi mais exportada das áreas sob PC. A análise sistêmica das áreas indicou que a qualidade ambiental resultou da qualidade do solo e da redução das perdas de solo e água e redução da exportação de carbono orgânico. / This research was done in areas of Lithic Aplusept under tobacco farming in a small rural watershed in Arvorezinha county in Rio Grande do Sul, state of Brazil. The sim was to study the effeet of the soil management systems and their period of adoption on soil attributes, production and movement of sediments on the hillslope, and organic carbon exportation from the cultivated area to the environment. The total soil organic carbon and their fractions were determined. The investigated soil management systems were conventional tillage (CT), minimum tillage (MT) and no tillage (NT) with different periods of adoption. The MT and NT were converted from CT. A forest area also was evaluated. The effect of the hillslope form on the movement of sediments was also investigated. The most degraded soil were those under CT for 40 and 25 years respectively. These areas presented the lowest soil organic carbon stocks, and also presented the largest movement of sediments on the hillslope. The conversion to the MT and NT systems improved the soil quality, inereasing the soil organie earbon stoek, especially the partieulate fraction and also reduced the movement of sediments. This was more evident in the NT area. The effect of hillslope form on the movement of sediments was more evident in the areas under CT followed by those under MT. Under NT, which had higher soil cover rate, the effect of the hillslope form was not observed.The largest soil loss and organic carbon exportation shappen in the areas under CT, followed by MT and NT. Proportionally, the particulate organic carbon was more exported than the other fractions, and was more exported from CT areas. The systemic analysis of the areas indicated that the environmental quallty are related to soil quality, reduction of the soil and water losses and reduction of organic carbon exportation.

OBJETIVO: O primeiro objetivo deste trabalho foi avaliar, através da citopatologia e da técnica de AgNOR, as taxas de proliferação celular da borda de língua e assoalho de boca de indivíduos que abandonaram o hábito tabágico e de indivíduos que nunca fumaram, ao longo de um ano. O segundo objetivo foi avaliar a influência da condição de higiene bucal na velocidade de proliferação da mucosa bucal de sujeitos não expostos ao tabaco e ao álcool. MÉTODOS: Foram incluídos na amostra inicial 99 indivíduos. As coletas foram realizadas em borda de língua e assoalho de boca, em um momento inicial (baseline), após em média 6 meses (6 meses) e após 12 meses (12 meses). Os participantes foram divididos em três grupos de acordo com os seguintes critérios: Grupo Controle (GC) (n=44): indivíduos atendidos na Faculdade de Odontologia da UFRGS (FO-UFRGS), que nunca fumaram, e que ingeriam até 2 doses (28g) de álcool por semana. Grupo de indivíduos que abandonaram o tabagismo (GAT) (n=22): indivíduos em acompanhamento no Grupo de Apoio ao Fumante do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (GAF-HCPA), que fumavam no momento do inicial do trabalho, e que ao longo do tempo cessaram o hábito tabágico, alcoolistas ou não. Grupo de Tabagistas (GT) (n=33): indivíduos em acompanhamento no GAF-HCPA, que fumavam no momento do inicial do trabalho, e que não cessaram o hábito tabágico ao longo do acompanhamento, alcoolistas ou não. As amostras foram sujeitadas à técnica de AgNOR e quantificadas por três examinadores previamente calibrados. A média de AgNOR por núcleo (mAgNOR) e a porcentagem de células com mais de 3 AgNORs (pAgNOR>3) foram calculados nas 50 primeiras células, nucleadas, não sobrepostas, e bem distendidas. Os dados da condição de higiene bucal (perda