O capim-amargoso é uma planta daninha de difícil controle. Além de apresentar características de tolerância ao uso de herbicidas, como a presença de rizoma, e cera em sua superfície foliar, a espécie apresenta biótipos resistentes ao herbicida glyphosate. O glyphosate é o herbicida mais utilizado no mundo. Este trabalho objetivou avaliar as características foliares que contribuem para a absorção diferencial do herbicida glyphosate em biótipos resistentes de capim-amargoso. Para isso foram realizados estudos de microscopia eletrônica de luz e varredura em diferentes estádios vegetativos da planta. Em uma segunda parte, tratou-se da análise molecular de plantas resistentes, através da análise do sequenciamento e da expressão da enzima EPSPs. Foram ainda comparados diferentes biótipos quanto a sua similaridade na constituição enzimática. Por fim, analisou-se as alternativas de controle químico pelo estudo da associação de diferentes formulações de glyphosate com graminicidas. Estes trabalhos foram realizados em dois estádios vegetativos da espécie, sendo um estádio inicial e um estádio avançado (pré-florescimento). Como resultados, notou-se que as plantas suscetíveis apresentam características que facilitam a absorção do herbicida, como a presença de tricomas não cuticulados. A presença destes somada a espessa epiderme adaxial favorece a absorção no biótipo suscetível. Nos estudos enzimáticos, foram encontradas duas mutações de aminoácidos que compõe a enzima EPSPs. A expressão da enzima não foi conclusiva. O biótipo suscetível apresentou maior expressão da mesma. Esta expressão diferencial pode estar relacionada a uma maior eficiência da enzima em plantas resistentes. As plantas resistentes expressam os dois tipos de enzima, enquanto as suscetíveis apenas um. O uso de graminicidas em mistura com glyphosate é eficaz, porém o controle feito em estádios iniciais da planta é mais satisfatório. O uso de formulações de rápida absorção favorece o controle de plantas. O uso de quizalofop-ethyl foi superior aos demais graminicidas, não mostrando efeitos antagonísticos em associações com glyphosate. Recomenda-se que em estádios mais avançados das plantas, outras medidas, fora o controle químico sejam utilizadas, integradas em uma manejo integrado de plantas daninhas. / The sourgrass is a hardy-to-kill weed. Besides characteristics of tolerance to herbicides, as the presence of rhizome and wax at leaf surface, there are present glyphosate-resistant biotypes. Glyphosate is the most used herbicide in the world. This study aimed to evaluate foliar characteristics that contribute to the differential absorption of the glyphosate in resistant biotypes of sourgrass. For this study has been performed scanning electron and scanning light microscopy at different vegetative stages of the plant. In a second part, it was analyzed the molecular biology of resistant plants EPSPs, through the sequencing and expression of the enzyme. Biotypes were also compared as their similarity in enzymatic constitution. Finally, were analyzed the chemical alternatives to control resistant sourgrass by studying the association of different glyphosate formulations with grass-herbicides. These studies were conducted in two stages of development of plants, one in early stage and other in advanced stage (before flowering). It was noted that susceptible plants have characteristics that facilitate the herbicide absorption, such as trichomes without wax. The presence of these plus the thick adaxial epidermis favors the absorption susceptible biotype. In enzymatic studies, were found two amino acids mutations at EPSPS gene composition. Expression of the enzyme was not conclusive. The susceptible biotype showed higher expression of it. This differential expression may be related to the increased efficiency of the enzyme in resistant plants. The resistant plants express two kinds of enzyme, while the sensitive biotype just one. The use of glyphosate in mixture with grass herbicides was effective, but the control is better in early stages of. The use of glyphosate formulations with rapid absorption enhances the control. The use of quizalofop - ethyl is better than the others herbicides tested, showing no antagonistic effects in association with any glyphosate formulation. It is recommended that at later stages of the plants development, others measures outside the chemical control should be used in an integrated management of weeds.

