Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-26Bitstream added on 2014-06-13T21:04:27Z : No. of bitstreams: 1 hayacibara_rm_dr_araca.pdf: 434924 bytes, checksum: c828c6276d51f994ba5eee35c4019f18 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Propósito: O objetivo deste estudo foi avaliar histometricamente as alterações ósseas dimensionais, que ocorrem em rebordo atróficos induzidos experimentalmente, com a colocação de implante e enxerto ósseo autógeno ou grânulos de hidroxiapatita/fosfato β-tricálcio (BC) associados à membrana reabsorvível (MR). Materiais e Métodos: Defeitos ósseos foram criados após a extração dos 3 e 4 pré-molares mandibulares de cinco cães beagle. Após 3 meses, foram colocados 2 implantes em cada lado da mandíbula, dentro do rebordo atrófico, resultando em aproximadamente 6mm de superfície exposta do implante. Três grupos de tratamento foram distribuídos aleatoriamente: sem tratamento, MR + Osso autógeno (OA), MR + grânulos de hidroxiapatita/fosfato β-tricálcio. Após 4 meses, os cães foram sacrificados e foi realizada análise histométrica para avaliação de contato osso implante (COI) e ganho ósseo vertical (GOV). As médias de COI e GOV dos três grupos foram comparadas pelo teste de Tukey ao nível de significância de 5%. Resultados: Em 4 meses, o tratamento com MR+OA mostrou COI (%): 26.41 ± 4.90 e GOV (%): 16.06 ± 11.83. O grupo com MR+BC obteve COI (%): 15.16 ± 2.40 e GOV (%): 7.45 ± 9.84 e o grupo A mostrou COI (%): -0.23 ± 0.50 e GOV (%): -1.09 ± 8.99. O grupo MR+OA mostrou regeneração óssea maior (COI e GOV) que o grupo MR+BC e o grupo A (p<0.05). O grupo MR+BC obteve regeneração óssea maior (COI) que o grupo A (p<0.05). Conclusão: Concluiu-se que em rebordos atróficos: (i) tratamento com MR+OA aumenta a regeneração óssea, incluindo ganho ósseo vertical e contato osso implante; (ii) ocorre perda óssea na ausência de técnicas regenerativas / Purpose: The objective of this study was to evaluate histometric bone dimensional changes that occur in atrophics defects induced experimentally by placing the implant and autogenous bone graft or hydroxyapatite/β-tricalcium phosphate granules (BC) associated with reabsorbable membrane (RM). Material and Methods: A defect was created after the extraction of three four mandibular premolars of five beagle dogs. After 3 months, 2 implants were placed on each side of the mandible, within the atrophics defects, resulting in approximately 6 mm exposed surface of the implant. Three treatment groups were randomly assigned to: untreated control, RM + autogenous bone, RM + hydroxyapatite /β-tricalcium phosphate granules. After four months, the dogs were sacrificed and histometric analysis was performed to evaluate bone implant contact (BIC) and vertical bone gain (VBG). Mean BIC and VBG in the three groups were compared by Tukey test at a significance level of 5%. Results: In 4 months, treatment with RM + autogenous bone showed BIC (%): 26.41 ± 4.90 and VBG (%): 16.06 ± 11.83. The group RM + BC showed BIC (%): 15.16 ± 2.40 and VBG (%): 7.45 ± 9.84 and the A group obtained BIC (%): -0.23 ± 0.50 and VBG (%): - 1.09 ± 8.99. The RM + autogenous bone group showed greater bone regeneration (BIC and VBG) that RM + BC group and A group (p <0.05). The group received RM + BC greater bone regeneration (BIC) than the A group (p <0.05). Conclusion: We conclude that in atrophics defects: (i) RM + autogenous bone treatment increases bone regeneration, including vertical bone gain and bone implant contact, (ii) bone loss occurs in the absence of regenerative techniques

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-17. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:26Z : No. of bitstreams: 1 000868556.pdf: 2249192 bytes, checksum: 56c08879005372bbfc8fbfb5cff2c6d2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Dentre as membranas utilizadas para regeneração óssea guiada as membranas reabsorvíveis se destacam por não necessitarem do segundo ato cirúrgico, fato esse que pode ocasionar lesões no tecido estabelecido além do incomodo que o segundo ato cirúrgico em si proporciona ao paciente. Entretanto, não existe no mercado uma membrana considerada adequada. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma membrana a partir de materiais híbridos ureasil-poliéter para regeneração óssea guiada, capaz de isolar o enxerto ósseo e simultaneamente liberar de forma controlada fármacos ou proteínas, resultando assim em uma membrana capaz de melhorar a resposta fisiológica do tecido ósseo diminuindo o tempo de neoformação óssea. Os materiais utilizados foram sintetizados a partir do método sol-gel utilizando os polímeros Poli Oxido de Etileno (POE) e Poli Oxido de Propileno (POP) de diferentes massas moleculares (400, 1900, 2000 g mol-1). O fármaco utilizado como modelo foi o Acetato de Dexametasona. Os resultados de intumescimento na presença de saliva artificial revelaram que com o aumento na proporção de ureasil-POP2000 e ureasil-POE1900 na mistura ocorre um aumento no ganho de massa, contudo esse aumento é mais expressivo para as misturas com ureasil-POE1900. A evolução das curvas de SAXS durante os experimentos de liberação com saliva artificial revela que a mistura formada por ureasil-POP400/POE1900 leva ao deslocamento do pico de correlação para baixos valores de q e ao aumento na intensidade do pico, por outro lado devido à razão hidrofóbica na mistura ureasil-POP400/POP2000 esse deslocamento para baixos valores de q é invariável. O teste de liberação revelou que é possível controlar a velocidade de liberação do fármaco a partir da variação das misturas ureasil-POP400/POP2000 e ureasil-POP400/POE1900. Resultados da análise... / Among the membranes used for guided bone regeneration