Background.  Sepsis is a syndrome associated with high mortality rates, substantial morbidity and high costs of care. The incidents of sepsis is reported to be high and controversy exists whether gender affect severity or outcome. Little is known about factors determining suscepti­bility for developing the syndrome and severity of the syndrome once developed. Early detection and adequate antibiotic administration are the mainstay of treatment and means to identify patients with particular high risk of adverse outcome are desirable. There are data to suggest that the course of sepsis and outcome from the syndrome may be influenced by inherited differences in the immunological response among humans Aims: Paper I: Assess incidence and outcome for ICU-treated sepsis patients in this region; Paper II: Assess if there are gender differences related to characteristics, aspects of treatment or out­come in sepsis in this region. Paper III: Assess the association of baseline levels of leptin and adiponectin and future sepsis event, and association of these adipokines in the cute phase and sepsis severity and outcome. Paper IV: Assess association of baseline levels of mannose-binding lectin (MBL) and future sepsis event, and MBL levels in the acute phase in relation to sepsis severity and outcome. Results. Paper I:  Overall ICU mortality rate was 25%, while the ICU mortality for patients with septic shock was 58% in this retrospective single university hospital cohort analysis. Cardio­vascular disease and diabetes were the most prevalent comorbidities among patients who died during hospital stay.  Paper II:  No gender-related differences in mortality or length of stay was found in this prospective single center observational study. Differences in aspects of treatment were related to differences in site of infection. Men had more often infections in skin and skin-structures, whereas women more often had abdominal infections. Early organ dysfunction asses­sed as SOFA score at admission was a stronger predictor for hospital mortality for women than for men. The discrepancy was related to the SOFA coagulation-sub score.  Paper III: In this nes­ted case-referent study hyperleptinemia at baseline predicted a first-ever sepsis event, even after adjustment for BMI and other cardiovascular risk factors. Hyperleptinemia in the acute sepsis phase was associated with reduced risk of in-hospital death in men, but associated with increased risk of in-hospital   death in women.  Paper IV: In the same matched cohort as in Paper III high baseline levels of MBL predicted a first ever sepsis event. High MBL levels in the acute phase or an increase from baseline to the acute phase associate with increased in-hospital death in women but not in men. Low MBL levels was not identified as a risk for acute sepsis or in-hospital death. Conclusions. Mortality from severe sepsis is high, equally affecting men and women. There are differences in patient characteristics and inflammatory markers, which associate with in-hospital mortality differentially in men and women. Aspects of gender should be mandatory, and genetic analysis are desired in future sepsis research.

The interactions of glycoconjugates with carbohydrate binding proteins are responsible for a wide range of recognition events in vivo; including immune response, cell adhesion and signal transduction. Glycoconjugates have already found many medicinal uses as therapeutic and diagnostic agents, but their full potential is yet to be realised. Access to a variety of homogeneously glycosylated glycoproteins is essential for the study of these important carbohydrate binding events. This requires the chemical synthesis and attachment of biologically relevant glycans to unglycosylated protein scaffolds in a site selective manner. Here we describe the use of a range of glycosyl iodoacetamides to glycosylate proteins selectively via their cysteine residues. We have chosen the green fluorescent protein mutant GFPuv for use as a protein scaffold due its known tolerance of two cysteine mutations (E6C and I229C) and the previous successful derivatisation of these cysteines with iodoacetamides.1 The inherent fluorescence of GFPuv also makes it a useful candidate for fluorescence based binding assays or cell labelling studies.16 active, mutants of GFPuv were created using a mixture of site directed mutagenesis and DNA shuffling (including one mutant containing six reactive cysteine residues). This was achieved by producing random combinations of two synthetic variants of GFPuv, one of which contained 33 surface cysteines. 94 bacterial colonies expressing active GFPuv were then sequenced and the new chimeric genes analysed. Four monosaccharides and one trisaccharide (N-glycan core mimic) suitable for the chemical glycosylation via cysteines were synthesised and successfully used to create a selection of homogeneous neoglycoproteins. These neoglycoproteins were demonstrated to interact differently with different lectins (including ConA, GNL and Jacalin) in a qualitative fluorescence based assay. Interactions were shown to vary with glycan structure, position of glycosylation sites and the number of glycosylation sites.