O capim-amargoso é uma planta daninha de difícil controle. Além de apresentar características de tolerância ao uso de herbicidas, como a presença de rizoma, e cera em sua superfície foliar, a espécie apresenta biótipos resistentes ao herbicida glyphosate. O glyphosate é o herbicida mais utilizado no mundo. Este trabalho objetivou avaliar as características foliares que contribuem para a absorção diferencial do herbicida glyphosate em biótipos resistentes de capim-amargoso. Para isso foram realizados estudos de microscopia eletrônica de luz e varredura em diferentes estádios vegetativos da planta. Em uma segunda parte, tratou-se da análise molecular de plantas resistentes, através da análise do sequenciamento e da expressão da enzima EPSPs. Foram ainda comparados diferentes biótipos quanto a sua similaridade na constituição enzimática. Por fim, analisou-se as alternativas de controle químico pelo estudo da associação de diferentes formulações de glyphosate com graminicidas. Estes trabalhos foram realizados em dois estádios vegetativos da espécie, sendo um estádio inicial e um estádio avançado (pré-florescimento). Como resultados, notou-se que as plantas suscetíveis apresentam características que facilitam a absorção do herbicida, como a presença de tricomas não cuticulados. A presença destes somada a espessa epiderme adaxial favorece a absorção no biótipo suscetível. Nos estudos enzimáticos, foram encontradas duas mutações de aminoácidos que compõe a enzima EPSPs. A expressão da enzima não foi conclusiva. O biótipo suscetível apresentou maior expressão da mesma. Esta expressão diferencial pode estar relacionada a uma maior eficiência da enzima em plantas resistentes. As plantas resistentes expressam os dois tipos de enzima, enquanto as suscetíveis apenas um. O uso de graminicidas em mistura com glyphosate é eficaz, porém o controle feito em estádios iniciais da planta é mais satisfatório. O uso de formulações de rápida absorção favorece o controle de plantas. O uso de quizalofop-ethyl foi superior aos demais graminicidas, não mostrando efeitos antagonísticos em associações com glyphosate. Recomenda-se que em estádios mais avançados das plantas, outras medidas, fora o controle químico sejam utilizadas, integradas em uma manejo integrado de plantas daninhas. / The sourgrass is a hardy-to-kill weed. Besides characteristics of tolerance to herbicides, as the presence of rhizome and wax at leaf surface, there are present glyphosate-resistant biotypes. Glyphosate is the most used herbicide in the world. This study aimed to evaluate foliar characteristics that contribute to the differential absorption of the glyphosate in resistant biotypes of sourgrass. For this study has been performed scanning electron and scanning light microscopy at different vegetative stages of the plant. In a second part, it was analyzed the molecular biology of resistant plants EPSPs, through the sequencing and expression of the enzyme. Biotypes were also compared as their similarity in enzymatic constitution. Finally, were analyzed the chemical alternatives to control resistant sourgrass by studying the association of different glyphosate formulations with grass-herbicides. These studies were conducted in two stages of development of plants, one in early stage and other in advanced stage (before flowering). It was noted that susceptible plants have characteristics that facilitate the herbicide absorption, such as trichomes without wax. The presence of these plus the thick adaxial epidermis favors the absorption susceptible biotype. In enzymatic studies, were found two amino acids mutations at EPSPS gene composition. Expression of the enzyme was not conclusive. The susceptible biotype showed higher expression of it. This differential expression may be related to the increased efficiency of the enzyme in resistant plants. The resistant plants express two kinds of enzyme, while the sensitive biotype just one. The use of glyphosate in mixture with grass herbicides was effective, but the control is better in early stages of. The use of glyphosate formulations with rapid absorption enhances the control. The use of quizalofop - ethyl is better than the others herbicides tested, showing no antagonistic effects in association with any glyphosate formulation. It is recommended that at later stages of the plants development, others measures outside the chemical control should be used in an integrated management of weeds.