Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-13T13:56:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 353935 bytes, checksum: 88d19234c6373988a473eeec24e5ab38 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T13:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 353935 bytes, checksum: 88d19234c6373988a473eeec24e5ab38 (MD5) Previous issue date: 2001-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A lagarta do cartucho Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) é uma praga polífaga de grande importância para várias culturas. Atualmente, vem sendo controlada principalmente através da utilização de inseticidas, entretanto alguns agentes de controle biológico apresentam potencial para reduzir o tamanho das suas populações, entre eles Telenomus remus Nixon (Hymenoptera: Scelionidae) e Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae), que são parasitóides de ovos de S. frugiperda. O entendimento de como os inimigos naturais de determinada praga interagem entre si e com os outros componentes do sistema é fundamental para o manejo de pragas. Dessa forma, foram realizados testes em olfatômetro de 4 braços, com o objetivo de esclarecer como T. remus e T. atopovirilia se relacionam entre si e com diferentes plantas hospedeiras. Teste 1: Avaliou os sinais que as fêmeas das duas espécies de parasitóides utilizam para localizar S. frugiperda, qual a influência de diferentes plantas hospedeiras sobre a busca dos parasitóides e se, através da detecção de diferentes sinais, há separação das guildas dos parasitóides. As fontes de odor utilizadas foram: milho, sorgo, algodão, milho + ovos de S. frugiperda, sorgo + ovos de S. frugiperda, algodão + ovos de S. frugiperda, ovos de S. frugiperda, e ovos de S. frugiperda lavados com hexano. Teste 2: Avaliou se fêmeas de T. remus e T. atopovirilia criadas massalmente, que emergem num ambiente com estímulos provenientes da cultura-alvo (milho) e do hospedeiro (fêmeas experientes), buscam o hospedeiro mais eficientemente e são mais capazes de discriminar entre plantas com e sem hospedeiros do que fêmeas que emergem em condições normais de criação massal (fêmeas inexperientes). Teste 3: Avaliou se T. remus e T. atopovirilia são arrestados da mesma forma por ovos de S. frugiperda parasitados por coespecíficos, por heteroespecíficos e não-parasitados, e se os parasitóides são capazes de discriminar entre ovos parasitados por co ou heteroespecíficos e não-parasitados. Em todos os testes, o parâmetro avaliado foi o tempo que as fêmeas gastaram em cada um dos braços do olfatômetro, sendo os resultados obtidos analisados pelos testes de Wilcoxon ou Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de comparações múltiplas (P< 0,05). As fêmeas das duas espécies foram arrestadas por voláteis provenientes das plantas hospedeiras, plantas hospedeiras + ovos, e ovos de S. frugiperda, não sendo arrestadas pelos ovos de S. frugiperda lavados com hexano. Isso indica que as fêmeas utilizam voláteis provenientes de várias plantas hospedeiras e do hospedeiro para sua localização. O fato das fêmeas não terem sido arrestadas por ovos lavados com hexano significa que o(s) composto(s) presente(s) na superfície dos ovos e que são responsáveis pelo arrestamento dos parasitóides, são solúveis nessa substância. Comparando-se as respostas das fêmeas das duas espécies, é possível perceber que não houve diferenças de arrestamento das fontes milho, sorgo, algodão, ovos e ovos lavados, entre elas. Entretanto as fêmeas de T. remus foram significativamente mais arrestadas pelas fontes milho+ovos, sorgo+ovos e algodão+ovos do que as fêmeas de T. atopovirilia, o que indica que semioquímicos do complexo planta+hospedeiro são usados mais eficientemente por T. remus. Quando as fêmeas de T. remus e T. atopovirilia tiveram a chance de escolher entre plantas com e sem posturas, ambas preferiram plantas com postura, exceto T. atopovirilia em sorgo. Isso indica que os parasitóides são capazes de discriminar, utilizando voláteis, áreas com e sem hospedeiros, dessa forma otimizando a busca. Quando tiveram a oportunidade de escolher entre voláteis provenientes de milho, sorgo e algodão, as duas espécies apresentaram respostas semelhantes, indicando que pequenas diferenças interespecíficas na resposta a voláteis de diferentes plantas hospedeiras podem fazer com que haja redução na sobreposição das guildas das duas espécies. Nos testes de aprendizagem foi observado que fêmeas experientes e não-experientes respondem da mesma forma à planta de milho com ovos. Entretanto, quando têm a possibilidade de escolher entre plantas com e sem ovos, as fêmeas de T. remus, ao contrário das fêmeas de T. atopovirilia experientes, são significativamente mais arrestadas para plantas de milho com ovos do que fêmeas inexperientes, indicando que ocorre aprendizagem em T. remus no momento da emergência. O fato de que esse mecanismo torna a busca pelo hospedeiro mais eficiente faz com que seja um método potencial para melhorar o controle promovido por essa espécie de parasitóide. Com relação ao reconhecimento à distância de ovos parasitados intra e interespecificamente, fêmeas das duas espécies foram arrestadas da mesma forma por ovos parasitados por co ou heteroespecíficos e ovos não-parasitados. Além disso, quando estavam na presença de voláteis provenientes de ovos parasitados intra ou interespecificamente e ovos não-parasitados, não houve diferença no arrestamento dos dois tipos de ovos. Isso indica que as substâncias utilizadas para marcar ovos parasitados só atuam à curta distância, o que pode ser explicado pelo fato de que os marcadores que atuam à longa distância podem tornar os hospedeiros marcados mais conspícuos para hiperparasitóides e predadores, sendo dessa forma detrimentais para a espécie. / The fall armyworm Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) is an important pest for many crops and has been controlled by the use of pesticides. However it can be potentially controlled by the use of natural enemies like Telenomus remus Nixon (Hymenoptera: Scelionidae) and Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae), egg