the resorbable membranes stand out for do not need the second surgery, a fact that can cause tissue damage beyond uncomfortable that the second surgery itself provides the patient.However, there is no on the market a membrane considered appropriate. The objective of this study was to develop a membrane from hybrid materials ureasil polyether for guided bone regeneration, able to isolate the bone graft and simultaneously drug release controlled or protein, resulting in a membrane capable of improving the physiological response of the tissue bone decreasing the bone formation. The materials used were synthesized from solgel method using polymers poly ethylene oxide (POE) and poly propylene oxide (POP) of different molecular weights (400, 1900, 2000 g mol-1).The drug used as model was dexamethasone acetate. The results of swelling in the presence of artificial saliva showed that with the increase in the proportion of ureasilPOP2000 and ureasil POE1900 in the mixture occurred an increasing mass, but this increase is more significant for mixture with the ureasil-POE1900.The evolution of SAXS curves during the release experiment with artificial saliva reveals that the mixture formed by ureasil-POP400/POE1900 leads to displacement of the correlation peak for low values of q and the increase in the intensity of the peak but the reason hydrophobic in the mix ureasilPOP400/POP2000 this displacement for low values of q is invariable. The release test showed that it is possible to control the release rate of the drug from the variation of the mixtures and ureasil-POP400/POP2000 ureasilPOP400/POE1900. Results of the microtomography showed that bone defects containing the ureasil-polyether membranes tested showed bone growth statistically similar to bone defects containing commercial collagen membrane (Bio-Gide, Geistlich Pharma).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-12Bitstream added on 2014-06-13T18:51:06Z : No. of bitstreams: 1 borrasca_ag_me_araca.pdf: 4821350 bytes, checksum: d36c5037a99ffa9487215170ba0a1610 (MD5) / Proposição: O objetivo deste trabalho foi avaliar, qualitativa e quantitativamente, o comportamento da membrana de matriz óssea homógena desmineralizada e conservada em glicerina no processo de reparo ósseo de cavidades cirúrgicas preenchidas com osso autógeno realizadas em tíbias de ratos diabeticos. Material e Métodos: Foram utilizados 40 ratos (Rattus norvegicus albinus, Wistar) machos, com aproximadamente 250 gramas divididos em dois grupos: o grupo I (Controle) recebeu injeção de tampão citrato, pela via endovenosa e o grupo II (Diabético) recebeu pela via intravenosa injeção de estreptozotocina dissolvida no tampão citrato para induzir o diabetes. Após controle glicêmico, anestesia, depilação e antissepsia foi realizada uma incisão longitudinal nas regiões antero-laterais de cada tibia. Após exposição das tíbias, duas cavidades cirúrgicas de 2mm de diâmetro foram preparadas com trefina em baixa-rotação refrigerada, uma no membro posterior direito e outra no membro posterior esquerdo, sendo a primeira preenchida com o osso autógeno particulado coletado durante a realização das duas cavidades e a segunda preenchida com coágulo sanguíneo e ambas recobertas pela membrana. Aos 10 e 30 dias pós-operatórios os animais foram eutanaziados e as peças obtidas foram processadas laboratorialmente para a realização de cortes semi-seriados com seis micrômetros de espessura e corados pela hematoxilina e eosina para análise histomorfométrica. Resultados e Conclusão: Concluiu-se que a reparação óssea foi maior com o emprego dos enxertos ósseos no grupo controle, embora as diferenças não foram estatisticamente significantes em nenhum período estudado e que, aos 30 dias, o processo de reparo das tíbias preenchidas... / Purpose: The aim of this study was to evaluate histomorphometric the behavior of membrane of a demineralized homogenous bone matrix and preserved in glycerin in the process of bony repair of surgical cavities filled out with autogenous bone accomplished in tibias of diabetic rats. Materials and Methods: Forty male rats weighing approximately 250 g were selected and assigned to two groups, as follows. Group I (Control) received a citrate buffer injection intravenously while Group II (Diabetic) received an intravenous injection of streptozotocin dissolved in citrate buffer to induce diabetes. After glycemic control, anesthesia, shaving and antisepsis, a longitudinal incision was made in the anterolateral areas of each tibia. After exhibition of the tibias, two surgical cavities of 2mm of diameter were prepared with trefina in refrigerated low-rotation, one in the right posterior member, other in the left subsequent member, being the first filled out with particulate autogenous bone collected during the accomplishment of the two cavities and second filled out with sanguine coagulum and both covered with the membrane. Ten and thirty days postoperatively, the animals were euthanized and the anatomical pieces were submitted to routine laboratorial processing and serially sectioned to obtain 6-μm-thick sections, which were stained by hematoxylin and eosin for histomorphometric analysis. Results and Conclusions: We concluded in the ended of the bony repair was larger with the employment of the bone grafts in the group control, although the differences don't have statistics significance in any studied period and that to the 30 days, the process of repair of the tibias filled out by graft of the group control it was more favorable quality than of the tibias under the same treatment of the diabetic group although such differences have not been statistics significance and the membrane was biocompatible in all the analyzed groups.