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Natural products and their derivatives are currently the most important source of novel therapeutic agents and provide useful tools for studies in physiopathology and pharmacology. Snake venoms display a wide array of pharmacological properties due to their complex combinations of active substances, especially peptides and proteins, capable of interfering with physiological processes. Snakes of the genera Bothrops and Bothropoides accounted for 70% of snake bites reported in Brazil. The Bothropoides insularis (golden lancehead) is endemic to Queimada Grande, an island off the state of SÃo Paulo. Like the venom of other Bothrops species, the venom of B. insularis has coagulant, hemorrhagic and fibrinolytic properties and is known to cause kidney failure in vivo. The objective of the study was to evaluate of whole venom of B. insularis and its phospholipase A2 fraction in Madin-Darby canine kidney (MDCK) cell culture tubes. The cells were grown in RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum in plastic vials with an atmosphere containing 5% CO2 at 37ÂC. Treatment with whole venom reduced cell viability at all the concentrations tested (200, 100, 50, 25, 12.5 and 6.25 mg/mL) and yielded an IC50 of 9 μg/mL. Cell membrane integrity during the process of cell death from whole venom was evaluated by LDH enzyme assay, indicating enzyme release at all concentrations. Flow cytometry with Annexin V-FITC and propidium iodide revealed that cell death at the lowest concentrations (18 and 36 μg/mL) of whole venom occurred predominantly by apoptosis. However, at the highest concentration (72 μg/mL), in addition to death by apoptosis, an increased number of cells in late apoptosis was observed.In the Rhodamine 123 assay the treatment with whole venom (36 μg/mL) induced significant depolarization of the mitochondrial membrane potential. The expression of genes involved in cell death by apoptosis did not show any significant results, when tested with whole venom in 24h. The phospholipase A2 fraction was also submitted to cell viability and membrane integrity assays at several concentrations (200, 100, 50, 25, 12.5 and 6.25 mg/mL), with no significant results in any of the experiments. Taken together, our results indicate that the venom of B. insularis is cytotoxic in MDCK cell culture and that cell death occurs predominantly by apoptosis. / Os produtos naturais e seus derivados tÃm sido as fontes mais comuns na obtenÃÃo de agentes terapÃuticas inovadores, alÃm de fornecerem ferramentas para estudos fisiopatolÃgicos e farmacolÃgicos. Os venenos de serpentes exibem uma infinidade de atividades farmacolÃgicas, por serem formados por uma mistura complexa de substÃncias ativas, principalmente peptÃdeos e proteÃnas, capazes de interferir com muitos processos fisiolÃgicos. As serpentes Bothrops e Bothropoides sÃo responsÃveis por 70% dos acidentes ofÃdicos ocorridos no Brasil. A serpente Bothropoides insularis (jarara ilhoa), Ã uma espÃcie endÃmica nativa da ilha de Queimada Grande na costa Sul do Estado de SÃo Paulo, seu veneno apresenta caracterÃsticas semelhantes aos das outras serpentes do gÃnero Bothrops, como atividade coagulante, hemorrÃgica, fibrinolÃtica e insuficiÃncia renal in vivo. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do veneno total da Bothropoides insularis e sua fraÃÃo fosfolipase A2 em culturas de cÃlulas tubulares renais do tipo MDCK (Madin-Darby canine kidney). CÃlulas MDCK foram cultivadas em garrafas plÃsticas a 37 ÂC em atmosfera de 5% de CO2, com meio RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%. O tratamento com veneno total da B.insularis causou diminuiÃÃo da viabilidade celular em todas as concentraÃÃes (200; 100; 50; 25; 12,5 e 6,25 mg/mL) estudadas com um IC50 de 9 μg /mL. A integridade da membrana celular foi avaliada pelo mÃtodo de determinaÃÃo da enzima lactato desidrogenase, e apÃs a exposiÃÃo das cÃlulas ao veneno houve um aumento significativo da enzima. Nos ensaios de citometria de fluxo com anexina V-FITC e iodeto de propÃdio foi observada a morte celular nas menores concentraÃÃes (18 e 36 μg/mL) estudadas com o veneno total e ocorreu predominantemente por apoptose. No entanto na maior concentraÃÃo (72μg/mL) estudada, foi observado alÃm da morte por apoptose, um aumento de cÃlulas em apoptose tardia. Nos ensaios com rodamina 123, o tratamento com o veneno total da B.insularis (36 μg/ mL) levou a despolarizaÃÃo significativa do potencial de membrana mitocondrial. NÃo houve expressÃo significativa de genes envolvidos na morte celular por apoptose. Ensaios de viabilidade celular e integridade de membrana foram realizados com a fraÃÃo fosfolipase A2 do veneno da B.insularis, em vÃrias concentraÃÃes (200; 100; 50; 25; 12,5 e 6,25 mg/mL), nÃo apresentado resultados significativos em nenhum dos experimentos. Esses resultados demonstram a citotoxicidade do veneno de B. insularis em culturas de cÃlulas tubulares renais (MDCK), e sugerem morte celular predominantemente por apoptose

Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantes / In this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injection

Este trabalho teve como objetivo principal avaliar o sêmen da jararaca ilhoa, Bothrops insularis, quanto ao volume, motilidade, vigor e concentração, além de verificar se estes paramentos estão relacionados ao comprimento ou massa dos animais ou se variam ao longo das estações, uma vez que esta espécie possui ciclo reprodutivo sazonal. Para tanto, foram avaliadas amostras de sêmen de 18 machos, com comprimento rostro-cloacal (CRC) variando de 43,5 a 73,70 cm, pertencentes ao plantel do Laboratório de Ecologia e Evolução do Instituto Butantan, entre os meses de agosto de 2012 e maio de 2013. O sêmen de Bothrops insularis apresentou coloração variando de esbranquiçada a amarelada e consistência cremosa e espessa. Foi possível observar amostras de sêmen viáveis em todos os 18 animais avaliados, indicando que animais com CRC igual ou acima de 43,5 cm já são sexualmente maduros. O espermatozoide de Bothrops insularis é filiforme, possui cabeça alongada, fina e com formato pontiagudo, seguindo o padrão morfológico descrito para outros Squamata. Não foi observada nenhuma relação entre o comprimento, massa e cada um dos parâmetros seminais avaliados. Foi observada variação significativa da motilidade e da concentração do sêmen de Bothrops insularis entre as estações, porém o volume e o vigor do sêmen não variaram. Foi no outono, época de cópula da espécie, que o sêmen apresentou as maiores médias para os parâmetros avaliados. / This study aimed to evaluate sperm parameters of the golden lancehead, Bothrops insularis, including appearance, sperm motility, vigor, volume and concentration, determine if these parameters varied with body size or weight and to verify whether these vestments vary throughout seasons, since this species has a seasonal reproductive cycle. Samples of semen of 18 males with snout-vent length (SVL) ranging from 43.5 to 73.70 cm, belonging to the squad of the Ecology and Evolution Laboratory at Instituto Butantan, were collected between August 2012 and May 2013. Sperm color from Bothrops insularis ranged from whitish to yellowish, and a creamy and thick consistency. Viable sperm was observed in samples from all 18 males evaluated, indicating that animals with SVL equal to or above 43.5 cm are sexually mature. Sperm of Bothrops insularis is thready, has elongated, thin and pointed shaped head, following the morphological pattern described for other Squamata. No relationship between length, mass and each of seminal parameters evaluated was observed. Significant variation of concentration and motility of semen from Bothrops insularis between seasons was observed, but volume and vigor did not change. It was during Fall, mating season of the species, that sperm had the highest means for all parameters evaluated.

