Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Silmara Sanae Sakamoto de Lima / Banca: Flávia Rezende Eugênio / Resumo: As neoplasias oculares representam uma crescente preocupação na oftalmologia veterinária. O carcinoma de células escamosas (CCE) corneal é raro em cães, pouco estudado e as investigações sobre os mecanismos da carcinogênese são escassos. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a imunoexpressão das proteínas p53, p63 e PUMA e suas possíveis contribuições quanto ao prognóstico e terapêutica no CCE corneal espontâneo de cães. Foram identificados seis casos, cinco diagnosticados como CCE e um como ceratite actínica. Na imunoistoquímica avaliou-se o número de células marcadas por campo no microscópio adotando-se dois critérios de classificação, quanto à intensidade e quanto à frequência de marcação. Também foi avaliada a graduação histológica dos tumores quanto ao grau de malignidade nos casos de carcinoma de células escamosas de córnea, utilizando o índice mitótico como principal referência. Todas as amostras apresentaram imunomarcação para as proteínas estudadas, porém com intensidade e frequência variadas. Não foi observada relação entre maior índice mitótico e, portanto, maior malignidade, com uma maior expressão de qualquer uma das proteínas analisadas. Conclui-se que a imunoexpressão das proteínas p53, p63 e PUMA estão presentes nos CCE corneal de cães podendo contribuir para sua carcinogênese, mas não fornece indicadores de prognóstico nesta neoplasia / Abstract: Ocular tumors play an increasing concern in veterinary ophthalmology. Corneal squamous cell carcinoma (SCC) is unfrequent in dogs, and by this way it has little studies, and the investigations of carcinogenesis mechanisms are rare. The aim of this work was to identify the p53, p63 and PUMA proteins expression in the spontaneous dog corneal SCC. For this work, were used five cases of corneal SCC and one case of actinic keratitis and their possible contributions to prognosis and therapy. The immunohistochemical analysis could evaluated the number of stained cells by field in optic microscopy using two classifications methods: intensity and immunofrequency. Also, we could evaluated histological grade of tumor related to malignancy in corneal SCC cells by using the mitotic index as a pattern. All samples showed immunolabelling to those proteins studied, although with diversity in intensity and frequency. The authors couldn't observe relationship between the biggest mitotic index, and, by this way, most malignancy, with the expressions of all analysed proteins. These results could support the conclusions that p53, p63 and PUMA proteins immunoexpression are present in canine corneal SCC and could give help to their carcinogenesis, but they don't give a prognostic indicator of these tumors / Mestre

Orientador: Mariângela Esther Alencar Marques / Coorientador: Luciana Abbade / Banca: Renata Aparecida Martinez Antunes Ribeiro Vieira / Banca: Gisele Alborghetti Nai / Resumo: O carcinoma espinocelular (CEC) é tumor maligno das células espinhosas da epiderme caracterizado por evolução mais rápida, maior poder invasivo e metastático em relação ao carcinoma basocelular (CBC). A área mais profunda e infiltrativa do CEC, conhecida como fronte de invasão, revela células neoplásicas malignas com menor grau de diferenciação comparadas à totalidade da lesão. Estudos recentes demonstram a influência do padrão do fronte de invasão tumoral no prognóstico de CEC de laringe e colo uterino. Contudo, não há estudos sobre o mesmo em relação a CEC cutâneos de cabeça e pescoço. Estudar as características clínicas, histopatológicas e perfil imuno-histoquímico do CEC de cabeça e pescoço e fronte de invasão tumoral, correlacionando-o com comportamento biológico. O estudo foi do tipo coorte retrospectivo, sendo selecionados os pacientes que tiveram diagnóstico de CEC de cabeça e pescoço confirmados pelo exame anatomopatológico no período de 1999 a 2009. A avaliação do fronte de invasão tumoral foi realizada empregando-se imuno-histoquímica para E-caderina, ki-67 e p53. Resultados: O tipo de fronte de invasão, bem como as expressões de E-caderina e ki-67, seja em sítio superficial ou profundo, não apresentaram associação com os critérios prognósticos histopatológicos. Os achados mostraram que a E-caderina, o p53 e o ki-67 foram mais expressos em tumores