Submitted by JOÃO AUGUSTO OSHIRO JUNIOR (joaooshiro@yahoo.com.br) on 2017-08-31T18:02:19Z No. of bitstreams: 1 TESE JOAO AUGUSTO OSHIRO Jr_28 ago 2017_CORRIGIDA_FM com a ficha catalográfica.pdf: 3397335 bytes, checksum: 441e5684373bdd28dc8eb198a113eebe (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-09-01T14:36:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oshirojunior_ja_dr_arafcf.pdf: 3397335 bytes, checksum: 441e5684373bdd28dc8eb198a113eebe (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-01T14:36:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oshirojunior_ja_dr_arafcf.pdf: 3397335 bytes, checksum: 441e5684373bdd28dc8eb198a113eebe (MD5) Previous issue date: 2017-08-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A técnica de Regeneração Óssea Guiada (ROG) auxilia a restauração do tecido ósseo impedindo a concorrência entre as células do tecido ósseo e as células dos tecidos moles pelo uso de membranas; entretanto, não existe no mercado uma membrana osteoindutora. O peptídeo de crescimento osteogênico (OGP) atua como estimulador hematopoiético, promovendo a diferenciação osteoblástica e é um bom candidato para ser incorporado em membranas. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver membranas a partir de materiais híbridos contendo OGP para otimizar a ROG. Para o desenvolvimento das membranas, foram utilizadas misturas de três polímeros, sendo dois à base de polióxido de etileno (POE) de massa molecular 500 e 1900 g mol-1 e um à base de polióxido de propileno (POP) de massa molecular 400 g mol-1. Diferentes métodos de esterilização foram utilizados. A caracterização dos materiais foi realizada pelas técnicas de calorimetria exploratória diferencial (DSC), espalhamento de raios-x a baixo ângulo (SAXS), análise mecânica dinâmica (DMA), determinação do pH e microscopia de força atômica (MFA). O OGP foi sintetizado pelo método em fase sólida, purificado por HPLC e caracterizado por espectrometria de massas. Os resultados de esterilização revelaram que a radiação gama a 24 kGy não alterou a estrutura do material, confirmado pelo DSC. A técnica de SAXS revelou a homogeneidade estrutural da matriz, assim como, a nano distância entre os entre os “nós” de silício. Os resultados de DMA mostraram que as membranas não sofreram ruptura, quando submetidas à aplicação de uma elevada intensidade de força (15N). Os resultados de pH permaneceram entre 7,38 e 7,64 durante 48 horas, faixa que não ocasiona efeitos citotóxicos. Os perfis cromatográficos confirmaram o grau de pureza do OGP obtido. O OGP nas membranas foi incorporado na concentração de 66,25x10-10mol. Os resultados de liberação monstraram que as membranas ureasil-POP400/PEO500 e ureasil-POP400/POE1900 liberaram após 48 horas, 7 e 21% respectivamente. A MFA demonstrou que todos os materiais são mesoporosos, mas o ureasil-POP400/POE1900 com OGP possui poros maiores (2,8 µm). Teste de biocompatibilidade in vitro não mostrou nenhum efeito citotóxico. A Análise Histológica revelou que ureasil-POP400/POE1900 promoveu inflamação local após 30 dias semelhante à membrana comercial de colágeno. A cicatrização do tecido ósseo revelou que a resposta do ureasil-POP400/POE1900 é semelhante a membrana comercial. Os resultados obtidos permitem concluir que as membranas híbridas contendo o OGP apresentam características que as tornam potenciais candidatas para o tratamento de defeitos ósseos de tamanhos críticos. / The Guided Bone Regeneration (GBR) technique helps to restore bone tissue through the principle of cellular selectivity, i.e., excluding the epithelium and connective tissues from the damaged area by the use of membranes; However, there is no osteoinductive membrane on the market. The osteogenic growth peptide (OGP) acts as a hematopoietic stimulator, promoting osteoblastic differentiation and is a good candidate to incorporated into membranes. Therefore, the objective of this work was to develop membranes from hybrid materials containing OGP to optimize GBR. For development of the membranes, blends of three polymers were used, being two poly oxide ethylene (POE) of molecular weight 500 and 1900 g mol-1 and one based on poly oxide propylene (POP) of molecular mass 400 g Mol-1. Different methods of sterilization were used. The characterization of the materials was performed by differential scanning calorimetry (DSC), small angle x-ray scattering (SAXS), dynamic mechanical analysis (DMA), pH determination and atomic force microscopy (AFM). OGP was synthesized by the solid phase method, purified by HPLC and characterized by mass spectrometry. Sterilization results revealed that gamma radiation at 24 kGy did not change the structure of the material, as confirmed by the DSC. The SAXS technique revealed the structural homogeneity of the matrix, as well as the nano distance between the "nodes" of silicon. The DMA results showed that the membranes were not ruptured when submitted to a high force intensity (15N). The pH results remained between 7.38 and 7.64 for 48 hours, a range that did not cause cytotoxic effects. The chromatographic profiles confirmed the purity of the obtained OGP. The OGP in the membranes was incorporated in the concentration of 66,25x10-10mol. The release results showed that the ureasil-POP400/PEO500 and ureasil-POP400/POE1900 membranes released after 48 hours, 7 and 21% respectively. AFM showed that all materials are mesoporous, but ureasil-POP400/POE1900 with OGP has larger pores (2.8 μm). In vitro biocompatibility test showed no cytotoxic effect. Histological analysis revealed that ureasil-POP400/POE1900 promoted local inflammation after 30 days similar to commercial collagen membrane. Healing of bone tissue revealed that the ureasil-POP400/POE1900 response is similar to commercial membrane. The results obtained allow conclude that hybrid membranes containing OGP have characteristics that make them potential candidates for the treatment of critically bone defects.

