Orientador: Sergio de Toledo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-22T18:48:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tramontina_ViniciusAugusto_M.pdf: 7437451 bytes, checksum: 67b942bc3b47f83c6e0ada554a4e2427 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do subgalato de bismuto no processo de reparação tecidual. Foram utilizados 55 ratos Wistar no dorso dos quais realizou-se feridas padronizadas pelo uso de um bisturi circular (3,5 mm X 2,0 mm). No lado direito a ferida foi tratada com subgalato de bismuto e no esquerdo, com solução fisiológica 0,9%. Os períodos avaliados foram de 01, 04, 07, 11 e 18 dias. Utilizou-se microscopia ótica comum para avaliação histológica qualitativa ( H.E. ) e microscopia de polarização para avaliação da birrefringência de fibras colágenas; foi realizada ainda avaliação histométrica através das imagens histológicas digitalizadas e também avaliação macroscópica através de fotografias padronizadas. Os resultados mostraram que histologicamente não houve diferenças relevantes entre teste e controle, com síntese de colágeno discretamente maior para grupo controle; macroscopicamente não houve diferença significativa (ANOVA) no padrão de contração lateral das feridas e histometricamente, os parâmetros avaliados mostraram números significativemente maiores para as feridas tratadas com subgalato de bismuto. (ANOVA dias 01 e 04; teste t, p<0,05 nos dias 07,11 e 18). Connclui-se que o subgalato de bismuto não interferiu na qualidade do processo de reparação, sendo biocompatível aos tecidos, apresentando uma área maior de tecido de granulação pela presença física do material, podendo ser indicado como hemostático. sem efeito inibor significado sobre o processo de reparação / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of Bismuth subgallate on wound healing. In fifty five Wistar rats, two standardised wounds were made with a biopsy punch ( 3,5 mm X 2,0 mm ) at the back of each rat. Test wound was filled with bismuth subgallate and the control with salina 0,9%. The periods of evaluation were 1, 4, 7, 11 and 18 days. The methods utilised were: qualitative evaluation of the granulation tissue morphology; evaluation of collagen synthesis (polarisation microscopy / birefringence); histometric evaluation of digitalized histology images and evaluation of a macroscopic ( photograph ) group. The results showed that: histologically there were no relevant differences between test and control, with collagen synthesis very similar to each other. At the photographic group, no statistically significant difference (ANOVA) was observed between test and control, related to the lateral closure of the wounds. Histometrically, the parameters analysed ( area of ulceration - Day 1; distance between epithelial edges - Day 4 and area of granulation tissue - Days 7, 11 and 18 ) showed that there were statistically significant differences between test and control ( ANOVA - Days 1 and 4; student t test , p<0,05 - Days 7, 11 and 18 ). It was concluded that bismuth subgallate did not interfere on wound healing quality, being biocompatible to the tissues, showing only a greater area of granulation tissue due to the physical presence of bismuth subgallate / Mestrado / Periodontia / Mestre em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-24Bitstream added on 2014-11-10T11:58:33Z : No. of bitstreams: 1 000782784.pdf: 752501 bytes, checksum: d801a641e97a2fbc972dcfeb448843ef (MD5) / Em humanos a dipirona apresenta efeito inibitório sobre a enzima COX-1, podendo inibir a agregação plaquetária por até 6 horas (1). Devido parte da sua ação analgésica estar associada ao sistema nervoso central (2), este fármaco vem sendo associado a outros anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), como o meloxicam, para o tratamento da dor crônica em cães (3). Apesar do uso da dipirona isolada ou associada ao meloxicam ser teoricamente justificável, os benefícios analgésicos desta associação e os potenciais efeitos adversos sobre a hemostasia devem ser investigados para que seu emprego clínico seja validado. Com isso o presente trabalho envolveu 2 fases. Na primeira fase (CAPÍTULO 1) objetivou-se comparar os efeitos da dose única de dipirona, meloxicam e da associação de dipirona com meloxicam sobre a hemostasia em cães. Nesta etapa empregaram-se seis cães adultos, em um estudo prospectivo, aleatório, cruzado e controlado por placebo. Os animais receberam 4 tratamentos pela via intravenosa com intervalo de 15 dias entre si: controle (0,1 mL/kg de solução fisiológica), meloxicam (0,2 mg/kg), dipirona (25 mg/kg) e dipirona-meloxicam (25 e 0,2 mg/kg, respectivamente). As amostras de sangue foram coletadas antes e após 1, 2, 3, 5, e 8 horas da administração dos tratamentos para a avaliação da agregação plaquetária em sangue total e tromboelastometria. O tempo de sangramento de mucosa oral foi avaliado antes e após 1, 3 e 5 horas da administração dos tratamentos. Na segunda fase (CAPITULO 2), objetivou-se