com tamanho ˃ 2cm. Em relação a espessura do tumor, observamos que o p53 foi mais expresso na profundidade nas lesões mais espessas (índice de Breslow maior que 2mm), e que foi acompanhada também pela expressão maior do Ki-67.A expressão de p53 em sítio superficial teve associação inversa com o critério de espessura (p<0,049) e, em sítio profundo, teve associação direta com a intensidade do processo inflamatório local (p<0,046). O tipo de fronte de invasão, bem como as expressões de E-caderina, ki-67 e p53, em sítios ... / Abstract: The Squamous Cell Carcinoma (SCC) is a malignant epidermal tumor of squamous epithelial cells, characterized for greater aggressiveness much higher incidence of metastasis than Basal Cell Carcinoma (BCC). The deepest invading tumor area, known as invasive tumor front usually disclose less differentiated malignant cells, compared with the whole lesion. Recent studies demonstrate the influence of the invasive tumor front pattern on the prognosis of larynx and uterine cervix SCC. However, there is no studies about that on cutaneuos SCC of the head and neck. To study the clinical, histopathological and immunohistochemical profile of the SCC from head and neck and its invasive tumor front, correlating it with its biological behavior. The study was a retrospective type coorte, where the patients with histopathological diagnosis of head and neck cutaneous SCC among 1999 to 2009 were selected. The evaluation of invasive tumor front was immunohistochemistry for E-cadherin, ki-67 and p53. The pattern of invasive tumor front, as well as E-cadherin and ki-67 expressions, at superficial and deep sites, did not present association with histopathological prognostic criteria. The findings showed that E-cadherin, p53 and Ki-67 were more highly expressed in tumors with size ˃ 2cm. Regarding the thickness of the tumor, we observed that p53 was expressed in depth in thicker lesions (Breslow thickness greater than 2 mm), which was also accompanied by higher expression of Ki-67. p53 expression, at superficial site, had inverse association with thickness criteria (p<0,049) and, at deep site, had direct association with local inflammatory process intensity (p<0,046). The invasive tumor front, as well as E-cadherin, ki-67 and p53 expressions, at superficial and deep sites, did not demonstrate impact on free disease survival. The characteristics of invasive tumor front did not correlate with prognosis in cutaneuos SCC of the head and neck regarding to the ... / Mestre

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Magda Massae Hata Viveiros / Banca: Jaqueline de Camargo Rinaldi / Resumo: Introdução: Muitas patologias podem acometer a córnea, entre elas a síndrome do olho seco e as doenças relacionadas. Tratamentos inovadores para a síndrome do olho seco têm surgido, entre eles, o uso de colírio produzido com soro autólogo de uso ocular, soro de sangue de cordão umbilical, meio condicionado obtido pela expansão de células tronco do epitélio limbal (modelo ex vivo), entre outros. Pacientes com provável indicação do colírio de soro autólogo podem ter a contra-indicação na produção oriunda do status imune para doenças virais como HIV, hepatites B e C, sífilis, doença de Chagas e HTLV I e II, que do ponto de vista de produção do autocolírio, encontram barreiras. Para estes casos, o colírio de soro alogênico, oriundo de doadores saudáveis, é uma alternativa viável. Objetivos: Analisar o efeito in vitro da ação de colírio alogênico em cultura de células da região córneo-escleral, estabelecer a cultura e expansão de células aderentes obtidas da região córneo-escleral, comparar a cultura das células aderentes em meio de cultura contendo colírio e fatores de crescimento derivados de plaquetas, avaliar as células por meio da técnica de imunohistoquímica e analisar os dados médicos dos pacientes que utilizam autocolírio por meio de prontuários. Casuística e Métodos: Os anéis córneo-esclerais foram obtidos no centro cirúrgico após cirurgia de doação de córnea, sendo que estes anéis são materiais de descarte após a cirurgia. Em seguida, o tecido foi encaminhado ao Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu, onde foi fragmentado em pequenas partes e digerido com colagenase tipo I. As células foram plaqueadas em frascos de 25 cm² com meio DMEM Knockout, em uma primeira parte do experimento, e em meio Keratinocyte