Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-28T22:47:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Rosivania Silva Mota.pdf: 2096527 bytes, checksum: c2bf113b3ef63f3e3e91b1bc8f1d7c61 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-20T22:34:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Rosivania Silva Mota.pdf: 2096527 bytes, checksum: c2bf113b3ef63f3e3e91b1bc8f1d7c61 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-20T22:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Rosivania Silva Mota.pdf: 2096527 bytes, checksum: c2bf113b3ef63f3e3e91b1bc8f1d7c61 (MD5) Previous issue date: 2017-08-30 / Existem muitos relatos de alterações hematológicas medulares em portadores crônicos do HCV, entretanto os estudos realizados até o momento se destinaram a pacientes infectados e sintomáticos de doença hepática e/ou hematológica que foram encaminhados a atendimento médico terciário para investigação de citopenias. Nenhum estudo foi encontrado que abordasse a avaliação das alterações em medula óssea, numa fase mais precoce da infecção, com pacientes ainda assintomáticos do ponto de vista hematológico e hepático. Os objetivos deste estudo foram descrever as alterações hematológicas periféricas e medulares em indivíduos infectados pelo vírus da hepatite C (HCV) e assintomáticos de doenças hepática e hematológica, ainda não submetidos a tratamento específico e correlacioná-las com a carga viral plasmática, genótipos e graus de fibrose hepática. Estimar a frequência das alterações hematológicas periféricas e medulares e verificar a associação entre as alterações hematológicas periféricas e medulares com carga viral, genótipos e graus de fibrose hepática. Trata-se de estudo descritivo analítico, onde foram selecionados 30 pacientes de ambos os sexos, com idade entre 18 a 60 anos, atendidos nos ambulatórios de hepatologia e infectologia do Estado da Paraíba no período de 01/2016 a 03/2017. Foi realizada uma entrevista para obtenção dos dados sócios demográficos, os clínico-laboratoriais foram obtidos a partir dos registros em prontuários e realizado a coleta do aspirado de medula óssea. A média de idade foi de 43,93, sendo 60,0% mulheres. A frequência das alterações hematológicas periféricas foi de 20,0% (6/30) e das alterações medulares de 90,0% (25/30), observou-se associação entre os indivíduos com alterações hematológicas periféricas e os graus de fibrose (p=0,014), sem associação com a carga viral e os genótipos. O genótipo 1 foi presente em 80,0% (24/30) dos pacientes e alta viremia em 64,4% (16/30) e 66,7% (20/30) com graus iniciais de fibrose hepática de F0 a F2. 80,0% (24/30) dos pacientes não tinham alterações no exame sanguíneo periférico, entretanto na análise do mielograma56,7% (17/30) apresentavam algum tipo de alteração na celularidade geral e/ou específica por série, 83,3% (25/30) tinham alteração de maturação das linhagens celulares, predominando a desproporção maturativanúcleo citoplasmática e os retardos maturativos. Trata-se de estudo pioneiro com pacientes assintomáticos de doença hepática, infectados pelo HCV, assim apesar da baixa frequência das alterações periféricas, houve associação com os graus de fibrose e por outro lado as alterações hematológicas medulares foram altas, mas sem associação com a carga viral, os genótipos e o grau de fibrose, ressalta-se a importância do acompanhamento hematológico desses pacientes, uma vez que podem se beneficiar com uma abordagem mais precoce de sua doença hepática com o tratamento especifico, bloqueando a progressão desses distúrbios hematológicos antes de tornarem-se irreversíveis. / There are many reports of hematological changes in peripheral blood and bone marrowin chronic HCV infected patients, however, the studies carried out so far have been aimed at patients infected and symptomatic of liver and / or hematological disease who were referred to tertiary medical care withcytopenias to be investigated. No study was found to address the evaluation of bone marrow changes, at an earlier stage of infection, with patients still asymptomatic from a hematological and hepatic point of view. The aims of this study were to describe hematological changes in peripheral blood and bone marrow in infected individuals with hepatitis C virus infection and asymptomatic of hepatic and hematological diseases, not yet submitted to specific treatment and correlate them with viral load, genotype and degree of hepatic fibrosis. To estimate the frequency of peripheral and medullary hematological changes and to verify the association between peripheral and medullary hematological changes with viral load, genotypes and degrees of hepatic fibrosis. This is an analytical descriptive study, in which 30 patients of both sexes, aged between 18 and 60 years old, attended at the outpatient clinics of hepatology and infectology of the State of Paraíba were selected from 2016, january to 2017, march. An interview was carried out to obtain the socio-demographic data, the clinical-laboratory ones were obtained from the medical records and the bone marrow aspirate was collected. The mean age was 43.93, with 60.0% women. The frequency of peripheral hematological alterations was 20.0% (6/30) and the medullary changes of 90.0% (25/30), an association was observed between individuals with peripheral hematological alterations and degree of fibrosis (p=0,014), without association with viral load and genotype. Genotype 1 was present in 80.0% (24/30) of the patients and high viremia in 64.4% (16/30) and 66.7% (20/30) with initial degrees of hepatic fibrosis from F0 to F2. 80.0% (24/30) of the patients had no alterations in the peripheral blood test; however, in the analysis of the myelogram 56.7% (17/30) presented some type of alteration in general and / or specific series cellularity, 83, 3% (25/30) had maturational alterations of the cell lineages, predominating maturative nucleus cytoplasmatic disproportion and maturative delays. This is a pioneer study with asymptomatic patients of liver disease, infected with HCV, thus, despite the low frequency of peripheral alterations was low, there was an association with the degree of fibrosis and, on the other hand, the hematological changes in bone marrow were high but with no association with viral load, genotype and degree of fibrosis, however the importance of hematologic follow-up of these patients is emphasized, since they may benefit from an earlier approach to their liver disease with specific treatment, blocking the progression of these hematological disordersbefore they become irreversible.