avaliar o controle da dor pós-operatória de dose única de dipirona, meloxicam e da associação dipirona-meloxicam em cadelas submetidas a ovariosalpingohisterectomia em um estudo prospectivo, aleatório, duplo cego e controlado por placebo. Quarenta cadelas foram divididas aleatoriamente em 4 grupos (10 animais por grupo) e receberam os mesmos tratamentos descritos na fase anterior. A dor ... / In humans, dipyrone acts as a non-selective COX inhibitor and can inhibit platelet aggregation for up to 6 hours (1). Because dipyrone-induced analgesia may be attributable not only to its anti-inflammatory action, but also to its central nervous system mediated effects (2), this drug has been combined with other non steroid antinflammatories (NSAIDs), such as meloxicam, for the control of chronic pain in canine patients (3). Although the use of dipyrone alone or combined with meloxicam is theoretically justifiable, the analgesic benefits of this association and the potential adverse effects on hemostasis should be investigated before its clinical use is validated. In order to investigate the effects of dipyrone, meloxicam, and of the combination of these two drugs, the present study was carried out in 2 phases. During phase 1, presented in Chapter 1, the effects of a single dose administration of dipyrone, meloxicam, and of the combination of these two NSAIDs were evaluated on the hemostasis of conscious dogs. Six adult dogs were used in a prospective, randomized, crossover study. The animals received 4 treatments intravenously with 15-day washout intervals: control (0.1 mL/kg saline), meloxicam (0.2 mg/kg) dipyrone (25 mg/kg) and dipyrone combined with meloxicam (25 and 0.2 mg/kg respectively). Blood samples were collected for assessment of platelet aggregation in whole blood and thromboelastometry before, and 1, 2, 3, 5, and 8 hours after treatment administration. Buccal mucosal bleeding time was evaluated before and at 1, 3, and 5 hours of treatment administration. During phase 2 (Chapter 2), the postoperative analgesic effects promoted by a single dose of dipyrone, meloxicam, and of the drug combination were evaluated in bitches undergoing ovariohysterectomy in a prospective, randomized , double-blinded, placebo controlled study design. Forty healthy bitches selected for ovariohysterectomy were ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:50:22Z : No. of bitstreams: 1 utsunomia_ek_me_botfm.pdf: 415505 bytes, checksum: 904bb5b0f94628384d4ffd205f0db712 (MD5) / A doença de von Willebrand (DvW) é decorrente da deficiência qualitativa ou quantitativa do Fator de von Willebrand (FvW) e é considerada a coagulopatia hereditária mais comum na população com uma prevalência de 1,1% na população geral. Para o seu diagnóstico são utilizados diversos métodos como o teste do cofator da ristocetina, que é amplamente utilizado na rotina laboratorial por ser considerado padrão-ouro na avaliação da função do fator de von Willebrand e por estar diminuído em todos os casos da doença. O kit comercial de plaquetas liofilizadas é importado, de elevado custo e possui uma validade de 30 dias após sua reconstituição se conservado de 2C a 8C. Devido à baixa prevalência da DvW na população, muitas vezes não há uma grande quantidade de exames a serem realizados, fazendo com que os plasmas desses pacientes sejam congelados e armazenados até o momento onde apareça um número mínimo de pacientes. O estudo teve como objetivo padronizar uma técnica como alternativa na utilização de plaquetas fixadas em formalina e o seu teste em indivíduos saudáveis e com a suspeita da doença, onde foram avaliados a porcentagem de atividade expressa considerando o montante de aglutinação induzida pela ristocetina, que se relaciona proporcionalmente com a concentração do FvW e o percentual de atividade normal medido através do agregômetro. O estudo possui um caráter preliminar e apresentou-se viável à rotina laboratorial, e se faz necessário não só a coleta de um número amostral maior, mas também da análise de diversas variáveis (grupo sanguíneo, idade, hormônios, estresse, uso de medicamentos) para se estabelecer nessa população um valor de referência para essa técnica / The von Willebrand disease (VWD) is caused by a qualitative or quantitative deficiency of von Willebrand Factor (vWF) and is considered the most common hereditary bleeding disorder in the population with a prevalence of 1.1% in the general population. For its diagnosis, several methods are used to test the ristocetin cofactor, which is widely used in laboratories because it is considered the gold standard in assessing the function of von Willebrand factor and to be decreased in all cases of the disease. The imported commercial kit of lyophilized platelets is costly and expires 30 days after reconstitution if stored from 2C to 8C. Due to the low prevalence of v WD in the population, usually there are not enough tests to be done, making it necessary to freeze and store the plasma of these patients