A esporotricose é uma micose subcutânea causada por espécies do complexo Sporothrix schenckii que acomete seres humanos e animais, principalmente os gatos. Desde 1998 o Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz no Rio de Janeiro vem acompanhando uma epidemia dessa doença envolvendo seres humanos, cães e gatos, onde as principais formas de transmissão são arranhadura, mordedura e/ou contato com o exsudato das lesões cutâneas de gatos doentes. O diagnóstico definitivo da esporotricose felina é obtido a partir do isolamento do Sporothrix sp. em meios de cultura, entretanto, o resultado desse exame pode demorar até quatro semanas, o que em algumas situações pode retardar o início do tratamento antifúngico. Os exames citopatológico, histológico e imuno-histoquímico são opções viáveis e mais rápidas para o diagnóstico dessa micose em gatos, principalmente em situações quando não é possível realizar o isolamento fúngico. O diagnóstico precoce da esporotricose felina é importante na implementação rápida do tratamento antifúngico, melhorando o prognóstico na maioria dos casos. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar as diferentes técnicas utilizadas no diagnóstico da esporotricose felina antes e durante o tratamento antifúngico. Na primeira etapa do estudo foram comparados os exames citopatológico (coloração pelo método panótico rápido), histológico (impregnação pela prata de Grocott) e imuno-histoquímico de 184 gatos no diagnóstico da esporotricose sem tratamento antifúngico prévio utilizando o cultivo fúngico como teste padrão de referência. Estruturas leveduriformes foram observadas em 160 (87,0%) casos no exame citopatológico, 168 (91,3%) na histopatologia e 163 (88,3%) na imunohistoquímica. A associação das três técnicas elevou a sensibilidade do diagnóstico para 98,3%, o que enfatiza a necessidade de sua implementação como ferramentas de rotina, sobretudo quando a cultura fúngica não está disponível. Na etapa seguinte, a carga parasitária e o isolamento de Sporothrix sp. das lesões cutâneas de 74 gatos foram avaliados mensalmente antes e durante o tratamento com itraconazol por um período de 12 semanas. A mediana da carga fúngica observada antes do início do tratamento antifúngico foi maior (pMW = 0,013) nos gatos nos quais foi observada a persistência da lesão (Med=98,6) em relação aqueles em que houve cicatrização (Med=15,0). A redução da carga fúngica ocorreu em todas as lesões estudadas, assim como a redução da positividade da cultura fúngica e do exame citopatológico. Estes resultados sugerem uma redução no potencial zoonótico dos gatos, enfatizando a importância do tratamento precoce como medida de controle. Adicionalmente, o isolamento do fungo e a presença de estruturas leveduriformes nas lesões de gatos com esporotricose podem ser fatores preditores da falência terapêutica, indicando a necessidade da implementação de alternativas terapêuticas. / Sporotrichosis is subcutaneous mycose caused by species of fungus from the Sporothrix schenckii complex and affects humans and animals, especially cats. Since 1998, the Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz in Rio de Janeiro has been describing in Rio de Janeiro an epidemic of sporotrichosis, involving humans, cats and dogs, with most of cases related to transmission through scratches, bites or contact with lesions from infected cats. The definitive diagnosis is based on the isolation of the fungus in culture; however, the results may take up to four weeks and postpone treatment outset. The cytopathology, histopathology and immunohistochemistry should be considered as rapid and accessible alternatives for the diagnosis in cats, especially when the fungal culture is not available. The early diagnosis of feline sporotrichosis is desirable for the prompt beginning of the antifungal treatment, improving the prognosis in most of the cases. The aim of this study was to evaluate and compare different techniques for the diagnosis of feline sporotrichosis before and during the treatment with itraconazol. In the first part of the study, cytopathological (Quick Panoptic), histopathological (Grocott silver stain) and immunohistochemical examinations were compared regarding the diagnosis of sporotrichosis in 184 cats without previous treatment, by using fungal culture as a reference standard. The yeast-like cells were observed in 160 (87.0%) cases by cytopathological examination, in 168 (91.3%) by histopathology and in 163 (88.3%) by immunohistochemistry. The combination of the three methods led to the diagnosis of 98.3% of cases, pointing to the need of their implementation as regular tools, notably when fungal culture is not available. In the second part of the study, the fungal burden and the isolation of Sporothrix sp. in cutaneous lesions of 74 cats were monthly evaluated before and during the treatment with itraconazole for twelve weeks. The median of the fungal load detected before the outse of the antifungal treatment was higher (pMW=0.013) in cats in which there was a persistence of the cutaneous lesion (Med=98.6) in comparison to those in which healing of the lesion was observed (Med=15.0). The decrease of the fungal burden occurred in all the lesions in this study as well as the reduction of the positivity of the fungal culture and the cytopathological examination. These results suggest a reduction in the zoonotic potential of cats and emphasize the importance of the early treatment as a control measure. In addition, the isolation of the fungus and the presence of yeast-like cells in lesions of cats with sporotrichosis during the treatment can be a predictor of treatment failure and should alert for the need of alternative therapeutic regimens.

