Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura. / Made available in DSpace on 2012-10-20T04:45:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Acompanha memorial / Tese (livre-docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T08:07:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Habib_MohamedEzzEl-DinMostafa_LD.pdf: 6621704 bytes, checksum: f55463be23eb86b925f2eacb9517e66e (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: A patogenicidade de duas variedades de Bacillus tnuringiensis Berliner foi investigada em larvas de Lepi-doptera e Diptera. Através do enfoque patológico no estudo, tentou-se esclarecer alguns aspectos importantes nas áreas de pesquisa, industrialização de patógenos e aplicação de produtos à base de B. thuringiensis no campo. Os sintomas externos pré-mortais foram descritos em larvas de Lepidoptera infectadas por B. thuringiensis var. kurstaki e em larvas de Diptera infectadas por B. thuringien-sis var. israelensis. Algumas alterações histológicas foram detectadas em alguns tecidos de tais larvas, principalmente , no intestino médio, sistema nervoso e musculatura. As alterações observadas nesses tecidos foram relacionadas com o desencadeamento dos sintomas externos da bacteriose. A variedade kurstaki teve ação fatal lenta (2 a 3 dias) nas larvas de Lepidoptera, quando comparada com a ação da variedade israelensis nas larvas aquáticas de Diptera,onde a morte ocorre em poucas horas após a infecção. Nenhum dos lepidópteros estudados pertence o tipo I da classicificação de Heimpel & Angus (1959); pois não ocorreu paralisia geral ou aumento no pH da hemolinfa nas larvas doentes. Entre as larvas dessas espécies, as de Brasso-lis sophorae revelaram-se mais susceptiveis em relação às demais. Por outro lado, as larvas de Spodoptera latifascia e-ram as mais resistentes à mesma variedade kurstaki ( sorotipo H-3a:3b). A origem do patógeno, o hospedeiro do qual este foi isolado e o processamento da produção comercial, além da variedade do bacilo e da espécie do inseto infectado, eram fatores responsáveis pela variação nas respostas das larvas infectadas. A expressão da quantidade do patógeno em termos de Unidades Internacionais de virulência / unidade de peso do inseto tratado revelou-se altamente precisa para comparações de susceptibilidade de insetos e virulência de produtos. 0 uso de critérios de DL50 e CL50 _ mostrou-se muito adequado, e até pode ser recomendado, para estudos com populações de insetos geneticamente menos variáveis. A resposta dos indivíduos, no caso, seria diretamente relacionada com e em função da dose ou a concentração aplicada. 0 uso de TL50 , por outro lado, revelou-se mais funcional e, também, pode ser recomendado para investigações com populações de maior variabilidade genética. Os níveis de susceptibilidade revelados para cada uma das espécies estudadas, indicaram a alta possibilidade de obter resultados satisfatórios no campo, quando produtos comerciais à base da variedade kurstaki forem aplicados contra larvas de B. sophorae , Alabama argillacea e Plodia inter-punctella em jardins e áreas urbanas, lavoura e armazéns respectivamente. A morte iniciou-se, nas larvas aquáticas dos dípteros estudados, apenas poucas horas após a infecção pela variedade israelensis. As larvas de Culex declarator (Culicidae) mostraram-se mais susceptíveis a essa variedade do que as lar vas de simulídeos, quando infectadas com este patógeno. Entre as duas espécies de simulídeos, as larvas de Simulium goeldii eram 4 vezes mais susceptíveis do que as de S. rorotaense. As larvas do último estádio de C. declarator revelaram-se mais susceptíveis ao patógeno do que as dos estádios iniciais. No mesmo tempo, as larvas no início do último estádio (42) eram mais susceptíveis do que no final do mesmo estádio. Este último aspecto, juntamente com a morte rápida causada pelo patógeno ( 2 a 3 horas), devem ser considerados nas recomendações de alguns órgãos oficiais no exterior. Tais órgãos, exigem que o 42 estádio larval de Aedes aegypti seja usado nos bioensaios de padronização de produtos à base da variedade israelensis ; porém, sem estabelecer uma fase desse estádio. A especificidade e a alta virulência da variedade israelensis para larvas aquáticas de Diptera, revelam o seu grande valor como agente promissor no controle microbiano de larvas de Culicidae e Simuliidae. Os sintomas externos observados nas larvas de. C. declarator, as alterações nistológicas e a morte rápida foram suficientemente convenientes para mostrar a ação da S-endo toxina produzida pelo patógeno. Tal toxina deve ter afetado drasticamente o sistema nervoso e a musculatura