until there is a minimum number of patients for testing. This study aimed to standardize a technique as an alternative to the use of formalin-fixed platelets and to test it in healthy subjects with suspected disease. Thus, the percentage of expressed activity was evaluated considering the amount of agglutination induced by ristocetin proportionally related to the concentration of vWF and the percentage of normal activity measured by an aggregometer. The study has a preliminary character and showed to be feasible for laboratory routine, and it is necessary not only to collect a larger sample size, but also to analyze several variables (blood group, age, hormones, stress, use of drugs) to establish a reference value for this technique in the population

Orientadores: Sergio Marangoni, Luis Alberto Ponce Soto / Dissertação ( mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T23:07:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Minaya_MagalyAlejandraBrousett_M.pdf: 1843449 bytes, checksum: 708051f59ddc90ca5b185a088f8d589d (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os venenos de serpentes contêm uma variedade de proteínas que são estudadas no mundo pela importância biológica e farmacológica. Dentro de sua complexa composição, o veneno apresenta enzimas proteases, como as metaloproteases e serinoproteases que estão envolvidas em distúrbios hemostáticos e coagulantes, interferindo na agregação plaquetária. O presente trabalho teve como objetivo purificar, caracterizar bioquimicamente e avaliar as atividades farmacológicas de uma serinoprotease com atividade coagulante, do veneno de Bothrops barnetti nomeada TLBbar. A purificação envolveu dois passos cromatográficos, exclusão molecular em Sephadex G-75 e HPLC de fase reversa em coluna analítica Supelco C8, obtendo-se um alto grau de pureza e homogeneidade, revelado com SDSPAGE e com Mr ~ 28,5 kDa. TLBbar mostrou homlogia sequêncial com outras serinoproteases de veneno de serpentes, evidenciado através de espectrometria de massas MS/MS, como a trombina-like denominada Calobin, isolada e caracterizada a partir de Agkistrodon caliginosus (Korean Viper), Crotalase (Crotalus adamanteus), flavoxobin (Trimeresurus flavoviridis) entre outras. Observa-se na homologia que as serinoproteases, com as quais foi comparada a TLBbar, apresentam os aminoácidos conservados do sítio catalítico (His57, Asp102, Ser195), já na sequencia da TLBbar demonstra-se a presença do aminoácido histidina na posição 57 da tríada catalítica. Este resultado em conjunto com as atividades enzimáticas e biológicas, confirmam que TLBbar pertence ao grupo de enzimas serinoproteases com atividade trombina-like. A enzima apresenta sua maior atividade proteolítica a 37oC e em pH 8, sendo essa alterada na presença de íons divalentes por interações eletrostáticas entre enzima e substrato. TLBbar apresenta um comportamento michaeliano segundo os estudos cinéticos realizados com o substrato BApNA, revelando um Vmax e Km de 0,42nmol/min e 0,433mM, respectivamente. Em presença de heparina mantem 80% de sua atividade, e apresenta relativa estabilidade frente a SBT-I e agentes quelantes como EDTA e EGTA. TLBbar tem atividade coagulante sobre fibrinogênio bovino (atividade fibrigenolítica), formando um coágulo semi-rígido, pois não ativa o fator XIII da cascata de coagulação como faz a trombina que resulta na formação de um coágulo consistente. Sua atividade fibrigenolítica foi evidenciada pela liberação dos fibrinopeptídios A, pela degradação da cadeia A? do fibrinogênio, a qual foi inibida por PMSF e Leupeptina, confirmando sua classificação no grupo das serinoproteases. A eficiência desta atividade fibrigenolítica foi observada entre 30 oC e 40oC durante 2 horas de incubação e alterada em presença de íons divalentes como cálcio, magnésio e bário, ressaltando a maior atividade fibrigenolítica com o cálcio. A enzima purificada TLBbar foi capaz de agregar plaquetas e em concentração de 2,5?g evidenciou comportamento semelhante à trombina. Interessante que TLBbar estimula a agregação plaquetária assim como também retarda dita atividade no tempo quando comparado com o controle (trombina). Este fato é devido a sua mudança de conformação estrutural que corresponde à ativação plaquetaria a qual ocorre com mais lentidão (nos primeiros minutos), em comparação a transformação causada pela trombina, tendo como conseqüência a liberação mais lenta de agentes como ADP e tromboxanos A2, necessários para alcançar a adesão plaquetária. A serinoprotease TLBbar não apresenta toxicidade, pois não possui atividades edematogênica, hemorrágica e miotóxica in vivo. Por outro lado, TLBbar evidencia capacidade de dissolver o coágulo de fibrina gerado pela trombina após 36 horas de incubação a 37oC, esta atividade foi inibida com PMSF nas mesmas condições, estes dados sugerem a presença de atividade fibrinolítica / Abstract: The snake venoms contain variety of proteins and are studied in the world for biological and pharmacological