Teste intradérmico avalia reação de hipersensibilidade a diversos agentes que possam apresentar poder reacional alérgico e são comumente utilizados para complementar o diagnóstico da dermatite atópica canina (DAC). Ainda não existe consenso sobre as concentrações de histamina e extratos alergênicos a serem utilizadas. Para determinar a concentração ideal de histamina, como controle positivo, e do limiar irritativo de extratos alergênicos em teste intradérmico é necessário que diversas concentrações sejam avaliadas em uma população bem numerosa de cães hígidos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar em 160 cães sadios submetidos a teste intradérmico, quais seriam as concentrações de histamina e de extratos alergênicos consideradas ideais. A solução contendo 0,1 mg/mL de histamina foi considerada como parâmetro ideal, provocando reações cutâneas com diâmetro médio, mediana e desvio padrão, de 15,18 mm, 14,97 mm e 2,07 mm, respectivamente. A partir do estabelecimento da concentração de histamina, foram determinadas as concentrações ótimas dos extratos alergênicos, expressas em PNU/mL: 1.000 para Dermatophagoides pteronyssinus, 500 para D. farinae, 125 para Blomia tropicalis e 2.000 para Malassezia pachydermatis. Futuros estudos devem ser conduzidos em cães atópicos para verificação da acurácia dos testes intradérmicos realizados com essas concentrações. / Intradermal testing evaluates hipersensitivity reaction to different agents that can present allergic reactivity power. It is commonly used to complement canine atopic dermatitis diagnosis. There is still no consensus about histamine concentrations and allergen extracts to be used. The determination of the histamine ideal concentration as positive control and the irritant threshold of allergen extracts for intradermal testing, requires evaluation of different concentrations on a large population of healthy dogs. The purpose of this research was to evaluate the ideal histamine and allergen extracts concentrations on 160 healthy dogs submitted to intradermal testing. A histamine solution 0,1 mg/mL was considered the ideal parameter. It caused cutaneous reactions with average diameter, median measure and standard deviation of 15.18 mm, 14.97 mm and 2.07 mm, respectively. From the histamine concentration establishment, the optimum allergen extracts concentrations were determined, expressed by PNU/mL: 1.000 for Dermatophagoides pteronyssinus, 500 for D. farinae, 125 for Blomia tropicalis and 2.000 for Malassezia pachydermatis. Future studies have to be conducted on atopic dogs to verify the accuracy of the intradermal testing with these concentrations.

Introdução: O Transtorno do Espectro do Autismo (TEA) é caracterizado por prejuízos na interação social e comunicação, e por comportamentos repetitivos e repertório restrito de interesses. Alterações em diferentes sistemas de neurotransmissores, como o serotoninérgico, GABAérgico e glutamatérgico já foram estudadas e relatadas no TEA. Surpreendentemente, o sistema histaminérgico recebeu pouca atenção e poucos estudos sobre histamina (HA) e TEA estão disponíveis na literatura. Além disso, ligantes do receptor histaminérgico 3 (H3R) são considerados agentes terapêuticos promissores para o tratamento de diferentes desordens neurológicas e prejuízos cognitivos, mas seus efeitos em características do tipo autista ainda não foram determinados. Objetivos: Avaliar o efeito do ciproxifan (CPX), um agonista inverso do H3R, sobre o modelo animal de autismo induzido por exposição pré-natal ao ácido valpróico (VPA, do inglês: valproic acid) e medir a concentração de HA e os níveis do mRNA de H3R e H4R em diferentes estruturas encefálicas desse modelo. Além disso, investigar o papel do H3R no comportamento social e estereotipado. Métodos: Camundongos Swiss sofreram exposição pré-natal ao VPA no dia embrionário 11 e, aos 50 dias de vida pós-natal foram submetidos à avaliação de comportamento social, limiar de nocicepção e comportamento repetitivo, com ou sem tratamento com CPX. Após as avaliações comportamentais, os animais foram eutanasiados por exsanguinação depois de terem sido anestesiados com isoflurano. Córtex cerebral, estriado e hipocampo foram removidos, congelados em nitrogênio líquido e armazenados a -80°C para quantificação de mRNA do H3R e H4R por qPCR e de conteúdo de HA por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC, do inglês: High Performance Liquide Chromatography). Camundongos H3R KO e WT C57BL/6J, aos 50 dias de vida, foram usados nos testes com o aparato de três câmaras e marble burying para determinação do papel do H3R na sociabilidade e comportamento estereotipado. Resultados: O grupo VPA apresentou menor índice se sociabilidade quando comparado aos animais do grupo Controle, e o tratamento com CPX foi capaz de reverter completamente este efeito. Entretanto, o aumento no limiar de nocicepção observado no grupo VPA não foi revertido pelo tratamento. No teste marble burying, o grupo VPA enterrou um maior número de bolinhas de gude em relação ao grupo Controle, indicando comportamento repetitivo, um efeito também prevenido pelo CPX. Além disso, a análise molecular entre os grupos VPA e Controle mostrou um aumento significativo nos níveis de mRNA do H3R, bem como uma maior concentração de HA no estriado