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Uso Tópico do Alendronato de Sódio Associado ao Bio-oss® no Reparo de Defeitos Òsseos - Estudo Histomorfométrico em Calvária de Ratos

MUSSO, D. B. 04 December 2015 (has links)
Made available in DSpace on 2018-08-01T23:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9394_Dissertação Douglas Final 2.pdf: 1833131 bytes, checksum: fb6c20c5e64bf545a92eb43a8794d710 (MD5) Previous issue date: 2015-12-04 / O alendronato de sódio (ALN) tem demostrado um efeito anabólico no reparo ósseo quando associado aos enxertos provenientes de osso bovino liofilizado, porém a forma de administração e a concentração ainda são objeto de investigação. Objetivo: Esta pesquisa avaliou o efeito do uso tópico do ALN a 0,5%, utilizado isoladamente ou associado ao osso bovino liofilizado (Bio-Oss®), sobre o percentual de neoformação óssea e a absorção dos grânulos do enxerto. Metodologia: Duas cavidades de 5mm de diâmetro foram confeccionadas na calvária de 18 ratos Wistar e preenchidas com: ALN 0,5% veiculado em esponja de gelatina (grupo A - GA); BioOss® (grupo B - GB); Bio-Oss® embebido em ALN 0,5% (grupo AB - GAB); coágulo sanguíneo (grupo controle - GC). Os animais foram eutanasiados aos 90 dias pósoperatórios. Os espécimes foram analisados histologicamente (hematoxilina/eosina) e por histomorfometria com auxílio do software AutoCAD®, quanto ao percentual de neoformação óssea e de remanescentes de grânulos de Bio-Oss®. Na análise estatística, os grupos foram comparados utilizando o teste t de Student para amostras pareadas (p ≤ 0,05). Resultados: As médias dos percentuais de neoformação óssea foram: GA = 40,4 ± 22,2; GB = 46,0 ± 22,0; GAB = 29,9 ± 17,8; GC = 49,9 ± 16,4, enquanto a média dos percentuais de remanescentes de grânulos de Bio-Oss® foram: GB = 9,2 ± 4,5 e GAB = 12,2 ± 7,2%. Houve diferença estatisticamente significativa no percentual de neoformação óssea apenas entre o grupo GC e GAB (p = 0,025), com preenchimento tecidual do defeito ósseo sem diferença estatística em virtude da presença dos grânulos do enxerto. Não houve diferença estatisticamente significativa no percentual de remanescentes de grânulos entre os grupos. Conclusão: O uso do ALN 0,5% tópico isoladamente nas cavidades ósseas não alterou o percentual de neoformação óssea. Quando associado ao Bio-Oss®, diminuiu o percentual de neoformação óssea e não interferiu na reabsorção dos grânulos do enxerto. Descritores1
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Comparação entre o uso de sutura e sutura associada ao selante de fibrina (CEVAP) na interação neuromuscular após Lesão Nervosa Periférica

Leite, Ana Paula Silveira. January 2018 (has links)
Orientador: Selma Maria Michelin Matheus / Resumo: Os nervos periféricos são comumente acometidos por lesões que acarretam interrupção do impulso nervoso. Dentre as causas mais comuns, estão: traumas, estiramento, pinçamento, compressão e esmagamento, resultando em comprometimento do sistema neuromuscular. A recuperação tanto morfológica quanto funcional após este tipo de lesão raramente é completa, sendo um desafio para clínica médica. A maior parte da literatura tem como foco o estudo da recuperação nervosa e muscular, havendo poucas referências em relação às junções neuromusculares (JNM). Além disso, outros procedimentos vêm sendo testados como uma forma de minimizar os danos causados pelo uso da sutura. Dentro desta proposta este estudo teve como objetivo avaliar o uso do selante de fibrina (CEVAP) associado ao número reduzido de pontos (1 ponto), quando comparado a sutura convencional (3 pontos), após lesão do nervo isquiático. Foram utilizados 36 ratos Wistar machos adultos, divididos em 4 grupos experimentais: Controle (C), Desnervado (D); Sutura (S) e Sutura + Selante de Fibrina (SFS). No grupo C, foi realizada apenas incisão superficial no antímero direito, afastamento da musculatura e localização do nervo isquiático. No grupo D foi realizada neurotmese do nervo isquiático (gap de 6 mm). No grupo S foi realizada transecção completa do nervo isquiático direito e após 7 dias foi efetuada anastomose epineural do mesmo. No grupo SFS, a reconstrução nervosa foi realizada com um ponto de sutura, seguida da aplicação do sel... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Peripheral nerves are commonly affected by injuries that lead to interruption of the nerve impulse. Among the most common causes are: trauma, stretching, pinching, compression and crushing, resulting in impairment of the neuromuscular system. Both morphological and functional recovery after this type of injury is rarely complete and a challenge for medical practice. Most of the literature focuses on the study of nerve and muscle recovery, with few references to neuromuscular junctions (NMJs). In addition, other procedures have been tested as a way to minimize the damages caused by the use of suture. The aim of this study was to evaluate the use of fibrin selant (CEVAP) associated to reduced number of stitches (1 point) when compared to conventional suture (3 stitches) after ischiatic nerve injury. Thirtysix male adult Wistar rats were divided into four experimental groups: Control (C), Desnervate (D), Suture (S) and Suture + Fibrin Sealant (SFS). In group C, an only superficial incision was made in the right antimer, followed by distance from the musculature and location of the ischiatic nerve. In group D, ischiatic nerve neurotmesis (6 mm gap) was performed. In group S, a complete transection of the right ischiatic nerve was carried out and after 7 days an epineural anastomosis of the ischiatic nerve was performed. In the SSF group, the nerve reconstruction was performed with one suture point, followed by the application of CEVAP fibrin sealant (Unesp- Botucatu Center for th... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Resposta tecidual ao implante ósseo xenógeno inorgânico variando-se o método de esterilização: avaliação histomorfológica e histomorfométrica

Valentini Neto, Rodolpho [UNESP] 15 January 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-15Bitstream added on 2014-06-13T20:41:19Z : No. of bitstreams: 1 valentinineto_r_dr_araca.pdf: 348074 bytes, checksum: fe35ce64122835a7383e6940b91d45a5 (MD5) / Proposição: Este estudo avaliou a resposta tecidual ao implante xenógeno inorgânico de osso bovino, por meio de análise histomorfológica e histomorfométrica, variando-se o método de esterilização. Materiais e Método: Discos de 8 mm costela bovina foram obtidos por processamento específico para remoção de parte orgânica e foram esterilizados por meio de autoclavagem ou radiação gama. Em seguida, 20 coelhos brancos (Nova Zelândia) foram cirurgiados para instalação dos discos na face lateral dos gônios mandibulares, bilateralmente, através de parafuso de fixação de enxertos, originando dois grandes grupos: Grupo EA - implante autoclavado; Grupo EI – implante gama-irradiado. As lâminas foram obtidas nos períodos de 15 e 45 dias pós-operatórios e as imagens teciduais foram analisadas qualitativa e quantitativamente. Resultados: O teste de Kruskal-Wallis foi aplicado e não identificou diferença significativa entre as medidas lineares das interfaces osso/implante (BIC) dos grupos dentro dos mesmos períodos (15 dias: p=0,100; 45 dias: p=0,940). Conclusão: De acordo com a metodologia aplicada, foi possível concluir que o estabelecimento da integração osso/implante cursou com atraso quando o implante foi esterilizado por radiação, porém, com a evolução da reparação, o método de esterilização não ocasionou alterações significativas no período final / Proposition: This study evaluated the tissue response to the implant inorganic xenogenic bovine bone through the histomorphological analysis, varying the method of sterilization. Materials and Methods: Discs of 8 mm bovine rib were obtained by specific processing to remove organics phase and were sterilized by autoclaving or gamma radiation. Then, 20 white rabbits (New Zealand) were operated for discs installation on gonion external side of mandibular, bilaterally, through screw grafts, yielding two large groups: EA - implant autoclaved; EI Group - gamma-irradiated implant. Slides were obtained at 15 and 45 days post-operative tissue and the images were analyzed qualitatively and quantitatively. Results: The Kruskal-Wallis test was used and no difference was found between linear interfaces of the bone / implant (BIC) groups within the same period (15 days: p = 0.100; 45 days: p = 0.940). Conclusion: According to the methodology, it was concluded that the establishment of integration bone / implant occurred later when the implant was sterilized by radiation in initial period, but with the evolution of repair, the method of sterilization did not cause significative changes in the final period
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Estudo dos resíduos de aminoácidos de friedelina sintase de Maytenus ilicifolia envolvidos com sua especificidade biossintética / Study of the amino acids residues of friedelin synthase of Maytenus ilicifolia involved with its biosynthetic specificity

Remlinger, Melissa [UNESP] 24 April 2017 (has links)