CORREIA, Jorge Luis Almeida. Purificação, caracterização parcial e potencialidade biotecnológica de três lectinas de sementes de espécies de Leguminosae da subtribo Diocleinae. 2015. 101 f. Tese (Doutorado em biotecnologia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T15:30:18Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T19:07:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T19:07:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) Previous issue date: 2015 / Leguminosae is recognized by the large amount of isolated and characterized lectins, especially seeds. In this group stand out proteins extracted from species belonging to subtribe Diocleinae, the number of studies in different areas of knowledge. Lectins can be defined as proteins or glycoproteins which are not originated from a body's immune response and have the ability to recognize and bind reversibly to mono or oligosaccharides particular without, however, altering their chemical structures. Different works in our group are structurally haracterizing these proteins as well as elucidating some possible biotechnological applications for these molecules. In this sense, the objective of this study was to isolate and characterize lectins of different species of Leguminosae of Diocleinae subtribe and test them for toxicity to Artemia sp. naupilos, The effect on the smooth muscle of blood vessels and the detention lectin matrix agarose previously activated with cyanogenic bromide (CNBr). Were isolated and characterized the lectin Dioclea sclerocarpa, Dioclea lasiocarpa and Dioclea lasiophylla. Were also made circular dichroism studies on lectin Dioclea sclerocarpa and Dioclea lasiocarpa. The lectin Dioclea lasiophylla was tested against Artemia sp. order to assess their toxicity and was also immobilized on agarose matrix. We evaluated the effect of lectin Dioclea lasiocarpa in the smooth muscle of blood vessels. The knowledge gained from the three scientific articles published in this thesis is a major breakthrough in this promising field of study that has been continuously growing for biotechnological applications. / A família Leguminosae é reconhecida pela grande quantidade de lectinas isoladas e caracterizadas, especialmente de sementes. Neste grupo se destacam as proteínas extraídas de espécies pertencentes a subtribo Diocleinae, pela quantidade de estudos em diferentes áreas do conhecimento. Lectinas podem ser definidas como proteínas ou glicoproteínas que não são originadas a partir de uma resposta imunológica do organismo e possuem a capacidade de reconhecer e se ligar reversivelmente a mono ou oligossacarídeos específicos sem, no entanto, alterar suas estruturas químicas. Diferentes trabalhos no nosso grupo vêm caracterizando estruturalmente essas proteínas, bem como elucidando algumas possíveis aplicações biotecnológicas para essas moléculas. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar lectinas de diferentes espécies de Leguminosae da subtribo Diocleinae e testa-las com relação à toxicidade para naupilos de Artemia sp., o efeito na musculatura lisa de vasos sanguíneos e a imobilização de lectina em matriz de agarose previamente ativada com brometo cianogênico (CNBr). Foram isoladas e caracterizadas as lectinas de Dioclea sclerocarpa, Dioclea lasiocarpa e Dioclea lasiophylla. Também foram feitos estudos de dicroísmo circular na lectina de Dioclea sclerocarpa e Dioclea lasiocarpa. A lectina de Dioclea lasiophylla foi testada contra Artemia sp.de forma a avaliar sua toxicidade e também foi imobilizada em matriz de agarose. Foi avaliado o efeito da lectina de Dioclea lasiocarpa na musculatura lisa de vasos sanguineos. O conhecimento acumulado a partir dos três artigos científicos publicados nesta tese constitui um grande avanço no neste campo promissor de estudo que vem em contínuo crescimento para aplicação biotecnológica.