de animais VPA. O H3R pode ter um papel no interesse por novidade social, característica prejudicada no TEA, já que camundongos H3R KO demonstraram comportamento anormal quando testados para este parâmetro no teste com aparato de três câmaras. Conclusões: Uma dose aguda de CPX foi capaz de reverter prejuízo na sociabilidade, bem como comportamento repetitivo apresentados pelo modelo VPA de autismo. Além disso, este é o primeiro relato sobre anormalidades no sistema histaminérgico nesse modelo. Estes achados contribuem para investigações futuras sobre a fisiopatologia do TEA, bem como apontam para um possível novo tratamento para características do tipo autista. Mais estudos são necessários para corroborar e expandir esses dados iniciais. / Introduction: Autism spectrum disorder (ASD) is primarily characterized by impaired social interaction and communication, and by restricted repetitive behaviors and interests. Alterations in different neurotransmitter systems, such as serotonergic, GABAergic and glutamatergic have been studied and reported in ASD. Surprisingly, the histaminergic system has received less attention and few studies are available on the literature about histamine and ASD. In addition, ligands of histamine receptor 3 (H3R) are considered potential therapeutic agents for the treatment of different brain disorders and cognitive impairments, but its effects on autistic-like features have not been evaluated. Objectives: The objective of this study was to evaluate the actions of ciproxifan (CPX), an H3R inverse agonist, on the animal model of autism induced by prenatal exposure to valproic acid (VPA) and to measure the concentration of histamine and the H3R and H4R mRNA levels in different brain structures of this model. In addition, to investigate the role of H3R in sociability and stereotypic behavior. Methods: Swiss mice were prenatally exposed to VPA on embryonic day 11 and assessed for social behavior, nociceptive threshold and repetitive behavior at 50 days of life after treatment with CPX. After the behavioral tests, animals were killed by exsanguination after being anesthetized with isoflurane. Cerebral cortex, striatum and hippocampus were removed, frozen in liquid nitrogen and stored at -80°C for quantification of H3R and H4R mRNA by qPCR and histamine content by HPLC analysis. H3R KO and WT C57BL/6J mice, at 50 days of life, were used in the three-chamber test and marble burying test to determine the role of H3R in sociability stereotypic behavior. Results: The VPA group presented lower sociability index compared to VPA animals that were treated with CPX. Compared to the Control group, VPA animals presented a significantly higher nociceptive threshold, and treatment with CPX was not able to modify this parameter. In the marble burying test, the number of marbles buried by VPA animals was consistent with markedly repetitive behavior. VPA animals that received CPX buried a reduced amount of marbles. A significant increase in H3R mRNA, as well as higher concentration of histamine were detected in striatal samples from the VPA mice. H3R might influence the search for social novelty, a feature that is impaired in ASD, as H3R KO mice displayed abnormal behavior when tested for this parameter in the three chambers test. Conclusions: In summary, an acute dose of CPX is able to revert sociability deficits and stereotypies present in the VPA model of autism. In addition, this is the first report of abnormalities in the histaminergic system of this model. These findings have the potential to help the investigations of both the molecular underpinnings of ASD and of possible treatments to ameliorate the ASD symptomatology, although more research is still necessary to corroborate and expand this initial data.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-10-23T17:18:48Z No. of bitstreams: 1 Daniela Almeida Participaçao dos receptores....pdf: 1297031 bytes, checksum: 754812103a71d951c868e902bd43f90c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:18:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniela Almeida Participaçao dos receptores....pdf: 1297031 bytes, checksum: 754812103a71d951c868e902bd43f90c (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Situações de estresse repetido ou prolongado podem resultar em vários estados patológicos, como hipertensão arterial, arritmias cardíacas, infarto do miocárdio e até mesmo morte súbita. Embora se tenha muita informação sobre o controle cerebral da pressão arterial, as respostas cardiovasculares ao estresse não são totalmente compreendidas. Dados da literatura mostram a importância do núcleo medial da amigdala (MeA) e da neurotrasmissão histaminérgica no controle autonômico das funções cardiovasculares, no entanto, não há estudos evidanciando o papel das vias histaminérgicas no MeA nas adaptações cardiovasculares evocada pelo estresse emocional. Desta forma, o objetivo desta pesquisa foi estudar a participação dos receptores H1 e H2 no MeA sobre as respostas cardiovasculares em ratos estressados e não-estressados. Ratos Wistar (280-320g) foram submetidos à cirurgia estereotáxica para canulação bilateral do MeA. Passado cinco dias da estereotaxia, os animais foram submetidos a cateterização da artéria carótida esquerda. Vinte e quatro horas após a