Orientador: Elio Hitoshi Shinohara / Coorientador: Alessandra Marcondes Aranega / Banca: Roberta Okamoto / Banca: Daniela Atili Brandini de Weert / Banca: Nicolas Homsi / Banca: André Takahashi / Resumo: Proposição: O objetivo deste trabalho foi analisar histologicamente e histomorfometricamente o processo de reparo de defeitos ósseos em ratos diabéticos preenchidos com osso autógeno e recoberto por membranas de matriz óssea homógena ou politetrafluoretileno expandido (PTFe). Materiais e métodos: Para a obtenção da membrana homógena foram utilizados 40 animais saudáveis, não incluídos no grupo experimental. No experimento foram utilizados 120 ratos (Rattus norvegicus albinus, Wistar) machos, com peso aproximado de 250 gramas, divididos em dois grupos: o grupo I (IC), sem alterações sistêmicas (Controle) recebeu injeção de tampão citrato a 0,01M, ph 4,5, pela via endovenosa e o grupo II (Diabético) ou IID recebeu pela mesma via de administração (veia peniana) injeção de estreptozotocina (Sigma-Aldrich) dissolvida em tampão citrato a 0,01M, ph 4,5, em uma concentração de 35mg/Kg. Após controle glicêmico os ratos sem alterações sistêmicas (grupo controle) e diabéticos foram subdivididos em três subgrupos de experimentos: SM - a cavidade cirúrgica da tíbia esquerda foi preenchida com enxertos ósseos autógenos, não sendo recoberta por membrana, MH - a cavidade também preenchida com enxertos ósseos foi recoberta por membrana homógena e MX - o recobrimento foi feito com membrana sintética de PTFe. Os animais foram eutanaziados aos 10 e 60 dias e as tíbias foram submetidas ao processamento laboratorial de rotina para análise histológica e histométrica. Resultados: Aos 10 dias não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os diabéticos e não-diabéticos que tiveram suas feridas recobertas ou não com as membranas. No entanto, nesse tempo, o tecido ósseo do grupo diabético apresentou-se qualitativamente pior se comparado ao do grupo controle. Aos 60 dias constatou-se atraso... / Abstract: Purpose: To carry out histological and histomorphometric analysis of the bone repair process in diabetic rats filled with autogenous bone graft and covered with homogenous demineralized bone matrix membrane or expanded polytetrafluoroethylene membrane (e-PTF). Materials and Methods: In order to obtain the homogenous membrane, 40 healthy animals not included in the experimental group were used. In the experiment 120 male rats (Rattus norvegicus albinus, Wistar) weighing approximately 250g were divided into two groups. Group I (IC) had no systemic alterations (Control) and received an intravenous citrate buffer injection at 0.01 M, pH 4.5, while Group II (Diabetic) or IID received an intravenous injection of streptozotocin (Sigma-Aldrich) dissolved in citrate buffer at 0.01M, ph 4.5 in a concentration of 35 mg/kg. After glycemic control, the rats with no systemic alterations (Control group) and the diabetic rats were subdivided into three subgroups, as follows: SM - surgical cavity of left tibia was filled with autogenous bone grafting not covered by membrane; MH - bone grafting covered by homogenous membrane; and MX - bone grafting covered by expanded polytetrafluoroethylene membrane (e-PTFE). The animals were euthanized at 10 and 60 days and the tibiae were submitted to routine laboratorial processing for histological and histomorphometric analysis. Results: At 10 days, there were no statistically significant differences between diabetic and non-diabetic rats which had their wounds covered or not covered with the membranes. However, at 10 days the bone tissue of the diabetic group was qualitatively worse in comparison to that of the control group. At 60 days a delay was found in the bone repair process in wounds covered by membranes when compared to the group without membrane, regardless of the systemic state. At 60 days... / Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Sonia Regina Panzarini Barioni / Resumo: Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães. / Abstract: This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs. / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Zaghete Bertochi / Banca: Orivaldo Lopes da Silva / Banca: Neri Alves / Banca: Walter Katsumi Sakamoto / Banca: Cecilia Amelia de Carvalho Zavaglia / Resumo: Neste trabalho, foi conduzido um estudo sistemático da síntese de compósitos poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário - P(VDF-TrFE)/BT - para uso em Regeneração Tecidual Guiada (GTR). Esta técnica osteopromotiva tem sido amplamente empregada em tratamentos do periodonto. A GTR emprega uma barreira física (membrana) para promover a formação de osso pela migração de células ósseas na região isolada. Desta forma, estas