Orientador: Rejane Maria Tommasini Grotto / Resumo: A progressão da fibrose hepática somada à infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) tem sido associada à resposta imunológica permanente. O estudo no repertório de anticorpos Anti-VHC na progressão da fibrose hepática foi explorado através de ferramentas de sequenciamento em larga escala (NGS) possibilitando uma análise de repertórios altamente variáveis como as porções variáveis VH (cadeia pesada) e Vk (cadeia leve) das imunoglobulinas, e a determinação de famílias e subfamílias dos genes V-D-J associadas à resposta humoral encontrada nas diferentes fases da doença proporcionam uma ferramenta importante no entendimento da resposta imune frente à infecção viral pelo VHC. As porções VH e Vk das imunoglobulinas foram obtidas a partir da amplificação de RNA de sangue de paciente VHC positivos e com diferentes graus de fibrose, e sequenciadas na plataforma Illumina® Miseq, fornecendo uma grande variabilidade de sequências que foram pré-processadas por ferramentas de bioinformática e analisadas em dois bancos de anticorpos diferentes: IgBlast (NCBI) e IMGT® quanto às famílias e subfamílias mais expressas. A expressão restrita de algumas famílias e subfamílias: IGHV1, IGHV3, IGHV4 e subfamílias já descritas em vários estudos associados ao VHC corrobora com nossos achados de que existe uma tendência do uso de algumas subfamílias como: IGHV1-2, IGHV1-8, IGVH1-69, IGHV3-11, IGHV3-21, IGHV3-23, IGVH3-30, IGHV4-4, IGHV4-34 IGHV4-39 na cadeia pesada; assim como IGkV3-15 e IGkV3-20 na cadei... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The progression of hepatic fibrosis in the hepatitis C virus (HCV) infection has been linked with permanent immune response. The study in the repertoire of Anti-HCV antibodies in the progression of hepatic fibrosis was analysed for large-scale sequencing (NGS) tools enabling a highly variable analysis such as the VH (heavy chain) and Vk (light chain) portions of immunoglobulins and the determination of families and subfamilies of the V-D-J genes in the humoral response found in the different phases of the disease, a great tool in the understanding of the immune response to HCV viral infection. The VH and V portions of the immunoglobulins were obtained from the amplification of HCV positive HCV patient blood with different degrees of fibrosis and sequenced on the Illumina® Miseq platform, providing a large sequence variability that was preprocessed by tools of bioinformatics and analyzed in two different antibody banks: IgBlast (NCBI) and IMGT® for the most expressed families and subfamilies. The restricted expression of some families: IGHV1, IGHV3, IGHV4 and subfamilies already described in several HCV-related studies confirm our findings that there is a tendency to use some subfamilies, such as: IGHV1-2, IGHV1-8, IGVH1- 69, IGHV3-11, IGHV3-21, IGHV3-23, IGVH3-30, IGHV4-4, IGHV4-34 IGHV4-39 in the heavy chain; as well as IGkV3-15 and IGkV3-20 in the light chain, but the subfamilies: IGHV1-8, IGHV3-11, IGHV4-39, IGkV1-5, IGkV1-12, IGkV1-39 were also among the most expressed, i... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Introdução – O tratamento da hipertensão portal continua sendo um desafio e muitos desses pacientes necessitam até transplante de fígado, como tratamento definitivo. Nesse contexto a derivação porto-sistêmica intra-hepática transjugular (Transjugular Intrahepatic Portosystemic Shunt – TIPS) surgiu como uma alternativa atraente para esta complicação da doença hepática crônica, sobretudo por não requerer laparotomia e efetivamente reduzir a pressão portal. O conhecimento da distância entre as veias hepáticas e os ramos portais e outros dados anatômicos, no fígado cirrótico, são requisitos importantes no planejamento e execução desse procedimento. Objetivos - Determinar as distâncias e diâmetros das veias hepáticas direita e média para os ramos portais e para a bifurcação da veia porta, no fígado cirrótico humano, com vistas à construção do TIPS. Tipo de estudo – Estudo anatômico descritivo e macroscópico em moldes vasculares de resina obtidos por corrosão de fígados humanos isolados e cirróticos. Material e método – O estudo foi autorizado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do HUOC/Procape-UPE e todos os pacientes, ou seus representantes legais, assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Foram obtidos 21 moldes de resina acrílica dos ramos portais e veias hepáticas de fígados cirróticos, de pacientes transplantados, dos hospitais Jayme da Fonte e Universitário Oswaldo Cruz, do Recife/PE. Após a completa corrosão do parênquima, foram medidas as distâncias e diâmetros das veias hepáticas e ramos da veia porta. Para testar a hipótese de diferença da média estimada em relação a um valor de referência, foi aplicado o teste t-Student para uma amostra. Resultados - A distância média da veia hepática direita para o ramo direito da veia porta e para a sua bifurcação foram, respectivamente, de 33 (±6,4) e 36 (±7,4) mm, ambos significativamente menores (p<0,0001 e p<0,0002) que os resultados encontrados na literatura, em fígados normais. A distância média da veia hepática média para o ramo direito e para o ramo esquerdo da veia porta foi, respectivamente, de 36 (±6,8) e 26 (±8,8) mm . Conclusão – As distâncias entre a veia hepática direita e o ramo direito da veia porta ou a bifurcação da mesma, em fígados cirróticos, foram significativamente menores que as anteriormente relatadas em fígados normais. A veia hepática média é confirmada como uma via alternativa adequada. / Introduction - The treatment of portal hypertension remains a challenge and many of these patients need liver transplantation as definitive