Helicobacter spp é uma bactéria espiralada gram negativa que pode fazer parte da microbiota gástrica de cães e gatos domésticos, e sua associação com as gastropatias ainda é amplamente discutida na Medicina Veterinária. O objetivo do estudo foi avaliar a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica em cães e gatos necropsiados no HOVET-USP e comparar quatro métodos de diagnóstico para a identificação do agente. Fragmentos da mucosa gástrica foram destinados ao TRU, citologia, histopatologia por hematoxilina e eosina (HE) com coloração de Warthin Starry (WS) e imuno-histoquímica (IHQ). Para a análise comparativa, de concordância e de desempenho dos testes, entre os métodos de diagnóstico com o padrão ouro (HE), foram utilizados o teorema de Bayes, o índice Kappa e o índice Youden respectivamente. Nos cães a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica ficou em 57%, com associação entre a infecção e a faixa etária dos animais. Nos gatos esta frequência de ocorrência foi de 87% pelo método padrão ouro (HE) de diagnóstico escolhido sem associação entre infecção, raça, gênero e idade dos animais. A imunohistoquímica obteve maiores índices de Youden e Kappa nos cães. Nos gatos, a coloração específica a base de prata, Warthin Starry, obteve maior índice Youden e Kappa do que os outros diagnósticos. A determinação da frequência de ocorrência do Helicobacter spp varia conforme o método de diagnóstico adotado. A escolha do método depende dos recursos financeiros disponíveis, das amostras que se pretende estudar, do tempo necessário, da praticidade do método e da sua performance. / Helicobacter spp are gram negative spiral bacterium that can be part of the gastric microbiota of domestic dogs and cats, and its association with gastropathies is still widely discussed in Veterinary Medicine. The aim of the study was to evaluate the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose in dogs and cats necropsied at HOVET - USP and compare four diagnostic methods for the identification of the agent. Fragments of gastric mucosa were sent to the rapid urease test (RUT), cytology, histopathology by hematoxylin and eosin (HE) staining with Warthin Starry (WS) and immunohistochemistry (IHC). For comparative analysis, and concordance and performance between diagnostic methods with the gold standard (HE) were used respectively the Bayes\' theorem, the Kappa index and Youden index. In dogs the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose stood at 57 %, with an association between infection and the age of the animals. In cats this frequency of occurrence was 87 % for the gold standard method (HE) and no association between infection, race, gender and age of the animals was found. Immunohistochemistry showed higher Youden index and Kappa in dogs. In cats, the specific staining based on silver, Warthin Starry, demonstrated the highest Youden and Kappa indexes among the other diagnostic methods. The determination of the frequency of occurrence of Helicobacter spp varies according to the diagnostic method adopted. The choice of method depends on the financial resources available, the samples under study, the time required, the practicality of the method and its performance.

Helicobacter spp é uma bactéria espiralada gram negativa que pode fazer parte da microbiota gástrica de cães e gatos domésticos, e sua associação com as gastropatias ainda é amplamente discutida na Medicina Veterinária. O objetivo do estudo foi avaliar a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica em cães e gatos necropsiados no HOVET-USP e comparar quatro métodos de diagnóstico para a identificação do agente. Fragmentos da mucosa gástrica foram destinados ao TRU, citologia, histopatologia por hematoxilina e eosina (HE) com coloração de Warthin Starry (WS) e imuno-histoquímica (IHQ). Para a análise comparativa, de concordância e de desempenho dos testes, entre os métodos de diagnóstico com o padrão ouro (HE), foram utilizados o teorema de Bayes, o índice Kappa e o índice Youden respectivamente. Nos cães a frequência de ocorrência da helicobacteriose gástrica ficou em 57%, com associação entre a infecção e a faixa etária dos animais. Nos gatos esta frequência de ocorrência foi de 87% pelo método padrão ouro (HE) de diagnóstico escolhido sem associação entre infecção, raça, gênero e idade dos animais. A imunohistoquímica obteve maiores índices de Youden e Kappa nos cães. Nos gatos, a coloração específica a base de prata, Warthin Starry, obteve maior índice Youden e Kappa do que os outros diagnósticos. A determinação da frequência de ocorrência do Helicobacter spp varia conforme o método de diagnóstico adotado. A escolha do método depende dos recursos financeiros disponíveis, das amostras que se pretende estudar, do tempo necessário, da praticidade do método e da sua performance. / Helicobacter spp are gram negative spiral bacterium that can be part of the gastric microbiota of domestic dogs and cats, and its association with gastropathies is still widely discussed in Veterinary Medicine. The aim of the study was to evaluate the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose in dogs and cats necropsied at HOVET - USP and compare four diagnostic methods for the identification of the agent. Fragments of gastric mucosa were sent to the rapid urease test (RUT), cytology, histopathology by hematoxylin and eosin (HE) staining with Warthin Starry (WS) and immunohistochemistry (IHC). For comparative analysis, and concordance and performance between diagnostic methods with the gold standard (HE) were used respectively the Bayes\' theorem, the Kappa index and Youden index. In dogs the frequency of occurrence of gastric helicobacteriose stood at 57 %, with an association between infection and the age of the animals. In cats this frequency of occurrence was 87 % for the gold standard method (HE) and no association between infection, race, gender and age of the animals was found. Immunohistochemistry showed higher Youden index and Kappa in dogs. In cats, the specific staining based on silver, Warthin Starry, demonstrated the highest Youden and Kappa indexes among the other diagnostic methods. The determination of the frequency of occurrence of Helicobacter spp varies according to the diagnostic method adopted. The choice of method depends on the financial resources available, the samples under study, the time required, the practicality of the method and its performance.