Submitted by MELISSA REMLINGER null (melissa.remlinger@yahoo.com.br) on 2017-05-15T18:49:13Z No. of bitstreams: 1 DissertacaoMestradoMelissaRemlinger.pdf: 6915267 bytes, checksum: 6abcf69dca1b6149f3cab02b71fbd6e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-16T14:48:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 remlinger_m_me_araiq.pdf: 6915267 bytes, checksum: 6abcf69dca1b6149f3cab02b71fbd6e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T14:48:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 remlinger_m_me_araiq.pdf: 6915267 bytes, checksum: 6abcf69dca1b6149f3cab02b71fbd6e3 (MD5) Previous issue date: 2017-04-24 / Triterpenos são produtos naturais de plantas estruturalmente complexos com numerosas aplicações medicinais. Como exemplo, friedelina é um triterpeno pentacíclico com atividade gastroprotetora, enquanto que seus derivados quinonametídicos maitenina e pristimerina apresentam promissoras atividades antiinflamatória, antitumoral, antimicrobiana, antimalárica, espermicida e antioxidante. O único triterpeno pentacíclico cetônico formado diretamente na ciclização do oxidoesqualeno é a friedelina. Sua produção se dá a partir da enzima friedelina sintase, uma oxidoesqueleno ciclase que se difere das demais oxidoesqualeno ciclases por estabilizar a ciclização promovida pelo carbocátion formado no sítio catalítico produzindo uma cetona. As oxidoesqualeno ciclases têm o mesmo substrato, porém se diferenciam pela especificidade de seus produtos formados e, por isto, a análise da estrutura primária da friedelina sintase permite estudar sua especificidade pela produção de friedelina. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo realizar o estudo da especificidade da friedelina sintase clonada de Maytenus ilicifolia por meio de mutantes desta enzima. Por meio de análises de docking da molécula de friedelina no sítio ativo da enzima foram observados resíduos de aminoácidos cuja interação poderia se relacionar à produção singular de friedelina. Os mutantes destes resíduos foram então gerados por mutagênese sítiodirigida para avaliar tais interações de acordo com o produto formado heterologamente pelos mutantes expressos em Saccharomyces cerevisiae. Os resíduos estudados e gerados por mutação sítio-dirigida foram: F183L, C369A, W417H, D484E e W612F. Os produtos assim diferencialmente produzidos foram avaliados por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM). Assim, foi possível observar que os resíduos D484 e W417 são essenciais para a atividade da enzima, enquanto que os resíduos C369, W612 e F183 são importantes para a especificidade de produto, uma vez que a troca levou a produção de outros compostos terpênicos e/ou também a friedelina. Tais resultados permitiram avaliar resíduos importantes para a biossíntese de friedelina, contribuindo para o entendimento desta singular oxidoesqualeno ciclase. / Triterpenes are natural plant products structurally complex with numerous medicinal applications. As an example, friedelin is a pentacyclic triterpene with gastroprotective activity whereas its quinone methide derivates maytenin and pristimerin present promising anti-inflammatory, antitumor, antimicrobial, antimalarial, spermicidal and antioxidant activities. Friedelin is the only pentacyclic ketone triterpene obtained directly from ciclization of oxidosqualene. Its production occurs from the enzyme friedelin synthase, an oxidosquelene cyclase, which differs from the other oxidosqualene cyclases by stabilizing the cyclization promoted by the carbocation formed at the catalytic site forming a ketone. The oxidosqualene cyclases have the same substrate, but are differentiated by the specificity of their products formed and, therefore, the analysis of the primary structure of friedelin synthase allows to study its specificity by the production of friedelin. Thus, the present work aimed to study the specificity of the friedelin synthase cloned from Maytenus ilicifolia using mutants of the enzyme. Through the analysis of docking of the molecule friedelin in the active site of the enzyme, it was observed amino acids residues whose interation could be related to the unique production of friedelin. Mutants of these residues were generated by site-directed mutagenesis to evaluate such interactions according to the product formed heterologously by the mutants expressed in Saccharomyces cerevisiae. Residues studied and generated by site-directed mutation were: F183L, C369A, W417H, D484E and W612F. The products thus differentially produced were evaluated by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) from the expression and production of the mutants using the heterologous S. cerevisiae system. Thus, the residues D484 and W417 are essential for enzyme activity, whereas residues C369, W612 and F183 are important for product specificity, since the exchange led to the production of other terpene compounds and / or also friedelin. These results allowed the evaluation of important residues for the biosynthesis of friedelin, contributing to the understanding of this unique oxidoesqualene cyclase.
