Resumo parte 1: A invasão biológica é uma das principais ameaças à biodiversidade em todo o mundo. Entretanto, apesar dos trópicos concentrarem a maior parcela desta diversidade, ainda é pouco e esparso o conhecimento científico disponível sobre plantas invasoras nos ecossistemas tropicais. Este capítulo tem como objetivo comparar a quantidade de trabalhos publicados sobre invasões biológicas por plantas terrestres em ambientes tropicais e não tropicais, assim como a abordagem seguida nesses artigos. Foram lidos, selecionados e revisados os artigos publicados no intervalo de 1995 a 2004, em oito revistas científicas de alto índice de impacto. Ao todo, foram encontrados 239 artigos sobre plantas invasoras, sendo que a maioria deles aborda ecossistemas da América do Norte e Europa. Este é um reflexo do desequilíbrio na produção científica atual, que não dá a devida atenção aos ambientes com a maior biodiversidade, sendo que esta recebe vários tipos de ameaças à sua conservação. Resumo parte 2: As palmeiras da espécie Archontophoenix cf. cunninghamiana são invasoras em um pequeno fragmento florestal na região metropolitana da cidade de São Paulo (SP). Este trabalho investigou a abundância das sementes dessa espécie na chuva e no banco de sementes nesse local. Foram coletadas cinqüenta amostras de solo e de sementes da chuva de sementes em doze coletas mensais. Os resultados indicam que a dispersão de sementes dessa espécie invasora é efetiva na mata e que há a possibilidade dessa espécie formar um banco de sementes sazonal. Portanto, o sucesso da invasão poderia ser explicado pela capacidade de dispersão dessa espécie na mata, assim como por outras características da espécie e pela baixa resistência à invasão da comunidade neste fragmento. / Biological invasion is one of the worst threats to the world biodiversity. The actual extent of the impact of biological invasions in the tropics is still unknown. The aim of this chapter is to survey the literature published on plant invasions, comparing the material concerning the tropics with that regarding the rest of the world. 239 articles published in 8 ecological journals over the past ten years were reviewed. Most of them focused on temperate ecosystems, in North America and Europe. There is a weak effort on research concerning plant invasions in tropical ecosystems. Much more research is needed to evaluate the real scenario in the countries that contain the highest biodiversity of the world. The exotic palm Archontophoenix cf. cunninghamiana invaded a small forest fragment in São Paulo (São Paulo, Brazil). The abundance of this species in the seed rain and seed bank were investigated. The results indicate that this species may form a seasonal seed bank in the soil and that the seed dispersal is effective in the community. The success of the invasion by this exotic palm can be attributed to its high dispersal ability and to the community high invasibility due to the isolation of the forest fragment.

Nos cerrados brasileiros, várias gramíneas africanas foram introduzidas, tornando-se invasoras e ameaçando a biodiversidade nativa. É, portanto, imprescindível a elaboração de medidas para seu controle. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência e o custo de diferentes métodos para o controle das gramíneas invasoras Urochloa decumbens e Melinis minutiflora, em unidades de conservação de proteção ao cerrado. O trabalho foi desenvolvido no Cerrado Péde- Gigante e na Estação Ecológica de Itirapina (SP, Brasil), onde foram selecionadas seis manchas com dominância de U. decumbens e seis com M. minutiflora. Em cada mancha, aplicou-se um bloco randômico com os tratamentos: corte raso, uma vez (CRI, nov/2007) e duas vezes (CRII, nov/2007 e mar/2008), corte e revolvimento do solo, uma vez (CRSI, nov/2007) e duas vezes (CRSII, nov/2007 e mar/2008), sombreamento (SOM), abafamento (ABF), estes aplicados em julho/2007, permanecendo cobertos respectivamente com tela de nylon e lona até mar/2008. Ao final do experimento (jul/2008), a biomassa das parcelas foi cortada e separada em categorias (graminóides nativas, U. decumbens, M. minutiflora, dicotiledôneas). As análises basearam-se em testes de permutação. Posteriormente, foram calculados os custos de cada tratamento com mão-de-obra, materiais, ferramentas, transporte e descarte para o manejo das áreas. Para U. decumbens, os tratamentos mais eficientes para reduzir sua biomassa foram ABF, CRII e CRSII, sendo o ABF economicamente viável apenas para manejo de pequenas infestações; para áreas maiores, os tratamentos de corte mostram uma melhor relação benefício/custo. Para M. minutiflora, ABF, CRII, CRSII e CRSI são eficientes em reduzir sua biomassa e o tratamento CRSI é o que possui maior relação benefício/custo, portanto, o mais viável para o controle de desta gramínea. / Several African grasses introduced in the Brazilian savannas for cattle feeding became invasive, and now they severely threaten the native biodiversity. It is, therefore, fundamental to look for effective methods to control them. The objective of this study was to evaluate the efficiency and cost of different management techniques to control the invasive grasses Urochloa decumbens and Melinis minutiflora. The study was conducted in the Cerrado Pé-de-Gigante and Itirapina