na segunda parte do trabalho. Após confluência de 80%, as células passaram pelo processo de tripsinização para desprendimento ... / Abstract: Introduction: Many diseases can affect cornea, including dry eye syndrome and related diseases. Innovative treatments for dry eye syndrome have emerged , among them the use of autologous serum eye drops produced with the use of eye serum, umbilical cord blood, conditioned medium obtained by expansion of limbal epithelial stem cells (ex vivo model) among others. Patients with probable indication of autologous serum eyedrops may be contraindicated in production originating immune status for viral diseases such as HIV, hepatitis B and C, syphilis , Chagas disease and HTLV I and II, from the point of view of eye drops's production, have barriers . For these cases, eye drops from healthy donors allogeneic serum can be an alternative. Objectives: Evaluate in vitro effect of the action of allogeneic eye drops in corneal-scleral cell culture, established the culture and expansion of adherent cells obtained from the corneal- scleral region, compare the culture of adherent cells in culture medium containing eye drops and platelets derived growth factors, evaluating the cells by immunohistochemistry and analyze medical data of eye drops's patients. Materials and Methods: The corneal- scleral rings were obtained in the operating room after surgery of tissue donor, and these rings were discarded after surgery. Then, tissue was sent to the Laboratory of Cell Engineering of Botucatu Blood Center, which was fragmented into small pieces and digested with collagenase type I. Cells were plated in 25 cm² flasks with DMEM Knockout in the first part of the experiment, and Keratinocyte in the second part of the experiment. After 80% confluence, cells passed through the trypsinization procedure for detachment of the cells from the culture flask. Mounting plaque experiment, cells were placed to control, or untreated cells, treated cells with eye drops and cells treated with platelets derived growth factors was performed. After 5 days, immunohistochemistry ... / Mestre

Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Coorientador: Mirela Tinucci Costa / Coorientador: Reneé Laufer Amorim / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Daniel Guimarães Gerardi / Resumo: A via PI3K/AKT/mTOR está relacionada com a proliferação, síntese proteica, sobrevivência e motilidade das células. Mutações nesta via tem sido associadas com o processo carcinogênico de diferentes tipos tumorais. Atualmente, inibidores específicos de proteínas como a PI3K, AKT, mTOR, vem sendo testados com o intuito de otimizar a terapia antitumoral em seres humanos e animais. Além de potenciais alvos terapêuticos, o aumento da expressão de algumas destas proteínas tem sido associado a tumores de pior prognóstico em seres humanos. Em cães, o mastocitoma (MCT) é um tumor cutâneo extremamente comum, de comportamento bastante variável e etiologia ainda não esclarecida. Diante disso, o objetivo deste estudo, foi avaliar a imunomarcação dos componentes proteicos da via PI3K/AKT/mTOR, por meio da técnica de imuno-histoquímica e em um segundo momento, associar esses resultados com os parâmetros clínicos dos pacientes, com as características morfológicas e biológicas dos tumores e com o tempo de sobrevida dos pacientes, visando determinar possíveis marcadores prognósticos para esta neoplasia. Para tal 46 MCTs caninos foram utilizados. Todos os tumores apresentaram positividade na avaliação imuno-histoquímica para as proteínas analisadas. As proteínas p-AKT Thr 308 e p-S6K1 apresentaram forte intensidade de imunomarcação, quando comparadas a parâmetros associados a piores prognósticos. Esses resultados indicam que a forte intensidade de imunomarcação de p- AKT Thr 308 e p-S6K1 está relacionada a um pior prognóstico para os cães acometidos pelo MCT cutâneo / Abstract: The PI3K/AKT/mTOR pathway is related to proliferation, protein synthesis, cell motility and survival. Mutations in this pathway have been associated with the carcinogenic process in diferent tumor types. Currently, specific inhibitors of some proteins such as PI3K, AKT, mTOR, are being tested in order to optimize antitumor therapy in humans and animals. Apart from potential therapeutic targets, increased in immunostaining of some of these proteins have been associated with