Orientadores: Luiz Carlos Zeferino, Fernando Carlos de Landér Schmitt / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T10:11:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alvarenga_CesarAugusto_D.pdf: 4979947 bytes, checksum: 8da78ad01d29e47c7c97bb4d231ee04b (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A maioria dos carcinomas invasivos da mama são classificados como carcinoma ductal invasivo, sem outras especificações (CDI-SOE), enquanto que cerca de 25% são definidos como tipos especiais histológicos (TEH). Esses TEH de carcinomas da mama são categorizados em pelo menos 17 entidades patológicas distintas. Como a maioria dos estudos realizados na literatura em relação à classificação molecular (luminais A e B, sobre expressão de HER2, "basal-like") tenham utilizado somente CDI-SOE e lobulares invasivos, um estudo com mais TEH seria necessário. A CK19 pode ser utilizada como método de avaliação do linfonodo sentinela através de uma técnica molecular chamada de OSNA (amplificação de ácido nucléico de um passo). A expressão de sua positividade foi avaliada somente nos carcinomas ductais, lobulares, medulares e de pequenas células. Realizado tissue microarray (TMA) no IPATIMUP (Porto-Portugal) de 157 casos selecionados dos arquivos do Instituto de Patologia de Campinas. Obtido um total de 121 e 116 casos no TMA do perfil molecular e da CK19, respectivamente, estes incluíram carcinomas tubulares, mucinosos, papilares encapsulados e invasivo, lobulares, micropapilares, medulares, metaplásicos, apócrinos e mistos. Foram utilizados marcadores imunoistoquímicos tais como: RE, RP, RA (somente nos apócrinos), HER2, Ki67, P-caderina, CK5, EGFR e p63 para classificá-los quanto à classificação molecular e CK19 para avaliar sua expressão na mama antes da realização da técnica de OSNA em linfonodo sentinela. Tubulares, papilares e mucinosos foram todos luminais A e B, dado semelhante ao perfil de expressão genética; medulares e metaplásicos foram quase todos "basais-like" (76.2% e 90%, respectivamente), enquanto que ao nível transcriptômico, todos os casos pertencem ao subtipo "basallike"; micropapilares foram luminais A e B e sobre-expressão de HER2, sendo que ao nível transcriptômico são praticamente todos luminais B devido à alta expressão de HER2; apócrinos foram os mais heterogêneos de todos com casos luminais A e B, sobre-expressão de HER2 e "basais-like", dado diferente ao nível transcriptômico que revela o subtipo "molecular apócrino" (RE-/RA+/HER2- ou +). O risco relativo do Ki67 aumentou entre os TEH, sendo que o carcinoma medular teve 110 vezes mais risco de aumento do Ki-67 em relação ao tubular. A CK19 foi expressa em 98.2% dos TEH de carcinomas da mama, dado idêntico ao estudo anterior de Chu et al, sendo que sua positividade aumentou nos casos em que o bloco de parafina foi inteiramente estudado, pois sua marcação foi focal em muitos casos avaliados no TMA. Isso pode produzir eventualmente resultados falso-negativos nas "corebiopsies" / Abstract: Most invasive breast carcinomas are classified as invasive ductal carcinoma, not otherwise specified (IDC-NOS), while approximately 25% are defined as special histological types (HST). These HST of breast carcinomas are categorized into at least 17 distinct pathological entities. Most studies in the literature regarding the molecular classification (luminal A and B, HER2- overexpression, "basal-like") were evaluated only in IDC-NOS and in lobular invasive carcinoma, a study with more HST of breast carcinoma would be necessary. The CK19 can be used as a method of evaluation of sentinel lymph node using a molecular technique called OSNA (one step acid nucleic amplification). The expression of CK19 positivity was assessed only in ductal, lobular, medullary and small cell carcinomas. It was performed tissue microarray (TMA) in IPATIMUP (Porto-Portugal) of 157 cases selected from the archives of the Instituto de Patologia de Campinas, a private laboratory. A total of 121 and 116 TMA cases in the molecular profiling and in the CK19 studies was obtained, respectively, including tubular, mucinous, papillary encapsulated and invasive, lobular, micropapillary, medullary, metaplastic, apocrine and mixed carcinomas. It was used immunohistochemical markers such as ER, PR, RA (only in apocrine carcinomas), HER2, Ki67, P-cadherin, CK5, EGFR and p63 to classify them as the molecular classification and as the CK19 expression in the breast before performing the technique of OSNA in sentinel lymph node. Tubular, papillary and mucinous were all luminal A and B, as similar as the geneexpression profiling; medullary and metaplastic were almost all "basal-like" (76.2% and 90%, respectively), while at transcriptome level, all cases belong to subtype "basal-like"; micropapillary was luminal A and B and HER2- overexpression and in the transcriptomic level was virtually all luminal B due to high expression of HER2; apocrine was the most heterogeneous tumours of our study with luminal A and B, HER2-overexpression and "basal-like" cases. This data was different from transcriptomic level that revealed the "molecular apocrine" subtype (RE-/ RA+/ HER2- or +). The relative risk of Ki67 increased between HST, because medullary carcinomas had 110 times more risk of increased Ki-67 than tubular carcinomas. The CK19 was expressed in 98.2% of HST of breast carcinomas, data identical to the Chu et al study, and the positivity increased in cases where the entire paraffin block had been fully studied, because its labeling was focal in many cases evaluated on TMA. This CK19 focal expression can produce false-negative results in the breasts "corebiopsies" / Doutorado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Doutor em Ciências da Saúde