Ecological Station (SP, Brazil). Six plots dominated by U. decumbens and six by M. minutiflora were selected and a random block design was applied including the treatments: clipping once ( CRI, nov/2007) and twice (CRII, nov/2007 and mar/2008), clipping and soil digging once (CRSI, nov/2007) and twice (CRSII, nov/2007 and mar/2008), shading (SOM), mugging (ABF), being the last two applied in July/2007 and remained covered until mar/2008, respectively with nylon mesh and canvas. At the end of the experiment (jul/2008), all biomass in the blocks was cut and separated into categories (native grasses, U. decumbens, M. minutiflora and dicotyledons). The analyses were based on permutation tests. The cost of each treatment was calculated taking into account materials, tools, labor, transportation and discharge. The most effective treatments to reduce U. decumbens biomass were ABF, CRII and CRSII, being ABF economically viable only for small patches; the double-clipping treatments showed best benefit/cost value in large areas. The treatments ABF, CRII, CRSI and CRSII were effective in reducing M. minutiflora biomass, being CRSI the one which showed a best benefit/cost value; therefore, clipping and digging is the best way to control that grass.

The anaerobic capacity is crutial to the results of team invasion games and can be assessed through the Line Drill Test (LDT), which shows correlations with Wingate. Its results and execution time is commonly obtained using manual timers. The anaerobic capacity can also be measured by the Maximal Accumulated Oxygen Deficit (MAOD), adopted as the gold standard for this capability. The classic version of this method requires time and cost relatively high, while the alternate version (MAODALT), although, although it presents time and execution costs reduced, has been validated exclusively for the cycle ergometer, which does not meet the motor demands of team invasion games. Based on that, three studies were developed, with the following objectives: a) Determine the reliability of results records of LDT runtime through stopwatches and video analysis; b) Validate the protocol for determining the MAOD through MAODALT, performed with treadmill in athletes of team invasion games; c) Validate the LDT as a measure of anaerobic capacity in collective team invasion games, comparing it to a gold standard test and specific to movement. Participated in the present research university basketball athletes, handball and futsal. There was good agreement between the runtime registration measures for all measures and there was no significant difference (p = 0.999). The MAODALT showed high correlation (r = 0.76; p = 0.030) and good agreement with the MAOD. Finally, MAOD obtained in the LDT (MAODLD) showed good agreement with the classic MAOD and MAODALT. Our results suggest that: a) the use of both timers and videos to record the LDT time is valid and reliable; b) The MAODALT obtained in tests on the treadmill proved to be able to estimate the classic MAOD in athletes of team invasion games; c) The LDT can be used to estimate the MAOD, however, its running time is not associated with the measure of anaerobic capacity represented by MAOD. / A capacidade anaeróbica é determinante nos resultados dos esportes coletivos de invasão e pode ser avaliada através do Line Drill Test (LDT), que apresenta correlações com o Wingate. Seu resultado, tempo de execução, é comumente obtido utilizando cronômetros manuais. A capacidade anaeróbica também pode ser mensurada pelo máximo déficit de oxigênio acumulado (MAOD), adotado como padrão-ouro para essa capacidade. A versão clássica desse método demanda tempo e custo relativamente elevados, ao passo que a versão alternativa (MAODALT), embora apresente tempo e custos de execução reduzidos, foi validada exclusivamente para o cicloergômetro, o que não satisfaz as solicitações motoras dos esportes coletivos de invasão. A partir deste cenário, foram desenvolvidos três estudos cujo objetivos foram: a) Determinar a fidedignidade dos resultados de registros do tempo de execução do LDT através de cronômetros e da análise de vídeo; b) Validar o protocolo para determinação do MAOD através do MAODALT realizado na esteira ergométrica em atletas de esportes coletivos de invasão; e c) Validar o LDT como medida da capacidade anaeróbica em atletas de desporto coletivo de invasão comparando-o com um teste padrão-ouro e específico para movimento. Participaram da presente pesquisa atletas universitários de basquetebol, handebol e futsal. Houve uma boa concordância entre as medidas de registro do tempo de execução para todas as medidas e não houve diferença significativa (p = 0,999). O MAODALT apresentou alta correlação (r = 0,76; p = 0,030) e boa concordância com o MAOD. Por fim, o MAOD obtido no LDT (MAODLD) apresentou boa concordância com o MAOD clássico e o MAODALT. Nossos resultados sugerem que: a) A utilização tanto de cronômetros como de vídeos para registrar o tempo do LDT é válida e confiável; b) O MAODALT obtido em testes na esteira ergométrica mostrou-se capaz de estimar o MAOD clássico em atletas de esportes coletivos de invasão; e c) O LDT pode ser utilizado para estimar o MAOD, contudo, seu tempo de execução não está associado à medida da capacidade anaeróbica representada pelo MAOD.