FELIX, Wagner Pereira. Produção heteróloga de frutalina em Pichia pastoris. 2008. 113 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2008. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T15:13:10Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_wpfelix.pdf: 3013919 bytes, checksum: 5ad2f9b358ba8740f49b54a25064ab73 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:44:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_wpfelix.pdf: 3013919 bytes, checksum: 5ad2f9b358ba8740f49b54a25064ab73 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_wpfelix.pdf: 3013919 bytes, checksum: 5ad2f9b358ba8740f49b54a25064ab73 (MD5) Previous issue date: 2008 / Frutalin, the Artocarpus incise alfa-D-galactose binding seed lectin was expressed and processed in a heterologous system for protein expression, using the metilotrophic yeast Pichia pastoris. In order to obtain the proposed objectives, three strategies were followed: identify the frutalin gene from the genomic DNA, obtained from the leaves; obtain, from the GenScript Corporation, the synthetic frutalin polypeptide chains gene, optimized for expression in Pichia system; and isolate frutalin gene, from mRNA present in fresh seeds in order to obtain the cDNA, using the RT-PCR technique. The obtained genes were inserted in the Pichia genome, in order to evaluate the lectin expression. While in the first strategy only the beta chain gene was obtained, in the other two the complete frutalin gene was obtained. The best results were obtained from the third strategy. The expression process was temperature dependent, with the optimum at 18 οC and the recombinant frutalin showed an apparent molecular mass of 17 kDa, which suggest the presence of both the linker peptide and the histidine tag. / A frutalina, lectina α-D-galactose ligante, foi expressa e processada num sistema heterólogo para expressão de proteínas utilizando a levedura metilotrófica Pichia pastoris. Para atingir os objetivos esperados foram desenvolvidas três estratégias: identificar o gene que codifica para a frutalina a partir do DNA genômico obtido de folhas de A. incisa; sintetizar, por uma empresa especializada, o gene que codifica para as cadeias polipeptídicas da frutalina, otimizando-o para a expressão em P. pastoris e isolar o gene que codifica para a frutalina, a partir do mRNA presente em sementes maduras e frescas, para obtenção do cDNA utilizando a técnica da RT-PCR. Enquanto na primeira estratégia, foi obtido apenas o gen da cadeia beta, nas duas outras estratégias o gen completo foi obtido. No entretanto, a estratégia que mostrou melhor expressão da frutalina recombinante em P. pastoris foi a da obtenção do gene que codifica para a frutalina, a partir do mRNA. A expresão foi tempertura dependente e a frutalina recombinante apresentou uma massa molecular aparente de 17 kDa, sugerindo a presença do peptídeo de ligação e da cauda de histidina.

Lectins are tissue specific carbohydrate binding proteins with possible functions in invertebrate immunity and pathogen transmission. The main goal of this study was to identify hemolymph lectins in three different tick species. Three proteins with molecular weights of 58 kDa, 75 kDa and 180 kDa were detected in all investigated species using antibodies directed against hemagglutination activity of Rhipicephalus appendiculatus hemolymph. These proteins were characterized by biochemical methods such as Schiff/periodate staining, lectin blotting, enzymatic deglycosylation, hemagglutination analysis, immunoblotting, and mass spectrometry.