parasitoids of S. frugiperda. Nowadays it is known that the understanding of how the natural enemies of a pest interact among each other and with the other components of the system, have main importance to the pest management. Hence experiments to discover how T. remus and T. atopovirilia interact between each other and with different host plants were performed in a 4 way olfactometer. Test 1: Assessed which cues the females of the two parasitoid species use to find S. frugiperda, how different host plants influenced the parasitoid search and if the parasitoid guilds are separated through the detection of different cues. The odour sources used were: corn, sorghum, cotton, corn + S. frugiperda eggs, sorghum + S. frugiperda eggs, cotton + S. frugiperda eggs, S. frugiperda eggs, and S. frugiperda eggs washed with hexane. Test 2: Assessed if massal raised females of T. remus and T. atopovirilia that emerge in an environment with stimuli from the target pest and crop (experienced females) search for the host more efficiently and are more able to distinguish between plants with and without the host than females that emerge in normal conditions of massal raising (inexperienced females). Test 3: Assessed if T. remus and T. atopovirilia are attracted by eggs parasitized by conspecific, heterospecific and non parasitized; and if the females are able to distinguish between eggs parasitized by con or heterospecifics and non parasitized. For all the tests the parameter evaluated was the time spent in each arm of the olfactometer. The results were analysed by the Wilcoxon test or Kruskal-Wallis test followed by the multiple comparison test (P< 0.05). The females of both species were attracted by volatiles from the host plants, host plants+eggs and S. frugiperda eggs; and were not attracted by the S. frugiperda eggs washed with hexane. It indicates that the parasitoid females use volatiles from many host plants and from the host in the search process. The fact that the females were not attracted by eggs washed with hexane means that the compound(s) on the egg surface that are responsible for the parasitoid attraction are soluble in this substance. By comparing the responses of the females of the two species it is possible to notice that the attractivity of corn, sorghum, cotton, eggs, and eggs washed with hexane were the same for both species. However the females of T. remus were more attracted by corn+eggs, sorgum+eggs and cotton+eggs than T. atopovirilia. It means that the cue plant+host is more efficiently used by T. remus. When the females of T. remus and T. atopovirilia had the chance to choose between plants with and without eggs, both preferred plants with eggs except T. atopovirilia on sorghum. It means that the parasitoids are able to distinguish, through volatiles, areas with and without host, hence optimising the search. When they had the chance to choose among volatiles from corn, sorghum and cotton, the two species showed a slightly different behaviour, indicating that interespecific differences in the responses to volatiles from host plants may cause a reduction of the superposition of the two parasitoids guilds. On the learning tests it was observed that experienced and inexperienced females show the same responses to corn plants with eggs. However when they can choose between plants with and without eggs, experienced T. remus females (but not experienced T. atopovirilia females) are more attracted to plants with eggs than inexperienced females, indicating that a learning process occurs in emergence in T. remus, and as this mechanism makes the T. remus search more efficient, it can be used to increase the level of control promoted by this parasitoid in the field. Concerning the ability to recognise at long range eggs parasitized intra and interespecifically, the females of both species were attracted in the same way by eggs parasitized by con or heterospecifics and non parasitized. Moreover, they could not distinguish between the odour of eggs parasitized intra or interespecifically and nonparasitized eggs, when they were in presence of both types. It means that the substances used to mark parasitized eggs are only perceived at short range or by contact. It can be explained by the fact that marks that could be perceived at long range would make the parasitized hosts more conspicuous to hyperparasitoids and predators, thus being detrimental to the parasitoid. X / Dissertação importada do Alexandria

Orientador: Carmino Antonio De Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T04:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miranda_ElianaCristinaMartins_D.pdf: 1801629 bytes, checksum: b4c847d7141a9b207af7438bdef8c791 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O estudo analisa duas metodologias que estão sendo usadas para estimar a probabilidade de eventos. Um método é a inversão do Kaplan-Meier (1-KM), o qual não considera eventos competitivos, e o outro método é a função da incidência cumulativa (FIC). O estudo contemplou a definição do conceito de risco competitivo e a aplicação dos métodos citados em um conjunto de dados de pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH). Os critérios de inclusão foram pacientes consecutivos transplantados no período de Janeiro de 1994 a Dezembro de 2010, com diagnóstico de leucemia aguda (LA) ou leucemia mieloide crônica (LMC). O evento de interesse foi a doença do enxerto contra o hospedeiro (DeCH) crônica, enquanto os eventos competitivos foram: recaída e morte prévia a DeCH crônica. O resultado após a aplicação do método 1-KM para o grupo de pacientes com LA foi de 52% e estratificado pelo tipo de enxerto foi 44% para medula óssea (MO) e 77% para sangue periférico (SP) p= 0.003. Quando aplicado o método FIC a probabilidade geral foi de 45% e por tipo de enxerto foi 17% para MO e 33% para SP, p= 0.00002. No grupo de pacientes diagnosticados com LMC, usando a mesma racional os resultados foram similares. Não há comparações entre os métodos estatísticos, principalmente porque o pressuposto de se considerar o evento competitivo é aplicado somente na metodologia FIC. A