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Resposta tecidual ao implante ósseo xenógeno inorgânico variando-se o método de esterilização : avaliação histomorfológica e histomorfométrica /

Valentini Neto, Rodolpho. January 2013 (has links)
Orientador: Eduardo Hochuli Vieira / Banca: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Banca: Wilson Roberto Poi / Banca: Thallita Pereira Queiroz / Banca: Paulo Esteves Pinto Faria / Resumo: Proposição: Este estudo avaliou a resposta tecidual ao implante xenógeno inorgânico de osso bovino, por meio de análise histomorfológica e histomorfométrica, variando-se o método de esterilização. Materiais e Método: Discos de 8 mm costela bovina foram obtidos por processamento específico para remoção de parte orgânica e foram esterilizados por meio de autoclavagem ou radiação gama. Em seguida, 20 coelhos brancos (Nova Zelândia) foram cirurgiados para instalação dos discos na face lateral dos gônios mandibulares, bilateralmente, através de parafuso de fixação de enxertos, originando dois grandes grupos: Grupo EA - implante autoclavado; Grupo EI - implante gama-irradiado. As lâminas foram obtidas nos períodos de 15 e 45 dias pós-operatórios e as imagens teciduais foram analisadas qualitativa e quantitativamente. Resultados: O teste de Kruskal-Wallis foi aplicado e não identificou diferença significativa entre as medidas lineares das interfaces osso/implante (BIC) dos grupos dentro dos mesmos períodos (15 dias: p=0,100; 45 dias: p=0,940). Conclusão: De acordo com a metodologia aplicada, foi possível concluir que o estabelecimento da integração osso/implante cursou com atraso quando o implante foi esterilizado por radiação, porém, com a evolução da reparação, o método de esterilização não ocasionou alterações significativas no período final / Abstract: Proposition: This study evaluated the tissue response to the implant inorganic xenogenic bovine bone through the histomorphological analysis, varying the method of sterilization. Materials and Methods: Discs of 8 mm bovine rib were obtained by specific processing to remove organics phase and were sterilized by autoclaving or gamma radiation. Then, 20 white rabbits (New Zealand) were operated for discs installation on gonion external side of mandibular, bilaterally, through screw grafts, yielding two large groups: EA - implant autoclaved; EI Group - gamma-irradiated implant. Slides were obtained at 15 and 45 days post-operative tissue and the images were analyzed qualitatively and quantitatively. Results: The Kruskal-Wallis test was used and no difference was found between linear interfaces of the bone / implant (BIC) groups within the same period (15 days: p = 0.100; 45 days: p = 0.940). Conclusion: According to the methodology, it was concluded that the establishment of integration bone / implant occurred later when the implant was sterilized by radiation in initial period, but with the evolution of repair, the method of sterilization did not cause significative changes in the final period / Doutor
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Supressão da resposta imune anti-ovalbumina em camundongos descendentes de mães esquistossomóticas: participação da IL-10 e dos linfócitos T regulatórios (Tregs)

SANTOS, Patrícia D'emery Alves 30 January 2013 (has links)
Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T17:14:52Z No. of bitstreams: 2 Tese Doutorado - Patrícia d`Emery Alves Santos.pdf: 5623506 bytes, checksum: 6d2b44603aad51ee424936237aa73e8b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T17:14:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Doutorado - Patrícia d`Emery Alves Santos.pdf: 5623506 bytes, checksum: 6d2b44603aad51ee424936237aa73e8b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-01-30 / Camundongos descendentes de mães esquistossomóticas apresentam, na vida adulta, alterações na resposta imune para o antígeno heterólogo, ovalbumina (OVA). A prévia amamentação em mães esquistossomóticas induziu aumento na produção de anticorpos anti-OVA, enquanto a gestação levou à diminuição. Aqui analisamos nos descendentes de mães esquistossomóticas: a influência da IL-10 na supressão dos anticorpos e a expressão de moléculas co-estimulatórias em resposta à OVA nas células apresentadoras de antígenos (APCs). Além disso, analisamos nestes descendentes após a infecção ou administração i.p. de antígeno solúvel de ovos de S. mansoni (SEA), a presença de células T regulatórias (Tregs) e a intensidade da supressão ou potencialização