INTRODUÇÃO: Carcinomas de mama triplo-negativos (CMTN) constituem um grupo de tumores heterogêneos caracterizados por sobrevida pobre dos pacientes e falta de terapia-alvo. Receptor andrógeno (AR) tem sido descrito no CMTN, mas o impacto prognóstico da expressão nesse subgrupo não está bem claro. OBJETIVO: Investigar a associação do status de expressão AR analisado por imunohistoquímica em casos de CMTN com parâmetros clínicos (idade, sobrevida) e variáveis patológicas (tamanho do tumor, grau do tumor). MÉTODOS: Foram analisados 62 CMTN por imuno-histoquímica automatizada para receptor andrógeno. A imuno-histoquímica foi avaliada por dois diferentes patologistas e a expressão do biomarcador foi avaliada por H-Score (intensidade mais percentagem de coloração). Kaplan-Meyer foi o método usado para avaliar a sobrevida global, tendo as diferenças nas distribuições sido avaliadas com base na expressão do marcador. RESULTADOS: 26% dos CMTNs foram AR positivos (n = 16) e 74% AR negativos (n = 46). Todos os casos de AR positivos ocorreram em mulheres ≥ 40 anos enquanto 13% dos casos de AR negativos foram vistos em mulheres ≤ 40 anos. 93% (52/56) de todos os CMTNs foram carcinoma ductal invasivo do tipo não especial (ICNST) e 93% (14/15) de AR positivos dos casos de ICNST. O tamanho do tumor variou de 2 a 4,9 cm na maioria dos cânceres AR positivos (n = 8/13; 62%). 60% (n = 9/15) dos casos de AR positivos mostraram grau histológico 3 seguidos de 27% de tumores de grau 2. Não se observou diferença entre pacientes AR positivos e AR negativos quando comparados por idade, tamanho do tumor, grau do tumor e tipo do tumor (p > 0,17). A positividade imuno-histoquímica para ARs também não foi associada com melhor sobrevida (p = 0,737; n = 51) ou sobrevida livre da doença (p = 0,552; n = 45) em CMTNs. CONCLUSÃO: Sob o ponto de vista do prognóstico, a imunorreatividade do AR tem sido associada com melhor sobrevida das pacientes. Esse resultado não foi confirmado na presente série. Isso poderia estar relacionado com o pequeno tamanho amostral ou com uma baixa prevalência de casos de AR positivos especificamente nesse subtipo de câncer de mama. Estudos realizados com maiores amostras são necessários para investigar esse biomarcador em CMTNs. / INTRODUCTION: Triple negative breast carcinomas (TNBC) are a heterogeneous group of tumors characterized by poor patient survival and lack of targeted therapies. Androgen receptor (AR) has been described in TNBC but the prognostic impact of the expression in this subgroup of tumors is not clear. OBJECTIVE: To investigate the association of AR expression status by immunohistochemistry in TNBC cases with clinical (age, survival) and pathological variables (tumor size, tumor grade). METHODS: 62 TNBC were analyzed by automated immunohistochemistry for androgen receptor. Immunohistochemistry was scored by two investigators and biomarker expression was assessed by H-Score (intensity plus the percentage of staining). Kaplan-Meier was used to evaluate overall survival, where differences in distributions were evaluated based on marker expression. RESULTS: 26% of TNBC were AR-positive (n = 16) and 74% AR negative (n = 46). All AR-positive cases occurred in women ≥ 40 years, while 13% of AR-negative cases were seen in women ≤ 40 years. 93% (52/56) of all TNBC were infiltrating ductal carcinomas of no special type (ICNST) and 14/15 (93%) of AR-positive cases were ICNST. Tumor size varied from 2-4.9 cm in the majority of AR-positive cancers (n = 8/13; 62%). 60% (n = 9/15) of AR-positive cases showed histological grade 3 tumors, followed by 27% of grade 2 tumors. No differences were observed between AR-positive and AR-negative patients when compared for age, tumor size, tumor grade and tumor type (all p > 0.17). AR immunohistochemical positivity was also not associated with better overall survival (p = 0.737, n = 51) or disease-free survival (p = 0.552; n = 45) in TNBCs. CONCLUSION: From the prognostic point of view, AR immunoreactivity has been associated with better overall patient survival. Unfortunately, this result could not be confirmed in our series. This could be related to the relatively small series of analyzed samples and to the low prevalence of AR-positive cases in this specific breast cancer subtype. Further studies with bigger samples are needed to investigate this biomarker in TNBC.

Orientador: Pedro Duarte Novaes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T09:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_JulianadosSantos_M.pdf: 17773747 bytes, checksum: 861f7b8b208320f769d2c3c3c20302c5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Nos incisivos de ratos a face do alvéolo relacionada ao esmalte é continuamente reabsorvida do lado interno e neoformada no lado externo. Estudo realizado em nosso laboratório mostrou que em incisivos de ratos contidos por um período de 18 dias, há uma substituição de reabsorção óssea na face do alvéolo relacionada ao esmalte por neoformação óssea, onde osteoclastos foram substituídos por osteoblastos. CSF-1 e RANKL estimulam a proliferação e diferenciação de osteoclastos enquanto a OPG possui potente atividade inibitória da osteoclastogênese. O objetivo deste estudo foi analisar a distribuição e a intensidade do CSF-1, RANKL e OPG nos tecidos periodontais relacionados ao esmalte (PRE), de incisivos inferiores de ratos em erupção normal e após período de 18 dias de contenção, utilizando método imunohistoquímico e associando a análise quantitativa de osteoclastos. Quinze ratos Wistar machos tiveram seu incisivo inferior esquerdo imobilizado por meio de um fio de aço preso ao 1° molar inferior esquerdo por 18 dias. Quinze ratos com o incisivo esquerdo em erupção normal foram utilizados como controle. A taxa de erupção foi medida por meio de uma marca feita na face labial da coroa. No 18º dia de experimento os animais foram sacrificados e a região da crista alveolar do incisivo foi separada. Os incisivos de 12 ratos (6 controles e 6 contidos) foram fixadas e processadas para inclusão em Paraplast e reação imunohistoquímica foi realizada utilizando anticorpos primários anti-CSF-1, OPG e RANKL. A intensidade de marcação do folículo dentário foi quantificada através de medida da densidade óptica, utilizando o ¿software¿ de análise de imagens Leica QWin (Leica imaging systems, Cambridge, UK ) e ambos os grupos foram comparados pelo test t não-pareado. Para verificar a atividade osteoclástica, os incisivos de 18 ratos (9 controles e 9 contidos) foram fixadas e processadas para inclusão em Historesina e foram realizadas a evidenciação da fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e a contagem de osteoclastos TRAP positivos presentes em toda a extensão do osso alveolar que circunda o esmalte. A contenção com fio de aço mostrou-se eficiente em imobilizar o incisivo. A diferença na quantidade de osteoclastos entre os grupos