treatment. In this context the Transjugular Intrahepatic Portosystemic Shunt (TIPS) has emerged as an attractive alternative to this complication of chronic liver disease, especially for not requiring laparotomy and effectively reducing the portal pressure. Knowing the distance between the hepatic veins and portal branches and other anatomical data in the cirrhotic liver, they are important requirements in the planning and execution of this procedure. Purpose: To determine spatial arrangements and diameters of right and middle hepatic veins relative to portal vein branches in cirrhotic human livers, gaining strategic insight to percutaneous procedures as transjugular intrahepatic portosystemic shunt. (TIPS). Materials and Methods: This study was authorized by an area Research Ethics Committee, and each study subject or legal representative granted signed informed consent. Acrylic corrosion casts of 21 resected cirrhotic livers were generated. Diameters of hepatic veins and portal branches and pertinent intervening distances were measured. To assess differences in estimated average (relative to reference values), Student's t-test for one sample was applied. Results: Mean distances from right hepatic vein to right portal branch and to portal vein bifurcation were 33±6.4 mm and 36±7.4 mm, respectively, both significantly shorter than published reference values in healthy human livers (p<0.0001 and p<0.0002, respectively). Mean distances from middle hepatic vein to right and left branches of portal vein were 36±6.8 mm and 26±8.8 mm, respectively. Conclusion: Distances separating right hepatic vein and portal vein (right branch and bifurcation) are diminished in cirrhotic livers compared to healthy ones. The middle hepatic vein is confirmed as a suitable alternative route.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-28T18:27:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseComponentesPrincipais.pdf: 1933293 bytes, checksum: 97829416c43e5c7ef910f64f6e7ae8d4 (MD5) / Rejected by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br), reason: on 2017-10-10T17:02:24Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T19:25:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseComponentesPrincipais.pdf: 1933293 bytes, checksum: 97829416c43e5c7ef910f64f6e7ae8d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-29T13:39:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseComponentesPrincipais.pdf: 1933293 bytes, checksum: 97829416c43e5c7ef910f64f6e7ae8d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-29T13:39:14Z (GMT). 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Foram considerados casos, pacientes com infecção crônica pelo VHC, aqueles que apresentavam anti-VHC e VHC-RNA positivos por seis meses ou mais desde a detecção da infecção dentro dos parâmetros de apresentação clínica. Foram considerados participantes do grupo controle indivíduos saudáveis, com idade > 20 anos, de ambos os sexos. Os mesmos foram convidados a participar da pesquisa de forma voluntária. Utilizou-se um questionário de avaliação nutricional. Foi investigada a presença de polimorfismos MDM2 (rs3730485); XRCC1 (rs3213239) e MTHFR (rs1801133). Aplicou-se o teste Exato de Fisher, Odds Ratio, e a análise de Componentes Principais. Resultados: Em relação a genotipagem, constatou-se semelhança na frequência dos polimorfismos dos genes MTHFR, XRCC1 e MDM2 em ambos os grupos. As razões de chance que tiveram valores de p significativos foram: baixo consumo de frutas, sedentarismo e IMC > 25 kg/m². Os resultados da análise de componentes principais são indicativos de que existem pelo menos três processos fisiopatológicos que atuam no agrupamento dos fatores de risco para o CHC, sendo fortemente relacionados a gordura corporal, etilismo e baixo consumo de frutas. Conclusão: Os pacientes avaliados agregam fatores de risco para o desenvolvimento do CHC. / Introduction: Liver diseases are among the leading causes of morbidity and mortality in the world. Hepatitis C is present in approximately 20% of cases of acute hepatitis and 70% of cases of chronic hepatitis. E has been associated with the presence of accumulation of intrahepatic lipids (fatty liver) and it often progresses to development of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC) is the leading cause of liver transplantation. Objective: To evaluate the relationship of nutritional variables and polymorphisms of MDM2 gene, MTHFR and XRCC1 with risk to HCC in patients with chronic hepatitis C. Methods: case - control performed with patients with chronic hepatitis C. Cases were patients with chronic HCV infection, those with positive anti-HCV and HCV-RNA for six months or more since the detection of the infection within the clinical presentation parameters. They considered participants in the control group healthy subjects aged> 20 years, of both sexes. They were invited to participate in the voluntary survey. We used a nutritional assessment questionnaire. The presence of MDM2 polymorphisms (rs3730485) was investigated; XRCC1 (rs3213239) and MTHFR (rs1801133). It used the Fisher's exact test, odds ratio, and analysis of Principal Components. Results: For genotyping, it was found similarity in frequency of polymorphisms of MTHFR genes XRCC1 and MDM2 in both groups. The odds ratios that had significant p values were low fruit intake, physical inactivity and BMI> 25 kg / m². The results of principal component analysis are indicative that there are at least three pathophysiologic processes that operate in the cluster of risk factors for HCC, and are strongly related to body fat, alcohol consumption and low consumption of fruits. Conclusion: The patients evaluated aggregate risk factors for the development of HCC.

