Foram estudados 151 doadores de sangue encaminhados pelo Hemocentro de Ribeirão Preto ao Ambulatório de Hepatites do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto em função de terem apresentado resultados foram positivos para hepatite C nos testes de triagem pré-doação, entre 2001 e 2010. Todos tiveram confirmação diagnóstica mediante uso de técnicas de biologia molecular. No momento de chegada ao Hospital foram entrevistados por uma assistente social ligada ao Núcleo Hospitalar de Epidemiologia, com o objetivo de caracterizá-los segundo variáveis sociodemográficas, estudar fatores de risco presentes e genótipos encontrados. Houve predominância de indivíduos do sexo masculino, com baixos níveis de escolaridade e de estratos sociais menos favorecidos, com idade mediana de 36 anos. Observou-se uma tendência decrescente de infectados ao longo dos anos estudados. O genótipo mais prevalente foi o 1 com percentual de 68,8%, seguido do genótipo 3 (27,0%). Os potenciais fatores de risco mais prevalentes foram história pregressa de hospitalização sem e com cirurgia, multiplicidade de parceiros sexuais no passado, convivência com usuários de drogas, contato com sangue em atendimentos a terceiros, múltiplos parceiros sexuais no presente e contato domiciliar com casos de hepatite. Também com elevadas frequências foram observados os seguintes fatores: antecedente de transfusão sanguínea, uso coletivo de escova de dentes, história de contato sexual com usuários de drogas, frequência a creches na infância e tatuagem. Uso passado de drogas injetáveis e compartilhamento de seringas e agulhas foram relatados por 15,2% e 9,9%, respectivamente. Conclui-se que deve ter ocorrido omissão de inúmeros fatores de risco por ocasião da triagem clínica, possivelmente indicativo do desejo de se utilizar o Banco de Sangue como controle da situação sorológica por parte de parte dos doadores. / 151 blood donators were analyzed sent from the Hemocenter of Ribeirão Preto to the Hepatitis Clinic of the University Hospital of the Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, because these individuals had presented positive results for Hepatitis C in the screening tests for pre-donation, taken between 2001 and 2010. All of them had diagnosis confirmation through the use of molecular biology techniques. At the moment of arrival in the hospital, they were interviewed by a Social Assistant from the Hospital Nucleus of Epidemiology, in order to characterize them according to socio-demographic variables, to study risk factors that might be present, and genotypes found. The predominance was of male individuals, with low school levels, and coming from a less favored social stratum, with a median age of 36 years. There was a decreasing tendency of infected individuals along the years of study. The most prevailing genotype was type 1 with a percentage of 68.8%, followed by the genotype 3 (27.0%). The most prevailing potential risk factors were previous history of hospitalization with and without surgery, multiplicity of sexual partners in the past, acquaintance with drug user, contact with blood on dealing with to third parties, multiple current sexual partners and home contact with hepatitis cases. The following factors were also observed with high frequency: antecedent of blood transfusion, collective use of tooth brush, history of sexual contact with drug users, attendance to day care clinics in childhood and tattoos. Past use of injectable drugs and syringe and needle sharing were reported by 15.2% and 9.9%, respectively. The conclusion was that there must have been the omission of a number of risk factors at the time of the clinical screening, possibly indicating the desire of using the Blood Bank to make control of the serological status by some of the donators

Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2017-07-31T13:41:46Z No. of bitstreams: 1 Mariane de Amarante Souza.pdf: 1596658 bytes, checksum: 44d5d39f8f8a41833027151f10b44e37 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T13:41:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariane de Amarante Souza.pdf: 1596658 bytes, checksum: 44d5d39f8f8a41833027151f10b44e37 (MD5) Previous issue date: 2017-05-25 / Introduction: Hepatitis C virus (HCV) is an RNA virus with six different genotypes (1 to 6). This virus is mainly transmitted through parenteral route. An estimated 170 million individuals are HCV carriers worldwide. HCV infection is considered as the main cause of liver cirrhosis in the West. The natural history