dentária, sangramento gengival e profundidade de sondagem) foram obtidos nos registros dos prontuários disponíveis na FO-UFRGS. RESULTADOS: Na coleta baseline, os grupos expostos ao fumo (GAT e GT) apresentaram os valores da velocidade de proliferação celular maiores quando comparados aos indivíduos do GC. Ao longo do tempo, os indivíduos do GAT apresentaram uma redução da taxa de proliferação celular em ambos os sítios analisados, até atingir valores semelhantes aos do GC. Os resultados deste estudo, ainda, sugerem que a variação individual de mAgNOR dos indivíduos do GC, ao longo de um ano de acompanhamento, é de no máximo 23% para o sítio borda de língua, e de 18% para o sítio assoalho de boca. Indivíduos com mais de 3 dentes perdidos apresentam valores superiores de mAgNOR quando comparado com sujeitos com menos de 3 dentes perdidos, no sítio borda de língua (p<0.01). CONCLUSÕES: Indivíduos não expostos ao tabaco e ao álcool apresentam a contagem de AgNOR similar ao longo de 12 meses de acompanhamento, com variações pouco significativas. A partir dos resultados deste estudo pode-se concluir que a cessação do hábito tabágico reduz a velocidade de proliferação celular da mucosa bucal. / OBJECTIVE: The primary aim of this study was to assess, through cytopathology and AgNOR staining technique, the cell proliferation patterns of the border tongue and floor of mouth of pattern who abandoned the smoking habit, over a year. A secondary aim was to investigate the influence of oral health status on cell proliferation rates in the oral mucosa of individuals not exposed to tobacco and alcohol. METHODS: The initial sample comprised 99 individuals. Samples were collected from border tongue and floor of the mouth at initial moment (baseline), after 6 (6 months) and 12 months (12 months). The subjects were divided into three groups, according to the following criteria: Control Group (CG), n = 44: individuals who presented at the clinic of the School of Dentistry, Federal University of Rio Grande do Sul, seeking dental treatment, who never smoked and who drank up to 2 servings (28g) of alcohol per week. Abandonment of Tobacco Group (ATG), n=22: individuals in monitoring at the HCPA Group of Smokers, who smoked at the baseline time, and over time cease the smoking habit, alcoholics or not. Smokers Group (SG), n = 33: individuals in monitoring at the HCPA Smoking Support Group, who smoked at baseline, and that did not stop the smoking habit during the research, alcoholics or not. The samples were subjected to the AgNOR technique and quantified by three calibrated examiners. Mean AgNORs per nucleus (mAgNOR) and the percentage of cells with more than three AgNORs per nucleus (pAgNOR>3) were calculated from the first 50 well-arranged, non-overlapping nucleated cells. Oral health data (missing teeth, gingival bleeding and probing depth) were collected from each patient’s record. RESULTS: At baseline collection the exposed groups to tobacco (ATG and SG) had higher proliferation rate, compared to the CG. Over time, individuals of ATG showed a reduction in cell proliferation in both sites analyzed, reaching values similar to the CG. The present findings show that that individuals not exposed to carcinogens maintain a relatively steady cell proliferation rate in the oral mucosa, with up to 23% of variation in the border of tongue and 18% in the floor of the mouth. Furthermore, it was observed that individuals, not exposed to tobacco and alcohol, with more than three missing teeth presented significantly higher mAgNOR in the border of the tongue (p<0.01). CONCLUSIONS: Individuals not exposed to tobacco and alcohol maintain the count of AgNOR similar over 12 months, with a scarcely variation. More over the smoking habit cassation decreases the proliferation rate of oral mucosa over 1 year of follow-up.