Invasões biológicas são uma das maiores ameaças à biodiversidade mundial. O estabelecimento de espécies exóticas, principalmente de insetos, em vários países ocorreu por meio da utilização de controle biológico, quando se introduz uma espécie exótica para o controle de outra. Em alguns casos, por diferentes motivos, espécies introduzidas com este objetivo acabaram se tornando invasoras. O besouro coprófago Digitonthophagus gazella é um destes exemplos. O objetivo desta tese foi avaliar o impacto de D. gazella sobre a abundância, diversidade e turnover de uma comunidade de besouros coprófagos nativos no Brasil. A comunidade foi amostrada semanalmente, e no mesmo local, desde novembro de 1989, através de armadilha luminosa, obtendo-se dados até novembro de 2015. A espécie exótica invadiu a área após quatro anos do início das coletas, tendo-se no presente estudo 22 anos de coletas semanais dessa espécie exótica introduzida. Na comunidade já havia outra espécie coprófaga exótica presente, Labarrus pseudolividus, que possui hábito residente de nidificação. A invasão por D. gazella modificou substancialmente a comunidade local. A abundância, diversidade e riqueza da comunidade nativa apresentavam tendência de aumento antes, passando a diminuir após a invasão. As espécies com o mesmo hábito de nidificação de D. gazella (escavador) não mostraram sinais de recuperação dos impactos, com todos os índices apresentando decréscimo contínuo desde a invasão, principalmente do turnover, tamanho populacional e riqueza de espécies. Espécies residentes, exibindo hábito similar a L. pseudolividus, foram capazes de recuperar o status após alguns anos, mantendo-se mais estáveis a partir do ano 15. Quando analisado o turnover da comunidade atual, ou seja, espécies nativas e exóticas, observou-se que toda a dinâmica da comunidade foi mantida pelas espécies exóticas. A partir da diminuição da abundância de D. gazella houve aumento na de L. pseudolividus, levando a uma aparente estabilidade na diversidade e turnover, a despeito do comportamento oposto observado na comunidade nativa. A partir da invasão por D. gazella, variáveis climáticas, fatores responsáveis principais pela característica da comunidade, passaram a execer menor influência. / Biological invasions are one of the major threats to the global biodiversity. The use of exotic species as agents of biological control is one way to contribute to invasions. In some cases, the introduced species became invasive. The tunneler dung beetle (DB) Digothophagus gazella is a good example. Released in many countries, including Brazil, to improve dung pad removal, the species quickly spread to new ones, where it is considered as an invasive species. The objective of this thesis was to evaluate impacts of D. gazella on the abundance, alfa-diversity and turnover of a native DB community in Brazil. Another exotic DB species, the dweller Labarrus pseudolividus, was present in the study area. The community was sampled weekly, at the same location, from November 1989 until November 2015 using a black light trap. The exotic species was first recorded four years after the beginning of sampling. The invasion by D. gazella changed significantly the native community. Abundance, diversity and richness were increasing during the first years, however they all decreased since the invasion. Species with the same nesting behavior of D. gazella (tunneler) were not able to recover from the impacts, with turnover, abundance and species richness continuously decreasing after the invasion. Dweller species on the contrary were able to partially recovery after some years, rebound its abundance and turnover since year 15. Results from the turnover analysis of the current community, which is native and exotic, showed that it has been influenced by both exotic species. Following the decrease in abundance of D. gazella and native species, L. pseudolividus was able to increase its abundance, leading to stabilization of the turnover despite the opposite observed in the native community. Since the invasion by D. gazella, weather variables became less important on the changes observed.