of HCV is related to viral and host factors. Among the latter, type 2 diabetes mellitus (T2DM) has been related with more rapid progression of liver fibrosis. Aim: To evaluate HCV carriers and identify factors associated with more advanced degrees of liver fibrosis. Methods: A cross-sectional study with chronic HCV carriers. The study was performed at the Center for Liver Study Outpatient Clinic of the Presidente Dutra University Hospital, Federal University of Maranhão, São Luís, Maranhão, northeast Brazil. The patients had their medical records analysed. The subjects with the following features were not enrolled for this study: incomplete data, HIV or HBV coinfection, end-stage chronic renal disease on dialysis and individuals who underwent kidney or liver transplantation. Demographic data (sex and age), alcohol intake (yes or no), T2DM (presence or absence), HCV genotype and degrees of liver fibrosis were retrieved from the patients’ medical records. The patients were classified as less or more advanced fibrosis. Both groups were compared to demographic variables, viral genotypes, T2DM presence and alcohol intake. We used the chi-square test and student’s t-test for nominal and numerical variables respectively. Multivariate logistic regression analysis was performed to identify factors independently associated with more advanced degrees of liver fibrosis. We used the SPSS version 23.0 for statistical analyses. Results: A total of 235 patients participated of this study. These patients had complete data on their medical records and met all the inclusion and exclusion criteria. Most of them were male (138/235; 59%) ranging from 18 to 78 years of age (53 ± 10). They were associated with more advanced degrees of fibrosis: Age (OR=1.061, 95% CI: 1.025- 1.098, p<0.001), presence of T2DM (OR 2.227, 95%CI: 1.059-4.142, p = 0.035) and alcohol intake (OR 1.921, 95%CI: 1.129-3.269, p=0.036). Conclusion: T2DM was associated with more advanced degrees of liver fibrosis among the HCV carriers. Thus, diagnosis and treatment of HCV carriers with diabetes are of great importance for interrupting the progression of liver cirrhosis. / Introdução: O vírus da Hepatite C (HCV) é um RNA vírus, que apresenta seis genótipos diferentes (1 a 6) e é transmitido por via predominantemente parenteral. Existem cerca de 170 milhões de indivíduos portadores do HCV em todo o mundo. É a principal causa de cirrose hepática no mundo ocidental. A história natural da infecção pelo HCV é modulada pela interação de fatores virais e do hospedeiro. Entre os fatores associados ao hospedeiro, Diabetes mellitus tipo 2 (T2DM) tem sido associada a maior progressão da doença hepática. Objetivo: avaliar portadores do HCV e identificar fatores associados a graus mais avançados de fibrose hepática. Metodologia: Estudo transversal com portadores da infecção crônica pelo HCV. Foram analisados dados dos prontuários de pacientes atendidos no ambulatório do Núcleo de Estudo do Fígado do Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão, excluídos portadores de co-infecção com vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou vírus da hepatite B (HBV), portadores de doença renal crônica terminal em diálise e transplantados de fígado ou rim. Resgatados dados demográficos (idade e gênero), graus de fibrose hepática, genótipo viral, história de ingestão alcoólica e diagnóstico de T2DM. Os portadores foram categorizados em graus mais e menos avançados de fibrose e comparados quanto aos dados demográficos (idade e sexo), genótipo viral, presença ou não de T2DM e ingestão alcoólica. Diferenças entre variáveis numéricas foram calculadas pelo teste t de Student e entre nominais pelo Quiquadrado. Foi realizada regressão logística multivariada para identificar fatores independentemente associados com graus mais avançados de fibrose. O programa SPSS versão 23.0 foi utilizado. Resultados: Incluídos 225 pacientes, a maioria do sexo masculino (138/235, 59%), com média de idade 53 ± 10 anos. Foram associados a graus mais avançados de fibrose: idade (OR=1,061 (IC 95% 1.025-1,098) P<0.001), presença de T2DM (OR 2,227 (IC 95% 1,059-4,142) P= 0,035) e ingestão alcoólica (OR 1,921(IC 95% 1,129-3,269) P=0,036). Conclusão: Entre portadores crônicos do HCV no Maranhão, a presença de T2DM esteve associada a graus mais avançados de fibrose hepática, sugerindo que é importante o diagnóstico da infecção crônica pelo HCV entre diabéticos, para que o tratamento da infecção seja feito, prevenindo progressão para cirrose hepática.