importance, within their complex composition of the venom protease enzymes present, as metalloproteases and serineproteases that cause hemostatic disorders, coagulantes and platelet aggregation. The present dissertation aimed to purify, biochemically characterize and evaluate the pharmacological activities of a serine protease with coagulant activity named TLBbar from Bothrops barnetti. Its purification involved two chromatographic steps, molecular exclusion in Sephadex G-75 and reversedphase HPLC with a Supelco C8 analytical column, obtaining high purity and homogeneity revealed by SDS-PAGE with Mr ~ 28.5 kDa. The enzyme has its highest proteolytic activity at 37 °C and at pH 8, which is altered in the presence of divalent ions by electrostatic interactions between enzyme and substrate. TLBbar presents a Michaelis-Menten behavior according the kinetic studies revealing a Km and Vmax of 0.433 mM and 0.42 nmol/min, respectively. TLBbar in the presence of heparin maintains its activity around 80%, although has relative stability compared with SBT-I and chelating agents such as EDTA and EGTA. TLBbar has coagulant activity on bovine fibrinogen, forming a clot semi-rigid, different the action of thrombin that results in the formation of a clot consistent. Its fibrigenolytic activity was evidenced by the release of fibrinopeptides A, by degradation of fibrinogen A? chain, which was inhibited by PMSF and Leupeptin, confirming its classification in the group of serineproteases. The efficiency of this activity was observed between 30 and 40 °C during 2 hours of incubation and changed in the presence of divalents ions such as calcium, magnesium and barium, brings out the greatest fibrigenolytic activity with calcium. The purified enzyme TLBbar was capable of aggregating platelets; 2.5?g of concentration evidence similar behavior to thrombin, TLBbar interesting stimulates platelet aggregation as well as delay time in such activity when compared with control (thrombin). We suggest that structural process of platelet activation occurs over a longer period of time with TLBbar as a result of release of ADP and thromboxane A2 agents that happen that occur with less speed to achieve platelet adhesion compared with thrombin. This enzyme not showed edematogenic-activity when compared with the activity caused by B. Barnetti snake venom, did not induce hemorrhagic nor myotoxic effect in vivo. On the other hand, TLBbar had proteolytic activity similar to thrombin, proven in the fibrigenolytic activity on bovine fibrinogen as measured in the release of fibrinopeptides in times of release similar to the control, the proteolytic activity was also evidenced by the ability to dissolve fibrin clot generated by Thrombin after 36 hours of incubation at 37 °C, the activity was inhibited with PMSF under the same conditions, these data suggest the presence of fibrinolytic activity / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Joyce Maria Annichino-Bizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T17:15:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_ErichViniciusde_D.pdf: 3311580 bytes, checksum: 0e2725586b5aed078f6a78de1edd1d14 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A doença arterial oclusiva (DAO) é a principal causa de morbidade e mortalidade em países industrializados. Com o aumento da expectativa de vida da população mundial a DAO tornou-se um problema de saúde publica também em países em desenvolvimento. O tratamento de uma das formas graves de DAO, a isquemia crítica de membros inferiores (ICMI), normalmente oferece alívio temporário e muitas vezes requer a amputação do membro afetado. No Brasil, a sobrevida desses pacientes é comparável a algumas formas de câncer. Desta forma, a busca de estratégias terapêuticas alternativas à amputação é fundamental para estes pacientes. Nesse estudo, nós exploramos o papel da angiogênese terapêutica induzida por terapia gênica (TG) em modelos animais ICMI. A angiogênese terapêutica se baseia na utilização de fatores de crescimento vascular sob a forma de proteínas recombinantes ou TG. A reposição de proteína deve ser mantida por períodos prolongados e normalmente requer administração sistêmica. Isto aumenta o risco de formação de vasos em locais indesejáveis como tumores ocultos ou retina. Estudos clínicos anteriores demonstraram que a indução de angiogênese terapêutica utilizando apenas um fator pró-angiogênico é eficaz. No entanto, esses estudos sugerem que integridade destes neovasos é deficiente pela ocorrência de edema de membros inferiores ou proteinúria após a monoterapia angiogênica.Neste trabalho avaliamos a eficácia da TG combinada usando vetores não virais com os genes de dois fatores de crescimento: FGF-2 e PDGF-BB, em comparação com a transferência gênica isolada do VEGF-A. A escolha destes dois fatores deveu-se ao fato de eles atuarem em etapas distintas e complementares do processo de formação vascular: formação e estabilização dos novos vasos, respectivamente. Para