Introdução: A síndrome de Wiskott-Aldrich (SWA) é uma imunodeficiência primária rara ligada ao X caracterizada pela presença de eczema, trombocitopenia com ou sem microplaquetas e infecções recorrentes. Mais de 300 tipos de mutações associadas com o gene WAS foram descritas, incluindo oito hotspots. A diversidade destas mutações pode levar ao aparecimento de grande variabilidade nas apresentações clínicas, o que dificulta a previsão da evolução da doença baseada apenas nas manifestações iniciais. Além disso, há escassez de informações sobre a população brasileira. Objetivos: Descrever as características clínicas e genéticas de pacientes brasileiros com diagnóstico clínico de SWA. Resultados: Dezoito pacientes foram avaliados. Dezessete pacientes apresentaram os primeiros sintomas no primeiro ano de idade. Idade média para o início dos sintomas foi de 4,5 meses e média de tempo para o diagnóstico foi de 31,2 meses. Três pacientes (16,3%) foram diagnosticados após 10 anos de início dos sintomas. Dezessete pacientes (94,5%) apresentaram eczema. Os níveis plaquetários variaram entre 1.000 e 65.000/mm3 e nove pacientes (50%) apresentaram microtrombocitopenia. Dois pacientes (11,1%) apresentaram macroplaquetas. Dezesseis pacientes (88,9%) tiveram eventos hemorrágicos ao longo de suas vidas, especialmente sangramentos intestinais, urinários e petéquias. Em relação às manifestações infecciosas, otite média aguda foi a infecção mais frequente, relatada por 13 pacientes (72,2%), seguido por infecções cutâneas (66,7%). Três pacientes(16,6%) apresentaram manifestações autoimunes, incluindo nefropatia por IgA, trombose isquêmica e vasculite. A maioria dos pacientes (55,5%) não apresentou alterações nos níveis IgG. Níveis elevados de IgA só foram observados em 4 pacientes (23,5%). Redução dos níveis IgM foi observada em 7 pacientes (38,9%). Os pacientes foram classificados de acordo com um escore clínico previamente descrito. A maioria apresentou pontuações de 3 (33,3%) e 4 (27,8%). Quatro pacientes (22,2%) foram classificados com pontuação 5 devido às manifestações autoimunes ou neoplasias. Em relação à análise genética, foram encontradas mutações em 10 pacientes (55,5%). Apenas três das mutações encontradas neste estudo foram descritas previamente. Conclusão: As características clínicas dos pacientes brasileiros foram semelhantes às características observadas em outras populações, porém a análise genética revelou mutações ainda não descritas. / Introduction: Wiskott-Aldrich syndrome (WAS) is a rare X-linked primary immunodeficiency characterized by eczema, thrombocytopenia with or no small sized platelets and recurrent infections. More than 300 types of mutations associated with the WAS gene have been described, including eight hotspots. The diversity of these mutations can lead to the appearance of great variation in the clinical presentations, which makes it difficult to predict the evolution of the disease based only on the initial manifestations. Furthermore, there is paucity of information on WAS from the Brazilian population. Objectives: To describe the clinical and genetic characteristics of Brazilian patients with clinical diagnose of WAS. Results: Eighteen patients were evaluated. Seventeen patients presented first symptoms within first year of age. Mean age for initiating symptoms was 4,5 months and mean time for diagnosis was 31,2 months. Three patients (16.6%) were diagnosed after 10 years of initiating symptoms. Seventeen patients (94.5%) had eczema. The platelet levels ranged from 1,000 to 65,000/mm3 and nine patients (50%) presented microthrombocytopenia. Two patients (11.1%) had macroplatelets. Sixteen patients (88.9%) had hemorrhagic events throughout their lives, especially intestinal, urinary and petechial bleedings. In relation to infectious manifestations, acute media otitis was the most frequent infection, reported by 13 patients (72.2%), followed by skin infections (66.7%). Three patients (16.6%) had autoimmune manifestations including IgA nephropathy,ischemic stroke and vasculitis. Most patients (55.5%) did not present alterations in IgG levels. Twelve patients (70.6%) did not present alterations in IgA levels and elevated levels of IgA were only observed in 4 patients (23.5%). Reduction of IgM levels was observed in 7 patients (38.9%). Patients were classified according to a previously described clinical score. Most patients presented scores of 3 (33.3%) and 4 (27.8%). Four patients (22.2%) were classified with score 5 due to autoimmune or neoplastic manifestations. Regarding genetic analysis, mutations were found in 10 patients (55.5%). Only three of mutations found in this study were previously described. Conclusion: Clinical characteristics of Brazilian patients were similar to medical features observed in other populations, however genetic analysis showed undescribed mutations yet

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:18Z : No. of bitstreams: 1 000842360_20151108.pdf: 387370 bytes, checksum: 631e8b48aea68bc38f5c085f7c65b648 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-10T12:03:46Z: 000842360_20151108.