O movimento dos animais desempenha papel importante na aptidão dos indivíduos, no fluxo gênico, na dinâmica de metapopulações e na persistência, a longo prazo, de espécies em um ambiente. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi compreender aspectos relacionados à ecologia do movimento da rã-manteiga (Leptodactylus latrans) e da rã-touro (Lithobates catesbeianus). Para isso, indivíduos de ambas as espécies foram marcados com radiotransmissores e rastreados com o objetivo de coletar informações sobre seus movimentos. Ressaltamos os seguintes resultados deste trabalho: (1) a área de vida média de L. latrans é de 2034,2 m2; (2) com o aumento do tamanho corpóreo de anuros há o aumento do tamanho da área de vida; (3) indivíduos de L. latrans se locomovem mais em noites escuras, chuvosas e quentes; e (4) o aumento da pressão de propágulos não reflete uma maior probabilidade no aumento da distribuição geográfica de uma dada população de L. catesbeianus. Entender os padrões de locomoção dos anfíbios e como utilizam o espaço na natureza é fundamental para o entendimento de processos ecológicos e evolutivos relacionados às histórias de vida das espécies desse grupo. Além disso, esse conhecimento serve como uma ferramenta importante no estabelecimento de limites de áreas de conservação com significado biológico para espécies ameaçadas. Ainda, saber como espécies invasoras se locomovem é um dos primeiros passos para que se tomem medidas de controle populacional e para o bloqueio do avanço da distribuição de espécies exóticas / The ability of animals to move plays an important role in individual fitness, gene flow, population regulation, metapopulation dynamics and long-term persistence of species. The aim of this study was to understand aspects related to the movement ecology of the Butter Frog (Leptadactylus latrans) and the Bullfrog (Lithobates catesbeianus). We collected movement data by radio tracking individuals of both species. Some of the most important results obtained were: (1) the mean home range of L. latrans is 2034.2 m2; (2) increasing body size increases home range size in anurans; (3) individuals of L. latrans are more likely to move larger distances in dark, rainy and warm nights; (4) the increase in propagule pressure does not reflect an increase in the probability of geographical spread of a given population of L. catesbeianus. Understanding how amphibians move and use the space in nature is fundamental for the understanding of basic ecological and evolutionary processes related to life history of the species. Moreover, this knowledge is a useful tool to establish biologically meaningful conservation boundary areas to threatened species. Yet, understanding how invasive species move in nature is one of the first steps to population control and to block the spread of geographical distribution of exotic species

Os pacientes com melanomas, em geral, apresentam extrema quimiorresistência e prognóstico ruim, com taxa de sobrevida de aproximadamente seis meses; portanto, novas estratégias terapêuticas são necessárias. As células deste tipo de tumor acumulam alterações na expressão gênica que contribuem para a proliferação descontrolada, evasão de senescência e inibição de morte celular em múltiplas rotas intracelulares. No Capítulo 1, foi explorado o controle epigenético do supressor tumoral RECK. Esse gene é largamente expresso em tecidos normais, com correlação de sua expressão com melhor prognóstico. Em tumores, RECK é inibido, incluindo em melanoma. Neste estudo, sua inibição por hipermetilação do promotor e remodelamento da cromatina por HDACs não foi o único fator inibitório nas linhagens de melanoma analisadas. Mesmo após a utilização a remoção de marcas epigenéticas associadas ao silenciamento gênico, a expressão proteica não pôde ser recuperada nas linhagens utilizadas neste trabalho. No Capítulo 2, isolou-se subpopulações clonais ao acaso a fim de modelar a heterogeneidade tumoral intrínseca. Neste modelo experimental, caracterizamos a presença de dois perfis tumorais subclonais: uma mais proliferativa, invasiva e sensível a vemurafenibe; e outra menos proliferativa, mais resistente e com maior expressão de RECK e fatores ligados a EMT. Nossos resultados, em conjunto, mostraram que as linhagens celulares parentais utilizadas apresentam diferenças entre si quanto