Introdução: Nos últimos anos têm-se demonstrado que a vitamina D desempenha um papel crucial em muitas doenças agudas e crônicas, não só afetando as condições ósseas, mas também aumentando o risco de fraturas, doenças auto-imunes e câncer. A influência da vitamina D nas doenças do fígado tem sido amplamente discutida já que esta sofre metabolismo hepático. Indivíduos com doenças hepáticas, e em especial com hepatite C crônica, apresentam maior prevalência de deficiência de vitamina D. Objetivos: Avaliar, em duas amostras distintas, a influência dos níveis séricos de vitamina D e/ou dos polimorfismos envolvidos na sua rota metabólica na progressão da doença hepática crônica causada pelo vírus C. Métodos: A primeira amostra consistiu de um estudo transversal com 132 pacientes com hepatite C crônica genótipo 1 do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA). Foi avaliada a influência de níveis séricos de vitamina D e dos polimorfismos rs7041 e rs4588 do gene GC no grau de fibrose hepática (escore METAVIR). As genotipagens foram feitas com ensaio TaqMan e as análises estatísticas foram realizadas no programa SPSS v.20.0. A segunda amostra consistiu da análise de dados extraídos da plataforma dbGaP. Foram investigados 681 pacientes com hepatite C crônica da coorte americana HALT-C, acompanhados pelo período quatro anos. Avaliou-se a relação de 40 polimorfismos dos genes DHCR7, GC, CYP2R1, CYP24A1, CYP27B1, VDR, SMAD3 e TGFB1 nos seguintes desfechos: piora da fibrose hepática; descompensação hepática (escore Child Pugh-Turcotte>7, ascite, encefalopatia hepática, peritonite bacteriana espontânea e/ou sangramento de varizes gastroesofágicas); desenvolvimento de carcinoma hepatocelular e morte do fígado. Os polimorfismos que não se encontravam disponíveis no banco de dados foram imputados com o programa Mach-Admix 2.0.203 e as análises foram no programa Plink 1.07 e foi realizada correção de Bonferroni. Nesta amostra, resultados com P<0,05 foram considerados 2 como tendência à associação. Resultados: Na amostra do HCPA, níveis diminuídos de vitamina D, bem como a deficiência grave de vitamina D, foram mais frequentes entre pacientes com fibrose intermediária/avançada (METAVIR 3 e 4). Embora os polimorfismos rs7041 e rs4588 e seus haplótipos tenham apresentado relação com os níveis séricos de vitamina D, estes não apresentaram associação com a gravidade da fibrose hepática. Na segunda amostra estudada, onze polimorfismos tiveram tendência à associação (P<0,05) com os desfechos analisados: quatro SNPs no gene DHCR7 com descompensação hepática (rs4944957, rs12800438, rs3829251 e rs4945008); dois no gene GC com piora da fibrose e morte do fígado (rs7041 e rs222020); dois no gene CYP2R1 com ascite ou carcinoma hepatocelular (rs7116978 e rs1562902); dois no gene VDR com sangramento de varizes gastresofágicas e carcinoma hepatocelular (rs4516035 e rs2239186); e um no gene SMAD3 com piora da fibrose e encefalopatia (rs2118610). Apenas um polimorfismo, rs1800469no gene TGFB1, apresentou associação com descompensação hepática após correção de Bonferroni (P<0,05/40). Conclusões: Nossos resultados demonstraram que níveis séricos menores de vitamina D estão associados à progressão da fibrose hepática na hepatite C crônica genótipo 1. Além disso, os onze polimorfismos da rota da vitamina D que apresentaram tendência à associação estatística, indicam que variantes genéticas da rota metabólica da vitamina D possuem fraca ou nenhuma relação com a progressão da hepatite C crônica, merecendo análises futuras. Já o polimorfismo