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-11T18:20:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoPerfilPacientes.pdf: 1617181 bytes, checksum: 969ee7ea63d92e24045ceff04aa1076c (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-27T13:01:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoPerfilPacientes.pdf: 1617181 bytes, checksum: 969ee7ea63d92e24045ceff04aa1076c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T13:01:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoPerfilPacientes.pdf: 1617181 bytes, checksum: 969ee7ea63d92e24045ceff04aa1076c (MD5) Previous issue date: 2015 / INTRODUÇÃO: O Helicobacter pylori é conhecido pela sua capacidade de adaptação ao hospedeiro podendo evoluir para infecção crônica usando mecanismos diversos e eficazes de patogenicidade. Apresenta elevada incidência mundial e sua relação direta com úlcera péptica, gastrite, carcinoma e linfoma gástrico ocorre em uma minoria de indivíduos infectados. O melhor entendimento da regulação gênica da resposta imunológica gástrica, motivou essa pesquisa. OBJETIVOS: Descrever os fatores de transcrição dos Linfócitos T positivos para ROR-γ, FOXP3 e GATA3, correlacionando-os com a intensidade, tipo e grau de atividade das gastrites, causadas pela infecção do H. pylori. METODOLOGIA: Participaram do estudo 50 pacientes de ambos os sexos, submetidos à endoscopia digestiva alta com biópsia. Teste da urease e estudo histológico foram feitos para identificação e confirmação da infecção pela bactéria. Trinta e cinco amostras foram encaminhadas para o laboratório de Imunopatologia do NMT-UFPA para estudo de expressão gênica dos fatores de transcrição dos linfócitos T (ROR- γ, FOXP3 e GATA3) pelo método RT-PCR. RESULTADOS: Obtivemos 48,5% de pacientes H. pylori positivos no teste da urease e 25,7% de H. pylori positivos no estudo histológico. A concordância de positividade para o H. pylori realizada pelos dois testes ocorreu em 11,7%. Relato de infecção prévia pelo Helicobacter pylori foi feito por 22% dos indivíduos da amostra. A idade e gênero dos indivíduos da amostra não influenciaram na expressão gênica dos fatores estudados. Houve maior expressão do gene GATA3 nos indivíduos H. pylori positivos, com relato de infecção prévia e que apresentaram gastrite leve erosiva de corpo classificada pelo Sistema Sydney via endoscopia digestiva alta. O gene ROR- γ apresentou-se com expressão aumentada somente ao compararmos amostras com ou sem positividade pelo H. pylori (estudo histológico), com a topografia do processo inflamatório evidenciado pela endoscopia. As expressões dos fatores em estudo apresentaram-se com maior significância, quando foi usado o gene constitutivo β-actina como padrão quando comparado com o gene GAPDH. CONCLUSÕES: 1- A faixa etária adulta analisada em nossa amostra, não influenciou na expressão gênica dos fatores de transcrição estudados. 2- Não houve diferenças encontradas nas expressões dos genes em estudo com relação ao gênero dos indivíduos participantes da amostra. 3- Houve expressão gênica significante tanto nos pacientes H. pylori positivos (análise histológica), como nos pacientes que relataram infecção prévia em nosso estudo. 4- Ao compararmos os achados endoscópicos da amostra, utilizando o Sistema Sydney, com a expressão gênica dos fatores de transcrição em estudo, obtivemos maior concordância somente em relação ao grau de atividade das gastrites. 5- O fator de transcrição GATA3 (perfil de resposta TH2) foi o gene de maior expressão nas amostras com gastrites endoscópicas e com positividade para o H. pylori. 6- O fator de transcrição ROR-γ (perfil de resposta TH17) apresentou-se com expressão aumentada ao compararmos as amostras com a topografia do processo inflamatório evidenciado pela endoscopia, independente da positividade pelo H. pylori (estudo histológico). 7- O gene da β-actina como gene-padrão constitutivo utilizado em nosso estudo foi o que mais apresentou resultados significativos nas expressões quantificadas, quando comparado com o gene GAPDH. / INTRODUCTION: Helicobacter pylori is known for its adaptability to the host may progress to chronic infection using diverse and effective mechanisms of pathogenicity. It has high worldwide incidence and its direct relationship with peptic ulcer, gastritis, gastric carcinoma and lymphoma occurs in a minority of infected individuals. A better understanding of the genetic regulation of gastric immune response, motivated this investigation. OBJECTIVES: Describe the transcription factors of T lymphocytes positive for ROR-γ, FOXP3 and GATA3, correlating them with the intensity, type and degree of activity of gastritis, caused by H. pylori infection METHODS: The study included 50 patients of both sexes who underwent upper gastrointestinal endoscopy with biopsy. Urease test and histology were