foi significante (p<0.001), sendo que no incisivo normofuncional a quantidade destes foi aproximadamente três vezes maior que no contido. Para o CSF-1 e OPG não houve, no folículo dentário, diferença estatisticamente significante na intensidade de marcação entre os grupos (p>0.05). Para RANKL o grupo contido apresentou-se com intensidade de marcação menor do que o normofuncional (p<0.01). As moléculas estudadas estavam presentes no PRE, da região da crista de incisivos inferiores de ratos, em erupção normal e contida, sendo que na condição contida houve uma diminuição na intensidade de RANKL e da quantidade de osteoclastos. Diante desta observação, podemos concluir que alterações nos tecidos que compõem o PRE no incisivo contido, modificam o balanço na relação RANKL/OPG alterando o metabolismo das células que participam da remodelação óssea / Abstract: In the rat incisors the face of the socket related to the enamel is resorpted continually on the inner side and formed on the outer side. A study accomplished at our laboratory showed that in rat incisors immobilized by a period of 18 days, there is a replacement of bone resorption in the face of the socket related to the enamel by bone formation, where osteoclasts were substituted by osteoblasts. CSF-1 and RANKL stimulate the proliferation and osteoclast differentiation while OPG has a potent osteoclastogenesis inhibitory activity. The aim of this study was to analyze the distribution and intensity of CSF-1, RANKL and OPG in periodontal tissues related to the enamel (PRE) of rat lower incisors, in normal eruption and after the period of 18 days of containment, using immunohistochemical technique and associating the quantitative analysis of osteoclasts. Fifteen male Wistar rats had their left lower incisor immobilized by means of a steel wire attached to the first left lower molar for 18 days. Fifteen rats with the left lower incisor in normal eruption were used as control. The eruption rate was measured using landmarks in the labial face of the crown. The animals were killed on day 18th and the region of the alveolar crest of the incisor was split. The incisors of 12 rats (6 control and 6 immobilized) were fixed and processed for embedding in Paraplast and immunohistochemical assay was accomplished using primary antibodies anti-CSF-1, OPG and RANKL. The immunostaining of the dental follicle was quantified by measure of the optical density, using the image analysis software Leica QWin (Leica imaging systems, Cambridge, UK) and both groups were compared by test t. To verify osteoclast activity, the incisors of 18 rats (9 control and 9 immobilized) were fixed and processed for embedding in Historesin and to make the tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) evident. Osteoclasts TRAP positive in the whole length of the alveolar bone surrounding the enamel were counted. The incisor immobilization with steel wire was efficient. The difference in the number of osteoclasts between both rat groups was significant (p<0.001). In the normal incisor, the number of osteoclasts was threefold greater than in the immobilized tooth. In the dental follicle, there wasn't significant difference in the immunostaining intensity for CSF-1 and OPG between the groups (p>0.05). The immobilized incisor group showed immunostained intensity smaller than the normal incisor group (p <0.01). The studied molecules were present in PRE, in the region of the alveolar crest of rat lower incisor, in normal and immobilized eruption. There was a decrease in the intensity of RANKL immunostaining and in the number of osteoclasts in the immobilized condition. Hence, we concluded that changes in tissues of PRE, in the immobilized incisor, modify the RANKL/OPG ratio altering the metabolism of cells that participate in the bone remodeling / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Pedro Duarte Novaes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T09:33:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Omar_NadiaFayez_M.pdf: 1647075 bytes, checksum: fea79bf37f4e22a4c5de5085d51981f1 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Metaloproteinases de matriz (MMPs) são uma família de endopeptidases capazes de degradar muitos dos componentes estruturais da matriz extracelular, entre eles o colágeno. A presença de MMPs no folículo dentário estaria relacionada com a remodelação que ocorre neste tecido durante o processo de erupção dentária. A matriz metaloproteinase de membrana tipo 1 (MT1-MMP ou MMP-14) tem sido considerada uma importante metaloproteinase de superfície celular envolvida no desenvolvimento do dente e suas raízes, na formação do osso alveolar e no processo de erupção dentária. Este estudo teve por objetivo verificar a distribuição de MT1-MMP, por meio da técnica de imunohistoquímica, no folículo dentário da região odontogênica de incisivos inferiores de ratos, em condições de erupção normal e alterada experimentalmente. Foram utilizados ratos Lewis machos adultos, divididos em 3 grupos: normofuncional - em condição de erupção normal; grupo hiper e hipofuncional - onde o incisivo inferior esquerdo foi seccionado a cada dois dias, mantendo o dente em desoclusão (hipofuncional), o incisivo contralateral direito permaneceu em oclusão e em sobrecarga, sendo considerado em hiperfunção; grupo contido - onde o incisivo inferior esquerdo recebeu uma contenção a fim de impedir o processo eruptivo. Após o período experimental de 14 dias, os animais foram anestesiados e sacrificados por perfusão intracardíaca, as hemimandíbulas foram removidas e fixadas, e os fragmentos correspondentes à região destinada ao estudo (região odontogênica) foram retirados. Após a descalcificação em EDTA 10%, os fragmentos foram incluídos em parafina. Os cortes obtidos foram submetidos à técnica de imunohistoquímica. A MT1-MMP foi localizada na região de folículo dentário em todos os grupos estudados. No grupo normofuncional a intensidade de marcação foi moderada, apresentando uma distribuição mais intensa nas células próximas ao osso alveolar. O grupo hiperfuncional apresentou intensidade de marcação e distribuição semelhante ao grupo normofuncional. O grupo hipofuncional apresentou intensidade de marcação forte com extensão para as células próximas à papila dentária. O grupo contido apresentou intensidade de marcação fraca com distribuição difusa por toda área do folículo dentário. Os resultados sugerem que a condição funcional de erupção alterada (hipo, hiperfuncional e contido) pode modificar a expressão da proteína MT1-MMP na região odontogênica de incisivos de ratos, demonstrando que esta molécula pode ter um importante papel no mecanismo de erupção dental / Abstract: Matrix metalloproteinases (MMPs) are a growing family of endopeptidases that are capable of degrading many structural components of the extracellular matrix, including collagen. MMPs on the dental follicle