GUIMARÃES FILHO, Artur. Alterações metabólicas e enzimáticas na regeneração hepática em ratos alimentados com dietas suplementar de L-Glutamina e Alfa-Cetoglutarato. 2012. 181 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T16:48:08Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_aguimarãesfilho.pdf: 4581094 bytes, checksum: 84a3cc331dc0857a6d77bfa6ca795bb5 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T16:49:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_aguimarãesfilho.pdf: 4581094 bytes, checksum: 84a3cc331dc0857a6d77bfa6ca795bb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-14T16:49:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_aguimarãesfilho.pdf: 4581094 bytes, checksum: 84a3cc331dc0857a6d77bfa6ca795bb5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Studies have shown that partial hepatectomia (HP) with removal of two thirds of the organ, in rodents, is followed by growth of remnant liver. In eukaryotic cells the enzyme malate dehydrogenase, from Krebs cycle, can be found in the cytoplasm (cytoplasmic malate dehydrogenase (MDH1) and in the mitochondrial matrix mitochondrial malate dehydrogenase (MDH2). Ammonia, a chemical compound that is toxic to animals, is produced in the course of metabolism. The liver actively participates in the mechanism of detoxification of ammonia. Two enzymes are involved in the disposal of excess ammonia in the cytosol: the glutamate dehydrogenase and glutamine synthetase which reduce α-ketoglutarate (AKG) to glutamate and glutamate to glutamine (GLN), respectively. Considering the effects of AKG and GLN in the liver of rodents, this study aims at assessing the metabolic enzyme changes that take place in regenerating livers after HP in rats treated with these amino acids. Anesthetized rats (Ketamine 50mg/mL + Xilazine 2% -1:0,5 mL) were submitted to HP and treated with calcium caseinate (CCA), L-glutamine (GLN) or ornithine alpha ketoglutarate (OKG) solutions administered by gavage, according to weight of each animal (0, 5gKg). One hundred and eight rats were distributed in 6 groups (n=18) and named according to the treatment used: G-1= Laparotomy (LAP) + CCA; G-2-HP+CCA; G-3 = LAP + GLN; G-4 HP + GLN; G-5 = LAP +ACG; G-6 = HP + ACG. Each group was redistributed into 3 subgroups. Blood and liver samples were collected on the 3rd, 7th and 14th postoperative days for quantification of metabolites (glucose, ketone bodies, lactate, pyruvate and ATP) and enzymes (MDH1 and MDH2). There was an increase of glycemia in 3rd day both in rats subjected to LAP and treated with ACG (G-5) as well as those submitted to HP and treated with GLN (G-3). There was significant reduction in expression of MDH1 enzyme in the liver in the 3rd and 14th day in rats subjected to LAP and treated with ACG and GLN (G-5 and G-3) compared to the control G-1 as well as in the expression of the enzyme MDH2 in 3rd day in the liver of G-6 and G-2 rats. Moreover no changes occurred in the expression of MDH2 in Group G-4 in relation to G-2. It is concluded that the surgical trauma in animals subjected to LAP or HP and treated with ACG or GLN induces increased glycemia in post-operative stage. ACG or GLN promotes reduction in expression of MDH1 enzyme in the liver of rats subjected to surgical trauma in 3rd and 14 days post surgery. ACG promotes reduction in the expression of MDH2 in the liver of rats undergoing HP or LAP only on the 3rd and 14 days post surgery, respectively. GLN given to HP rats does not alter the expression of MDH2 in the liver during the first 14 days post surgery. / Estudos demonstraram que a hepatectomia parcial (HP) com remoção de dois terços do órgão, em roedores, é seguida por crescimento do fígado remanescente. Em células eucariontes a enzima malato desidrogenase, do ciclo de Krebs, pode ser encontrada no citoplasma (malato desidrogenase citoplásmica – (MDH1) e na matriz mitocondrial (malato desidrogenase mitocondrial - MDH2). A amônia, um composto químico tóxico para os animais, é produzida no curso do metabolismo. O fígado participa ativamente do mecanismo de detoxificação da amônia. Duas enzimas participam da eliminação do excesso de amônia do citosol: a glutamato desidrogenase e a glutamina sintetase que reduzem o alfa-cetoglutarato (ACG) em glutamato e glutamato em glutamina (GLN), respectivamente. Considerando os efeitos do ACG e da GLN no fígado de roedores, este estudo tem como objetivo avaliar as alterações metabólicas e enzimáticas observadas em fígados em regeneração após HP em ratos tratados com esses aminoácidos. Ratos anestesiados (Ketamina 50mg/mL + Xilazina 2% -1:0,5 mL) foram submetidos a HP e tratados com soluções de caseinato de cálcio (CCA), L-glutamina (GLN) ou ornitina alfa cetoglutarato (OKG), administradas por gavagem, de acordo com massa de cada animal (0,5g/Kg). Cento e oito ratos foram distribuídos em 6 grupos (n=18) e denominados conforme o tratamento usado: G-1= Laparotomia (LAP) + CCA; G-2= HP + CCA; G-3 = LAP + GLN; G-4 = HP + GLN; G-5= LAP + ACG; G-6 = HP + ACG. Cada grupo foi redistribuído em 3 subgrupos. Amostras (sangue e fígado) foram coletadas no 3º, 7º e 14º dias do pós-operatório, para quantificação de metabólitos (glicose, corpos cetônicos, piruvato, lactato e ATP) e enzimas (MDH1 e MDH2). Houve aumento da glicemia no 3º dia tanto nos ratos submetidos a LAP e tratados com ACG (G-5) bem como naqueles submetidos a HP e tratados com GLN (grupo G-3 ).Houve redução significante na expressão da enzima MDH1 no fígado no 3º e 14º dia nos ratos submetidos a LAP e tratados com ACG e GLN (G-5 e G-3) em relação ao controle G-1 bem como na expressão da enzima MDH2 no 3º dia no fígado dos ratos do G-6 em relação ao G-2. Também não foram observadas alterações na expressão da enzima MDH2 no grupo G-4 em relação ao grupo G-2. Conclui-se que o trauma cirúrgico em animais submetidos a LAP ou HP e tratados com ACG ou GLN induz aumento da glicemia na fase pós-operatoria. A oferta de ACG ou GLN promove redução na expressão da enzima MDH1 no fígado de ratos submetidos ao trauma cirúrgico no 3º e 14º dias pós cirurgia. A oferta de ACG promove redução na expressão da enzima MDH2 no fígado de ratos submetidos à HP ou somente LAP no 3º e 14º dias pós cirurgia, respectivamente. A oferta de GLN à ratos hepatectomizados não altera a expressão da enzima MDH2 no fígado desses animais nos primeiros 14 dias pós cirurgia.