made for identification and confirmation of infection by the bacteria. Thirty-five samples were sent to the immunopathology laboratory NMT-UFPA to study gene expression of transcription factors of T lymphocytes (ROR- γ, FOXP3 and GATA3) by RT-PCR method. RESULTS: We obtained 48.5% positive H. pylori urease test in patients and 25.7% positive of H. pylori in the histological study. The confirmation of H. pylori held by these two exams was 11.7%. In this sample, 22% of individuals reported having a previous Helicobacter pylori infection. The age and gender of the individuals did not influence the gene expression of the studied factors. The H. pylori positive individuals showed a higher expression of the GATA3 gene with prior infection report, and mild erosive gastritis body classified by the Sydney system via endoscopy. The ROR-γ gene presented with increased expression only when comparing samples with or without positive for H. pylori (histology), by the topography of the inflammatory process evidenced by endoscopy. The terms of the factors in the study were more significant when we used the β-actin gene as standard when compared to the GAPDH gene. CONCLUSIONS: The adult age group analyzed in our sample did not influence the gene expression of the studied transcription factors. 2- There were not found differences in the genes expressions that were studied, related to gender of the sample. 3- There was a significant gene expression not only in the patients that were H. pylori positive (histology), but also in the ones who reported previous infection in our study. 4-To compare the endoscopic findings of the sample using the Sydney system with the gene expression of transcription factors under study, we obtained better agreement only in the degree of activity of gastritis. 5- The transcription factor GATA3 (TH2 response profile) was the highest gene expression in samples with endoscopic gastritis and tested positive for H. pylori. 6- The transcription factor ROR-γ (TH17 response profile) presented with increased expression when comparing samples with the topography of the inflammatory process evidenced by endoscopy, regardless of positive H. pylori (histology). 7- The gene β-actin gene as a constituent standard used in our study was that showed significant results in quantified terms, when compared to the GAPDH gene.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T12:43:53Z No. of bitstreams: 1 Josenaldo Silva Macedo.pdf: 689898 bytes, checksum: 3215e2e1e0646d554d6f16686dd6361d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T12:43:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Josenaldo Silva Macedo.pdf: 689898 bytes, checksum: 3215e2e1e0646d554d6f16686dd6361d (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / The present work was designed to investigate the incidence of the bacterium Helicobacter spp. In cats from the Recife city, Pernambuco State. The stomach samples were collected from 119 cats, without distinction between race or age, being 56 males and 63 females originated from the Environmental Survey Center (CVA), captured in the city of Recife.. The urease quick test and the histopathological examination using both the Hematoxilin-Eosin (HE) and Giemsa stains were performed. The urease quick test showed that 83,92% of the male (47/56) and 80,95% of the female (51/63) samples were positive for Helicobacter, with a total of 82,35% (98/119) of the population being positive. The Giemsa analysis demonstrated that in 73,21% of the males (41/56) and 74,60% of the females (47/63) samples the Helicobacter spp. Bacteria was found, and the total positive sample in the tested population was 73,94% (88/119). During the analysis performed using the HE stain, was observed that 59,66% (71/119) of the samples showed histopathological alterations, such as: lymphoplasmocitic infiltration with a lymphoid foliculum, microabscess, necrosis, hypotrophy, and in 40,34% of the samples(48/119) no alterations were observed. Since the Helicobacter spp. Microorganisms are able to cause gastric inflammation in cats, having showed , the research studies concerning the clinical importance and elucidate the gastric neoplasic genesis in these animals. It coud conclude that cats originated from Recife city, Pernambuco state, shows high incidence of helicobacteriosis. / O presente trabalho foi delineado para investigar a incidência da bactéria Helicobacter spp. em gatos oriundos da cidade do Recife do estado de Pernambuco. As amostras de estômagos analisadas, foram coletados de 119 gatos sem raça definida e idade, sendo 56 machos e 63 fêmeas provenientes do Centro de Vigilância Ambiental (CVA), capturados na cidade do Recife. Foram realizados para pesquisa de Helicobacter spp., os métodos de teste rápido da urease, o exame histopatológico corado pela técnica hematoxilina-eosina (HE) e pelo método de coloração Giemsa. As análises pelo teste rápido da urease mostraram que em 83,92% das amostras dos machos (47/56) e em 80,95% das amostras das fêmeas (51/63), foi detectada reação positiva para Helicobacter, sendo 82,35% (98/119) na totalidade das amostras. As análises pelo método de coloração pelo Giemsa mostraram que em 73,21% das amostras dos machos (41/56) e em 74,60% das amostras das fêmeas (47/63), foi encontrada a bactéria Helicobacter spp. , sendo 73,94% (88/119) na totalidade das amostras. Na análise das amostras coradas pela técnica de coloração hematoxilia-eosina (HE), verificou-se que em 59,66% das amostras (71/119) apresentaram alterações histopatológicas como: infiltrado linfoplasmocitário com folículo linfóide, microabcesso, necrose, hipotrofia; e em 40,34% das amostras (48/119) não apresentaram alterações histológicas. Dessa forma, os microorganismos do gênero Helicobacter spp. são capazes de gerar inflamação gástrica no gato, sendo necessário cada vez mais aprofundar as pesquisas a respeito da importância clínica e da gênese de neoplasias gástricas nesses animais. Concluiu-se neste trabalho que gatos oriundos da cidade do Recife, estado de Pernambuco apresentam alta incidência de helicobacteriose.