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-10T12:04:32Z : No. of bitstreams: 1 000842360.pdf: 1540751 bytes, checksum: fdf8249df089cc2e3eb6a81bba6c7dc5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O câncer de mama é uma das maiores causas de morte dentre as mulheres, seguido pelo câncer de colo de útero. Os tratamentos geralmente utilizados são extremamente agressivos e na maioria das vezes causando efeitos deletérios as células do hospedeiro. Os macrófagos são as primeiras células a serem ativadas para participar de uma resposta imunológica propriamente dita, são células capazes de secretar mais de cem produtos biologicamente ativos, entre esses, espécies reativas de nitrogênio e citocinas que atuam no contexto da resposta imunológica e/ou inflamatória. Qualea grandiflora Mart (Q. grandiflora) da família Vochysiaceae é uma planta do cerrado brasileiro, utilizada na medicina popular no tratamento de úlceras, gastrites, amebíase, diarréia com sangue, cólicas intestinais e inflamações. Estudos realizados anteriormente em nosso laboratório demonstraram que espécies de Qualea sp. apresentou atividade antitumoral in vitro extremamente seletiva para tumor de mama murino (linhagem LM3) e ainda apresenta características anti-inflamatórias através da inibição expressiva da produção dos mediadores imunológicos NO, IL-1 e IL-12 pelos macrófagos peritoneais murinos ativados com LPS. A partir destes resultados, propusemos avaliar neste trabalho uma forma alternativa de tratamento contra o câncer de mama experimental empregando-se um extrato bruto (EH), uma fração terpênica (FT) derivada do extrato hexânico de Q. grandiflora e a substância isolada β-sitosterol (BS), em modelo experimental de Ehrlich concomitante à avaliação dos efeitos imunológicos das substâncias testadas, no animal. Como droga padrão dos experimentos realizados, utilizou-se o Taxol® (Paclitaxel- TX). Foi determinado in vitro a citotoxicidade celular de células do exsudado peritoneal de camundongos e células tumorais de Ehrlich, após incubação com os diferentes tratamentos pela técnica de MTT, analise da angiogênese pela dosagem... / Breast cancer is a leading cause of death among women, followed by cervix cancer. The treatments normally used are highly aggressive, and most often causing deleterious effects on host cells. Macrophages are the first cells to be activated to participate in an immune response itself, cells are able to secrete more than hundred biologically active products, among these, reactive nitrogen species and cytokines that act in the context of immune and / or inflammatory. Qualea grandiflora Mart (Q. grandiflora) family Vochysiaceae is a plant of the Brazilian Cerrado, used in folk medicine in the treatment of ulcers, gastritis, amebiasis, bloody diarrhea, intestinal cramps and inflammation. Previous studies in our laboratory have shown that species Qualea sp. showed in vitro antitumor activity extremely selective murine breast tumor (line LM3) and also has anti-inflammatory characteristics by the significant inhibition of the production of immune mediators NO, IL-1 and IL-12 by murine peritoneal macrophages activated with LPS. From these results, we propose to evaluate this work an alternative form of treatment for breast cancer by employing a crude extract (EH), a fraction terpene (FT) derived from the hexane extract of Q. grandiflora and substance isolated β-sitosterol (BS) in an experimental model of Ehrlich concomitant evaluation of the immunological effects of the tested substances in the animal. As standard drug of experiments, we used Taxol ® (Paclitaxel-TX). It has been determined in vitro cytotoxicity of peritoneal exudate cells of mice and Ehrlich tumor cells after incubation with the different treatments using the technique of MTT analysis of VEGF angiogenesis by measuring the ocorência apoptosis in tumor cells by techniques Tunel and annexin V as well as the inhibition of nitric oxide (NO) and TNF-α, IL-1, IL-12 and IL-6. In addition, it was determined the rate of in vivo tumor inhibition and histological analysis by light ...

Orientador : Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Fernanda de Freitas Aníbal / Banca: Luis Vitor da Silva Sacramento / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: \denise Fecchio / Resumo: O câncer de mama é uma das maiores causas de morte dentre as mulheres, seguido pelo câncer de colo de útero. Os tratamentos geralmente utilizados são extremamente agressivos e na maioria das vezes causando efeitos deletérios as células do hospedeiro. Os macrófagos são as primeiras células a serem ativadas para participar de uma resposta imunológica propriamente dita, são células capazes de secretar mais de cem produtos biologicamente ativos, entre esses, espécies reativas de nitrogênio e citocinas que atuam no contexto da resposta imunológica e/ou inflamatória. Qualea grandiflora Mart (Q. grandiflora) da família Vochysiaceae é uma planta do cerrado brasileiro, utilizada na medicina popular no tratamento de úlceras, gastrites, amebíase, diarréia com sangue, cólicas intestinais e inflamações. Estudos realizados anteriormente em nosso laboratório demonstraram que espécies de Qualea sp. apresentou atividade antitumoral in vitro extremamente seletiva para tumor de mama murino (linhagem LM3) e ainda apresenta características anti-inflamatórias através da inibição expressiva da produção dos mediadores imunológicos NO, IL-1 e IL-12 pelos macrófagos peritoneais murinos ativados com LPS. A partir destes resultados, propusemos avaliar neste trabalho uma forma alternativa de tratamento contra o câncer de mama experimental empregando-se um extrato bruto (EH), uma fração terpênica (FT) derivada do extrato hexânico de Q. grandiflora e a substância isolada β-sitosterol (BS), em modelo experimental de Ehrlich concomitante à avaliação dos efeitos imunológicos das substâncias testadas, no animal. Como droga padrão dos experimentos realizados, utilizou-se o Taxol® (Paclitaxel- TX). Foi determinado in vitro a citotoxicidade celular de células do exsudado peritoneal de camundongos e células tumorais de Ehrlich, após incubação com os diferentes tratamentos pela técnica de MTT, analise da angiogênese pela dosagem... / Abstract: Breast cancer is a leading cause of death among women, followed by cervix cancer. The treatments normally used are highly aggressive, and most often causing deleterious effects on host cells. Macrophages are the first cells to be activated to participate in an immune response itself, cells are able to secrete more than