inserção do cateter, foram iniciados os experimentos com a gravação do registro da pressão arterial pulsátil (PAP) dos animais em condições basais e em livre movimento em suas respectivas caixas de forma continuada. As drogas utilizadas para a microinjeção central foram a mepiramina (antagonista dos receptores H1) nos grupos experimentais I e III e a cimetidina (antagonista dos receptores H2) nos grupos experimentais II e IV. Nos grupos experimentais I e II, 15 min após microinjeção central bilateral de mepiramina ou cimetidina respectivamente, em diferentes doses, os animais foram submetidos a estresse de restrição de movimentos em tubos de polietileno, e a PAP foi registrada continuamente durante 45 min. Após o período de estresse, os animais foram realocados em suas caixas e a PAP foi registrada por mais 30 min. Nos grupos experimentais III e IV, após as microinjeções centrais bilaterais no MeA, a PAP continuou sendo registrada por 75 min em animais sob condições basais e em livre movimento (não estressados). Os animais controles de todos os grupos experimentais receberam microinjeções de salina 0,9%. Os experimentos foram realizados entre 7h00min às 13h00min e os animais não tiveram acesso à água ou ração durante o experimento. Os dados estão expressos como média±E.P.M das variações da PAM e FC. Microinjeções de mepiramina nas doses de 50, 100 e 200 nmol promoveu bloqueio dose-dependente da resposta hipertensiva evocada pelo estresse de restrição. A cimetidina (100 e 200 nmol) atenuou a resposta hipertensiva ao estresse apenas na maior dose utilizada. A resposta anti-hipertensiva ao estresse foi maior nos animais que receberam microinjeções de mepiramina do que de cimetidina nas mesmas doses. Nenhuma das drogas alterou a resposta taquicárdica típica do estresse. Mepiramina ou cimetidina foram incapazes de alterar a PAM ou a FC de animais não estressados. Os dados sugerem que as vias histaminérgicas presentes no MeA medeiam a resposta pressora sem alterar a taquicardia evocadas pelo estresse de restrição, ativando preferencialmente os receptores do tipo H1. Além disto, os dados confirmam a hipótese de que a via histaminérgica no MeA não exerce modulação tônica do sistema cardiovascular. A obtenção de dados adicionais relativos ao papel fisiológico dos receptores histaminérgicos centrais no controle das funções cardiovasculares se reveste de grande importância para as ciências biológicas e para a clínica médica, principalmente quando vinculada à variável estresse. Os resultados deste trabalho contribuem para o esclarecimento da participação destes receptores no controle das funções cardiovasculares. / Repeated long lasting experiences of stress situations may result in various pathologic states such as arterial hypertension, cardiac dysrhythmias, myocardial stroke and even sudden death. Although there is a lot information about the neural control of the arterial blood pressure, especially by the brain stem and some other prosencephalic areas, stress-evoked cardiovascular responses are not totally understood. Previews studies shows the importance of the medial amygdala nucleus (MeA) and of the histaminergic neurotransmission on the autonomic control of cardiovascular functions, however there aren’t studies that evidence the role of the histaminergic pathways in MeA on emotional stress-evoked cardiovascular adaptations. Therefore, the aim of this study was investigate the participation of the histaminergic receptors H1 and H2 in MeA on the cardiovascular responses in stressed and non-stressed rats. Wistar rats (280-320g) were submitted to stereotaxic surgery for bilateral cannulation of MeA. Five days after surgery, animals were submitted to catheterization of the left carotid artery. Twenty four hours after catheter insertion, experiments were started and the pulsatile arterial pressure (PAP) of freely moving rats on basal conditions was recorded. Drugs used for central administration were mepyramine (H1 receptors antagonist) on experimental groups I and III and cimetidine (H2 receptors antagonist) on experimental groups II and IV. At experimental groups I and II, 15 min after central microinjections of mepyramine or cimetidine respectively, in different doses, the rats was submitted to restraint stress in a polyvinyl apparatus, and PAP were continuously recorded for 45 min. After stress period, rats were replaced in their own cages and an additional 30 min were recorded for PAP reestablishment. At experimental groups III and IV, after 30 min of basal recording, rats received bilateral central microinjections of mepyramine or cimetidine in a dose of 200 nmol, respectively, and an additional period of 75 min was recorded in freely moving rats on basal conditions. Saline 0,9% was administered as vehicle in control animals of all experimental groups. Mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) were, then, calculated from the PAP signal. Experiments occurred between 7:00 and 13:00 and rat did not have access to water and food during the sessions. Data were expressed as mean±S.E.M. of MAP and HR variation. Mepyramine microinjections at doses of 50, 100 and 200 nmol promoted dose-dependent blockade of the restraint stress-evoked hypertensive response. Cimetidine (100 and 200 nmol) attenuated the hypertensive response to