may be related with remodelation that occurs in this tissue during dental eruption. MT1-MMP has been considered an important membrane-type matrix metalloproteinase involved in tooth and root development, in alveolar bone formation, and in the dental eruption process. The aim of this investigation was to verify the distribution of MT1-MMP, using immunohistochemical technique, in the dental follicle of odontogenic region of lower incisors of rats, with normal and altered eruption conditions. Male adult Lewis rats were used. They were separated in 3 groups: Normalfunctional teeth group - teeth with normal eruption condition; hyper- and hypofunctional teeth group - the left lower incisors were cut at the level of the interdental papilla each two days, keeping the teeth out of occlusion (hypofunctional teeth) and the contralateral right incisors remained with overload (hyperfunctional teeth); Restrain teeth group, the left lower incisors received a restrain to impede the eruption process. After fourteen days the animals were anesthetized and sacrified by perfusion through the heart, the hemimandibles were removed and fixed, the fragments corresponding to the odontogenic region were removed. After descalcification in 10% EDTA they were embedded in paraffin. The sections were submitted to the immunohistochemical technique. MT1-MMP was distributed on the dental follicle area in all groups. In the normalfunctional teeth group the staining intensity was moderated, presenting a more concentrated distribution near the alveolar bone. The hyperfunctional teeth group showed staining intensity and distribution similar to the normalfunctional teeth group. The hypofunctional teeth group presented strong staining intensity with distribution extended to dental papilla. In the restrain teeth group the staining intensity was weak with diffuse distribution to all dental follicle area. The results suggest that the altered function condition eruption (hypo-, hyper-, and restrain tooth) may modify the MT1-MMP expression in rat incisor odontogenic region, demonstrating that this metalloproteinase may have an important role in the process of dental eruption / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Introdução: O adenocarcinoma ampular é uma neoplasia maligna rara, com frequência de 1% em relação a todos os tumores gastrintestinais e, de 6 a 25% dos casos de neoplasias periampulares. Como distintos epitélios convalescem dentro da ampola de Vater, a origem histológica desses tumores ainda é uma questão desafiadora na prática clínica. As diferenças nas classificações histomorfológicas tornam difícil a avaliação e comparação dos estudos clínicos desses tumores. Por isso, a divisão histológica em dois tipos principais (intestinal e pancreatobiliar) é necessária para comparação terapêutica e prognóstica desta neoplasia. Materiais e métodos: No presente estudo foram incluídos 27 pacientes no período de 2007 a 2013 com diagnóstico de Adenocarcinoma Ampular no HCFMRP-USP. Foi realizada a avaliação histológica e imuno-histoquímica com os anticorpos CK7, CK20, CDX2, MUC1, MUC2, MUC5AC e, em seguida, avaliado a sobrevida global. Resultados: A média de sobrevida global foi de 40,26 meses. 63% eram carcinomas do tipo intestinal e 37% eram do tipo pancreatobiliar. A expressão dos marcadores CK20, MUC 2 e CDX 2 foram mais frequentes nos tumores do tipo intestinal, já os marcadores CK7, MUC 1 e MUC5AC foram expressos com maior frequência no tipo pancreatobiliar. O CDX2 é o marcador com maior sensibilidade e especificidade para o tipo intestinal quando usado de forma isolada (p<0,01). A associação de CK7 e MUC1 apresentou alta sensibilidade (80%) para o subtipo pancreatobiliar, enquanto as associações CK20 e CDX2 ou MUC2 e CDX2 apresentavam especificidade de 100% para o subtipo intestinal. A média global de sobrevida foi de 40,26 meses. Não houve interferência do tipo histológico (p=0,48), estadiamento (p=0,90) ou realização de quimioterapia (p=0.30) na sobrevida global. Conclusão: O presente estudo propõe que a utilização de um painel imuno-histoquímica composto por CDX2, CK7 e MUC1 permite a classificação com maior acurácia dos adenocarcinomas ampulares em tipo intestinal ou pancreatobiliar. Não foi possível afirmar que a realização de quimioterapia, o estadiamento patológico ou o perfil histopatológico influenciou na sobrevida global, porém o grande impacto deste estudo foi a possibilidade de classificar, a partir de um painel imuno-histoquímico reduzido, os dois subtipos histológicos usuais dos adenocarcinoma ampulares e com isso estabelecer um protocolo para direcionar melhor os pacientes. / Background: Ampullary carcinoma is a rare malignant neoplasm, with a frequency of 1% of all gastrointestinal tumors and represents 6 to 25% of the cases of periampullary neoplasms. As distinct epithelia convalesce within the ampulla of Vater, the histological origin of these tumors is still a challenging question in clinical practice. Differences in histomorphological classifications make difficult to evaluate and compare the clinical trials of these tumors. Therefore, the histological division into two main types (intestinal and pancreatobiliary) is necessary for therapeutic and prognostic comparison of this cancer. Methods: 27 patients were included between 2007 and 2013 with diagnosis of ampullary carcinoma from HCFMRP-USP. Histological and immunohistochemical evaluation was performed with the antibodies CK7, CK20, CDX2, MUC1, MUC2, MUC5AC and then was evaluated the overall survival. Results: The overall survival rate was 40.26 months. Sixty three percent were intestinal type carcinomas and 37% were pancreatobiliary type. Expression of the CK20, MUC 2 and CDX 2 were more frequent in intestinal tumors, whereas the CK7, MUC 1 and MUC5AC markers were expressed more frequently in the pancreatobiliary type. The immunostaining of CDX2 presented highest sensitivity and specificity for the intestinal type when used alone (p <0.01). The association of CK7 and MUC1 showed high sensitivity (80%) for the pancreatobiliary type, while CK20 and CDX2 or MUC2 and CDX2 associations had 100% specificity for the intestinal type. The overall survival rate was 40.26 months. There was no significative relation of histological type (p = 0.48), staging (p = 0.90) or chemotherapy (p = 0.30) with the overall survival. Conclusions: This study suggests that the use of an immunohistochemical panel of CDX2, CK7 and MUC1 allows the classification with higher accuracy in the intestinal or pancreatobiliary type. It was not possible to affirm that chemotherapy, pathological staging or histopathological profile influenced the overall survival, but the major impact of this study was the possibility to classify, from a reduced immunohistochemical panel, the two usual histological subtypes of ampullary adenocarcinoma and thus establish a protocol to better target patients.