rs1800469, do gene TGFB1, demonstrou potencial utilidade para auxiliar na identificação de pacientes com maior chance de descompensação hepática. / Introduction: In the past years it has been demonstrated that vitamin D plays a crucial role in many acute and chronic diseases, not only affecting bone conditions but increasing the chance of fractures, autoimmune diseases and cancer. Vitamin D influence in liver disease is also widely discussed since it undergoes trough hepatic metabolism. Subjects with liver diseases, especially chronic hepatitis C, present higher rates of vitamin D deficiency. Objectives: Evaluate, in two different samples, the influence of vitamin D serum levels and/or polymorphisms of vitamin D metabolic pathway in liver disease progression in patients with chronic hepatitis C. Methods: The first sample consisted of a transversal study with 132 patients from Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) with chronic hepatitis C genotype 1. We evaluated the influence of serum levels of vitamin D and rs7041 and rs4588 GC polymorphisms over liver fibrosis (METAVIR scoring). Genotyping was performed with TaqMan probes and statistical analyses were conducted using SPSS v.20.0. The second sample was extracted from HALT-C cohort available in dbGap plataform. It included 681 patients with chronic hepatitis C, followed for 4 years. Forty polymorphisms in DHCR7, GC, CYP2R1, CYP24A1, CYP27B1, VDR, SMAD3 and TGFB1 genes were analyzed with the following outcomes: worsening of fibrosis; hepatic decompensation (gastric/esophageal bleeding, CTP > 7, ascites, spontaneous bacterial peritonitis, and/or encephalopathy); development of hepatocellular carcinoma; and liver death. Polymorphisms not available in dbGaP data were imputed using Mach-Admix 2.0.203 software and analyses were performed in Plink v.1.07 and a Bonferroni’s correction was performed. Results with P<0.05 were considered as having tendency towards association. Results: In HCPA sample low serum vitamin D, as well as severe vitamin D deficiency, were more frequent among patients with intermediate/severe fibrosis (METAVIR 3 and 4). Although rs7041 and rs4588 4 polymorphisms and its haplotypes presented association with serum levels of vitamin D, they were not associated with severity of liver fibrosis. In sample two, eleven polymorphisms presented tendency towards association (P<0.05) with the studied outcomes: four SNPs in DHCR7 with hepatic decompensation (rs4944957, rs12800438, rs3829251 and rs4945008); two in GC with worsening of fibrosis and liver death (rs7041 and rs222020); two in CYP2R1 with ascites or hepatocellular carcinoma (rs7116978 and rs1562902); two in VDR with gastric/esophageal bleeding and hepatocellular carcinoma (rs4516035 and rs2239186); and one in SMAD3 with worsening of fibrosis and encephalopathy (rs2118610). Only one polymorphism, rs1800469 in TGFB1, showed statistical significance with hepatic decompensation after Bonferroni’s correction (P<0.05/40). Conclusions: Our results demonstrated that low serum vitamin D has association with fibrosis progression in chronic hepatitis C genotype 1. Also, the eleven polymorphisms with tendency towards association indicate that genetic variants in vitamin D pathway possess weak or none relation with progression of chronic hepatitis C, deserving future analyses. Finally, polymorphism rs1800469 in TGFB1 demonstrated potential utility to help identify patients with higher odds of hepatic decompesantion.

Doutor -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 1999.