A insuficiência hepática aguda é caracterizada por morte celular maciça de hepatócitos. As primeiras células que se ativam após uma lesão hepática são as células de Kupffer. Estas células secretam citocinas e produzem espécies reativas de oxigénio, causando a apoptose de hepatócitos. Em um estudo anterior, mostramos que plaquetas encapsuladas aumentam a sobrevida de animais em um modelo de insuficiência hepática aguda em 10 dias. Aqui investigamos como as plaquetas exercem o seu efeito benéfico precoce nesse modelo. Para isso, plaquetas encapsuladas ou cápsulas vazias foram implantadas em ratos submetidos a hepatectomia parcial de 90%. Os animais foram eutanasiados 1, 3, 6, 12, 24, 48 e 72 horas (n=6/grupo/hora) após hepatectomia. O fígado remanescente foi coletado para avaliar o estresse oxidativo, a atividade da caspase 3 e a expressão de genes relacionados ao estresse oxidativo ou função hepática. Além disso, os níveis de lipopolissacarideos no soro e no tecido foram medidos. O número de células de Kupffer do fígado remanescente foi avaliado. A interação de plaquetas encapsuladas e células de Kupffer foi investigada utilizando um sistema de co-cultura. Foi observado que os níveis de lipopolissacarideos foram semelhantes em ambos os grupos, assim como a expressão do gene de Tlr4 e Myd88, mas o Lbp foi maior no grupo plaquetas. O número de células de Kupffer no grupo plaquetas estava aumentado 1 hora após hepatectomia, voltando a níveis normais em seguida. No grupo controle estava aumentado às 6 até 72 horas. Além disso, as plaquetas modulam a expressão de interleucina-6 e interleucina-10 em células de Kupffer após 24 horas de co-cultura. Além disso, as plaquetas aumentam a atividade de superóxido dismutase e catalase e reduzem a peroxidação lipídica. Além disso, a atividade da caspase 3 também foi reduzida em animais que receberam plaquetas encapsuladas às 48 e 72 horas. A expressão da óxido nítrico sintase endotelial, do fator nuclear kappa B e interleucina-6 estavam elevados no grupo de plaquetas. A expressão do gene de albumina e do fator V também estavam aumentados no grupo plaquetas. Estes resultados indicam que as plaquetas interagem com as células de Kupffer e exercem o seu efeito benéfico através de redução do estresse oxidativo no fígado o que resulta em hepatócitos saudáveis e diminuição da apoptose. Além disso, estes efeitos são mediados por fatores parácrinos imediatamente após a lesão hepática. / Acute liver failure is characterized by massive hepatocyte cell death. Kupffer cells are the first cells to be activated after liver injury. They secrete cytokines and produce reactive oxygen species, leading to apoptosis of hepatocytes. In a previous study, we showed that encapsulated platelets increase survival in a model of acute liver failure. Here we investigate how platelets exert their early beneficial effect in this model. For that, encapsulated platelets or empty capsules were implanted in rats submitted to 90% partial hepatectomy. Animals were euthanized at 1, 3, 6, 12, 24, 48 and 72 hours (n = 6/group/time) after hepatectomy. Liver was collected to assess oxidative stress, caspase activity, and gene expression related to oxidative stress or liver function. Also, lipopolysaccharide (LPS) levels in serum and tissue were assessed. The number of Kupffer cells in the remnant liver was evaluated. Interaction of encapsulated platelets and Kupffer cells was investigated using a co-culture system. It was observed that LPS levels were similar in both groups, as well as gene expression of Tlr4 and Myd88, but Lbp was higher in platelet group. The number of Kupffer cells in platelet group was increased at 1 hour and then returned to normal levels; in control group it was increased from 6 to 72 hours. Platelets modulate Interleukin-6 and Interleukinl-10 expression in Kupffer cells after 24 hours of co-culture. In addition, platelets increase superoxide dismutase and catalase activity and reduce lipid peroxidation. Moreover, caspase 3 activity was also reduced in animals receiving encapsulated platelets at 48 and 72 hours. Gene expression of endothelial nitric oxide synthase, nuclear factor kappa B and Interleukin-6 were elevated in platelet group. Gene expression of albumin and factor V were also increased in platelet group. These results indicate that platelets interact with Kupffer cells in this model and exert their beneficial effect through reduction of oxidative stress that results in healthier hepatocytes and decreased apoptosis. Furthermore, these effects are mediated by paracrine factors immediately after liver injury.

