Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T06:40:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nascimento_MariaAmaliaCavinato_M.pdf: 2973013 bytes, checksum: eef160eabbd2d1426a9f2e0795702488 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: É reconhecido que a sínfise púbica de algumas espécies de mamíferos, incluindo camundongos, passa por transformações estruturais durante a prenhez e no período pós-parto. Estas transformações incluem o surgimento de um ligamento interpúbico e o amolecimento deste tecido nos dois últimos dias antes do parto. Este ligamento permite a separação dos ossos púbicos, garantindo a passagem segura do feto pelo canal de parto. Após o parto ocorre a involução deste ligamento. Ambos os períodos de remodelação tecidual envolvem grandes modificações da matriz extracelular e de seus componentes, bem como um balanço entre proliferação e morte celular programada. A galectina-3, uma lectina animal com especificidade de ligação por ß-galactosídeos, é uma proteína amplamente distribuída entre diferentes tipos de células e tecidos, podendo ser encontrada dentro das células tanto no núcleo quanto no citoplasma, ou ainda na superfície celular ou no espaço extracelular. Através de interações específicas com diversos ligantes intra e extracelulares, a galectina-3 participa de numerosos processos fisiológicos e patológicos, como por exemplo, desenvolvimento, reações imunes, controle do ciclo celular, apoptose e metástase. Este estudo teve como objetivo localizar a expressão de galectina-3 nas populações celulares que compõem esta articulação durante o período de prenhez, a fim de investigar seu possível envolvimento nos processos de remodelação da sínfise. Foi observado que a galectina-3 está presente em todas as populações celulares que compõem a sínfise púbica e o ligamento interpúbico de todos os grupos estudados. Além disso, a galectina-3 é co-localizada com a a-actina de músculo liso em alguns tipos celulares. A quantificação da detecção de galectina-3 nos permitiu observar que ela é expressa em diferentes concentrações durante o período estudado. Esses resultados nos permitiram concluir que a galectina-3 parece estar envolvida na remodelação da sínfise púbica, através de sua participação na ativação de células semelhantes a fibroblastos, no ciclo celular, na diferenciação e nos processos de morte celular programada. / Abstract: It is recognized that the pubic symphysis of some mammal species, including mice, undergoes structural transformations during pregnancy and post-partum. These transformations include the emerging of an interpubic ligament and softening of this tissue in the two last days of pregnancy. This ligament allows the pelvic bones separation, warranting fetus self passage through the birth channel. After delivery this ligament involutes. Both periods of tissue remodeling involve changes in extracellular matrix and its components, as so a balance between cell proliferation and death. Galectin-3, an animal lectin with specificity for ß-galactosídes, is widely spread among different types of cells and tissues, thus being found inside the cells in the cytoplasm and in the nucleus, on cell surface or in the extracellular space. Through specific interactions with a variety of intra and extracellular ligands galectin-3 participates of numerous physiological and pathological processes, like for example, development, immune reactions, cell cycle control, apoptosis and metastasis. This research had the objective to localize galectin-3's expression in mouse pubic symphysis cells during pregnancy, and to investigate its involvement in the pubic remodeling process. It was observed that galectin-3 is present in all pubic cells populations of all of the studied groups. Besides that, galectin-3 is colocalized with a-smooth muscle actin in some cell types. Quantifying of galectin-3 detection revealed that this protein is expressed in different concentrations during the studied period. These results allowed us to conclude that galectin-3 seems to be involved in mouse pubic symphysis remodeling, probably working in the activation of fibroblast like cells, on cell cycle, on differentiation and in the processes of programmed cell death. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Paulo Pinto Joazeiro, Cláudio Chrysostomo Werneck / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T04:27:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Consonni_SilvioRoberto_M.pdf: 3398352 bytes, checksum: 7a1238aba907982b903dec23fbc0470d (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A organização das fibras elásticas envolve a síntese e a deposição de moléculas em uma sequência altamente regulada para assegurar as características elásticas nos estágios iniciais do desenvolvimento. Durante e prenhez, os tecidos pélvicos ricos em fibras elásticas se alteram para permitir um parto seguro e essa remodelação é essencial para o parto normal. A sínfise púbica de camundongos também remodela em um processo controlado por hormônios. Este fenômeno compreende a "transformação" da fibrocartilagem em um ligamento interpúbico (LIp) seguido por seu relaxamento antes do parto. Após o primeiro parto, o processo de retorno ocorre e assegura a homeostase dos tecidos pélvicos. Ainda, alterações no suporte dos órgãos pélvicos foram descritas em animais geneticamente modificados para proteínas envolvidas na elastogênese como a lysyl oxidase-like 1 (LOXL1), fibulina-3 e 5. Como ligamentos são as principais estruturas de suporte dos órgãos pélvicos, o objetivo deste estudo foi avaliar a elastogênse no desenvolvimento do LIp durante a prenhez de camundongos. Assim, camundongos selvagens C57Bl/06 e deficientes em fibrilina-1 virgens, prênhes e no pós-parto foram estudados usando microscopia de luz convencional, microscopia confocal a laser, microscopia eletrônica de transmissão, western blotting e real-time PCR. Ambos os animais selvagens e deficientes em fibrilina-1 apresentaram classicamente a separação dos ossos púbicos, a formação e relaxamento do LIp e a involução deste no pós-parto. Esses processos sugeriram um padrão no qual as células controlam a remodelação da matriz extracelular sob sinalização hormonal e molecular. A ultra-estrutura dos tecidos fibrocartilaginosos apresentou delgadas microfibrilas aleatoriamente distribuídas entre os fibrocondrócitos. Na formação do LIp, foram observadas fibras elásticas com conglomerados de material amorfo distribuídos entre as microfibrilas. O LIp mostrou fibras elásticas e todos os componentes teciduais alinhados na direção da abertura da articulação interpúbica antes do parto. O estudo imuno-histoquímico e de expressão gênica relativa quantitativa indicou que durante o