nÃo hà / Cristais da lectina de sementes de Canavalia maritima (ConM) nativa foram obtidos pelo mÃtodo da difusÃo de vapor em gota suspensa com soluÃÃo do reservatÃrio contendo tampÃo Hepes 0,1M pH 8.43 com 4% v/v de polietilenoglicol 400 e 2M de sulfato de amÃnio. AtravÃs de âsoakingâ dos cristais com ligantes glicÃdicos foram produzidos cristais da lectina complexada aos aÃucares maltose e trealose. Os cristais obtidos de ConM nativa difrataram a uma resoluÃÃo mÃxima de 1,56 Ã, pertencendo ao grupo primitivo ortorrÃmbico, P21212 com parÃmetros de cÃlula de a=67.9, b=71.0, c=97.6 à e apresentando um dÃmero na unidade assimÃtrica (VM = 2,4 A3 Da-1). Com base nas densidades eletrÃnicas dos resÃduos da estrutura tridimensional resolvida, constatou-se que a sequencia de Perez et al (1991) apresentava erros, que quando corrigidos e comparados com a seqÃÃncia de ConA, aumentaram para 98% o grau de similaridade entre as duas lectinas. A estrutura de ConM nativa exibe um alto grau de enovelamento terciÃrio, tÃpico das lectinas de leguminosas, com visÃvel conservaÃÃo do sÃtio de ligaÃÃo a metais e loops envolvidos na oligomerizaÃÃo molecular. Embora a especificidade e o nÃmero de pontes de hidrogÃnio formadas na interaÃÃo com os dissacarÃdeos maltose e trealose seja a mesma, estruturalmente ocorrem diferenÃas no padrÃo de formaÃÃo de pontes de hidrogÃnio, principalmente na distribuiÃÃo do nÃmero de pontes de hidrogÃnio entre os dois resÃduos de glicose dos dissacarÃdeos. Os ensaios de atividade biolÃgica mostraram que o efeito relaxante concentraÃÃo-dependente da lectina de sementes de Canavalia maritima em anÃis de aorta isolados ocorre provavelmente atravÃs da interaÃÃo com um sÃtio de ligaÃÃo lectina-especÃfico presente no endotÃlio, resultando em liberaÃÃo de Ãxido nÃtrico. / Crystals of Canavalia maritima seeds lectin (ConM) were obtained using the vapor diffusion method in hanging drop by sparse matrix with reservatory solution containing 0,1 M HEPES, pH 8,43, 4% Polyethylene Glycol 400 and 2 M ammonium sulfate. The soaking technic was used to produce lectin crystals complexed with the carbohydrates maltose and trehalose. ConM native crystals diffracted to 1.56 à resolution, belonging to the primitive orthorhombic space group P21212, with unit-cell parameters a=67.9, b=71.0, c=97.6 Ã, consisting in a dimer in the asymmetric unit (VM = 2,4 A3 Da-1), with two metal binding sites per monomer, and loops involved in the molecular oligomerization. The structure was solved by standard molecular replacement techniques. The wrong amino acids residues previously suggested by manual sequencing by Perez et al. (1991) are now determinated as I17, I53, S129, S134, G144, S164, P165, S187, V190, S169, T196 and S202. These modifications confer 98% of similarity between ConM, ConA and ConBr. ConM structure presents a high level of tertiary protein folding, typically of legume lectins. Despite the specificity and the numbers of hydrogen bonds formed in the interaction with the disaccharides maltose and trehalose be the same, structurally changes occurs in the pattern of formation of the hydrogen bonds, especially in the distribution in the number of hydrogen bonds between the two glucose residues of the disaccharides. Our biological activity data show that the relaxant concentration-dependent effect of the seed lectin of Canavalia maritima on isolated aortic rings probably occurs via interaction with a specific lectin-binding site on the endothelium, resulting in a release of nitric oxide.

nÃo hà / Lectinas sÃo glicoporteÃnas que interagem de forma reversÃvel e especificamente com carboidratos. A lectina Vatairea macrocarpa (VML) à uma lectina ligadora de galactose pertencente à famÃlia de leguminosas da tribo Dalbergiae. No presente estudo, nÃs investigamos os efeitos da lectina Vatairea macrocarpa (VML) no modelo de rim isolado de rato, bem como as alteraÃÃes histolÃgicas. O rim isolado a partir de ratos Wistar, pesando entre 240 e 280g foram perfundidos com soluÃÃo de Krebs-Henseleit contendo 6% de albumina bovina sÃrica. Os parÃmetros estudados incluem: pressÃo de perfusÃo (PP), resistÃncia vascular renal (RVR), ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG), fluxo urinÃrio (FU), percentual de transporte tubular de sÃdio (%TNa), percentual de transporte tubular de potÃssio (%TK), e percentual de transporte tubular de cloro (%TCl). A lectina Vatairea macrocarpa (10 Âg/ml) aumentou