O silenciamento gênico tem sido utilizado extensivamente para facilitar a investigação de eventos da biologia vegetal. Ele pode ser induzido de diferentes modos, sendo que o passo chave para sua ocorrência é a presença de RNA fita dupla (dsRNA). A fim de avaliar um método rápido de obtenção de silenciamento para análise funcional em larga escala, foi inoculado dsRNA ou siRNA diretamente em folhas de plantas de arroz e de Nicotiana benthamiana. Os dsRNAs de seqüências do gene pds e do gene codificante da ferritina foram obtidos através da síntese in vivo e in vitro e o siRNA de PDS de arroz, derivado somente de síntese in vitro. O gene pds codifica a enzima fitoeno desaturase (PDS), uma enzima chave na biossíntese de carotenóides, que protege a clorofila das plantas contra o foto-branqueamento. O silenciamento deste gene mostra um fenótipo visível, claramente demonstrado através do uso de um inibidor químico da síntese desta enzima. No presente estudo, plantas de arroz e de N. benthamiana inoculadas com dsRNAs derivados do gene pds não apresentaram mudanças fenotípicas. Para avaliação de um outro método foi adaptado um vetor de silenciamento estável, no qual foram inseridos fragmentos de cDNA nas orientações senso e antisenso do gene de ferritina de arroz. O papel da ferritina, segundo experimentação in vitro, pode estar ligada à tolerância de certos cultivares de arroz às altas concentrações de ferro. O aprimoramento das metodologias de silenciamento e de transformação poderá resultar em uma ferramenta mais útil para a análise funcional em larga escala de genes de arroz. / Gene silencing has been used extensively to facilitate the investigation of different events in plant biology. It can be induced through different ways. The key step for its occurrence is the presence of double strand RNA (dsRNA). In order to evaluate a fast method to obtain silencing for functional analysis in a wide scale, either dsRNAs or siRNAs were directly inoculated in the leaves of rice and N. benthamiana plants. The dsRNAs the sequences of the pds gene and of the coding region of the ferritin gene were obtained through in vivo or in vitro synthesis, the siRNA PDS of rice were derived from synthesis in vitro. The pds gene codifies for the enzyme phytoene desaturase (PDS), a key enzyme in the biosynthesis of carotenoids, which protects the clorophil from the plants against photo-bleaching. The silencing of this gene shows a visible phenotype, clearly demonstrated through a chemical inhibition of PDS synthesis. However, no phenotypical changes were observed in either rice or N. benthamiana plants inoculated with dsRNA of the pds gene. In the present study, it was also adapted a vector for stable transformation, in which were inserted cDNA fragments of both, sense and antisense, orientations of the rice ferritin gene. In vitro experiments show that ferritin could be connected to the tolerance to high concentrations of iron of certain cultivars of rice. The improvement of silencing and transformation methodologies could result in a more useful tool for the functional analysis of rice genes in a wide scale.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-26Bitstream added on 2014-06-13T18:43:14Z : No. of bitstreams: 1 novo_r_dr_botfm.pdf: 1015453 bytes, checksum: 101fa6a393e4fe3aea61177cb99fc2d5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Em estudo anterior realizado em nosso laboratório ratos expostos à fumaça de cigarro apresentaram menor mortalidade após infarto agudo do miocárdio em relação ao grupo controle. Entretanto a mortalidade aumentou nos ratos fumantes quando receberam β-caroteno. Não se sabe qual o mecanismo da diminuição de mortalidade nos animais fumantes. Formulamos a hipótese de que a fumaça de cigarro induziria estresse oxidativo que causaria efeito tipo precondicionamento cardíaco. O efeito tipo precondicionamento diminuiria a comunicação intercelular pelas junções comunicantes. A suplementação da dieta com β-caroteno inibiria os efeitos provenientes da exposição à fumaça de cigarro. Foram estudados ratos Wistar, distribuídos em 4 grupos: grupo controle (C) - formado por 30 animais, que receberam a dieta usada de rotina em nosso laboratório; 2) grupo β-caroteno (BC) - composto por 28 animais que receberam β-caroteno (na forma de cristal adicionado e misturado à dieta) na dose de 500 mg de β-caroteno/kg