INTRODUÇÃO: Diversas doenças crônicas do fígado resultam em desenvolvimento de fibrose do parênquima, condição que pode culminar em perda de função do órgão e hipertensão portal grave com indicação de transplante. Nas últimas décadas, alguns estudos têm buscado demonstrar a possibilidade de modulação farmacológica do processo de fibrogênese hepática. Particularmente com relação às obstruções biliares, tem-se sugerido que a administração de corticosteróides pode promover melhora no prognóstico tardio das crianças portadoras de atresia das vias biliares submetidas a portoenterostomia (cirurgia de Kasai). Nenhum trabalho experimental foi realizado com o objetivo de verificar essa hipótese e os modelos descritos para estudo de outras drogas com potencial antifibrogênico, como a pentoxifilina, não incluíram animais jovens. MÉTODOS: Foram operados 119 ratos jovens (21º ou 22º dias de vida), submetidos a laparotomia com ligadura do ducto biliar comum (LDBC) ou cirurgia simulada (CS). Os animais foram divididos em 5 grupos, conforme o procedimento cirúrgico e a medicação administrada: 1. LDBC + água destilada; 2. CS + água destilada; 3. LDBC + pentoxifilina (PTX); 4. LDBC + prednisolona (PRED); 5. LDBC + pentoxifilina + prednisolona (PTX+PRED). Cada grupo foi dividido em 2 subgrupos conforme a duração do experimento (15 ou 30 dias). Ao final do período, os animais foram pesados e submetidos a retirada de um fragmento de fígado, coletado para análise histológica através das colorações de hematoxilina-eosina e de picrossírius. As lâminas coradas pelo picrossírius foram utilizadas para análise quantitativa (morfometria digital) da área preenchida por colágeno e da área total dos espaços-porta. Após a obtenção desses valores, foi calculada a fração de área de colágeno de cada grupo. RESULTADOS: Os animais do grupo PTX apresentaram maior ganho de peso do que os dos grupos PRED e PTX+PRED. Os animais dos 3 grupos terapêuticos (PTX, PRED e PTX+PRED) apresentaram diminuição da área preenchida por colágeno nos espaços-porta. A área total dos espaços-porta foi maior no grupo PTX. CONCLUSÕES: A evolução da fibrose hepática induzida pela ligadura biliar em ratos jovens pôde ser modificada com o uso de medicamentos. A administração de prednisolona e pentoxifilina, isoladamente ou em associação, resultou em diminuição da área preenchida por colágeno nos espaços-porta / INTRODUCTION: Many chronic liver diseases lead to progressive establishment of hepatic fibrosis, condition that can ultimately result in loss of organ function and severe portal hypertension demanding hepatic transplantation. Within the last decades, some studies have been conducted in order to demonstrate the possibility of drug modulation of hepatic fibrogenesis. Particularly related to biliary obstruction, it has been suggested that administration of corticosteroids could promote better late outcomes for biliary atresia children submitted to Kasais portoenterostomy. There is no published experimental study related to that issue, and described models used to test potential antifibrogenic drugs, such as pentoxifylline, have not included growing animals. METHODS: In this experimental study, 119 young rats (21st or 22nd days) were submitted to laparotomy and bile duct ligation (BDL) or sham surgery (SHAM). Animals were divided into 5 groups, according to surgical procedure and administered solution: 1. BDL + distilled water; 2. SHAM + distilled water; 3. BDL + pentoxifylline (PTX); 4. BDL + prednisolone (PRED); 5. BDL + pentoxifylline + prednisolone (PTX+PRED). Each group was further divided into 2 subgroups according to the length of the experiment (15 or 30 days). At the end of the defined period, animals were weighed and one hepatic fragment was collected from each one for histological analysis using hematoxylin-eosin and Sirius red stains. Sirius red stained slides were examined for quantitative analysis (digital morphometry) of collagen-filled area and portal space total area. RESULTS: PTX group animals presented increased weight gain compared to PRED or PTX+PRED groups. Animals from the 3 therapeutic groups (PTX, PRED and PTX+PRED) showed diminished collagen-filled area in portal spaces. Total portal space area was increased in PTX group slides. CONCLUSIONS: Hepatic fibrosis induced by bile duct ligation in young rats could be modulated by pharmacologic interventions. Pentoxifylline and prednisolone administration, associated or not, resulted in diminished collagen-filled area in portal spaces

Introdução – O tratamento da hipertensão portal continua sendo um desafio e muitos desses pacientes necessitam até transplante de fígado, como tratamento definitivo. Nesse contexto a derivação porto-sistêmica intra-hepática transjugular (Transjugular Intrahepatic Portosystemic Shunt – TIPS) surgiu como uma alternativa atraente para esta complicação da doença hepática crônica, sobretudo por não requerer laparotomia e efetivamente reduzir a pressão portal. O conhecimento da distância entre as veias hepáticas e os ramos portais e outros dados anatômicos, no fígado cirrótico, são requisitos importantes no planejamento e execução desse procedimento. Objetivos - Determinar as distâncias e diâmetros das veias hepáticas direita e média para os ramos portais e para a bifurcação da veia porta, no fígado cirrótico humano, com vistas à construção do TIPS. Tipo de estudo – Estudo anatômico descritivo e macroscópico em moldes vasculares de resina obtidos por corrosão de fígados humanos isolados e cirróticos. Material e método – O estudo foi autorizado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do HUOC/Procape-UPE e todos os pacientes, ou seus representantes legais, assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Foram obtidos 21 moldes de resina