à viabilidade celular, indução de apoptose e fosforilação de ERK após o tratamento com vemurafenibe. Segundo o nosso modelo, a resistência intrínseca ao vemurafenibe está presente e reflete a heterogeneidade do tumor inicial. Com estes resultados, pretendemos contribuir para o conhecimento sobre a composição clonal presente na heterogeneidade tumoral, além de contribuir para a função de RECK na biologia do melanoma. / Patients with melanoma often present extreme chemoresistance and poor prognosis, with survival rates of approximately six months; therefore, new therapeutic strategies are necessary. Melanoma cells accumulate genotypic changes that contribute to uncontrolled proliferation, evasion of senescence and cell death inhibition in multiple cellular pathways. In Chapter 1, we have explored the epigenetic control of the tumor suppressor RECK. This gene is widely expressed in normal tissues, with correlation of its expression with better prognosis. In tumors, RECK is inhibited, including melanoma. Here, RECK inhibition by promoter hypermethylation and chromatin remodeling by HDACs was not the only inhibiting factor in the melanoma cell lines analyzed. Even after removing the epigenetic marks associated to gene expression silencing, the protein expression could not be recovered in the cell lines used in this study. In Chapter 2, it has been isolated several tumor clonal subpopulations in order to modulate the intrinsic tumor heterogeneity. In this experimental model, we have characterized the presence of two tumor subclonal profiles: a more proliferative, invasive and sensitive to Vemurafenib; and other less proliferative, less sensitive to Vemurafenib and presenting more expression of RECK and factors associated to EMT. Our results together have showed the parental cell lines used here differed from each other in terms of cell viability, induction of apoptosis, and ERK phosphorylation after treatment with Vemurafenib. According to our model, the intrinsic resistance to Vemurafenib is present and reflects the heterogeneity of the initial tumor. With these results, we intend to contribute to the knowledge of the tumor clonal subpopulations composition in tumor heterogeneity, and contributes to the RECK function in melanoma biology.

A Igreja Ibérica na região da Península Ibérica, durante a Alta Idade Média, tornara-se uma referência para o poder temporal, como já o era para o povo. Embora fosse apoiada pela monarquia visigótica, ainda enfrentava problemas internos de dogma e de situações decorrentes dos conflitos humanos. O expansionismo árabe trouxe para a região ibérica um confronto além de civil, religioso que ameaçava e fragilizava o papel homogêneo que a Igreja desempenhava no território. A convivência entre muçulmanos e cristãos, que estavam subjugados, fez com que a Igreja buscasse respostas para a situação vivida naquele momento, após a invasão muçulmana no território ibérico. Este trabalho de mestrado buscou compreender o discurso elaborado pela Igreja, através do escrito de um de seus membros, que interpretaria a situação de acordo com a perspectiva eclesiástica. Concomitantemente, verificaremos os problemas estruturais concernentes a formação da monarquia visigoda, para analisar o contexto histórico no qual foi produzido o documento utilizado neste trabalho. / The Church in the region of the Iberian Peninsula during the Middle Ages, become a reference to the laic power, as it was for the people. Although it was backed by the Visigothic monarchy, still faced internal problems of dogma and situations resulting from human conflicts. The Arab expansionism brought to the Iberian region a confrontation, as well as civil, religious that threatened and weakened the homogeneous role that Church played in the territory. The coexistence between Muslims and Christians, who were enslaved, made the Church sought answers to the situation experienced at that moment, after the Muslims invasion in the Iberian territory. This dissertation sought to understand the speech prepared for the Church, written by one of its members, who would interpret the situation according to the ecclesiastical perspective. Concurrently, we find structural problems concerning the formation of the Visigothic monarchy, to consider the historical context in which it was produced the document used in this work.