poorer prognostic in humans tumors. In dogs, mast cell tumor (MCT) is an extremely common skin tumor, which presents a highly variable behavior and unclear etiology. Therefore, the aim of this study was to evaluate the immunostaining of the protein components of PI3K/AKT/mTOR pathway, through the technique of immunohistochemistry, and in a second stage, correlate this results with clinical parameters of patients, with morphological and biological tumor characteristics and the survival time of patients to determine possible prognostic markers for this disease. For this, 46 canine MCTs were used. All tumors were positive in immunohistochemical analysis for the proteins analyzed. Proteins p-AKT Thr 308 and p-S6K1 showed increases in the intensity of immunostaining compared to parameters associated with worse prognosis. These results suggest that the increase in the intensity of immunostaining of p-AKT Thr 308 and p-S6K1 are related to a worse prognosis for dogs affected by cutaneous MCT / Mestre

Orientador: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Katia Mitsube Tarraga / Banca: Wagner Luís Ferreira / Resumo: A cardiotoxicidade induzida pela doxorrubicina gera remodelamento miocárdico e disfunção sistólica. O presente estudo avaliou a participação da apoptose e componentes da matriz extracelular (miofibroblastos e fibronectina) na cardiomiopatia dilatada induzida com doxorrubicina em coelhos. Foram utilizados 25 coelhos da raça Nova Zelândia, alocados em dois grupos (controle e tratados). O fármaco foi administrado por seis semanas e a ecodopplercardiografia foi realizada no momento zero e após a última administração. O remodelamento do miocárdio foi avaliado por microscopia eletrônica (varredura e transmissão) e por imunodetecção de fibras apoptóticas, miofibroblastos e fibronectina. Nos animais tratados houve redução significativa da função sistólica observada na ecodopplercardiografia e aumento das fibras apoptóticas e miofibroblastos, no ventrículo esquerdo, septo interventricular e ventrículo direito. Houve correlação negativa significativa entre o número de mitocôndrias lesadas e das células apoptóticas no septo interventricular e no ventrículo esquerdo com os índices de função sistólica. Os dados obtidos permitem inferir que a apoptose por via mitocondrial participa da disfunção sistólica observada no tratamento com doxorrubicina e que o aumento da matriz extracelular não é o principal causador de disfunção sistólica na cardiomiopatia dilatada induzida com doxorrubicina / Abstract: The cardiotoxicity induced by doxorubicin generates myocardial remodeling and systolic dysfunction. The present study evaluated the role of apoptosis and extracellular matrix components (fibronectin and myofibroblasts) in doxorubicin-induced dilated cardiomyopathy in rabbits. Twenty five New Zealand rabbits were used, allocated into two groups (control and treated). The drug was administered for six weeks and Doppler echocardiography was performed before the first and after the last administration. Myocardial remodeling was evaluated by electron microscopy (scanning and transmission) and immunodetection of apoptotic cells, myofibroblasts and fibronectin. Significant reduction in systolic function, increased apoptotic fibers and myofibroblasts were noticed in treated animals, on the left ventricle, interventricular septum and right ventricle. There was a significant negative correlation between the number of damaged mitochondria and apoptotic cells at the left ventricle and interventricular septum with systolic function, showing that the apoptosis by mitochondrial pathway plays a role on the systolic dysfunction during treatment with doxorubicin and the increase in extracellular matrix is not the primary cause of systolic dysfunction induced by doxorubicin / Doutor