células são capazes de regenerar o defeito ósseo pela exclusão da competição com células não-osteogênicas na reabsorção do coágulo. Desta forma, membranas de compósitos polímero-cerâmica piezoelétrica podem promover osteogênese por meio de potenciais elétricos produzidos e prover proteção mecânica a região isolada. Membranas deste tipo podem ser consideradas como barreiras alternativas para GTR. Nesta direção, as propriedades estruturais e elétricas dos compósitos P(VDF-TrFE)/BT foram avaliadas, bem como, sua biocompatibilidade in vitro. Os compósitos foram preparados pela mistura de pós de titanato de bário e poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno) (VDF = 80mol%) em meio de dimetilformamida (DMF0). As membranas de compósitos foram obtidos utilizando os seguintes métodos: espalhamento de solução sobre substrato (SC), deposição em spincoating (SP) e precipitação em água seguido de prensagem a quente (WHP). Compósitos obtidos por precipitação em água apresentaram microestrutura heterogênea e superfícies adequadas. Compósitos com fração volumétrica de 0,55 apresentaram os melhores valores de polarização remanescente e constante dielétrica relativa (33,1mC/cm2 e 78, respectivamente). Compósitos com fração volumétrica de 0,10 e 0,50 apresentaram coeficiente piezoelétrico d33 igual a 15,5 e ~0 pC/N respectivamente. P(VDF-TrFE)/BT demonstraram melhor biocompatibilidade in vitro...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work, a systematic study on synthesis of poly(vinylidene fluoride-trifluoroethylene)/barium titanate - P(VDF-TrFE)/BT - composites for used in Guided Tissue Regeneration (GTR) was carried out. This osteopromotive technique has been widely employed on periodontal treatment. GTR utilizes a physical barrier (membrane) to promote bone-forming cell to migrate into secluded space. Hereby, these cells are able to regenerate the osseous defect, by the exclusion of competing non-osteogenic soft tissue cells on reabsorption. The osteogenic process also can be enhanced by application of electrical energy (direct current or pulsed electromagnetic field). Thereby, membranes of polymer-ceramic piezoelectric composites can promote the osteogenesis by means of electrics potentials produced and to provide mechanical protection to the secluded space. This kind of membrane can be considered an alternative barrier to GTR. In this way, the structural and electrical properties of P(VDF-TrFE)/BT composites were evaluated, as well as, their in vitro biocompatibility. The composites were prepared by mixing Barium Titanate powders and P(VDF-TrFE) (VDF=80mol%) on dimethylformamide medium (DMF). Composites membranes were made by following methods: solvent casting (SC), spincoating (SP), and precipitation on water followed by hot pressing (WHP). Composites obtained by WHP showed heterogeneous microstructure and adequate surfaces. The composite of ceramic fraction of 0.55 presented the best values of remanent polarization and relative dielectric constant (33.1mC/cm2 and 78, respectively). The piezoelectric coefficient d33 was 15,5 and ~0 pC/N for composites with volumetric fraction of 0.10 and 0.50 respectively. P(VDF-TrFE)/BT presented better in vitro biocompatibility when compared to commercial e-PTFE GTR barrier. Therefore, P(VDF-TrFE)/BT membrane developed could be an alternative to be used in GTR. / Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente em cães e tratados com enxerto de osso autógeno (OA) associado ou não à barreira de sulfato de cálcio (SC). Os segundos, terceiros e quartos pré-molares mandibulares de 6 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo; Grupo OA (osso autógeno): o defeito foi preenchido com enxerto de OA; Grupo OA/SC (osso autógeno/sulfato de cálcio): o defeito foi preenchido com enxerto de OA e coberto com barreira de SC. Os retalhos foram suturados de forma a cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pós-operatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com HE ou Tricrômico de Masson. Cinco cortes de cada dente foram selecionados para análises histológica e histométrica. Foram avaliadas medidas lineares e medidas de área da cicatrização periodontal. Esses parâmetros foram apresentados como porcentagem do defeito original e transformados em arcoseno para análise estatística (ANOVA, p < 0,05). A regeneração periodontal ocorreu de forma similar nos três grupos, não sendo observada completa neoformação óssea e de tecido conjuntivo na maioria dos espécimes. Diferenças estatisticamente significativas não foram constatadas entre os três grupos em nenhum dos parâmetros avaliados. A cicatrização periodontal foi similar após o tratamento de defeitos de furca Classe II com enxerto de OA, enxerto de OA com barreira de SC ou debridamento cirúrgico somente. / Abstract: The purpose of this study was to histologically analyze the healing of surgically created Class II furcation defects treated using an autogenous bone (AB) graft with or without a calcium sulfate (CS) barrier. The second, third and fourth mandibular premolars of 6 mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Teeth were randomly divided into 3 groups: Group C (control): the defect was filled with blood clot; Group AB: the defect was filled with AB graft; Group AB/CS: the defect was filled with AB graft and covered by a CS barrier. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized at 90 days postoperative. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either H&E or Masson's Trichrome. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (ANOVA, p<0.05). Periodontal regeneration in the 3 groups was similar. Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Statistically significant differences were not found in any of the evaluated parameters among the groups. Periodontal healing was similar wheter using surgical debridement alone, AB graft, or AB graft with a CS barrier in the treatment of Class II furcation defects. / Mestre