da larva, dificultando assim a manutenção desta na superfície da água e conseqüentemente a sua respiração do ar atmosférico. Assim , a larva afundada morreu por asfixia. Esses estudos revelaram a presença de um novo campo para investigações de patologia de insetos e controle microbiano para os dípteros aquáticos neotropicais e subtropicais . Tais investigações terão o seu alto valor do ponto de vista humano, desde que várias dessas espécies tem a sua importância como insetos vetores de doenças humanas / Abstract: The pathogenicity of two varieties of Bacillus thuringiensis Berliner was investigated using some lepi-dopterous and dipterous larvae. The aim of the present study was to clarify certain aspects related to the application of insect pathology, such as susceptibility and virulence évalua tions, standardisation criteria, and field applications of microbial products to the control of some harmful insects. The sequence of external symptoms was described in lepidopterous larvae infected with the B. thuringiensis var. kurstaki (syrotype K-3a:3b) and in dipterous larvae infected with the variety israelensis (syrotype H-14)-The histological alterations, in these infected larvae, were described, principally those in the mid-gut, nervous system, and musculature These alterations were found to be directly associated with the different external symptoms of the disease. The progress of the disease up to the death in the lepidopterous larvae lasted longer time (2-3 days) than in dipterous ones (2-3 hours). Type I of Heimpel & Angus (1959) classification did not occur among the lepidopterous species studied, since nei_ ther general paralysis nor pH alterations in the hemolymph were detected. Brassolis sophorae larvae were found to "be the most susceptible to syrotype H-3a:3b, when compared with the other lepidopterous species. On the other hand, Spodoptera lati-fascia larvae were the most resistant. Origin, natural host, and mass production criteria of the pathogen, in addition to its variety and the tested insect species, were the most important factors responsible for the variation in responses of the infected larvae. Therefore, these aspects should be considered to choice the more adequate product for each insect species to be combatted. The quantity of the pathogen expressed in International Units of toxicity per unit of body weight, showed to be highly precise for the comparison of insect susceptibility and pathogen virulence. The LD^Q and LC^0 criteria were found to be suitable and, therefore, can be recommended for investigations where the populations of insects are of low genetic variability. On the other hand, for genetically variable populations, the LT^q was found to be more adequate. B. sophorae, Alabama argillacea and Flodia inter-punctella were found to be highly susceptible to the syrotype H-3a:3b. Therefore, this pathogen can be recommended for their control. The aquatic dipteran larvae, studied in the present work, died some hours after infection with syrotype H-14.Culex declarator (Culicidae) larvae were more susceptible than those .132 . of the simulid species. Within Simuliidae, Simulium goeldii larvae were 4 times more susceptible than the S_. rorotaense ones. The last instar (4th.) larvae of C. declarator were more susceptible than those of the first instars. Moreover, within the same instar, these larvae showed different levels of susceptibility. In the initial phase of the last instar they were more susceptible than in the final phase. These informations, in addition to the rapid fatal action of the toxin in dipteran aquatic larvae, should be considered by the governamental agencies, in establishing standardization criteria for future commercial products based on this variety.At the present, these agencies establish the 4th instar larvae of Aedes aegypti as a test insect for stadardization bio-assays, ignoring the difference in susceptibility within the same instar. Because of the high specificity and virulence of B. thuringiensis var. israelensis for dipteran aquatic larvae, it can be considered as a promissing agent for microbial control of mosquitos and black flies larvae. Considering the mode of action of syrotype H-14 in mosquito larvae, the results led us to beleive that the £-endotoxin liberated in the high alkaline mid-gut affected the ventral nervous system and consequently the musculature , provoking disfunction of the latter.The effect on the muscles made the larva lose its capacity to maintain itself at the water surface. Consequently, the larva submerged and died by asphixiation. The observed sequence of the external symptoms, as well as the histological alterations sustained this hypothesis. The results obtained in the present study reveal the possibility to utilize the syrotype H-14 in the control of vectors of some human diseases, such as malaria and filaria This application, however, requires additional extensive research work to complete urgently needed informations / Tese (livre-docencia) - Univer / Livre-Docente em Ciencias Biologicas