Orientador : Prof. Dr. Marco Aurelio Krieger / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 15/05/2009 / Inclui bibliografia / A infecção pelo vírus da hepatite C acomete cerca de 3% da população mundial e a prevalência no Brasil está próxima deste valor. Seu impacto social é enorme, tanto na morbidade e mortalidade, quanto nos custos que seu tratamento demanda. O tratamento baseado no uso de interferon é efetivo em uma fração dos casos. Uma vez que a determinação do genótipo do HCV é fundamental para a condução do tratamento, métodos diagnósticos com esta finalidade fazem-se necessários. Este trabalho publica pela primeira vez na literatura, ao menos pelo conhecimento do autor, a utilização da metodologia de microarranjo líquido na determinação do genótipo e subtipo do HCV. Na avaliação de oitenta amostras positivas para a presença do HCV, o ensaio foi capaz de determinar o genótipo em setenta e seis (76/80, sensibilidade de 95%). A avaliação de sua concordância com outros métodos: seqüenciamento da região NS5b , Versant HCV genotype 1.0 e RT-PCR &quot;in house",foi realizada. A concordância em relação à determinação do genótipo foi total em relação aos demais métodos, sendo o de seqüenciamento o padrão ouro. A determinação do subtipo foi possível em cinqüenta e duas amostras com genótipos determinados (52/76, 68%). Uma vez que para o tratamento da hepatite somente a determinação do genótipo, e não do subtipo é necessária, conclui-se que o teste baseado em microarranjo pode ser utilizado para esta finalidade; sendo sensível, específico, de alto rendimento e de relação custo benefício favorável. / Worldwide 3% of the population is infected by hepatitis C virus, and a number next to this is believed do occur in Brazil as well. Its social impact is huge, when morbidity and mortality are considered, also treatment associated costs. Interferon based treatment is favorable in a fraction of cases. Since it was established the importance of HCV genotyping regarding treatment, diagnostics methods are in high demand. The present work is the first to publish on liquid microarray utilization for HCV genotyping, at least to the author knowledge. Eighty positive samples for HCV presence evaluated showed seventy six to have their genotypes determined by the microarray test (76/80, sensitivity of 95%). Agreement evaluation with other methods: NS5b sequencing, Versant HCV genotype 1.0 and RT-PCR &quot;in house" was performed. When genotyping is considered, total agreement was found compared to the other methods; sequencing being considered the &quot;gold standard" . Subtyping determination was possible in fifty two of those genotyped (52/76, 68%). Once considered that only genotyping matters to treatment decision, and not subtyping, it is concluded that microarray can be utilized to this goal; find to be sensitive, specific, of high throughput and cost effective.

Submitted by PEDRO MADY BERTOLINI null (pedro.bertolini@hotmail.com) on 2017-12-05T17:54:38Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL.pdf: 846707 bytes, checksum: 4fef262520629daeeadbe842680821eb (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2017-12-06T13:11:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bertolini_pm_me_bot.pdf: 846707 bytes, checksum: 4fef262520629daeeadbe842680821eb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-06T13:11:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bertolini_pm_me_bot.pdf: 846707 bytes, checksum: 4fef262520629daeeadbe842680821eb (MD5) Previous issue date: 2017-11-20 / O vírus da hepatite E (HEV) é um importante problema para a saúde pública e uma das principais causas de hepatite entérica em todo o mundo, podendo ser transmitido pelo consumo de carne suína contaminada. O trabalho teve por objetivos avaliar a prevalência do HEV em suínos de criações intensivas e tecnificadas, abatidos em matadouro-frigorífico sob Inspeção Sanitária. Foram coletadas 140 amostras de fezes de suínos de 14 propriedades distintas dos estados de São Paulo e Santa Catarina. As técnicas de diagnósticos moleculares nas amostras de fezes foram Nested RT-PCR e sequenciamento de Sanger para identificação da presença do vírus da hepatite E e o genótipo para elucidar os dados epidemiológicos. Os suínos não apresentaram doenças ou sinais clínicos no exame ante mortem e no exame post mortem. Os fígados