anti-OVA. Camundongos machos formaram quatro grupos: animais nascidos de mães infectadas e amamentados em mães não-infectadas (MI), animais de mães não-infectadas e amamentados em mães infectadas (AI), animais nascidos/amamentados em mães infectadas (MIAI) e nascidos/amamentados em mães não-infectadas (Controle). Parte destes animais foi depletada da ação da IL-10. Em outra parte, após a imunização com OVA+adjuvante realizou-se a dupla marcação para APCs (CD45R/B220 ou CD11c e CD80/CD86/CD40/HLA-DR), e nas infecções pós-natais, para Tregs (Foxp3). Foi observado que a IL-10 esteve comprometida com a supressão de anticorpos nos camundongos do grupo MI (p<0,05) e a frequência de células CD11c+/CD86+ (p<0,05) e células B CD40+/CD80+/CD86+ (p<0,01/p<0,01/p<0,05) foi drasticamente reduzida. Enquanto no grupo AI, ocorreu um aumento na frequência de células B CD40+/CD80+ (p<0,001/p<0,05) tão logo a imunização com OVA, sem nenhuma alteração nas células CD11c+. Após infecção dos descendentes ou contato com SEA, todos os grupos infectados apresentaram supressão nas reações de hipersensibilidade imediatas anti-OVA (p<0,05), sendo mais intensa no grupo AI. Neste último, observou-se alta frequência de Tregs (p<0,05). Foi observada alta produção de IL-4 e IL-10 e baixos níveis de IFN- nos grupos infectados em comparação ao controle sem infecção (p<0,05). Não foram observadas diferenças na produção de IgG1 e IgG2a anti-OVA entre os grupos. Então, a prévia amamentação em mães esquistossomóticas resulta em melhor apresentação antigênica pelas células B nos descendentes adultos, enquanto a gestação prejudica. As infecções pós-natais restauram a imunidade humoral anti-OVA, em descendentes nascidos ou amamentados em mães infectadas, e induzem um potencial imunossupressor nos camundongos previamente amamentados em mães infectadas.
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Produção da proteína L1 do Papilomavírus bovino tipo 1 em Pichia pastoris

JESUS, André Luiz Santos de 31 January 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3741_1.pdf: 1581853 bytes, checksum: 0025fe881a3b0e2eed7c457909ca63d6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Os papilomavírus são conhecidos por causarem lesões tumorais, geralmente benignas, em tecidos epiteliais de diversos organismos, que podem sob condições adequadas progredirem para o câncer. O papilomavírus bovino (BPV) tem sido amplamente caracterizado tanto por ser considerado um modelo experimental para o estudo do papilomavírus humano (HPV), quanto por sua grande importância na bovinocultura. Estudos para o combate da infecção mostram que vacinas baseadas em virus-like particles (VLPs), formadas a partir das proteínas capsidiais L1/L2 ou L1, induzem à produção de anticorpos neutralizantes conferindo proteção contra o mesmo tipo viral. A levedura Pichia pastoris é um sistema de expressão eficiente e de baixo custo para produção de altos níveis de proteínas, além de apresentar vantagens em relação a outros sistemas. Neste trabalho foi avaliado a possibilidade do uso do sistema de expressão heteróloga baseado em células da levedura P. pastoris para a produção da proteína L1 do capsídeo do papilomavírus bovino tipo 1. O gene L1 foi amplificado por PCR a partir do genoma completo de BPV 1, clonado no vetor pGEM-T Easy e subclonado sob a regulação do promotor AOX1 e em fase de leitura com uma cauda de poli-histidina presentes no vetor pPICZA. As células da levedura foram transformadas com a construção pPICZAL1B1 e os recombinantes resistentes a zeocina foram selecionados para expressão da proteína L1. Estes foram cultivados em frascos contendo meio com glicerol como fonte de carbono e após 48 horas o meio foi trocado por outro contendo 0,5% de metanol. A cada 24 horas foi adicionado metanol para uma concentração final de 2%, até completar 96 horas. Os resultados obtidos mostraram que os recombinantes P. pastoris transformados com o cassete de expressão pPICZAL1B1, após indução com metanol, foram capazes de expressar o gene L1 e de produzir a proteína L1 de BPV 1. Tais transformantes permitirão o estabelecimento de um sistema de expressão da proteína L1 e conseqüente produção de VLPs como primeiro passo para implementação de uma estratégia vacinal contra infecções por papilomavírus
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Análise metabolômica de Saccharomyces cerevisiae superexpressando a enzima friedelina sintase heteróloga para produção de metabólitos de interesse biológico e comercial /