A endometriose é uma doença de origem multifatorial, caracterizada por presença de tecido endometrial fora da cavidade uterina, responsável por sintomas álgicos com grande impacto na qualidade de vida da paciente, além de ser um dos principais fatores de infertilidade. Muitos estudos já foram realizados no intuito de explicar a etiopatogenia da endometriose, assim como muito tem sido estudado para encontrar novas estratégias de tratamento. Várias linhas de medicamentos têm sido estudadas com este intuito, agindo em diferentes pontos da etiopatogênese da doença, uma delas na inibição de metaloproteinases da matriz extracelular, que tem papel no remodelamento do mesotélio do peritônio e angiogênese. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de uma droga (doxiciclina) de baixo custo, com ação conhecida na inibição das metaloproteinases, em endometriose peritoneal induzida em ratas. Para isso, foram usadas 30 ratas adultas Wistar com lesão induzida de endometriose, divididas em três grupos, um grupo controle (C, n=10) sem tratamento, um grupo onde foi administrado doxiciclina em baixa dose (BD, n=10) e um grupo onde foi realizado doxiciclina em alta dose (AD, n=10). Foi realizada avaliação da área das lesões de cada rata e estudo imunohistoquímico para positividade de anticorpo primário de metaloproteinase de matriz 9 (MMP9) e de inibidor de metaloproteinase de matriz 2 (TIMP2). A doxiciclina atuou reduzindo a área das lesões nos grupos BD e AD (p=0,0052) em relação ao grupo C e reduzindo a expressão do TIMP2 no grupo AD (p=0,0009) em relação aos grupos BD e C. Não houve resultado significativo na expressão da MMP9. / Endometriosis is a multifactorial origin disease, characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity, responsible for painful symptoms with important impact on the life quality of the patient, besides being one of the main factors of infertility. Many studies have already been carried out to explain the etiopathogenesis of endometriosis, and much has been studied to find new treatment strategies. Several lines of drugs have been studied for this purpose, acting at different points in the etiopathogenesis of the disease, one of them in the inhibition of extracellular matrix metalloproteinases, which plays a role in the remodeling of the peritoneum mesothelium and angiogenesis. The purpose of this study was to evaluate the influence of a low-cost drug (doxycycline), with known action on the inhibition of metalloproteinases, in induced peritoneal endometriosis in rats. Thirty adult Wistar rats with endometriosis-induced lesions were divided into three groups: one untreated control group (C, n = 10), one group receiving low dose doxycycline (BD, n = 10) and a group where high dose doxycycline (AD, n = 10) was performed. An evaluation of the lesion area of each rat and immunohistochemical study for primary antibody to matrix metalloproteinase 9 (MMP9) and matrix metalloproteinase inhibitor 2 (TIMP2) was performed. Doxycycline worked by reducing the area of lesions in the BD and AD groups (p = 0.0052) in relation to the C group and reducing the expression of TIMP2 in the AD group (p = 0.0009) in relation to the BD and C groups. There was no significant effect on MMP9 expression in the present study.

Os gliomas apresentam comportamento amplamente infiltrativo e a invasão para o tecido cerebral sadio adjacente ao tumor o tornam um grande desafio para intervenções clínicas agressivas. Estudos recentes dos mecanismos de invasão de gliomas sugerem que as metaloproteinases (MMPs) desempenham papel crítico neste processo. As MMPs são super-expressas em quase todos os tumores humanos e vastos dados pré-clínicos as apontam como contribuintes do desenvolvimento maligno; portanto, a inibição de atividade de MMPs poderia ser adotada como uma estratégia de terapêutica anti-câncer. A atividade inibitória de MMP-2 e MMP-9 do extrato liofilizado da raiz de P. umbellata foi avaliada em estudos prévios de nosso laboratório por Ropke e colaboradores. Assim, esta dissertação teve como objetivo, primeiramente, explorar a citotoxicidade do extrato de P. umbellata e posteriormente, a avaliar o efeito do 4-neroridilcatecol (o princípio ativo isolado do extrato) quanto à citotoxicidade e potencial de inibição de MMPs durante o processo de invasão de duas linhagens de glioma humano, caracterizadas pelos diferentes níveis de invasividade. Os resultados revelam os índices de citotoxicidade do extrato bruto da raiz de P. umbellata e do composto 4-NC presente nesse extrato. Ensaios de invasão tumoral in vitro em concentrações não citotóxicas mostraram que há forte inibição desse processo pelo composto. Interessantemente, o 4-NC não alterou significativamente a atividade e expressões gênicas e protéicas de MMPs envolvidas na invasão deste tipo de tumor, nem de seus reguladores. O ensaio de fragmentação do DNA