fonte de células SP cotejada com fonte de células MO conduzem a uma incidência cumulativa maior de DeCH, independente da doença de base. Os resultados apresentaram, na grande maioria, diferenças grandes entre os testes, indicando a importância de se averiguar os detalhes no momento da aplicação / Abstract: This study presents two methodologies that have been used to estimate the probability of events. One method is the Kaplan-Meier inversion (1-KM), which no consider the competitive events, and another one is the cumulative incidence function (CIF). The study showed the definition of competitive risk concepts and its application in the database of patients submitted to the hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). Inclusion criteria were consecutive transplanted patients in the period between January 1994 to December 2010, with acute leukemia (AL) or chronic myeloid leukemia (CML). The interest event was chronic graft versus host disease (GVHD), insofar, competitive events were relapse or early death previous to chronic GVHD. The results after 1-KM application in the AL group was 52% and stratified by source of graft was 44% in bone marrow (BM) and 77% in peripheral blood (PB) with p=0.003. When CIF test applied the results was 45% and by source of graft was 17% in BM and 33% in PB, p= 0.00002. In the CML group the results were similar. There is no comparison between the statistical tests, mainly because their assumptions are not the same. PB as source of graft induces a higher incidence of chronic GVHD, independent of disease. All results presented, in the mayor, huge differences among the tests, indicating the importance to check the details at time of application / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Este estudo objetivou estudar os carrapatos e a infecção por patógenos, e sua correlação com os vertebrados desta região entre 10/2007 e 09/2008 foram realizadas mensalmente doze visitas a uma área de floresta ombrófila densa da Amazônica na Estação Ecológica de Samuel. Foram coletados, 60 aves, 36 mamíferos, 14 répteis e 11 anfíbios. Em vida livre foram realizadas 80 coletas de carrapatos em um total de 39.600m em cerca de 2.640min (44h) e coletados 265 carrapatos adultos de quatro espécies, sendo elas: A. scalpturatum (81), A. latepunctatum (84), A. oblongogutattum (18), A. naponense (69) e 597 ninfas de Amblyomma sp. Dos 104 adultos (11,8% do total de carrapatos) foram testados para Anaplasmataceae, obtive-se 27 (25,9%) positivos e mais 36 adultos (total de 140) e 11 carrapatos foram positivos (1) A. scalpturatum, (4) A. latepunctatum, (3) A. naponense. É notável o impacto da hidrelétrica sobre a fauna de pequenos mamíferos. / This study was aimed to analyze the ticks and the pathogenic infections, and their correlation with the vertebrates of such a region from October 2007 to September 2008, 12 surveys were monthly carried out at the Samuel Ecological Station in an Amazonian dense ombrophilous forest. They were collected from 60 birds, 36 mammals, 14 reptiles, and 11 amphibians. Eighty(80) collections of free-living ticks were carried out within an area of about 39.000 meters, during 2.640 minutes (44 hours), and 265 adult ticks or four species were picked up as following: 81 A.scalpturatum, 84 A. latepunctatum, 18 A. oblongogutattum, 69 A. naponense , and 597 Amblyomma sp. nymphs. 104 the adults, which accounted for 11.8% of total of ticks collected, were tested for Anaplasmataceae, and 27 (25.9%) were positive. In the Rickettsia spp. sample, additionally to the above mentioned 104 ticks tested, 36 adult ticks (out of a total of 140) were positive. It is noteworthy the impact caused by the hydropower plant on the small mammal fauna.

Orientador: Estevam Guilherme Lux Hoppe / Resumo: As vicunhas (Vicugna vicugna) são camelídeos sul-americanos silvestres adaptados às rigorosas condições climáticas da Cordilheira dos Andes. Esses animais possuem uma das fibras animais mais finas do mundo e de grande valor econômico. O estudo das doenças parasitárias que afetam a saúde e produtividade da espécie é o primeiro passo na implementação de medidas preventivas, programas de controle e educação em saúde. Nosso objetivo é descrever a população parasitária de vicunhas de três comunidades andinas e sua relação com a qualidade das fibras usando 115 amostras de fezes e 22 de fibra, além de registros de sexo, idade, escore de condição corporal e sistema de manejo. O diagnóstico coproparasitológico revelou que 84,4% dos animais apresentaram pelo menos um tipo de ovo/oocisto de parasitas, sendo os ovos de estrongilídeos (54,8%) e os oocistos de Eimeria punoensis (38,3%) os mais frequentes. As vicunhas silvestres apresentaram maior prevalência de ovos estrongilídeos (91,4%) do que os animais semicativos (38,8%), e a idade foi significativa para a infecção por Eimeria spp., já que as crias (100%) tiveram a maior frequência quando comparadas aos animais juvenis (84,2%) e adultos (49,4%). A identificação de larvas revelou uma forte influência de animais domésticos na comunidade de parasitas da vicunha, apresentando o primeiro relato de Bunostomum phlebotomum e Gaigeria pachyscelis em vicunhas do sudeste Peru. O diâmetro de fibra das fêmeas (13,05 ± 0,73 μm) foi significativamen... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The vicunhas (Vicugna vicugna) are wild Neotropical camelids adapted to the harsh climatic conditions of the Andes. These animals have one of the finest animal fibers in the world and an important position in the international market. Studies of parasitic diseases affecting animal health and productivity are the first step in the implementation of preventive measures, control programs and health education. We aim to describe the parasite population of vicuñas from three Andean communities and its relationship with fibre quality using 115 fecal and 22 fibre samples, records of sex, age, body condition score, and management system. Coproparasitologic diagnostic revealed that 84.4% of animals presented at least one type of parasite egg/oocyst. Most frequent parasite egg/oocyst were Strongyle-type eggs (54.8%) and Eimeria punoensis (38.3%). Wild vicuñas had a higher prevalence of Strongyle-type eggs (91.4%) than semi-captive (38.8%) animals, and age was significative to Eimeria infection, crias (100%) had the highest frequency when compared to yearlings (84.2%) and adults (49.4%). Larvae identification revealed a strong influence of domestic animals on vicuña parasite community, presenting the first report of Bunostomum phlebotomum and Gaigeria pachyscelis in vicuñas from Southeastern Peru. Females had a significantly finer diameter of fibre (13.05 ± 0.73 µm) than males (14.22 ± 1.22 µm), and infection with Eimeria spp. affected negatively fibre diameter and resistance. Our resul... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

