Made available in DSpace on 2016-04-04T18:27:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Josy de Souza Moriyama-1.pdf: 538769 bytes, checksum: d9c9c18d8d0776782f67a5efca7e8c1b (MD5) Previous issue date: 2003-06-17 / The Body Dysmorphic Disorder (BDD) is diagnosed when there is an exaggerated preoccupation with some minimal or imagined defect in the appearance, which brings significative impairments to the person s life. It has been sought to investigate the development and maintenance of the BDD behaviors through the functional analysis and the concept of experential avoidance proposed by Hayes, Wilson, Gifford and Follette (1996). Seven people with characteristic behaviors of the BDD, their families and four plastic surgeons participated in this study. It has been used as instruments: instructions to orient surgeons about behaviors of the BDD, enabling them to identify and invite patients to participate in the research; an identification questionnaire with the purpose to select the sample; semi-structured interviews for the participant and their families, containing questions relating to the history of the participants life, families relationship, the beginning of the concern with the appearance, behaviors of the BDD and actual contingencies which maintains them. Ten patients responded to the identification questionnaire and seven of them were selected. Individual interviews were made with each of the participants and their families, according to the necessity of collecting complementary data. From the recording and transcription of the interviews, it has been made a clinic systematical study, in which, the behaviors were described and analyzed according to probable origin and actual functioning processes. Beyond the behaviors related to the preoccupations with the appearance, typical behaviors of other disorders were found (such as: Obsessive Compulsive Disorder, Depression, Social Phobia, Hypochondria) and standards of behavior known as personality features (such as: vanity, perfectionism, aggressiveness). The results pointed similar functional processes, among all the participants. Among the origin processes there were: the cohersitive education with few positive reinforcements in the childhood, past occurrence like accidents, comparisons and comments relating to the part of the body which they worried about. These contingencies, probably, influenced the strong emphasis on discriminative stimuli related to the appearance. Among the actual processes there have been identified: negative reinforcement, lack of positive reinforcements, secondary gains and strong cultural influences of the valorization of the appearance. As particular variables to each case there have been found: low development of skilful socially behaviors, models in the childhood, extremely critical mother concerning to the appearance, among others. It has been concluded that the actual functioning of the BDD is marked by experiential avoidance where the individuals start avoiding the private aversive stimuli, like the anxiety, thoughts about their appearance and about the reaction of the people against their appearance. This avoidance prevents them from exposing themselves to the social situations, resulting in consequences such as social isolation and depressive behaviors. Functional resemblances were demonstrated for all seven cases studied although some topographic behaviors were different, indicating the necessity in considering the functionality of the behaviors and not only the arbitrariness of the psychiatric classification based on symptoms. / O Transtorno Dism?rfico Corporal (TDC) ? diagnosticado quando h? uma preocupa??o t?o exagerada com algum defeito m?nimo ou imaginado na apar?ncia, que traz preju?zos significativos ? vida da pessoa. Buscou-se investigar o desenvolvimento e manuten??o de comportamentos do TDC atrav?s de an?lises funcionais e do conceito de esquiva experencial proposto por Hayes, Wilson, Gifford e Follette (1996). Participaram do estudo sete pessoas com comportamentos caracter?sticos do TDC, seus familiares e quatro cirurgi?es pl?sticos. Foram utilizados como instrumentos: roteiros para orientar cirurgi?es sobre comportamentos do TDC, possibilitando-os identificar e convidar pacientes seus para participarem da pesquisa; uma ficha de identifica??o dos participantes, para selecionar a amostra; roteiros de entrevistas semi-estruturadas para os participantes e seus familiares, com quest?es relativas ? hist?ria de vida dos participantes, rela??es familiares, in?cio das preocupa??es com a apar?ncia, comportamentos do TDC e conting?ncias atuais que os mantinham. Dez pacientes responderam ? ficha de identifica??o e sete foram selecionados. Entrevistas individuais foram feitas com cada participante e com seus familiares, de acordo com a necessidade de se coletar dados complementares. A partir da grava??o e transcri??o das entrevistas foi feito um estudo sistem?tico cl?nico em que os comportamentos foram descritos e analisados de acordo com prov?veis processos de origem e funcionamento atual. Al?m de comportamentos relacionados ?s preocupa??es com a apar?ncia, foram encontrados comportamentos t?picos de outros transtornos (como: Transtorno Obsessivo Compulsivo, Depress?o, Fobia Social, Hipocondria) e padr?es de comportamento conhecidos como tra?os de personalidade (como: vaidade, perfeccionismo, agressividade). Os resultados apontaram processos funcionais semelhantes, entre todos os participantes.