stress only at the highest dose administered. The anti-hypertensive response was bigger on animals which received mepyramine than cimetidine. Neither drugs altered the typical stress-evoked tachycardiac responses. Indeed, mepyramine or cimetidina were unable to modify the MAP or HR of freely moving rats on basal conditionals (non-stressed rats). These data suggest that histaminergic pathways in MeA mediates pressor responses without modifying the tachycardia promoted by restraint stress, activating preferentially H1 receptors. Besides, data corroborate to the hypothesis that histaminergic pathways in MeA do not plays tonic modulation of the cardiovascular system. Additional information acquired about physiologic role of central histaminergic receptor on the cardiovascular functions is important to biological science and to medical practice, especially when linked to the stress factor. These data contribute to clarify the role of these receptors on cardiovascular functions

Teste intradérmico avalia reação de hipersensibilidade a diversos agentes que possam apresentar poder reacional alérgico e são comumente utilizados para complementar o diagnóstico da dermatite atópica canina (DAC). Ainda não existe consenso sobre as concentrações de histamina e extratos alergênicos a serem utilizadas. Para determinar a concentração ideal de histamina, como controle positivo, e do limiar irritativo de extratos alergênicos em teste intradérmico é necessário que diversas concentrações sejam avaliadas em uma população bem numerosa de cães hígidos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar em 160 cães sadios submetidos a teste intradérmico, quais seriam as concentrações de histamina e de extratos alergênicos consideradas ideais. A solução contendo 0,1 mg/mL de histamina foi considerada como parâmetro ideal, provocando reações cutâneas com diâmetro médio, mediana e desvio padrão, de 15,18 mm, 14,97 mm e 2,07 mm, respectivamente. A partir do estabelecimento da concentração de histamina, foram determinadas as concentrações ótimas dos extratos alergênicos, expressas em PNU/mL: 1.000 para Dermatophagoides pteronyssinus, 500 para D. farinae, 125 para Blomia tropicalis e 2.000 para Malassezia pachydermatis. Futuros estudos devem ser conduzidos em cães atópicos para verificação da acurácia dos testes intradérmicos realizados com essas concentrações. / Intradermal testing evaluates hipersensitivity reaction to different agents that can present allergic reactivity power. It is commonly used to complement canine atopic dermatitis diagnosis. There is still no consensus about histamine concentrations and allergen extracts to be used. The determination of the histamine ideal concentration as positive control and the irritant threshold of allergen extracts for intradermal testing, requires evaluation of different concentrations on a large population of healthy dogs. The purpose of this research was to evaluate the ideal histamine and allergen extracts concentrations on 160 healthy dogs submitted to intradermal testing. A histamine solution 0,1 mg/mL was considered the ideal parameter. It caused cutaneous reactions with average diameter, median measure and standard deviation of 15.18 mm, 14.97 mm and 2.07 mm, respectively. From the histamine concentration establishment, the optimum allergen extracts concentrations were determined, expressed by PNU/mL: 1.000 for Dermatophagoides pteronyssinus, 500 for D. farinae, 125 for Blomia tropicalis and 2.000 for Malassezia pachydermatis. Future studies have to be conducted on atopic dogs to verify the accuracy of the intradermal testing with these concentrations.

O sistema histaminérgico no sistema nervoso central (SNC) apresenta funções que modulam o aprendizado e consolidam a memória. O objetivo foi estudar o efeito da histamina através dos receptores histaminérgico (H1 e H2) na reconsolidação da memória discriminativa na região CA1 do hipocampo de ratos. Foram utilizados 153 ratos Wistar submetidos à cirurgia exterotáxica para implantação de cânulas guia na região CA1 do hipocampo. Os animais foram habituados por quatro dias consecutivos no campo aberto durante 20 minutos. Na sessão de treino os ratos foram expostos a dois diferentes objetos (A e B) por 5 min. Após 24h (reativação), um dos objetos foi trocado para um novo (objeto C), e os ratos foram reexpostos no campo aberto por 5 min. Imediatamente após, os animais receberam infusões bilaterais intra-CA1 dos agonistas/antagonistas histaminérgicos. O teste da reconsolidação da memória discriminativa foi realizado na tarefa de reconhecimento de objetos (RO). Os dados foram expressos pela média ± erro padrão da média para o teste de t-student para p<0,05 de significância. Foi realizado 3 dias, 7 dias ou 10 dias após a sessão de reativação. Resultados:Nossos dados mostraram que 3 dias após a infusão tanto os grupos salina (56.69 ± 4,651) quanto o grupo histamina (61.10 ± 4,712) exploraram mais o objeto novo (D) em relação ao objeto familiar. Em 7 dias após a reativação os animais tratados com histamina (55.96 ±7,022) exploraram mais o objeto (D) em relação ao objeto familiar, comparados aos salina (39.40 ± 4,845) p< 0,01. No teste do dia 10 não houve mais diferença estatística entre os grupos p>0.05. O SKF 91488 mostrou que o aumento da histamina endógena