As doenças inflamatórias intestinais (DII) são doenças crônicas incapacitantes com significativa morbidade. A Doença de Crohn (DC) e a Retocolite Ulcerativa (RCU) são as maiores representantes. O diagnóstico é baseado na suspeita clínica e complementado por achados endoscópicos, histopatológicos e radiológicos. Como não existe um teste padrão, o diagnóstico destas doenças permanece sendo um problema para gastroenterologistas e patologistas. O desenvolvimento de terapias mais específicas torna cada vez mais importante o diagnóstico preciso para uma escolha terapêutica individualizada. A imunidade inata está ativada de forma semelhante nas duas DII, porém na RCU os linfócitos CD4 TH2 são os principais envolvidos. Estes linfócitos expressam o receptor CD30 na sua membrana plasmática e produzem citocinas que ativam os eosinófilos. Levando em consideração o conhecimento fisiopatológico atual, este estudo tem como principal objetivo avaliar a relevância da expressão do marcador CD30 por imuno-histoquímica, a contagem de eosinófilos e as características histopatológicas no diagnóstico diferencial das DII. Foram avaliados 185 pacientes de um ambulatório especializado em um Hospital Universitário (105 com DC 80 com RCU). O diagnóstico foi estabelecido pelos critérios de Lennard-Jones, revisados por um gastroenterologista especializado e corroborado por cinco anos de seguimento. As biópsias foram realizadas por diversos profissionais na rotina assistencial, porém todas foram analisadas por um patologista com experiência em tubo digestivo. Nenhum paciente estava usando tratamento no momento da coleta das biópsias. As variáveis histopatológicas que demonstraram poder estatístico para auxiliar no diagnóstico diferencial foram a extensão do processo inflamatório para a submucosa, a presença de granuloma, erosões aftóides e variabilidade de acometimento entre os fragmentos. Avaliando estas características em conjunto, foi possível obter uma acurácia de 69.1% para o diagnóstico diferencial entre DC e RCU. Estudando o segmento mais alterado encontrou-se uma mediana de eosinófilos de 42 (25,5 – 63,5), nos pacientes com DC e 107 (67 – 123) nos pacientes com RCU (p< 0.001). Assumindo como ponto de corte um número V a 70 eosinófilos, a sensibilidade foi de 78,3% e a especificidade de 71% favorecendo o diagnóstico de RCU, a área sob a curva ROC foi de 0,767 (IC 95%: 0,696–0,838). A imuno-histoquímica com CD30 demonstrou uma mediana de 3 células CD30+ (2-6) na DC e 33 (24-52) na RCU, demonstrando uma diferença estatística significativa para o diagnóstico diferencial entre as duas doenças (p<0,001). Além disso, nos pacientes com RCU as células CD30+ estavam distribuídas mais frequentemente em agrupamentos nos centros dos folículos linfoides. O ponto de corte determinado pela curva ROC foi de 15 células marcadas (S = 97,5%, E = 94,3%, RV + = 17,1; RV = 0.03, área sob a curva: 0.967, IC 95%: 0.941 - 0.993). Todos estes parâmetros estudados tiveram capacidade discriminatória para o diagnóstico de DC e RCU. Designando um valor para cada variável, baseado no poder estatístico de cada uma e de forma a obter uma soma de 10 pontos no total, foi construído um escore histopatológico para o diagnóstico da DC. Considerando-se a soma das variáveis V 5 obteve-se uma especificidade de 100% e uma sensibilidade de 86,8%. Considerando 4 como ponto de corte do escore, a sensibilidade aumenta para 95,3%, e a especificidade reduz de 100% para 94,9%. Concluindo, o uso rotineiro da avaliação das características histopatológicas descritas em associação com a contagem de eosinófilos e células CD30+ proporciona uma alta acurácia no diagnóstico diferencial entre DC e RCU. Todos os parâmetros estudados são de fácil avaliação tanto por patologistas especialistas quanto generalistas. Sugere-se a realização de um estudo prospectivo para validação deste escore. / Inflammatory bowel diseases (IBD) are chronic disabling diseases with significant morbidity, being Crohn’s disease (DC) and Ulcerative colitis (UC) their greatest representatives. Diagnosis is based on clinical suspicious and complemented by endoscopic, histopathological and radiological findings. However, there is not a gold standard test, so it remained a problem for gastroenterologists and pathologists. The development of more targeted therapies makes it even more important to establish an accurate diagnosis for a better individualized therapeutic approach. Innate immune response is activated in both IBD, but in UC the lymphocytes CD4 TH2-like are mainly engaged, this kind of lymphocytes has CD30 expressed in their plasma membrane and produces cytokines that activate eosinophils. Considering the current pathophysiological knowledge, this study aimed to evaluate the relevance of CD30 expression by immunohistochemical, eosinophil count and histopathological features in differential diagnosis of IBD. A total of 185 patients were evaluated (105 CD/ 80 UC). Patients were followed at a specialized clinic of a university hospital, diagnosed according to Lennard- Jones criteria reviewed by a gastroenterologist expert and corroborated by five years of follow up. Biopsy samples were taken by different professionals in routine care, but analyzed by an experienced gastrointestinal pathologist. None of the patients were using treatment at the time of biopsy. Of all the pathological variables assessed, those that had statistical capacity to assist in the differential diagnosis were extension of the inflammatory process to submucosa, granuloma, aphthous erosion and variability of involvement between fragments. Evaluating these variables together, an accuracy of 69.1% in the differential diagnosis between CD and UC was found. Assessing the most altered sample the median of eosinophils was 42 (25.5 – 63.5) in CD patients and 107 (67 – 123) in UC patients (p< 0.001). Assuming a cutoff V 70 eosinophils, the sensitivity was 78,3% and specificity of 71% favoring the UC diagnosis, the area under the ROC curve was 0.767 (CI 95%: 0,696–0,838). Immunohistochemical CD30+ cells presented with a median of 3 cells (2-6) in CD and 33 cells (24-52) in UC, demonstrating a highly significant statistical difference between the two diseases (p<0.001). Besides, CD30+ cells were distributed most clustered in the center of lymphoid follicles in UC patients. The cutoff determined by ROC curve was 15 (S = 97.5%, E = 94.3%, LR + = 17.1;-RV = 0.03, AUC: 0.967, 95% CI: 0.941 - 0.993). All these parameters studied had discriminatory capacity for diagnosis of CD and UC. A value was assigned to each variable based on the statistical power of each, making a total sum of 10 points to build a histopathological score for the CD diagnosis. Setting the cutoff as V 5 we found a specificity of 100% and a sensitivity of 86.8%. When we consider as cutoff as V 4 points the score sensitivity comes to 95.3%, and reduces the specificity of 100% to 94.9%. In conclusion, the use of routine assessment of the histopathological features described previously in association with the eosinophils and CD30+ cells count provides a high accuracy for CD and UC differential diagnosis. All parameters assessed here are easily performed by pathologists specialists and generalists. The next step seems to be the validation of this score in a prospective study.