Orientador : Aluisio Jose Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-16T23:53:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leal_TaniaTeresinhadeSouza_M.pdf: 5192636 bytes, checksum: db6eda422dacd694306d7f1bc717df27 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: As larvas das espécies Chrysomya albiceps, Chrysomya chloropyga e Chrysomya megacephala foram inicialmente utilizadas neste estudo. A espécie C. chloropyga, foi selecionada por seu comportamento semelhante em dieta natural (carcaça) e na dieta de leite e levedura (STOFFOLANO, 1974). Verificou-se inicialmente, o efeito de diferentes niveis de proteína na dieta, no desenvolvimento das larvas, utilizando-se a:rcD fonte proteica leite em pó integral, leite em pó integral combinado com levedura, caseína e caseína combinada com levedura, nos níveis de 2, 4, 6, 8 e 10%. Nas dietas de leite e de leite e levedura, as porcentagens de ganho de peso foram proporcionais ao nível de proteína das dietas nos níveis 2 e 4%. Nos níveis 6, 8 e 10%, não houve crescimento, provavelmente devido à alta concentração de sólidos nas dietas. Com a utilização de caseína e caseína combinada com levedura, obtivemos respostas de crescimento proporcionais ao níve1 de proteína das dietas até o nível 8% para as dietas de caseína e levedura e até o nível 10%, para as dietas de caseína. Como as dietas contendo levedura apresentaram resultados superiores aos obtidos somente com leite ou caseína como fontes proteicas e, sendo levedura uma fonte rica em ácido ribonucleico, este substituiu a levedura nas dietas de caseína, obtendo-se resultados superiores aos até então obtidos.- A série de dietas contendo caseína e RNA foi por este motivo utilizada como padrão nos ensaios subseqüentes. Verificamos então, respostas das larvas quando proteinas de diferentes origens eram adicionadas às dietas. No primeiro grupo de dietas as farinhas das leguminosas feijão e soja foram utilizadas, testando-se também o efeito de tratamento térmico e o de suplementação com metionina no desenvolvimento das larvas. A suplementação de feijão crú com metionina não aumentou a porcentagem de ganho de peso das larvas, o que ocorreu após o tratamento térmico e também com a suplementação da farinha tratada. Nas dietas com farinha de soja crua, quando suplementadas com metionina, as larvas apresentaram porcentagem de ganho de peso maior do que as dietas não suplementadas. O tratamento térmico também melhorou a qualidade das dietas. Os cereais arroz, milho e trigo foram utilizados como contendo cereal como única fonte proteica, para milho e trigo. A suplementação das dietas com aminoácidos limitantes produziu resultados superiores ou próximos aos obtidos com as dietas complementadas. Um último ensaio foi realizado utilizando-se ovo integral liofilizado como fonte proteica, obtendo-se resultados bastante satisfatórios, embora as dietas não contivessem RNA adicionado, confirmando que o desempenho da dieta depende do balanço adequado de nutrientes / Abstract: The growth of Chrysomya albiceps, Chrysomya chloropyga and Chrysomya megaceplala larvae toward a natural (mice carcass) and milk-yeast diets was studied. The larva of C. chloropyga was selected because of its identical growth in both diets. Experiments were carried out to study the effect of different protein levels and different protein sources as well. Four pratein sources were utilized in this study: l)dried whole milk, 2) dried whole milk-plusyeast, 3) casein and 4) casein cornbined with yeast. The protein levels were 2, 4, 6, 8 and 10% for each one of the diets. In the dried whole milk and dried whole milk-plus-yeast the gain in body weight was proportional to the protein content of the diets, at the levels af 2 and 4%. At 6, 8 and 10% the growth was impaired, probably due to the high solid concentration in the diets. When the caseio and the casein-plus-yeast diets were utilized, the growth was proportional to the protein content of the diets up to the leveI of 8%, in the case of the casein plus-yeast diet, and up to 10% for the casein diet. When yeast was incorporated to the diets, the growth rates were always higher than those obtained without it. This result was not surprising sinee yeasts are a good