este fim utilizamos o modelo de isquemia da pata posterior em ratos, e um novo método não invasivo, o 99mTc-sestamibi para avaliação da neovascularização. A expressão combinada do FGF-2 e PDGF-BB induziu a formação de neovasos com a mesma intensidade e com a mesma relevância funcional que o uso do VEGF-A isolado. No entanto, a estratégia combinada se mostrou mais atraente por induzir a formação de vasos mais íntegros, e necessitar de doses individuais 50% menores de cada gene terapêutico. Em conjunto esses dados demonstram que a TG combinada com FGF-2/PDGF-BB é eficaz e potencialmente mais segura para o tratamento da ICMI. Com o objetivo de definir fatores que afetam a resposta angiogênica pós-natal, nós investigamos o papel da trombina durante a indução de neovasos. Animais receberam diversos inibidores da coagulação imediatamente ou após 72 horas da indução de isquemia periférica. Nós documentamos que a inibição da coagulação sangüínea na fase aguda da isquemia diminui a resposta angiogênica, mas esse efeito não é observado quando a anticoagulação é iniciada após 72 horas. A ativação dos receptores celulares da trombina (e outras proteases) pode oferecer um novo alvo para otimizar a resposta angiogênica pós- natal. Em conjunto, os resultados obtidos formam a base para estudos futuros utilizando a TG combinada com FGF-2/PDGF-BB como uma alternativa potencialmente eficaz e segura paro tratamento da ICMI / Abstract: Arterial occlusive disease (AOD) is the main cause of mortality and morbidity in industrialized countries. Global improvements in life expectancy have turned it into a public health problem in developing countries as well. The treatment of one of the severe presentations of DAO, which is critical limb ischemia (CLI) normally offers temporary relief to symptoms, often requiring major amputations of the affected limb. In Brazil, the prognosis of CLI is similar to that of some forms of cancer. Therefore, new therapeutic strategies alternative to amputations are necessary for these patients. In the present work we evaluated the role of therapeutic angiogenesis induced by gene therapy (GT) in animal models of CLI. Therapeutic angiogenesis consists in the use of vascular growth factors by means of recombinant proteins or GT. When using protein formulations, therapy must be maintained for prolonged periods and normally involves systemic administration. These requirements increase the risk of inducing the formation of neovessels in undesired places such as occult malignant lesions or retina. Previous studies have demonstrated that therapeutic angiogenesis using a single pro-angiogenic factor is effective. However, these studies suggest that the new formed vessels are leaky, as evidenced by the occurrence of lower limb edema and proteinuria after pro-angiogenic monotherapy. In the present work we evaluated efficacy of a combined GT strategy using non-viral vectors expressing two vascular growth factors: FGF-2 and PDGF-BB, and compared this strategy to the gene transfer of VEGF-A alone. The choice of these two growth factors was due to their complementary roles in the process of vascular development: formation and stabilization of new vessels. In order to do so we used a hindlimb ischemia model in rats, and a new non-invasive method based on 99mTc-sestabimi scintigrapy, to evaluate the neovascularization response. Dual gene transfer of FGF-2 and PDGF-BB using non-viral vectors was able to induce a similar revascularization response as VEGF-A alone, both in terms of anatomical and functional parameters. In regard to safety, the dual gene transfer strategy was more attractive because it was able to induce more stable capillaries, and required a 50% lower individual dose of each therapeutic gene. Taken together our data demonstrate that this dual gene transfer strategy is an effective safer strategy for the treatment of CLI by therapeutic angiogenesis. In order to investigate factors that might affect the revascularization post-natal response, we further investigated the role of thrombin during the induction of neovascularization. Animals were treated with different coagulation inhibitors immediately after or 72 hours after the creatin of hindlimb ischemia in rats. We documented that the inhibition of blood coagulation in the acute phase of ischemia impairs the angiogenic response. In contrast, this effect was not observed when anticoagulation was initiated after 72 hours of ischemia. The activation of cellular receptors of thrombin and other proteases might therefore offer an new target to optimize post-natal revascularization. Based on our results, future studies using combined GT with FGF-2 and PDGF-BB are warranted in order to translate these findings into a new and safer strategy for the treatment of CLI / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:50:50Z : No. of bitstreams: 1 almeidajunior_p_me_araca.pdf: 2659878 bytes, checksum: 7b05cfcaf4408ab253ef351ae3eb5826 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A