Pneumocystis é um importante patógeno oportunista que pode causar um quadro de pneumonia intersticial fatal em animais infectados por alguma doença imunodepressora. Pneumocystis sp. tem sido identificado em suínos domésticos e selvagens coinfectados com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2) que desenvolvem a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O presente trabalho analisou 78 javalis (Sus scrofa) com histórico de SMDS procedentes de 6 diferentes propriedades com sistema de confinamento intensivo no Rio Grande do Sul no período de março de 2006 a junho de 2008. Amostras de tecido pulmonar de seis javalis que não desenvolveram clinicamente a SMDS, assim como, amostras de suínos procedentes de abatedouros dos Estados do Rio Grande do Sul e Mato Grosso foram incluídas nas análises molecular e filogenética do trabalho. O teste de imunohistoquímica (IHQ) para a detecção de Pneumocystis sp. foi positivo em 50% dos pulmões analisados. A IHQ para a detecção de PCV2 foi positiva em 37% dos animais, sendo que o linfonodo mesentérico foi o órgão que apresentou maior grau de marcação positiva. Coinfecção entre Pneumocystis sp. e PCV2 foi confirmada pela IHQ em 20,5% dos javalis. O teste de nested-PCR dos genes mtLSU rRNA e mtSSU rRNA identificou a presença de material genético de Pneumocystis sp. em pulmões de javalis que desenvolveram a SMDS e em pulmões de javalis que não apresentaram clinicamente a doença, sugerindo que somente a presença de Pneumocystis sp. não se caracteriza como causa suficiente para o desenvolvimento de pneumonia intersticial. Identificou-se pela análise filogenética que javalis e suínos no Brasil são afetados pela mesma espécie de Pneumocystis sp. e que esta subdividese em dois grupos distintos. / Pneumocystis is an important opportunistic pathogen that may cause lethal interstitial pneumonia in infected animals due to some immunosuppressive disease. Pneumocystis sp. has been found in domestic and feral swine co infected with porcine circovirus type 2 (PCV2) that developed the postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). This study analyzed 78 wild boars (Sus scrofa) with PMWS background from 6 different farms with intensive confinement system in Rio Grande do Sul from March 2006 to June 2008. The lung tissue samples of six wild boars that did not develop PMWS, as well as the swine samples from slaughterhouses in Rio Grande do Sul and Mato Grosso were included in the molecular and phylogenetic analyses of this study. The immunohistochemistry test (IHC) for detection of Pneumocystis sp. was positive in 50% of the analyzed lungs. The IHC for PCV2 detection was positive in 37% of the animals and the mesenteric lymph node was the organ with the highest degree of positive staining. Co infection in Pneumocystis sp. and PCV2 was confirmed by IHC in 20.5% of wild boars. The nested-PCR test of the mtLSU rRNA and mtSSU rRNA genes identified the presence of genetic material of Pneumocystis sp. in lungs of wild boars that developed the PWMS and in wild boars that did not presented clinical disease, which may mean that only the presence of Pneumocystis sp. was not characterized as sufficient cause to interstitial pneumonia development. Through phylogenetic analysis it has been identified that wild boars and swine in Brazil are affected by the same specie of Pneumocystis sp. and its subdivision in two different groups.