natural source of ribonucleic acid. The addition of RNA to the casein diet showed even better results, in terms of growth, than the casein-plus-yeast diet. For this reason, the casein diet to which RNA was added, was taken as the standard diet throughout this study. The effect af different protein saurces on the growth rates of C. chloropyga larvas was investigated in another set of experiments. The ability of bean (Phaseolus vulgaris) and soy-bean (Glycine max) proteins to support grawth as well as the effect of heat treatment and L-methionine supplementation were studied. The larvae did not respond to the supplementation of the unheated bean protein with L-methionine, however the growth rates were higher when the flour was heat-treated and when the heated-treated flour was supplemented with L-methionine. In the case of unheated soy flour, there was a better growth response after L-methionine addition; heated soy flour supported higher growth rates than the unheat flour both with and without L-methionine addition. Rice corn and wheat were also testes as protein sources for the C. Chloropyga larvae. Corn and wheat when supplemented with limiting amino acids elicited a better growth response than the unsupplemented sources. Supplementation of corn, rice and wheat with bean and soy-bean protein was beneficial to the growth of C. Chloropyga larvae. Dried whole egg vlas also tested, giving higher growth rates when compared with any other protein source / Mestrado

Members of the Pyramidellidae are ectoparasites that have highly unusual feeding habits relative to other heterobranch gastropods. Pyramidellid foregut anatomy is so complex that it is difficult to recognize homologous parts relative to other heterobranch gastropods, which is a necessary step in reconstructing evolutionary changes to the foregut developmental program. We investigated foregut development through metamorphosis and beyond in the pyramidellid Odostomia tenuisculpta. By examining sections of larval and post-velum loss stages, we conclude that the so-named acrembolic proboscis of this pyramidellid is actually an eversible oral tube and the piercing stylet is either a modified radular tooth or a jaw derivative. Much of the complex, multi-component foregut of the post-metamorphic stage is constructed during a 10-day period of explosive metamorphic morphogenesis. This stands in marked contrast to predatory neogastropods, where most components of the adult feeding system become extensively differentiated in the larval stage prior to settlement and metamorphosis. / Graduate / 2020-06-10

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-21Bitstream added on 2014-08-13T18:01:08Z : No. of bitstreams: 1 000738502_20150619.pdf: 168048 bytes, checksum: 67974831ca78b6d925c01cebfef1a94c (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-22T12:53:50Z: 000738502_20150619.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-22T12:54:45Z : No. of bitstreams: 1 000738502.pdf: 1467766 bytes, checksum: 7c0de265290f7067173746101d9a2b71 (MD5) / Aminopeptidases N (APNs) são uma classe de ectoenzimas presentes no intestino médio das larvas de lepidópteros, que participa no cenário do modo de ação das toxinas Bacillus thuringiensis (Bt). No presente trabalho, duas aminopeptidases (OnAPN5 e OnAPN6) foram clonadas a partir células do intestino de Ostrinia nubilalis, lepidópteros praga do milho dos climas temperados. As duas sequências foram identificadas como APNs pela da presença dos motivos HEXXH18(X)E e GAMEM, bem como o peptídeo sinal. As mesmas se agruparam corretamente quando analisadas com outras sequências de aminopeptidase em uma arvore fenogenética, Pode-se verificar a expressão em tempo real em diferentes tecidos (intestinal, adiposo e tegumento) da APN5 e APN6 e também de uma terceira aminopeptidase APN7 analisada nesta etapa do trabalho, onde APN7 apresentou expressão de 7,5 vezes mais no tegumento quando comparado com o intestino e de 4,9 vezes mais no tecido adiposo quando comparado com o intestino enquanto que a APN5 e APN6 apresentaram expressão relevante apenas no tecido do intestino. Estas identificações de APNs irão facilitar estudos para caracterizar interações de ligação com as toxinas Bt, proporcionando uma forma de compreender e evitar o desenvolvimento da resistência às proteínas Cry de B. thuringiensis. Estas informações são fundamentais para a elaboração de estratégias adequadas para o manejo da resistência de pragas e seu efetivo controle / Aminopeptidases N (APNs) are a class of ectoenzymes present in the midgut of lepidopteran larvae, which participates in setting the mode of action of Bacillus