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Claudia Momo / Banca: Karen Regina Lemos / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Marcos Rogério André / Resumo: A inflamação é um componente crítico para a progressão de tumores e sua malignidade está correlacionada com a resposta inflamatória induzida por citocinas e leucócitos infiltrados no sítio tumoral. O presente estudo teve por objetivo caracterizar, por imuno-histoquímica, o infiltrado inflamatório e citocinas pró e anti-inflamatórias nos carcinomas mamários caninos e determinar a identidade molecular dos tumores em luminal A ou B, C-erbb-2 ou basal. Para isso fez-se a imunodetecção de macrófagos, linfócitos (CD4, CD8, Treg), citocinas (MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β e IFN-ɣ), além de C-erbb-2, receptor de estrógeno e receptor de progesterona e avaliou-se as médias das imunomarcações por meio do Teste T e análise de variância nos tecidos mamários com ou sem carcinomas. Houve diferença estatística (p<0,0001) entre o grupo controle e o grupo de animais com carcinoma mamário simples em todos os parâmetros avaliados, apresentando aumento nas médias de animais acometidos por neoplasias. Quando ocorreu a divisão por tipo histológico, todos os anticorpos apresentaram diferença com o grupo controle (p<0,0001). Os carcinomas mamários simples (tubulares e papilares) apresentaram aumento na contagem de macrófagos, linfócitos T, linfócitos T auxiliares, T regulatórios, assim como, aumento na imunomarcação das citocinas MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β em comparação ao grupo controle. Os carcinomas mamários sólidos tiveram menor detecção de macrófagos e das subpopulações de linfócitos T, bem como de IFN-ɣ, IL-4 e TGF-β, possivelmente por um menor estímulo do sistema imune como mecanismo de evasão. Os macrófagos e linfócitos T CD4, bem como a citocina IL-10 foram predominantes no padrão tubular. Os carcinomas mamários caninos apresentam um perfil celular e de citocinas com ação pró-tumor, favorecendo seu crescimento e metástase. Na identificação molecular os tumores basais apresentaram menor... / Abstract: Inflammation is a critical component of tumor progression and its malignancy is correlated with the inflammatory response induced by cytokines and infiltrating leukocytes in the tumor site. This study aimed to characterize, by immunohistochemistry, the inflammatory infiltrate and pro- and anti-inflammatory cytokines in canine mammary carcinomas and determine the molecular identity of tumors in luminal A or B, C-erbB-2 or basal. For this, we made immunodetection of macrophages, lymphocytes (CD4, CD8, Treg), cytokines (MIF, IL-10, IL-4 and TGF-β and IFN-ɣ), further on c-erbB-2, estrogen receptor and progesterone receptor and evaluated the average of immunostainings through the T test and analysis of variance in the breast tissue with or without carcinomas. There was statistical difference (p <0.0001) between the control group and the group of animals with simple breast carcinoma in all parameters, an increase in average animal affected by cancer. When the split occurred by histological type, all antibodies showed differences with the control group (p <0.0001). Simple breast carcinoma (papillary and tubular) showed increased macrophage counts, T lymphocytes, T helper lymphocytes, regulatory T as well as increase in the immunostaining of the cytokines MIF, IL-10, IL-4 and TGF-β compared to control group. The solid breast carcinomas have had a decreased of macrophages and subsets of T lymphocytes and IFN-ɣ, IL-4 and TGF-β, possibly for less stimulation of the immune system as evasion mechanism. The macrophages and T CD4 + lymphocytes and IL-10 cytokine were prevalent in the tubular pattern. The canine mammary carcinomas have a cell profile and cytokines with pro-tumor action, favoring their growth and ... / Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Coorientador: Edilson Ervolino / Banca: Adriana Campos Passanezi Sant'Ana / Banca: Alvaro Francisco Bosco / Resumo: Este estudo avaliou, histoquimicamente e imunoistoquimicamente, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), da terapia com laser em baixa intensidade (LLLT) ou da associação de ambos na cicatrização de defeitos de fenestração periodontal (DFP) em ratos. DFP foram criados cirurgicamente na mandíbula de 80 ratos. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos: 1) C (controle) e 2) PRP - defeitos preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP, respectivamente; 3) LLLT e 4) PRP/LLLT - defeitos receberam aplicação da LLLT, foram preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP, respectivamente e irradiados novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 ou 30 dias pós-operatórios. As fibras colágenas imaturas e maduras foram avaliadas por análise histoquímica e suas porcentagens calculadas. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para fator de transcrição relacionado à Runt (Runx2), osteocalcina (OCN), osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP). Células Runx2-positivas foram quantificadas. Um método semi-quantitativo foi usado para avaliar a imunomarcação de OCN, OPN e ALP. Os dados foram analisados estatisticamente. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas porcentagens de fibras colágenas imaturas e maduras dos grupos experimentais quando comparadas ao grupo controle. Aos 10 dias, os grupos PRP e PRP/LLLT apresentaram número de células Runx2-positivas significativamente maior que o controle; o grupo PRP/LLLT apresentou padrões de imunomarcação de OCN e OPN significativamente maiores que o controle e não houve diferenças estatisticamente significativas no padrão de imunomarcação de ALP. Aos 30 dias, diferenças estatisticamente significativas não foram Resumo observadas nos padrões de imunomarcação de OCN, OPN e ALP entre os grupos experimentais... / Abstract: This study histochemically and imunoistochemically evaluated the influence of platelet-rich plasma (PRP), low-level laser therapy (LLLT), or their combination on the healing of periodontal fenestration defects (PFD) in rats. PFD were surgically created in the mandible of 80 rats. The animals were randomly divided into 4 groups: 1) C (Control) and 2) PRP - defects were filled with blood clot or PRP, respectively; 3) LLLT and 4) PRP/LLLT - defects received laser irradiation, were filled with blood clot or PRP, respectively, and then irradiated again. Animals were euthanized at either 10 or 30 days post-operative. Immature and mature collagen fibers were histochemically evaluated and their percentages were calculated. Runtrelated transcription factor 2 (Runx2), osteocalcin (OCN), osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP) immunohistochemical staining were performed. Runx2-positive cells were quantified. A semi-quantitative method was used to evaluate OCN, OPN, and ALP immunolabeling pattern. Data were statistically analyzed. Statistically significant differences were not observed in the percentages of immature and mature collagen fibers when each experimental group was compared to control. At 10 days, PRP and PRP/LLLT groups presented a significantly higher number of Runx2-positive cells than control; PRP/LLLT presented significantly higher OCN and OPN immunolabeling than control; and statistically significant differences were not observed in the ALP immunolabeling. At 30 days, statistically significant differences were not observed in the OCN, OPN and ALP immunolabeling among the experimental groups... / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Banca: Maria Cláudia Nogueira Zerbini / Banca: Roberto Antonio Pinto Paes / Banca: Alexandre Todorovic Fabro / Banca: Elida Paula Benquique Ojopi / Resumo: Introdução: Linfomas Double-Hit (LDH) são neoplasias de alto grau raras, caracterizadas pela translocação do gene MYC concomitante a translocação envolvendo os genes BCL2 e/ou BCL6, cujo diagnóstico depende da realização de exame citogenético, técnica de baixa disponibilidade e elevado custo. Diante disso, tem-se valorizado a identificação de fatores morfológicos e/ou imunofenotípicos que tenham associação com a detecção de tais translocações diagnósticas. Objetivos: Identificar pacientes portadores de LDH em casuística de linfomas Não-Hodgkin de alto grau e avaliar as associações entre os resultados citogenéticos imunoistoquímicos (IHQ) relativos aos marcadores MYC, BCL2 e BCL6. Material e Métodos: Procedeu-se revisão clínico-morfológica de 120 pacientes com diagnóstico de linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) e linfoma de Burkitt (LB), com confecção de plataforma de tissue microarray (TMA) para realização IHQ (CD20, CD79a, PAX5, CD10, BCL6, BCL2, MUM1, TDT e c-MYC) e hibridação por fluorescência in situ (FISH) para detecção de translocações dos genes c-MYC, BCL6 e BCL2. Resultados: Detectaram-se três pacientes portadores de LDH: dois com translocações de MYC e BCL2 e um com translocações de MYC e BCL6, todos evoluindo para óbito em menos de seis meses. Entre 90 amostras com citogenética avaliável, houve associação entre IHQ e FISH para MYC (p=0,036) e BCL2 (p=0,001), com concordância regular indicada por valores de Kappa de 0,23 [0,0;0,49] e de 0,35 [0,13;0,56], respectivamente. No grupo de LDGCB (n=72), as translocações envolvendo