O objetivo deste trabalho foi caracterizar algumas propriedades físico-químicas do osso bovino misto (OBM) e analisar comparativamente o potencial osteocondutor do OBM em relação ao osso bovino inorgânico medular (Bio-Oss® e Gen-Ox®), tendo o coágulo como controle negativo. O OBM foi analisado por meio de termogravimetria, espectroscopia no infravermelho, calorimetria exploratória diferencial, determinação da porosidade e tamanho de poros, microscopia eletrônica de varredura, difração de raios-X e cristalinidade. Para esta análise foram feitos defeitos críticos (9 mm de diâmetro) na calvária de ratos (n=5/período - material), preenchidos de acordo com o grupo experimental e recobertos com membrana de cortical óssea bovina Gen-Derm®. Ao final dos períodos de 1, 3, 6 e 9 meses póscirúrgicos, as calotas foram coletadas, fixadas em formalina 10% tamponada,radiografadas e processadas para análise histológica. As análises físico-químicas evidenciaram grupamentos característicos de colágeno e de hidroxiapatita no osso bovino misto. Na análise microscópica comparativa observamos que: a) não ocorreu o completo fechamento do defeito em quaisquer dos grupos estudados; b) em todos os grupos a membrana foi reabsorvida antes do período de 1 mês; c) no grupo controle a ossificação ocorreu na borda do defeito, sendo a região central preenchida por tecido conjuntivo fibroso; d) no grupo tratado com Bio-Oss ocorreu ossificação na borda do defeito, com denso fibrosamento ao redor das partículas; e) no grupo tratado com Gen-Ox houve neoformação óssea ao redor das partículas do biomaterial; f) no grupo tratado com OBM o infiltrado inflamatório persistiu no primeiro mês, sendo substituído por tecido conjunto fibroso ao redor das partículas.Concluímos que: a) o OBM apresenta frações orgânica (cerca de 15%) e inorgânica (cerca de 75%); b) nenhum dos materiais testados foi capaz de induzir o fechamento completo da lesão de tamanho crítico; c) o Gen-Ox inorgânico demonstrou a maior capacidade osteocondutora dentre os materiais testados; d) o OBM e o Bio-Oss, no modelo experimental utilizado, não apresentaram propriedades osteocondutoras e, e) nenhum dos materiais foi reabsorvido no período de 9 meses. / The aim of this study was to evaluate the physicochemical properties of mixed bovine bone (MBB) and analyze the osteoconductive potential of MBB compared to woven inorganic bovine bone (Bio-Oss® e Gen-Ox®), having as a control the blood clot, in rat calvariae. MBB was analyzed by means of thermogravimetry, infrared spectroscopy, differential exploratory calorimetry, pore size and porosity determination, scanning electron microscopy, X-ray diffraction and cristalinity. Critical size defects (9-mm diameter) were made in rat calvariae (n=5/period - material), filled according to the experimental group and covered with bovine cortical bone membrane (Gen-Derm®). At the end of the study periods (1, 3, 6 and 9 months postoperatively), the skulls were collected, fixed in 10% formalin, radiographed and processed for histological analysis. Physicochemical analysis showed characteristic collagen and hydroxyapatite groups in the MBB. The comparative microscopic evaluation showed that: a) there was no complete closure of the defects in any study group; b) in all groups, the membrane was resorbed before 1 month; c) in the control group, ossification took place on the periphery of the defect, and the central region of the defect was filled with connective fibrous tissue; d) in the group treated with Bio-Oss there was ossification on the periphery of the defect and dense fibrous tissue surrounding the graft particles; e) in the group treated with Gen-Ox there was bone formation surrounding the biomaterial particles; f) in the group treated with MBB the inflammatory infiltrate persisted in the first month and was then substituted by fibrous connective tissue surrounding the particles. In conclusion: a) MBB is composed by organic (15%) and inorganic (75%) fractions; b) none of the tested materials was able to induce the complete cleasure of the critical size defects; c) Gen-Ox was the most osteoconductive material among those tested; d) neither MBB nor Bio-Oss, in this experimental model, showed osteoconductive properties and e) none of the materials was resorbed in 9 months