Orientador: Lucia Helena Simões da Costa Paiva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T10:58:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntunesJunior_Armando_D.pdf: 4955938 bytes, checksum: 48f57d77f59634d799326ec35e3baa55 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: Os pólipos endometriais são achados frequentes em mulheres na pós-menopausa e têm sido raramente associados a lesões precursoras e neoplasia endometrial. O desconhecimento de sua patogênese e potencial de malignidade tem levado a polipectomia de rotina o que pode estar expondo muitas mulheres a um risco cirúrgico desnecessário. Objetivo: Avaliar a prevalência de malignidade e a expressão de receptores de estrógeno e progesterona, marcadores tumorais e COX-2 em pólipos endometriais malignos e benignos em mulheres na pós-menopausa. Sujeitos e métodos: Realizou-se um estudo de corte transversal com mulheres submetidas à polipectomia no período de janeiro de 1998 a dezembro de 2008 no Hospital da Mulher "Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti"-CAISM-UNICAMP. Foram incluídas 390 mulheres na pós-menopausa que não eram usuárias de terapia hormonal e tamoxifeno. Foram avaliadas as características clínicas como idade, sangramento pós-menopausa, paridade, presença de hipertensão arterial, diabetes mellitus, obesidade e diagnóstico histológico dos pólipos. Foi avaliada a expressão imuno-histoquímica de RE e RP e dos marcadores Bcl-2, Ki-67 e COX-2 em microarranjo de amostras teciduais (TMA). Foi comparada a expressão desses receptores e marcadores entre pólipos benignos e pré-malignos/malignos. Análise estatística: Para análise estatística os pólipos foram agrupados em benignos e pré-malignos/malignos. As características clínicas entre os grupos benignos/pré-malignos e malignos foram comparadas utilizando-se os testes qui-quadrado, exato de Fisher ou não paramétrico de Mann-Whitney. Para a comparação do escore final dos receptores e marcadores foram utilizados os testes exato de Fisher, qui-quadrado ou teste de Mann- Whitney. Resultados: A prevalência de malignidade nos pólipos endometriais em estudo foi de 7,1% e esteve associada ao sangramento pós-menopausa e à baixa expressão de RE no estroma. O escore final da expressão do RE no estroma dos pólipos foi maior nos benignos em relação aos pré-malignos/malignos, sendo esta diferença significativa. Não houve diferença de expressão do RP, Ki-67 e Bcl-2 entre os pólipos benignos e pré-malignos/malignos. O escore final da expressão da COX- 2 foi significativamente maior nos pólipos pré-malignos/malignos em relação aos benignos no epitélio glandular e no estroma. Conclusões: Os pólipos na pósmenopausa apresentam uma alta expressão dos RE no estroma e no epitélio glandular. Esta expressão foi menor nos pólipos pré-malignos/malignos em relação aos benignos. Observou-se alta expressão da COX- 2, sendo maior nos pólipos prémalignos/ malignos em relação aos benignos / Abstract: Introduction: Endometrial polyps are common findings in postmenopausal women that are rarely associated with precursor lesions and endometrial neoplasm. Lack of understating of the pathogenesis and oncogenic potential of polyps has led to the routine performance of polypectomy which may expose many women to unnecessary surgical risks. Objective: To evaluate the prevalence of malignancy and expression of estrogen/progesterone receptors, tumor markers and COX-2 in malignant and benign endometrial polyps in postmenopausal women. Subjects and Methods: A cross-sectional study was conducted with women undergoing polypectomy from January 1998 to December 2008 in the "Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti" Women's Hospital-CAISM-UNICAMP. Included in the study were 390 postmenopausal women who were non-users of hormone therapy and tamoxifen. Clinical characteristics such as age, postmenopausal bleeding, parity, presence of arterial hypertension, diabetes mellitus, obesity and histologic diagnosis of polyps were assessed. Immunohistochemical expression of ER/PR, Bcl-2, Ki-67 and COX-2 markers in tissue microarray (TMA) samples was evaluated. A comparison of these receptors and markers was made between benign and premalignant/malignant polyps. Statistical analysis: For statistical analysis, polyps were grouped into benign and premalignant/malignant. Clinical characteristics between the benign/premalignant group and the malignant group were compared using the chi-square, Fisher exact or Mann-Whitney nonparametric test. To compare the final score of receptors and biomarkers, the Fisher exact tests, chi-square or Mann-Whitney test were used. Results: The prevalence of malignancy in endometrial polyps in the study was 7.1% and was associated with postmenopausal bleeding and low ER expression in the stroma. The final score of ER expression in the stromal component of the polyp was higher in benign polyps than in premalignant/malignant and this was a significant difference. There was no difference in PR, Ki-67 and Bcl-2 expression between benign and premalignant/malignant polyps. The final score of COX-2 expression was significantly higher in premalignant/malignant polyps in comparison to benign polyps in the glandular epithelium and stroma. Conclusions: Polyps in the postmenopause show a high ER expression in the stroma and glandular epithelium. Expression was lower in premalignant/malignant polyps than in benign polyps. Elevated COX-2 expression was observed that was higher in premalignant/malignant polyps than in benign polyps / Doutorado / Fisiopatologia Ginecológica / Doutor em Ciências da Saúde

Orientador: Konradin Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T00:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valladao_MariaLuizadeCastroRamos_D.pdf: 10270983 bytes, checksum: 4313e15091d949287ba12830e233437d (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é transmitido por meio da transplantação de células neoplásicas. O sulfato de vincristina é o agente quimioterápico mais utilizado no tratamento do TVTC. O objetivo deste estudo foi comparar as alterações morfológicas antes da quimioterapia e após uma semana da aplicação de uma injeção intravenosa de sulfato de vincristina. Neste estudo prospectivo, 100 massas tumorais do TVTC de ocorrência natural foram inclusos. Lâminas citológicas coradas com HE, cortes parafinados corados com tubulina e PCNA, cortes para microscopia eletrônica foram preparados pré e pós tratamento. Realizou-se a contagem da taxa de mitoses, da porcentagem de linfócitos e da marcação do PCNA. Também foi feita a análise de imagem computacional da textura nuclear e a análise sintática estrutural do tecido tumoral. A morfometria demonstrou que, após a terapia, houve a diminuição da área, do perímetro, do