de dieta; 3) grupo exposto à fumaça de cigarro (EFC) composto por 28 animais, que receberam a dieta usada de rotina em nosso laboratório e foram expostos ao cigarro; 4) grupo β-caroteno/EFC (BC/EFC) - formado por 28 animais que receberam o β-caroteno na mesma forma que o grupo BC e foram expostos à fumaça de cigarro. A suplementação com β- caroteno e a EFC foram realizados simultaneamente, até que ratos, com peso inicial de 100g, 82 atingissem peso corpóreo de 200-250g. / In previous study performed in our laboratory, we observed which the mortality rates were lower in exposure to tobacco smoke rats than in control rats. Moreover, when the exposure to tobacco smoke rats received β-carotene supplementation this reduction of mortality was abolished. The mechanisms of lower mortality in smokers are unknown. In this context we formulated the hypothesis of that the exposure to tobacco smoke produces oxidative stress which would induce precondictioning-like effect. This effect would cause reduction of gap junctional intercellular communication. The supplementation with β-carotene would abolish the effect of the tobacco smoke. Male Wistar rats were allocated in four experimental groups: 1) Control group (C), n=30: control rats were fed a standard diet without exposure tobacco smoke; 2) β-carotene group (BC), n= 28: rats fed the same diet supplemented with 500 mg of β-carotene/kg diet (Sigma) milled in the feed; 3) Exposure to tobacco smoke group (ETS), n=28: rats exposed to tobacco smoke; 4) BC/ETS group (BC/ETS), n=28: rats exposed to tobacco smoke plus BC supplementation. The BC supplementation and tobacco smoke exposure were performed simultaneously until the rats weighed 200 to 250 g (approximately 5 weeks). After this period of treatment the rats were killed and the serum, livers and hearts storaged to -80°C for study of: 1) intercellular communication by immunohistochemistry and western blotting for Cx43; 2) oxidative stress by dosages of reduced glutathione (GSH), oxidized glutathione (GSSG) and lipid 85 hidroperoxides; 3) cardiac remodeling by morphometrical and histological (picro sirius red and hematoxilin-eosin) analyses; 4) biochemical study by BC analysis in serum end tissues. The statistical analysis was performed by t students test for BC levels and two way ANOVA for the rest of variables.

O presente ensaio clínico comparou a resposta dos parâmetros clínicos supragengivais e subgengivais durante o controle da placa supragengival em 25 pacientes que fumam (F), com média de 46 anos de idade (variando de 33 - 57), 19,44 + 11,63 cigarros por dia durante 24,84 + 8,50 anos, e 25 pacientes que nunca fumaram (NF), com média de 46,80 anos de idade (variando de 34 - 59). Os exames, baseline, 30, 90 e 180 dias, foram realizados por uma examinadora calibrada, que avaliou o Índice de Placa Visível (IPV) e de Sangramento Gengival (ISG), Profundidade de Sondagem (PS), Nível de Inserção Clínica (NIC) e Sangramento Subgengival (SS). O controle da placa supragengival consistiu inicialmente de raspagem, alisamento e polimento coronário, limitado ao ambiente supragengival seguido por sessões semanais, por um período de seis meses, de instrução e monitoramento individualizado do controle de placa. As médias por indivíduo foram analisados pelo Teste de Friedman e pelo Teste de U de Mann-Whitney (p≤0,05). Foram observadas reduções significativas em todos os parâmetros para fumantes e nunca fumantes. O IPV reduziu de 90,96% para 8,29% (NF) e de 88,09% para 6,10% (F), sem diferenças entre os grupos. O ISG foi reduzido de 78,95% para 2,12% e de 70,48% para 0,28% nos mesmos grupos, porém com diferenças significativas entre os grupos a partir dos 30 dias. Reduções do SS também foram significativas, para nunca fumantes de 94,05% para 21,75%, e em fumantes de 94,05% para 23,71%, sem diferenças entre os grupos. Significativas reduções na PS foram observadas para nunca fumantes de 3,67mm para 2,60mm e em fumantes de 3,93mm para 2,77mm. Alterações no NIC foram significativas, de 3,43mm para 3,02mm (NF) e de 4,20mm para 3,68mm(F). Houve uma significativa redução do percentual de sítios com PS inicial maior ou igual a 7mm e um aumento no percentual de sítios de 0-3mm. Conclui-se que o controle de placa supragengival executado reduziu significativamente os sinais clínicos da doença periodontal em paciente que fumam e que nunca fumaram.