As Escherichia coli produtoras da toxina Shiga (STEC) são importantes patógenos humanos, causando desde diarréias até a síndrome hemolítica urêmica (SHU). Há diversos sorotipos associados a SHU, tais como O157:H7 e O113:H21. No Brasil o sorotipo O113:H21 ainda não aparece associado a SHU, embora seja frequentemente isolado de carcaças e fezes bovinas. Nosso grupo já investigou comparativamente as redes de coexpressão gênica (RCG) de STEC EH41 (associado à SHU) e Ec472/01 (isolado de fezes bovinas). A análise comparativa do perfil transcricional de EH41 e Ec472/01 revelou que somente EH41 expressa um conjunto de genes que inclui o regulador transcricional dicA. A maioria destes genes está situada em um único módulo transcricional e podem estar associados a fatores de virulência. Assim, este trabalho centrou-se numa abordagem de biologia de sistemas, integrando análises genômica e fenotípica da resposta de enterócitos Caco-2 à EH41 e Ec472/01. A análise genômica baseou-se no estudo temporal de RCG para compreender os mecanismos moleculares envolvidos na patogenicidade desses dois isolados. As alterações fenotípicas ocorridas nas células Caco-2 ao longo da exposição a cada um dos isolados de STEC foram visualizadas através de MEV. A análise genômica mostrou que o mecanismo molecular da resposta de Caco-2 durante a interação com EH41 ou Ec472/01 é claramente distinto. Nas redes do grupo Caco-2/EH41 as alterações topológicas incluíram a perda do status scale free e a sua recuperação, com o estabelecimento de uma nova hierarquia de genes na rede. Esses resultados se enquadram no modelo de redes para transição saúde-doença: a nova rede representa a resposta adaptativa da célula ao patógeno, o que não significa um retorno à normalidade. Já no grupo Caco-2/Ec472 as redes, após a perda do status scale free, não recuperam esse status até o final do período estudado, o que sugere um estado de transição mais prolongado para reorganização da hierarquia da rede. Mais ainda, através da caracterização dos módulos transcricionais, foi possível compreender dinamicamente os mecanismos moleculares envolvidos na resposta diferencial de Caco-2 aos dois isolados aqui estudados. STEC EH41 induz rapidamente a resposta inflamatória e apoptótica a partir da primeira hora de interação enterócito-bactéria. Por outro lado, células Caco-2 em contato com Ec472/01 ativam, a partir de uma hora, a fagocitose e, a partir da segunda hora, expressam moduladores da homeostase imune. A análise fenotípica das células Caco-2 mostrou, de forma nítida, uma maior destruição dos microvilos dos enterócitos em contato com EH41 do que com Ec472/01. Integrando os resultados genômicos e fenotípicos pode-se concluir que EH41 induz em Caco-2 - em comparação com Ec472/01 - maiores e mais rápidas alterações na expressão gênica global, além de uma resposta inflamatória e apoptótica excessiva, levando assim a alterações morfológicas mais pronunciadas nas células Caco-2. Em seu conjunto, esses resultados contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na patogenicidade das STECs associadas à SHU. Assim, as perspectivas de desenvolvimento deste trabalho deverão incluir a investigação de fatores de virulência e vias moleculares envolvidas na indução das respostas imunes que podem conduzir à SHU / Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) O113:H21 strains are associated with human diarrhea and some of these strains may cause hemolytic uremic syndrome (HUS). In Brazil O113:H21 strains are commonly found in cattle but, so far, were not isolated from HUS patients. Previously, our group conducted comparative gene co-expression network (GCN) analyses of two O113:H21 STEC strains: EH41, isolated from a HUS patient in Australia, and Ec472/01, isolated from bovine feces in Brazil. Differential transcriptome profiles for EH41 and Ec472/01 revealed a gene set exclusively expressed in EH41, which includes the dicA putative virulence factor regulator. GCN analysis showed that this set of genes constitutes an EH41 specific transcriptional module which may be associated to virulence factors. Therefore, in the present work a system biology approach was conducted to investigate the differential Caco-2 response - genomic and phenotypic - to EH41 (Caco-2/EH41) or to Ec472/01 (Caco- 2/Ec472) along enterocyte-bacteria interaction. The genomic analysis was based on temporal GCN data in order to gain a better understanding on the molecular mechanisms underlying the capacity to cause HUS. The phenotypic alterations in Caco-2 during enterocyte-bacteria interaction were assessed by scanning electronic microscopy (SEM). The genomic analysis showed that the molecular mechanism of Caco-2 response to EH41 or to Ec472/01 during enterocyte-bacteria interaction is clearly different. The GCN topological analyses for Caco-2/EH41 group revealed loss of the scale-free status after one hour of interaction, persistence of this condition along the second hour and establishment of a new gene hierarchy thereafter. These events resemble the network mechanism of health-disease transition. The new established network represents an adaptive cell response to the pathogen and not the return to a \"normal\" state. Conversely, the networks for Caco-2/Ec472 group showed a slow and progressive loss of the scale-free status without its restoration at the end of the time interval here studied. Through