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1982_1.pdf: 1649003 bytes, checksum: 1e1923dd1de26cd14dac820fd44e2ae8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Com os objetivos de estabelecer a ocorrência e os tipos de lesões gástricas na forma hepatoesplênica da esquistossomose mansônica (EMHE), e de verificar a existência de associação da gastropatia congestiva portal (GCP) com a intensidade da fibrose periportal (FPP) e com os sinais endoscópicos e ultra-sonográficos da hipertensão porta (HP), foram estudados prospectivamente 71 pacientes, selecionados no ambulatório de esquistossomose do HC, UFPE. Foram excluídos pacientes com antecedentes de tratamento cirúrgico para HP, escleroterapia ou ligadura elástica das varizes do esôfago, de alcoolismo, hepatites B e/ou C e pacientes em uso de beta-bloqueador. Todos os pacientes realizaram endoscopia digestiva alta (EDA), seguindo um protocolo para caracterização das varizes do esôfago, da gastrite e da GCP, realizando biópsia no corpo e antro gástricos; ultra-sonografia (USG) do abdome superior, seguindo protocolo do Cairo e Niamey para caracterização do grau e padrão da FPP e dos diâmetros das veias porta, esplênica e também do diâmetro longitudinal do baço. Foram calculados médias, valores máximos, mínimos e desvios padrão das variáveis contínuas, apresentados distribuição de freqüência e percentuais, e utilizados os testes de Qui-quadrado e Exato de Fisher para verificar as associações entre a GCP e a intensidade da HP e grau da FPP. Em todos os testes foram aplicados níveis de confiabilidade com valores de 95% (p<0,05). A freqüência de GCP pela EDA foi de 54,9% (39 casos), sendo 33 (46,5%) leve e 06 (8,5%) intensa. A de gastrite foi de 83% (59 casos), sendo 32 (45,1%) enantematosa e 27 (38%) erosiva. A análise histopatológica revelou 20 casos (28,2%) de GCP, 39 casos (54,9%) de gastrite, 07 casos (9,9%) de lesões associadas (GCP e gastrite) e 05 casos (7,0%) com mucosa normal. Não houve associação entre o diagnóstico endoscópico e o histopatológico da GCP. A elevada incidência de Helicobacter pylori possivelmente mascara o diagnóstico da GCP pela histopatologia. Igualmente, não houve associação da GCP com o calibre e sinais vermelhos das varizes do esôfago, assim como da GCP com o grau da FPP, nem com diâmetros das veias porta, esplênica e diâmetro longitudinal do baço. O grande número de circulação colateral observado em 33 pacientes (43,5%) foi possivelmente o motivo pelo qual não se obteve associação da GCP com a FPP, nem com os sinais preditivos de HP avaliados pela USG do abdome. Devido ao pequeno número de casos de GCP intensa (06 - 8,5%), conclui-se que, na EMHE sem antecedentes prévios de tratamento para HP, a GCP é uma condição benigna, com baixo risco de HDA

Orientador: Marcelo Lima Ribeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T02:53:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alvarez_MarisaClaudia_D.pdf: 3342763 bytes, checksum: ef7082f8bb653fcdcf965415a79b4d30 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A infecção por Helicobacter pylori e usualmente adquirida durante a infância e persiste durante toda a vida caso não seja tratada. A bactéria induz uma resposta inflamatória crônica, que esta associada com alterações hipergenéticas em oncogenes, genes supressores tumorais, e genes de reparo ao DNA. O Objetivo deste estudo foi avaliar a influencia da infecção por H. pylori no padrão de metilação de genes envolvidos na carcinogenese gástrica. O perfil de metilação de 106 genes foi caracterizado em biopsias provenientes de 5 pacientes adultos (1 Helicobacter pylori negativo, 3 com gastrite crônica infectados com linhagens de diferentes toxicidades e 1 com câncer gástrico) e em DNA proveniente de células epiteliais gástricas infectadas por H. pylori. Para estas analises foram utilizados o Promoter methylation array system, e o Gastric Cancer Methyl--Profiler DNA PCR Array. Os resultados destas análises mostraram que 20 % dos genes se encontravam metilados na amostra de câncer gástrico e 16 % dos genes na amostra de gastrite crônica, entretanto a analise comparativa entre estas amostras mostrou que compartilhavam 8,5 % dos genes metilados. A analise de metilação apos cocultura mostrou 12% dos genes metilados. Entre estes genes foram selecionados os seguintes: THBS1, HIC1, GATA--4, GATA--5 e MLH1 e MGMT, os quais foram avaliados em 239 amostras de biopsias gástricas, provenientes de 50 crianças e 97 adultos infetados ou não pela bactéria e de 92 adultos com câncer gástrico. O padrão de metilação foi avaliado por metilação PCR especifica (MSP--PCR). Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que não houve metilação da região promotora de MLH1, MGMT e HIC1, nas amostras provenientes de crianças, independente do estado de infecção. Os maiores níveis de metilação entre as amostras oriundas de adultos com gastrite crônica infectados foram observados em GATA--4 e THBS1 (p<0.05), MGMT e GATA--5 (p<0.001). Nos pacientes com câncer gástrico os maiores níveis de metilação foram observados em MGMT e GATA--5 (p<0.05, p<0.001, respectivamente). Foi verificado um aumento da instabilidade microssatelites nas amostras de câncer gástrico (p<0.03) e o mesmo foi associado com um aumento nos níveis de metilação de MLH1 e sua consequente diminuição de RNAm. Foi realizado in vitro a analise de expressão de GATA--5 e TFF1 apos cocultura de diferentes linhagens de H. pylori e células AGS, que revelou um aumento nos níveis de RNAm de GATA--5 as 6, 24 e 48h apos infecção, e aumento de TFF1 apos 48h. Estes aumentos foram independentes da presença de cag PAI. O aumento na expressão de GATA--5 foi observado em camundongos C57BL/6 apos 6 meses de infecção. Foi observado in vivo que nas amostras metiladas em GATA--5 apresentavam níveis diminuídos de TFF1. Estes resultados nos permitem sugerir que a metilação acontece precocemente na mucosa gástrica dos pacientes pediátricos e esta associada com a infecção por H. pylori. Entretanto alguns loci como MGMT e MLH1 a metilação parece ser dependente do tempo de infecção. Foi observado que os níveis de metilação aumentaram conforme a idade dos pacientes sugerindo que o maior tempo de exposição induz maiores níveis de metilação / Abstract: Helicobacter pylori infection is usually acquired in childhood and persists into adulthood if untreated. It is known that the bacterium induces a chronic inflammatory response, which is associated with epigenetic alterations in oncogenes, tumor suppressor genes and DNA repair genes. The aim of this study was to evaluate the influence of Helicobacter pylori infection on the methylation pattern of genes related to gastric carcinogenesis. The methylation pattern of 106 genes was characterized in gastric biopsies samples from 5 adult patients (1 H. pylori negative, 3 chronic gastritis infected with strains of different toxicities, and 1 gastric cancer) and DNA extracted from co--cultured cells infected with H. pylori. These analyses were performed with Promoter methylation array system, and Gastric Cancer Methyl--Profiler DNA PCR Array. The results showed that 20 % of genes were methylated in gastric cancer mucosa and 16% were hyper methylated in the mucosa of the chronic gastritis patients. The comparative analysis showed that 8,5 % of genes were methylated in both samples. The results from the co culture showed that 12% of genes were methylated. Among them the following genes were selected: THBS1, HIC1, GATA--4, GATA--5 e MLH1 e MGMT and evaluated in 239 gastric biopsies samples from 50 children and 97 adults infected or uninfected by H. pylori, and 92 adults with gastric cancer. The methylation pattern was analyzed by methylation specific PCR (MSP--PCR). The results from pediatric samples showed no methylation for MLH1, MGMT and HIC1 genes, independent of the infection status. Among the infected adults samples the higher levels of methylation were observed for GATA--4 e THBS1 (p<0.05), MGMT e GATA--5 (p<0.001). Higher levels of methylation were observed for MGMT e GATA--5 (p<0.05, p<0.001, respectively) in gastric cancer samples. It was observed an increase in microsatellite instability among gastric cancer samples, related to hyper methylation of MLH1. The expression levels of GATA--5 and TFF1 was analyzed in vitro. The results from infected cells showed an up regulation at 6, 24, and 48 for GATA-5 and at 48 h for TFF1. This increase was independent of cagPAI status. In an animal model an up regulation of GATA--5 was observed after six months of infection. A decrease in TFF1 mRNA levels was observed in infected children and adults samples methylated in GATA--5 promoter region. These data suggest that promoter hyper methylation occurs in gastric mucosa of children in association with H. pylori infection, however for some loci as MGMT and MLH1 this event seems to be dependent on the time of exposure. Furthermore it was observed an increase in methylation frequencies in adults samples compared to pediatric samples suggesting that the duration of the infection is related to methylation levels / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutora em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T12:19:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roesler_BrunaMaria_M.pdf: 3428404 bytes, checksum: ee37171bd6740210c88477c4839317fb (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O Helicobacter pylori é uma bactéria gram-negativa que está estritamente relacionada com o desenvolvimento de doenças gástricas, inclusive malignas, sendo classificada como carcinógeno do grupo I pela Agência Internacional para Pesquisa do Câncer. Apesar de grande parte da população mundial estar contaminada pela bactéria, a maioria dos indivíduos permanece assintomática. Muitas abordagens são sugeridas para diferenciar os isolados de H. pylori e diversas técnicas de biologia molecular têm sido aplicadas para caracterizar as amostras clínicas de diferentes pacientes. A análise de restrição (RFLP) usada em conjunto com a PCR tem sido amplamente utilizada para a tipagem de isolados clínicos, utilizando vários genes do genoma do H. pylori como alvos para esse método. Padrões de eletroforese da nested PCR e da PCR para as regiões dos genes urease C e urease B do H. pylori foram obtidos com enzimas de restrição e comparados entre pacientes com úlcera péptica e gastrite crônica. Os produtos da nested PCR para urease C foram digeridos com a enzima Mbo I e os produtos da PCR para urease B com a enzima Hae III, sendo os fragmentos obtidos analisados por eletroforese em gel de agarose. Foram encontrados 7 padrões de genotipagem para urease B e 17 padrões para urease C. O grupo prevalente para gastrite crônica obtido com essa última genotipagem foi o denominado grupo ureC MboI G, com fragmentos de 110, 120, 250 e 310 pares