O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento do gradiente de pressão venosa hepática (GPVH) em pacientes com cirrose. Foram estudados 83 pacientes portadores de hepatopatia crônica, com média de idade de 52,9 ± 10,1 anos, sendo 71,1% do sexo masculino. Todos realizaram estudo hemodinâmico hepático, sendo determinado o GPVH. Nestes doentes o GPVH foi analisado segundo distintas variáveis clínicas, enfatizando seu papel na avaliação da probabilidade de sangramento a partir de um nível discriminativo. Os pacientes foram seguidos em média por 16,6 ± 16,02 meses e divididos em grupos conforme o desfecho: óbito, realização de cirurgia de “shunt” porto-cava, de transplante hepático e ressangramento por ruptura de varizes de esôfago durante o seguimento, tendo sido realizadas comparações entre as médias do GPVH nos diferentes desfechos. O nível de significância estatística adotado de foi 0,05. Com os dados obtidos foram possíveis os seguintes resultados: - A média do GPVH nos pacientes com hepatopatia crônica foi de 15,26 ± 6,46 mmHg. - Não houve diferença estatística entre as médias do GPVH nos hepatopatas crônicos de etiologia alcoólica e não alcoólica. - O risco relativo para sangramento por varizes de esôfago foi maior nos pacientes com GPVH acima de 10 e 12mmHg, embora tenha havido sangramento em doentes com níveis inferiores a estes. - A média do GPVH foi significativamente maior nos pacientes que apresentaram sangramento durante o seguimento em relação àqueles que estiveram livres desta complicação. - A média do GPVH no grupo de pacientes que sangraram, que foram a óbito, que realizaram “shunt” porto-cava e que foram a transplante hepático foi significativamente maior do que aquela observada nos pacientes que evoluíram sem complicações. - Não foi identificado um nível crítico discriminativo do GPVH que estivesse relacionado ao prognóstico. - A determinação do GPVH, ressalvada uma complicação de seriedade, mostrou-se um método seguro. Dos resultados aqui observados, conclui-se que a determinação do GPVH é útil em predizer qual população de cirróticos está mais suscetível ao sangramento digestivo por ruptura de varizes, bem como em auxiliar na avaliação do prognóstico dos mesmos. / The objective of the present study was to evaluate the behavior of the hepatic venous pressure gradient (HVPG) in patients with chronic liver disease. Eighthy-three patients were studied, with a mean age of 52,9 + 10,1 years and 71,1% males. All were submitted to hepatic hemodynamic study and HPVG was determined. HVPG was analised according to differents clinicals events, pointing out its role in the evaluation of bleeding probability related to a critical discriminatory level. The patients were followed up on average for 16,6 + 16,02 months and divided into groups according to outcome: death, portocaval shunt surgery, liver transplant, and rebleeding by rupture of esophageal varices during follow-up. The various outcome groups were compared for HVPG. The level of significance set at 0,05. The following results were obtained: - Mean HVPG was 15,26 + 6,46 mmHg in patients with chronic liver disease. - There was no significant difference in HVPG between patients with cirrhosis of alcoholic and non-alcoholic etiology. - The relative risk for bleeding due to esophageal varices was higher in patients with HVPG above 10 and 12 mmHg, although bleeding also occurred among patients with levels lower than these. - Mean HVPG was significantly higher among patients who presented bleeding during follow-up than among those who did not present this complication. - Mean HVPG was significantly higher among patients who presented bleeding, who died, patients submitted to portocaval shunt and patients submitted to liver transplantation than among patients who progressed without complications. - We did not identify a critical discriminatory HVPG level related to prognosis. - HVPG determination proved to be a safe measure, except in one case. On the basis of the present results, we conclude that HVPG determination is useful in predicting which cirrhotic population is more susceptible to digestive bleeding due to varix rupture and also as a index prognostic for these patients.