individualmente os genes MYC, BCL6 e BCL2 representaram 4,1%, 12,5% e 15,2%, respectivamente, sendo a morfologia de céu estrelado fortemente associada à detecção de translocações do gene MYC (p=0,01). Conclusão: A detecção de apenas três pacientes portadores de LDH na casuística estudada, todos com evolução para óbito, corrobora... / Abstract: Background: Double-Hit Lymphomas (DHL) are rare high-grade neoplasms characterized by the translocation of gene MYC to other translocations involving genes BCL2 and/or BCL6, whose diagnosis depends on the cytogenetic examination, a technique with low availability and high cost. Therefore, it has been valued the identification of morphologic and/or immunophenotypic factors that have association with the detection of those translocations. Objectives: To identify DHL patients in group of high grade non-Hodgkin lymphoma (NHL-B) and evaluate the associations between the cytogenetic and immunohistochemical (IHC) results for the MYC, BCL2 and BCL6 markers. Design: Clinical and morphological review of 120 patients diagnosed with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and Burkitt lymphoma (BL) was proceeded, with production of a tissue microarray platform (TMA) to perform IHC (CD20, CD79a, PAX5, CD10, BCL6, BCL2, MUM1, TDT and c-MYC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) for detection of c-MYC, BCL2 and BCL6 gene translocations. Results: Three patients with DHL were detected: two with translocations of MYC and BCL2 and one with translocations of MYC and BCL6, all leading to death in less than six months. Among 90 cytogenetically evaluable samples, associations were determined between IHC and FISH for MYC (p=0.036) and BCL2 (p=0.001), though with regular compliance testing, indicated by Kappa value of 0.23 [0.0;0.49] and 0.35 [0.13;0.56], respectively. In the DLBCL group (n=72), MYC, BCL6 and BCL2 translocations were present in 4.1%, 12.5% and 15.2%, respectively. "Starry sky" morphology was strongly associated with MYC positivity (p=0.01). Conclusion: The detection of only three DHL patients in this series, all evolving to death, confirms the rarity and aggressiveness of this neoplasm. The morphological pattern "starry sky" and the expression by IHC of MYC and BCL2 can represent possible selection factors for the ... / Doutor

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Cleverson Teixeira / Resumo: O carcinoma mamário é uma doença relativamente frequente entre as cadelas na faixa etária de 10 anos e apresenta morbidade importante, com expectativa de sobrevida média de 5 anos. A citoinclusão é usada rotineiramente na Medicina como método de escolha na investigação, pela rapidez que fornece subsídios para prever a resposta terapêutica. Entretanto, para a cadela se desconhece a aplicação da tal técnica, portanto, o estudo objetivou correlacionar os padrões morfológicos dos tumores mamários caninos encontrados na técnica de citoinclusão e na análise histológica da peça cirúrgica e comparar a marcação de RE, RP e CK5 nos os dois métodos em 25 amostras de carcinoma mamário. A citoinclusão e espécime cirúrgico foram submetidos ao processamento histológico, confecção das lâminas para coloração de hematoxilina-eosina (HE) e posterior reação imunoistoquímica (IQ) para receptores de estrógeno α (RE), progesterona (RP) e citoqueratina 5 (CK5). Foram consideradas positivas as marcações das células neoplásicas acima de 1% para RE e RP, e acima de 10% para CK5. Pela coloração de HE houve 100% de concordância no diagnóstico das neoplasias entre técnica de citoinclusão e análise histopatológica. A imunoistoquímica apresentou sensibilidade de 85,71%, 95,45% e 100% e índice Kappa de Cohen de 0,78, 0,84, e 0,95 para o RE, RP e CK5 respectivamente, e 100% de especificidade e p<0,01 para os três marcadores. Portando, a citoinclusão trata-se de um método acessível, rápido e de baixo custo, que oferece alta sensibilidade no diagnóstico citomorfológico e imunoistoquímico de carcinoma mamário em cadelas / Abstract: Breast carcinoma in a dog is a disease relatively frequent in bitches of 10 years old, displays important morbidity and evolve to death. The cell block for the diagnosis of injury in women is the method of choice in the investigation, because it provides subsidies to provide for response to therapy. However, for the dog is unknown the application of this technique, therefore, this