a pressÃo de perfusÃo, a resistÃncia vascular renal, o fluxo urinÃrio e o ritmo de filtraÃÃo glomerular. Por outro lado, a Vatairea macrocarpa (VML) nÃo alterou o percentual de transporte dos Ãons sÃdio, potÃssio e cloro. O complexo Galactose-Lectina (Gal-VML) quando utilizado nÃo causou qualquer alteraÃÃo nos parÃmetros avaliados, ou seja, bloqueou significativamente o aumento dos parÃmetros PP, RVR, UF e RFG, observados pela aÃÃo da lectina Vatareia macrocarpa (VML). No grupo controle a histologia apresentou um pequeno aumento de material proteinÃceo nos espaÃos urinÃrios, no entanto, nÃo foram detectadas alteraÃÃes a nÃvel de tÃbulos renais. A administraÃÃo de galactose sozinha nÃo modificou os parÃmetros funcionais renais. Os rins prÃ-tratados com Gal-VML teve apenas um pequeno acÃmulo de material proteinÃceo nos espaÃos urinÃrios, mas nenhuma anormalidade foi nos tÃbulos renais. Estes resultados sugerem que a lectina obtida a partir de semestres de Vatairea macrocarpa apresenta importante efeito sobre o sistema renal relacionado com o sÃtio carboidrato-ligante, tendo em vista observamos reversÃo dos efeitos renais quando se utilizou o inibidor especÃfico. O presente trabalho à a primeira demonstraÃÃo de atividade biolÃgica da VML em rim isolado de rato. / Lectins are glycoproteins that interact reversibly and specifically with carbohydrates. The Vatairea macrocapa lectin (VML) is a galactose-binding lectin present in the family leguminosae and in the tribe Dalbergieae. ln the present study, we investigated the effect of Vatairea macrocarpa lectin (VML) in the isolated rat kidneys, as well as histological changes. Isolated kidneys from Wistar rats, weighing 240 to 280g, were perfused with Krebs-Henseleit solution containing 6% of bovine serum albumin. The parameters studied included perfusion pressure (PP), renal vascular resistance (RVR), glomerular filtration rate (GPR), urinary flow (UF), percent of sodium tubular transport (%TNa+), percent of potassium tubular transport (%TK+) and percent of chloride tubular transport (%TCl-). The latairea macrocarpa lectin (10 Âg/mL) increased the PP, RVR, UF and GPR. On the other hand, VML did not change the %TNa+, %TK+ and % TCl-. The lectin plus galactose complex (Gal-VML) signihcantly blocked the increase in the PP, RVR, UF and RFG. ln the control group showed a small amount of a proteinaceous material in the urinary space, although no alteration in the renal tubules was detected. The administrated of galactose alone did not modify the functional kidney parameters. The kidneys perfused with /ML showed moderate deposit of proteinaceous material in the tubules and urinary space. ln the kidneys pretreated with Gal-VML had only small amount of a proteinaceous material in the urinary space. But no abnormalities were seen in renal tubules. These results suggest that lectin from Vatairea macrocarpa seeds presents important effect on renal system reported carbohydrate-binding site, taken into account that showed the reversion of renal effects using the inhibitor specific. The current experiments are first demonstration of biological action of VML in the isolated kidney.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T19:08:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_DOUTORADO 2012 - Cynarha Daysy Cardoso da Silva.pdf: 3444226 bytes, checksum: a9c71962304b89acd2a0635de279f563 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T19:08:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_DOUTORADO 2012 - Cynarha Daysy Cardoso da Silva.pdf: 3444226 bytes, checksum: a9c71962304b89acd2a0635de279f563 (MD5) Previous issue date: 2012-07 / CNPQ / As lectinas são um grupo de proteínas que se ligam especificamente a carboidratos e aglutina diferentes células através da ligação a glicoconjugados da superfície celular. A propriedade de ligação a carboidratos determina a classe da lectina que é promovida pelo domínio de reconhecimento de carboidratos (CRD). O estudo com lectinas de peixes