Motivated by the huge success of the applications of the abstract fractional equations in many areas of science and engineering, and by the unsolved question in this theory, in this work we study several matters related to abstract fractional Cauchy problems of order \'alpha\' \'it belongs\' (0, 1). We search to answer some questions that were open: for instance, we analyze the existence of local mild solutions for the problem, and its possible continuation to a maximal interval of existence. The case of critical nonlinearities and corresponding regular mild solutions is also studied. Finally, by establishing some general comparison results, we apply them to conclude the global well-posedness of a fractional partial differential equation coming from heat conduction theory / Motivados pelo êxito das aplicações nas equações abstratas em muitas áreas da ciência e da engenharia, e pelas perguntas ainda abertas, neste trabalho estudamos questões relativas aos problemas fracionários abstratos de Cauchy de ordem \'alpha\' \'pertence a\' (0, 1). Buscamos responder algumas perguntas: por exemplo, analisamos a existência de soluções locais fracas do problema e sua possível continuação em um intervalo maximal de existência. O caso da não-linearidade crítica e sua correspondente solução regular fraca também é abordado. Por último, mediante o estabelecimento de alguns resultados gerais de comparação, chegamos a conclusão de que as soluções de uma equação diferencial parcial fracionária, proveniente da teoria de condução de calor, existe globalmente

Made available in DSpace on 2016-04-29T13:17:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavia Vieira de Souza Leite.pdf: 914389 bytes, checksum: bf1a594246bb1484316589bfbe285afd (MD5) Previous issue date: 2011-05-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Contingency analysis has been considered fundamental for the identification of variables of certain behaviors so that such behaviors can be changed. The purpose of this work was to determine the effect of a training course designed to teach teachers a part of contingency analysis: assessment of the probable function of inadequate student behavior in the classroom. Three elementary school teachers participated in the study. Every one of them indicated a student whose in-class behavior they considered inadequate. The study consisted of eight stages: Previous observations; Baseline (BL); Training; Test 1; generalization Test 1; application Test 1; generalization Test 2; and application Test 2. AT BL, teachers were presented eight scenarios: four showing behaviors maintained by positive reinforcement by teacher s attention, and the other four showing behaviors maintained by negative reinforcements by task escape, each one followed by a question about the probable function of student s behavior. The scenarios presented described: inadequate student behavior, antecedent events preceding the behavior, behavior consequence, the resultant frequency of that behavior. During this stage, the highest number of right answers was three. During training, the removal information procedure was used. It consisted of six steps. Thus, 36 scenarios were used, six for each step (three where behavior was maintained by the teacher s attention, and three by student s task escape from academic tasks. Each scenario was accompanied by questions intended to identify the behavior, preceding event, consequence, frequency and probable behavior function. At step 1, all scenario-related questions had been answered. From step 2 onward, answers were withdrawn one by one until no answer was provided to all questions. On Test 1, identical to BL, all three participants had all eight questions right. Next, on generalization Test 1, teachers were asked to describe the probable function of behavior in the student they indicated. Two teachers gave the right answer on this test. On application Test 1, participants were asked to suggest a potential intervention, and two of them proposed adequate interventions to change the inadequate behavior of the student indicated. On generalization Test 2 (taken by only one participant), a description of the interaction sequence between participant and student was provided, and the question about the probable function of the student s behavior was made. On this test, the participant gave a right answer. Finally, application Test 2, identical to application Test 1, was administered, and no adequate intervention was proposed. The results obtained suggest that training was effective in teaching teachers to determine the probable function of student behavior in a relatively short time / A Análise de Contingências tem sido considerada fundamental para que sejam identificadas as variáveis que mantêm determinados comportamentos, para