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Propagação e conservação in vitro de acessos de jenipapeiroAlmeida, Camila Santos 05 February 2013 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The jenipapeiro (Genipa americana L.) has great economic importance both for its forest essence, as the production of food. Obtaining protocols is important for conservation of genetic resources conservation. The objectives of this study was to establish protocols for in vitro conservation jenipapeiro, and studies of the effect of different culture media on in vitro germination of seeds of this species and the effects of different culture media on the induction of somatic embryogenesis from explants of this culture. The experiments were conducted in the laboratory of Plant Tissue Culture Embrapa Coastal Tablelands, SE. To study the in vitro conservation of plant seeds were used arrays jenipapeiro from Cruz das Almas, Bahia; access Oiteiros, Sergipe and access Siriri, Sergipe. In the experiment of conservation tested different concentrations of mannitol - Test 1; ABA- Test 2, and variations of the MS and sucrose- test 3. After 150 days, the seedlings from the means of conservation, targeted and were inoculated on regeneration medium (MS gelled supplemented with 30 g L-1 sucrose, BAP (0 and 1 mg L-1) and 4,5 g L-1 Phytagel ®). For the germination experiment tested distilled water and different variations of MS salts and sucrose. For the experiment of somatic embryogenesis, seedling 90 days in vitro culture were segmented and transferred to a new MS medium supplemented with 30 g L-1 sucrose and different concentrations of 2,4 - 2,4-D-Dichlorofenoxyacetic (0 , 4 and 8 mg L-1) combined with concentrations of four-benzylaminopurine (BAP 0, 1, 2 and 3 mg L-1). In the stage of conservation, mannitol concentrations studied did not promote growth slowdown seedlings jenipapeiro, while, abscisic acid caused a reduction in the number of leaves. The means MS and ½ MS salt concentration in the presence of 30 g L-1 sucrose promoted slowing the growth of seedlings jenipapeiro can be recommended protocols for conservation by slow growth. The explants from the storage medium containing mannitol and maintained abscisic acid in the presence of 1,0 mg L-1 BAP phase of resumption showed higher morphogenetic response. Explants kept in storage phase in the presence of MS medium + 30 g L-1 sucrose and ½ MS 15 or 30 g L-1 sucrose, had lower morphogenetic response in the absence of BAP compared with the other treatments. In the stage of germination in vitro, it was observed that in the absence of salts and sucrose was highest percentage of normal seedlings and lowest shoot length. In the stage of somatic embryogenesis, the presence of 2,4-D, promoted greater percentage of explants with morphogenetic response. The shoot segments promoted greater response than the foliar concentration in the absence and 4 mg L-1 2,4-D. Furthermore, the presence of BAP induced reduced response to this variable stem explants and greater response to foliar explants. / O jenipapeiro tem grande importância econômica tanto pela sua essência florestal, quanto pela produção de alimentos. A obtenção de protocolos de conservação é importante para a preservação de recursos genéticos. O presente trabalho teve como objetivo estabelecer protocolos de conservação in vitro de jenipapeiro, além de estudos do efeito de diferentes meios de cultura na germinação in vitro de sementes dessa espécie e do efeito de diferentes meios de cultura na indução da embriogênese somática. Os experimentos foram conduzidos no laboratório de Cultura de Tecidos de Plantas da Embrapa Tabuleiros Costeiros, SE e foram utilizadas sementes de plantas matrizes de jenipapeiro provenientes de Cruz das Almas- BA; Povoado Oiteiros- SE e Povoado Siriri- SE. No experimento de conservação foram testadas diferentes concentrações de manitol- ensaio 1; de ABA- ensaio 2; e variações do meio MS e sacarose- ensaio 3. Após 150 dias, as plântulas provenientes do meio de conservação, foram segmentadas e inoculados em meio de regeneração (MS gelificado suplementado com 30 g L-1 de sacarose, BAP (0 e 1 mg L-1) e 4,5 g L-1 de Phytagel®). Para o experimento de germinação foram testadas água destilada e diferentes variações de sais MS e sacarose. Para o experimento da embriogênese somática, plântulas com 90 dias de cultivo in vitro foram segmentadas e transferidas para um novo meio MS suplementado com 30 g L-1 de sacarose e diferentes concentrações de 2,4- Diclorofenoxiacético- 2,4-D (0; 4 e 8 mg L-1) combinadas com quatro concentrações de benzilaminopurina-BAP (0; 1; 2 e 3 mg L-1). Na etapa de conservação, o manitol nas concentrações estudadas não promoveu desaceleração do crescimento das plântulas de jenipapeiro, enquanto, o ácido abscísico promoveu a redução do número de folhas. Os meios MS e ½ da concentração de sais MS na presença de 30 g L-1 de sacarose promoveram a desaceleração do crescimento das plântulas de jenipapeiro, podendo ser recomendados para protocolos de conservação por crescimento lento. Os explantes provenientes do meio de conservação contendo manitol e ácido abscísico mantidos na presença de 1,0 mg L-1 de BAP na fase de retomada, apresentaram maior resposta morfogenética. Os explantes mantidos na fase de conservação na presença de meio MS + 30 g L-1 de sacarose e ½ MS com 15 ou 30 g L-1 de sacarose, apresentaram menor resposta morfogenética na ausência de BAP quando comparado com os demais tratamentos. Na etapa de germinação in vitro, observou-se que na ausência de sais e de sacarose houve maior porcentagem de plântulas normais e menor comprimento da parte aérea. Na etapa da embriogênese somática, a presença de 2,4-D, promoveu maior porcentagem de explantes com resposta morfogenética. O segmento caulinar promoveu maior resposta que o segmento foliar na ausência e na concentração 4 mg L-1 de 2,4-D. Além disso, a presença de BAP induziu menor resposta dessa variável para o explante caulinar e maior resposta para o explante foliar.