INTRODUÇÃO: Carcinomas de mama triplo-negativos (CMTN) constituem um grupo de tumores heterogêneos caracterizados por sobrevida pobre dos pacientes e falta de terapia-alvo. Receptor andrógeno (AR) tem sido descrito no CMTN, mas o impacto prognóstico da expressão nesse subgrupo não está bem claro. OBJETIVO: Investigar a associação do status de expressão AR analisado por imunohistoquímica em casos de CMTN com parâmetros clínicos (idade, sobrevida) e variáveis patológicas (tamanho do tumor, grau do tumor). MÉTODOS: Foram analisados 62 CMTN por imuno-histoquímica automatizada para receptor andrógeno. A imuno-histoquímica foi avaliada por dois diferentes patologistas e a expressão do biomarcador foi avaliada por H-Score (intensidade mais percentagem de coloração). Kaplan-Meyer foi o método usado para avaliar a sobrevida global, tendo as diferenças nas distribuições sido avaliadas com base na expressão do marcador. RESULTADOS: 26% dos CMTNs foram AR positivos (n = 16) e 74% AR negativos (n = 46). Todos os casos de AR positivos ocorreram em mulheres ≥ 40 anos enquanto 13% dos casos de AR negativos foram vistos em mulheres ≤ 40 anos. 93% (52/56) de todos os CMTNs foram carcinoma ductal invasivo do tipo não especial (ICNST) e 93% (14/15) de AR positivos dos casos de ICNST. O tamanho do tumor variou de 2 a 4,9 cm na maioria dos cânceres AR positivos (n = 8/13; 62%). 60% (n = 9/15) dos casos de AR positivos mostraram grau histológico 3 seguidos de 27% de tumores de grau 2. Não se observou diferença entre pacientes AR positivos e AR negativos quando comparados por idade, tamanho do tumor, grau do tumor e tipo do tumor (p > 0,17). A positividade imuno-histoquímica para ARs também não foi associada com melhor sobrevida (p = 0,737; n = 51) ou sobrevida livre da doença (p = 0,552; n = 45) em CMTNs. CONCLUSÃO: Sob o ponto de vista do prognóstico, a imunorreatividade do AR tem sido associada com melhor sobrevida das pacientes. Esse resultado não foi confirmado na presente série. Isso poderia estar relacionado com o pequeno tamanho amostral ou com uma baixa prevalência de casos de AR positivos especificamente nesse subtipo de câncer de mama. Estudos realizados com maiores amostras são necessários para investigar esse biomarcador em CMTNs. / INTRODUCTION: Triple negative breast carcinomas (TNBC) are a heterogeneous group of tumors characterized by poor patient survival and lack of targeted therapies. Androgen receptor (AR) has been described in TNBC but the prognostic impact of the expression in this subgroup of tumors is not clear. OBJECTIVE: To investigate the association of AR expression status by immunohistochemistry in TNBC cases with clinical (age, survival) and pathological variables (tumor size, tumor grade). METHODS: 62 TNBC were analyzed by automated immunohistochemistry for androgen receptor. Immunohistochemistry was scored by two investigators and biomarker expression was assessed by H-Score (intensity plus the percentage of staining). Kaplan-Meier was used to evaluate overall survival, where differences in distributions were evaluated based on marker expression. RESULTS: 26% of TNBC were AR-positive (n = 16) and 74% AR negative (n = 46). All AR-positive cases occurred in women ≥ 40 years, while 13% of AR-negative cases were seen in women ≤ 40 years. 93% (52/56) of all TNBC were infiltrating ductal carcinomas of no special type (ICNST) and 14/15 (93%) of AR-positive cases were ICNST. Tumor size varied from 2-4.9 cm in the majority of AR-positive cancers (n = 8/13; 62%). 60% (n = 9/15) of AR-positive cases showed histological grade 3 tumors, followed by 27% of grade 2 tumors. No differences were observed between AR-positive and AR-negative patients when compared for age, tumor size, tumor grade and tumor type (all p > 0.17). AR immunohistochemical positivity was also not associated with better overall survival (p = 0.737, n = 51) or disease-free survival (p = 0.552; n = 45) in TNBCs. CONCLUSION: From the prognostic point of view, AR immunoreactivity has been associated with better overall patient survival. Unfortunately, this result could not be confirmed in our series. This could be related to the relatively small series of analyzed samples and to the low prevalence of AR-positive cases in this specific breast cancer subtype. Further studies with bigger samples are needed to investigate this biomarker in TNBC.

As encefalopatias espongiformes transmissíveis (EETs), ou doenças do príon, ocorrem tanto nos animais como no homem, são responsáveis por doenças transmissíveis e hereditárias e provocam lesões degenerativas no encéfalo. A presença de uma forma protéica anormal (PrPSc), ao invés da sua forma normal (PrPC), no tecido encefálico e linforreticular é característica peculiar das EETs. Essa proteína é altamente insolúvel, resistente à degradação por proteases e se deposita eventualmente sob forma de placas amiloides na substância cinzenta. Tais placas provocam a morte maciça de neurônios e células gliais, causando vacuolização intensa no tecido afetado. A partir da implantação do programa de vigilância epidemiológica da encefopatia espongiforme bovina (EEB), coordenado pelo Programa Nacional de Controle da Raiva dos Herbívoros e Outras Encefalopatias (PNCRH) do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA), o Setor de Patologia Veterinária da UFRGS tem sido requisitado frequentemente para realização de exames de necropsias e de materiais de animais com suspeita de scrapie. A técnica de imuno-histoquímica (IHQ) é o teste para o diagnóstico das EETs mais específico disponível até o momento, sendo cada vez mais utilizado para diagnóstico, rastreamento, estudo da patogênese e fornecimento de informações comparativas em nível molecular. Por outro lado, a genotipagem é uma ferramenta importante no auxílio da identificação da suscetibilidade genética a scrapie, tornando o diagnóstico mais seguro, além de possibilitar a identificação de casos atípicos de scrapie, como a Nor98. Este trabalho consistiu na realização da IHQ para proteína priônica no tecido nervoso e no tecido linforreticular, como método diagnóstico de scrapie em ovinos e caprinos, associado à genotipagem dos ovinos. Entre 2009 e 2012 foram realizadas colheitas de materiais para exames de IHQ e coloração por hematoxilina-eosina em amostras de tecidos de ovinos das raças Suffolk, Santa Inês, Dorper e mestiços. As amostras foram obtidas a partir de biopsias e necropsias para diagnóstico de scrapie. Foi realizada também a genotipagem nos animais para os códons 136, 154 e 171 da proteína PRP, e em alguns casos no códon 141. Foram realizadas três repetições da IHQ para cada amostra positiva para PrPSc. O diagnóstico por IHQ no tecido linforreticular foi considerado positivo quando o material apresentou um número de, no mínimo, três folículos linfoides com centros germinativos marcados pela técnica. Entre os resultados obtidos neste trabalho pode-se incluir o primeiro diagnóstico positivo para scrapie de genótipo resistente (ARR/ARR) não Nor98, na espécie ovina no Brasil, com marcação por IHQ nas tonsilas palatínicas, terceira pálpebra e mucosa reto-anal. Este animal era pertencente a um rebanho de ovinos mestiços Sufolk, no qual foram diagnosticados mais nove animais positivos