desenvolvimento do LIp em camundongos selvagens, elastina/tropoelastina, fibrilina-1 e 2, LOXL1, fibulina-5 e TGF-? foram regulados espacial e temporalmente, e estas moléculas poderiam contribuir para a síntese de novas fibras elásticas que asseguram a elasticidade necessária para a cintura pélvica durante o preparo para o parto e também no fechamento da articulação no pós-parto. Entretanto, se comparados com o animal selvagem, a análise indicou alteração na expressão gênica relativa da tropoelastina, fibrilina-1, LOXL1, fibulina-5 e TGF-?, diferentemente da morfologia muito similar observada em camundongos selvagens. Neste estudo, o camundongo deficiente em fibrilina-1 não apresentou prolapso de órgãos pélvicos após o primeiro parto como o deficiente em LOXL1 (Liu et al., 2004), nem modificações morfológicas que poderiam ser relacionadas ao enfraquecimento dos tecidos pélvicos. No entanto, este é o primeiro estudo que relata disfunções pélvicas nos camundongos deficientes em fibrilina-1 multíparos, usados como matrizes reprodutivas. Em conclusão, a formação das fibras elásticas que ocorreu na sínfise púbica de camundongos durante a vida adulta possui características únicas de um modelo que pode ser usado para compreensão dos processos normais e patológicos, principalmente aqueles relacionados aos animais geneticamente modificados para proteínas envolvidas na elastogênese. Assim, este trabalho traz à luz as evidências das profundas modificações que a sínfise púbica de camundongos passa durante a prenhez com a síntese de novas fibras elásticas, o que pode contribuir na compreensão dos mecanismos biológicos para formação das fibras elásticas / Abstract: The organization of elastic fibers involves the synthesis and the deposition of molecules in a high regulated sequence to ensure the elastic characteristics in the early stages of development. During pregnancy, elastic fibers-enriched pelvic tissues change to allow safe delivery and this remodeling is essential to the vaginal delivery. The mouse pubic symphysis articulation also remodels in a controlled hormonal process. This phenomenon comprises the "transformation" of the fibrocartilage into an interpubic ligament (IpL) followed by its relaxation before parturition. After the first parturition, recovery process occurs to ensure the pelvic tissue homeostasis. Adding to that, pelvic organ support impairment had been described in genetically modified mouse for the proteins involved in the elastogenesis such as lysyl oxidase-like 1 (LOXL-1), fibulin-3 and -5. Since, ligaments are the main supportive structures of pelvic organs, the aim of this study was to evaluate the elastogenesis in the IpL development during mouse pregnancy. Thus virgin, pregnant and postpartum C57Bl/06 wild-type and fibrillin-1mg?/+ female mice were studied using light, confocal, transmission electron microscopy, western blotting and real-time PCR. Both, wild-type and fibrillin-1mg?/+ female mice showed classically the separation of the pubic bones, the formation and relaxation of the IpL and the recovery at postpartum. These processes suggested a pattern which cells control the extracellular matrix remodeling under hormonal and molecular signaling. The ultra-structure of the fibrocartilaginous tissue had slender bundles of microfibrils randomly distributed among the fibrochondrocytes. By the time IpL is formed, there were seen elastic fibers, which consist of small conglomerates of amorphous material, distributed among the bundles of microfibrils. The IpL showed elastic fibers and all tissue compounds aligned to the opening axis of the articulation before parturition. The immunohistochemical study and quantitative gene expression indicated that during IpL development in wild-type mice, tropoelastin/elastin, fibrillin-1, fibrillin-2, LOXL-1, fibulin-5 and TGF-? were spatial and temporal regulated, and these molecules might contribute to the synthesis of new elastic fibers that assure the elasticity that is needed to the pelvic girdle during preparation for parturition and also the recovery at postpartum. However, compared to wild-type mice, alterations were found in the quantitative gene expression of elastin, fibrillin-1, LOXL-1, fibulin-5 and TGF- ?, different from the morphology that was very similar to the one that was observed in wild-type mice. In this study, the fibrillinmg?/+ mice did not show pelvic organ prolapse after the first parturition as LOXL1-/- did (Liu et al., 2004), neither morphological modifications that could be related to the weakness of pelvic tissue. However, this is the first work about pelvic dysfunctions in multiparous fibrillin-1mg?/+ mice used as reproductive matrices. In conclusion, the elastic fiber assembly that occurred in the mouse pubic symphysis during the adult life has characteristics of a model that could be used to understand normal and pathological processes, mainly those related to genetically modified mice for the proteins involved in the elastogenesis. Then, this work may bring readers up-to-date with accumulating evidence that the mouse pubic symphysis undergoes remarkable modifications during pregnancy with new synthesized elastic fibers and may contribute to our understanding of the biological mechanisms about elastic fiber assembly / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T05:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Veridiano_AdrianoMora_M.pdf: 13328877 bytes, checksum: 8cdd5c8e051145c4210f83e267962da1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Uma dramática mudança na sínfise púbica de camundongos é observada no final da prenhez. Recentemente demonstramos que estas mudanças na sínfise púbica durante a prenhez, parto e pós-parto estão diretamente associadas com componentes da matriz extracelular principalmente colágeno, fibras do sistema elástico, proteoglicanos e glicosaminoglicanos. A remodelação tecidual envolve um equilíbrio dinâmico entre proliferação celular e morte celular programada assim como as alterações nos componentes estruturais da matriz extracelular. Deste modo, é importante considerar estes dois comportamentos celulares quando investigamos os mecanismos que regulam a remodelação do tecido interpúbico; durante o seu crescimento ao final da prenhez, parto e subseqüente involução no período pós-parto. A proliferação e a morte celular programada foram identificadas por detecção imunohistoquímica, PCNA e TUNEL respectivamente os índices de proliferação e morte celular foram determinados por analises morfométricas. Os nossos resultados demonstraram que a proliferação celular foi intensa durante o período de formação do ligamento, entre os 015 e 018 de prenhez. Entretanto, no 019, dia do parto, ocorre uma queda abrupta dos índices