O princípio da regeneração tecidual guiada (RTG) baseia-se na utilização de membranas biocompatíveis com a finalidade de impedir a migração dos tecidos conjuntivo e epitelial para a ferida, permitindo que células do ligamento periodontal repovoem a superfície radicular e regenerem o aparato de inserção do dente. A RTG tem sido utilizada em diversas situações clínicas para facilitar o reparo de defeitos ósseos e periodontais, sendo as membranas de politetrafluoretileno expandido (e-PTFE) as mais utilizadas. O objetivo deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade in vitro de uma nova membrana do compósito de poli(vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário (P(VDF-TrFE)/BT). Para isso, osteoblastos, fibroblastos e queratinócitos, células com as quais a membrana entrará em contato durante o processo de RTG, foram cultivados sobre membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE (controle). Os seguintes parâmetros foram avaliados: 1) adesão celular por contagem em hemocitômetro; 2) proliferação celular por MTT e 3) adesão e morfologia celular por fluorescência, para as linhagens osteoblástica, fibroblástica e de queratinócitos; 1) medida do conteúdo de proteína total; 2) medida da atividade de fosfatase alcalina (ALP) e 3) formação de matriz mineralizada, para as linhagens osteoblástica e fibroblástica; 1) imunolocalização de ALP por fluorescência; 2) detecção histoquímica in situ da atividade de ALP e 3) expressão dos genes Runx2, Colágeno I (COL I), Ostepontina (OPN), ALP, Sialoproteína óssea (BSP), Osteocalcina (OC), Bax, Bcl-2 e Survivina (SUR) por PCR em tempo real, para a linhagem osteoblástica; 1) expressão dos genes Periostin (PRT), Periodontal Ligament Specific 17 (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulina (FBM), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem fibroblástica e 1) expressão dos genes Involucrina (IVL), Queratina 1 (QRT-1), Queratina 10 (QRT-10), Queratina 14 (QRT-14), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem de queratinócitos. Os dados quantitativos foram submetidos ao teste estatístico Mann-Whitney (nível de significância: 5%). A adesão de células osteoblásticas foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de células osteoblásticas foi maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1, 7 e 10 dias (p<0,05). A epifluorescência indicou que as células osteoblásticas estavam aderidas e mais espraiadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 4 e 24 h. A imunofluorescência revelou presença de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias. O conteúdo de proteína total foi semelhante entre as duas membranas em 10 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve diferença estatisticamente significante para atividade de ALP em 7 dias (p>0,05), entretanto em 10 e 14 dias (p<0,05) a atividade de ALP foi maior em culturas sobre o P(VDFTrFE)/ BT. A detecção histoquímica in situ revelou atividade de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT, tanto aos 7 quanto aos 14 dias. A formação de matriz mineralizada ocorreu apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. A expressão dos genes Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax e SUR foi maior em células cultivadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve expressão de Bcl-2 em culturas sobre as duas membranas. A adesão de células fibroblásticas foi semelhante entre P(VDFTrFE)/ BT e PTFE em 30 min (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 2 e 4 h (p<0,05). A proliferação de células fibroblásticas foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 3 dias (p>0,05) e maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1 e 7 dias (p<0,05). Os ensaios de fluorescência direta revelaram que as células fibroblásticas estavam aderidas sobre as duas membranas, porém em estágios mais avançados de espraiamento sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 2 e 4 h. O conteúdo de proteína total foi maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 10, 14 e 21 dias (p<0,05). Não se observou atividade de ALP em culturas fibroblásticas sobre as membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE aos 7 dias. Contudo, em 14 dias (p>0,05) a atividade de ALP foi semelhante entre as duas membranas e em 21 dias (p<0,05) foi estatisticamente significante em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. Aos 21 dias não se notou formação de matriz mineralizada em ambas as membranas. A expressão dos genes PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax e SUR foi maior em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em células fibroblásticas cultivadas sobre o PTFE em 7 e 14 dias (p<0,05). A adesão de queratinócitos foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de queratinócitos foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 4, 7, 10 e 14 dias (p>0,05) e maior sobre culturas crescidas sobre P(VDF-TrFE)/BT em 1, 17 e 21 dias (p<0,05). Por fluorescência direta notou-se que células cultivadas sobre ambas as membranas exibiam morfologia predominantemente arredondada em 30 min, 4 e 24 h. A expressão do gene IVL foi semelhante em culturas crescidas sobre as duas membranas em 7 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 14 dias (p<0,05). Os genes QRT-1, QRT -10 e QRT -14, Bax e SUR estavam mais expressos em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em queratinócitos crescidos sobre o PTFE em 7 dias (p<0,05) e semelhante entre as duas membranas em 14 dias (p>0,05). Por favorecer eventos relacionados ao desenvolvimento tecidual, como a adesão, proliferação e diferenciação celular, a membrana de P(VDF-TrFE)/BT pode representar uma boa alternativa ao PTFE para procedimentos de RTG. / The principle of guided