A hepatectomia de 90% em murinos é um modelo de insuficiência hepática aguda. Recentemente, tem sido demonstrado que as plaquetas possuem um efeito importante na regeneração hepática. As plaquetas promovem a regeneração de tecidos através da liberação de fatores de crescimento tais como o Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e a Serotonina. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do plasma rico em plaquetas (PRP) em modelo de hepatectomia de 90% em ratos. Para isso, PRP ou medula óssea total (WBM) foram imobilizados em microcápsulas de alginato de sódio implantadas no peritônio de ratos imediatamente após a hepatectomia. O grupo controle recebeu cápsulas vazias (EC). Os animais foram sacrificados às 6, 12, 24, 48, 72 horas pós-hepatectomia (n=5-8/grupo/tempo) para avaliar a taxa de regeneração hepática, o índice mitótico, o índice de marcação com 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU), HGF sérico, e a expressão no fígado remanescente de 5Ht2b e Pdgf. A taxa de sobrevida em 10 dias foi avaliada em outro grupo de animais (n=20/grupo). Foi observado que o grupo PRP apresentou a maior taxa de sobrevida aos 10 dias apesar da menor taxa de regeneração hepática em todos os tempos. Já o grupo EC mostrou uma taxa de regeneração maior nas primeiras 72 horas. O índice mitótico foi maior para o grupo PRP às 48 horas, porém o índice de BrdU não foi diferente entre os grupos em nenhum tempo. A expressão de 5Ht2b e Pdgf foi elevada no grupo PRP às 72 horas, entretanto o HGF sérico não apresentou diferenças entre os grupos. Estes resultados sugerem que o efeito benéfico do PRP pode ser mediado pelo incremento gradual e uniforme da taxa de regeneração e por uma resposta a fatores mitogênicos como a serotonina e o PDGF. / Ninety percent hepatectomy in rodents is a model for acute liver failure. Recently, it has been reported that platelet has a strong effect enhancing liver regeneration, due to its several growth factors such as Platelet Derived Growth Factor (PDGF) and serotonin. The aim of this study was to investigate the role of Platelet-Rich Plasma on 90% hepatectomy in rats. Platelet rich-plasma (PRP) or Whole Bone Marrow (WBM) were microencapsulated in sodium alginate and implanted in the peritoneum of rats immediately after 90% hepatectomy. Control group received empty capsules (EC). Animals were sacrificed at 6, 12, 24, 48, and 72 hours post hepatectomy (n=5-8/group/time) to evaluate liver regeneration rate, mitotic index, 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) labeling index, serum HGF, and 5Ht2b and Pdgf expression in liver. Survival rate in 10 days was also evaluated in a different set of animals (n=20/group). PRP group showed the highest survival rate at 10 days despite the lowest liver regeneration rate at any time point. EC group showed the highest regeneration rate in the first 72 hours. Mitotic index was highest in PRP group at 48 hours although BrdU index did not show any difference among groups. Gene expression of 5Ht2b and Pdgf was both up-regulated at 72 hours in PRP group, whereas serum HGF did not show any differences among groups. These results suggest that the beneficial effect of PRP may be mediated by a gradual increase in the regeneration rate and a response to mitogenic factors such as serotonin and PDGF.

A insuficiência hepática aguda é caracterizada por morte celular maciça de hepatócitos. As primeiras células que se ativam após uma lesão hepática são as células de Kupffer. Estas células secretam citocinas e produzem espécies reativas de oxigénio, causando a apoptose de hepatócitos. Em um estudo anterior, mostramos que plaquetas encapsuladas aumentam a sobrevida de animais em um modelo de insuficiência hepática aguda em 10 dias. Aqui investigamos como as plaquetas exercem o seu efeito benéfico precoce nesse modelo. Para isso, plaquetas encapsuladas ou cápsulas vazias foram implantadas em ratos submetidos a hepatectomia parcial de 90%. Os animais foram eutanasiados 1, 3, 6, 12, 24, 48 e 72 horas (n=6/grupo/hora) após hepatectomia. O fígado remanescente foi coletado para avaliar o estresse oxidativo, a atividade da caspase 3 e a expressão de genes relacionados ao estresse oxidativo ou função hepática. Além disso, os níveis de lipopolissacarideos no soro e no tecido foram medidos. O número de células de Kupffer do fígado remanescente foi avaliado. A interação de plaquetas encapsuladas e células de Kupffer foi investigada utilizando um sistema de co-cultura. Foi observado que os níveis de lipopolissacarideos foram semelhantes em ambos os grupos, assim como a expressão do gene de Tlr4 e Myd88, mas o Lbp foi maior no grupo plaquetas. O número de células de Kupffer no grupo plaquetas estava aumentado 1 hora após hepatectomia, voltando a níveis normais em seguida. No grupo controle estava aumentado às 6 até 72 horas. Além disso, as plaquetas modulam a expressão de interleucina-6 e interleucina-10 em células de Kupffer após 24 horas de co-cultura. Além disso, as plaquetas aumentam a atividade de superóxido dismutase e catalase e reduzem a peroxidação lipídica. Além disso, a atividade da caspase 3 também foi reduzida em animais que receberam plaquetas encapsuladas às 48 e 72 horas. A expressão da óxido nítrico sintase endotelial, do fator nuclear kappa B e interleucina-6 estavam elevados no grupo de plaquetas. A expressão do gene de albumina e do fator V também estavam aumentados no grupo plaquetas. Estes resultados indicam que as plaquetas interagem com as células de Kupffer e exercem o seu efeito benéfico através de redução do estresse oxidativo no fígado o que resulta em hepatócitos saudáveis e diminuição da apoptose. Além disso, estes efeitos são mediados por fatores parácrinos imediatamente após a lesão hepática. / Acute liver failure is characterized by massive hepatocyte cell death. Kupffer cells are the first cells to be activated after liver injury. They secrete cytokines and produce reactive oxygen species, leading to apoptosis of hepatocytes. In a previous study, we showed that encapsulated platelets increase survival in a model of acute liver failure. Here we investigate how platelets exert their early beneficial effect in this model. For that, encapsulated platelets or empty capsules were implanted in rats submitted to 90% partial hepatectomy. Animals were euthanized at 1, 3, 6, 12, 24, 48 and 72 hours (n = 6/group/time) after hepatectomy. Liver was collected to assess oxidative stress, caspase activity, and gene expression related to oxidative stress or liver function. Also, lipopolysaccharide (LPS) levels in serum and tissue were assessed. The number of Kupffer cells in the remnant liver was evaluated. Interaction of encapsulated platelets and Kupffer cells was investigated using a co-culture system. It was observed that LPS levels were similar in both groups, as well as gene expression of Tlr4 and Myd88, but Lbp was higher in platelet group. The number of Kupffer cells in platelet group was increased at 1 hour and then returned to normal levels; in control group it was increased from 6 to 72 hours. Platelets modulate Interleukin-6 and Interleukinl-10 expression in Kupffer cells after 24 hours of co-culture. In addition, platelets increase superoxide dismutase and catalase activity and reduce lipid peroxidation. Moreover, caspase 3 activity was also reduced in animals receiving encapsulated platelets at 48 and 72 hours. Gene expression of endothelial nitric oxide synthase, nuclear factor kappa B and Interleukin-6 were elevated in platelet group. Gene expression of albumin and factor V were also increased in platelet group. These results indicate that platelets interact with Kupffer cells in this model and exert their beneficial effect through reduction of oxidative stress that results in healthier hepatocytes and decreased apoptosis. Furthermore, these effects are mediated by paracrine factors immediately after liver injury.