diâmetro, da densidade óptica integrada e da tonalidade dos agrupamentos nucleares; enquanto houve aumento do "goodness of fit" da dimensão fractal nuclear. Na análise sintática estrutural, observou-se o aumento da distância entre os núcleos. A contagem de mitoses e o índice PCNA não mostraram diferença entre a primeira e a segunda biópsia. Os agrupamentos citoplasmáticos grandes que foram corados com tubulina diminuíram de tamanho após o tratamento e essa alteração talvez se deva à ruptura induzida pela vincristina nos microtúbulos. Em resumo, a quimioterapia com vincristina promoveu profundas alterações no núcleo, no citoplasma e na reorganização estrutural sintática do tumor / Abstract: The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is transmitted by transplantation of neoplastic cells. Vincristine sulfate is the most widely used chemotherapeutic agent for the treatment of CTVT. The aim of this study was to compare the tumor morphology before chemotherapy and one week after application of a single intravenous injection of vincristine sulphate. In this prospective study 100 animals with spontaneously occuring CTVT were included. HE-stained cytological imprints, paraffin sections stained by tubulin and PCNA and sections for electron microscopy were prepared from the tumor before and after treatment. Mitotic rate, percentage of lymphocytes and PCNA stained tumor cells were counted. Computerized image analysis of the nuclear texture and syntactic structure analysis were applied. After therapy nuclear morphometry showed decreased area, perimeter and diameter values, diminished integrated optical density and cluster shade of nuclear texture, as well as increased values of "goodness of fit" of the fractal dimension. The nuclei were more distant. Mitotic counting and PCNA index did not differ between the first and second biopsy. Cytoplasmic large tubulin clusters diminished their size during treatment. This finding may be due to the vincristine-induced rupture of microtubules. In summary, chemotherapy with vincristine provides profound changes in the nuclear, cytoplasmic and syntactic structural organization of the tumor / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Jacks Jorge Júnior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T03:09:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SenaFilho_Marcondes_M.pdf: 9539347 bytes, checksum: ecd31e3eb890ecb3fcf26cc3dc064e25 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Sabe-se que a transição da mucosa normal para um carcinoma invasivo é um processo complexo, de múltiplas etapas e com etiologia multifatorial, onde as Lesões Potencialmente Malignas (LPMs) são de extrema importância. As LPMs são caracterizadas por uma maior possibilidade de malignização, quando comparadas à mucosa normal. Dentre estas, a Leucoplasia Bucal (LB) é a principal representante. Alguns estudos sugerem que há aumento da atividade de metaloproteinases (MMPs) 2 e 9 em mucosas com displasia epitelial e carcinomas espinocelulares (CECs) bucais, porém isso ainda não está totalmente claro e necessita de mais estudos. Os objetivos deste trabalho foram: 1) Avaliar a expressão imunoistoquímica das metaloproteinases 2 e 9; 2) Mensurar a atividade gelatinolítica total in situ; 3) Avaliar a integridade da lâmina basal através da expressão de colágeno IV; 4) Correlacionar e co-localizar a atividade gelatinolítica total in situ com a imunofluorescência de dupla marcação para colágeno IV e metaloproteinases 2 ou 9; 5) Correlacionar os achados anteriores com os aspectos clínicos e anatomopatológicos;. Foram realizadas 50 coletas (45 lesões e 5 controles) de biópsias oriundas de pacientes com suspeita clínica de lesões potencialmente malignas ou carcinomas bucais. Deste total, 30 (60%) receberam diagnóstico clínico de LB e 15 (30%) de CEC. Histopatologicamente, observou-se que 12 amostras tratavam-se apenas de hiperqueratose e acantose, 08 de displasia epitelial leve/moderada, 08 de displasia epitelial intensa, 10 CEC bem diferenciados e 04 carcinomas pouco diferenciados. Nas analises imunoistoquímicas, observou-se que a MMP-2 é fortemente expressa nos epitélios livres de displasia, diminuindo de acordo com a progressão da displasia epitelial ou indiferenciação da lesão. Ambas as MMPs foram expressas no estroma das lesões com displasia epitelial intensa e CEC's, porém a MMP-9 foi mais acentuada, principalmente nos CEC's indiferenciados. A atividade gelatinolítica in situ foi maior no epitélio dos controles e das hiperqueratoses e acantoses, se co-localizando apenas com a MMP-2. Todos os CEC's e 63% das displasias epiteliais intensas apresentaram descontinuidade da lâmina basal, onde houve co-localização das MMPs com atividade gelatinolítica. Nestas mesmas lesões, houve regiões de co-localização das MMP's, atividade gelatinolítica em lâminas basais ainda íntegras. A baixa expressão gelatinolítica das lesões displásicas e CEC's, correlacionado com as rupturas de lâmina basal e aumento da expressão das MMP's no estroma, além da co-localização das mesmas nas regiões de descontinuidade da lâmina basal, sugerem que as MMP's expressas no estroma das lesões provavelmente estão mais relacionadas com a progressão do tumor do que as expressas pelo parênquima / Abstract: The transition from normal oral mucosa to invasive carcinoma has a complex and multifactorial etiology. Oral leukoplakia (OL) is regarded as the most prevalent potentially malignant oral lesion, with a higher tendency for malignant transformation if compared to normal oral mucosa. Although an increased activity of matrix metalloproteinases (MMPs) 2 and 9 in oral mucosa presenting varying degrees of epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinomas (OSCCs) has been suggested, but further investigation is necessary for confirming such association. Therefore, the aim of this research is to evaluate the immunohistochemical expression and the total in situ gelatinolytic activity of MMP-2 and MMP-9 in OL and OSCC, as well as to evaluate the integrity of the basal lamina through the expression of collagen IV, correlating the results obtained with clinical and pathological features. Immunohistochemical, immunofluorescent and in situ zymography reactions were carried out in 5 normal