thuringiensis toxin (Bt). In this work, two aminopeptidases (OnAPN5 and OnAPN6) were cloned from cells of the intestine Ostrinia nubilalis, Lepidoptera pests of temperate maize. The two sequences were identified as APNs for the presence of motifs HEXXH18 (X) and E GAMEM as well as the signal peptide. The same when analyzed correctly grouped with other aminopeptidase sequences in a tree fenogenética, can check in real time the expression in different tissues (gut, adipose tissue and carcass) from APN5 and APN6 and also a third aminopeptidase analyzed in this step APN7 work, where APN7 showed expression of 7.5 times the carcass when compared with the intestine and 4.9 times in adipose tissue when compared with the intestine while APN5 and APN6 relevant only showed expression in tissue of the intestine. These IDs APNs will facilitate studies to characterize binding interactions with Bt toxins, providing a way to understand and prevent the development of resistance to Cry proteins of B. thuringiensis. This information is fundamental to the development of appropriate strategies for managing pest resistance and its effective control

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. / Made available in DSpace on 2012-10-17T10:29:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A concentração e volume de sêmen foram avaliados e machos de jundiá, Rhamdia quelen, sem indução hormonal. A motilidade espermática em pH 4, 5, 6, 7, 8 e 9 foi avaliada, em machos induzidos e não induzidos. A influência desses pH descritos sobre ovos e larvas de jundiá, em diferentes desovas, com diferentes temperaturas, também foi examinada, no intervalo entre fertilização e abertura da boca das larvas. Foram encontrados volumes de 0,41±0,47ml, motilidade entre 60 e 85% e concentração espermática de 24.650.000 a 138.950.000 células/mm3. A motilidade espermática não apresentou diferença estatística entre machos induzidos e não induzidos nos diferentes tratamentos. A mortalidade dos ovos no pH 4 foi de 100%. Não houve diferença entre os tratamentos, com relação à taxa de fertilização, nas desovas com temperatura mais baixa. A desova com temperatura mais elevada apresentou diferença nos pH 6 e 7, que foram menores. O tempo de eclosão dos ovos foi diretamente proporcional à temperatura. Na temperatura de 17oC, houve mortalidade total dos ovos. Após a eclosão, todas as larvas do pH 5 morreram. A abertura da boca foi influenciada pela temperatura e não pela pH. A melhor taxa de sobrevivência foi obtida com temperatura de 27,5±1,09oC, mas observou-se a influência do pH. Nas condições analisadas, conclui-se que os machos não precisam ser induzidos hormonalmente. Os níveis de pH estudados não influenciaram a motilidade do sêmen. O pH 4 é fatal para todos os ovos, assim como o pH 5 para as larvas. Da fertilização até a abertura da boca a faixa de pH de 6 a 9 foi favorável à larvicultura do jundiá.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T13:39:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282353.pdf: 2878481 bytes, checksum: dfbb804a538ff39823a3fcb921ebe472 (MD5) / Dentre as espécies nativas com potencial de cultivo, estão a ostra perlífera Pteria hirundo (Linnaeus, 1758) e o molusco de areia Cyrtopleura costata (Linnaeus, 1758). O tempo de larvicultura de P. hirundo variou de 19 a 32 dias. Foram testadas duas salinidades: 30# e 35#, sendo a última favorável ao manejo assim como troca de água a cada 48 horas, quando comparada com troca diária. Em densidade de larvas inferiores a 8,5 larvas/mL-1 a sobrevivência larval final foi superior a 19%. O bioensaio em larvas de P. hirundo indicou que a combinação de temperatura a 23?C com salinidade 35 # favoreceu a sobrevivência e o desenvolvimento larval e temperaturas elevadas favoreceram o crescimento. Verificou-se que microalgas flageladas combinadas com diatomáceas propiciaram um maior crescimento e sobrevivência larval. A taxa de recuperação de assentamento observada nas larvas de P. hirundo foi de 69,64%, após duas semanas de manutenção em laboratório. O crescimento das sementes de P. hirundo, em cultivo no mar, foi mais acentuado nas ostras de classe média quando comparada às da classe alta. A sobrevivência nesta etapa de cultivo foi superior a 90% nas duas classes testadas. Os reprodutores de Cyrtopleura costata foram obtidos sempre em maré seca, observando-se o orifício do sifão no substrato areno-lodoso. A manutenção de reprodutores em laboratório favoreceu a integridade dos animais, quando comparado a estruturas mantidas no mar. A desova ocorre em poucos minutos após início da indução. O tempo de larvicultura variou entre 29 e 34 dias.