acrílica dos ramos portais e veias hepáticas de fígados cirróticos, de pacientes transplantados, dos hospitais Jayme da Fonte e Universitário Oswaldo Cruz, do Recife/PE. Após a completa corrosão do parênquima, foram medidas as distâncias e diâmetros das veias hepáticas e ramos da veia porta. Para testar a hipótese de diferença da média estimada em relação a um valor de referência, foi aplicado o teste t-Student para uma amostra. Resultados - A distância média da veia hepática direita para o ramo direito da veia porta e para a sua bifurcação foram, respectivamente, de 33 (±6,4) e 36 (±7,4) mm, ambos significativamente menores (p<0,0001 e p<0,0002) que os resultados encontrados na literatura, em fígados normais. A distância média da veia hepática média para o ramo direito e para o ramo esquerdo da veia porta foi, respectivamente, de 36 (±6,8) e 26 (±8,8) mm . Conclusão – As distâncias entre a veia hepática direita e o ramo direito da veia porta ou a bifurcação da mesma, em fígados cirróticos, foram significativamente menores que as anteriormente relatadas em fígados normais. A veia hepática média é confirmada como uma via alternativa adequada. / Introduction - The treatment of portal hypertension remains a challenge and many of these patients need liver transplantation as definitive treatment. In this context the Transjugular Intrahepatic Portosystemic Shunt (TIPS) has emerged as an attractive alternative to this complication of chronic liver disease, especially for not requiring laparotomy and effectively reducing the portal pressure. Knowing the distance between the hepatic veins and portal branches and other anatomical data in the cirrhotic liver, they are important requirements in the planning and execution of this procedure. Purpose: To determine spatial arrangements and diameters of right and middle hepatic veins relative to portal vein branches in cirrhotic human livers, gaining strategic insight to percutaneous procedures as transjugular intrahepatic portosystemic shunt. (TIPS). Materials and Methods: This study was authorized by an area Research Ethics Committee, and each study subject or legal representative granted signed informed consent. Acrylic corrosion casts of 21 resected cirrhotic livers were generated. Diameters of hepatic veins and portal branches and pertinent intervening distances were measured. To assess differences in estimated average (relative to reference values), Student's t-test for one sample was applied. Results: Mean distances from right hepatic vein to right portal branch and to portal vein bifurcation were 33±6.4 mm and 36±7.4 mm, respectively, both significantly shorter than published reference values in healthy human livers (p<0.0001 and p<0.0002, respectively). Mean distances from middle hepatic vein to right and left branches of portal vein were 36±6.8 mm and 26±8.8 mm, respectively. Conclusion: Distances separating right hepatic vein and portal vein (right branch and bifurcation) are diminished in cirrhotic livers compared to healthy ones. The middle hepatic vein is confirmed as a suitable alternative route.

Submitted by LETICIA DE CAMPOS FRANZONI null (leticiafranzoni@hotmail.com) on 2017-04-05T01:59:34Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Versao Final 13 jan 2017 - Franzoni.pdf: 1564703 bytes, checksum: 96d71fb57b63c2b888283c1b53168fd1 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-12T17:18:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 franzoni_lc_dr_bot.pdf: 1564703 bytes, checksum: 96d71fb57b63c2b888283c1b53168fd1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T17:18:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 franzoni_lc_dr_bot.pdf: 1564703 bytes, checksum: 96d71fb57b63c2b888283c1b53168fd1 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Os aminoácidos de cadeia ramificada (BCAA) são parte do tratamento da encefalopatia hepática (HE) e aumentam a perfusão cerebral. Como são compostos por três aminoácidos diferentes, as proporções de cada um variam nos ensaios clínicos, tornando difícil esclarecer qual substância está mais envolvida na perfusão cerebral e em outros parâmetros significativos. O objetivo deste estudo foi comparar os efeitos clínicos e de perfusão cerebral obtidos pela suplementação de leucina versus isoleucina para tratamento da HE. Métodos: Cinqüenta pacientes ambulatoriais com cirrose e HE foram randomizados para receber suplementos orais contendo 30 g de leucina ou isoleucina diariamente, por um ano. As avaliações clínicas e a avaliação nutricional foram realizadas bimestralmente. A Tomografia Computadorizada cerebral por emissão de fóton único (SPECT) e a cintilografia cerebral dinâmica foram realizadas pré-tratamento e em 1, 8 e 12 meses de suplementação. Vinte e sete indivíduos concluíram o estudo (16 com isoleucina e 11 com leucina). Resultados: O aumento da perfusão cerebral foi observado apenas no grupo isoleucina. O aumento foi documentado aos 8 meses de tratamento tanto pelo SPECT como pela cintilografia cerebral (p <0,001 e p = 0,05, respectivamente) e pelo SPECT no 12º mês (p <0,05). Foi associado a uma melhora significativa de HE em 8 e 12 meses neste grupo (p = 0,008 e 0,004, respectivamente), o que foi menos claro no grupo leucina (p = 0,313 e 0,055, respectivamente). Conclusões: A suplementação de isoleucina permitiu alcançar um melhor impacto nas manifestações de HE e na perfusão cerebral de pacientes com cirrose. Os resultados sugerem que pacientes com HE devem receber mais isoleucina do que leucina. / Introduction: Branched chain amino acids (BCAA) are part of hepatic encephalopathy (HE) treatment and lead to brain perfusion increasing. As they are composed by three different amino acids, the proportions of each one vary in the clinical trials, making difficult to clarify