de o 5dpp. As análises quantitativas de morte celular, mostraram resultados opostos quando comparados com os índices de proliferação celular. Por exemplo, no 019, inicia-se um declínio nos índices de proliferação celular. Realmente, neste dia são encontrados os mais altos índices de morte celular. Quando nós observamos simultaneamente proliferação e morte celular durante o início da prenhez a renovação do ciclo celular é claramente proliferativo, produzindo hiperplasia para no final da prenhez o ciclo ser dirigido para morte celular programada. Interessantemente, embora altos níveis de morte celular durante a involução pós-parto pode ser mostrada pelas células TUNEL positivas, não fomos capazes de observar núcleos picnóticos. Núcleos picnóticos com uma razoável freqüência deveriam ser observados nesta situação, aonde morte celular programada ocorre em altos níveis. O processo de autofagia, uma variação da morte celular programada denominada apoptose foi discutida como um mecanismo alternativo de eliminação celular na involução do ligamento interpúbico no período pós-parto / Abstract: Marked changes in mice pubic symphysis occurs by the end of pregnancy. Recently, we demonstrated that these changes in the pubic symphysis during the period under study are directly associated with extracellular matrix components remodeling mainly collagen, elastic fibers system, proteoglycans and glycosaminoglycans. Tissue remodeling involves a dynamic balance between cell proliferation and programmed cell death as well as changes in the extracellular matrix components. Therefore, it is important to consider these both cellular behaviors when investigating the mechanism that regulates the interpubic tissue remodeling; growth during Iate pregnancy and partum ensuring involution during the postpartum period. Proliferating and programmed death cells were identified by immunohistochemistry, PCNA and TUNEL detection, respectively, and the rates at which these processes occurred were determined by morphometric analysis. Our results demonstrated that cellular proliferation was intense during the period of ligament formation, from 015 to 018, thereafter abruptly declining on 019. From parturition (019) onwards, an ever increasing decline in the cellular proliferation levels could be observed. The quantitative analyses of cellular death, showed opposite results when compared to cellular proliferation. For example, on 019, has initiated the decrease on the proliferative index. Likewise, on this day that occur one of the highest levei of cellular death. When we observed simultaneously proliferation and cellular death, during the early pregnancy the cycle of cellular renovation is clearly proliferative, producing hyperplasia for in the later pregnancy the cycle be directing by programmed cellular death. Interestingly, although the high levels of the cellular death during postpartum involution could be show by the TUNEL positive cells, we were unable to observed picnotic nucleus. We would expect to find picnotic nucleus with reasonable frequency in this situation, where programmed cellular death occurs in a great extension. The process of autophagy, a variation of classical apoptotic cellular death was discussed as an alternative mechanism of the cell elimination in the postpartum Iigament involution / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:41:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_RenataGiardini_M.pdf: 17497902 bytes, checksum: 703ffbe86316dbd66437c0d105646fed (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Durante a prenhez de alguns roedores ocorre um acentuado processo de remodelação da sínfise púbica (SP). No camundongo, esta articulação fibrocartilaginosa é gradativamente formada por um tecido conjuntivo fibroso, resultando no ligamento interpúbico (LI) entre os coxins de cartlagem na etapa final da prenhez. Logo após o parto, este ligamento é rapidamenteremodelado e o espaço entre os ossos púbicos se fecha por volta do quinto dia pós-parto. Sabe-se que o hormônio relaxina facilita o crescimento e remodelação dos órgãos do trato reprodutor feminino, alterando a regulação dos processos bioquímicos envolvidos na remodelação da matriz extracelular (MEC) do útero gravídico e da cérvice. Porém pouco se conhece sobre a sínfise em relação ao envolvimento de metaloproteinases (MMPs) nessa remodelação. Assim como, da participação de células inflamatórias, que poderiam estar envolvidas no processo de remodelaçãoda sínfise púbica do camundongodurantea prenhez. Neste estudo, foram utilizadas sínfises de camundongos virgens e ligamento interpúbico de animais prenhes para a detecção de MMPsin vivo e in vitro (explante de 24 horas). As MMPs da família das gelatinases (MMP-2 e MMP-9) foram caracterizadas pela zimografia e por meio de ensaios imunohistoquímicos,assim como a MMP-8 (colagenase2) associada,quase que exclusivamente, com o processo inflamatório. Também foram utilizadas microscopia eletrônica de transmissão e microspia de luz associada às colorações seletivas para evidenciar os tipos celulares que poderiam estar participandodo processo de remodelaçãoda sínfise púbica. A zimografia demonstrou a presença das gelatinases MMP-2 e MMP-9, ambas como pré e pró-enzimas, na SP e no LI. Imunohistoquímicadetectou a reação positivade gelatinasese também de MMP-8em células seme~hantesaos fibroblastos. A caracterização morfológica evidenciou que as células semelhantesa fibroblastos na sínfise de animais virgens estão próximasa matriz pericelular, ao passo que durante a prenhez, há um aumento deste subcompartimento, entre célula e matriz. As análises qualitativas e quantitativas, mostramum reduzido númerode granulócitosna sínfise de animaisvirgens e no ligamento intepúbico durante a prenhez. Dados obtidos neste trabalho suportam a hipótese de que as gelatinases estão envolvidas na remodelação da sínfise por processos intrínsecos, evidenciando que tanto as modificaçõesdo fenótipo de células semelhantes a fibroblastos, como as modificaçõesquímicas da MEC, são fundamentais para o rearranjo desta articulação durante a prenhez, parto e pós-parto no camundongo. A extensão da remodelação da MEC sugere o papel dos hormônios da prenhez na modulação da interação célula-matriz independentemente de uma reação do tipo inflamatória descrita em outros órgãos durante a prenhez / Abstract: During pregnancy of some rodents a deep remodeling occurs in the pubic symphysis (PS). In the mouse, these fibrocartilagenousarticulation are gradually replaced by a dense connective tissue, forming the interpubic ligament (IL) at the end of pregnancy. Right after birth, this ligament is rapidly remodeled and the space between the two bones is quickly closed, five days after