Nora, João Paulo de Oliveira. January 2018 (has links)
Orientador: Maysa Furlan / Banca: Angela Regina Araujo / Banca: Hosana Maria Debonsi / Resumo: As espécies das famílias Celastraceae mostram o acúmulo de substâncias de interesse biológico, com destaque para a friedelina, com potentes efeitos anti-inflamatórios, analgésicos e gastroprotetores, e os triterpenos quinonametídeos, promissores agentes antitumorais. Entretanto, para que sejam utilizados como fármacos, novas metodologias e/ou técnicas para obtenção dos mesmos em larga escala se fazem necessárias. Nesse contexto, um sistema heterólogo composto pela levedura Saccharomyces cerevisiae, foi modificado geneticamente com a inserção de plasmídeos (vetores) contendo genes oriundos de Maytenus ilicifolia que codificam a enzima friedelina sintase, a qual leva a produção de friedelina. A introdução dos genes heterólogos pode perturbar as vias metabólicas do sistema heterólogo e, além do metabólito alvo, outras classes e/ou substâncias de interesse biológico e/ou comercial podem ser produzidas. Para tanto, as leveduras foram cultivadas em meio sintético completo (0,67% de base para levedura nitrogenada sem adição de aminoácidos e 2% de glicose), suplementado com aminoácidos, bases e ácido p-aminobenzóico, sem adição de uracila. Para os estudos de variabilidade metabólica, análises por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas foram realizadas utilizando os extratos etanólicos, clorofórmicos e hexânicos obtidos do sistema heterólogo com e sem modificação genética. Com o auxílio de técnicas metabolômicas foi possível a identificação de uma variedade de substâ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The species of the Celastraceae family shows the accumulation some compounds of biological interest, with emphasis on friedelin, with potent anti-inflammatory, analgesic and gastroprotective effects, as well as quinonemethide triterpenes, promising antitumor agents. However, in order to be used as drugs, new methodologies and / or techniques for obtaining them in large scale are necessary. In this way, a heterologous system of Saccharomyces cerevisiaeyeast was genetically modified with the insertion of plasmids (vectors) containing genes from Maytenus ilicifoliathat encode the enzyme friedelin synthase, looking for the production of friedelin by metabolic engineering. The introduction of the heterologous genes may disrupt the metabolic pathways of the heterologous system and, in addition to the target metabolite, other classes and / or compounds of biological and / or commercial interest may be produced. For this, yeasts were grown in complete synthetic medium (0.67% yeastnitrogen basewithout addition of amino acids and 2% glucose), supplemented with amino acids, bases and p-aminobenzoic acid, without addition of uracil. For metabolic variability studies, gas chromatographic analysis coupled with mass spectrometry were performed using ethanolic, chloroform and hexane extracts, obtained from the heterologous system with and without genetic modification. With the aid of metabolomic techniques it was possible to identify avariety of substances including various fatty acids and derivatives from 1to 5, as well as amides, such as (Z)-9-ocatadecenamide (7), terpenoid precursors such as squalene (8) and 2,3-oxidosesqualene (10), the triterpenes; friedelin (21) and lupeol (15), and alsosteroids ergosterol (14) and lanosterol (19). Due to perturbations in metabolic pathway of mevalonate, different substances were also observed, both in yeasts with the empty vector, plasmid considered as control... / Mestre
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Matriz óssea desmineralizada caprina (MODc) na reparação de falhas ósseas não-críticas em tíbias de coelhos /

Santos, Felipe Rocha dos. January 2019 (has links)
Orientador: Bruno Watanabe Minto / Banca: Luis Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Banca: Fernando Yoiti Kitamura Kawamoto / Resumo: Objetivou-se neste estudo avaliar a matriz óssea desmineralizada caprina como xenoenxerto em falhas ósseas tibiais de coelhos. Foram utilizados 24 coelhos fêmeas, adultos da raça Nova Zelândia. Uma falha circular monocortical de 6 mm de diâmetro foi criada em ambas as tíbias, no terço proximal da superfície medial. A lesão da tíbia esquerda foi preenchida com 70mg de matriz óssea desmineralizada caprina, enquanto que a direita correspondeu ao controle. Nos períodos pós-operatórios de 15, 30, 60 e 90 dias, os 6 animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia e amostras de tíbia proximal foram coletadas. As amostras foram escaneadas por meio de microtomografia computadorizada helicoidal. Analisou-se as características macroscópicas do reparo ósseo, o padrão de preenchimento trabecular e formação de tecido ósseo intralesional. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos, para os parâmetros volume ósseo e na relação entre volume ósseo e volume total nos tempos 15, 30 e 90 dias, com maior produção óssea obtida do grupo controle. Evidenciou-se também superioridade estatística do grupo controle em relação ao grupo matriz, para as variáveis superfície óssea, relação entre superfície óssea e superfície total e número de trabéculas, nos tempos 15 e 90 dias, indicando maior superfície óssea do tecido de reparo no grupo controle. A matriz óssea desmineralizada caprina demonstrou ser biotolerável e segura em coelhos, durante 90 dias, comprovando por meio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the demineralized goat bone matrix as xenograft in tibial bone defects of rabbits. Twenty-four female rabbits, New Zealand adults, were used. A circular monocortical defect of 6 mm in diameter was created in the form of tibias, without proximal third of the medial surface. The case of the boundary case of the case of the demineralized caprine, while a corresponding right to control. On the postoperative days of 15, 30, 60 and 90 days, the six animals were submitted to euthanasia and proximal tibia samples were collected. The samples were scanned by computerized helical microtomography. Analyzed as macroscopic of bone repair, trabecular filling pattern and intralesional bone formation. Statistically significant differences were observed between the groups, so that the volumes were adjusted to the variable between volume and total volume at times 15, 30 and 90 days, with higher bone production in the control group. It was also evidenced the statistical superiority of the control group in relation to the set of matrices, such as the temperature in bone ground, the relation between the bone surface and the total surface and the number of trabeculae, in the 15 and 90 days, control. The demineralized bone matrix demonstrated to be biotolerable and safe in systems, during 90 days, proved by computer microtomography, the beginning of the system installation in 30 days after implantation, as well as a bone bridge formation at 60 days. / Mestre
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Ação da matriz inorgânica de osso bovino (Bonefill®) na neoformação óssea em ratos submetidos ao alcoolismo experimental: análise histológica e morfométrica / Action of inorganic bovine bone Matrix (Bonefill®) on bone formation in rats submitted to experimental alcoholism: histological and morphometric analysis

Borgo, Iris Jasmin Santos German 17 March 2016 (has links)
O desequilíbio no turnover ósseo decorrente dos efeitos do alcoolismo crônico está relacionado à apoptose dos osteócitos, diminuição da espessura do osso medular e cortical e pelas alterações na atividade e diferenciação de osteoblastos. Devido à necessidade de tratamentos regenerativos e reconstrutivos associado ao alcoolismo, os xenoenxertos tem providenciado uma possibilidade terapêutica como material de preenchimento de defeitos ósseos. Em vista disso, este trabalho teve como objetivo analisar o comportamento do biomaterial Bonefill® em defeitos críticos realizados em calvária de ratos, comparar a interferência do alcoolismo experimental na neoformação óssea, além de avaliar a influência do tipo de dieta líquida sobre a massa corporal dos animais. Foram utilizados 40 ratos machos (Rattus norvegicus) da linhagem Wistar, com 60 dias de idade, separados aleatoriamente em Grupo Controle (GC) os animais receberam água como dieta líquida e Grupo Experimental (GE) os animais receberam etanol a 25%, cada grupo composto por 20 ratos. O GC foi sub-dividido em GAC (Grupo Água Coágulo) correspondente ao defeito direito na calota craniana do animal e GAB (Grupo Água Biomaterial), defeito do lado esquerdo do animal. O GE foi sub-dividido em GEC (Grupo Etanol Coágulo) correspondente ao defeito direito da calota craniana e GEB (Grupo Etanol Biomaterial) defeito do lado esquerdo do animal. Foi realizada uma osteotomia circular de 5 mm de diâmetro no osso parietal direito e esquerdo. Os defeitos GAC e GEC foram preenchidos com coágulo sanguíneo e os defeitos GAB e GEB com osso bovino cortical inorgânico. Cinco animais de cada grupo foram eutanasiados nos períodos de 