induz a melhora a memória discriminativa quando testados 7 dias (57.60 ± 5.210) comparado ao salina (48.09 ± 7.582) para p<0,001. O agonista H2 Dimaprit (56.14 ± 7.425) também melhorou a memória discriminativa comparado à salina (49.04 ± 9, 309) p < 0,05. O mesmo não ocorreu com o agonista H1 Piridiletiletanolamina (52.93 ± 8.946) e o grupo salina (49.04 ± 9,309). Nas coinfusões os antagonistas e histamina, os animais que receberam Pirilamina + histamina (56.41 ± 6.694) e histamina (60.04 ± 10.16) obtiveram uma taxa exploratória maior do objeto novo comparado a os animais que receberam Ranitidina + histamina (51.06 ±7.238) e o salina (47.04 ± 4.718) que tiveram a memória bloqueada com significância de p<0.05. As doses utilizadas nas infusões intra- CA1 bilaterais foram de (1μl) de salina, Histamina 10mM/μl, SKF 91488 50mM/μl, os agonistas Piridiletiletanolamina (PEA) e Dimaprit nas doses de 10mM/μl e os antagonistas Pirilamina e Ranitidina nas doses de 50mM/μl. De acordo com os dados obtidos neste estudo pode-se concluir que a histamina infundida na região CA1 do hipocampo dorsal de ratos imediatamente após a reativação melhora a memória discriminativa na tarefa de RO via receptor do tipo H2. / The histaminergic system in the central nervous system is involved in the regulation of learning and memory. Therefore, the aim of this study was to investigate the effects of histamine through histaminergic receptors activation (H1,H2) in discriminative memory reconsolidation in rat hippocampal region CA1. Wistar male rats (n= 154) were used to investigate whether histamine itself or receptor-selective histamine agonist and antagonist given into the CA1 region of this hippocampus immediately post-reactivation can affect the object recognition test (RO) performance. Our results showed an improve in RO test performance seven days after memory reactivation caused by histamine and SKF-98144 infusion. The same test ten days after memory reactivation not show difference between saline and histamine group. H1 agonist did not improve discriminative memory in RO. The enhancing effect of histamine was blocked by the H2 receptor antagonist, ranitidine, but not by the H1 receptor antagonist, pyrilamine. The present results suggest that histamine infusion in rat hippocampal region CA1 post-activation improves discriminative memory in RO trough H2 receptor.

Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2016-12-19T11:12:56Z No. of bitstreams: 1 DissBSM.pdf: 1768478 bytes, checksum: eda7735f00144887885cd0d34f6718e2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-16T18:21:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissBSM.pdf: 1768478 bytes, checksum: eda7735f00144887885cd0d34f6718e2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-16T18:21:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissBSM.pdf: 1768478 bytes, checksum: eda7735f00144887885cd0d34f6718e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T18:21:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissBSM.pdf: 1768478 bytes, checksum: eda7735f00144887885cd0d34f6718e2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Experimental evidence suggests that the cerebellum plays a more complex role in learning than simply regulating the motor response. Rather, it is thought to play a significant role in the consolidation of emotional memory in mice. Due to the difficulty of interpreting fear and anxiety behaviors - the standard methodology for the study of the histaminergic system and emotional memory - in mice, we propose a behavioral assessment of mice subjected to the Elevated T-Maze after histamine microinjection of the cerebellar vermis. Young male Swiss albino mice weighing 25 – 35 g were used. In addition, locomotor activity was tested in an open field test. Our data suggest that histamine did not affect memory consolidation during escape or open field behavior at the doses used in this study. However, we observed a significant increase in inhibitory avoidance on the second day in animals receiving a dose of 6.8 nmol/0.5μl, suggesting that histamine facilitates the consolidation of inhibitory avoidance in mice. / Evidências experimentais sugerem que o papel do cerebelo na aprendizagem pode ser mais complexo do que a regulação das respostas motoras, e seu envolvimento na consolidação da memória emocional em camundongos tem demonstrado ser significativo. Considerando a dificuldade em interpretar o comportamento de medo/ansiedade nos modelos usuais para o estudo do sistema histaminérgico e memória emocional, o presente estudo propôs a avaliação comportamental de camundongos submetidos ao labirinto em T-elevado (LTE) após microinjeção de histamina no vérmis cerebelar. O teste de Campo Aberto foi realizado para medir a atividade locomotora dos animais. Foram utilizados camundongos suíços albinos, machos, adultos jovens, pesando entre 25-35g. Os nossos dados sugerem que a histamina não afetou a consolidação da memória emocional durante a fuga ou atividade locomotora no campo aberto nas doses utilizadas neste estudo. No entanto, observou-se um aumento significativo da esquiva inibitória 14h após a microinjeção de histamina na dose de 6.8 nmol/0.5μl. Sugerimos que a histamina facilita a consolidação a memória emocional na esquiva inibitória em camundongos.