propriedade, funções e eventos biológicos foi apresentado em forma de artigo de revisão. A lectina do soro de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), OniL, foi parcialmente purificada e caracterizada. A pré-purificação foi realizada por precipitação com sulfato de amônio (fração 20-40%), F2, seguida de diálise, atividade hemaglutinante e inibição da atividade hemaglutinante. A fração foi cromatografada em matriz de afinidade (Con A-Sepharose 4B) e eluída com metil-α-D-mannopyranosideo (200 mM) em TBS seguida de diálise para avaliar suas características bioquímicas como: especificidade a caboidratos, teste de temperatura e íons, SDS-PAGE e PAGE. Nos ensaios imunológicos, in vitro, foram analisados índices de citotoxidade e proliferação, produção de citocinas, viabilidade celular e tipo de resposta imune em culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. No ensaio de citotoxidade, seis concentrações (100, 50, 25, 10, 5 e 1 μg/mL) de OniL foram analisadas por 24 h; saponina foi empregada como um controle positivo; para avaliar a atividade proliferativa, células foram tratadas por 72 h com OniL (2,5, 5 e 10 μg/mL) ou Con A (2,5 μg/mL) comparando com o controle; a citotoxidade e proliferação dos compostos foi determinada comparando o percentual de incorporação da [3H]-timidina como indicador de viabilidade celular usando radiação beta counter. A produção de citocinas (IL-2, IL-6, IL-10 e IFN-γ) foi determinada por ELISA; sobrenadantes de cultura não tratadas foram considerados controles; as culturas foram estimuladas durante 24, 48, 72 h e 6 dias com concentrações de 10 μg/mL de OniL e 2,5 μg/mL de Con A, este último tratamento considerado o controle positivo. A morte celular, analisada por citometria de fluxo, foi verificada com marcadores Anexina V-FITC e Iodeto de Propídeo. Os esplenócitos foram estimulados por 24 e 48 h com OniL (10 μg/mL) e Con A (2,5 μg/mL); células marcadas com Anexina-FITC (negativa) e Iodeto de propídeo (positivo) foram consideradas necróticas; Anexina-FITC (positiva) e Iodeto de Propídeo (negativa), apoptóticas. O método colorimétrico de Griess avaliou a concentração de nitritos dos sobrenadantes de culturas tratadas com OniL (10 μg/mL) e Con A (2,5 μg/mL) nos tempos de 24, 48, 72 h e 6 dias de incubação. F2 e OniL apresentou atividade hemaglutinante específica de 330,3 e 94,7, respectivamente. A lectina purificada apresentou um rendimento de 31,1%; OniL, aglutina eritrócitos de coelho (título, 64-1) e eritrócitos humanos A, B, AB e O (título, 8-1, 64-1, 4-1 e 32-1, respectivamente); a atividade hemaglutinate foi detectada numa faixa de pH entre 7,0 e 11,0 e foi completamente preservada após o aquecimento de 10 min a 25, 30, 40, 50 e 60 °C, porém a atividade foi completamente abolidas após 70 °C. A adição de um agente quelante de Ca2+, EDTA, diminuiu a atividade revelando que OniL é uma lectina cálcio-dependente. O peso molecular foi de 17 kDa na SDS-PAGE em condições não redutoras; e 11 e 6,6 kDa na presença de uma agente redutor a proteína apresentou duas subnidades ligadas por pontes disulfeto; OniL apresentou-se, através de PAGE, como uma proteína ácida com banda única de polipeptídeo. Os ensaios imunológicos revelaram que OniL não é citotóxica para esplenócitos de camundongos e induziu alta produção de citocinas em relação ao controle: IFN-γ (24 h), IL-2 e IL-6 em todos os tempos analisados. Porém, a produção de IL-10 e concentrações de nitritos foram baixas quando comparadas com o controle; OniL apresentou atividade proliferativa em relação ao controle para todas as concentrações e não induz morte celular significativa nos tempos analisados. A lectina purificada do soro de tilápia (Oreochromis niloticus) é manose-específica, não apresenta citotoxidade para esplenócitos, com atividade imunomoduladora induzindo produção de citocinas para diferenciação e proliferação de células preferencialmente Th1 CD4+, assim, esta proteína pode ser utilizada como um potente agente mitogênico em mamíferos.