de bases, ocorrendo em 13 pacientes (15,7% dos casos). Em relação aos casos de úlcera péptica, o grupo de genotipagem mais prevalente foi o denominado ureC MboI E, com 110, 180 e 500 pares de bases, ocorrendo em 11 pacientes (24,4% do total de casos). O grupo prevalente obtido com a genotipagem para urease B foi o denominado ureB I, com um fragmento único de 750 pares de bases. Esse grupo foi o prevalente tanto para os casos de úlcera péptica (27), com 60,0%, quanto para os de gastrite crônica (53), com 63,9%. Não foram observadas diferenças significativas entre os padrões encontrados para ambas as doenças. A nested PCR para detecção prévia do DNA do H. pylori também foi realizada, obtendo-se 100% de concordância. Os métodos de tipagem dos produtos obtidos por nested PCR e PCR proporcionam um esquema funcional e de grande reprodutibilidade para estudos epidemiológicos e de caracterização de cepas / Abstract: Helicobacter pylori is a gram-negative bacterium that has been implicated as a major human gastric pathogen responsible for gastritis and peptic ulcer disease. It has been classified as a group I carcinogen by the International Agency for Research on Cancer and is regarded as a primary factor for gastric cancer. A significant proportion of the world population is infected with H. pylori, even though most infections are asymptomatic. To isolate H. pylori, many approaches have been presented and several molecular techniques have been applied to separate clinical isolates from different patients. PCR-RFLP analysis has been widely developed for the typing of clinical isolates, with several genes within H. pylori having been targeted by this method. Eletroforesis patterns of nested PCR and PCR to urease C and urease B gene regions of H. pylori were obtained by restriction fragment length polymorphism and compared among patients with peptic ulcer and chronic gastritis. Nested PCR products for urease C were digested with MboI enzyme and PCR products for urease B with Hae III enzyme, and the obtained fragments were analyzed by eletroforesis in agarosis gel. We have encountered 7 genotyping patterns for urease B and 17 patterns for urease C. The prevalent group for chronic gastritis which was obtained with this last genotyping was named ureC MboI G group, with fragments of 110, 120, 250 and 310 base pairs, occurring in 13 patients (15,7% of the cases). Regarding the peptic ulcer cases, the most prevalent genotyping group was named ureC MboI E group, with 110, 180 and 500 base pairs, occurring in 11 patients (24,4% of the cases). The prevalent group obtained with the genotyping for urease B was named ureB I, with only one fragment of 750 base pairs. This group was the prevalent one both in peptic ulcer cases (27) with 60,0%, and in chronic gastritis case (53), with 63,9%. We haven¿t found meaningful differences among the encountered patterns for both diseases. Nested PCR for previous detection of H. pylori DNA has also been performed, and we have obtained 100% of concordance. The typing methods of the products obtained by nested PCR and PCR show a functional scheme and of great reproduction for epidemiologic studies and of H. pylori strains characterization / Mestrado / Mestre em Farmacologia

INTRODUÇÃO: A prevalência da úlcera péptica e outras afecções esofagogastroduodenais associadas à infecção pelo H. pylori foram alteradas em decorrência da erradicação desta infecção e uso de inibidores de secreção gástrica ácida. OBJETIVO: Determinar a prevalência da infecção pelo Helicobacter pylori associada às afecções diagnosticadas pela endoscopia digestiva alta e analisar fatores de risco. MÉTODOS: Foram analisados dados de 1478 pacientes, e as informações dos achados endoscópicos foram correlacionadas com resultado de teste de urease, faixa etária e gênero. Os pacientes com exame endoscópico normal foram considerados como grupo controle para análise estatística dos fatores de risco, perfazendo um total de 272 indivíduos. RESULTADOS: A prevalência da infecção por H. pylori foi de 53% (n=786), e maior na faixa etária entre 31 e 40 anos. Os achados endoscópicos mais frequentes foram gastrites (n=810; 54,8%), úlceras pépticas duodenais e gástricas (n=494; 33,4%), duodenites (n=287; 19,4%) e esofagites (n=217; 14,7%). Apenas a gastrite nodular e úlcera péptica foram associadas com infecção por H. pylori (p<0,05). Gastrite erosiva no antro (n=644, 78,5%) predominou em relação à pangastrite (n=166; 20,2%) e aquelas no corpo (n=19; 2,3%). Entre os casos de úlcera péptica, 103 (7%) foram gástricas, 343 (23,2%) foram duodenais e 48 (3,2%) foram gástrica e duodenal. A esofagite geralmente foi leve (grau A; 63,1%), 23,5% foram moderada (grau B) e 13,3% foram intensa (graus C e D). Infecção por H. pylori aumentou o risco de úlceras gástrica e duodenal em 1,9 e 1,6 vezes, respectivamente. Gênero masculino e maior idade foram riscos de todas as outras afecções. CONCLUSÃO: Infecção pelo H. pylori associada com maior idade e gênero masculino foram determinantes importantes para evolução de afecções gastrintestinais / Introduction: Peptic ulcer prevalence and other esophageal and gastroduodenal disorders associated with H. pylori infection changed as a consequence of its eradication and the use of gastric acid secretor inhibitors. Purpose: To establish H. pylori infection prevalence associated with clinical disorders diagnosed by upper gastrointestinal endoscopy, and determine the risk factors. Methods: Data from 1478 patients were analyzed, and the endoscopic findings were correlated with the urease test results, age and gender. Patients with normal endoscopy were considered