oral epithelium, 12 cases presenting hyperkeratosis and acanthosis with no epithelial dysplasia, 8 mild/moderate epithelial dysplasia, 8 severe epithelial dysplasia, 10 well differentiated and 4 poorly differentiated OSCC's. It was found that MMP-2 expression was higher in oral epithelium devoid of dysplasia, if compared to dysplastic and neoplastic oral epitheliums. In addition, despite both MMPs were expressed in the stroma of severe epithelial dysplasia and OSCC's samples, MMP-9 expression revealed to be more pronounced, especially in poorly differentiated OSCCs. in situ gelatinolytic activity was higher in normal epithelium and those presenting only hyperkeratosis and acanthosis, co-localizing only with MMP-2. All cases of OSCC and 63% of lesions with severe epithelial dysplasia showed discontinuity of the basal lamina, revealing co-localization of MMPs with in situ gelatinolytic activity in regions with continuous and discontinuous basal lamina. Taken together, the results obtained revealed that a low gelatinolytic activity in the parenchyma of dysplastic lesions and OSCC correlated with disruption of the basal lamina and with an increased expression of MMPs in the stroma, suggesting that MMP's expressed in the stroma of the lesions would be more related with tumor progression than MMP's expressed in the lesional parenchyma / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia

Orientadores: Ilka de Fátima Santna Ferreira Boin, Cecilia Amélia Fazzio Escanhoela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T02:58:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ataide_ElaineCristinade_D.pdf: 2429864 bytes, checksum: ec486a6adc404d0751bb752ea469797b (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: Apesar de sobrevida ao redor de 70% em cinco anos a recidiva do CHC vem suscitando cuidados com índices que variam na literatura entre 6% a 26%. Muitos são os fatores atrelados ao maior risco de recidiva descritos na literatura, sem definição de qual o melhor método que poderia predizer esse evento de alta letalidade. Objetivo: Os objetivos desse estudo foram: avaliar a sobrevida e recidiva tumoral em pacientes submetidos a transplante hepático por CHC e investigar a imunoexpressão dos marcadores imunohistoquimicos: HSP70, Glipican3, Glutamina sintetase, beta-catenina, CK7, Ck19, HepPar1 e PCNA, estudando sua associação com características tumorais e prognóstico de pacientes submetidos a transplante hepático por CHC. Método: Foram estudados 90 pacientes portadores de CHC submetidos a transplante hepático de 1996 a 2010. Foram estudados fatores correlacionados ao aparecimento da recidiva neoplásica como: tamanho da maior lesão, número de lesões, grau histológico, presença de invasão vascular, nível de alfa-feto proteína (AFP) superior a 200 ng/ml e regime de imunossupressão. Foi estudada também a correlação da expressão dos marcadores imunohistoquimicos estudados com cada uma dessas mesmas variáveis. A técnica de estudo imunohistoquimico foi o arranjo em matriz tecidual (TMA). A análise estatística utilizou testes de regressão uni e multivariadas, teste de Cox, teste de Qui-quadrado ou Fisher, teste de Mann-Whitney e para estudo de sobrevida foi utilizado o método de Kaplan Meyer. Resultados: Foi observada recidiva em 7 pacientes (8%).O tempo de cirurgia, quantidade de concentrados de hemácias administrados, valor do MELD calculado no momento da cirurgia e a presença de recidiva foram associados à menor sobrevida. Pacientes com recidiva tumoral apresentaram tendência à presença de invasão vascular, apresentaram maior número de nódulos e maiores nódulos. Em relação aos marcadores imunohistoquimicos pacientes com glutamina sintetase positiva apresentaram tendência à menor sobrevida; e a presença de HepaPar1 negativo apresentou correlação com o aparecimento de recidiva neoplásica. Pacientes com HSP70 positivo apresentaram maior prevalência do grau histológico III. Pacientes com Glipican3 positivo apresentaram nódulos maiores e presença de mais casos com AFP superior a 200 ng/ml. Pacientes com PCNA positivo apresentaram nódulos maiores. Pacientes com HepPar1 negativo apresentaram nódulos maiores e tendência a apresentar mais nódulos. Pacientes com beta-catenina positiva apresentaram maiores nódulos e presença de maior número de pacientes com grau histológico III. Pacientes com CK19 positivo demonstraram tendência a apresentar nódulos maiores (p=0.05). A associação entre beta-catenina e Glipican3 positivos demonstrou correlação com a presença de nódulos maiores com maior evidência estatística do que quando avaliados separadamente (p=0,003). Conclusão: Não foi possível a associação de nenhum desses marcadores com a sobrevida exceto pela presença de glutamina sintetase positiva que apresentou tendência à associação com piora da sobrevida. A imunoexpressão desses marcadores não se correlacionou com o tempo de aparecimento de recorrência tumoral, com exceção da do HepPar1, o qual, quando negativo, correlacionou-se com maior frequência de aparecimento de recidiva. Entretanto, a maioria dos marcadores estudados apresentaram correlação com pelo menos uma das variáveis em estudo, confirmando nossa hipótese de que esses marcadores podem, sim, auxiliar na avaliação do prognóstico de pacientes submetidos a transplante hepático por CHC / Abstract: Introduction: Although overall survival rates have been around 70% after five years, recurrence of HCC has indices in literature ranging from 6 to 26%. There is no consensus therapy for treatment of HCC recurrence after liver transplantation that could lead to a significant increase in survival. Many factors are linked to higher risk of recurrence in the literature, without defining the best method that could predict this highly lethal event. Objective: The aim of this study was first to evaluate the survival and tumor recurrence in patients undergoing liver transplantation for HCC and second to evaluate immunoexpression of immunohistochemical markers: HSP70, Glipican3, Glutamin synthetase, Beta-Catenin, CK7, Ck19, HepPar1 and PCNA, which are capable of assessing the malignant cellular potential, studying its association with tumor characteristics and prognosis of patients undergoing liver transplantation for HCC. Methods: We studied 90 patients who underwent liver transplantation from 1996 to 2010. We evaluated factors related to survival and tumor recurrence. Factors were also studied related to the onset of neoplastic recurrence as size of the largest lesion, number of lesions, histological grade, presence of vascular invasion, AFP level greater than 200 ng / ml and the immunosuppressive regimen. The correlation of expression of immunohistochemical markers studied was correlated with each of these variables. The immunohistochemistry technique was the tissue matrix arrangement (TMA) and the statistical analysis used was regression testing univariate and multivariate, Cox test, chi-square or Fisher test and Mann-Whitney test, while for study of survival the Kaplan Meyer curve was used. Results: The duration of surgery and recurrence was associated with shorter survival. Patients with tumor recurrence tended to have the presence of vascular invasion, showing a higher number of nodules and larger nodules. Regarding the presence of immunohistochemical markers glutamin synthetase showed a positive trend toward lower survival, and presence of HepPar1 negative correlated with the appearance of neoplastic recurrence. HSP70 positive patients had higher prevalence of histologic grade III. Patients with positive Glipican3 showed larger lesions and more patients had AFP greater than 200 ng / ml. PCNA positive patients had bigger lesions. HepPar1 negative patients had larger lesions and tended to have more nodules. Patients with positive Beta-Catenin showed larger nodules and more histologic grade III. Patients with positive CK19 showed a tendency to have larger nodules. The association between Beta-catenin and Glipican3 showed positive association with larger nodules. Conclusion: There was no statistical correlation of these markers and the specific disease survival except for the presence of glutamine synthetase which showed only a positive trend of association with survival. The immunoreactivity of these markers did not correlate with the time of appearance of a recurrent tumor, with the exception of the Hep-Par1, which, if negative, was correlated with higher frequency of occurrence of relapse. However, most of the markers studied showed correlation with at least one of the variables studied, whether of characteristics of the population (AFP level, the presence of recurrence and survival time) or characteristics of the lesion (tumor number, the greater lesion size, presence of vascular invasion and degree of differentiation) confirming our hypothesis that these markers can indeed assist in assessing the prognosis of patients undergoing liver transplantation for HCC / Doutorado / Fisiopatologia Cirúrgica / Doutor em Ciências da Cirurgia

Orientadores: Ana Maria Marcondes, Newton Kara Jose / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Poterio_MarisaBraga_D.pdf: 773656 bytes, checksum: 72542a4d45c8aefe15115e27725a70ba (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da mitomicina C (MMC) a 0,02%, aplicada em dose única por 3 minutos, na proliferação e diferenciação das células do epitélio da córnea de coelhas. Durante o procedimento cirúrgico aplicou-se MMC ou soro fisiológico (SF) sendo a droga a ser utilizada em cada animal (nos 2 olhos) definida por sorteio. A solução sorteada foi aplicada topicamente na episclera da região limbar temporal, com o tecido epitelial da córnea íntegro (em um olho) e após a desepitelização parcial (no olho contra-lateral). Os animais foram distribuídos em lotes A (20 olhos), B (16 olhos) e C (14 olhos) e sacrificados respectivamente no 4º, 15º e 45º dia de experimento. Para estimular a proliferação celular, os animais do lote C foram submetidos à desepitelização da córnea central 3 dias antes do dia do sacrifício. Para o estudo da diferenciação do epitélio da córnea empregou-se anticorpos monoclonais (AE-1, AE-3 e AE-5). Para a análise da proliferação celular utilizou-se solução de 5-bromo-2-deoxiuridina (BrdU), aplicada via endovenosa em todos os animais, 24 horas antes do sacrifício. Nas lâminas preparadas para o estudo com BrdU, sob microscopia óptica foram definidas as porções temporal, nasal e central da córnea. Em cada porção contou-se, o número de células com expressão positiva deste marcador, em 3 campos aleatórios, definidos com objetiva milimetrada. A média aritmética dos 3 campos foi utilizada para análise estatística. Os resultados das médias e desvios-padrão do número de células marcadas pela BrdU nos lotes A, B e C utilizando-se a técnica de desepitelização parcial prévia da córnea e solução fisiológica, nas regiões temporal, central e nasal foram respectivamente de 15,07 ± 12,18; 5,53 ± 5,11; 1,80 ± 2,37 no lote A, 11,17 ± 11,15; 8,50 ± 7,18; 9,67 ± 9,09 no lote B e 12,34 ± 9,02; 15,67 ± 5,84; 3,78 ± 2,80 no lote C. Com a mesma técnica cirúrgica usando-se a MMC, foram respectivamente: 6,60 ± 5,33; 3,80 ± 6,36 e 1,93 ± 2,14 no lote A, 3,09 ± 2,40; 4,34 ± 2,97 e 2,59 ± 0,63 no lote B e 5,83 ± 8,55; 6,17 ± 1,55; 4,42 ± 2,63 no lote C. Para a técnica de desepitelização parcial da córnea após a aplicação de solução fisiológica as médias foram respectivamente: 13,80 ± 8,51; 7,47 ± 3,79; 3,07 ± 1,55 no lote A, 5,67 ± 4,49; 4,75 ± 2,13; 3,84 ± 3,45 no lote B e 6,78 ± 3,35; 11,67 ± 2,97; 3,78 ± 1,39 no lote C. Quando foi aplicado MMC e utilizada a técnica de desepitelização parcial da córnea após a aplicação de solução, 8,73 ± 7,35; 7,60 ± 6,88; 3,27 ± 1,85 no lote A, 1,75 ± 0,78; 3,92 ± 3,06; 2,67 ± 1,98 no lote B e 2,83 ± 3,54; 2,50 ± 2,08; 8,75 ± 9,62 no lote C. As diferenças entre MMC e SF foram significativas nos animais dos lotes A, B e C, nas áreas central e temporal das córneas estudadas quando a técnica de desepitelização parcial prévia foi aplicada. Não houve diferença entre as drogas quando se utilizou a técnica de desepitelização parcial da córnea após a aplicação de solução. Nas lâminas coradas com o AE1/AE3 e AE5 não houve interferência na diferenciação celular independentemente da droga ou da técnica. Esses resultados sugerem que a MMC a 0,02% em aplicação única episcleral por 3 minutos atua restritamente no local onde as células foram expostas e tem um efeito prolongado sobre a proliferação celular, na técnica de desepitelização