transcriptional module characterization it was possible to reveal the dynamic of the molecular mechanism involved in the Caco-2 differential responses to the STEC isolates. EH41 induces a rapid inflammatory and apoptotic response just after the first hour of enterocyte-bacteria interaction. Instead, the Caco-2 response to Ec472/01 is characterized by phagocytosis activation at the first hour, followed by the expression of immune response modulators after the second hour. SEM phenotypic analysis of Caco-2 cells along enterocyte-bacteria interaction showed more intense microvilli destruction in cells exposed to EH41, when compared to cells exposed to Ec472/01. The integration of genomic and phenotypic data allowed us to conclude that EH41, comparatively to Ec472/01, induces greater and precocious global gene expression alterations in Caco-2, what is related to excessive inflammatory and apoptotic responses. These responses are associated with the pronounced morphological alterations observed by SEM in Caco-2 cells exposed to EH41. Altogether, these results contribute for a better understanding of the molecular mechanism involved in STEC pathogenicity associated to HUS. Therefore, the future perspectives for the development of the present work should include the investigation of virulence factors and molecular pathways involved in the induction of immune responses leading to HUS

A esquistossomose é uma doença importante em saúde pública. Dos genes selecionados como diferencialmente expressos em esquistossômulos a partir do transcriptoma do S. mansoni, 56% foram confirmados por RT-PCR em tempo real. Entre eles, a proteína Ly6.5, está presente no tegumento de esquistossômulos e vermes adultos por âncoras de GPI. Não foi detectada a função de inibir o sistema complemento, mas pode estar envolvido na manutenção do tegumento. O gene SmVal7 revelou transcritos nas glândulas esofágicas de vermes adultos por hibridização in situ, enquanto a localização da proteína não está definida. Anexina está associada ao tegumento de esquistossômulos e vermes adultos, de maneira dependente de cálcio. A supressão do gene por RNAi não resultou em alteração fenotípica significativa em esquistossômulos in vitro. Foi observada atividade parcial de inibição de coagulação e potencial atividade de endocitose de anticorpos ligados à superfície. A imunização com rLy6.5, rSmVal7, rAneI-II ou rAneII-III não levou a redução da carga parasitária após desafio. / Schistosomiasis is an important disease in public health. Genes selected from the S. mansoni transcriptome, 56% of them were confirmed as differentially expressed in schistosomula by real time RT-PCR. Among them, the protein Ly6.5 is present in the tegument of schistosomula and adult worms by GPI anchors. The function of inhibiting the complement system was not detected, but it may be involved in maintenance of the tegument. The gene SmVal7 revealed transcripts in the esophageal glands of adult worms by in situ hybridization, while the localization of the protein is not defined. Annexin is associated with the membranes of the schistosomula and adult worms tegument in a calcium-dependent manner. The suppression of the gene by RNAi did not resulted in a significant phenotypic change in schistosomula in vitro. Parcial inhibition of the coagulation activity and potential function of endocytosis of membrane-bound antibodies were observed. Immunization with the rLy6.5, rSmVal7, rAneI or rAneII-II-III did not show reduction in worm burden recovery after challenge.

A boca é local de frequentes complicações relacionadas ao transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH) tais como xerostomia, disgeusia, disfagia, mucosite, infecções oportunistas e doença do enxerto contra hospedeiro (DECH). Sabe-se que estas complicações podem comprometer a qualidade de vida do paciente e interferir na morbidade pós-TCTH. O dentista é o profissional da saúde que deverá intervir no momento correto para tratar e minimizar esses efeitos secundários do TCTH. Para tanto é importante conhecermos o momento em que cada complicação ocorre para que a intervenção seja pronta e eficiente. O objetivo principal deste estudo foi identificar e quantificar as alterações bucais em indivíduos submetidos ao TCTH em cinco momentos consecutivos desde antes do início do condicionamento pré-TCTH até o dia 100 pós-TCTH. Como objetivos secundários buscamos investigar possíveis relações entre a severidade da mucosite oral e a manifestação da DECH com dados demograficos (sexo, idade), com o status de saude bucal (por meio dos índices IHO-S, CPOD, número de dentes cariados) e com a realização de adequação bucal pré-TCTH, e ainda, somente para a DECH, também foi investigada a possível relação entre esta doença com infecção sistêmica por citomegalovírus e com a manifestação de mucosite oral severa. Foram incluídos no estudo 27 indivíduos com doenças hematológicas do Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP), com idade 12 anos que receberam TCTH alogênico. Os indivíduos foram examinados em cinco momentos consecutivos. No primeiro momento, pré-TCTH, foi realizada a coleta de índices de saúde bucal e aplicação de questionário sobre o histórico de tratamentos odontológico prévios. Nos momentos de 10, 20, 60 e 100 dias pós-TCTH foram avaliadas as manifestações bucais presentes. A incidência de mucosite oral foi de 82,6% considerando todos os momentos avaliados. Mucosite oral severa, ou seja, graus 3 e 4 (OMS) foi observada em 57,9% dos pacientes avaliados nos momentos 2 e 3. Dez (37%) pacientes apresentaram GVHD em algum órgão, e destes, 8 (80%) apresentaram GVHD de boca. Infecção sistêmica por CMV foi diagnosticada em 6 (22,2%) pacientes. Concluímos que entre as queixas levantadas, dor bucal e disfagia foram as mais referidas. O período de maior incidência das complicações bucais foi nos segundo e terceiro momentos, ou seja, D+10 e D+20, representando deste forma, o período de maior morbidade do tratamento. Não houve associação entre a severidade de mucosite oral e idade, sexo, fonte de células, regime de condicionamento, número de dentes cariados, IHO-S, CPOD