que, então, se possa intervir neles. O presente estudo teve por objetivo verificar o efeito de um treino para ensinar a professores uma parte da análise de contingências: o levantamento da provável função do comportamento inadequado do aluno em sala de aula. Participaram do estudo três professoras do ensino fundamental, cada uma das quais indicou um aluno que emitia comportamentos considerados por elas inadequados em sala de aula. O estudo foi desenvolvido em oito etapas: Observações prévias; Linha de Base (LB); Treino; Teste 1; Teste de generalização 1; Teste de aplicação 1; Teste de generalização 2 e Teste de aplicação 2. Na LB foram entregues aos professores oito cenários, sendo que quatro correspondiam a comportamentos mantidos por reforçamento positivo por atenção do professor e outros quatro, a comportamentos mantidos por reforçamento negativo por fuga de tarefas, cada um deles seguido de uma questão sobre a provável função do comportamento do aluno. Os cenários apresentados descreviam: o comportamento inadequado do aluno, os eventos antecedentes, a conseqüência produzida e o que ocorreu com a freqüência posterior desse comportamento. Nesta etapa, o maior número de acertos obtido foi três. No treino, foi utilizado um procedimento de remoção de informações, composto por seis passos, e foram utilizados 36 cenários, sendo seis cenários por passo, três em que o comportamento do aluno era mantido pela atenção do professor e três em que era mantido pela fuga de tarefas acadêmicas. Cada cenário foi acompanhado de questões para identificação do comportamento; do evento antecedente; da consequência; da frequência; e da provável função do comportamento. No primeiro passo do procedimento, todas as perguntas relativas aos cenários estavam respondidas; a partir do segundo passo, a resposta a uma das questões era retirada a cada passo, até não ser mais fornecida resposta para nenhuma questão. No Teste 1, idêntico à LB, as três participantes acertaram oito questões de oito possíveis. Em seguida, foi aplicado o Teste de generalização 1, em que era solicitado às participantes que respondessem a questão sobre a provável função do comportamento do aluno por elas indicado. Nesse Teste, duas participantes obtiveram a totalidade ou quase totalidade de acertos. No Teste de aplicação 1, era solicitado às participantes que respondessem a questão sobre uma possível intervenção e duas participantes propuseram intervenção adequada para mudar o comportamento do aluno indicado. No Teste de generalização 2 (só aplicado a uma participante) era entregue uma folha com uma descrição da sequência da interação da participante com o aluno, e apresentada, em seguida, a questão sobre a provável função do comportamento do aluno. Nesse Teste, a participante acertou a questão sobre a provável função do comportamento. Após isto, foi aplicado o Teste de aplicação 2, idêntico ao Teste de aplicação 1, em que não soube propor uma intervenção adequada. Os resultados obtidos sugerem que o treino foi efetivo para ensinar professores a levantar a provável função do comportamento do aluno em um tempo relativamente curto

Made available in DSpace on 2016-04-29T13:17:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Helena dos Santos Silverio.pdf: 769811 bytes, checksum: c9aa7d4917b3a75fe4a7f4f7acef7008 (MD5) Previous issue date: 2012-05-30 / In the last two decades the behavior analysis observed the emergence and growth of a line of research aimed at investigating the teaching of verbal repertoires description and functional analysis of conditions that could facilitate their teaching in applied settings. In Brazil at least two working groups study the teaching of functional analysis for teachers. The first group, UNESP Bauru, is represented by the academic work of Fonseca (2008), Sparvoli, (2008), Oliveira (2010) and Gomes (2010). The second group, the PUC SP, is represented by the works of Almeida (2009), Cerqueira (2009), Tavares (2009) and Leite (2010). The objective of this research was to analyze the data collected by these two lines of research to identify which variables were responsible for the results obtained in the teaching functional analysis and its generalization. The consistency of their methods with the principles of behavior analysis to education was investigated. The research was also aimed at identifying the difficulties mentioned by the authors propose some ways of overcoming. The results showed that the PUC SP group presented methods using experimental designs, and even used some principles of behavior analysis to education___ as the description of goals and behavioral measures, the preliminary assessment of the repertoire of the participants, the planning small steps, the constant promotion of responding to and use of a material