birth. It is well known that hormones such as relaxin, facilitates the growth and remodeling of organs in female reproductive tract, changing the regulation of biochemical processes that are involved in the remodeling of the extracellular matrix (ECM) of the uterus and cervix during pregnancy. However, little are known about pubic symphysis in when the subject is the involvement of metalloproteinases (MMPs) in this remodeling, as well as the participation of inflammatorycells that could be involved in the remodeling process of the mouse pubic symphysisduring pregnancy. In this study were used pubic symphysis of virgin mice and interpubic ligament in pregnant animais for the detection of MMPs in vivo and at in vitro (24h explants). MMPs from the gelatinase family (MMP-2 and MMP-9) were characterized by zymography and by immunohistochemistryessays, also MMP-8 (collagenase 2) that is believed to be associated almost exclusively with an inflammatory processoTransmission electron microscopy and light microscopy was also used associated with selectively staining, to evidence type of cells that could be involved in the pubic symphysis remodeling. Zymographydemonstratedthe presenceof gelatinases MMP-2 and MMP- 9 both in inactive and active forms, at the PS and IL. Immunohistochemistry,at the pubic symphysis and interpubic ligament, detected the expression of gelatinases and also MMP-8 in cells that were similar to fibroblasts. Morphological characterization evidenciated that cells that are similar to fibroblasts in the pubic symphysis of virgin animais are closely related to the pericellular region, being that during pregnancy,these spaces suffers an increase in this sub-compartment between cell and matrix. Qualitative and quantitative , analysis demonstratedlittle granulocytes in the pubic symphysis of virgin animais and in the interpubic ligament during pregnancy. Results that were obtained from this work support the hypothesis that the gelatinases could be involved in pubic symphysis remodeling through intrinsic processes, being evident that, both cellular phenotype modifications and also chemical modifications of the ECM, are fundamental to the rearrange of this articulation during mouse pregnancy, birth and pos-partum. The extensive remodeling of the ECM suggests hormonal role of the pregnancy in the modulation of the interaction between cell-matrix independently of an inflammatoryreaction in other organs during pregnancy / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Olga Maria de Toledo Correa, Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T13:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_EduardoAnselmo_M.pdf: 5637432 bytes, checksum: 7856ba76c45912e029c4e039ce280e21 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O tecido interpúbico no camundongo é conhecido pelas rápidas adaptações sofridas devido as novas demandas impostas durante a prenhez, parto e pós-parto. O desenvolvimento de um ligamento interpúbico é explicado em parte pelas modificações observadas na hidratação deste tecido, assim como, pela presença de Ácido Hialurônico (AH). O presente estudo focou-se na presença do AH na sínfise púbica, uma vez que pouco se sabe a respeito do seu papel durante as modificações sofridas neste período. A localização e quantificação do AH, por meio de uma sonda específica para AH, foi feita em amostras de sínfises púbicas de camundongos virgens, com 12 a 18 dias de prenhez, no dia do parto (D19) e durante o 3° e 5° dia pós-parto. A análise quantitativa fluorométrica indicou um aumento gradual no AH do tecido interpúbico durante a prenhez, seguido de uma diminuição já presente no dia do parto. A análise histoquímica demonstrou a presença de AH na matriz extracelular deste tecido assim como dentro das células. Baseado nestes resultados, pudemos demonstrar a provável participação do AH em três processos. Quando encontrado na matriz extracelular, o AH contribui para a formação de uma estrutura flexível, de consistência rígida, que vai permitir a passagem do feto pelo canal de parto. Ao passo que, quando encontrado intracelularmente, o AH contribui em dois processos distintos: até o 18° dia de prenhez, o AH participa nos processos de proliferação celular, através de possíveis interações com moléculas e estruturas importantes neste processo. O AH talvez também contribua para a proliferação através da formação de uma zona hidratada ao redor das células facilitando o destacamento das mesmas de seu substrato. Finalmente, após o parto e até o 5° dia pós-parto o AH contribui para a manutenção do fenótipo miofibroblástico destas células ajudando no processo de involução sofrido pelo tecido interpúbico no pós-parto / Abstract: The interpubic tissue in mice is known to rapidly adapt itself to the ali new demands imposed during pregnancy, partum and post-partum. The development of an interpubic ligament may be explained, in part, due to the modifications observed in the hydration of this tissue, as well as, the presence of hyaluronan (HA). The present study focuses on the presence of HA in the pubic symphysis, since still very little is known of its role during the modifications suffered through this period. The localization and quantification of HA using a HA-probe were studied in samples of mice pubic symphyses from virgin, 12th to 18th days of pregnancy, the day of delivery (D19) and during 3 and 5 days post-partum. The quantitative fluorimetric analysis indicated a gradual increase of HA in the interpubic tissue throughout pregnancy, being followed by a decrease already present on the day of the delivery. In addition, the histochemical analysis demonstrated the presence of HA in the extracellular matrix of the tissue as well as within its cells. Based on these results, it can be shown that HA may participate in three processes during pregnancy, partum and post-partum. While found in the extracellular matrix, HA contributes in the formation of a flexible structure, yet of rigid consistency, that allows the passage of the embryo for the birth canal. Whereas, while found intracellular, HA contributes in two distinct processes: until the 18th day of pregnancy, HA participates in the process of cellular proliferation through its possible interaction with mitotic cells. HA may also contribute to cellular proliferation through the formation of a hydrated zone from parturition as well as the 5th day post-partum HA contributes to the maintenance of the myofibroblastic phenotype of these cells, aiding in the process of involution suffered by the interpubic tissue following parturition / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T11:46:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castelucci_BiancaGazieri_M.pdf: 5603376 