A hepatectomia de 90% em murinos é um modelo de insuficiência hepática aguda. Recentemente, tem sido demonstrado que as plaquetas possuem um efeito importante na regeneração hepática. As plaquetas promovem a regeneração de tecidos através da liberação de fatores de crescimento tais como o Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e a Serotonina. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do plasma rico em plaquetas (PRP) em modelo de hepatectomia de 90% em ratos. Para isso, PRP ou medula óssea total (WBM) foram imobilizados em microcápsulas de alginato de sódio implantadas no peritônio de ratos imediatamente após a hepatectomia. O grupo controle recebeu cápsulas vazias (EC). Os animais foram sacrificados às 6, 12, 24, 48, 72 horas pós-hepatectomia (n=5-8/grupo/tempo) para avaliar a taxa de regeneração hepática, o índice mitótico, o índice de marcação com 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU), HGF sérico, e a expressão no fígado remanescente de 5Ht2b e Pdgf. A taxa de sobrevida em 10 dias foi avaliada em outro grupo de animais (n=20/grupo). Foi observado que o grupo PRP apresentou a maior taxa de sobrevida aos 10 dias apesar da menor taxa de regeneração hepática em todos os tempos. Já o grupo EC mostrou uma taxa de regeneração maior nas primeiras 72 horas. O índice mitótico foi maior para o grupo PRP às 48 horas, porém o índice de BrdU não foi diferente entre os grupos em nenhum tempo. A expressão de 5Ht2b e Pdgf foi elevada no grupo PRP às 72 horas, entretanto o HGF sérico não apresentou diferenças entre os grupos. Estes resultados sugerem que o efeito benéfico do PRP pode ser mediado pelo incremento gradual e uniforme da taxa de regeneração e por uma resposta a fatores mitogênicos como a serotonina e o PDGF. / Ninety percent hepatectomy in rodents is a model for acute liver failure. Recently, it has been reported that platelet has a strong effect enhancing liver regeneration, due to its several growth factors such as Platelet Derived Growth Factor (PDGF) and serotonin. The aim of this study was to investigate the role of Platelet-Rich Plasma on 90% hepatectomy in rats. Platelet rich-plasma (PRP) or Whole Bone Marrow (WBM) were microencapsulated in sodium alginate and implanted in the peritoneum of rats immediately after 90% hepatectomy. Control group received empty capsules (EC). Animals were sacrificed at 6, 12, 24, 48, and 72 hours post hepatectomy (n=5-8/group/time) to evaluate liver regeneration rate, mitotic index, 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) labeling index, serum HGF, and 5Ht2b and Pdgf expression in liver. Survival rate in 10 days was also evaluated in a different set of animals (n=20/group). PRP group showed the highest survival rate at 10 days despite the lowest liver regeneration rate at any time point. EC group showed the highest regeneration rate in the first 72 hours. Mitotic index was highest in PRP group at 48 hours although BrdU index did not show any difference among groups. Gene expression of 5Ht2b and Pdgf was both up-regulated at 72 hours in PRP group, whereas serum HGF did not show any differences among groups. These results suggest that the beneficial effect of PRP may be mediated by a gradual increase in the regeneration rate and a response to mitogenic factors such as serotonin and PDGF.