hundred biologically active products, among these, reactive nitrogen species and cytokines that act in the context of immune and / or inflammatory. Qualea grandiflora Mart (Q. grandiflora) family Vochysiaceae is a plant of the Brazilian Cerrado, used in folk medicine in the treatment of ulcers, gastritis, amebiasis, bloody diarrhea, intestinal cramps and inflammation. Previous studies in our laboratory have shown that species Qualea sp. showed in vitro antitumor activity extremely selective murine breast tumor (line LM3) and also has anti-inflammatory characteristics by the significant inhibition of the production of immune mediators NO, IL-1 and IL-12 by murine peritoneal macrophages activated with LPS. From these results, we propose to evaluate this work an alternative form of treatment for breast cancer by employing a crude extract (EH), a fraction terpene (FT) derived from the hexane extract of Q. grandiflora and substance isolated β-sitosterol (BS) in an experimental model of Ehrlich concomitant evaluation of the immunological effects of the tested substances in the animal. As standard drug of experiments, we used Taxol ® (Paclitaxel-TX). It has been determined in vitro cytotoxicity of peritoneal exudate cells of mice and Ehrlich tumor cells after incubation with the different treatments using the technique of MTT analysis of VEGF angiogenesis by measuring the ocorência apoptosis in tumor cells by techniques Tunel and annexin V as well as the inhibition of nitric oxide (NO) and TNF-α, IL-1, IL-12 and IL-6. In addition, it was determined the rate of in vivo tumor inhibition and histological analysis by light ... / Doutor

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:00Z : No. of bitstreams: 1 000865792_20170703.pdf: 136663 bytes, checksum: 598a2569b5cb9578699b2241ca94ae90 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-07-24T11:34:12Z: 000865792_20170703.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-07-24T11:35:17Z : No. of bitstreams: 1 000865792.pdf: 3649957 bytes, checksum: a33acc20fc89748c7c69172c8ee96434 (MD5) / A esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica que afeta seres humanos e outros mamíferos, causada pelo complexo de espécies Sporothrix schenckii. A doença tem uma distribuição mundial, mas é endêmica no Brasil, principalmente no estado do Rio de Janeiro, onde o gato tem se tornado o principal agente transmissor. O tratamento antifúngico convencional é demorado e está associado a efeitos adversos, apontando a necessidade de terapias mais eficazes e seguras, sendo a vacinação profilática ou terapêutica provavelmente a alternativa mais promissora. Neste estudo foi avaliada a imunogenicidade e a toxicidade de candidatos vacinais à base de proteínas da superfície celular (PSCs) de S. schenckii stricto sensu. As PSCs isoladas com o agente redutor Ditiotreitol foram caracterizadas por eletroforese, espectrometria de massas e pelo programa preditor de adesinas FungalRV. As PCSs foram formuladas com dois adjuvantes, hidróxido de alumínio (HA) ou Gel PetA, em duas concentrações ou usadas isoladamente. As formulações resultantes (PSC10, PSC100, HA+PSC10, HA+PSC100, PetA+PSC10 e PetA+PSC100) foram administradas em duas doses pela via subcutânea em camundongos Balb/C com intervalo de 2 semanas. O soro obtido de cada grupo sete dias após a segunda dose foi usado para analisar a imunogenicidade de cada formulação. O soro de todos os grupos vacinados, exceto os grupos PSC10 e HA+PSC10, reagiram com uma banda de 47 kDa, previamente identificada como a enzima glicolítica enolase e predita como uma adesina pela base dados FungalRV. Posteriormente foi demonstrada por citometria de fluxo a presença dessa proteína na parede celular de S. schenckii, sugerindo o papel imunogênico da mesma. A indução das imunoglobulinas IgG e IgG2a foi significativamente maior com HA+PSC100 e Pet+PSC100 em relação a PSC10, PSC100, HA+PSC10 e PetA+PSC10. A indução... / Sporotrichosis is a subacute or chronic infection affecting humans and other mammals, caused by the Sporothrix schenckii species complex. The disease has a worldwide distribution, but is considered endemic in Brazil, mainly in the state of Rio de Janeiro, where the cat has become the main transmitting agent. The antifungal treatment is very long and often associated to adverse effects indicating the demand for preventive or more effective and safe therapeutic strategies. One of the more promissory approaches would probably be the prophylactic or therapeutic vaccination. This study evaluated the immunogenicity and toxicity of cell surface protein-based (CSP) vaccine candidates of S. schenckii stricto sensu. The CSPs isolated with dithiotreitol were characterized by electrophoresis, mass spectrometry and FungalRV adhesin predictor. The CSPs were formulated with two adjuvants, aluminum hydroxide (AH) or gel PetA, or used alone, in two concentrations. The obtained formulations (CSP10, CSP100, AH+CSP10, AH+CSP100, PetA+ CSP10 and PetA+ CSP100) were administered to Balb/C mice in two subcutaneous doses at 2 weeks interval. The serum obtained from each group 7 days after the second dose was used to analyze the immunogenicity of each formulation. All the serum obtained from vaccinated groups, except those from CSP10 and AH+CSP10 groups, reacted with a 47 kDa band, previously identified as the glycolytic enolase enzyme and predicted as an adhesin in the FungalRV program. Subsequently, we demonstrated the presence this protein in the cell wall of S. schenckii, suggesting its immunogenic role. The induction of IgG and IgG2a immunoglobulins was significantly higher with AH+CSP100 and PetA+CSP100 formulations with respect to CSP10, CSP100, AH+CSP10, and PetA+CSP10. The significant induction of IgG1 and IgG2a subtypes and IL-12, IFN-γ, IL4 and IL-17 by AH+CSP100, suggests a balance ...