parcial prévia / Abstract: This study was performed to evaluate the influence of 0,02% mitomycin C (MMC), applied on a single dose for 3 minutes, in proliferation and differentiation of the cornea rabbits epithelium cells. During the surgery procedure, MMC or 0,9% physiologic saline solution (SF) was applied and the solution for each animal (both eyes) was performed by raffle. A topic solution was applied at episclera of the temporal limbic area, with intact epithelial tissue (one eye) and after partial corneal desepithelization (other eye). The animals were arranged in a group A (20 eyes), group B (16 eyes) and group C (14 eyes). They were sacrificed respectively at 4th , 15th and 45th days of the post-operative. To stimulate cell proliferation, the animals of group C were submitted to central corneal desepithelization 3 days before the sacrifice day. Cellular differentiation markers (AE1, AE3 and AE5) were used for differentiation study of the corneal epithelium. A cellular proliferation marker 5-Bromo-2-Deoxyuridine (BrdU) was applied by intravenous injection in all of the animals, 24hs before the sacrifice. In the slides labeled with BrdU technique, the nasal, temporal and central areas were determined under optic microscopy. The number of labeled cells was counted in 3 different fields of each area using millimeter lenses. The arithmetic means of the 3 different fields was used for statistical analysis. The mean and standard deviation of the number of labeled cells with BrdU marker in A, B and C groups using previous partial corneal desepithelization technique and SF at temporal, central and nasal area were respectively 15.07 ± 12.18; 5.53 ± 5.11; 1.80 ± 2.37 in group A, 11.17 ± 11.15; 8.50 ± 7.18; 9.67 ± 9.09 in group B e 12.34 ± 9.02; 15.67 ± 5.84; 3.78 ± 2.80 in group C. Using the same technique and MMC the results were: 6.60 ± 5.33; 3.80 ± 6.36 e 1.93 ± 2.14 in group A, 3.09 ± 2.40; 4.34 ± 2.97 e 2.59 ± 0.63 in group B e 5.83 ± 8.55; 6.17 ± 1.55; 4.42 ± 2.63 in group C. For the corneal desepithelization surgical technique after SF application, the results were: 13.80 ± 8.51; 7.47 ± 3.79; 3.07 ± 1.55 in group A, 5.67 ± 4.49; 4.75 ± 2.13; 3.84 ± 3.45 in group B e 6.78 ± 3.35; 11.67 ± 2.97; 3.78 ± 1.39 in group C. When MMC was applied in the same surgical technique, the results were: 8.73 ± 7.35; 7.60 ± 6.88; 3.27 ± 1.85 in group A, 1.75 ± 0.78; 3.92 ± 3.06; 2.67 ± 1.98 in group B e 2.83 ± 3.54; 2.50 ± 2.08; 8.75 ± 9.62 in group C. The difference between MMC and SF were statistically significant at central and temporal areas when previous partial corneal desepithelization was performed in all groups. There was no difference between drugs when corneal desepithelization technique was used after solution application. There was no difference between differentiation cells in the slides labeled with AE1, AE3 and AE5 when drugs or surgical technique were analysed. These results suggests that 0,02% MMC applied for 3 minutes at the episclera, acts only at the exposed cells and have late effect under the cell proliferation, when the previous partial desepithelization surgery was applied. / Doutorado / Oftalmologia / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Pedro Duarte Novaes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:08:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pasetto_Silvana_D.pdf: 2934024 bytes, checksum: e55fbc0178e149fd28ba97d8ca9267d2 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O objetivo deste estudo, foi analisar, por meio da técnica de imunohistoquímica, a distribuição do EGF, EGFr, TGF-b1, IL-1a e CSF-1, em 3 diferentes regiões dos incisivos inferiores de ratos, em condições funcionais normais e alteradas. Cinquenta animais, tiveram seus incisivos inferiores esquerdos, seccionados na altura da papila interdental, permanecendo fora de oclusão, sendo considerados hipofuncionais (Ho), seus contralaterais, em sobrecarga de função foram chamados hiperfuncionais (Hr). Vinte e cinco destes animais, sofreram a intervenção apenas uma única vez, sendo sacrificados 8 horas após, os outros vinte e cinco animais, sofreram a intervenção a cada 2 dias, sendo sacrificados no 8o dia de desoclusão. Dez animais pertencentes ao grupo controle (c), tiveram seus incisivos mantidos em condições funcionais normais de erupção. As hemimandíbulas de todos os animais foram fixadas em Karnovsky (com 0,1% de glutaraldeído), descalcificadas em EDTA 4,13%, subdivididas transversalmente em 5 regiões e incluídas em paraplast. Cortes transversais, com 4 mm de espessura de cada peça foram coletados em lâminas silanizadas e submetidos à técnica de imunohistoquímica. O folículo dental e o ligamento periodontal, mostraram variações nas intensidades de marcação, com todos os anticorpos, entre as diferentes regiões e entre os grupos analisados. Aparentemente, no entanto, os tecidos periodontais dos incisivos, após 8 dias de hipofunção, mostraram imunoreatividade mais forte, particularmente com o CSF-1, quando comparados com os incisivos, em condições funcionais normal e alterada. Os resultados parecem sugerir, que a ¿cascata¿ formada por essas moléculas, pode estar relacionada com a ampliação da via eruptiva do incisivo, que cresce por um período prolongado da vida do animal / Abstract: The aim of this study, was to analized, using immunohistochemical technique, the distribution of EGF, EGFr, TGF-b1, IL-1a e CSF-1, in periodontal tissues of three regions of rat lower incisors, in normal and altered functional conditions. Fifty animals, had their left lower incisors, cut at the level of the interdental papilla. Becoming out occlusion, they are considered hipofunctional teeth. The contralateral incisors, attrited with both upper incisors are considered hiperfunctional teeth. Twenty-five of these animals were killed 8 hours after. In the order twenty-five animals, the shortening was repeated every second day, and killed 8 days after. Ten animals were kept in normal functional conditions. The hemimandibules of all animals were fixed in Karnovsky (with 0,1% of glutaraldehyde), demineralized with EDTA, subdivided in five transversal regions and embedded in paraplast. Cross sections, 4 mm-thick were collected in glass slides coated with silane. The antibodies were