O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento do gradiente de pressão venosa hepática (GPVH) em pacientes com cirrose. Foram estudados 83 pacientes portadores de hepatopatia crônica, com média de idade de 52,9 ± 10,1 anos, sendo 71,1% do sexo masculino. Todos realizaram estudo hemodinâmico hepático, sendo determinado o GPVH. Nestes doentes o GPVH foi analisado segundo distintas variáveis clínicas, enfatizando seu papel na avaliação da probabilidade de sangramento a partir de um nível discriminativo. Os pacientes foram seguidos em média por 16,6 ± 16,02 meses e divididos em grupos conforme o desfecho: óbito, realização de cirurgia de “shunt” porto-cava, de transplante hepático e ressangramento por ruptura de varizes de esôfago durante o seguimento, tendo sido realizadas comparações entre as médias do GPVH nos diferentes desfechos. O nível de significância estatística adotado de foi 0,05. Com os dados obtidos foram possíveis os seguintes resultados: - A média do GPVH nos pacientes com hepatopatia crônica foi de 15,26 ± 6,46 mmHg. - Não houve diferença estatística entre as médias do GPVH nos hepatopatas crônicos de etiologia alcoólica e não alcoólica. - O risco relativo para sangramento por varizes de esôfago foi maior nos pacientes com GPVH acima de 10 e 12mmHg, embora tenha havido sangramento em doentes com níveis inferiores a estes. - A média do GPVH foi significativamente maior nos pacientes que apresentaram sangramento durante o seguimento em relação àqueles que estiveram livres desta complicação. - A média do GPVH no grupo de pacientes que sangraram, que foram a óbito, que realizaram “shunt” porto-cava e que foram a transplante hepático foi significativamente maior do que aquela observada nos pacientes que evoluíram sem complicações. - Não foi identificado um nível crítico discriminativo do GPVH que estivesse relacionado ao prognóstico. - A determinação do GPVH, ressalvada uma complicação de seriedade, mostrou-se um método seguro. Dos resultados aqui observados, conclui-se que a determinação do GPVH é útil em predizer qual população de cirróticos está mais suscetível ao sangramento digestivo por ruptura de varizes, bem como em auxiliar na avaliação do prognóstico dos mesmos. / The objective of the present study was to evaluate the behavior of the hepatic venous pressure gradient (HVPG) in patients with chronic liver disease. Eighthy-three patients were studied, with a mean age of 52,9 + 10,1 years and 71,1% males. All were submitted to hepatic hemodynamic study and HPVG was determined. HVPG was analised according to differents clinicals events, pointing out its role in the evaluation of bleeding probability related to a critical discriminatory level. The patients were followed up on average for 16,6 + 16,02 months and divided into groups according to outcome: death, portocaval shunt surgery, liver transplant, and rebleeding by rupture of esophageal varices during follow-up. The various outcome groups were compared for HVPG. The level of significance set at 0,05. The following results were obtained: - Mean HVPG was 15,26 + 6,46 mmHg in patients with chronic liver disease. - There was no significant difference in HVPG between patients with cirrhosis of alcoholic and non-alcoholic etiology. - The relative risk for bleeding due to esophageal varices was higher in patients with HVPG above 10 and 12 mmHg, although bleeding also occurred among patients with levels lower than these. - Mean HVPG was significantly higher among patients who presented bleeding during follow-up than among those who did not present this complication. - Mean HVPG was significantly higher among patients who presented bleeding, who died, patients submitted to portocaval shunt and patients submitted to liver transplantation than among patients who progressed without complications. - We did not identify a critical discriminatory HVPG level related to prognosis. - HVPG determination proved to be a safe measure, except in one case. On the basis of the present results, we conclude that HVPG determination is useful in predicting which cirrhotic population is more susceptible to digestive bleeding due to varix rupture and also as a index prognostic for these patients.

Orientadores: Elza Cotrim Soares, Jose Carlos Pareja / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T14:48:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_JazonRomilsondeSouza_D.pdf: 5080393 bytes, checksum: 0282e08bf70d3b376d5bc294796d16d6 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a contribuição de um novo marcador tumoral, a desgamacarboxiprotrombina (DCP), no diagnóstico do carcinoma hepatocelular (CHC) e compará-Io com a alfafetoproteína (AF.P.). Foram estudados 124 pacientes, sendo 92 brasileiros e 32 japoneses. Os pacientes brasileiros foram divididos em cinco grupos: 19 pacientes com carcinoma hepatocelular (grupo I), 19 com cirrose hepática (grupo II), 17 com hemangioma hepático (grupo III), 17 com metástase hepática (grupo IV) e 20 com dispepsia, sem doença hepática (grupo V). Os pacientes japoneses constituíram um outro grupo com CHC. Os exames incluídos no protocolo foram: fosfatase alcalina, gamaglutamiltransferase, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, tempo de protrombina (TP), expresso em RNI (Intemational Normalized Ratio), AF.P., DCP, ultra sonografia, tomografia computadorizada, sorologia para vírus B e C e biópsia hepática. Para o diagnóstico histológico do CHC, foi utilizado o grau de diferenciação histo1ógico segundo Edmondson-Steiner. A dosagem do nível plasmático da DCP foi realizada em todos os pacientes, utilizando-se o método de enzima imuno-ensaio (ElA) (E-1023: Eitest MONO - P - II, Eisai C., Ltd., Tokyo). A positividade da DCP nos pacientes com CHC foi de 57,9%. Nos outros grupos, de 13,7%. A sensibilidade e especificidade foram de 57,9% e 86,3%, respectivamente. O valor predição positivo, de 52,4 % e negativo, de 88,7%. A concentração plasmática da DCP apresentou-se elevada nos pacientes com tumores acima de 5,0 cm e naqueles com lesões ~ltinodulares. Houve associação entre o nível plasmático de DCP e o nível sérico de A.F.P. nos pacientes com CHC (n = 49; r = 0,58998; p = 0,0001). Concluíu-se que, a DCP é um marcado r tumoral complementar para o diagnóstico do carcinoma hepatocelular e que sua combinação