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Coorientador: Alexander Batista Duharte / Banca: Fanny Guzman Quimbayo / Banca: Sandro Antonio Pereira / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: Angela Maria Victoriano Campos Soares / Resumo: A esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica que afeta seres humanos e outros mamíferos, causada pelo complexo de espécies Sporothrix schenckii. A doença tem uma distribuição mundial, mas é endêmica no Brasil, principalmente no estado do Rio de Janeiro, onde o gato tem se tornado o principal agente transmissor. O tratamento antifúngico convencional é demorado e está associado a efeitos adversos, apontando a necessidade de terapias mais eficazes e seguras, sendo a vacinação profilática ou terapêutica provavelmente a alternativa mais promissora. Neste estudo foi avaliada a imunogenicidade e a toxicidade de candidatos vacinais à base de proteínas da superfície celular (PSCs) de S. schenckii stricto sensu. As PSCs isoladas com o agente redutor Ditiotreitol foram caracterizadas por eletroforese, espectrometria de massas e pelo programa preditor de adesinas FungalRV. As PCSs foram formuladas com dois adjuvantes, hidróxido de alumínio (HA) ou Gel PetA, em duas concentrações ou usadas isoladamente. As formulações resultantes (PSC10, PSC100, HA+PSC10, HA+PSC100, PetA+PSC10 e PetA+PSC100) foram administradas em duas doses pela via subcutânea em camundongos Balb/C com intervalo de 2 semanas. O soro obtido de cada grupo sete dias após a segunda dose foi usado para analisar a imunogenicidade de cada formulação. O soro de todos os grupos vacinados, exceto os grupos PSC10 e HA+PSC10, reagiram com uma banda de 47 kDa, previamente identificada como a enzima glicolítica enolase e predita como uma adesina pela base dados FungalRV. Posteriormente foi demonstrada por citometria de fluxo a presença dessa proteína na parede celular de S. schenckii, sugerindo o papel imunogênico da mesma. A indução das imunoglobulinas IgG e IgG2a foi significativamente maior com HA+PSC100 e Pet+PSC100 em relação a PSC10, PSC100, HA+PSC10 e PetA+PSC10. A indução... / Abstract: Sporotrichosis is a subacute or chronic infection affecting humans and other mammals, caused by the Sporothrix schenckii species complex. The disease has a worldwide distribution, but is considered endemic in Brazil, mainly in the state of Rio de Janeiro, where the cat has become the main transmitting agent. The antifungal treatment is very long and often associated to adverse effects indicating the demand for preventive or more effective and safe therapeutic strategies. One of the more promissory approaches would probably be the prophylactic or therapeutic vaccination. This study evaluated the immunogenicity and toxicity of cell surface protein-based (CSP) vaccine candidates of S. schenckii stricto sensu. The CSPs isolated with dithiotreitol were characterized by electrophoresis, mass spectrometry and FungalRV adhesin predictor. The CSPs were formulated with two adjuvants, aluminum hydroxide (AH) or gel PetA, or used alone, in two concentrations. The obtained formulations (CSP10, CSP100, AH+CSP10, AH+CSP100, PetA+ CSP10 and PetA+ CSP100) were administered to Balb/C mice in two subcutaneous doses at 2 weeks interval. The serum obtained from each group 7 days after the second dose was used to analyze the immunogenicity of each formulation. All the serum obtained from vaccinated groups, except those from CSP10 and AH+CSP10 groups, reacted with a 47 kDa band, previously identified as the glycolytic enolase enzyme and predicted as an adhesin in the FungalRV program. Subsequently, we demonstrated the presence this protein in the cell wall of S. schenckii, suggesting its immunogenic role. The induction of IgG and IgG2a immunoglobulins was significantly higher with AH+CSP100 and PetA+CSP100 formulations with respect to CSP10, CSP100, AH+CSP10, and PetA+CSP10. The significant induction of IgG1 and IgG2a subtypes and IL-12, IFN-γ, IL4 and IL-17 by AH+CSP100, suggests a balance ... / Doutor

O objetivo deste trabalho foi avaliar a infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) em indivíduos de Londrina e regiões circunvizinhas. Amostras de doadores de sangue e de indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) foram analisadas pela metodologia de enzimaimunoensaio de micropartículas (MEIA), obtendo-se a freqüência de positividade para anticorpos anti-HCV de 0,8% e de 20,2%, respectivamente. Um conjunto de 185 amostras soropositivas para anti-HCV pelo MEIA foi submetido a outros testes laboratoriais, para avaliação da correlação entre os diferentes métodos empregados. Apenas 79% destas amostras apresentaram resultado reagente em um segundo teste imunoenzimático (ELISA) empregado, sendo que a maior proporção de resultados discordantes ocorreu entre doadores de sangue. O mesmo ocorreu na pesquisa do RNA viral, onde 111 (67%) das 166 amostras analisadas apresentaram resultado positivo, sendo que a positividade foi maior entre indivíduos HIV soropositivos e pacientes com hepatite crônica do que entre os doadores de sangue. Quinze amostras foram submetidas ao immunoblot (IB), tendo-se obtido resultados positivos neste teste apenas nas amostras reagentes nos dois métodos imunoenzimáticos utilizados. Também pudemos verificar um grande número de amostras com resultado indeterminado no