developed with DAB plus H2O2. The dental follicle and the periodontal ligament showed variation in the staining intensities, for all antibodies used, among the different regions and groups analyzed. Apparently, however, the periodontal tissues of the incisors, after eight days of hipofunction, showed stronger immunoreactivity, particularly with CSF-1, as compared with incisors under normal and hiperfunctional conditions. The results suggest that this molecular ¿cascade¿, may be related with the enlargement of the rodent incisor eruptive pathway, since these teeth grow for a long period of animal¿s life / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientadores: Olga Maria de Toledo Correa, Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T13:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_EduardoAnselmo_M.pdf: 5637432 bytes, checksum: 7856ba76c45912e029c4e039ce280e21 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O tecido interpúbico no camundongo é conhecido pelas rápidas adaptações sofridas devido as novas demandas impostas durante a prenhez, parto e pós-parto. O desenvolvimento de um ligamento interpúbico é explicado em parte pelas modificações observadas na hidratação deste tecido, assim como, pela presença de Ácido Hialurônico (AH). O presente estudo focou-se na presença do AH na sínfise púbica, uma vez que pouco se sabe a respeito do seu papel durante as modificações sofridas neste período. A localização e quantificação do AH, por meio de uma sonda específica para AH, foi feita em amostras de sínfises púbicas de camundongos virgens, com 12 a 18 dias de prenhez, no dia do parto (D19) e durante o 3° e 5° dia pós-parto. A análise quantitativa fluorométrica indicou um aumento gradual no AH do tecido interpúbico durante a prenhez, seguido de uma diminuição já presente no dia do parto. A análise histoquímica demonstrou a presença de AH na matriz extracelular deste tecido assim como dentro das células. Baseado nestes resultados, pudemos demonstrar a provável participação do AH em três processos. Quando encontrado na matriz extracelular, o AH contribui para a formação de uma estrutura flexível, de consistência rígida, que vai permitir a passagem do feto pelo canal de parto. Ao passo que, quando encontrado intracelularmente, o AH contribui em dois processos distintos: até o 18° dia de prenhez, o AH participa nos processos de proliferação celular, através de possíveis interações com moléculas e estruturas importantes neste processo. O AH talvez também contribua para a proliferação através da formação de uma zona hidratada ao redor das células facilitando o destacamento das mesmas de seu substrato. Finalmente, após o parto e até o 5° dia pós-parto o AH contribui para a manutenção do fenótipo miofibroblástico destas células ajudando no processo de involução sofrido pelo tecido interpúbico no pós-parto / Abstract: The interpubic tissue in mice is known to rapidly adapt itself to the ali new demands imposed during pregnancy, partum and post-partum. The development of an interpubic ligament may be explained, in part, due to the modifications observed in the hydration of this tissue, as well as, the presence of hyaluronan (HA). The present study focuses on the presence of HA in the pubic symphysis, since still very little is known of its role during the modifications suffered through this period. The localization and quantification of HA using a HA-probe were studied in samples of mice pubic symphyses from virgin, 12th to 18th days of pregnancy, the day of delivery (D19) and during 3 and 5 days post-partum. The quantitative fluorimetric analysis indicated a gradual increase of HA in the interpubic tissue throughout pregnancy, being followed by a decrease already present on the day of the delivery. In addition, the histochemical analysis demonstrated the presence of HA in the extracellular matrix of the tissue as well as within its cells. Based on these results, it can be shown that HA may participate in three processes during pregnancy, partum and post-partum. While found in the extracellular matrix, HA contributes in the formation of a flexible structure, yet of rigid consistency, that allows the passage of the embryo for the birth canal. Whereas, while found intracellular, HA contributes in two distinct processes: until the 18th day of pregnancy, HA participates in the process of cellular proliferation through its possible interaction with mitotic cells. HA may also contribute to cellular proliferation through the formation of a hydrated zone from parturition as well as the 5th day post-partum HA contributes to the maintenance of the myofibroblastic phenotype of these cells, aiding in the process of involution suffered by the interpubic tissue following parturition / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_nubia_seyffert.pdf: 4325642 bytes, checksum: 2836f7bcdef6a962ef1e00c38936c413 (MD5) Previous issue date: 2007-02-05 / Leptospiral immunoglobulin-like (Lig)proteins are exposed on membrane surface of pathogenic Leptospira and may play a role in host cell attachment and invasion during infection.A pair of Ligs,named LigA and LigB,with identical and non-identical polypeptide regions has recently been identified.The two proteins elicit a strong humoral immune response during acute host infection and have been suggested as targets for development of vaccines and diagnostic tests for leptospirosis.This study reports the production and characterization of monoclonal antibodies (Mabs)against recombinant non-identical fragments of LigA (rLigANI)and LigB (rLigBNI).The recombinant fragments were used for mice immunization and screening hybridomas by indirect ELISA.Four Mabs obtained against rLigANI and six Mabs obtained against rLigBNI were isotyped and evaluated regarding their potential for use in studies of immunoprotection and diagnostic test development.The Mabs were of the IgM (1),Ig 2b (3)and Ig 1 (6)isotypes and reacted with the native proteins from a pathogenic strain of Leptospira i terroga s serovar Copenhageni L1 130 in an indirect ELISA and immunofluorescence.Mabs affinity constants felt between 4x10 7 M -1 and 2x10 8 M -1 ,and epitope mapping by additive ELISA has shown that each Mab either react with the same epitope in the recombinant