bytes, checksum: 36691ec0b0e4ba6ebab8bc72c2ce99ed (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A sínfise púbica (SP) faz parte do conjunto de elementos do sistema musculoesquelético que oferece suporte aos órgãos pélvicos. Em alguns animais, como camundongos e cobaias, esta junção fibrocartilaginosa passa por drásticas modificações hormonalmente reguladas durante a prenhez, resultando no afastamento dos ossos púbicos e na formação de um ligamento elástico (LiP) que facilita a passagem dos fetos durante o parto. Assim como o LiP, a cérvice uterina (CV) também sofre extensa remodelação durante a prenhez e ambos apresentam similaridades no que diz respeito à composição tecidual, proliferação celular e regulação por relaxina e hormônios esteroides. Embora alguns achados relacionem o relaxamento da SP da e CV à ativação de uma resposta pró-inflamatória sem a participação de granulócitos, a participação de outros leucócitos no remodelamento da SP durante o parto e pós-parto ainda não foi devidamente investigada em camundongos. Com a finalidade de caracterizar aspectos que envolvem a participação de leucócitos neste remodelamento realizamos o presente estudo visando à caracterização morfológica e análise da expressão gênica destas células durante o relaxamento (dias 12, 18 e 19ddg) e a remodelamento da SP no pós-parto (dias 1 e 3dpp) associadas à depleção de monócitos/macrófago. A análise morfológica demonstrou a presença de monócitos/macrófagos, positivos para os marcadores dos antígenos 7/4 e F4/80 respectivamente, dispersos na matriz e no interior de lacunas do LiP entre 18ddg e 3dpp nos grupos controle e tratados. No grupo controle, as análises de PCR em tempo real demonstraram o aumento da expressão de receptor (Ccr2) característico de monócitos inflamatórios nos tecidos interpúbicos, no final da prenhez e pós-parto. Durante a separação dos ossos púbicos, as evidencias indicaram tendência à polarização dos macrófagos favorável ao fenótipo anti-inflamatório M2 (Arg1). No relaxamento houve aumento dos fenótipos pro-inflamatório M1 (Il1a, Tnfa) e anti-inflamatório M2 (Il10); enquanto no pós-parto (1dpp) houve aumento na expressão de genes caraterísticos do fenótipo M1 e queda da expressão relativa de Arg1, simultaneamente ao remodelamento da matriz necessário a reorganização da articulação interpúbica. Posteriormente, no 3dpp, apesar da manutenção dos níveis de expressão de Il1a e Tnfa houve aumento da expressão de Il10, Arg1 e Tgfb, genes relacionados ao fenótipo M2, o que potencialmente pode ser associado à ativação de mecanismos de reparo tecidual necessários à reaproximação dos ossos púbicos. A depleção de monócitos/macrófagos nas etapas de separação e relaxamento dos tecidos interpúbicos, assim como no 3dpp favoreceu a polarização de macrófagos de fenótipo M1 (Il1a, Tnfa), resultando em alterações na compactação da matriz extracelular. Este estudo demonstra que os fagócitos mononucleares são células importantes no processo fisiológico do remodelamento da SP do camundongo durante a prenhez, parto e pós-parto. Estas células atuam por meio de mecanismos finamente regulados capazes de garantir o sucesso da reparação tecidual de estruturas suportes da cavidade pélvica do camundongo / Abstract: The pubic symphysis (PS) is part of the musculoskeletal system elements that provide support to the pelvic organs. In mice, this fibrocartinaginous joint undergoes hormonally regulated changes during pregnancy involving the pubic bones reabsortion and formation of an elastic ligament (IpL) that leading to a safe delivery. At this period, the uterine cervix (UC) also undergoes an extensive remodeling sharing some similarities with the IpL tissue like connective tissue composition, cell proliferation and hormonal regulation of that process. Although some findings relate the relaxation of PS and UC to the activation of a pro-inflammatory response without the granulocytes involvement, others leukocytes participation in PS remodeling at the delivery and postpartum were not well investigated in mice. In order to characterize aspects of the participation of leukocytes in the PS remodeling we conducted the morphological characterization and analysis of gene expression of these cells during relaxation (12, 18 and 19 days of pregnancy) and the remodeling of the PS postpartum (1 and 3dpp) associated with the depletion of monocytes / macrophages. Morphological analysis revealed the presence of positive cells for antigen 7/4 and F4 / 80, monocytes and macrophages respectively, dispersed in the matrix and inside gaps of the IpL between the 18dp and 3dpp in the control and treated groups. In control group, the real-time PCR analysis showed increased expression of the characteristic inflammatory monocytes receptor (Ccr2) at the interpúbicos tissues on late pregnancy and postpartum. During pubic bones separation, evidences indicated that macrophages preferentially tend to polarize in the anti-inflammatory phenotype M2 (Arg1). At the relaxation of IpL pro-inflammatory M1 (Il1a, Tnfa) and anti-inflammatory M2 (I110) phenotypes was increased; in the meantime, parallel to the remodeling of the extracellular matrix necessary to the interpúbica joint reorganization at postpartum (1dpp), there was an increase in the expression of genes characteristic of M1 phenotype and decreasing in the Arg1 relative expression. Subsequently, at the 3dpp, despite the maintenance in expression levels of Il1a and Tnfa there was an increased in M2 phenotype-related genes expression (Il10, Arg1 and Tgfb) potentially involved in the activation of tissue repair mechanisms necessary to pubic bones reapproximation. Depletion of monocytes / macrophages at separation and interpubic tissue relaxation, as well as 3dpp favored the M1 macrophage phenotype polarization (Il1a, Tnfa), leading to changes in the extracellular matrix compression. This study shows that mononuclear phagocytes are important cells in the physiological process of mice PS remodeling during pregnancy, labor and postpartum. These cells act through finely regulated mechanisms to ensure the successfull tissue repair of the pelvic support structures in mice / Mestrado / Biologia Tecidual / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Os ligamentos são estruturas estabilizadoras estáticas das articulações e desempenham um papel importante na junção mecânica. Podem ser influenciadas por fatores de diversas naturezas, inclusive adaptações sofridas durante o período puerperal. Na gravidez existem grandes modificações hormonais que preparam o organismo materno para o desenvolvimento do embrião e feto, bem como para a parturição. Assim, sob ação hormonal os ligamentos e a sínfise púbica têm suas características mecânicas alteradas