O sistema histaminérgico no sistema nervoso central (SNC) apresenta funções que modulam o aprendizado e consolidam a memória. O objetivo foi estudar o efeito da histamina através dos receptores histaminérgico (H1 e H2) na reconsolidação da memória discriminativa na região CA1 do hipocampo de ratos. Foram utilizados 153 ratos Wistar submetidos à cirurgia exterotáxica para implantação de cânulas guia na região CA1 do hipocampo. Os animais foram habituados por quatro dias consecutivos no campo aberto durante 20 minutos. Na sessão de treino os ratos foram expostos a dois diferentes objetos (A e B) por 5 min. Após 24h (reativação), um dos objetos foi trocado para um novo (objeto C), e os ratos foram reexpostos no campo aberto por 5 min. Imediatamente após, os animais receberam infusões bilaterais intra-CA1 dos agonistas/antagonistas histaminérgicos. O teste da reconsolidação da memória discriminativa foi realizado na tarefa de reconhecimento de objetos (RO). Os dados foram expressos pela média ± erro padrão da média para o teste de t-student para p<0,05 de significância. Foi realizado 3 dias, 7 dias ou 10 dias após a sessão de reativação. Resultados:Nossos dados mostraram que 3 dias após a infusão tanto os grupos salina (56.69 ± 4,651) quanto o grupo histamina (61.10 ± 4,712) exploraram mais o objeto novo (D) em relação ao objeto familiar. Em 7 dias após a reativação os animais tratados com histamina (55.96 ±7,022) exploraram mais o objeto (D) em relação ao objeto familiar, comparados aos salina (39.40 ± 4,845) p< 0,01. No teste do dia 10 não houve mais diferença estatística entre os grupos p>0.05. O SKF 91488 mostrou que o aumento da histamina endógena induz a melhora a memória discriminativa quando testados 7 dias (57.60 ± 5.210) comparado ao salina (48.09 ± 7.582) para p<0,001. O agonista H2 Dimaprit (56.14 ± 7.425) também melhorou a memória discriminativa comparado à salina (49.04 ± 9, 309) p < 0,05. O mesmo não ocorreu com o agonista H1 Piridiletiletanolamina (52.93 ± 8.946) e o grupo salina (49.04 ± 9,309). Nas coinfusões os antagonistas e histamina, os animais que receberam Pirilamina + histamina (56.41 ± 6.694) e histamina (60.04 ± 10.16) obtiveram uma taxa exploratória maior do objeto novo comparado a os animais que receberam Ranitidina + histamina (51.06 ±7.238) e o salina (47.04 ± 4.718) que tiveram a memória bloqueada com significância de p<0.05. As doses utilizadas nas infusões intra- CA1 bilaterais foram de (1μl) de salina, Histamina 10mM/μl, SKF 91488 50mM/μl, os agonistas Piridiletiletanolamina (PEA) e Dimaprit nas doses de 10mM/μl e os antagonistas Pirilamina e Ranitidina nas doses de 50mM/μl. De acordo com os dados obtidos neste estudo pode-se concluir que a histamina infundida na região CA1 do hipocampo dorsal de ratos imediatamente após a reativação melhora a memória discriminativa na tarefa de RO via receptor do tipo H2. / The histaminergic system in the central nervous system is involved in the regulation of learning and memory. Therefore, the aim of this study was to investigate the effects of histamine through histaminergic receptors activation (H1,H2) in discriminative memory reconsolidation in rat hippocampal region CA1. Wistar male rats (n= 154) were used to investigate whether histamine itself or receptor-selective histamine agonist and antagonist given into the CA1 region of this hippocampus immediately post-reactivation can affect the object recognition test (RO) performance. Our results showed an improve in RO test performance seven days after memory reactivation caused by histamine and SKF-98144 infusion. The same test ten days after memory reactivation not show difference between saline and histamine group. H1 agonist did not improve discriminative memory in RO. The enhancing effect of histamine was blocked by the H2 receptor antagonist, ranitidine, but not by the H1 receptor antagonist, pyrilamine. The present results suggest that histamine infusion in rat hippocampal region CA1 post-activation improves discriminative memory in RO trough H2 receptor.