which substance is more involved in brain perfusion and other significant endpoints. The aim of this study was to compare clinical and brain perfusion effects obtained by supplementation of leucine versus isoleucine for HE treatment. Methods: Fifty outpatients with cirrhosis and HE were randomized to receive oral supplements containing 30 g of leucine or isoleucine on a daily basis for one year. Clinical evaluations and nutritional assessment were performed bimonthly. Brain Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) and dynamic brain scintigraphy were performed pretreatment and at 1, 8 and 12 months of supplementation. Twenty-seven subjects concluded the study (16 taking isoleucine and 11 taking leucine). Results: Increasing in brain perfusion was observed only in the isoleucine group. The increase was documented at 8 months of treatment by both SPECT and brain scintigraphy (p<0.001 and p= 0.05, respectively) and by SPECT at the 12th month (p <0.05). It was associated with a significant HE improvement at 8 and 12 months in this group (p=0.008 and 0.004, respectively), which was less clear in the leucine group (p=0.313 and 0.055, respectively). Conclusions: Isoleucine supplementation allowed achieving a better impact on HE manifestations and brain perfusion of patients with cirrhosis. The results suggest that patients with HE should receive more isoleucine than leucine. / FAPESP: 2013/11761-2

Introdução – O tratamento da hipertensão portal continua sendo um desafio e muitos desses pacientes necessitam até transplante de fígado, como tratamento definitivo. Nesse contexto a derivação porto-sistêmica intra-hepática transjugular (Transjugular Intrahepatic Portosystemic Shunt – TIPS) surgiu como uma alternativa atraente para esta complicação da doença hepática crônica, sobretudo por não requerer laparotomia e efetivamente reduzir a pressão portal. O conhecimento da distância entre as veias hepáticas e os ramos portais e outros dados anatômicos, no fígado cirrótico, são requisitos importantes no planejamento e execução desse procedimento. Objetivos - Determinar as distâncias e diâmetros das veias hepáticas direita e média para os ramos portais e para a bifurcação da veia porta, no fígado cirrótico humano, com vistas à construção do TIPS. Tipo de estudo – Estudo anatômico descritivo e macroscópico em moldes vasculares de resina obtidos por corrosão de fígados humanos isolados e cirróticos. Material e método – O estudo foi autorizado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do HUOC/Procape-UPE e todos os pacientes, ou seus representantes legais, assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Foram obtidos 21 moldes de resina acrílica dos ramos portais e veias hepáticas de fígados cirróticos, de pacientes transplantados, dos hospitais Jayme da Fonte e Universitário Oswaldo Cruz, do Recife/PE. Após a completa corrosão do parênquima, foram medidas as distâncias e diâmetros das veias hepáticas e ramos da veia porta. Para testar a hipótese de diferença da média estimada em relação a um valor de referência, foi aplicado o teste t-Student para uma amostra. Resultados - A distância média da veia hepática direita para o ramo direito da veia porta e para a sua bifurcação foram, respectivamente, de 33 (±6,4) e 36 (±7,4) mm, ambos significativamente menores (p<0,0001 e p<0,0002) que os resultados encontrados na literatura, em fígados normais. A distância média da veia hepática média para o ramo direito e para o ramo esquerdo da veia porta foi, respectivamente, de 36 (±6,8) e 26 (±8,8) mm . Conclusão – As distâncias entre a veia hepática direita e o ramo direito da veia porta ou a bifurcação da mesma, em fígados cirróticos, foram significativamente menores que as anteriormente relatadas em fígados normais. A veia hepática média é confirmada como uma via alternativa adequada. / Introduction - The treatment of portal hypertension remains a challenge and many of these patients need liver transplantation as definitive treatment. In this context the Transjugular Intrahepatic Portosystemic Shunt (TIPS) has emerged as an attractive alternative to this complication of chronic liver disease, especially for not requiring laparotomy and effectively reducing the portal pressure. Knowing the distance between the hepatic veins and portal branches and other anatomical data in the cirrhotic liver, they are important requirements in the planning and execution of this procedure. Purpose: To determine spatial arrangements and diameters of right and middle hepatic veins relative to portal vein branches in cirrhotic human livers, gaining strategic insight to percutaneous procedures as transjugular intrahepatic portosystemic shunt. (TIPS). Materials and Methods: This study was authorized by an area Research Ethics Committee, and each study subject or legal representative granted signed informed consent. Acrylic corrosion casts of 21 resected cirrhotic livers were generated. Diameters of hepatic veins and portal branches and pertinent intervening distances were measured. To assess differences in estimated average (relative to reference values), Student's t-test for one sample was applied. Results: Mean distances from right hepatic vein to right portal branch and to portal vein bifurcation were 33±6.4 mm and 36±7.4 mm, respectively, both significantly shorter than published reference values in healthy human livers (p<0.0001 and p<0.0002, respectively). Mean distances from middle hepatic vein to right and left branches of portal vein were 36±6.8 mm and 26±8.8 mm, respectively. Conclusion: Distances separating right hepatic vein and portal vein (right branch and bifurcation) are diminished in cirrhotic livers compared to healthy ones. The middle hepatic vein is confirmed as a suitable alternative route.