control group for statistical analysis of the risk factors, comprising a total of 272 individuals. Results: The overall prevalence of H. pylori infection was 53% (n=786), being higher between 31 and 40 years old. The most frequent endoscopic findings were gastritis (n=810, 54.8%), peptic ulcer (n=494, 33.4%), duodenitis (n=287, 19.4%) and esophagitis (n=217, 14.7%). Only nodular gastritis and peptic ulcer were associated with H. pylori infection (p<0.05). Erosive gastritis (70%) in the antrum (n=644; 78.5%) predominated in relation to pangastritis (n=166, 20.2%) and the ones in the corpus (n=19, 2.3%). Among peptic ulcer cases, 103 (7%) were gastric, 343 (23.2%) were duodenal and 48 (3.2%) were gastric and duodenal. Esophagitis usually was mild (grade A in 63.1%), 23.5% were moderate (grade B) and 13.3% were intense (grades C and D). H. pylori infection increased the risk of gastric and duodenal ulcers by 1.9 and 1.6-fold, respectively. Male gender and being older were risks of all the other conditions. Conclusion: H. pylori infection associated with older age and male gender were important determinants to gastrointestinal diseases outcome

INTRODUÇÃO: A prevalência da úlcera péptica e outras afecções esofagogastroduodenais associadas à infecção pelo H. pylori foram alteradas em decorrência da erradicação desta infecção e uso de inibidores de secreção gástrica ácida. OBJETIVO: Determinar a prevalência da infecção pelo Helicobacter pylori associada às afecções diagnosticadas pela endoscopia digestiva alta e analisar fatores de risco. MÉTODOS: Foram analisados dados de 1478 pacientes, e as informações dos achados endoscópicos foram correlacionadas com resultado de teste de urease, faixa etária e gênero. Os pacientes com exame endoscópico normal foram considerados como grupo controle para análise estatística dos fatores de risco, perfazendo um total de 272 indivíduos. RESULTADOS: A prevalência da infecção por H. pylori foi de 53% (n=786), e maior na faixa etária entre 31 e 40 anos. Os achados endoscópicos mais frequentes foram gastrites (n=810; 54,8%), úlceras pépticas duodenais e gástricas (n=494; 33,4%), duodenites (n=287; 19,4%) e esofagites (n=217; 14,7%). Apenas a gastrite nodular e úlcera péptica foram associadas com infecção por H. pylori (p<0,05). Gastrite erosiva no antro (n=644, 78,5%) predominou em relação à pangastrite (n=166; 20,2%) e aquelas no corpo (n=19; 2,3%). Entre os casos de úlcera péptica, 103 (7%) foram gástricas, 343 (23,2%) foram duodenais e 48 (3,2%) foram gástrica e duodenal. A esofagite geralmente foi leve (grau A; 63,1%), 23,5% foram moderada (grau B) e 13,3% foram intensa (graus C e D). Infecção por H. pylori aumentou o risco de úlceras gástrica e duodenal em 1,9 e 1,6 vezes, respectivamente. Gênero masculino e maior idade foram riscos de todas as outras afecções. CONCLUSÃO: Infecção pelo H. pylori associada com maior idade e gênero masculino foram determinantes importantes para evolução de afecções gastrintestinais / Introduction: Peptic ulcer prevalence and other esophageal and gastroduodenal disorders associated with H. pylori infection changed as a consequence of its eradication and the use of gastric acid secretor inhibitors. Purpose: To establish H. pylori infection prevalence associated with clinical disorders diagnosed by upper gastrointestinal endoscopy, and determine the risk factors. Methods: Data from 1478 patients were analyzed, and the endoscopic findings were correlated with the urease test results, age and gender. Patients with normal endoscopy were considered control group for statistical analysis of the risk factors, comprising a total of 272 individuals. Results: The overall prevalence of H. pylori infection was 53% (n=786), being higher between 31 and 40 years old. The most frequent endoscopic findings were gastritis (n=810, 54.8%), peptic ulcer (n=494, 33.4%), duodenitis (n=287, 19.4%) and esophagitis (n=217, 14.7%). Only nodular gastritis and peptic ulcer were associated with H. pylori infection (p<0.05). Erosive gastritis (70%) in the antrum (n=644; 78.5%) predominated in relation to pangastritis (n=166, 20.2%) and the ones in the corpus (n=19, 2.3%). Among peptic ulcer cases, 103 (7%) were gastric, 343 (23.2%) were duodenal and 48 (3.2%) were gastric and duodenal. Esophagitis usually was mild (grade A in 63.1%), 23.5% were moderate (grade B) and 13.3% were intense (grades C and D). H. pylori infection increased the risk of gastric and duodenal ulcers by 1.9 and 1.6-fold, respectively. Male gender and being older were risks of all the other conditions. Conclusion: H. pylori infection associated with older age and male gender were important determinants to gastrointestinal diseases outcome

Introdução: O envolvimento gastroduodenal pode ocorrer na doença de Crohn (DC). Seu diagnóstico histológico definitivo é habitualmente realizado através da demonstração do granuloma não caseoso. O achado de gastrite focal H. pylori negativa em biopsias gástricas de pacientes com DC ileal e/ou colônica, apesar de não ser específico, também sugere o envolvimento da doença neste segmento. Objetivos: avaliar a frequência da gastrite focal em pacientes com DC comparada à de pacientes com retocolite ulcerativa (RCU) e controles, assim como as frequências da infecção pelo H. pylori nessas populações e correlacioná-las com a presença de gastrite focal; avaliar a capacidade da imunohistoquímica em diferenciar a gastrite focal nos três grupos; avaliar as associações entre dados demográficos, aspectos clínicos, laboratoriais, uso de medicamentos, presença de sintomas do trato gastrintestinal (TGI) superior e achados endoscópicos com