preparando a mãe para o parto. Este trabalho teve por objetivo caracterizar mecanicamente as modificações sofridas na sínfise púbica e no ligamento cruzado anterior do joelho, durante a gestação e na fase final. Para o estudo foram utilizadas 44 ratas da raça Wistar, com massa corporal inicial média de 301.1 / 8,1g e idade aproximada de 100 dias. Os animais foram divididos em três grupos experimentais: o grupo controle, grupo prenhez I e o grupo prenhez II. Para constituição do grupo prenhez I e II, fêmeas férteis foram acasaladas com machos e o coito foi comprovado pela presença de espermatozóides no lavado vaginal obtido da fêmea. Confirmando a prenhez, os animais foram mantidos em gaiolas até o décimo sexto dia para o grupo prenhez I e sacrificados, para o grupo prenhez II foi esperado até o vigésimo dia de gestação e sacrificados, sendo coletados a pelve e os joelhos de ambos os grupos. Após preparo, a sínfise púbica e o ligamento cruzado anterior do joelho foram ensaiados mecanicamente em tração, com obtenção dos seguintes parâmetros: carga no limite máximo e rigidez. Os resultados comparados com as fêmeas controles não prenhes mostraram que para a sínfise púbica houve aumento da rigidez e diminuição da carga no limite máximo. Para o ligamento cruzado anterior não houve diferença significativa entre os grupos / Ligaments are static stabilizer structures of the joints and play an important role in the mechanical junction. They may be influenced by factors of several natures, including adaptations suffered during the puerperal period. There are in pregnancy big hormonal modifications that prepare the maternal organism for the embryo and fetus development, as well to parturition. Thus, under hormonal actions the ligaments and the pubic sinfisis have their mechanical features shifted preparing the mother for the labor. This paper aimed to point out the shifts occurred by the pubic sinfisis and by the knee anterior cruciate ligament during pregnancy and in the final phase. For the study were used 44 mice Wistar breed, corporal average mass of 301,1 / 8,1g and approximated age of 100 days. They were divided into 3 experimental groups: control group, pregnancy I group and pregnancy II group. For the disposition of the control group, the animals were expected to complete 120 days, then sacrificed and collected the pelvis and the knees. For pregnancy group I and II, fertile females were mated with males and the coitus was proved with the presence of spermatozoids in the vaginal washed obtained from the female. Once confirmed pregnancy, the animals were kept in cages until the 16th day for pregnancy group I and so only collected the animal’s pelvis. For pregnancy group II was expected until the 23rd day of pregnancy and sacrificed, being collected the pelvis and the knees. After preparing, the pubic sinfisis and the anterior cruciate ligament of the knee were mechanically tested in traction, obtaining the following parameters: load in maximum border line and stiffness. The results compared with non pregnant females showed that to the pubic sinfisis there was an increase of stiffness and a load in maximum border line decrease. For the anterior cruciate ligament there was no significant difference between the groups

Os ligamentos são estruturas estabilizadoras estáticas das articulações e desempenham um papel importante na junção mecânica. Podem ser influenciadas por fatores de diversas naturezas, inclusive adaptações sofridas durante o período puerperal. Na gravidez existem grandes modificações hormonais que preparam o organismo materno para o desenvolvimento do embrião e feto, bem como para a parturição. Assim, sob ação hormonal os ligamentos e a sínfise púbica têm suas características mecânicas alteradas preparando a mãe para o parto. Este trabalho teve por objetivo caracterizar mecanicamente as modificações sofridas na sínfise púbica e no ligamento cruzado anterior do joelho, durante a gestação e na fase final. Para o estudo foram utilizadas 44 ratas da raça Wistar, com massa corporal inicial média de 301.1 / 8,1g e idade aproximada de 100 dias. Os animais foram divididos em três grupos experimentais: o grupo controle, grupo prenhez I e o grupo prenhez II. Para constituição do grupo prenhez I e II, fêmeas férteis foram acasaladas com machos e o coito foi comprovado pela presença de espermatozóides no lavado vaginal obtido da fêmea. Confirmando a prenhez, os animais foram mantidos em gaiolas até o décimo sexto dia para o grupo prenhez I e sacrificados, para o grupo prenhez II foi esperado até o vigésimo dia de gestação e sacrificados, sendo coletados a pelve e os joelhos de ambos os grupos. Após preparo, a sínfise púbica e o ligamento cruzado anterior do joelho foram ensaiados mecanicamente em tração, com obtenção dos seguintes parâmetros: carga no limite máximo e rigidez. Os resultados comparados com as fêmeas controles não prenhes mostraram que para a sínfise púbica houve aumento da rigidez e diminuição da carga no limite máximo. Para o ligamento cruzado anterior não houve diferença significativa entre os grupos / Ligaments are static stabilizer structures of the joints and play an important role in the mechanical junction. They may be influenced by factors of several natures, including adaptations suffered during the puerperal period. There are in pregnancy big hormonal modifications that prepare the maternal organism for the embryo and fetus development, as well to parturition. Thus, under hormonal actions the ligaments and the pubic sinfisis have their mechanical features shifted preparing the mother for the labor. This paper aimed to point out the shifts occurred by the pubic sinfisis and by the knee anterior cruciate ligament during pregnancy and in the final phase. For the study were used 44 mice Wistar breed, corporal average mass of 301,1 / 8,1g and approximated age of 100 days. They were divided into 3 experimental groups: control group, pregnancy I group and pregnancy II group. For the disposition of the control group, the animals were expected to complete 120 days, then sacrificed and collected the pelvis and the knees. For pregnancy group I and II, fertile females were mated with males and the coitus was proved with the presence of spermatozoids in the vaginal washed obtained from the female. Once confirmed pregnancy, the animals were kept in cages until the 16th day for pregnancy group I and so only collected the animal’s pelvis. For pregnancy group II was expected until the 23rd day of pregnancy and sacrificed, being collected the pelvis and the knees. After preparing, the pubic sinfisis and the anterior cruciate ligament of the knee were mechanically tested in traction, obtaining the following parameters: load in maximum border line and stiffness. The results compared with non pregnant females showed that to the pubic sinfisis there was an increase of stiffness and a load in maximum border line decrease. For the anterior cruciate ligament there was no significant difference between the groups