e preparo bucal pré-TCTH. Para a DECH a única relação encontrada foi para fonte de células, tendo sido observada menor chance de ocorrer DECH quando a fonte de células foi o sangue periférico. / The mouth is a well-known site of complications of the hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) such as dry mouth, dysgeusia, dysphagia, mucositis, opportunistic infections and graft versus host disease (GVDH). It is known that these complications can compromise the patients quality of life and morbidity post-HSCT. The dentist is the health professional who should interfere at the right time to treat and minimize these side effects of HSCT. Thus, it is important to know the time at which each complication occurs to be dynamic and efficient. The main objective of this study was to identify and quantify the oral complications in patients treated with HSCT in five consecutive moments starting before conditioning chemotherapy until day 100 post-HSTC. As secondary objectives we seek to investigate possible relationships between the severity of oral mucositis and the manifestation of GVHD with demographic data (gender, age), with the oral health status (IHO-S, CPOD, number of decayed teeth) and dental treatment previously HSCT, and, only for GVHD, was also investigated the possible relationship between this disease with systemic cytomegalovirus infection and the manifestation of severe oral mucositis. It was included in the study 27 patients with hematologic diseases who were admitted in the Unit of Bone Marrow Transplantation, Hospital of Clinics, Faculty of Medicine, University of Sao Paulo (HC-FMUSP), 12 years old whom received allogeneic HSCT. The subjects were examined in five consecutive moments. At the first moment, before HSCT, the oral health índex evaluation and a questionnaire about history of previous dental treatments were performed. Besides that, 10, 20, 60 and 100 days after HSCT they were evaluated for oral manifestations. Oral mucositis incidence was 82,6% and 57,9% of these patients presented severe mucositis. Ten (37%) patients had GVHD in any organ, and of these, 8 (80%) had oral GVHD. Infection by CMV was diagnosed in 6 (22.2%) patients. We conclude that among the complaints raised, mouth pain and dysphagia were the most mentioned. The period of increased incidence of oral complications was the second and third times (D +10 and +20), representing the increased morbidity period. There was no association between the severity of oral mucositis and age, sex, cell source, conditioning regimen, number of decayed teeth, IHO-S, CPOD and dental treatment pre-HSCT. For GVHD the only relation found was with source of cells, in which, GVHD was less likely to occur when the source of cells was peripheral blood.

O HPgV (Pegivirus Humano), conhecido anteriormente por GBV-C, causa infecção assintomática, persistente e com alta carga viral. Sendo o vírus de RNA sem patologia associada mais prevalente no mundo até os dias de hoje, os estudos in vitro ainda não foram capazes de mimetizar a replicação in vivo, permanecendo pouco esclarecidos vários aspectos de sua biologia. Estudos em macacos mostraram que os órgãos responsáveis pela maior replicação viral são o baço e a medula óssea, no entanto as células específicas permissíveis à infecção ainda não foram determinadas. Na década de 90, o HPgV ganhou notoriedade por diminuir os efeitos patológicos do HIV e aumentar a sobrevida de pacientes coinfectados HIV/HPgV, através da diminuição da ativação do sistema imune. Devido a essa característica, diversos estudos tentaram associar a presença de viremia a doenças hematológicas e um deles mostrou que a viremia de HPgV parece estar associada com o desenvolvimento de linfoma não- Hodgkin, porém muitas variáveis de confusão parecem influenciar esse resultado. Em conjunto, os dados mostram que o HPgV pode ter influência sobre a maturação e liberação de células progenitoras da medula óssea e, portanto, tornou-se primordial avaliar o impacto da viremia em pacientes com doenças hematológicas e definir o tropismo viral. Para tanto, o presente trabalho analisou a dinâmica de exposição à viremia de HPgV em pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT), em cadáveres autopsiados pelo Sistema de Verificação de Óbitos da Capital de São Paulo (SVOC-SP) e em pacientes submetidos à cirurgia de artroplastia pelo Instituto de Ortopedia e Traumatologia (IOT) do HCSP. A carga viral de HPgV foi mensurada por qRT-PCR em Tempo Real levando em consideração valores adquiridos com um curva padrão desenvolvida para este trabalho. Para os pacientes HSCT, o efeito da presença de viremia antes e após o procedimento foi avaliada quanto aos principais desfechos do transplante: doença enxerto-hospedeiro aguda (aGVHD), recaída da doença hematológica primária e mortalidade. Para amostras SVOC e IOT, células específicas dos tecidos (cérebro, fígado, baço, linfonodo, medula óssea e sangue) foram avaliadas quanto à quantidade de RNA viral de polaridade positiva e negativa, a fim de quantificar a replicação e definir o tropismo do vírus. Os resultados mostraram que a prevalência de HPgV encontrada nos pacientes HSCT foi maior do que em estudos similares: 42% para as amostra pré- HSCT e 31% para as amostras pós-HSCT; porém, para as amostras SVOC, a prevalência foi menor do que o esperado: 1,2%. A presença de alta carga viral de HPgV em pacientes HSCT foi associada com aumento da taxa de incidência de aGVHD (95% CI 1,05-5,37, p=0,038). Dada a alta prevalência de HPgV na população brasileira, é essencial confirmar esse achado em outras coortes, de modo a determinar se o monitoramento do HPgV pode beneficiar o cuidado a esses pacientes. Nas amostras SVOC e IOT, a medula óssea apresentou maior número de populações celulares com replicação viral, com destaque para as células B progenitoras e para as células dendríticas. Porém, devido às condições da coleta e do processamento das amostras, o tipo celular permissível à infecção não pôde ser identificado com clareza, portanto fazendo-se necessária a coleta de um número maior de amostras SVOC / HPgV (Human Pegivirus), previously