para scrapie nas tonsilas palatínicas, terceira pálpebra e mucosas reto-anal. A coleta e envio de material de vários órgãos linfoides foi considerada importante por possibilitar a confirmação da presença ou não do agente em pelo menos dois deles, reduzindo o número de casos considerados suspeitos, o risco de falsos positivos, e parte, senão a totalidade, dos casos com material insuficiente para diagnóstico. Em necropsia, a coleta de tonsilas palatínicas mostrou-se eficaz pelo seu alto índice de marcação positiva. A coleta de amostras de sangue foi importante para a realização do teste de genotipagem, permitindo avaliar o grau de resistência/susceptibilidade do animal, complementando os resultados de IHQ. / Transmissible spongiform encephalopathies (TSEs), the prion diseases, occurs both in animals and in humans, are responsable for a transmissible and hereditary disease, and cause degenerative lesions in the brain tissue. The presence of an abnormal protein (PrPSc), instead of its normal form (PrPC), on the nervous and lymphoreticular tissue is characteristic of TSEs. This protein is highly insoluble and resistant to degradation by proteases and eventually settles in the gray matter in the form of amyloid plaques that causes massive death of neurons and glial cells, causing intense vacuolization in the affected tissue. After the establishment of the Bovine Spongiform Encephalopathy surveillance program, coordinated by the National Rabies and Other Encephalopathies Control Program, the Setor de Patologia Veterinária of UFRGS has been usually required to proceed necropsy and other diagnosis in suspicious animals. The immunohistochemistry (IHC) is the most specific technique actually used to TSEs identification, being increasingly used to diagnosis, traceability, pathogenesis study and providing comparative information on the molecular level. On the other hand, genotyping is an important tool on scrapie genetic susceptibility identification, making more secure the diagnosis, beyond to enable the atypical scrapie cases identification, like Nor98. This work consisted to performing IHC to prionic protein, on nervous system and lymphoreticular tissue, as scrapie diagnostic method in sheep and goat, associate to genotyping in sheep. Sheep tissues were sampled from Suffolk, Santa Inês, Dorper and crossbreed to proceed IHC and hematoxilin-eosin staining between 2009 and 2012. The samples were obtained by biopsy and necropsy to scrapie diagnose. Genotyping of codons 136, 154 and 171 of PRP protein was performed, as well as a few of codon 141. The monoclonal antibody anti-prion F98/160.1.5 and F99/97.6.1 was used at the IHC. For each positive sample three repetitions were performed. The diagnostic by IHC at lymphoreticular tissue was considered positive when it shows at minimum three follicles with germinal centers stained. Among the obteined results, could be included the first diagnostic of scrapie not Nor98 in resistant genotype (ARR/ARR) sheep in Brazil. This animal belongs to a Suffolk sheep flock in which were diagnosed more nine scrapie positive animals showing IHC staining on tonsils, third eyelid and rectal mucosa. The sampling and dispatch of many lymphoid tissues was considered important to enable the confirmation of agent presence or not in at least two of them, reducing the number of suspicious cases, the risk of false positive, and part, if not all, of cases with insufficient material for diagnosis. At necropsy, the tonsils collecting showed efficient by the it high positive staining level. Blood sampling becomes important to proceed genotyping test, allowing measure the animal resistance/susceptibility grade, complementing the IHC results.

Rhodococcus equi é um importante patógeno bacteriano em medicina veterinária, associado, sobretudo, a pneumonias piogranulomatosas em potros no primeiro semestre de vida. São descritos neste trabalho vinte casos de infecção por R. equi em potros recebidos para necropsia no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul entre janeiro de 1997 e janeiro de 2013. Os históricos clínicos obtidos com os veterinários apresentaram grande variabilidade e, mesmo os sinais clássicos de comprometimento respiratório e febre só foram vistos em metade dos casos. Os dados obtidos em uma visita a uma propriedade demonstram que a superpopulação de potros e a introdução de fêmeas no grupo de parição contribuíram para a ocorrência de um surto. Exames de necropsia e de histologia revelaram que pneumonia piogranulomatosa multifocal foi a forma de apresentação mais constante (dezenove casos), seguida por linfadenite piogranulomatosa (dez casos) e tiflocolite piogranulomatosa e ulcerativa (cinco casos). Três animais apresentaram osteomielite piogranuloamatosa, dos quais, dois em vértebras. Uveítes e polissinovites assépticas foram constatadas em três casos. Exame imuno-histoquímco anti-Rhodococcus equi revelou-se positivo em todos os pulmões com lesões, embora os linfonodos tenham sido positivos em apenas três das nove amostras testadas. O exame bacteriológico das amostras de necropsia foi positivo em quinze casos clínicos, assim como em uma amostra de solo da propriedade visitada. O exame de reação da polimerase em cadeia (PCR) revelou o gene de virulência VapA de R. equi em todos os isolados clínicos, mas não na amostra de solo. Adicionalmente os pulmões foram testados por imuno-histoquímica para Pneumocystis sp.e apresentaram marcação em treze dos vinte casos. / Rhodococcus equi is an important bacterial pathogen in veterinary medicine, especially associated with piogranulomatous pneumonia in foals under six months of age. Twenty cases of R. equi infection in foals received for necropsy at the Pathology Veterinary Sector (SPV) of the Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS) between January 1997 and January 2013 are described in this paper. Clinical history obtained with veterinary practitioners presented high variability, and even classical respiratory signs and fever were only observed in half of the cases. Data collected in an investigative visiting to a breeding farm showed that the foal superpopulation and the introduction of females to the parturition group contributed to the occurrence of an outbreak. Necropsy and histologic examinations revealed that multifocal piogranulomatous pneumonia was the most constant presentation (nineteen cases), followed by piogranulomatous lymphadenitis (ten cases) and piogranulomatous and ulcerative typhlocolitis (five cases). Three animals presented piogranulomatous osteomyelitis, two of them in vertebrae. Aseptic uveitis and polisynovitis were verified in three cases. Anti-Rhodococcus equi immunohistochemical examination stained positive in all lungs containing lesions, although lymphnodes have stained positive in only three of nine samples tested. Bacteriologic examination of the necropsy samples was positive in fifteen cases and in a soil sample from the visited breeding farm. Polymerase chain reaction (PCR) test revealed the VapA virulence factor of R.equi in all clinical isolates, but not in the soil sample. Additionally, the lungs were tested to the presence of Pneumocystis sp. by immunohistochemistry, and stained positive in thirteen of twenty cases.