easy to reproduce. These characteristics seem to have contributed to all the participants learn to identify the function of the behaviors presented in teaching situations. In relation to data on generalization, UNESP Bauru group achieved better results, since most of the participants managed to change their teaching practices after having gone through training. The result obtained by UNESP Bauru group may have been a function of training with multiple copies in the natural applied context. It was concluded that to meet the demands of the scientific community and service providers is necessary a careful description of methodological procedures. Repeatable and measurable variables benefit the research and the application. In addition, the following principles of behavior analysis to education, and planning of generalization, could increase the effectiveness of teaching procedures. Careful planning of the methods adopted by Almeida (2009), Cerqueira (2009), Leite (2010) and Tavares (2009), together with the applied context adopted by Fonseca (2008), Gomes (2010), Oliveira (2010) and Sparvoli ( 2008), may point to advances in behavior analytic proposals for education / Nas últimas duas décadas a análise do comportamento observou o surgimento e crescimento de uma linha de pesquisa voltada para a investigação do ensino de repertórios verbais de descrição de análises funcionais e de condições que pudessem facilitar o seu ensino em contextos aplicados. No Brasil pelo menos dois grupos de trabalho estudam o ensino da análise funcional para professores. O primeiro grupo, da UNESP Bauru, é representado pelos trabalhos acadêmicos de Fonseca (2008), Sparvoli, (2008), Oliveira (2010) e Gomes (2010). O segundo grupo, da PUC SP, é representado pelos trabalhos de Almeida (2009), Cerqueira, (2009), Tavares (2009) e Leite (2010). O objetivo da presente pesquisa foi analisar os dados levantados por essas duas linhas de pesquisa, de modo a identificar quais variáveis foram responsáveis pelos resultados obtidos no ensino da análise funcional e na sua generalização, considerando-se como recorte de análise, a consistência de seus métodos com os princípios da análise do comportamento para a educação. A pesquisa teve ainda como objetivo identificar as dificuldades apontadas pelos autores e propor algumas formas de superação. Como resultados, observou-se que o grupo da PUC SP apresentou métodos empregando delineamentos experimentais, e ainda utilizou alguns princípios da análise do comportamento para educação, como a descrição de objetivos e medidas comportamentais, a avaliação prévia do repertório dos participantes, o planejamento de pequenos passos, a promoção do responder constante e a utilização de um material de fácil reprodução. Essas características parecem ter contribuído para que todos os participantes aprendessem a identificar a função dos comportamentos apresentados nas situações de ensino. Já em relação aos dados sobre a generalização, o grupo da UNESP Bauru obteve melhores resultados, pois a maior parte dos participantes conseguiu mudar suas práticas de ensino após terem passado pelo treinamento. O resultado da generalização obtido pelo grupo da UNESP Bauru pode ter sido função do treinamento com múltiplos exemplares em contexto aplicado natural. Concluiu-se que para atender a demanda da comunidade científica e dos prestadores de serviço se faz necessária uma cuidadosa descrição metodológica, pois os procedimentos comuns à pesquisa beneficiam a aplicação por torná-la replicável e mensurável. Além disso o seguimento dos princípios da análise do comportamento para a educação, e o planejamento da generalização, poderiam aumentar a eficácia dos procedimentos de ensino. O planejamento cuidadoso dos métodos adotados por Almeida (2009), Cerqueira (2009), Leite (2010) e Tavares (2009), aliado ao contexto aplicado adotado por Fonseca (2008), Gomes (2010), Oliveira (2010) e Sparvoli (2008), podem apontar avanços nas propostas analítico-comportamentais para a educação

Made available in DSpace on 2016-04-29T13:18:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariana Kanebley Tavares.pdf: 568027 bytes, checksum: 5ee0175d82bfcab5cdf9e539bc23b0ac (MD5) Previous issue date: 2009-06-05 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Many studies about the contingency analysis teaching for non-psychologists have been published. The procedures of some of these studies typically teach one of the necessary abilities to the contingency analysis achievement: the application of a previously defined standard procedure. Such studies generally don t make the apprentice to stay under control of what maintains the behavior wanted to be changed. Based on this, the present study intended to verify the efficacy of a training to teach teachers to