com a AF.P. é importante, pois aumenta a taxa de positividade do diagnóstico do CHC / Abstract: The aim of this work was to assess the usefulness of a new tumour marker, des')'-carboxy prothrombin (DCP), in the diagnosis of hepatocellular carcinoma (HCC), and to compare this with that of a-fetoprotein (AFP). The study involved 124 patients, divided into two groups (92 Brazilians and 32 Japanese). The Brazilian subject were further subdivided into tive groups: 19 patients with HCC (group I), 19 with hepatic cirrhosis (group 11), 17 with hepatic hemangioma (group 111), 17 with hepatic metastasis (group IV) and 20 with dyspepsia who were not affected by any hepatic disease (group V). The Japanese patients constituted a further HCC group. The medical and laboratory tests performed included a1kaline phosphatase (AP), ')'-glutamyl transferase (GGT), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), prothrombin time, expressed by INR (International Normalized Ratio), AFP and DCP, determinations an ultrasound scan, a tomography, hepatitis B and C viruse serology and a hepatic biopsy. The histological diagnosis of HCC was based on the degree of Edmondson-Steiner histological differentiation. The plasma DCP levels were determined in ali patients using an immunoassay enzyme (ElA) (E-1023: Eitest MONO - P - 11, Eisai c., Ltd., Tokyo). Among the HCC patients, 57,9% were positive for DCP while in the other groups only 13,7% were positive.The sensitivity and specifity ofthe ElA were 57.9% and 86.3%, respectively, V{hile the predictive positive value was 52.4% and the predective negative value was 88,7%. ,A rise in the plasma concentration of DCP was observed in patients with tumours exceeding 5.0 cm in diameter and in those with multinodular lesions. There wàS a positive association between the plasma DCP ~~vels"..and the serum AFP levels in HCC patients (n = 49; r = 0.58998; p = 0.0001). We conclude that the determinations of DCP levels is a useful complementary tumour marker in the diagnosis of HCC and that the association between DCP and AFP is important because increases the frequency of positive HCC diagnose / Doutorado / Medicina Interna / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Luiz sergio Leonardi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T19:38:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FreitasJunior_Segirson_M.pdf: 15354985 bytes, checksum: d4a68ae7558eafef205f361d98891dd0 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A cirrose hepática está entre as principais causas de morte no mundo todo, podendo ser provocada por diversas condições, tais como o alcoolismo, hepatite crônica, obstrução biliar, hemossiderose e outras doenças mais raras. Em crianças, a atresia de vias biliares constitui importante causa de cirrose hepática, sendo responsável por mais de 50 % dos transplantes hepáticos, nessa faixa etária. Apesar de apresentar toxicidade clinica, quando administrada cronicamente, a vitamina A tem sido implicada como fator de proteção hepática contra o surgjmento de cirrose em modelos experimentais com tetracloreto de carbono, dimetilnitrosamino,e na cirrose induzida por soro heterólogo em ratos. Foi demonstrado também, que a privação da vitamina A resulta em piora da fibrose hepática nesses modelos experimentais. Com o propósito de determinar se a vitamina A pode mterferir no processo de fibrose hepática por colestase, a mesma foi administrada a ratos submetidos à obstrução biliar, e comparados com ratos submetidos ao mesmo procedimento cirúrgico sem vitaminaA adicional. O presente estudo tem como objetivo a estimativa da fibrose hepática por meio da quantificação estereológica do colágeno e bioquímica da hidroxiprolina tecidual do figado de ratos, submetidos à obstrução biliar que receberam vitaminaA adicional. Foram utilizados 40 ratos, divididos em 3 grupos: Grupo Obstrução Biliar (OB): submetidos à obstrução do ducto biliar comum; Grupo Obstrução Biliar + Vitamina A (OV): submetidos à obstrução do ducto biliar comum e que receberam injeções subcutâneas de vitamina A nos períodos pré e pós - operatórios; Grupo Operação Simulada - sham (OS): submetidos à laparotomia e manipulação suave das vias biliares apenas. Foram feitas análises bioquímicas dos índices de hidroxiprolina hepática e histológicas do colágeno total em ftagmentos hepáticos e também dosagens séricas bioquímicas de fosfatase alcalina, bilirrubmas,GGT, transaminases e eletroforese de proteínas, dentro de 5 semanas do período pós-operatório. Os ratos colestáticos que receberam vitamina A apresentaram índices de hidroxiprolina (µg/100 mg de tec. hepático seco) e volumetria do colágeno (%) menores que seus controles que não receberam vitamina A, sendo as médias +-EPM, respectivamente, do grupo OB: 330,25 ± 28,23 e 12,86 ± 0,86; do grupo OV: 209,38 ± 14,47 (p < 0,001), e 8,72 ± 1,26 (p < 0,01). Não houve diferença entre os níveis séricos de fosfàtase alcalina, bilirrubmas e gamaglutamil transferase dos animais obstruídos que receberam ou não a vitamina A (p < 0,05). Os níveis séricos de alanina aminotransferase e aspartato aminotransferase foram maiores nos ratos obstruídos que receberam vitamina A do que em seus controles obstruídos que não a receberam (p < 0,05, ep < 0,05, respectivamente). Em vista dos resultados obtidos, conclui-se que a administração de vitamina A diminui de forma significativa a fibrose hepática em ratos submetidos a este modelo de obstrução biliar / Abstract: Hepatic cirrhosis is one of the main causes of death in the world and is due to diverse factors like alcoholism, chronic hepatitis, biliary obstruction, hemosiderosis and other rare diseases. The most important cause of this disease in children is biliary atresia, which is responsible for more than 50% of the liver transplants performed in this age group. Although chronic administration of vitamin A has resulted in clínical toxicity in experimental models with rats, it has proved to be a protective factor against cirrhosis induced by carbon tetrachloride, dimethylnitrosamine,and heterologous serum. Depriving these animaIs of vitamin A worsened hepatic fibrosis. In order to verify if vitamin A really interfered in the hepatic fibrotic process resulting from cholestasis, this vitamin was administered to rats that had undergone biliary