A dor e o prurido são sensações sensoriais que auxiliam na defesa do organismo. Apesar das ações anti-nociceptivas do novo gasotransmissor endógeno H2S, nada se sabe sobre seu efeito no prurido. Avaliou-se aqui o efeito de doadores de H2S (Na2S e reagente de Lawesson - LR) no prurido e inflamação induzidos pela injeção i.d. de histamina e composto 48/80 (C48/80) na pele de camundongos. Verificou-se a produção do H2S e a expressão de suas enzimas (CBS e CSE) na pele. A injeção i.d. de histamina ou C48/80 aumentou significativamente a frequência de coceira e induziu extravasamento plasmático e influxo de leucócitos na pele dos animais em relação ao veículo. A co-injeção do Na2S ou LR reduziu (P<0.05) o extravasamento plasmático evocado por ambos agentes, mas somente o prurido induzido por histamina foi inibido. Conclui-se que a suplementação exógena de H2S inibe o extravasamento plasmático induzido por histamina e C48/80, mas somente inibiu o prurido evocado por histamina. As enzimas CSE e CBS estão expressas constitutivamente na pele e sintetizam o H2S local. / Pain and pruritus are sensory sensations that help in defending the organism. Despite the anti-nociceptive actions of the new gasotransmitter H2S, little is known about its effect on pruritus. We evaluated the effect of H2S donors (Na2S and Lawesson\'s reagent - LR) in itching and inflammation induced by i.d. injection of histamine and compound 48/80 (C48/80) in mouse dorsal skin. We also investigated the production of H2S and expression of its enzymes (CBS and CSE) in the mouse skin. The i.d. injection of histamine or C48/80 significantly increased the frequency of itching and induced plasma leakage and leukocyte influx into the skin in relation to vehicle. Co-injection of Na2S or LR decreased (P<0.05) plasma extravasation evoked by both agents, but only the itching induced by histamine was inhibited. In conclusion, the exogenous supplementation of H2S inhibits plasma extravasation induced by histamine and C48/80, but only inhibited histamine-induced pruritus. CSE and CBS are constitutively expressed in the skin and are responsible for local H2S synthesis.

Introdução: O Transtorno do Espectro do Autismo (TEA) é caracterizado por prejuízos na interação social e comunicação, e por comportamentos repetitivos e repertório restrito de interesses. Alterações em diferentes sistemas de neurotransmissores, como o serotoninérgico, GABAérgico e glutamatérgico já foram estudadas e relatadas no TEA. Surpreendentemente, o sistema histaminérgico recebeu pouca atenção e poucos estudos sobre histamina (HA) e TEA estão disponíveis na literatura. Além disso, ligantes do receptor histaminérgico 3 (H3R) são considerados agentes terapêuticos promissores para o tratamento de diferentes desordens neurológicas e prejuízos cognitivos, mas seus efeitos em características do tipo autista ainda não foram determinados. Objetivos: Avaliar o efeito do ciproxifan (CPX), um agonista inverso do H3R, sobre o modelo animal de autismo induzido por exposição pré-natal ao ácido valpróico (VPA, do inglês: valproic acid) e medir a concentração de HA e os níveis do mRNA de H3R e H4R em diferentes estruturas encefálicas desse modelo. Além disso, investigar o papel do H3R no comportamento social e estereotipado. Métodos: Camundongos Swiss sofreram exposição pré-natal ao VPA no dia embrionário 11 e, aos 50 dias de vida pós-natal foram submetidos à avaliação de comportamento social, limiar de nocicepção e comportamento repetitivo, com ou sem tratamento com CPX. Após as avaliações comportamentais, os animais foram eutanasiados por exsanguinação depois de terem sido anestesiados com isoflurano. Córtex cerebral, estriado e hipocampo foram removidos, congelados em nitrogênio líquido e armazenados a -80°C para quantificação de mRNA do H3R e H4R por qPCR e de conteúdo de HA por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC, do inglês: High Performance Liquide Chromatography). Camundongos H3R KO e WT C57BL/6J, aos 50 dias de vida, foram usados nos testes com o aparato de três câmaras e marble burying para determinação do papel do H3R na sociabilidade e comportamento estereotipado. Resultados: O grupo VPA apresentou menor índice se sociabilidade quando comparado aos animais do grupo Controle, e o tratamento com CPX foi capaz de reverter completamente este efeito. Entretanto, o aumento no limiar de nocicepção observado no grupo VPA não foi revertido pelo tratamento. No teste marble burying, o grupo VPA enterrou um maior número de bolinhas de gude em relação ao grupo Controle, indicando comportamento repetitivo, um efeito também prevenido pelo CPX. Além disso, a análise molecular entre os grupos VPA e Controle mostrou um aumento significativo nos níveis de mRNA do H3R, bem como uma maior concentração de HA no estriado de animais VPA. O H3R pode ter um papel no interesse por novidade social, característica prejudicada no TEA, já que camundongos H3R KO demonstraram comportamento anormal quando testados para este parâmetro no teste com aparato de três câmaras. Conclusões: Uma dose aguda de CPX foi capaz de reverter prejuízo na sociabilidade, bem como comportamento repetitivo apresentados pelo modelo VPA de autismo. Além disso, este é o primeiro relato sobre anormalidades no sistema histaminérgico nesse modelo. Estes achados contribuem para investigações futuras sobre a fisiopatologia do TEA, bem como apontam para um possível novo tratamento para características do tipo autista. Mais estudos são necessários para corroborar e expandir esses dados iniciais. / Introduction: Autism spectrum disorder (ASD) is primarily