raise a probable function of the behavior considered inadequate of the students in the classroom. Participated three elementary teachers, who had indicated one of their classrooms student that presented behaviors considered undesirable by them. In the baseline, eight written scenes of situations in the classroom that involved inadequate behaviors of students were presented to the participants. These behaviors could be maintained by positive reinforcement (attention gain from the teacher) or negative reinforcement (demand escape). The participants should answer, based only in the eight scenes, about the behaviors emitted by the students, the consequences, the antecedents, the frequencies that followed and the probable function of the behaviors. The training had 14 scenes. The experimenter provided analysis models for the first two scenes, answering the questions that accompanied the scenes. For every two scenes that followed, the answers for one of the analysis questions were removed, raising the number of questions to be answered by the participants. In test 1, equal to the baseline, the participants performance improved, almost reaching the maximum possible, which shows that the training was effective. A second test, the test 2, was made by presenting only the questions about what functions could have the behaviors presented in another eight scenes. In this test, two participants had their performance worse than in the test 1, what could indicate that they still needed the questions about the previous items and that it may be important to remove these questions gradually. A generalization test was made by asking the participants about the behavior probable function of the student from her classroom that had been indicated. Based on the experimenter s classroom observation, all the participants seemed to be able to identify the probable function of their student s behaviors, but when asked to propose an intervention based on the behavior function, only one of the participants did it, with partially adequate interventions, what shows that being able to identify the function of the behavior doesn t imply being able to propose an intervention / Muitos estudos sobre o ensino de análise de contingências para não-psicólogos têm sido publicados. Os procedimentos de alguns desses estudos tipicamente ensinam uma das habilidades necessárias para a realização da análise de contingências: a aplicação de um procedimento padrão previamente definido. Tais estudos em geral não fazem com que o aprendiz fique sob controle do que mantém o comportamento que se quer alterar. Com base nisso, o presente estudo pretendeu verificar a eficácia de um treinamento para ensinar professores a levantar uma provável função do comportamento considerado inadequado de alunos em sala de aula. Participaram três professoras do ensino fundamental que haviam indicado um aluno de suas classes que apresentava comportamentos considerados por elas como indesejáveis. Na linha de base foram apresentados oito cenários escritos com situações em sala de aula envolvendo comportamentos inadequados de alunos e que podiam ser mantidos por reforçamento positivo (ganho de atenção da professora) ou reforçamento negativo (fuga de uma demanda). As participantes deveriam responder, com base apenas nos oito cenários, sobre os comportamentos emitidos pelos alunos, as conseqüências, os antecedentes, as freqüências dos comportamentos em seguida e as prováveis funções dos comportamentos. O treino constou de 14 cenários. Para os primeiros dois cenários a pesquisadora forneceu modelos de análise, respondendo as questões que acompanhavam os cenários. A cada dois dos cenários seguintes, as respostas a uma das questões de análise foram retiradas, aumentando-se o número de questões a serem respondidas pelas participantes. No teste 1, idêntico à linha de base, o desempenho das participantes melhorou, atingindo quase o máximo de acertos possíveis, o que mostra que o treino foi efetivo. Um segundo teste, o teste 2, foi feito apresentando apenas a pergunta sobre qual poderia ser a função dos comportamentos apresentados em outros oito cenários. Nesse teste, duas participantes tiveram desempenho pior do que no teste 1, o que pode indicar que elas ainda precisavam das questões sobre os itens anteriores e que talvez seja importante retirar essas perguntas gradualmente. Um teste de generalização foi feito perguntando às professoras sobre a provável função do comportamento do aluno de sua classe que havia sido indicado. Com base nas observações feitas em sala de aula pela pesquisadora, todas as participantes parecem ter sido capazes identificar a provável função dos comportamentos dos seus alunos, porém quando lhes foi solicitado que propusessem uma intervenção com base na função do comportamento do aluno identificada, apenas uma das professoras propôs intervenções parcialmente adequadas, o que mostra que ser capaz de identificar a função do comportamento não implica ser capaz de propor intervenção