nos indica que a morte das células é, em parte, devido à apoptose, além da participação do processo autofágico. Ensaios analisando a expressão de proteínas e genes envolvidos na via de autofagia mostraram que há indução deste processo pelo composto estudado. Quando este processo é inibido farmacologicamente há incremento na morte celular causada pelo 4-NC. Considerando que em câncer, a autofagia é um processo essencial na modulação da resistência a quimioterápicos, descrevemos aqui, que 4-NC, a exemplo de seu poder citotóxico em melanomas, atua no processo invasivo de gliomas e induz morte celular além de desencadear o processo autofágico. / Gliomas present extensive invasive behavior and the invasion to healthy adjacent neural tissue makes this type of tumor a great challenge for aggressive clinical intervention. Recent studies concerning glioma invasion mechanisms suggest that metalloproteinases (MMPs) have a critical role in this process. MMPs are overexpressed in almost all types of human tumors and many pre-clinical data point to them as functional enhancers to malignant development; then, the inhibition of MMP activity could be adopted as an anti-cancer therapeutic strategy. P. umbellate root extract inhibitory activity over MMPs-2 and 9 was previously evaluated in studies from our group by Ropke et al. Thus, this dissertation has as an objective to evaluate the cytotoxic effect of 4-nerolidylcatechol (a compound purified from the P. umbellate extract), and its potential for MMP inhibition during the invasive process of two human glioma cell lines, characterized for their different invasive levels. Our results show the cytotoxic levels of the crude extract from the root of P. umbellate and from the 4-NC isolated from the extract. In vitro tumor invasion assay in non-cytotoxic drug concentrations indicate a strong inhibition of this process by the compound. Interestingly, 4-NC did not significantly alter enzyme activity, genetic or proteic expression of the MMPs involved in glioma invasion, or its regulators. The DNA fragmentation assay shows that cells die, in part, due to apoptosis, but autophagy pathway is also involved in cell death. Assays showing expression of proteins and genes involved in the autophagy pathway showed an increase of this process by the compound studied. Pharmacological inhibition of this process leads to an increase in cell death caused by 4-NC. Considering that in cancer, autophagy plays an essential role in the modulation of chemoresistance, we describe here that 4-NC, as described previously for melanomas, acts on glioma invasive process, induces cell death and is capable of up-regulating autophagic process.

OBJETIVOS: Estudar variáveis anatomopatológicas relacionadas à progressão tumoral em carcinomas uroteliais primários de bexiga e sua associação com a imunoexpressão de metaloproteinases de matriz (MMPs) - 2, -9 e -14 no epitélio e no estroma dos tumores primários e nas metástases linfonodais. MÉTODOS: Sessenta e um casos de carcinomas uroteliais musculoinvasivos ou localmente avançados primários da bexiga operados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo, sendo 34 casos com metástase para linfonodo regional, foram caracterizados quanto ao gênero, idade, tamanho, focalidade, grau histológico, tipo/configuração neoplásica, tipo papilífero da neoplasia, padrão arquitetural de invasão tumoral, grau de atipia nuclear, componente sarcomatoide, diferenciações escamosa e glandular, variante histológica, invasões linfovascular e perineural, carcinoma in situ, estádio do tumor primário, metástase para linfonodo regional, tamanho da metástase e extensão extranodal. Amostras teciduais de 1,0 mm foram dispostas em micromatrizes teciduais (TMA) para pesquisa imuno-histoquímica (IH) das enzimas MMP-2, MMP-9 e MMP-14. A expressão IH das MMPs foi graduada em uma escala semiquantitativa de 0 (ausência de expressão) até 20 (maior expressão). As associações entre a imunoexpressão das MMPs de forma global, no epitélio e estroma do tumor primário e na metástase linfonodal com as variáveis anatomopatológicas foram avaliadas através do teste do qui-quadrado de Pearson, sendo consideradas significativas ao nível de p<0,05. RESULTADOS: Trinta e seis, 57 e 60 casos do tumor primário foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. Nas metástases linfonodais, 20, 27 e 26 casos foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. A imunoexpressão global de MMP-2 no tumor primário mostrou-se associada com o padrão arquitetural de invasão (p=0,022) e sua expressão no estroma com o grau de atipia nuclear (p=0,032) e a porcentagem de componente sarcomatoide (p=0,003). A imunoexpressão global de MMP-9 no tumor primário mostrou-se associada com diferenciação escamosa (p=0,033). O padrão arquitetural de invasão relacionou-se com a expressão de MMP-9 no epitélio (p=0,043) e no estroma (p=0,044). A expressão de MMP-9 no estroma mostrou-se associada com o grau de atipia nuclear (p=0,031), componente sarcomatoide (p=0,036) e com a porcentagem desse componente no tumor primário (p=0,013). O estádio tumoral agrupado pT2+pT3 vs pT4 demonstrou associação com a MMP-9 expressa no epitélio (p=0,049). Para a MMP-14, o padrão arquitetural de invasão demonstrou associação significativa com a imunoexpressão global (p=0,022) e no epitélio tumoral (p=0,045). A porcentagem de componente sarcomatoide relacionou-se ainda com a expressão estromal de MMP-14 (p<0,001). Considerando a imunoexpressão de MMPs apenas na metástase linfonodal, houve associação significativa da MMP-9 com o tipo de variante histológica do tumor (p=0,021) e da expressão de MMP-14 com a porcentagem de componente sarcomatoide no tumor primário (p=0,017). CONCLUSÃO: O estudo da imunoexpressão de MMP-2, MMP-9 e MMP-14 em amostras organizadas em TMA, tanto no epitélio como no estroma dos carcinomas uroteliais de bexiga e nas metástases de linfonodos regionais, demonstrou associações estatísticas com características anatomopatológicas reconhecidas como de prognóstico ruim para essas neoplasias, indicando a ação dessas enzimas na transição epitélio-mesênquima e nas etapas de progressão e metástase dos carcinomas uroteliais / OBJECTIVES: To study morphological features related to tumor progression in urothelial carcinoma of the urinary bladder and its association with immunohistochemical (IHC) expression of matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9 and -14 in epithelial and stromal cells of primary tumor and regional lymph node metastases. METHODS: Sixty-one cases of muscle-invasive or locally advanced urothelial carcinomas of the bladder operated on Clinic\'s Hospital of Faculty Medicine Sao Paulo University and the Cancer Institute of the State of Sao Paulo, with 34 cases showing regional lymph nodes metastases, were characterized regarding gender, age, tumor size, multifocality, histological grade, neoplastic type/configuration, papillary type, architectural pattern of invasive tumor, nuclear atypia, sarcomatoid component, squamous and glandular diffentiation, histological variants, lymphovascular and perineural invasion, carcinoma in situ, tumor stage, metastases to regional lymph nodes, metastases size and extranodal extension. Tissue samples of 1.0 mm were arranged in tissue microarrays blocks (TMA) for IHC detection of MMP-2, MMP-9 and MMP-14. The grading of expression of MMPs was determined to a semiquantitative scale from 0 (absence) to 20 (higher expression). The associations between the IHC global expression of MMPs, in epithelium and in stromal cells of the primary tumor and in the lymph node metastases with the morphological features were obtained through Pearson\'s chi-square (significant at p<0.05). RESULTS: Thirty-six, 57 and 60 cases of primary tumor were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. In the lymph nodes metastases, 20, 27 and 26 cases were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. The global IHC expression of MMP-2 in primary tumor has been associated with the architectural pattern of invasion (p=0.022). The expression in stromal cells were correlated with the degree of nuclear atypia (p=0.032) and the percentage of sarcomatoid component (p=0.003). The IHC expression of MMP-9 in primary tumor has been associated with squamous differentiation (p=0.033). The architectural pattern of invasion was related to the expression of MMP-9 in epithelium (p=0.043) and in the stroma (p=0.044). Expression of MMP-9 in the stroma was associated with the degree of nuclear atypia (p=0.031), sarcomatoid component (p=0.036) and the percentage of this component in primary tumor (p=0.013). The grouped tumoral stage pT2+pT3 vs pT4 showed association with MMP-9 expressed in epithelium (p=0.049). For MMP-14, the architectural pattern of invasion showed significant association with global IHC expression (p=0.022) and tumor epithelium (p=0.045). The percentage of sarcomatoid component related to the estromal expression of MMP-14 (p<0.001). Considering the IHC expression of MMPs in lymph nodes metastases, there was a significant association between MMP-9 with the type of histological variants (p=0.021) and the expression of MMP-14 with the percentage of sarcomatoid component in primary tumor (p=0.017). CONCLUSION: The study of IHC expression of MMP-2, MMP-9 and MMP-14 in bladder carcinoma samples arranged in TMA, both in epithelium and in stromal cells and regional lymph nodes metastases, demonstrated significant association with morphological features recognized as prognostically important for these tumors. These findings herald the importance of action of these enzymes in epithelialmesenchymal transition, providing basis for the understanding of tumoral progression and metastases in urothelial carcinoma