characterized by impaired social interaction and communication, and by restricted repetitive behaviors and interests. Alterations in different neurotransmitter systems, such as serotonergic, GABAergic and glutamatergic have been studied and reported in ASD. Surprisingly, the histaminergic system has received less attention and few studies are available on the literature about histamine and ASD. In addition, ligands of histamine receptor 3 (H3R) are considered potential therapeutic agents for the treatment of different brain disorders and cognitive impairments, but its effects on autistic-like features have not been evaluated. Objectives: The objective of this study was to evaluate the actions of ciproxifan (CPX), an H3R inverse agonist, on the animal model of autism induced by prenatal exposure to valproic acid (VPA) and to measure the concentration of histamine and the H3R and H4R mRNA levels in different brain structures of this model. In addition, to investigate the role of H3R in sociability and stereotypic behavior. Methods: Swiss mice were prenatally exposed to VPA on embryonic day 11 and assessed for social behavior, nociceptive threshold and repetitive behavior at 50 days of life after treatment with CPX. After the behavioral tests, animals were killed by exsanguination after being anesthetized with isoflurane. Cerebral cortex, striatum and hippocampus were removed, frozen in liquid nitrogen and stored at -80°C for quantification of H3R and H4R mRNA by qPCR and histamine content by HPLC analysis. H3R KO and WT C57BL/6J mice, at 50 days of life, were used in the three-chamber test and marble burying test to determine the role of H3R in sociability stereotypic behavior. Results: The VPA group presented lower sociability index compared to VPA animals that were treated with CPX. Compared to the Control group, VPA animals presented a significantly higher nociceptive threshold, and treatment with CPX was not able to modify this parameter. In the marble burying test, the number of marbles buried by VPA animals was consistent with markedly repetitive behavior. VPA animals that received CPX buried a reduced amount of marbles. A significant increase in H3R mRNA, as well as higher concentration of histamine were detected in striatal samples from the VPA mice. H3R might influence the search for social novelty, a feature that is impaired in ASD, as H3R KO mice displayed abnormal behavior when tested for this parameter in the three chambers test. Conclusions: In summary, an acute dose of CPX is able to revert sociability deficits and stereotypies present in the VPA model of autism. In addition, this is the first report of abnormalities in the histaminergic system of this model. These findings have the potential to help the investigations of both the molecular underpinnings of ASD and of possible treatments to ameliorate the ASD symptomatology, although more research is still necessary to corroborate and expand this initial data.

Teste intradérmico avalia reação de hipersensibilidade a diversos agentes que possam apresentar poder reacional alérgico e são comumente utilizados para complementar o diagnóstico da dermatite atópica canina (DAC). Ainda não existe consenso sobre as concentrações de histamina e extratos alergênicos a serem utilizadas. Para determinar a concentração ideal de histamina, como controle positivo, e do limiar irritativo de extratos alergênicos em teste intradérmico é necessário que diversas concentrações sejam avaliadas em uma população bem numerosa de cães hígidos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar em 160 cães sadios submetidos a teste intradérmico, quais seriam as concentrações de histamina e de extratos alergênicos consideradas ideais. A solução contendo 0,1 mg/mL de histamina foi considerada como parâmetro ideal, provocando reações cutâneas com diâmetro médio, mediana e desvio padrão, de 15,18 mm, 14,97 mm e 2,07 mm, respectivamente. A partir do estabelecimento da concentração de histamina, foram determinadas as concentrações ótimas dos extratos alergênicos, expressas em PNU/mL: 1.000 para Dermatophagoides pteronyssinus, 500 para D. farinae, 125 para Blomia tropicalis e 2.000 para Malassezia pachydermatis. Futuros estudos devem ser conduzidos em cães atópicos para verificação da acurácia dos testes intradérmicos realizados com essas concentrações. / Intradermal testing evaluates hipersensitivity reaction to different agents that can present allergic reactivity power. It is commonly used to complement canine atopic dermatitis diagnosis. There is still no consensus about histamine concentrations and allergen extracts to be used. The determination of the histamine ideal concentration as positive control and the irritant threshold of allergen extracts for intradermal testing, requires evaluation of different concentrations on a large population of healthy dogs. The purpose of this research was to evaluate the ideal histamine and allergen extracts concentrations on 160 healthy dogs submitted to intradermal testing. A histamine solution 0,1 mg/mL was considered the ideal parameter. It caused cutaneous reactions with average diameter, median measure and standard deviation of 15.18 mm, 14.97 mm and 2.07 mm, respectively. From the histamine concentration establishment, the optimum allergen extracts concentrations were determined, expressed by PNU/mL: 1.000 for Dermatophagoides pteronyssinus, 500 for D. farinae, 125 for Blomia tropicalis and 2.000 for Malassezia pachydermatis. Future studies have to be conducted on atopic dogs to verify the accuracy of the intradermal testing with these concentrations.