molecule or cause steric hindrance. Tissue sections from kidneys of hamsters experimentally infected with leptospires and probed with the Mabs reacted positively by immunohistochemistry.These findings suggest that the Mabs obtained can be useful for the studies of immunoprotection and development of diagnostic tests. / As proteínas leptospiral immu oglobuli -like (Lig)estão expostas na superfície da membrana das leptospiras patogênicas e podem estar envolvidas no ataque e penetração às células do hospedeiro durante a infecção.Recentemente,foi identificado um par de Ligs,nomeadas LigA e LigB,com regiões polipeptídicas idênticas e não-idênticas.As duas proteínas estimulam uma resposta humoral forte durante a infecção aguda no hospedeiro e têm sido sugeridas como alvos para o desenvolvimento de vacinas e testes diagnósticos para leptospirose.Este estudo relata a produção e caracterização de anticorpos monoclonais (Mabs)contra fragmentos recombinantes não idênticos de LigA (rLigANI)e LigB (rLigBNI).Os fragmentos recombinantes foram utilizados para a imunização dos camundongos e triagem dos hibridomas por ELISA indireto.Quatro Mabs obtidos contra rLigANI e 6 Mabs contra rLigBNI foram isotipados e avaliados quanto ao seu potencial para uso em estudos de imunoproteção e desenvolvimento de testes diagnósticos.Os Mabs foram dos isotipos IgM (1),Ig 2b (3)and Ig 1 (6)e reagiram com as proteínas nativas de Leptospira i terroga s sorovar Copenhageni cepa L1 130 em ELISA indireto e imunofluorescência.A constante de afinidade dos Mabs manteve-se entre 4x10 7 M -1 and 2x10 8 M -1 ,e o mapeamento de epitopos por ELISA de aditividade demonstrou que cada Mab reage com o mesmo epitopo na molécula recombinante ou causa um impedimento espacial (steric hi dra ce ).Finalmente,os Mabs reagiram positivamente em testes imuno-histoquímicos de seções do tecido renal de hamsters experimentalmente infectados com leptospiras.Esses dados sugerem que os Mabs obtidos podem ser usados para estudos de imunoproteção e desenvolvimento de testes de diagnóstico de leptospirose.

Rotavírus (RV) é um importante patógeno viral que causa diarreia em leitões e indivíduos jovens de várias outras espécies animais. RV dos grupos A, B, C e E foram descritos como causa de diarreia em suínos. Este estudo reúne achados histopatológicos, imunohistoquímicos e de reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa (RT-PCR) presentes em quatro surtos de diarreia causados por RV de um e de múltiplos grupos na região sul do Brasil. Vacinação para RV não era aplicada em nenhuma das granjas estudadas. Necropsia, exames histológicos e imuni-histoquímicos foram realizados em 34 suínos de maternidade que apresentavam diarreia severa, além disso, realizou-se cultivo bacteriano e RT-PCR para RV dos grupos A, B e C, vírus da gastroenterite transmissível (TGEV), vírus da diarreia epidêmica dos suínos (PEDV), sapovírus (SaV), norovírus (NoV) e kobuvírus (Aichi vírus C) em 30 dessas amostras. Desidratação e conteúdo pastoso a líquido no cólon foram observados em todos os suínos. Exame histológico revelou atrofia de vilosidades em 29 casos, vacuolização de enterócitos em 27 casos e debris celulares na lâmina própria em 20 casos. Houve marcação imunohistoquímica positiva em 21 casos. RT-PCR foi positiva para RV em 20 casos e RV do grupo C foi o mais frequentemente detectado, presente em 17 amostras. Cultivo e isolamento de Escherichia coli ocorreu em todos os casos e quatro destes foram de E. coli α-hemolítica. Em 15 amostras houve isolamento de Clostridium sp. Sapovirus foi detectado em oito amostras, duas amostras foram positivas para norovírus e detectou-se kobuvírus em 11 animais. Os achados histológicos foram consistentes com infecção por RV e a imuno-histoquímica revelou dois padrões de marcação para o agente no intestino delgado. Os resultados de RT-PCR mostraram que o RV do grupo C foi o principal agente detectado neste estudo. O isolamento de E. coli e a detecção de SaV os destacou como agentes associados à infecção por RV. A detecção de kobuvírus o enfatiza como um novo candidato em associação com RV. / Rotavirus is an important viral pathogen causing diarrhea in piglets and other animal species worldwide. Groups A, B, C and E have been described causing diarrhea in swine. This study reunites histopathological, immunohistochemical and reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) findings present in four outbreaks of diarrhea caused by single and multiple groups of rotavirus in the south of Brazil. None of the herds studied applied vaccination against rotavirus. Necropsy, histological examination and immunohistochemistry were performed in 34 nursing piglets that presented severe diarrhea, bacterial culture and reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for rotavirus from groups A, B and C, transmissible gastroenteritis virus (TGEV), porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), sapovirus (SaV), norovirus (NoV) and kobuvirus (Aichi virus C) were carried out in 30 of the animals necropsied. Additionally, RT-PCR was performed in fecal pools from two outbreaks. Dehydration and fluid to pasty contents were observed in the colon of all 34 swine examined. Histological examination revealed villus atrophy in 29 cases, vacuolation of enterocytes in 27 cases and necrotic debris in the lamina propria of 20 cases. IHC was positive in 21 samples. RT-PCR was positive for rotavirus in 20 samples and group C rotavirus was the most frequently detected, present in 17 samples. Escherichia coli was isolated from all cases, and in four cases, it was α-hemolytic. Clostridium sp. was isolated from 15 samples. Sapovirus was detected in eight samples, samples from two animals were positive for norovirus and kobuvirus was detected from 11 samples. Histological findings were consistent with rotavirus infection and immunohistochemistry revealed two patterns of staining for rotavirus in the small intestine. RT-PCR results have shown group C rotavirus as the main agent detected in this study. The isolation of Escherichia coli and the detection of sapovirus highlighted them as possible agents associated to rotavirus infection. Kobuvirus detection has emphasized it as a new candidate in the association with rotavirus.