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2017-10-25T17:03:06Z No. of bitstreams: 1 Ana Maria Lisboa Cesarino de Paula.pdf: 1005253 bytes, checksum: 5368dd1d941408f029b9df78fbb61a5d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-25T17:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Maria Lisboa Cesarino de Paula.pdf: 1005253 bytes, checksum: 5368dd1d941408f029b9df78fbb61a5d (MD5) Previous issue date: 2017-09-04 / The present study investigated the control exerted by antecedent and consequent events on the fear responses of three women diagnosed with anxiety disorder, and aged 45-74 years. To research these events was applied the process of functional assessment by using the strategies: (a) indirect functional assessment through interview (appointment), (b) direct functional assessment through direct observation, and (c) functional analysis or functional analysis methodology. The functional analysis consisted of the manipulation environmental events, especially in four principal conditions: attention, demand, alone and control. The attention condition was subdivided in (1) to contact-attention, (2) to worryattention, and (3) to establish-attention. The data obtained with the procedures adopted in the indirect assessment by interview, as well as that ones in direct observation of participants in the natural environment provided important subsidies to the experimental framework of functional analysis, and showed complementary to it. The functional analysis results demonstrated that the fear responses occurred with high frequency in attention and demand conditions, and didn't occur in alone and control conditions. However, one class of results, sensorial stimulation occurred in high frequency in alone condition. So, it was evident the control on fear responses by the sources positive and negative reinforcement, while the sensorial stimulations were controlled by automatic reinforcement. The date obtained make evident that the investigation by functional analysis methodology demonstrated the importance of fear responses control by using sources of positive reinforcement, negative reinforcement, and automatic reinforcement. The process of functional assessment applied in this study proved to be effective, once it was showed the control exerted by antecedent and consequent events on the fear responses and sensorial stimulation of the participants; than this way it is justified its application to evaluate the behavior of people diagnosed with anxiety disorder. / O presente estudo investigou o controle exercido pelos eventos antecedentes e consequentes sobre as respostas de medo de três pessoas do sexo feminino com diagnóstico de transtorno de ansiedade e idades entre 45 e 74 anos. Para pesquisar esses eventos foi usado o processo de avaliação funcional por meio das estratégias: (a) avaliação funcional indireta por entrevista, (b) avaliação funcional por observação direta e (c) análise funcional ou metodologia de análise funcional. A análise funcional constou da manipulação de eventos ambientais em quatro condições principais: atenção, demanda, sozinho e controle, sendo que a condição de atenção foi subdividida em (1) atençãocontactar, (2) atenção-preocupar e (3) atenção-constatar. Os dados obtidos com os procedimentos adotados na avaliação indireta por entrevista, bem como a observação direta dos participantes no ambiente natural, forneceram importantes subsídios para a armação experimental da análise funcional e se mostraram complementares a ela. Os resultados da análise funcional demonstraram que as respostas de medo ocorreram com alta frequência nas condições de atenção e demanda e não ocorreram nas condições sozinho e controle. No entanto uma classe de respostas, estimulação sensorial, ocorreu em alta frequência na condição sozinho. Evidenciou-se, assim, o controle das respostas de medo pelas fontes de reforçamento positivo e negativo. Já as estimulações sensoriais foram controladas pelo reforçamento automático. Os dados obtidos evidenciam que a investigação por meio da metodologia de análise funcional demonstrou a importância do controle das respostas de medo por fontes de reforçamento positivo, reforçamento negativo e reforçamento automático. O processo de avaliação funcional empregado por este estudo provou ser eficaz, uma vez que ficou evidenciado o controle exercido pelos eventos antecedentes e consequentes sobre as respostas de medo e estimulação sensorial das participantes, sendo que assim se justifica seu emprego para avaliar os comportamentos de pessoas com o diagnóstico de ansiedade.