não apresentaram lesões macroscópicas e contaminações gastrointestinais visíveis, portanto, as vísceras e carcaças foram destinadas ao consumo humano. Foram identificados 1,4% de suínos infectados pelo HEV genótipo 3. O vírus da Hepatite E, genótipos 3 e 4 tem caráter zoonótico, podendo gerar grande impacto na Saúde Pública. Diante disso, deve-se haver cuidados na manipulação de produtos possivelmente contaminados pelo HEV, evitando assim a contaminação cruzada, e, também, tratando termicamente a carne e derivados de suínos, a fim de garantir a inocuidade alimentar. / Hepatitis E virus (HEV) is a major public health problem and one of the leading causes of enteric hepatitis worldwide and can be transmitted through the consumption of contaminated pork. The objective of this study was to evaluate the prevalence of HEV in pigs from intensive and technified farms slaughtered at a slaughterhouse under Sanitary Inspection. A total of 140 swine feces samples were collected from 14 different properties in the states of São Paulo and Santa Catarina. Molecular diagnostic techniques in faecal samples were Nested RT-PCR and Sanger sequencing to identify the presence of hepatitis E virus and the genotype to elucidate epidemiological data. The pigs had no disease or clinical signs on antemortem and post-mortem examination. The livers did not present macroscopic lesions and visible gastrointestinal contaminations, therefore the viscera and carcasses were destined for human consumption. A total of 1.4% of HEV genotype 3 infected pigs were identified. The hepatitis E virus, genotypes 3 and 4, is zoonotic in nature and can have a great impact on public health. In view of this, care must be taken in the handling of products possibly contaminated by HEV, thus avoiding cross-contamination, and also by thermally treating meat and pork products in order to guarantee food safety.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marielle de Oliveira Castro.pdf: 948812 bytes, checksum: 71c8c7096fa4cd9fbc718b2983fb0b7d (MD5) Previous issue date: 2007-03-23 / Hepatitis C is considered one of the largest problems of public health in the world, inclusively in Brazil, whereas a preventive vaccine none is available; the number of asymptomatic infections is elevated and for control of the disease, there exist only imported kits. Considering, principally, the increase of preoccupation with the detection of precocious hepatitis C and that the diagnostic methods of this infection are of the highest clinical importance, the presence study proposes the expression and the purification of one codified protein through a synthetic gene (MEHCV Multiepitope HCV). To achieve this objective, the new recombinant protein multiepitope was designed on the basis of epitopes linear, immunodominant and phylogenetically conserved from the virus of hepatitis C (HCV), including the immune dominating sequences of the genotypes that are more prevalent in Brazil (1a e 3a) and a His-tag in C-terminal to facilitate the purification of the recombinant protein express in bacteria. These epitopes (core, NS3, NS4A, NS4B e NS5) are considered among the most important for the diagnosis of the illness utilized for many HCV detection tests. The MEHCV gene (~720pb) possesses restrictive of sites (NdeI e XhoI) in yours extremities that permits the clonage in phase in the expression of vector bacterial pET-21a. To the synthesize of this gene was made the optimization to the codon usage of E. coli. The protein of interest (~29kDa) was detected by SDS-PAGE and Western blot. The purification of the protein express was realized by centrifugal in resin Ni-NTA by affinitive chromatography. Inasmuch as the purification was not total, a new purification was made of this protein by means of chromatography of affinity in column with resin Ni-NTA. However, did not having this purification owe a presence of cellular proteins. In such case, in the trial of obtain a total purification of this protein multiepitope, would be interesting the utilization of the one new protocol, with the extraction of the inclusion body, wherein all the dissolvable proteins cellular would be remove of the solution. / A hepatite C é considerada um dos maiores problemas de saúde pública no mundo inteiro, inclusive no Brasil, pois uma vacina preventiva não está disponível, o número de infectados com