O capim-amargoso (Digitaria insularis) é uma planta daninha que ganhou importância no cenário agrícola brasileiro recentemente, decorrente da dificuldade natural de se controlar essa espécie de planta daninha e pela descoberta de populações resistentes ao glyphosate. Esse trabalho teve o objetivo de estudar os níveis de resistência apresentados por populações de capim-amargoso dos estados do Paraná e São Paulo e avaliar o controle de proporcionado por aplicações de herbicidas associados ou não a duas formulações de 2,4-D, em plantas perenizadas adultas e após roçada mecânica. No primeiro experimento foram coletadas populações de capim-amargoso em quinze áreas nos estados do Paraná e São Paulo. Foi feita a aplicação de 8 doses crescentes de glyphosate (0; 67,5; 135; 270; 540; 1080; 2160 e 4320 g e.a.ha-1) em 5 repetições para a obtenção da curva de dose resposta. Os dados de controle foram submetidos ao modelo de regressão não-linear do tipo log-logístico para determinação dos parâmetros das curvas de dose-resposta, em seguida foi determinado o fator de resistência para cada população. No segundo e terceiro experimentos foi avaliada a eficácia de controle de capim-amargoso através de 31 associações entre os herbicidas glyphosate, 2,4-D dimethylamine, 2,4-D choline, haloxyfop, clethodim, glufosinate, em plantas perenizadas adultas e após roçada mecânica a 20cm. Existe um cenário de evolução nos casos de resistência de capim-amargoso ao herbicida glyphosate nos estados de São Paulo e Paraná. Grande parte das populações estudadas apresentaram algum nível de resistência ao glyphosate, mas em maioria (67%) baixa resistência. No entanto, a constatação de populações com fatores de resistência muito altos serve como alerta para a necessidade do uso do manejo integrado de plantas daninhas, buscando usar boas práticas agrícolas para que as populações que ainda apresentam baixo nível de resistência não atinjam esse mesmo patamar. É possível afirmar que o controle de plantas adultas de capim-amargoso resistente ao glyphosate é facilitado com a roçada mecânica, podendo atingir resultados semelhantes ao controle das plantas não roçadas, com uma aplicação sequencial. Existem diversas combinações de associações e aplicações sequenciais entre glyphosate, haloxyfop, clethodim e glufosinate, em associação ou não com 2,4-D colina e 2,4-D dimetilamina, capazes de proporcionar controle superior a 90% em plantas de capim-amargoso, roçadas ou não. Independente do tratamento algumas plantas sofreram rebrota, sendo a intensidade dessa importante na ocasião da aplicação sequencial. É recomendado que esse parâmetro seja observado com cautela para tomada de decisão correta, principalmente no caso de roçada mecânica das plantas, prévia a aplicação de herbicidas. Foi possível observar que a nova formulação de 2,4-D colina possui comportamento similar ao 2,4-D dimetilamina em relação a possíveis antagonismos em associações com graminicidas. Isso indica que os conhecimentos anteriores servem como uma boa referência para uso da nova formulação enquanto novos estudos são desenvolvidos. / The sourgrass (Digitaria insularis) is a weed that has gained importance in the Brazilian agricultural scene recently, due to the natural difficulty to control this species of weed and the discovery of populations resistant to glyphosate. The objective of this work was to study the resistance levels of sourgrass populations in the states of Paraná and São Paulo, and to evaluate the control provided by herbicides applications associated or not with two 2,4-D formulations in perennial plants and after mechanical mowing. In the first experiment, sourgrass populations were collected in fifteen areas in the states of Paraná and São Paulo. Eight growing doses of glyphosate (0, 67.5, 135, 270, 540, 1080, 2160 and 4320 g a.a.ha-1) were applied in 5 replicates to obtain the dose response curve. The control data were submitted to the log-logistic nonlinear regression model to determine the parameters of the dose-response curves, after the resistance factor for each population was determined. In the second and third experiments, was evaluated the effectiveness of sourgrass control through 31 associations between herbicides glyphosate, 2,4-D dimethylamine, 2,4-D choline, haloxyfop, clethodim, glufosinate, in adult perennial plants and after mowing at 20cm. There is a scenario of evolution in the cases of sourgrass resistance to glyphosate herbicide in the states of São Paulo and Paraná. Most of the populations studied showed some resistance to glyphosate, but most (67%) low resistance. However, the observation of populations with very high resistance factors serves as an alert to the need of using integrated weed management, seeking to use good agricultural practices, so that populations that still have a low resistance level do not reach this high level. It is possible to affirm that the control of adult plants of sourgrass resistant to glyphosate is facilitated with the mechanical mowing, being able to reach results similar to the control of the non-cropped plants, with a sequential application less. There are several combinations of sequential applications and associations between glyphosate, haloxyfop, clethodim and glufosinate, in association or not with 2,4-D choline and 2,4-D dimethylamine, capable of providing superior control to 90% in sourgrass plants, mowed or not. Regardless of the treatment, some plants regrowth, where the intensity is important at the occasion of the sequential application. It is recommended that this parameter get observed with caution for correct decision making, especially in the case of mechanical mowing of the plants, prior to the application of herbicides. It was possible to observe that the new formulation of 2,4-D choline has similar behavior to 2,4-D dimethylamine in relation to possible antagonisms in combinations with graminicides. This indicates that prior knowledge serves as a good reference for use of the new formulation while new studies are developed.