IB, inclusive entre amostras que eram negativas no segundo teste sorológico. Embora a amostragem fosse pequena, com apenas 61 amostras analisadas, a genotipagem do HCV revelou que os genótipos circulantes em nossa região são o tipo 1 (77,1%), seguido do tipo 3 (21,3%) e o tipo 2 (1,6%). Finalmente, avaliamos alguns fatores de risco associados à infecção pelo HCV, sendo que o principal fator de risco encontrado em indivíduos co-infectados pelo HIV/HCV foi o uso de drogas injetáveis, e em indivíduos sem infecção pelo HIV foi a transfusão sangüínea. O presente estudo contribuiu para a avaliação do perfil da infecção pelo HCV em indivíduos da nossa população, permitindo inclusive verificar a distribuição dos genótipos do HCV nesta região. / The objective of this work was to evaluate hepatitis C virus (HCV) infection in individuals of Londrina, Paraná State, Brazil, and adjacent areas. Samples of blood donors and individuals infected with Human Immunodeficiency virus (HIV) were analyzed by microparticle enzyme immunoassay (MEIA). Anti-HCV antibody frequency was 0.8% in blood donors, and 20.2% in HIV patients. A group of 185 anti-HCV positive samples by MEIA was submitted to other laboratorial tests, in order to access the correlation among different methods used. Only 79% of samples were reactive by a second antibody-screening test (enzime-linked immunosorbent assay - ELISA), and a great proportion of discordant results was verified among blood donors. The same happened at HCV-RNA detection by polymerase chain reaction (PCR), where 111/166 (67%) of samples showed positive results, which was greater among HIV positive individuals and patients with chronic hepatitis than among blood donors. Only 15 samples were submitted to immunoblot (IB): positive results were obtained only at samples which were also reactive by the two antibody-screening tests used. We could also verify a great number of anti-HCV indeterminate results by IB, which also happened among samples tested negative by the second serologic assay. Although the small number of samples used in genotype determination of HCV, only 61, our data revealed that the circulating genotypes in our region are type 1 (77.1%), followed by type 3 (21.3%) and type 2 (1.6%). Finally, we evaluated some risk factors associated to HCV infection, and we found that intravenous drug use was the most common risk factor among patients HIV/HCV co-infected, while blood transfusion was the most important risk factor in the group without HIV infection. The present study contributed to the evaluation of HCV infection in our population, so that the distribution of HCV genotypes in the region could be accessed.

As gastroenterites ainda são um importante problema de saúde pública nos países em desenvolvimento e as Escherichia colí são as principais causas de diarréias. Adultos brasileiros apresentam anticorpos reativos com E. colí enteropatogênica (EPEC), que apresenta muitas semelhanças com E. colí enterohemorágica (EHEC) e pode ser responsável por complicações como a síndrome hemolítica urêmica e a colite hemorrágica. Ambas as bactérias apresentam um mecanismo patogênico comum: a formação da lesão \"attaching and effacing\" nos microvilus dos enterócitos, mediadas por fatores de virulência, como Intimina, Tir e as Esps. Os lipopolissacarídeos (LPS) são componentes da membrana externa das bactérias gram-negativas, incluindo E. colí. A infecção por EHEC 0157 resulta na produção de anticorpos séricos antiLPS 0157, que geralmente são indicativos de infecção recente. Neste trabalho, nós investigamos a presença de anticorpos séricos IgG e IgM anti-EHEC 0157:H7, EHEC 0111:H- e EPEC 0111:H- em adultos brasileiros, da Grande São Paulo. Amostras de soro foram coletadas de 200 adultos saudáveis, doadores de sangue, e um pool foi formado com 100 amostras. Anticorpos foram determinados em 100 amostras individuais por ELlSA com bactérias íntegras e anti-LPS para a determinação de anticorpos específicos anti-LPS 0111 e 0157 com o \"pool\" de soro como controle, em relação às concentrações de IgG e IgM totais determinadas simultaneamente. Os resultados foram submetidos a análise estatística. O repertório de anticorpos IgG e IgM para as três bactérias foi investigado por \"immunoblotting\" (18). A presença de anticorpos anti-bacterianos e anti-LPS foi confirmada. Existe uma correlação positiva entre os anticorpos reativos com as três bactérias, e entre os anticorpos anti-bactéria e anti-LPS. As concentrações de IgM anti-LPSs foi mais alta que IgG, o que está de acordo com o mecanismo imune esperado para um antígeno timo-independente. As concentrações de anti-LPS 0157 foram altas, apesar da baixa freqüência da bactéria 0157 em nosso meio. Os ensaios de 18 mostraram anticorpos reativos com bandas antigênicas sugestivas de fatores de virulência. A origem destes em nossa população poderia ser o contato com bactérias da microbiota ou do ambiente, de animais ou alimentos. Alternativamente, nossa população pode estar exposta à EHEC mais freqüentemente do que imaginado até agora. / Gastroenteritis is still an important public health problem in developing countries and Escherichia coli are frequent agents of diarrhea. Brazilian adults present antibodies reactive with the principal virulence factors of enteropathogenic E. coli (EPEC), which have many genetic and antigenic similarities with enterohemorrhagic