a forma assintomática é elevado e para o controle da doença, há somente kits importados. Considerando, principalmente, o aumento da preocupação com a detecção precoce da hepatite C e que os métodos de diagnóstico desta infecção são de grande relevância clínica, o presente trabalho propõe a expressão e purificação de uma proteína codificada por um gene sintético (MEHCV Multiepítopo HCV). Para atingir este objetivo, uma proteína multiepítopo recombinante foi desenhada a partir de epítopos lineares, imunodominantes e filogeneticamente conservados do vírus da hepatite C (HCV), com a inclusão de seqüências imunodominantes dos genótipos mais prevalentes no Brasil (1a e 3a) e uma His-tag no C-terminal para facilitar a purificação da proteína recombinante expressa em bactéria. Estes epítopos (core, NS3, NS4A, NS4B e NS5) são considerados entre os mais importantes para o diagnóstico da doença e utilizados em muitos testes para detecção do HCV. O gene MEHCV (~720pb) possui sítios de restrição (NdeI e XhoI) nas suas extremidades que permitem a clonagem em fase no vetor de expressão bacteriano pET-21a. Para a síntese deste gene, foi feita a otimização para o códon usage de E. coli. A proteína de interesse (~29kDa) foi detectada por SDS-PAGE e Western blot. A purificação da proteína expressa foi realizada por cromatografia de afinidade em resina Ni-NTA. Como a purificação não foi total, foi feita uma nova purificação desta proteína por cromatografia de afinidade em coluna com resina Ni-NTA. No entanto, não houve esta purificação devido à presença de proteínas celulares. Sendo assim, na tentativa de alcançar a purificação total desta proteína multiepítopo, seria interessante a utilização de um novo protocolo, com a extração dos corpos de inclusão, onde todas as proteínas celulares solúveis seriam retiradas da solução.

Orientador: Cláudio Antonio Rabello Coelho / Resumo: A hepatite aguda pelo vírus da hepatite tipo A (VHA) é uma causa comum de doença hepática em crianças em nosso meio, sendo o tipo mais freqüente entre as de causa viral. Usualmente, diante de um paciente com quadro clínico e dados epidemiológicos sugestivos de hepatite aguda, a presença de doença hepática é confirmada e a evolução é acompanhada utilizando-se as chamadas "provas de função hepática" (PFH), cujos resultados habitualmente são conhecidos antes do resultado do exame sorológico, que define a etiologia. Diante do número relativamente grande de PFH que podem ser utilizadas, das implicações fisiopatológicas diferentes que podem ter e do custo de sua execução, procuramos verificar quais delas poderiam ser substituídas por outra(s) e quais as possíveis relações entre os mecanismos de suas alterações. Para isso estudamos as correlações entre os níveis das seguintes PFH - concentração sérica bilirrubina total (BT), concentração sérica de bilirrubina de reação direta (BD), atividades séricas de aspartato aminotransferase (AST), de alanina aminotransferase (ALT), de fosfatase alcalina (FA) e de γ-glutamiltransferase (γGT) em crianças com hepatite do tipo A (HA), que evoluíram para cura, em diferentes fases de sua evolução - do 1o ao 7o dia (G 0-7), do 8o ao 14o dia (G 8-14), do 15o ao 30o dia (G 15-30), do 31o ao 60o dia (G 31-60) e após os 60 dias (G > 60). Foi aplicada análise de correlação múltipla efetuando-se as seguintes análises: 1) correlação entre BD (variável dependente - VD) e BT, AST, ALT, FA e γGT (variáveis independentes - VI) nos grupos G 0-7 e G 8-14; 2) correlação entre BT (VD) e AST, ALT, FA e γGT (VI), nos demais grupos; 3) correlação entre AST (VD) e BT, ALT, FA e γGT (VI) em todos os grupos e 4) correlação entre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Acute type A hepatitis (HA) is a common disease in children in Brazil. And is the most frequent cause of viral hepatitis. Usually when the clinical picture and epidemiological data are suggestive of acute hepatitis the diagnosis of hepatic damage and the follow-up is made using the so called "liver function tests" (LFT), besides the serological confirmation of a recent infection by the hepatitis type A virus (HAV). Considering that: 1) the number of available LFT is relatively large: 2) the ordering of many tests repeatedly over the course or disease would be expensive, and 3) the physiopathological mechanisms of their alterations may be different one from the other