known as GBV-C, causes asymptomatic, persistent and high viral load infection. To date, it is the most prevalent RNA virus without associated pathologies in the world, yet in vitro studies have not yet been able to mimic the in vivo replication, consequently many aspects of its biology remaining unclear. Studies in non-humam primatas have shown that the organs responsible for the greatest viral replication are spleen and bone marrow, however the specific cells permissible for infection have not yet been determined. In the 1990s, HPgV gained notoriety by decreasing the pathological effects of HIV and increasing the survival of coinfected HIV/HPgV patients, by decreasing the activation of the immune system. Because of this characteristic, several studies have attempted to associate the presence of viremia with haematological diseases, and one has shown that HPgV appears to be associated with the development of non-Hodgkin\'s lymphoma, but many confounding variables still seems to influence this outcome. Together, the data show that HPgV may influence the maturation and release of bone marrow progenitor cells and therefore it has become crucial to evaluate the impact of HPgV viremia in patients with haematological diseases and to define viral tropism. Therefore, the present study analyzed the dynamics of HPgV viremia exposure in patients submitted to hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), in cadavers autopsied by the São Paulo City Death Verification System (SVOC-SP) and in patients submitted to arthroplasty surgery by the Orthopedics and Traumatology Institute (IOT) of the Clinics Hospital of Sao Paulo. The HPgV was identified by real-time qRT-PCR and the viral load quantification was estimated by a standard curve developed for this work. For HSCT patients, the effect of viremia before and after the procedure was evaluated for the main transplant outcomes: acute graft vs host disease (aGVHD), relapse of primary haematological disease and mortality. For SVOC and IOT samples, tissue-specific cells (brain, liver, spleen, lymph node, bone marrow and blood) were evaluated for the amount of viral positive and negative RNA strains, in order to quantify replication and define virus tropism. The results showed that the prevalence of HPgV found in HSCT patients was higher than in similar studies: 42% for pre-HSCT samples and 31% for post-HSCT samples; however, for SVOC samples, the prevalence was lower than expected: 1.2%. The presence of high viral load of HPgV in HSCT patients was associated with an increase in the incidence rate of aGVHD (95% CI 1.05-5.37, p = 0.038). Given the high prevalence of HPgV in the Brazilian population, it is essential to confirm this finding in other cohorts, in order to determine if HPgV monitoring can improve the care of these patients. In the SVOC and IOT samples, the bone marrow presented a higher number of cell populations with viral replication, especially the progenitor B cells and the dendritic cells. However, due to the conditions of specimen collection and processing, the major permissible cell could not be clearly identified, thus making it necessary to collect a larger number of SVOC samples

Uma das principais complicações inerentes ao transplante de células-tronco hematopoiéticas é a doença do enxerto contra hospedeiro (DECH), que se trata da resposta imunológica contra os tecidos do receptor pelas células T do doador contidas no transplante. Este quadro é responsável por 15-30% das mortes que ocorrem após o transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas. Apesar dos recentes avanços para reduzir a incidência de DECH através de alternância de regimes profiláticos reduzindo a intensidade do condicionamento, são poucos os tratamentos efetivos. Recentemente, o potencial imunomodulador das células-tronco mesenquimais tornou-se o foco de vários estudos. Alguns autores descreveram a atuação destas células na redução da resposta imunológica através da inibição da proliferação de células T, representando um novo potencial terapêutico para DECH. Mediante esse conhecimento, investigamos o papel das células-tronco mesenquimais na proliferação, apoptose e na produção de citocinas por linfócitos T. Nossos resultados mostraram que a presença de células-tronco mesenquimais nas culturas regulam negativamente a proliferação de linfócitos T estimulados de forma independente de contato e a apoptose de forma parcialmente dependente de contato. Observamos também que linfócitos T virgens em diferenciação para Th17 na presença de células-tronco mesenquimais apresentam redução na capacidade de produzir duas importantes citocinas efetoras implicadas na DECH, o interferon gama (IFN-y) e a interleucina 17A (IL-17A). Investigamos se a prostaglandina E2 (PGE2), por depletar triptofano, estava envolvida com a diminuição de proliferação de linfócitos T quando em cultivo com células-tronco mesenquimais. Utilizamos nas culturas a indometacina (IDT), um anti-inflamatório bloqueador de cicloxigenase (COX 1 e 2) e portanto da via da PGE2. Entretanto, observamos que o bloqueio da via da PGE2 inibia ainda mais a proliferação de linfócitos T e isto ocorria de acordo com a dose de IDT. Com o resultado deste experimento concluímos que, se a proliferação de linfócitos é inibida pela depleção de triptofano do meio, ela não ocorre via PGE2. Entretanto ainda não conseguimos esclarecer se esta via é ativada por outras moléculas, ou se é esta a via realmente responsável pela inibição da proliferação de linfócitos. No que concerne a via de inibição de apoptose, mostramos que a cadeia alpha do receptor de IL-7 (CD127) está aumentada na superfície de linfócitos T quando em presença de células-tronco mesenquimais. Verificamos que o bloqueio de IL-7 nas culturas aumenta a apoptose em linfócitos, bem como sua adição causa diminuição de apoptose. Identificamos a produção intracelular de IL-7 nas células-tronco mesenquimais, relacionando estas células e IL-7 com a inibição de apoptose em linfócitos T nestas condições. Este trabalho gerou dados que permitiram a compreensão de alguns possíveis mecanismos pelos quais as MSCs podem atuar