E. coli (EHEC), that may be responsible for complications following diarrhea, as haemolytic uremic syndrome (HUS) and hemorrhagic colitis (HC). Both bacteria present a common pathogenic mechanism, with the formation of “attaching and effacing” lesion in microvilis’ enterocytes, mediated by virulence factors codified by the patogenicity island LEE, as Intimin, Tir e Esps. Lipopolysaccharides (LPS) are components of outer membrane and important virulence factors of Gram-negative bacteria including E. coli. The infection with EHEC O157 results in the production of serum antibodies to the O157 LPS antigens, and usually they are indicators of recent infection. In this work we investigated IgG and IgM serum antibodies reactive with EHEC O157:H7, EHEC O111:H- and EPEC O111:H- antigens in healthy Brazilian adults, living in São Paulo. Serum samples were collected from 200 healthy adults (blood donors) and a pool was formed with 100 samples. The antibody levels were determined by ELISA for 100 individual serum samples by means of a whole cell ELISA with the three bacteria and an anti-LPS ELISA for the determination of the concentrations of specific antibodies anti-LPS O111 and O157, using the serum pool as control, in relation to the total IgG and IgM concentrations determined simultaneously. The results were submitted to statistical analysis. The repertoire of IgG and IgM antibodies to the three bacteria was investigated by immunoblotting (IB). The presence of anti-bacterial and anti-LPS seric antibodies was confirmed. There is a positive correlation between the titers of antibodies reactive with the three bacteria and between anti-bacteria and anti-LPS antibodies. The concentrations of IgM anti-LPSs were significantly higher than IgG, which is in accordance with the immune mechanism expected to a thymus-independent antigen. Surprisingly the concentrations of anti-LPS O157 were high taking into account the low frequency of O157 bacteria isolation in our country. The IB assays showed the presence of antibodies, mainly IgG, reactive with many antigenic bands suggestive of virulence factors. The origin of anti-EHEC antibodies in our population could be the contact with microbiota or environment bacteria, and animal or human E. coli strains, pathogenic or not. Alternatively, our people may be exposed to EHEC more frequently than previously thought.

A diarréia é um importante problema de saúde pública no mundo inteiro e a Escherichia coli é um dos mais freqüentes microorganismos causadores desta doença. A Escherichia coli enteropatogênica (EPEC), um dos principais agentes etiológicos das diarréias infantis no nosso país, é genética e fenotipicamente relacionada com a E. coli enterohemorrágica (EHEC) que além de provocar diarréia é responsável por complicações como síndrome hemolítica urêmica (HUS) e colite hemorrágica (HC). Embora a EHEC seja considerada emergente pela OMS, no Brasil poucos casos de complicações como HUS e HC foram reportados. O mecanismo de patogenicidade comum entre EPEC e EHEC é conhecido como a lesão \"attaching and effacing\" nos microvilos do enterócito. Esta lesão é mediada por um conjunto de fatores de virulência, dentre eles a intimina. A intimina é uma proteína de membrana externa, responsável pelo íntimo contato da bactéria com o enterócito, possui uma região N-terminal que é altamente conservada e uma região C-terminal que é variável. De acordo com a região variável, existem vários subtipos de intimina, dentre eles as intiminas α β e γ. Uma infecção por EPE-C ou EHE-C induz a uma resposta de anticorpos anti-intimina no soro e no colostro. No presente trabalho, foram determinados os anticorpos contra as regiões variáveis α β e γ e a região conservada em 100 amostras de soro e em 54 colostros de adultos saudáveis da Grande São Paulo. As concentrações de IgG sérico e de IgA secretora foram determinadas por ELISA utilizando como antígeno proteínas purificadas obtidas de bactérias recombinantes de cada intimina e os resultados foram submetidos a análise estatística. Foram também realizadas absorções com as bactérias recombirrantes e ensaios de inibição de adesão. Primeiramente observamos que nossa população apresenta anticorpos séricos e secretores reativos com a região conservada e as regiões variáveis das intiminas α β e γ, e que existe uma correlação positiva entre os, diferentes grupos de dados, mostrando assim uma reatividade cruzada parcial entre os anticorpos anti-intiminas, este fato foi confirmado com as absorções e com os ensaios de adesão. A concentração de anticorpos IgA no colostro é mais alta que IgG no soro e a concentração de anticorpos anti-região conservada da intimina no soro se encontra elevada quando comparada com as outras três determinações. Em ensaio de adesão em células HEp-2, foi verificado que anticorpos anti-região variável inibem a adesão de EPEC 0127:H6 numa porcentagem maior que os anticorpos anti-região conservada. Apresença de anticorpos anti-região variável da intimina γ sugere mais uma vez a possível proteção contra a EHEC. Em conjunto, nossos resultados corroboram com a idéia de que nossa população desenvolve uma imunidade natural resultante da exposição a linhagens de E. Coli ou outras bactérias presentes no ambiente, que confere uma proteção contra. EHEC, mesmo não sendo esta bactéria tão freqüente no nosso meio. / Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a