O termo proteoformas refere-se a todas as formas moleculares na qual variantes proteicas codificadas por um único gene podem ser encontradas, incluindo mudanças devido a variação genética, splicing alternativo e modificações cotraducionais e póstraducionais (MCTs e MPTs, respectivamente). Em Echinococcus granulosus, o agente causador da hidatidose cística, a caracterização de proteoformas ainda não foi sistematicamente abordada e pode revelar mecanimos moleculares relevantes para o estabelecimento do parasito nos hospedeiros intermediários. A caracterização tanto de proteoformas da frutose-bifosfato-aldolase (FBA) e enolase, potencialmente moonlighting, como de outras proteoformas expressas em frações subcelulares do estágio larval deste parasito foi realizada. Em relação às enzimas glicolíticas, várias evidências indicam a EgFBA1 e a EgEno1 como sendo proteínas moonlighting: (i) as localizações não usuais destas proteínas no tegumento de protoescólices e em produtos de excreção/secreção (ES) in vivo (líquido hidático) e in vitro; (ii) características estruturais destas proteínas, com destaque para a identificação de um sítio de ligação à F-actina na estrutura da EgFBA1; (iii) a habilidade destas proteínas de interagirem com várias proteínas não relacionadas à glicólise. Em relação ao repertório de proteínas expressas em frações subcelulares, frações nucleares e citosólicas de protoescólices de E. granulosus foram analisadas através de proteômica top down e bottom up. De modo geral, 525 proteínas foram identificadas, sendo 224 e 156 proteínas exclusivamente detectadas em frações nucleares e citosólicas, respectivamente. Além da identificação de proteínas, nossa abordagem de proteômica top down também permitiu a caracterização de MCTs e MPTs, destacando a excisão da metionina N-terminal e a acetilação N-terminal como modificações conservadas nas proteínas de E. granulosus. Nossos resultados representam as primeiras evidências de funções alternativas realizadas por enzimas glicolíticas em E. granulosus e sugerem que proteínas multifuncionais devem desempenhar papéis importantes na interação parasitohospedeiro. Os proteomas nuclear e citosólico de protoescólices também foram descritos, revelando novos aspectos da biologia do parasito, incluindo proteoformas com MCTs e MPTs, as quais devem desempenhar papéis críticos na regulação de processos celulares deste parasito. / The term proteoforms refers to all molecular forms in which the protein product of a single gene can be found, including changes due to genetic variation, alternatively spliced RNA transcripts and co-translational and post-translational modifications (CTMs and PTMs, respectively). In Echinococcus granulosus, the causative agent of hydatid disease, the characterization of proteoforms has never been systematically addressed and it may reveal molecular mechanisms underlying the parasite biology. Here, the characterization of fructose-bisphosphate aldolase (FBA) and enolase proteoforms, potentially moonlighting, and also, the identification and characterization of proteoforms expressed in subcellular fractions of E. granulosus larval stage were performed. In relation to the glycolytic enzymes, several evidences indicate EgFBA1 and EgEno1 as moonlighting proteins: (i) their unusual locations in protoscolex tegument and in in vivo (hydatid fluid) and in vitro excretory/secretory (ES) products; (ii) their structural features, highlighting the F-actin binding site in the EgFBA1 structure; (iii) their ability to interact with several proteins non-related to glycolysis. In relation to the repertoire of proteins expressed in subcellular fractions, nuclear and cytosolic fractions from E. granulosus protoscoleces were analyzed by top down and bottom up proteomics for protein identification and characterization. Altogether, 525 proteins were identified, with 224 and 156 proteins exclusively detected in nuclear and cytoplasmic fractions, respectively. Besides protein identification, our top down approach also provided CTMs and PTMs characterization, highlighting N-terminal methionine excision and N-terminal acetylation as conserved modifications in E. granulosus proteins. Overall, our results provided the first experimental evidences of alternative functions performed by glycolytic enzymes in E. granulosus and suggested that multifunctional proteins might play important roles in hostparasite interplay. We also provided the description of nuclear and cytosolic proteomes which revealed new aspects of parasite biology, highlighting proteoforms with CTMs and PTMS which might be playing critical roles in regulating cellular processes occurring in this parasite species.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura. / Made available in DSpace on 2013-12-05T21:44:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 266445.pdf: 732755 bytes, checksum: a039a68bf494226d591694c216643ff5 (MD5) Previous issue date: 2008