obstruction and then compared with rats that had undergone the same surgical process but without any additional vitamin A. The purpose of this study was to estimate hepatic fibrosis in rats, that had undergone biliary obstruction and had received additional vitamin A, based on the stereological quantification of collagen and the biochemistryofthe hydroxyproline liver tissue. The study used 40 rats divided into 3 groups: Biliary Obstruction Group (OB) - underwent common biliary duct obstruction; Biliary Obstruction + Vítamin A Group (OV) - underwent common biliary obstruction and received vitamin A subcutaneously during the pre and postoperative periods; Simulated Obstruction Group - Sham (OS) - underwent laparotomy and discreet manipulation of the biliary ducts. During 5 postoperative weeks, liver fragments were biochemically analyzed for hepatic and histological hydroxyproline indices of total collagen, and also for biochemical serum doses of alkaline phosphatase, bilirubins, GGT, transaminases and protein electrophoresis. The cholestatic rats that were given vitaminA showed lower indices of hydroxyproline (µg/100 mg of dry hepatic tissue) and volumetric collagen (%) than the controls. The respective mean :± SEM for the OB Group were 330.25 ± 28.23 and 12.86 ±0,86; for the OV Group: 209.38 ±14.47 (p < 0,001), and 8.72 ± 1.26 (p < 0,01). There was no difference between the serum levels of alkaline phosphatase, bilirubins and gammaglutamil transferase in the obstructed animals that received vitamin A and those that did not (p<0,05).The serum levels of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase were higher in the obstructed rats that received vitamin A than in the obstructed controls that did not receive vitaminA (p < 0,05, and p < 0,05, respectively).These results led to the conclusion that vitamin A significantly reduced the hepatic fibrosis induced in rats by biliary obstruction / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

Orientador : Jose Pedrazzoli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T16:00:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penteado_CristianeFranco_M.pdf: 2182451 bytes, checksum: 2b90ea32184b0d98a2ce08cd4269ea7e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A doença hepática crônica apresenta diversas causas, sendo caracterizada por diferentes graus de inflamação e necrose hepatocelular. A hepatite crônica pode ocorrer devido a vírus, reações autoimunes, drogas ou toxinas. Utilizando-se o modelo experimental de hepatopatia em coelhos induzido por CCU, o objetivo deste estudo foi investigar uma possível relação entre alguns parâmetros relacionados ao processo inflamatório (quimiotaxia de neutrófilos e análise total e diferencial dos leucócitos) e a lesão hepática. A extensão do dano hepático produzido pelo CCU foi investigada através da análise histológica dos fígados. Nossos resultados demonstraram que o tratamento com CCL4 induziu lesão hepática nos coelhos, conforme demonstrada pela análise histológica e pela elevação dos níveis séricos das enzimas ALT e AST. A análise histológica indicou a presença de hepatite após a 2a semana e de cirrose na 6a ou 8a semana de tratamento com CCL4. A resposta quimiotática in vitro dos neutrófilos verificada uma semana após a administração da droga, mostrou aumento entre a 2a e 6a semana de tratamento. Quando verificada 24 h após a droga, a quimiotaxia apresentou elevação a partir da 2ª até a 8a semana de tratamento. Neste mesmo período observou-se também aumento no número dos neutrófilos do sangue periférico. Levando-se em conta a verificação da presença de neutrófilos no fígado dos animais com cirrose, estes resultados 24 horas após a droga, sugerem que o aumento da migração in vitro dos neutrófilos e a elevação do número dos polimorfonucleares do sangue periférico podem estar relacionados à ativação e ao recrutamento destas células inflamatórias para o fígado, onde desempenham importante função no desenvolvimento do dano hepático / Abstract: The aim of this study was to investigate neutrophil chemotaxis during the induction of liver cirrhosis in rabbits. The study had three expérimentai arms: Group A (n=16) served as controls and received only normal rabbit chow. All animals were sacrificed at 16 weeks. Group B (n=19) was sacrificed 48 h after the chemotaxis assay, which was performed 24 h after CCL4 administration, at weeks 2, 4, 6 and 8. Group C (n=8) was followed by 16 weeks. The chemotaxis assay was performed 1 week after CCU administration. All animals were sacrificed at 16 weeks. The rabbits were treated with intragastric administration of CCU once weekly starting 14 days after addition of Phénobarbital to the drinking water (50mg/day). The CCU dose was adjusted weekly in order to obtain serun ALT and AST levels between 400 and 800 IU/I. Our results showed that increased ALT and AST levels were found in all of CCU-treated rabbits compared to the controls. In liver from animals sacrificed in 2, 4, 6 and 8 weeks of CCU treatment, hepatitis and fibrosis were already found at week two, and liver cirrhosis at week 6 and 8. Sixteen-week CCU treatment resulted in liver cirrhosis in 7 animals (87.5%). All animals with liver cirrhosis had an inflammatory infiltrate with neutrophils. Treatment with CCU did not interfered with total leukocyte count in blood from animals sacrificed in different periods, but a significant increase in polymorphonuclear cells between weeks 2 to 8 and a significant reduction in mononuclear leukocytes at week 4 were observed when compared with control animals. Neutrophil chemotaxis was also significantly increased from week 2 through week 8 compared with the control group. Animals that received CCU for 16 weeks present a significantly increased total leukocyte and polymorphonuclear number at week 10 when compared to controls. The mononuclear cell number was unchanged during the study period. A significant increase in neutrophil chemotaxis was observed from week 2 trough week 6. The presence of neutrophils in the liver of all animals with cirrhosis associated with an increase in polymorphonuclear cell chemotaxis during CCL4 administration in our experiment supports the view that this cell line has an important role in the development of toxic liver damage / Mestrado / Mestre em Farmacologia