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Diversidade genética e germinação de jenipapo / Genetic diversity and germination jenipapoMoura, Rafaela Santos de 31 July 2014 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Genipap (Genipa americana L.) is economically important species, and with great potential for intensive exploitation, however, lack information about the distribution of genetic diversity in the State of Sergipe, and there is little information about the behavior of seed germination under stress conditions. Thus, the aim of this study was to estimate the genetic diversity for pre-breeding individuals coming jenipapo the State of Sergipe, and evaluate the behavior of seeds subjected to different stress conditions. For evaluation of genetic diversity genomic DNA was extracted from young leaves of 76 adult subjects genipap following adaptation of CTAB protocol 2%, and was used in ISSR reactions that made total volume of 15 μL. 14 primers were tested seven selected due to the polymorphism detected in the amplified fragments gel under UV light. The profile of the amplified fragments was used to construct binary matrices, which were used to estimate genetic diversity. To the stresses by water restriction and salt, seeds were placed on germination paper soaked in the proportion of 2.5 times its weight in five osmotic potential (with polyethylene glycol PEG 6000 solutions at 0, -0. 1, -0. 2, -0. 3 and -0. 4 MPa); Salt stress and the seeds were subjected to solutions of sodium chloride at 0, 25, 50, 100 and 200 mol m-3. For thermal stress, seeds were germinated at 15, 25, 30, 35 and 40 °C. The seeds were also evaluated for water gain during the germination process and the data arranged in the imbibition curve. The variables analyzed were germination percentage (G %), germination speed index (IVG), the mean germination time (TMG), germination velodicade average (VMG), development (cm) and dry weight (PS) of seedlings. The genetic diversity of individuals genipap is distributed randomly, regardless of the region of their region of origin. And the less divergent individual´s were located in the municipality of Nossa Senhora do Socorro, which are not indicated for the study of pre-breeding. The seeds are affected when subjected to -0.3 MPa and -0.4 MPa. Biggest germination values were found in 25 mol m-3. The optimum temperature for seed germination is 30 °C jenipapo. / O jenipapo (Genipa americana L.) é espécie economicamente importante, e com grande potencial para exploração intensiva, no entanto, faltam informações acerca da distribuição da diversidade genética no Estado de Sergipe, e ainda existem poucas informações sobre o comportamento da germinação das sementes sob condições de estresse. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi estimar a diversidade genética para o pré-melhoramento de indivíduos de jenipapo procedentes do Estado de Sergipe, e avaliar o comportamento das sementes submetidas as diferentes condições de estresse. Para avaliação da diversidade genética o DNA genômico foi extraído de folhas jovens de 76 indivíduos adultos de jenipapo, seguindo adaptação do protocolo CTAB 2%, e foi utilizado em reações de ISSR que compunham volume total de 15 μL. Foram testados 14 primers, e sete selecionados devido ao polimorfismo de fragmentos amplificados detectado em géis sob luz UV. O perfil dos fragmentos amplificados foi usado para construção de matrizes binárias, que foram utilizadas para estimativa da diversidade genética. Para os estresses por restrição hídrica e salina, as sementes foram colocadas sobre papel de germinação embebido na proporção de 2,5 vezes o seu peso em cinco potenciais osmóticos (com soluções de polietilenoglicol -PEG 6000 à 0, -0,1, -0,2, -0,3 e -0,4 MPa); e para o estresse salino as sementes foram submetidas à soluções de cloreto de sódio a 0, 25, 50, 100 e 200 mol m-3. Para o estresse térmico as sementes foram germinadas a 15, 25, 30, 35 e 40°C. As sementes também foram avaliadas quanto ao ganho de água durante o processo germinativo e os dados dispostos em curva de embebição. As variáveis analisadas foram porcentagem de germinação (%G), índice de velocidade de germinação (IVG), tempo médio de germinação (TMG), velodicade média de germinação (VMG), desenvolvimento (cm) e o peso seco (PS) de plântulas. A diversidade genética dos indivíduos de jenipapo está distribuída de forma aleatória, independente da região de sua região de origem. E os indivíduos menos divergentes foram os localizados no município de Nossa Senhora do Socorro, sendo estes não indicados para o estudo de pré-melhoramento. As sementes são afetadas quando submetidas a -0,3 MPa e -0,4 MPa. Maiores valores de germinação foram encontrados em 25 m mol-3. A temperatura ótima para a germinação das sementes de jenipapo é 30°C.
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