A jararaca-ilhoa (Bothrops insularis) é uma serpente criticamente ameaçada, endêmica da Ilha da Queimada Grande (IQG), litoral sul de São Paulo. Com a sua população em declínio, foi estabelecido um programa de reprodução em cativeiro, porém o conhecimento da sua biologia reprodutiva ainda é incipiente. Até o momento considera-se essa espécie como sazonal, com período de espermatogênese e cópulas associado, ocorrendo do outono até início da primavera, porém não existem estudos a cerca da endocrinologia reprodutiva. O objetivo desse trabalho foi validar um método de avaliação hormonal não invasiva por meio das fezes e realizar o monitoramento dos metabólitos fecais de testosterona em conjunto com avaliação plasmática de testosterona. Ao longo de 36 meses foram coletadas 156 amostras de fezes e 30 amostras de sangue de oito machos cativos. As concentrações de metabólitos fecais de testosterona variaram entre 10,9 à 249,3 ng/g de fezes, enquanto as concentrações de testosterona plasmática variaram de 0,07 à 0,30 ng/mL de plasma. Não houve diferença significativa entre as concentrações plasmáticas de testosterona e de metabólitos fecais de testosterona ao longo do ano, apesar dos machos demonstrarem comportamento reprodutivo durante esse período. Os dados corroboram com outros estudos de estocagem espermática, qualidade seminal e volume gonadal, porém vão de encontro à resultados de histologia testicular. São discutidas a possibilidade da espécie ser assazonal ou desses resultados serem uma consequência das condições do cativeiro. Esse estudo contribui com a validação de um novo método de avaliação longitudinal de esteroides sexuais em B. insularis, com o conhecimento da biologia reprodutiva de serpentes tropicais e com a conservação de animais ameaçados de extinção / The golden lancehead pitviper (Bothrops insularis) is a critically endangered snake, endemic of the Queimada Grande Island, southeastern Brazil. With its declining population, a captive breeding program was established, but the knowledge of its reproductive biology is incipient. By the time this species is considered as seasonal, with spermatogenesis period and matting associated, occurring from autumn until early spring, but there are no studies about their reproductive endocrinology. The aim of this study was to validate a noninvasively hormonal evaluation method through feces and carry out the monitoring of androgens in conjunction with plasma testosterone evaluation. Over 36 months 156 stool samples and 30 blood samples were collected from eight captive males. The fecal androgen concentrations ranged from 10.9 to 249.3 ng / g of feces and the plasma testosterone concentrations ranged from 0.07 to 0.30 ng / mL of plasma. There was no significant difference between the concentrations of fecal androgens and plasma throughout the year, although the males had shown successfully reproductive behavior during this period. The data corroborate whith other studies of sperm storage, sperm quality and gonadal volume, but disagreeded of the results of testicular histology. We discuss the possibility of the species be assazonal or these results are a consequence of the captivity conditions. This study contributes to the validation of a new longitudinal evaluation method of sex steroids in B. insularis, with the knowledge of the reproductive biology of tropical snakes and the conservation of endangered animals

O capim-amargoso (Digitaria insularis) é uma planta daninha que ganhou importância no cenário agrícola brasileiro recentemente, decorrente da dificuldade natural de se controlar essa espécie de planta daninha e pela descoberta de populações resistentes ao glyphosate. Esse trabalho teve o objetivo de estudar os níveis de resistência apresentados por populações de capim-amargoso dos estados do Paraná e São Paulo e avaliar o controle de proporcionado por aplicações de herbicidas associados ou não a duas formulações de 2,4-D, em plantas perenizadas adultas e após roçada mecânica. No primeiro experimento foram coletadas populações de capim-amargoso em quinze áreas nos estados do Paraná e São Paulo. Foi feita a aplicação de 8 doses crescentes de glyphosate (0; 67,5; 135; 270; 540; 1080; 2160 e 4320 g e.a.ha-1) em 5 repetições para a obtenção da curva de dose resposta. Os dados de controle foram submetidos ao modelo de regressão não-linear do tipo log-logístico para determinação dos parâmetros das curvas de dose-resposta, em seguida foi determinado o fator de resistência para cada população. No segundo e terceiro experimentos foi avaliada a eficácia de controle de capim-amargoso através de 31 associações entre os herbicidas glyphosate, 2,4-D dimethylamine, 2,4-D choline, haloxyfop, clethodim, glufosinate, em