INTRODUÇÃO: Diversas doenças crônicas do fígado resultam em desenvolvimento de fibrose do parênquima, condição que pode culminar em perda de função do órgão e hipertensão portal grave com indicação de transplante. Nas últimas décadas, alguns estudos têm buscado demonstrar a possibilidade de modulação farmacológica do processo de fibrogênese hepática. Particularmente com relação às obstruções biliares, tem-se sugerido que a administração de corticosteróides pode promover melhora no prognóstico tardio das crianças portadoras de atresia das vias biliares submetidas a portoenterostomia (cirurgia de Kasai). Nenhum trabalho experimental foi realizado com o objetivo de verificar essa hipótese e os modelos descritos para estudo de outras drogas com potencial antifibrogênico, como a pentoxifilina, não incluíram animais jovens. MÉTODOS: Foram operados 119 ratos jovens (21º ou 22º dias de vida), submetidos a laparotomia com ligadura do ducto biliar comum (LDBC) ou cirurgia simulada (CS). Os animais foram divididos em 5 grupos, conforme o procedimento cirúrgico e a medicação administrada: 1. LDBC + água destilada; 2. CS + água destilada; 3. LDBC + pentoxifilina (PTX); 4. LDBC + prednisolona (PRED); 5. LDBC + pentoxifilina + prednisolona (PTX+PRED). Cada grupo foi dividido em 2 subgrupos conforme a duração do experimento (15 ou 30 dias). Ao final do período, os animais foram pesados e submetidos a retirada de um fragmento de fígado, coletado para análise histológica através das colorações de hematoxilina-eosina e de picrossírius. As lâminas coradas pelo picrossírius foram utilizadas para análise quantitativa (morfometria digital) da área preenchida por colágeno e da área total dos espaços-porta. Após a obtenção desses valores, foi calculada a fração de área de colágeno de cada grupo. RESULTADOS: Os animais do grupo PTX apresentaram maior ganho de peso do que os dos grupos PRED e PTX+PRED. Os animais dos 3 grupos terapêuticos (PTX, PRED e PTX+PRED) apresentaram diminuição da área preenchida por colágeno nos espaços-porta. A área total dos espaços-porta foi maior no grupo PTX. CONCLUSÕES: A evolução da fibrose hepática induzida pela ligadura biliar em ratos jovens pôde ser modificada com o uso de medicamentos. A administração de prednisolona e pentoxifilina, isoladamente ou em associação, resultou em diminuição da área preenchida por colágeno nos espaços-porta / INTRODUCTION: Many chronic liver diseases lead to progressive establishment of hepatic fibrosis, condition that can ultimately result in loss of organ function and severe portal hypertension demanding hepatic transplantation. Within the last decades, some studies have been conducted in order to demonstrate the possibility of drug modulation of hepatic fibrogenesis. Particularly related to biliary obstruction, it has been suggested that administration of corticosteroids could promote better late outcomes for biliary atresia children submitted to Kasais portoenterostomy. There is no published experimental study related to that issue, and described models used to test potential antifibrogenic drugs, such as pentoxifylline, have not included growing animals. METHODS: In this experimental study, 119 young rats (21st or 22nd days) were submitted to laparotomy and bile duct ligation (BDL) or sham surgery (SHAM). Animals were divided into 5 groups, according to surgical procedure and administered solution: 1. BDL + distilled water; 2. SHAM + distilled water; 3. BDL + pentoxifylline (PTX); 4. BDL + prednisolone (PRED); 5. BDL + pentoxifylline + prednisolone (PTX+PRED). Each group was further divided into 2 subgroups according to the length of the experiment (15 or 30 days). At the end of the defined period, animals were weighed and one hepatic fragment was collected from each one for histological analysis using hematoxylin-eosin and Sirius red stains. Sirius red stained slides were examined for quantitative analysis (digital morphometry) of collagen-filled area and portal space total area. RESULTS: PTX group animals presented increased weight gain compared to PRED or PTX+PRED groups. Animals from the 3 therapeutic groups (PTX, PRED and PTX+PRED) showed diminished collagen-filled area in portal spaces. Total portal space area was increased in PTX group slides. CONCLUSIONS: Hepatic fibrosis induced by bile duct ligation in young rats could be modulated by pharmacologic interventions. Pentoxifylline and prednisolone administration, associated or not, resulted in diminished collagen-filled area in portal spaces