hemorragia após extração dental constitui-se em uma das complicações mais freqüentes na prática da cirurgia oral. Devido à dificuldade para se exercer manobras como pinçamentos e ligaduras de vasos neste tipo de hemorragias, existe a possibilidade do preenchimento do alvéolo com materiais hemostáticos de ação tópica. O propósito deste estudo foi analisar a influência de três hemostáticos tópicos (Hemostop®, Pro Tape® e ViscoStat®) na cronologia do processo de reparo em feridas de extração dental por meio de uma análise histológica e histométrica. Para tanto foram utilizados 60 ratos (Wistar) machos divididos em quatro grupos de 15 animais cada. Todos os animais foram submetidos à extração do incisivo central superior direito, seguido ou não da colocação de agente hemostático entre o terço médio e apical do alvéolo dental, e posterior sutura com fio reabsorvível. Em grupos de cinco, os animais foram sacrificados aos 7, 14 e 28 dias pós-operatórios por inalação excessiva de éter sulfúrico. Suas maxilas foram separadas, fixadas em formalina, descalcificadas em EDTA e incluídas em parafina. Foram realizados cortes de 6 æm de espessura e corados com Hematoxilina e Eosina, e Tricrômio de Masson. Após a análise histológica, em microscópio óptico; e histometria óssea, com o software ImageLab, os resultados foram submetidos ao teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis. Pela metodologia aplicada foi possível concluir que: 1) houve atraso na cronologia do processo de reparo alveolar em todos os grupos tratados; 2) os materiais analisados provocaram intensa reação inflamatória no tecido adjacente; 3) em todos os períodos estudados (7, 14 e 28 dias), a análise histométrica revelou maior neoformação óssea nos animais do grupo 1 (controle). No entanto, a análise estatística constatou diferença significante (p<0,05) somente no 70 dia,... / The hemorrhage after dental extraction is one of the most frequent complications in practice of the oral surgery. Due to the difficulty to exercise maneuvers as arrestty and ligature of blood vessel in this type of hemorrhages, exists the possibility of the filling of the alveolus with hemostatics materials of topical action. The purpose of this study was to analyze the influence of three topical hemostatics (Hemostop®, Pro Tape® and ViscoStat®) in the chronology of the repair process in wounds of dental extraction through a histologic and histometric analysis. For such, 60 male's rats (Wistar) were used divided in four groups of 15 animals each. All the animals were submitted to the extraction of the right superior central incisor, followed or not of the placement of hemostatics agent among the medium and apical third of the dental alveolus, and subsequent suture with reabsorble filament. In groups of five, the animals were sacrificed to the 7, 14 and 28 postoperative days by excessive inhalation of sulfuric ether. Your maxillaries were separate, fixed in formalin solution, decalcified in EDTA and included in paraffin. Cuts of 6 æm of thickness were accomplished and stained with hematoxylin and eosin, and Masson's trichromic. After the histologic analysis, in optical microscope; and histometric bony, with the software ImageLab, the results were submitted to the no-parametric test of Kruskal-Wallis. For the applied methodology it was possible conclude that: 1) there was delay in the chronology of the alveolar repair process in all the treated groups; 2) the analyzed materials instigated a intense inflammatory reaction in the adjacent tissue; 3) in all the studied periods (7, 14 and 28 days), the histometric analysis revealed larger bony neoformation in the animals of the group 1 (control group)...(Complete abstract click electronic access below)

Orientadores: Elinton Adami Chaim, Jose Vassallo, Joyce Maria Annichino Bizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T21:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souto_LuisRicardoMartinhao_D.pdf: 19878737 bytes, checksum: 1bbe9e3450d7a801d05771b6998776a4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Cirurgias plásticas em pacientes que foram previamente submetidos à gastroplastia redutora apresentam altos índices de complicações, destacando-se maior sangramento nos períodos intra e pós-operatórios. A causa desse sangramento é desconhecida; postula-se que haja alterações de hemostasia não detectadas pelos exames pré-operatórios de rotina ou que esses pacientes tenham vasos subcutâneos em número e/ou calibre aumentados. O objetivo desse estudo foi avaliar e comparar a hemostasia e o número e calibre de vasos subcutâneos em dois grupos de pacientes submetidos à abdominoplastia, um deles com história de gastroplastia redutora prévia pela técnica de Fobi-Capella (grupo I) e o outro sem antecedentes de obesidade (grupo II). Cada um dos grupos foi composto por 10 pacientes do sexo feminino. Foram dosadas vitaminas C e K no período pré-operatório. Em diferentes momentos (antes, durante e após as cirurgias) foram