nÃo hà / O cDNA da bodesina Bdh-2 presente no plasma seminal de caprino (Capra hircus) foi subclonado no vetor de expressÃo pTrcHis TOPO utilizado para transformar cÃlulas E.coli Top 10 One Shot. Os clones recombinantes foram selecionados atravÃs de crescimento em meio LB-Broth contendo 50 μg/mL de ampicilina e amplificaÃÃo do gene por PCR. A sÃntese da proteÃna recombinante rBdh-2 fusionada com cauda de histidina foi monitorada atravÃs de SDS-PAGE seguido por immunobloting usando anticorpo monoclonal anti histidina. A produÃÃo da rBdh-2 atravÃs da induÃÃo a baixas temperaturas nÃo se mostrou satisfatÃria. A maior produÃÃo da rBdh-2 ocorreu com IPTG 1,5 mM apÃs 2 horas de induÃÃo. O mÃtodo utilizado para a purificaÃÃo da proteÃna recombinante rBdh-2 foi atravÃs de cromatografia de afinidade em coluna His-Trap seguida por cromatografia de troca-iÃnica em coluna de DEAE-Sephacel. A estrutura secundÃria da rBdh-2 foi avaliada atravÃs do perfil espectral de dicroÃsmo circular (CD) que confirmou a predominÃncia de estruturas secundÃrias do tipo folhas-β, a presenÃa de um baixo conteÃdo de estruturas nÃo-ordenadas e de hÃlices-. A rBdh-2 manteve sua estrutura estÃvel atà 35 ÂC. No entanto, mudanÃas significativas foram observadas a partir de 40 ÂC referentes à descaracterizaÃÃo do espectro de CD. / The Bdh-2 bodhesin cDNA present in seminal plasma of goat was subcloned in the expression plasmid pTrcHis TOPO used to transform E. coli Top10 One shot cells. The recombinant clones were selected by growth in 50 μg/mL ampicillin-containing LB-Broth medium and PCR amplifications. The recombinant protein synthesis was monitored by SDS-PAGE followed by immunoblotting using monoclonal anti-His antibody. The production of the rBdh-2 through low temperature was not satisfactory. A greater production of the rBdh-2 occurred with IPTG 1.5 mM after 2 h of induction. The method utilized to the purification of the rBdh-2 was realized in affinity chromatography on a His-Trap column following ion-exchange chromatography on a DEAE-Sephacel column. The secondary structure of the rBdh-2 was evaluated through spectral profile circular dichroism (CD) and confirmed the prevalence of secondary structures like β-sheets, the presence of a low content of unfolded structures and helices-. The rBdh-2 structure remained stable up to 35 ÂC. However, significant changes were observed from 40 ÂC related to a distortion of the spectrum of CD.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A lectina de sementes de Dioclea virgata (Dvir) foi purificada e submetida a experimentos de cristalizaÃÃo, determinaÃÃo da massa molecular e sequÃncia protÃica por espectrometria de massa Os cristais da proteÃna foram obtidos complexados com X-man e utilizando o mÃtodo de difusÃo de vapor a uma temperatura constante de 293 K, e cresceu em uma condiÃÃo contendo 0,5 M de sulfato de amÃnio, 0,1 M de citrato de sÃdio tribÃsico dihidratado pH 5,6 e 1,0 M de sulfato de lÃtio monohidratado. Um completo conjunto de dados foi coletado em 1,8 à de resoluÃÃo usando uma fonte de radiaÃÃo sÃncrotron. O cristal de Dvir pertence a um grupo espacial I222 ortorrÃmbico centrado, com parÃmetros de cÃlula unitÃria a = 647.5 Ã, b = 86.6 Ã, c = 90.2 à e os Ãngulos α = 90 0 β = 90 γ = 90.0Â.A melhor soluÃÃo para a pesquisa de substituiÃÃo molecular teve um coeficiente de correlaÃÃo de 77,1% e um Rfactor de 44,6%. A lectina possui massa molecular de 25412 Da  2 (cadeia α) em pH 6,5 ou superior, se encontra em um arranjo tetramÃrico e se apresenta como dÃmero na unidade assimÃtrica sugerindo um empacotamento cristalino similar a outra lectina da subtribo Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, a respeito do sÃtio de ligaÃÃo a carboidrato e os contatos dimÃricos / The lectin from Dioclea virgata (Dvir) was purified and subjected to crystallization experiments, determination of protein molecular weight and sequence by mass spectrometry. The crystals of the protein complexes were obtained by X-man and using the vapor diffusion method at a constant temperature of 293 K and grew in a condition containing 0.5 M ammonium sulphate, 0.1 M sodium citrate tribasic dihydrate pH 5.6 and 1.0 M lithium sulphate monohydrate. A complete data set was collected at 1.8 à resolution using a synchrotron radiation source. Dvir The crystal belongs to a centered orthorhombic space group I222, with unit cell parameters a = 647.5 Ã, b = 86.6 Ã, c = 90.2 à and angles α = 90.0  β = 90  γ = 90.0 Â. The best solution for the detection of molecular replacement had a correlation coefficient of 77.1% and 44.6% of rfactor. The lectin has a molecular mass of 25 412 Da  2 (α chain) at pH 6.5 or higher, is in a tetrameric arrangement and presents as a dimer in the asymmetric unit suggests a crystal packing similar to other lectin subtribe Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, regarding the carbohydrate-binding site and contacts dimeric