Orientadores: Paulo Pinto Joazeiro, Stephen Hyslop / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T23:19:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_RenataGiardini_D.pdf: 6665917 bytes, checksum: bfaa430fcdeef027dd2744caa78df851 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A remodelação que a sínfise púbica (SP) sofre durante a prenhez, parto e pós-parto é um dos eventos importantes para o parto normal, e ocorre no trato reprodutor feminino como útero, cérvice uterina e sínfise púbica em alguns mamíferos. Durante a prenhez de alguns roedores ocorre um acentuado processo de remodelação da sínfise púbica (SP). No camundongo, esta articulação fibrocartilaginosa é gradativamente modificada, formando o ligamento interpúbico (LI) da etapa final da prenhez. Logo após o parto, este ligamento é rapidamente remodelado e o espaço entre os ossos púbicos se fecha, por volta do quinto dia pós-parto. Contudo, alterações no metabolismo celular durante o relaxamento da sínfise púbica do camundongo durante a prenhez, parto e pós-parto não foram extensivamente estudadas. Neste trabalho, foram utilizadas sínfises de camundongos virgens (V) e de animais prenhes como também no pós-parto. Os experimentos evidenciaram que as enzimas Metaloproteinases (MMPs) -2, -9, Tissue Inhibitors of Metalloproteinases (TIMPs) -1, -2 assim como as catepsinas B e K foram detectadas em todos os dias estudados. Por meio do Western Blotting foi observado que a MMP-8 teve sua maior expressão protéica no (12º Dia de prenhez) D12, onde as modificações da sínfise em ligamento se iniciam. Através da zimografia foi possível observar que as MMPs -2 e -9 tiveram suas atividades mais evidentes no início das modificações decorrentes da prenhez no D12, D15. Estas MMPs ainda se mantiveram em níveis mais altos de expressão/atividade até o final da prenhez quando comparados com o animal virgem. As catepsinas tiveram sua expressão mais alta no final da prenhez, porém a catepsina B não foi detectada em sua forma ativa sugerindo participação no processo de remodelação da sínfise, porém não tão significativa do que as MMPs. O teste de solubilidade evidenciou um aumento no conteúdo de água não significativo durante a prenhez com um ápice significativo durante o parto D19 quando comparado com o animal não prenhe. O conteúdo de colágeno não se alterou e nem a solubilidade do colágeno demonstrou modificações significativas durante a prenhez, excetuando-se o 24HPP (horas pós-parto) em relação a solubilidade de colágeno. O Western blotting demonstrou que tanto a concentração do colágeno I, da molécula C-propeptídeo e do Decorin não se alteraram significativamente durante a prenhez, parto e pós-parto. O FACE (Fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis) evidenciou aumento qualitativo de moléculas AH (Ácido Hialurônico) de maiores pesos moleculares no ligamento interpúbico no final da prenhez. Este ensaio permitiu observar que não há quebra de moléculas de AH durante a prenhez e pós-parto, como é observado na cérvice uterina. Quantitative real-time PCR (QRT-PCR) evidenciou alta expressão relativa do Hyaluronic acid synthases (Has) 1 e 2 diferente das hialuronidases que tiveram sua expressão relativamente baixa. Estes dados são condizentes com aqueles que mostraram que o AH de alto peso molecular encontrado na sínfise púbica do camundongo não sofreu digestão enzimática. Dentre os proteoglicanos, o Versican foi altamente expresso juntamente com Adamts 1 e 2 que estão envolvidas em sua ativação. De modo geral, a remodelação é facilitada por mudanças nas regulações traducionais, pós-traducionais de efetores multifuncionais que participam ativamente da remodelação da MEC (Matriz Extracelular) in vivo. A identificação de etapas finamente reguladas na maturação de componentes celulares e da matriz poderá proporcionar avanços no entendimento de processos que ocorrem na preparação para a parturição normal, como também prevenir disfunções da sínfise púbica durante a parturição / Abstract: The remodeling that the pubic symphysis (PS) goes through pregnancy, parturition and post-partum is an important event for normal birth, and occurs in the female reproductive tract such as uterus, cervix and pubic symphysis in some mammals. During pregnancy of some rodents an acentuated remodeling process occurs in the PS. In mice, this fibrocartilaginous joint is gradually modify, forming the interpubic ligament (IpL) by the end of pregnancy. Right after birth, this ligament is rapidly restored and the gap between the pubic bones closes, around the fifth day postpartum. However, changes in cellular metabolism during relaxation of the pubic symphysis of mice during pregnancy, birth and postpartum has not been extensively studied. In this work, we used symphysis of virgin mice and interpubic ligaments of pregnant animals as well as postpartum. The experiments showed that the enzymes Metalloproteinases (MMPs) -2, -9, Tissue Inhibitors of Metalloproteinases (TIMPs) -1, -2 as well as cathepsins B and K were detected at all studied days. By Western blotting it was observed that MMP-8 was most expressed on 12º Day of pregnancy (D12), where the pubic symphysis changes into changes ligament begin. The zymography observed that MMPs -2 and -9 activities were more evident in early pregnancy D12, D15. These MMPs remained at higher levels of expression/activity until the end of pregnancy when compared to virgin animal. Cathepsins had its highest expression in late pregnancy, but cathepsin B was not detected in its active form suggesting involvement in the remodeling of the symphysis, but not as significant as MMPs. The solubility test showed an increase in water content that was not significant during pregnancy with a significant peak during birth D19 compared to the non-pregnant animal. The collagen content did not change and neither the solubility of collagen showed significant changes during pregnancy excepting the 24HPP (hours postpartum) in respect to the solubility of collagen. Western blotting analysis showed that both type I collagen, the molecule Cpropeptide and decorin did not change significantly during pregnancy, birth and postpartum. FACE (fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis) showed a qualitative increase of HA molecule (Hyaluronic Acid) from higher molecular weights in the interpubic tissue at the end of pregnancy. This essay has observed that there is no breaking down of HA during pregnancy