presença de gastrite focal em pacientes com doença inflamatória intestinal (DII); e avaliar a associação entre uso de medicamentos nesses pacientes e infecção pelo H. pylori. Métodos: Foram estudados 62 pacientes com DC, 35 pacientes com RCU e 40 pacientes controles. Todos foram submetidos à endoscopia digestiva alta (EDA) com biopsias para o teste da urease, exame histológico e imunohistoquímico. Resultados: Dos 137 pacientes estudados foram excluídos dois pacientes com DC e um com RCU. Não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos com relação à idade (p=0,921) e sexo (p=0,192). A maioria dos pacientes com DC estava em remissão clínica (75%). Cerca de 80% dos pacientes com DC faziam uso de azatioprina. H. pylori foi positivo em 18/60 (30%) pacientes com DC, 12/34 (35%) na RCU e 20/40 (50%) no grupo controle sem diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,131). Não foram observadas associações estatisticamente significantes entre uso de medicamentos e infecção pelo H. pylori nos pacientes com DII. A gastrite focal H. pylori negativa foi diagnosticada em 7/42 (16,7%) na DC, 3/22 (13,6%) na RCU e 2/20 (10%) no grupo controle, sem diferença estatisticamente significante entre eles (p=0,919). A gastrite focal H. pylori positiva foi diagnosticada em 2/18 (11%) na DC, 3/12 (25%) na RCU e 7/20 (35%) no grupo controle, sem diferença estatisticamente significante (p=0,213). Não foram observadas associações estatisticamente significantes entre características clínicas, laboratoriais, uso de medicamentos, sintomas do TGI superior, achados endoscópicos e gastrite focal. No entanto, foi observado que o uso de azatioprina nos pacientes com DC H. pylori negativos apresentou uma tendência a reduzir a gastrite focal. A imunohistoquímica da gastrite focal dos pacientes com DC e RCU H. pylori negativos foi semelhante e diferiu do grupo controle por este apresentar um maior acúmulo de linfócitos B (CD20). Já a imunohistoquímica da gastrite focal dos pacientes com DC, RCU e controles H. pylori positivos foi indistinguível. Conclusões: Pacientes com DII tendem a ser menos infectados pela bactéria H. pylori. A frequência de gastrite focal H. pylori negativa diagnosticada em nosso estudo foi menor do que a descrita na literatura. O uso de imunossupressor (azatioprina) pode estar relacionado com tal achado / Introduction: Gastroduodenal involvement may occur in Crohns disease (CD). Definitive histological diagnosis of CD in the upper gastrointestinal (GI) tract normally relies on the demonstration of epitheloid granuloma which is considered the histological hallmark of gastric CD. If granulomas are absent, the description of focally enhanced gastritis (FEG) or focal active gastritis in gastric biopsies of patients with known ileal and/or colonic CD, although not exclusive to CD, suggests the involvement of the disease at this site. Objectives: To access the prevalence of FEG in CD patients compared with a group of ulcerative colitis (UC) and CD/UC-free controls, as well as the frequencies of H. pylori infection in those population and correlate them to the presence of FEG; evaluate the capacity of immunohistochemistry in differentiating FEG in the three groups; evaluate the correlation with demographic and clinical characteristics, laboratory findings, current medical therapy as well as the presence of forgut symptoms and mucosal lesions at endoscopy with the presence or absence of FEG in patients with inflammatory bowel disease (IBD) and evaluate the association between medical therapy and H. pylori infection in IBD patients. Methods: We studied 62 patients with CD, 35 patients with UC and 40 patients from control group. All underwent upper GI endoscopy. Biopsy specimens taken from angulus, antrum and gastric body were evaluated by urease test, histology and immunohistochemistry. Results: Of the 137 patients studied we excluded 2 patients with CD and 1 with UC. There was no statistically significant difference among the groups in terms of age (p=0.921) and gender (p=0.192). The majority of CD patients were in clinical remission (75%). Around 80% of CD patients were taking azathioprine. H. pylori was positive in 18/60 (30%) CD patients, in 12/34 (35%) UC and in 20/40 (50%) controls with no statistically significance difference among the groups (p=0.131). No association was found between use of medications and H. pylori infection in IBD patients. In H. pylori negative patients, FEG was diagnosed in 16.7% cases (7/42) of CD, compared with 13.6% (3/22) of UC patients and 10% (2/20) of controls, with no statistically significance difference among them (p=0.919). In H.pylori positive patients, FEG was diagnosed in 11% cases (2/18) of DC, 25% (3/12) in UC and 35% (7/20) of controls with no significant difference among them (p=0.213). There was no statistical interrelationship between FEG and demographic and clinical characteristics, laboratory findings, use of medications, upper GI symptoms and endoscopic findings. However, it was observed that use of azathioprine in H. pylori negative CD patients presented a tendency to reduce FEG. In H. pylori negative patients, immunohistochemistry of FEG of CD and UC was similar and differed from controls as it presented a higher accumulation of B lymphocytes (CD20). On the other hand in H. pylori positive IBD patients, immunohistochemistry of FEG was indistinguishable from controls. Conclusions: IBD patients tend to be less infected by H. pylori. The frequency of H. pylori negative FEG diagnosed in our study was lower than described in literature. The use of immunossupressants (azathioprine) may be related to such findings