realizados exames laboratoriais rotineiros e de dosagem de fatores de coagulação, além de tromboelastografia. Ao final de cada cirurgia, foram colhidas amostras de tecido subcutâneo de seis diferentes topografias abdominais. O sangramento durante as cirurgias foi medido de forma indireta, através de contagem e pesagem de compressas ao final de cada procedimento. Os resultados dos exames laboratoriais e tromboelastografia foram comparados entre os dois grupos de pacientes. Foi também realizado estudo imunoistoquímico das amostras de tecido subcutâneo com anticorpos anti-CD34 (antígeno de superfície presente em vasos e células imaturas hematopoéticas) e avaliadas a densidade de microvasos (MVD) e as áreas endoteliais percentual (AEnd%) e média (AEndM), através de sistema de análise de imagem computadorizado. A análise estatística (Mood Median Test) mostrou sangramento maior (p = 0,007), com tempo de protrombina aumentado (p = 0,007) e dosagem de fator II diminuída no período intraoperatório (p = 0,007) e de fator X diminuída em todos os períodos avaliados nas pacientes do grupo I. A tromboelastografia, que avalia a hemostasia globalmente e no momento da coleta, não mostrou diferenças dos parâmetros avaliados entre os grupos. Demonstraram-se maiores concentrações de vitamina K no grupo I em relação ao grupo II. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os valores de MVD obtidos a partir de diferentes sub-regiões abdominais (p = 0,565) nem quanto aos valores de MVD (p = 0,88), AEnd% (p = 0,364) e AEndM (p = 0,257) entre os grupos I e II. O tamanho das peças cirúrgicas e o tempo das cirurgias foram maiores no grupo I (p = 0,007). O maior sangramento durante cirurgias plásticas realizadas em pacientes previamente submetidas à gastroplastia redutora não pode ser explicado por alterações de hemostasia verificada através de exames laboratoriais de coagulação, dosagem de fatores e tromboelastografia, por deficiências de vitaminas C ou K ou por um maior número de vasos sanguíneos, por uma malha vascular mais extensa ou pela presença de vasos mais calibrosos no tecido celular subcutâneo dessas pacientes. Os dados favorecem a hipótese de que as retiradas de maiores quantidades de tecido e o maior tempo das cirurgias nas pacientes do grupo I podem determinar maior ativação da coagulação e consumo dos fatores, com maior sangramento. / Abstract: Plastic surgery procedures performed in patients who previously underwent weight reducing gas troplasty present a high risk for medical complications, one of the most severe being bleeding during the perioperative period. Although the cause of this bleeding is currently unknown, it is postulated that these patients may present alterations in hemostasis not detected by routine coagulation tests or an increase in microvascular density and/or in the diameter of subcutaneous vessels. The purpose of this study was to evaluate and compare the hemostasis and the number and caliber of subcutaneous vessels in two groups of patients undergoing abdominoplasty, one of them with history of previous weight reducing gastroplasty performed in accordance with the Fobi-Capella technique (group I) and the other without obesity backgrounds (group II). Each group was composed by ten female patients. Vitamins C and K were measured at preoperative period. At the beginning, during, and at the end of surgeries, samples were collected to determine the coagulogram (prothrombin and activated partial thromboplastin times), measurements of coagulation factors and thromboelastography. At the end of each surgery, samples of subcutaneous tissue were collected from six different abdominal topographies. Bleeding during intraoperative period was assessed indirectly by counting and weighing the compresses at the end of each surgical procedure. Data obtained from laboratorial tests and thromboelastography were compared between the groups I and II. Subcutaneous vessels were also assessed by immunohistochemistry using the pan-endothelial marker CD34 and quantified through the variables "microvessel density (MVD), percentage (%EndA) and mean (MEndA) endothelial areas" using computer assisted technology. The statistical analysis (Mood Median Test) showed superior bleeding (p = 0.007), increased prothrombin time (p = 0.007) and factor II (FII) decreased during the intraoperative period (p = 0.007) and factor X (FX) decreased during all studied operative periods in the group I. Thromboelastography, which assess the full process of hemostasia in real time, did not show differences between the groups. Greater concentrations of vitamin K were demonstrated in group I compared to group II. There were not statistically significant differences among the MVD values obtained from different abdominal subregions (p = 0.565) nor between groups I and II regarding the values of MVD (p = 0.88), %EndA (p = 0.364) and MEndA (p = 0.257). The size of the surgical pieces and the duration of surgeries were greater in group I (p = 0.007). The more