study aimed to correlate the morphological patterns of canine mammary tumors between cell block technique and surgical specimen and compare the immunohistochemical marking of ER, PR and CK5 between the two methods in 25 samples. The cell block and surgical specimens were submitted to histological processing, preparation of slides for HE and subsequent immunohistochemistry (IQ) for estrogen receptor α (ER), progesterone (PR) and cytokeratin 5 (CK5). Were considered positive for ER and PR cases where there was marking on more than 1% of neoplastic cells and for CK5 the cases where there was marking on more than 10% of neoplastic cells. The level of agreement between the cell block and the surgical specimen was 86.9% for CK5 and 82.6% for the RE. For the HE staining was 100% agreement for the diagnosis of cancer between the techniques. Immunohistochemistry showed a sensitivity of 85.71%, 95.45% and 100% and Cohen's Kappa index of 0.78, 0.84, and 0.95 for ER, PR and CK5 respectively, and 100% specificity and p <0.01 for all three markers. Therefore the citoinclusão it is an affordable method, fast and low cost, which offers high sensitivity in immunohistochemical marker and in cytomorphological diagnosis of mammary carcinoma in female dogs / Mestre

Resumo:Nós investigamos a presença de formas promastigotas de Leishmania spp. pelo método de imuno-histoquímica em intestinos, ovários e glândulas salivares de carrapatos Rhipicephalus sanguineus em cães. Neste estudo, foram utilizados, 66 cães positivos e 33 negativos para Leishmania spp. pelo teste Imunoenzimático (ELISA), por exame citológico direto e por meio do método da Reação em cadeia da polimerase (PCR). Um total de 990 carrapatos foram colhidos desses 99 cães, sendo 10 por animal e estes foram dissecados, com posterior separação dos intestinos, ovários e glândulas salivares. Lâminas contendo os órgãos supramencionados foram confeccionadas para a execução da imuno-histoquímica (IHQ). Também foi efetuada a PCR em tempo real desses órgãos, bem como a quantificação da sua carga parasitária. Pela PCR em tempo real dos intestinos, ovários e glândulas salivares dos carrapatos, foram detectadas positividades de 93,94%, 46,97% e 27,27%, respectivamente. As cargas parasitárias médias no intestino foram de 9027,90 Leishmania/μL, nos ovários 411,66 Leishmania/μL e nas glândulas salivares 305,56 Leishmania/μL. Com relação as leituras das lâminas de IHQ, em 98,48% dos intestinos, 13,64% dos ovários e 7,58% das glândulas salivares houve imunomarcação positiva para Leishmania spp. Em virtude destes resultados evidenciados pela técnica de IHQ, com utilização do anticorpo primário lipofosfoglicano (LPG), nós consideramos a possibilidade da presença de formas promastigotas de Leishmania spp. em órgãos de R. sanguineus / Abstract:We investigated the presence of promastigotes of Leishmania spp. by immunohistochemical method in intestines, ovaries and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks in dogs. In this study, was used, 66 dogs positive and 33 negative for Leishmania spp. by immunoenzymatic test (ELISA), direct cytological examination and by polymerase chain reaction (PCR). A total of 990 ticks were collected from these 99 dogs, 10 per animal and these were dissected, with further separation of the intestines, ovaries and salivary glands. Slides of these organs were made for the implementation of immunohistochemistry (IHC). Also the real-time PCR was performed in these organs as well as the quantification of that parasite load. For real-time PCR of the guts, ovaries and salivary glands of ticks were detected positivities 93.94%, 46.97% and 27.27%, respectively. The average parasitic loads in the intestine were 9027.90 Leishmania/μL, the ovaries 411.66 Leishmania/μL and salivary glands 305.56 Leishmania/μL. Regarding the readings of IHC slides in 98.48% of the intestines, 13.64% of the ovaries and 7.58% of the salivary glands were positive for Leishmania spp. In view of these results shown by IHC technique, using the lipofosfoglicano primary antibody (LPG), we consider the possibility of the presence of promastigotes of Leishmania spp. in R. sanguineus organs / Orientador:Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Jancarlo Ferreira Gomes / Banca:Suely Regina Mogami Bomfim / Banca:Gisele Fabrino Machado / Banca:Mônica Regina Vendrame Amarante / Doutor