sobre linfócitos T ativados e/ou alorreativos; mecanismos estes que podem ser utilizados como base para futuras investigações na elucidação e prevenção da DECH / A major complication after hematopoietic stem cell transplantation is the graft versus host disease (GVHD), which is an immunological response of transplanted donor T cells against the recipient tissues; this outline is responsible for 15-30% of deaths that can occur after allogeneic hematopoietic stem cells transplant. Despite recent advances in reducing GVHD incidence by alternating prophylactic regimens, thus reducing the intensity of conditioning, there are few effective treatments. Recently, the immune modulatory potential of mesenchymal stem cells has become the focus of several studies. Some authors described the role of these cells in reducing immune response by inhibiting T cell proliferation, representing a potential new therapy for GVHD. Through this knowledge, we investigated the mesenchymal stem cells role into T lymphocytes proliferation, apoptosis and cytokine production. Our results showed that the presence of mesenchymal stem cells into the cultures downregulates the proliferation of stimulated lymphocytes independent of contact and apoptosis of stimulated lymphocytes in partially contact-dependent manner. We also observed during naive T lymphocytes differentiation into Th17 cells, that the mesenchymal stem cell presence reduces the lymphocyte ability in producing the GVHD major effectors cytokines, interferon gamma (IFN-y) and interleukin-17A (IL-17A). We investigated whether prostaglandin E2 (PGE2) was involved in the reduction of T lymphocytes proliferation, when cultured with mesenchymal stem cells, by tryptophan depletion. Indomethacin (IDT), an anti-inflammatory drug blocker of cyclooxygenase (COX 1 and 2) and therefore PGE2 pathway, was used. However, we observed that, according to IDT dose, blocking this pathway further inhibited lymphocyte proliferation. With this result we conclude that if lymphocyte proliferation is inhibited by tryptophan depletion, it does not occur via PGE2. However, we still cannot say whether this pathway is activated by other molecules, or if this pathway is actually responsible for T lymphocytes proliferation inhibition. Regarding the apoptosis inhibition in T lymphocytes, we show that the IL-7 receptor alpha chain (CD127) is increased on the surface of T lymphocytes when in the presence of mesenchymal stem cells. We found that IL-7 blockage in the cultures increases apoptosis in T lymphocytes, as well as their addition causes apoptosis decrease. We also identified the intracellular production of IL-7 on mesenchymal stem cells, linking these cells and IL-7 directly with apoptosis inhibition in T lymphocytes under these conditions This work has generated data that allowed the understanding of some possible mechanisms by which MSCs can act on activated and/or alloreactive T lymphocytes; mechanisms that can be used as a basis for future research in the elucidation and prevention of GVHD

A Doença Enxerto Contra Hospedeiro Associada à Transfusão (DECH-AT) é uma reação transfusional rara, porém fatal, que ocorre devido à presença de células T no sangue doado e que pode ser prevenida por meio da irradiação do sangue do doador e de seus componentes antes da transfusão. Assim, o controle de qualidade associado à irradiação do sangue é necessário para se garantir a qualidade do produto transfundido. Neste trabalho é proposta a caracterização e a adaptação da resposta do dosímetro Fricke para uso na dosimetria da irradiação de sangue, mais especificamente o Fricke Xilenol Gel (FXG). Este é um dosímetro químico radiocrômico, que apresenta as vantagens de ser tecido equivalente e de permitir a inferência espacial da dose absorvida dentro da faixa de doses usados na prevenção DECH-AT. Dessa maneira, de modo a possibilitar a inferência de dose absorvida em todo o intervalo utilizado na prevenção da DECH-AT (25 a 50 Gy), o FXG foi caracterizado e adaptado para aplicações dosimétricas envolvendo a irradiação de sangue e derivados. Os resultados com o novo dosímetro apontaram adequabilidade para toda a faixa necessária de doses absorvidas, com sensibilidade e desvanecimento temporal satisfatórios para aplicações rotineiras. Além disso, pela metodologia proposta neste trabalho, foi possível determinar as distribuições espaciais das doses absorvidas com o dosímetro proposto de uma maneira rápida e simples, mostrando assim que este dosímetro apresenta características convenientes para o controle de qualidade para a dosimetria da irradiação de sangue e de hemocomponentes. / The Transfusion Associated Graft Versus Host Disease (TA-GVHD) is a rare transfusion reaction, however fatal, which develops due to the presence of donor T lymphocytes in the donated blood and that can be avoided by the irradiation of the donated blood blood and blood components prior to transfusion. Thus, the associated quality control of blood irradiation is necessary to guarantee the quality of the transfused product. In this work it is proposed the characterization and adaptation of the response of a Fricke dosimeter to be used for dosimetry of blood irradiation, more especiafically the Fricke Xylenol Gel (FXG). This is a radiochromic chemical dosimeter, which presents advantages to be tissue equivalent and allows the spatial absorbed dose inference. In this manner, in a way to possibilitate the absorbed dose inference in the full interval used for the prevention of the TA-GVHD (25 to 50 Gy) the FXG was characterized and adapted for dosimetry applications involving blood and blood components irradiation. The results with the new dosimeter showed adequability for the necessary absorbed doses, with satisfactory sensibility and time fading for routine applications. Furthermore, according to the methodology proposed in this work, it was possible to determine the spatial absorbed dose distributions with the new dosimeter in an fast and simple way, showing that this dosimeter presents convenient characteristics for dosimetry quality control of irradiated the blood and blood components.