intense bleeding observed during plastic surgeries carried out in patients that previously underwent weight reducing gastroplasty can not be quite explained by alterations in hemostasis when it is assessed through coagulation laboratorial tests, measurements of coagulation factors and thromboelastography, by decreased levels of vitamins K and C, by a larger number of blood vessels, by a more extensive vascular network, or by the presence of vessels with larger calibers in the subcutaneous adipose tissue of these patients when compared to patients without obesity backgrounds. The results indicate that the greater surgical trauma and the longer duration of surgeries in group I may lead to increased coagulation activation and consume of coagulation factors resulting in more intense bleeding. / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

O complexo salivar da sanguessuga H. depressa é composto pelas glândulas salivares e probóscide. Análises bidimensionais (2D) mostraram que a maioria das proteínas apresentam pI entre 3.5 à 9.5 e MM entre 10 à 105 kDa. O mapa 2D do complexo salivar apresentou 352 spots totais, sendo 249 exclusivos da saliva (corado por nitrato de prata) e 219 spots totais (corado por Coomassie Blue). As proteínas foram identificadas após sequenciamento tandem MS (proteoma) pela complementariedade às sequências traduzidas do cDNA (transcriptoma). As proteínas mais abundantes foram: antiagregante plaquetário; miohemeritrina e anidrase carbônica. Estas proteínas devem exercer um papel na digestão ou anticoagulação do sangue durante a alimentação. A zimografia também identificou uma protease gelatinolítica (45 kDa). Porém, lefaxin (inibidor de FXa) e hementerina (fibrinogenolítico e inibidor de agregação plaquetária) não foram identificados por estas técnicas biotecnológicas, o que mostra a necessidade de técnicas adicionais para a completa elucidação da constituição desta amostra. / The salivary complex from H. depressa leech is composed of salivary gland and proboscis. Two-dimensional (2D) analysis showed that majority of proteins have pI from 3.5 to 9.5 and MW from 10 to 105 kDa. The 2D gel of salivary complex showed 352 total spots, 249 of them were from saliva (silver stained) and 219 total spots (Coomassie Blue stained). Proteins were identified after tandem MS sequencing (proteome) and complementar analysis of translated sequences from cDNA (transcriptome). The most abundant proteins were: antiplatelet protein; myohemerytrin; carbonic anhydrase. These proteins may have a role in digestion or antihemostatic system during blood feeding. The zymographic assay identified a gelatinolytic protein (45 kDa). But, lefaxin (inhibitor of Fxa) and hementerin (fibrinogenolytic and antiplatelet function) were not identified by these biotechonolgical techniques, showing that additional techniques are necessary for complete knowledge about the composition of this sample.

O complexo salivar da sanguessuga H. depressa é composto pelas glândulas salivares e probóscide. Análises bidimensionais (2D) mostraram que a maioria das proteínas apresentam pI entre 3.5 à 9.5 e MM entre 10 à 105 kDa. O mapa 2D do complexo salivar apresentou 352 spots totais, sendo 249 exclusivos da saliva (corado por nitrato de prata) e 219 spots totais (corado por Coomassie Blue). As proteínas foram identificadas após sequenciamento tandem MS (proteoma) pela complementariedade às sequências traduzidas do cDNA (transcriptoma). As proteínas mais abundantes foram: antiagregante plaquetário; miohemeritrina e anidrase carbônica. Estas proteínas devem exercer um papel na digestão ou anticoagulação do sangue durante a alimentação. A zimografia também identificou uma protease gelatinolítica (45 kDa). Porém, lefaxin (inibidor de FXa) e hementerina (fibrinogenolítico e inibidor de agregação plaquetária) não foram identificados por estas técnicas biotecnológicas, o que mostra a necessidade de técnicas adicionais para a completa elucidação da constituição desta amostra. / The salivary complex from H. depressa leech is composed of salivary gland and proboscis. Two-dimensional (2D) analysis showed that majority of proteins have pI from 3.5 to 9.5 and MW from 10 to 105 kDa. The 2D gel of salivary complex showed 352 total spots, 249 of them were from saliva (silver stained) and 219 total spots (Coomassie Blue stained). Proteins were identified after tandem MS sequencing (proteome) and complementar analysis of translated sequences from cDNA (transcriptome). The most abundant proteins were: antiplatelet protein; myohemerytrin; carbonic anhydrase. These proteins may have a role in digestion or antihemostatic system during blood feeding. The zymographic assay identified a gelatinolytic protein (45 kDa). But, lefaxin (inhibitor of Fxa) and hementerin (fibrinogenolytic and antiplatelet function) were not identified by these biotechonolgical techniques, showing that additional techniques are necessary for complete knowledge about the composition of this sample.