plantas perenizadas adultas e após roçada mecânica a 20cm. Existe um cenário de evolução nos casos de resistência de capim-amargoso ao herbicida glyphosate nos estados de São Paulo e Paraná. Grande parte das populações estudadas apresentaram algum nível de resistência ao glyphosate, mas em maioria (67%) baixa resistência. No entanto, a constatação de populações com fatores de resistência muito altos serve como alerta para a necessidade do uso do manejo integrado de plantas daninhas, buscando usar boas práticas agrícolas para que as populações que ainda apresentam baixo nível de resistência não atinjam esse mesmo patamar. É possível afirmar que o controle de plantas adultas de capim-amargoso resistente ao glyphosate é facilitado com a roçada mecânica, podendo atingir resultados semelhantes ao controle das plantas não roçadas, com uma aplicação sequencial. Existem diversas combinações de associações e aplicações sequenciais entre glyphosate, haloxyfop, clethodim e glufosinate, em associação ou não com 2,4-D colina e 2,4-D dimetilamina, capazes de proporcionar controle superior a 90% em plantas de capim-amargoso, roçadas ou não. Independente do tratamento algumas plantas sofreram rebrota, sendo a intensidade dessa importante na ocasião da aplicação sequencial. É recomendado que esse parâmetro seja observado com cautela para tomada de decisão correta, principalmente no caso de roçada mecânica das plantas, prévia a aplicação de herbicidas. Foi possível observar que a nova formulação de 2,4-D colina possui comportamento similar ao 2,4-D dimetilamina em relação a possíveis antagonismos em associações com graminicidas. Isso indica que os conhecimentos anteriores servem como uma boa referência para uso da nova formulação enquanto novos estudos são desenvolvidos. / The sourgrass (Digitaria insularis) is a weed that has gained importance in the Brazilian agricultural scene recently, due to the natural difficulty to control this species of weed and the discovery of populations resistant to glyphosate. The objective of this work was to study the resistance levels of sourgrass populations in the states of Paraná and São Paulo, and to evaluate the control provided by herbicides applications associated or not with two 2,4-D formulations in perennial plants and after mechanical mowing. In the first experiment, sourgrass populations were collected in fifteen areas in the states of Paraná and São Paulo. Eight growing doses of glyphosate (0, 67.5, 135, 270, 540, 1080, 2160 and 4320 g a.a.ha-1) were applied in 5 replicates to obtain the dose response curve. The control data were submitted to the log-logistic nonlinear regression model to determine the parameters of the dose-response curves, after the resistance factor for each population was determined. In the second and third experiments, was evaluated the effectiveness of sourgrass control through 31 associations between herbicides glyphosate, 2,4-D dimethylamine, 2,4-D choline, haloxyfop, clethodim, glufosinate, in adult perennial plants and after mowing at 20cm. There is a scenario of evolution in the cases of sourgrass resistance to glyphosate herbicide in the states of São Paulo and Paraná. Most of the populations studied showed some resistance to glyphosate, but most (67%) low resistance. However, the observation of populations with very high resistance factors serves as an alert to the need of using integrated weed management, seeking to use good agricultural practices, so that populations that still have a low resistance level do not reach this high level. It is possible to affirm that the control of adult plants of sourgrass resistant to glyphosate is facilitated with the mechanical mowing, being able to reach results similar to the control of the non-cropped plants, with a sequential application less. There are several combinations of sequential applications and associations between glyphosate, haloxyfop, clethodim and glufosinate, in association or not with 2,4-D choline and 2,4-D dimethylamine, capable of providing superior control to 90% in sourgrass plants, mowed or not. Regardless of the treatment, some plants regrowth, where the intensity is important at the occasion of the sequential application. It is recommended that this parameter get observed with caution for correct decision making, especially in the case of mechanical mowing of the plants, prior to the application of herbicides. It was possible to observe that the new formulation of 2,4-D choline has similar behavior to 2,4-D dimethylamine in relation to possible antagonisms in combinations with graminicides. This indicates that prior knowledge serves as a good reference for use of the new formulation while new studies are developed.

Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantes / In this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injection

A jararaca-ilhoa (Bothrops insularis) é uma serpente criticamente ameaçada, endêmica da Ilha da Queimada Grande (IQG), litoral sul de São Paulo. Com a sua população em declínio, foi estabelecido um programa de reprodução em cativeiro, porém o conhecimento da sua biologia reprodutiva ainda é incipiente. Até o momento considera-se essa espécie como sazonal, com período de espermatogênese e cópulas associado, ocorrendo do outono até início da primavera, porém não existem estudos a cerca da endocrinologia reprodutiva. O objetivo desse trabalho foi validar um método de avaliação hormonal não invasiva por meio das fezes e realizar o monitoramento dos metabólitos fecais de testosterona em conjunto com avaliação plasmática de testosterona. Ao longo de 36 meses foram coletadas 156 amostras de fezes e 30 amostras de sangue de oito machos cativos. As concentrações de metabólitos fecais de testosterona variaram entre 10,9 à 249,3 ng/g de fezes, enquanto as concentrações de testosterona plasmática variaram de 0,07 à 0,30 ng/mL de plasma. Não houve diferença significativa entre as concentrações plasmáticas de testosterona e de metabólitos fecais de testosterona ao longo do ano, apesar dos machos demonstrarem comportamento reprodutivo durante esse período. Os dados corroboram com outros estudos de estocagem espermática, qualidade seminal e volume gonadal, porém vão de encontro à resultados de histologia testicular. São discutidas a possibilidade da espécie ser assazonal ou desses resultados serem uma consequência das condições do cativeiro. Esse estudo contribui com a validação de um novo método de avaliação longitudinal de esteroides sexuais em B. insularis, com o conhecimento da biologia reprodutiva de serpentes tropicais e com a conservação de animais ameaçados de extinção / The golden lancehead pitviper (Bothrops insularis) is a critically endangered snake, endemic of the Queimada Grande Island, southeastern Brazil. With its declining population, a captive breeding program was established, but the knowledge of its reproductive biology is incipient. By the time this species is considered as seasonal, with spermatogenesis period and matting associated, occurring from autumn until early spring, but there are no studies about their reproductive endocrinology. The aim of this study was to validate a noninvasively hormonal evaluation method through feces and carry out the monitoring of androgens in conjunction with plasma testosterone evaluation. Over 36 months 156 stool samples and 30 blood samples were collected from eight captive males. The fecal androgen concentrations ranged from 10.9 to 249.3 ng / g of feces and the plasma testosterone concentrations ranged from 0.07 to 0.30 ng / mL of plasma. There was no significant difference between the concentrations of fecal androgens and plasma throughout the year, although the males had shown successfully reproductive behavior during this period. The data corroborate whith other studies of sperm storage, sperm quality and gonadal volume, but disagreeded of the results of testicular histology. We discuss the possibility of the species be assazonal or these results are a consequence of the captivity conditions. This study contributes to the validation of a new longitudinal evaluation method of sex steroids in B. insularis, with the knowledge of the reproductive biology of tropical snakes and the conservation of endangered animals