leading cause of infantile diarrhea in developing countries, and has many genetic and antigenic similarittes with enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC). EHEC can cause a variety of uman illnesses ranging from uncomplicated diarrhea to haemorrhagic colitis and haemolytic uremic syndrome. EHEC strains share with EPEC the ability to induce the attaching and effacing lesion (A/E) onto the human enterocyte membrane mediated by virulence factors codified by the patogenicity island LEE, as the type III secretion system, Esps, intimin and Tir. The infection with EPEC and EHEC induces the production of antibodies reactive with these virulence factors. Intimin is an outer membrane protein that mediates intimate attachment in the host cells, upon interaction with its- translocated receptor Tir. This protein shows high conservationin the N-terminal region and variability in the last C-terminal 280 amino acids. Many subtypes of intimins, like α, β and γ, were described according to the variable region. In this work we determined the concentration of IgG antibodies in 100 serum samples and IgA antibodies in 54 colostrum samples reactive with the variable regions α, β and γ intimins and the conserved region in healthy Brazilian adutts, living in São Paulo. The concentrations of seric IgG and secretor IgA anti-intimin antibodies were determined by ELISA with purified proteins obtained from recombinant bacteria expressing the conserved and the variable regions, and then the results were submitted to statistical analysis. Some absorptions and adhesion assays were performed with the aim of investigate cross reactions among the various antibodies. Firstly we observed that our poputation has seric and secretory antibodies reactive with conserved and variable regions of α, β and γ intimins, and there are a positive correlation among these antibodies in serum and colostrum, showing a partial cross reactivity among anti-intimins antibodies. This was confirmed by the absorptions and adhesion assays. IgA antibodies in colostrum were higher than IgG in serum, what could be related with the profective effect of breastfeeding against EPEC infection in infants. The seric antibodies anti-conserved region were higher compared to the other three determinations. The results obtained in the adhesion assays showed that the percentage of inhibition adhesion to EPEC 0127:H6 serotype with anti-variable regions antibodies was higher than anti-conserved regions. The presence of anti-γ variable region suggests the possible protection against EHEC. Taken together, our results suggest that our population develop a natural immunity as a result of the direct contact with E. coli strains or other bacteria present in the environment, which confers protection against EHEC, although it is not frequent in our population.

A diarréia é um importante problema de saúde pública no mundo inteiro e a Escherichia coli é um dos mais freqüentes microorganismos causadores desta doença. A Escherichia coli enteropatogênica (EPEC), um dos principais agentes etiológicos das diarréias infantis no nosso país, é genética e fenotipicamente relacionada com a E. coli enterohemorrágica (EHEC) que além de provocar diarréia é responsável por complicações como síndrome hemolítica urêmica (HUS) e colite hemorrágica (HC). Embora a EHEC seja considerada emergente pela OMS, no Brasil poucos casos de complicações como HUS e HC foram reportados. O mecanismo de patogenicidade comum entre EPEC e EHEC é conhecido como a lesão \"attaching and effacing\" nos microvilos do enterócito. Esta lesão é mediada por um conjunto de fatores de virulência, dentre eles a intimina. A intimina é uma proteína de membrana externa, responsável pelo íntimo contato da bactéria com o enterócito, possui uma região N-terminal que é altamente conservada e uma região C-terminal que é variável. De acordo com a região variável, existem vários subtipos de intimina, dentre eles as intiminas α β e γ. Uma infecção por EPE-C ou EHE-C induz a uma resposta de anticorpos anti-intimina no soro e no colostro. No presente trabalho, foram determinados os anticorpos contra as regiões variáveis α β e γ e a região conservada em 100 amostras de soro e em 54 colostros de adultos saudáveis da Grande São Paulo. As concentrações de IgG sérico e de IgA secretora foram determinadas por ELISA utilizando como antígeno proteínas purificadas obtidas de bactérias recombinantes de cada intimina e os resultados foram submetidos a análise estatística. Foram também realizadas absorções com as bactérias recombirrantes e ensaios de inibição de adesão. Primeiramente observamos que nossa população apresenta anticorpos séricos e secretores reativos com a região conservada e as regiões variáveis das intiminas α β e γ, e que existe uma correlação positiva entre os, diferentes grupos de dados, mostrando assim uma reatividade cruzada parcial entre os anticorpos anti-intiminas, este fato foi confirmado com as absorções e com os ensaios de adesão. A concentração de anticorpos IgA no colostro é mais alta que IgG no soro e a concentração de anticorpos anti-região conservada da intimina no soro se encontra elevada quando comparada com as outras três determinações. Em ensaio de adesão em células HEp-2, foi verificado que anticorpos anti-região variável inibem a adesão de EPEC 0127:H6 numa porcentagem