and postpartum, as observed in the uterine cervix. Quantitative real-time PCR (QRT-PCR) revealed high relative expression of Hyaluronic acid synthases (Has) 1 and 2 different from hyaluronidase that had relatively low expression. These data are consistent with those that showed high molecular weight of HA found in the pubic symphysis of mice suffered no brakes. Among the Proteoglycans, Versican was highly expressed along with ADAMTS 1 and 2 that are involved in its activation. In general, the remodeling is facilitated by changes in translational, post-translational regulations of multifunctional effectors that participate actively in the remodeling of ECM (extracellular matrix) in vivo. The identification of finely regulated steps in the maturation of cellular components and matrix could provide breakthroughs in the understanding of processes that occur in preparation for normal birth, but also prevent dysfunctions with the PS during parturition / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Paulo Pinto Joazeiro, Luiz Carlos Alves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MonicaMariaMoreira_D.pdf: 3522039 bytes, checksum: c8adbfe076ccc79eaa19efeb2f0d8fe7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Em camundongos, a sínfise púbica (SP) é metabolicamente ativa durante a prenhez. As adaptações orquestradas por hormônios e a sobrecarga mecânica imposta na sínfise, que gradualmente dá lugar ao ligamento interpúbico (Lip) e ao seu "relaxamento" no final da prenhez permitem a passagem da prole pelo canal do parto. Tais modificações oferecem oportunidade para estudo de remodelação de tecidos semelhantes às que ocorrem nas disfunções e distopias do assoalho pélvico feminino. Estudaram-se características morfológicas, imunohistoquímica das proteínas Galectina-3(GAL3) e CartilageOligomericProtein Matrix (COMP) e o comportamento biomecânico, na SP de camundongos fêmeas adultas jovens, durante a primeira prenhez e após o parto por meio de técnicas histológicas convencionais, imunohistoquímica, microscopia de luz, eletrônica de transmissão e varredura. Nas análises da organização fibrilar utilizou-se transformada rápida de Fourier (FFT) e do comportamento biomecânico ensaio destrutivo de tração uniaxial em máquina de testes universal com velocidade constante e força progressiva nas SP/Lip de camundongos C57BL6 grupos: (NP-controle), 12, 15 e 19 dias (d) após a verificação do plug vaginal e no 30, 50 e 100dias após o parto (dpp). No ensaio de tração uniaxial, a força máxima necessária para o início da ruptura do tecido diminuiu no decorrer da prenhez, sendo o menor valor medido no dia do parto, aumentou a partir deste dia, e no 10dpp retornou a valores próximos aosdos animais NP. A energia total de ruptura (ETR) diminuiu no 12d e a partir de 15d aumentou até o 5dpp, no 10dpp, diminuiu porém se manteve menor que o NP. Na Imunolocalização das proteínas COMP e GAL3 foram detectadas em todos os grupos, com variações no tipo celular e na localização. A morfologia bicorne do útero de camundongos e o peso do útero com os filhotes alteram os estímulos mecânicos nos tecidos interpúbicos e contribuem para sua remodelação. No 3dpp, quando os estímulos mecânicos foram abruptamente retirados no parto, observaram-se organelas compostas por microtúbulos semelhante a cílio solitário não móvel, citado como organela mecanosensorial. O comportamento biomecânico dos tecidos interpúbicos durante a prenhez e após o parto foi coerente com a histoarquitetura destes e a imunolocalização das proteínas COMP e GAL-3, à medida que o comportamento biomecânico dos tecidos se modifica são indicativos que essas proteínas estão envolvidas no remodelamento de transições de elementos ósseos e ligamentares e fibrocatilaginosas durante a prenhez e após o parto. Este remodelamento que proporciona afastamento de ossos púbicos e a rápida recuperação que se inicia pós-parto, oferece suporte ao canal de parto de animais que possuem útero bicorne a exemplo do camundongo, morcego e cobaia / Abstract: In mice, the pubic symphysis (PS) is metabolically active during pregnancy. Adaptations orchestrated by hormones and mechanical overload that the symphysis goes through during this period, which gradually gives place to an interpubic ligament (IpL) and the relaxation at the end of pregnancy, allows the passage of offspring through the birth canal. Such changes provide an opportunity to study remodeling of tissues such as those that occur in disorders and dystopias of the female pelvic floor. We studied morphological, immunohistochemical analysis of galectin-3 (GAL3) and Cartilage Oligomeric Matrix Protein (COMP) proteins and the biomechanical behavior in young adult females PS mice during first pregnancy and postpartum (dpp) through conventional histological techniques, immunohistochemistry and light,transmition and scanning electron microscopies. In analyzes of fibrillar organization we used fast Fourier transform and the biomechanical behavior destructive tensile testing in a universal testing machine with constant speed and progressive force in the PS/IpL C57BL6 mice groups: (NP-control), 12, 15 and 19 days (d) after checking the vaginal plug and 3th, 5th and 10thpp. In tensile testing the maximum force required to initiate the rupture of the tissue decreased in the course of pregnancy, with the lowest value measured at day of birth, increasing from this day on and at the 10dpp returned to the NP individual¿s value.The total rupture energy (TRE) decreasesat d12 and increased from d15 until 5dpp, decreasing at the 10dpp but remained lower than the NP. Immunolocalization of COMP and GAL3 proteins were detected in all groups, with variations in cell type and location. The bicornuate uterus morphology of the mice and the weight of the uterus with cubs alter the mechanical stimuli in interpubic tissues, contribute to its remodeling. In 3dpp when mechanical stimuli were abruptly removed at birth. It was observed organelles consisting of microtubules that were similar to a solitary cilium quoted as mechanosensory organelle.The biomechanical behavior of interpubic tissues during pregnancy and after delivery was consistent with the histoarchitecture and immunolocalization of COMP and GAL-3 protein, as the biomechanical behavior of the tissue changes are indicative that these proteins are involved in the remodeling of transitions bony and ligamentous elements and fibrocartilaginous during pregnancy and after childbirth. This remodeling that provides removal of pubic bones and a quick postpartum recovery, offers birth canal support of animals that have bicornuate uterus such as the mouse, guinea pig and bat / Doutorado / Biologia Tecidual / Doutora em Biologia Celular e Estrutural