10, 20, 40 e 60 dias pós-cirúrgico. Os resultados da análise histológica mostraram que no período de 10 dias, no GAB e GEB as partículas do enxerto ósseo estavam circundadas por tecido de granulação e células inflamatórias, apresentou uma pequena formação de osso imaturo principalmente nas margens do defeito. No período de 20 dias foi obsevado presença de vasos sanguíneos e no GAB e GEB algumas partículas parcialmente circundadas por tecido ósseo neoformado. Os períodos de 40 e 60 dias exibiram áreas de formação óssea nas margens e ao redor de algumas partículas. O osso neoformado encontrava-se em um estágio mais avançado de remodelação, porém sem preenchimento completo do defeito e sem sinais de reabsorção da superfície do biomaterial. Na análise histomofométrica o percentual de formação óssea entre o GAC versus GEC e GAB versus GEB, para cada período experimental, não apontou diferença estatisticamente significante. Com relação à massa corporal o GC, nos períodos de 20, 40 e 60 dias pós-cirurgia a massa corporal aumentou, 7,9%, 6,6% e 14,1%, respectivamente. No GE ocorreu uma perda de 9,2% da massa corporal após 10 dias da cirurgia, e aos 40 e 60 dias ocorreu ganho de massa corporal de respectivamente 5,9% e 6,4% nos animais. Conclui-se que o biomaterial Bonefill® não promoveu uma maior neoformação óssea em defeitos críticos; a dieta alcoólica não atingiu os seus efeitos nocivos na formação óssea, e a dieta líquida de etanol, quando comparada à de água, interferiu negativamente na massa corporal dos animais. / The imbalance in bone turnover resulting from the effects of chronic alcoholism is related to apoptosis of osteocytes, decrease of trabecular and cortical bone thickness and changes in activity and differentiation of osteoblasts. Due to the need for regenerative and reconstructive treatments associated with alcoholism, xenografts has provided a therapeutic possibility as a filling material of bone defects. Therefore, the aims of this study were to analyze the Bonefill® biomaterial behavior in critical defects created on the calvaria of rats; to compare the interference of experimental alcoholism in bone formation, as well as to evaluate the influence of 2 type of liquid diet on animal body weight. 40 male Wistar rats were used (Rattus norvegicus), with 60 days of age. The rats were randomly separated into Control Group (CG, nº = 20), which received water as liquid diet and Experimental Group (EG, nº = 20), these rats consumed ethanol 25%. CG was subdivided into WCG (Water Clot Group), corresponding to the right calvaria defect and WBG (Water Biomaterial Group), left side defect of the calvaria. EG was subdivided into ECG (Ethanol Clot Group), corresponding to the right calvaria defect and EBG (Ethanol Biomaterial Group), left side defect of the calvaria. A circle osteotomy of 5 mm in diameter was performed in the right and left parietal bone. The bone defects in WCG and ECG were filled with blood clot and the defects in WBG and EBG were filled with inorganic bovine bone. 5 animals from each group were euthanized at periods of 10, 20, 40 and 60 days after surgery. The histological analysis showed that at 10 days, WBG and EBG, the particles of bone graft were surrounded by granulation tissue and inflammatory cells, it also showed a small immature bone formation mainly at the margins of the defects. At 20 days it was observed blood vessels in WBG and EBG and some graft particles partially surrounded by new bone. At 40 and 60 days it was exhibited some areas of bone formation at the margins and around a few particles. The newly formed bone was in a more advanced stage of bone remodeling, however it did not showed neither complete filling nor signs of resorption of the biomaterial surface. Histomorphometric analysis on the percentage of bone formation between WCG versus ECG and WBG versus EBG, for each trial period, showed no statistical significant difference. Regarding the body mass CG, at 20, 40 and 60 days the body mass increased 7.9%, 6.6% and 14.1%, respectively. The EG had a loss of body weight of 9.2% after 10 days of surgery and at 40 and 60 days it showed a body mass gain of 5.9% and 6.4%, respectively. It can be concluded that Bonefill® did not promote an increase bone formation in critical defects; the alcohol diet did not achieve its adverse effects on bone formation, and the liquid diet containing ethanol, compared to the liquid water diet had a negative effect on animal body weight.

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