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A fibrose hepática é o resultado de uma resposta cicatrizante frente a repetidas lesões no fígado, e é caracterizada pelo acúmulo excessivo de proteínas da matriz extracelular (MEC) no parênquima hepático, incluindo colágeno, fibronectina, elastina, laminina e proteoglicanos, com a participação de diferentes populações celulares do fígado. As principais células responsáveis pela síntese de proteínas da MEC na fibrose hepática são as células estreladas hepáticas ativadas e os miofibroblastos, que surgem após estímulo inflamatório e são caracterizadas pela expressão de alfa-actina de músculo liso (&#945;-SMA). Sabe-se que durante a progressão da fibrose hepática, ocorre a morte de hepatócitos e sua substituição por células fibrogênicas &#945;-SMA+. A apoptose dessas células fibrogênicas é de grande relevância para a regressão da fibrose e regeneração hepática. Nos últimos anos, a terapia com células tronco de medula óssea tem sido utilizada para estimular a regeneração hepática em diferentes modelos experimentais e protocolos clínicos. A fração mononuclear da medula óssea adulta possui duas populações de células-tronco importantes no tratamento de diversas doenças hepáticas: células-tronco hematopoiéticas e células-tronco mesenquimais. O objetivo deste estudo foi analisar a expressão de &#945;-SMA e o processo de apoptose de células hepáticas durante a fibrose hepática induzida por ligadura do ducto biliar (LDB) e após o transplante de células mononucleares de medula óssea (CMMO). Os fígados foram coletados de ratos dos seguintes grupos: normal, 14 dias de LDB, 21 dias de LDB e animais que receberam CMMO após 14 dias de LDB, e foram analisados após 7 dias (totalizando 21 dias de LDB). Para quantificar a expressão de &#945;-SMA por células fibrogênicas nos grupos experimentais, foi realizada imunoperoxidase para &#945;-SMA, seguida de morfometria no programa Image Pro Plus. Para analisar a apoptose nas células hepáticas, foi realizada imunoperoxidase e Western Blotting (WB) para caspase-3 (proteína apoptótica) e imunofluorescência com dupla-marcação para caspase-3 e &#945;-SMA, seguida de observação em microscópio confocal. Os resultados da quantificação de &#945;-SMA por morfometria mostraram que a expressão de &#945;-SMA aumentou significativamente 14 e 21 dias após a LDB. Entretanto, essa expressão diminuiu significativamente no grupo tratado com CMMO, que apresentou parênquima hepático mais preservado em relação ao grupo com 21 dias de LDB. Os resultados de imunoperoxidase, WB e microscopia confocal para expressão de caspase-3 demonstraram que essa proteína diminuiu nos animais fibróticos com 14 e 21 dias de LDB com relação ao grupo normal, e estava significativamente elevada no grupo tratado com CMMO. A análise por microscopia confocal demonstrou que algumas células coexpressaram &#945;-SMA e caspase-3 nos animais tratados com CMMO, sugerindo a morte de células fibrogênicas e remodelamento do parênquima hepático. / Hepatic fibrosis is the result of a scarring response due to continued injury to the liver, and is featured by excessive accumulation of extracellular matrix (MEC) proteins in hepatic parenchyma. These proteins include collagen, fibronectin, elastin, laminin and proteoglicans, along with the participation of different cell populations within the liver. The main cells responsible for the synthesis of MEC proteins are activated hepatic stellate cells and myofibroblasts, which appear after inflammatory stimuli and are characterized by the expression of alpha-smooth muscle actin (&#945;-SMA). It is known that hepatic fibrosis progression is accompanied by hepatocyte death and its substitution by &#945;-SMA+ fibrogenic cells. Therefore, apoptosis of these fibrogenic cells is of main relevance to fibrosis regression and hepatic regeneration. In the later years, bone marrow stem cell therapy has been used to stimulate hepatic regeneration in different experimental models and clinical protocols. The adult bone marrow mononuclear fraction contains two stem cell populations particularly important in the treatment of diverse hepatic diseases: hematopoietic stem cells and mesenchymal stem cells. The aim of this study was to analyze &#945;-SMA expression and the apoptotic process in hepatic cells during hepatic fibrosis induced by bile duct ligation (BDL) and after bone marrow mononuclear cell (BMMC) transplantation. Livers were collect from rats of the following groups: normal, 14 days of BDL, 21 days of BDL and rats that received BMMC 14 days after BDL and were analyzed after 7 days (total of 21 days of BDL). To quantify &#945;-SMA expression by fibrogenic cells in the experimental groups, immunoperoxidase to &#945;-SMA followed by morphometry in the Image Pro Plus software was performed. To analyze apoptosis in hepatic cells, immunoperoxidase and western blotting (WB) against caspase-3 (apoptotic protein) were used, along with double immunofluorescence against caspase-3 and &#945;-SMA to confocal microscopy analysis. Results of &#945;-SMA quantification by morphometry showed that &#945;-SMA expression increased significantly 14 and 21 days after BDL. However, this expression was significantly decreased in the BMMC treated group, which presented a more preserved hepatic parenchyma in relation to the group with 21 days of BDL. Immunoperoxidase, WB and confocal microscopy results showed that caspase-3 is decreased in fibrotic livers with 14 and 21 days of BDL in comparison to normal group, and was significantly augmented in the BMMC treated group. Confocal microscopy analysis showed that were cells coexpressing &#945;-SMA and caspase-3 in rats treated with BMMC, suggesting fibrogenic cells death and hepatic remodeling.