tissue regeneration (GTR) is based on the use of physical barrier to isolate periodontal defects of the gingival connective and epithelial tissues so that bone, periodontal ligament, and cementum can be regenerated from their own cells. RTG procedure has been used in many clinical situations to promote bone and periodontal regeneration. Membranes of expanded polytetrafluoroethylene (e-PTFE) are the most commonly used material for GTR. However, several membranes have been tested to be applied in GTR. The purpose of this study was to evaluate the in vitro biocompatibility of the membrane of poly(vinylidene-trifluoroethylene/barium titanate (P(VDF-TrFE)/BT) composite. For that, osteoblasts, fibroblasts and keratinocytes, cells that will interact with the membrane during RTG, were culture P(VDF-TrFE)/BT and PTFE (control) membranes for up to 21 days. The following parameters were evaluated: 1) cell adhesion by counting in hemocytometer, 2) cell proliferation and 3) cell morphology by fluorescent labeling, for osteoblastic, fibroblastic and keratinocyte lineages; 1) total protein content; 2) alkaline phosphatase (ALP) activity and 3) mineralized bone-like nodule formation, for osteblastic and fibroblastic lineages; 1) immunolocalization of ALP by fluorescent labeling; 2) histochemistry detection in situ of ALP activity and 3) gene expression of Runx2, Collagen I (COL I), Ostepontin (OPN), ALP, Bone Sialoprotein (BSP), Osteocalcin (OC), Bax, Bcl-2 and Survivin (SUR) by real-time PCR, for osteoblastic lineage; 1) gene expression of Periostin (PRT), Periodontal ligament specific (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulin (FBM), Bax, Bcl-2 and SUR by real-time PCR, for fibroblastic lineage; 1) gene expression of Involucrin (IVL), Keratin-1 (QRT-1), Keratin-10 (QRT-10), Keratin-14 (QRT- 14), Bax, Bcl-2 and SUR days by real-time PCR, for keratinocyte lineage. Data were submitted to Mann-Whitney test (level of significance: 5%). The adhesion of osteoblastic cells was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Cell proliferation was higher in ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 7 and 10 days (p<0.05). Epifluorescence showed that osteoblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Immunofluorescence revealed the presence of ALP only in osteogenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days. Total protein content was similar between the membranes at 10 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no differences in ALP activity at 7 days (p>0.05). However, ALP activity was higher in osteogenic cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 10 and 14 days (p<0.05). The histochemistry reveals that only ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT had ALP activity in situ at 7 and 14 days. Bone-like nodule formation occurred only in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 21 days. Gene expression of Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax and SUR was higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no expression of Bcl-2 in cultures on both membranes. The adhesion of fibroblastic cells was similar between P(VDFTrFE)/ BT and PTFE at 30 min (p>0.05) and greater in fibroblastic cultures on P(VDFTrFE)/ BT at 2 and 4 h (p<0.05). Cell proliferation was similar in fibroblastic cultures grown on both membranes at 3 days (p>0.05) and higher in cultures on P(VDF-TrFE)/BT at 1 and 7 days (p<0.05). Epifluorescence showed that fibroblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and more spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Total protein content was greater on P(VDF-TrFE)/BT at 10, 14 and 21 days (p<0.05). There was no ALP activity in fibroblastic cultures grown on both membranes at 7 days. The ALP activity was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 14 day (p>0.05) and higher on P(VDFTrFE)/ BT at 21 days (p<0.05). Bone-like nodule formation was not observed in fibroblastic cultures on both membranes at 21 days. Gene expression of PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax and SUR was higher in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl- 2 expression was higher in fibroblastic cultures on the PTFE at 7 and 14 days (p<0.05). Keratinocyte adhesion was similar for P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Keratinocyte proliferation was statistically similar on both membranes at 4, 7, 10 and 14 days (p>0.05) and higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 17 and 21 days (p<0.05). Keratinocytes displayed a round morphology and was not observed any evidence of cell spreading at 30 min, 4 and 24 h. The gene expression of IVL was similar in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 7 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 14 days (p<0.05). Genes expression of QRT-1, QRT-10, QRT-14, Bax and SUR was greater in keratinocytes grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl-2 expression was higher in keratinocytes cultured on PTFE at 7 days (p<0.05) and similar on both membranes at 14 days (p>0.05). Our study indicates that P(VDF-TrFE)/BT membrane promote events related to tissue development/regeneration, such as cell adhesion, proliferation and differentiation. Thus, the membrane of P(VDF-TrFE)/BT could be used as an advantageous alternative to PTFE in GTR procedures.