Problems involving the minimization of functionals date back to antiquity. The mathematics of the calculus of variations has provided a framework for the analytical solution of a limited class of such problems. This paper describes a numerical approximation technique for obtaining machine solutions to minimal path problems. It is shown that this technique is applicable not only to the common case of finding geodesics on parameterized surfaces in R3, but also to the general case of finding minimal functionals on hypersurfaces in Rn associated with an arbitrary metric.

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Flavonoids are a class of secondary metabolites, the majority of which are present in glucosylated form. Glucosyltransferases are the enzymes that mediate glucosylation by transferring glucose from a high energy sugar donor to the acceptor substrates. Our study focuses on the structural and functional analysis of a flavonol-specific 3-O-glucosyltransferase (Cp-3-O-GT) clone from Citrus paradisi that has been characterized previously in our lab. Multiple sequence alignment and homology modeling was done to identify candidate residues for mutation. Cp-3-O-GT was modeled with a flavonoid 3-O-GT from Vitis vinifera (VvGT) that can glucosylate both flavonols and anthocyanidins. We identified a proline residue at position 145 of Cp-3-O-GT that corresponded to a threonine residue in VvGT and designed a Cp-3-O-GT- P145T mutant to test the hypothesis that that mutation of proline by threonine in Cp-3-O-GT could alter substrate or regiospecificity of Cp-3-OGT. While the mutant P145T enzyme did not glucosylate anthocyanidins, it did glucosylate flavanones and flavones in addition to flavonols. This is significant because flavanones and flavonols do not contain a 3-OH group. HPLC was performed to identify the reaction products. Early results indicated that the mutant protein glucosylates naringenin at 7-OH position forming prunin. Product identification with other substrates is in progress. Results are being used to revisit and refine the structure model. Structural and functional analysis of flavonoid GTs may contribute to custom design of GTs for the synthesis of novel glucosides by changing glucosylation patterns.

Glucosyltransferases (GTs) are enzymes that enable transfer of glucose from an activated donor (UDP-glucose) to the acceptor substrates. A flavonol specific glucosyltransferase cloned from Citrus paradisi has strict substrate and regiospecificity (Cp3OGT). The amino acid sequence of Cp3OGT was aligned with a purported anthocyanin GT from Clitorea ternatea and a GT from Vitis vinifera that can glucosylate both flavonols and anthocyanidins. Using homology modeling to identify candidate regions followed by site directed mutagenesis, three double mutations of Cp3OGT were made. Biochemical analysis of the three mutant proteins was performed. S20G+T21S protein retained activity similar to the wildtype (WT- Kmapp-80 µM; Vmax = 16.5 pkat/µg, Mutant- Kmapp-83 µM; Vmax -11 pkat/µg) but the mutant was more thermostable compared to the WT and this mutation broadened its substrate acceptance to include the flavanone, naringenin. S290C+S319A mutant protein retained 40% activity relative to wildtype, had an optimum pH shift, but had no change in substrate specificity (Kmapp-18 µM; Vmax-0.5 pkat/µg). H154Y+Q87I protein was inactive with every class of flavonoid tested. Product identification revealed that the S20G+T21S mutant protein widened the substrate and regio-specificity of CP3OGT. Docking analysis revealed that H154 and Q87 could be involved in orienting the ligand molecules within the acceptor binding site. H363, S20, and S150 were also found to make close contact with the 7-OH, 4-OH and 3’-OH groups, respectively.