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340616.pdf: 2115777 bytes, checksum: 1d2435902e586e211070ad67c52bb4ba (MD5) Previous issue date: 2016 / O objetivo deste estudo foi avaliar a toxicidade de fenantreno (FEN) e dos alquilbenzenos lineares (ABLs) durante o desenvolvimento larval da ostra Crassostrea gigas e verificar a influência do FEN e ABLs sobre respostas moleculares. Os gametas foram recolhidos a partir de ostras adultas, separados por telas, fertilizados e mantidos nas unidades experimentais durante 24 h. Com base em ensaios preliminares (Capitulo 1), foram definidas concentrações para o teste de toxicidade FEN (0,37; 0,75; 1,5; 3,0 e 6,0 µg.L-1) e ABLs (3,5; 5,3; 8,0; 12,0 e 18,0 µg.L-1). E no (Capitulo 2) A escolha das concentrações baseou-se na EC50 encontrada nos testes de toxicidade (Capitulo 1). A avaliação do desenvolvimento larval foi expresso como porcentagens líquidas do desenvolvimento normal (NPNe) de larvas em forma de D, as alturas da concha foi utilizado como um indicador de crescimento e a concentração efetiva (CE50) foi calculada utilizando o método Spearman Karber. Avaliação química da concha das larvas foi feita através da análise de espectrometria de energia dispersiva (EDS) acoplado ao microscópio eletrônico de varredura (MEV). Através da técnica PCR quantitativo em tempo real (qPCR) foi analisada a transcrição de genes-alvo. A CE50 para FEN foi de 1,91 µg.L-1 e de 8,94 µg.L-1 para ABLs. Após 24 horas de exposição, os contaminantes afetaram o desenvolvimento morfológico. O NPNe mostrou uma diferença significativa para FEN e ABLs com relação ao controle, o crescimento larval foi levemente afetado, a análise química das conchas revelaram alteração e houve desregulação na transcrição gênica. Este é o primeiro estudo que demonstra a suscetibilidade de larvas de moluscos marinhos quando expostos aos contaminantes ambientais FEN e ABLs, causando um aumento nas deformidades nas larvas, reduzindo seu crescimento e alterando a transcrições de genes importantes no desenvolvimento, mesmo em concentrações muito baixas.<br> / Abstract : The aim of this study was to evaluate the toxicity of phenanthrene (PHE) and linear alkyl benzenes (LAB) during the embryo-larval development of C. gigas oyster and the influence of the FEN and LAB on molecular responses. The gametes were collected from adult oysters, separated by screens, fertilized and kept in the experimental units for 24 h. Based on preliminary tests (Chapter 1), concentrations were defined for the FEN toxicity test (0,37; 0,75; 1,5; 3,0 and 6,0 µg.L-1) and LAB (3,5; 5,3; 8,0; 12,0 and 18,0 µg.L-1). In (Chapter 2) the choice of concentrations based on EC50 found in toxicity tests (Chapter 1). The embryo-larval development of evaluation were expressed as net percentages of normal development (NPNe) larvae D-shaped shell heights of was used as an indicator of growth and effective concentration (EC50) was calculated using the Spearman Karber-method. Chemical evaluation of the shell of the larvae was performed through the analysis of energy dispersive spectrometry (EDS) coupled to a scanning electron microscope (SEM). Through technical real-time polymerase chain reaction (qPCR) was analyzed transcription of target genes. The EC50 was 1.91 µg.L-1 FEN and 8.94 to 1 µg.L-1 LAB. After 24 hours of exposure, the contaminants affect the morphological development. The NPNe showed a significant difference to FEN and LAB with the control, the larval growth was slightly affected, the chemical analysis of the shells revealed change and there was deregulation in gene transcription. This is the first study to show the susceptibility of marine mollusc embryos when exposed to environmental contaminants FEN and LAB, causing an increase in deformities larvae, reducing its growth, and changing the major gene transcripts in development, even in very low concentrations.