maior que os anticorpos anti-região conservada. Apresença de anticorpos anti-região variável da intimina γ sugere mais uma vez a possível proteção contra a EHEC. Em conjunto, nossos resultados corroboram com a idéia de que nossa população desenvolve uma imunidade natural resultante da exposição a linhagens de E. Coli ou outras bactérias presentes no ambiente, que confere uma proteção contra. EHEC, mesmo não sendo esta bactéria tão freqüente no nosso meio. / Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a leading cause of infantile diarrhea in developing countries, and has many genetic and antigenic similarittes with enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC). EHEC can cause a variety of uman illnesses ranging from uncomplicated diarrhea to haemorrhagic colitis and haemolytic uremic syndrome. EHEC strains share with EPEC the ability to induce the attaching and effacing lesion (A/E) onto the human enterocyte membrane mediated by virulence factors codified by the patogenicity island LEE, as the type III secretion system, Esps, intimin and Tir. The infection with EPEC and EHEC induces the production of antibodies reactive with these virulence factors. Intimin is an outer membrane protein that mediates intimate attachment in the host cells, upon interaction with its- translocated receptor Tir. This protein shows high conservationin the N-terminal region and variability in the last C-terminal 280 amino acids. Many subtypes of intimins, like α, β and γ, were described according to the variable region. In this work we determined the concentration of IgG antibodies in 100 serum samples and IgA antibodies in 54 colostrum samples reactive with the variable regions α, β and γ intimins and the conserved region in healthy Brazilian adutts, living in São Paulo. The concentrations of seric IgG and secretor IgA anti-intimin antibodies were determined by ELISA with purified proteins obtained from recombinant bacteria expressing the conserved and the variable regions, and then the results were submitted to statistical analysis. Some absorptions and adhesion assays were performed with the aim of investigate cross reactions among the various antibodies. Firstly we observed that our poputation has seric and secretory antibodies reactive with conserved and variable regions of α, β and γ intimins, and there are a positive correlation among these antibodies in serum and colostrum, showing a partial cross reactivity among anti-intimins antibodies. This was confirmed by the absorptions and adhesion assays. IgA antibodies in colostrum were higher than IgG in serum, what could be related with the profective effect of breastfeeding against EPEC infection in infants. The seric antibodies anti-conserved region were higher compared to the other three determinations. The results obtained in the adhesion assays showed that the percentage of inhibition adhesion to EPEC 0127:H6 serotype with anti-variable regions antibodies was higher than anti-conserved regions. The presence of anti-γ variable region suggests the possible protection against EHEC. Taken together, our results suggest that our population develop a natural immunity as a result of the direct contact with E. coli strains or other bacteria present in the environment, which confers protection against EHEC, although it is not frequent in our population.

A Imunodeficiência de Variável Comum (ICV) é caracterizada por baixos níveis de imunoglobulinas com susceptibilidade a. Analisamos a distribuição de linfócitos, apoptose espontânea e a expressão gênica de receptores de morte, ligantes, adaptadores, moléculas reguladoras, inibidoras e anti-apotóticas em células CD4+ e CD8+ de 19 pacientes ICV e 19 controles. Pacientes com ICV apresentam diminuição na frequência de linfócitos TCD4+ e CD4+CD45RA+ e menor relação CD4/CD8 que indivíduos saudáveis. O grupo de pacientes mostrou maior frequência de apoptose espontânea em linfócitos totais e CD4+. Células CD4+ dos indivíduos afetados apresentaram menor expressão gênica de TRAIL-R, BCL-2, FLIPL e FADD; células CD8+ apresentaram diminuição da expressão gênica de TRAIL, FADD, BCL-2, BCL -xL e um aumento de FLIPs. Os resultados sugerem um desequilíbrio nos mecanismos que controlam a apoptose de linfócitos nestes pacientes, o que pode ajudar a elucidar as alterações observadas no compartimento de células T dos pacientes com ICV. / Common Variable Immunodeficiency (CVID) is is characterized by low immunoglobulins levels with susceptibility to infections. We have analyzed T cell distribution and spontaneous apoptosis in peripheral blood of CVID, as well as gene expression of several molecules involved in apoptosis, including death receptors, ligands, adapters, regulatory and anti-apototic molecules in CD4+ and CD8+ cells of 19 CVID patients and 19 healthy subjects. CVID subjects present decreased frequency of TCD4+ and CD4+ CD45RA+ cells and lower CD4/CD8 ratio than healthy controls. CVID group also presented higher frequency of spontaneous apoptosis in lymphocytes and CD4+ cells. CD4+ showed lower expression of TRAIL-R, BCL-2, FLIPL and FADD; CD8+ cells presented lower expression of TRAIL, FADD, BCL-2, BCL-xL and a augment of FLIP. Results suggest an imbalance in mechanisms controlling cell death of those patients lymphocytes, which might help to elucidate the changes observed in T cell compartment of CVID patients.