we aimed at determining which test(s) could be substituted by other(s) and which are the possible relations among the physiopathological mechanisms of their alterations. To fulfil these objectives, we studied, in children with type A hepatitis, which eventually cured, the multiple correlations among combinations from the following group of tests: total serum bilirubin concentration (TB), direct reactant bilirubin concentration (DB), serum aspartate aminotransferase activity (AST), serum alanine aminotransferase activity (ALT), serum alkaline phosphatase activity (AP) and serum γglutamiltranspeptidase activity (γGT). The correlations were calculated from data taken during different periods after jaundice was noticed - from 0 to 7 days (G 0-7), from 8 to 14 days (G 8-14), from 15 to 30 days (G 15-30), from 31 to 60 days (G 31-60) and after 60 days. A multiple correlation test was applied to carry out the following analyses: 1) correlation between DB ( dependent variable - DV) and TB, AST, ALT, AP and γGT (independent variable - IV) for the groups G 0-7 and... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Bruno Moreira Carneiro / Banca: João Bosco Guerreiro da Silva / Banca: Márcia Maria Costa Nunes Soares / Banca: Rejane Maira Góes / Banca: Ricardo Barros Mariutti / Resumo: O vírus da hepatite C (HCV) causa a doença da Hepatite C e estima-se que cerca de 3% da população mundial esteja infectada com o vírus. A infecção por HCV promove a alteração na expressão de várias proteínas celulares. Estudos têm demonstrado que muitas proteínas de choque térmico (HSPs) possuem um perfil de expressão alterado na presença do vírus e algumas HSPs interagem diretamente com proteínas do HCV. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro os níveis de expressão de proteínas de choque térmico na presença e ausência de HCV. Com este propósito, células de hepatoma humano Huh7.5 e células Huh7.5 infectadas com o vírus (HCV JFH-1) foram submetidas à extração de RNA e síntese de cDNA. A expressão diferencial de 84 HSPs e chaperonas foi avaliada por qPCR Array. Os resultados demonstram que cinco genes apresentaram expressão aumentada (em Log2 2), enquanto outros cinco apresentaram expressão reduzida. Para validar estes resultados os 10 genes diferencialmente expressos foram testados por qPCR em três modelos celulares para o HCV: células contendo replicon subgenômico do HCV (SGR-JFH-1), células infectadas com JFH-1 (ambos do genótipo 2a) e células contendo o replicon subgenômico S52 (genótipo 3). O gene HSPB8 mostrou expressão aumentada nos três modelos testados, condizente com os resultados obtidos por qPCR Array. Em seguida, promovemos o silenciamento de HSPB8 e foi observado um aumento na replicação viral. Em contraste, quando aumentamos a expressão de... / Abstract: Hepatitis C virus (HCV) causes Hepatitis C disease and it is estimated that about 3% of world population are infected with the virus. HCV infection promotes alteration in the expression of several cellular proteins. Studies have shown that many heat shock proteins (HSPs) have an altered expression profile in the presence of the virus and some HSPs interact directly with HCV proteins. Thus, the present study aimed to evaluate in vitro the expression levels of heat shock proteins in the presence and absence of HCV. With this purpose, human hepatoma Huh7.5 cells and Huh7.5 cells infected with the virus (HCV JFH-1) were subjected to RNA extraction and cDNA synthesis. The differential expression of 84 HSPs and chaperones was assessed by qPCR Array. The results demonstrate that five genes showed increased expression (over Log2 2), while five other presented reduced expression. To validate these results, the 10 differentially expressed genes were tested by real-time PCR in three different HCV cell culture models: subgenomic HCV replicon cells (SGR-JFH-1), JFH-1 infected cells (both genotype 2a) and subgenomic S52 cells (genotype 3). The HSPB8 gene showed increased expression in all of three tested models, consistent with qPCR Array results. Then we promoted the silencing of HSPB8 and observed an increase in viral replication. In contrast, when we increased an expression of HSPB8, HCV had a decrease in replication rate. The same procedure was adopted for the DNAJC5B, validated in the ... / Doutor

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