Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:21:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325488.pdf: 3321580 bytes, checksum: 54d833ad499c25ebc1352a3008f4dce1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Este trabalho teve como objetivo a síntese e caracterização de duas séries de chalconas, uma derivada da CH8 (previamente patenteada pelo grupo), contendo o grupo nitro na posição 3 ou 3' (série ML) e a outra derivada da 6-acetil-2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-ona (série MN), bem como a posterior avaliação biológica de todos os compostos obtidos. Os compostos da série ML foram avaliados como inibidores das proteínas tirosina fosfatase PtpA e PtpB de Mycobacterium tuberculosis, e não apresentaram atividades significativas. Foram também avaliados como agentes anti-leishmania, e de modo geral observou-se que apresentaram inibição superior a 60% para as formas amastigotas de Leishmania amazonensis, sendo (2E)-1-(4-metoxifenil)-3-(2-nitrofenil)prop-2-en-1-ona (ML3) o mais promissor, devido ao seu elevado índice de seletividade quando comparado aos outros compostos do estudo (IS = 15,58). A avaliação dos compostos da série MN revelou 3 chalconas com promissora atividade inibitória das proteínas PtpA e PtpB de Mycobacterium tuberculosis, para os quais foram determinados os valores de IC50: (2E)-6-(3-(3,4-diclorofenil)acriloil)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona (MN1) (IC50 = 18,44 ± 4,71 para PtpB e IC50 = 28,11 ± 0,33 para PtpA), (2E)-6-(3-(4-bromofenil)acriloil)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona (MN5) (IC50 = 16,71 ± 0,29 para PtpA) e (2E)-6-(3-(3nitrofenil)acriloil)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona (MN10) ( IC50=12,04 ± 1,90 para PtpB). O composto com melhor atividade frente a PtpB foi MN10 e frente a PtpA foi MN5.<br> / Abstract : This work aimed to objective the synthesis and characterization of two series of chalcones, a derivative of CH8 (previously patented by the group ), containing the nitro group in position 3 or 3' (ML series) and the other derived from 6-acetyl-2H-1,4-benzoxazin-3(4H )-one (MN series), as well as subsequent biological evaluation of all the compounds obtained. The compounds of ML series were evaluated as inhibitors of proteins tyrosine phosphatase PtpA and PtpB of Mycobacterium tuberculosis, and no present significant activities. Also were evaluated as anti-leishmania agents and in general was observed that they presented 60% inhibition superior to amastigote forms of L. amazonensis, being (2E)-1-(4-methoxyphenyl)-3-(2-nitrophenyl)prop-2-en-1-one (ML3) most promising due to their high selectivity index as compared to the other compounds of the study (IS=15.58). The evaluation of the compounds of MN series showed 3 chalcones with promising inhibitory activity of the proteins PtpA and PtpB of Mycobacterium tuberculosis, for which were determined IC50 values: (2E)-6-(3-(3,4-dichlorophenyl)acryloyl)-2H- benzo [b][1,4]oxazin- 3(4H) -one (MN1) (IC50= 18.44 ± 4.71 for PtpB and IC50= 28.11 ± 0.33 for PtpA), (2E)-6-(3-(4-bromophenyl)acryloyl)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-one (MN5) (IC50= 16.71 ± 0.29 PtpA) and (2E)-6-(3-(3nitrophenyl)acryloyl)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-one (MN10) (IC50= 12.04 ± 1.90 for PtpB). The compound with better activity in relation to PtpB was MN10 and in relation to PtpA was MN5.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-12Bitstream added on 2014-06-13T19:24:28Z : No. of bitstreams: 1 franchi_sjs_dr_araiq.pdf: 5568968 bytes, checksum: 8306343e54141c16774212c039fd5233 (MD5) / O presente trabalho teve como objetivo a síntese de compostos de paládio(II) utilizando como precursor o complexo [PdCl2(LH2)]×H2O (1), onde LH2 = 4,4’,5,5’-tetrametil-2,2’-bis-imidazol. A obtenção de novos derivados de Pd(II) a partir do composto 1 ocorreu empregando os sais KBr e KSCN, os ligantes sulfurados {tiouréia (tu); N-metiltiouréia (mtu); N-feniltiouréia (ftu); N,N’-dimetiltiouréia (dmtu); N,N’-difeniltiouréia (dftu)}, diimínicos {2,2’-bipiridina (bpy), 1,10-fenantrolina (phen); 1,10-fenantrolina- 5,6-diona (pheno)} e fosfínicos {1,2-bis(difenilfosfina)etano (dppe), cis-1,2-bis(difenilfosfina)etileno (dppet) e 1,3-bis(difenilfosfina)propano (dppp); trifenilfosfina (PPh3)}. Os compostos foram caracterizados por análise elementar, espectroscopia vibracional na região do infravermelho, ressonância magnética nuclear de 1H, 13C{1H}, MAS-RMN de 31P e por termogravimetria. As reações entre o precursor [PdCl2(LH2)] (1) e os sais KBr e KSCN conduziram a formação dos complexos [PdBr2(LH2)] (2) e [Pd2(g-1,3-SCN)2(SCN)2(LH2)] (3), respectivamente. A partir da análise dos dados espectroscópicos e dos resultados provenientes da otimização da geometria dos complexos utilizando a metodologia DFT, foi possível evidenciar o modo de coordenação quelante bidentado do ligante LH2 pelo deslocamento das bandas com forte contribuição do modo bNH em 1206 e 1379 cm-1 para frequências significativamente maiores que aquelas observadas no espectro no IV do ligante (1104 cm- 1 e 1353 cm-1, respectivamente). A presença de grupos tiocianatos coordenados no modo S-terminal e end-to-end no complexo 3 foi sugerida pelo aparecimentos de duas bandas nasSCN em 2160 e 2114 cm-1. Os complexos [Pd(tu)2(LH2)]Cl2 (4), [Pd(metu)2(LH2)]Cl2 (5), [Pd(ftu)2(LH2)]Cl2 (6), [Pd(dmtu)2(LH2)]Cl2 (7) e [Pd(dftu)2(LH2)]Cl2 (8)... / This work deals with the synthesis of Pd(II) compounds using [PdCl2(LH2)] (1), where LH2 = 4,4’,5,5’- tetramethyl-2,2’-bis-imidazole, as a precursor. New Pd(II) derivatives were prepared from the reaction between compound 1 and KBr and KSCN salts, sulfur-based ligands {thiourea (tu); N-methylthiourea (mtu); N-phenylthiourea (ptu); N,N’-dimethylthiourea (dmtu); N,N’-diphenylthiourea (dptu)}, diimines-type ligands {2,2’-bipyridine (bpy), 1,10-phenanthroline (phen); 1,10-phenanthroline-5,6-dione (pheno)} and phosphines {1,2-bis(diphenylphosphine)ethane (dppe), cis-1,2-bis(diphenylphosphine)ethylene (dppet) and 1,3-bis(diphenylphosphine)propane (dppp); triphenylphosphine (PPh3)}. The compounds were characterized by means of elemental analyses, IR spectroscopy, 1H, 13C{1H} NMR and 31P MAS-NMR spectroscopy and thermogravimetry. Reactions between [PdCl2(LH2)]×H2O (1) and the KBr and KSCN salts yielded the complexes [PdBr2(LH2)] (2) and [Pd2(g-1,3-SCN)2(SCN)2(LH2)] (3), respectively. From the inspection of spectroscopic data and results from geometry optimization of the complexes, calculated using the DFT/B3LYP method, the chelating bidentate coordination mode of the ligand was proposed by the shift to higher frequencies of the bNH bands at 1206 and 1379 cm-1 upon complexation (free ligand: 1104 cm-1 and 1353 cm-1). Complexes [Pd(tu)2(LH2)]Cl2 (4), [Pd(metu)2(LH2)]Cl2 (5), [Pd(ptu)2(LH2)]Cl2 (6), [Pd(dmtu)2(LH2)]Cl2 (7) and [Pd(dptu)2(LH2)]Cl2 (8) were synthesized from the reaction between 1 and the suitable thiourea type ligands, at the 1:2 molar ratio, respectively. Spectroscopic techniques provide useful information on the S-coordination mode of thioureas as well on the structural proposals. Reaction between precursor 1 and the diimines bpy, phen and pheno afforded the... (Complete abstract click electronic access below)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-08-16T20:24:05Z No. of bitstreams: 1 2016_ClêniadosSantosAzevedo.pdf: 3228575 bytes, checksum: 52c4b5bc7aca2ec9b7980c243056f4d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-05T22:01:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ClêniadosSantosAzevedo.pdf: 3228575 bytes, checksum: 52c4b5bc7aca2ec9b7980c243056f4d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-05T22:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ClêniadosSantosAzevedo.pdf: 3228575 bytes, checksum: 52c4b5bc7aca2ec9b7980c243056f4d3 (MD5) / Enzimas deubiquitinantes (DUBs) desempenham um papel importante na regulação da degradação de proteínas e de outros processos não-degradativos, por desconjugação de ubiquitina (Ub) de proteínas marcadas, como a modulação da resposta imune, a sinalização da quebra da dupla fita do DNA e endocitose. Explorar o papel de deubiquitinação em Leishmania infantum demonstra uma alternativa promissora para procurar novos alvos terapêuticos para a leishmaniose, já que a quimioterapia utilizada é onerosa, tóxica e tende a ser ineficiente. Este estudo teve como objetivo o estabelecimento de duas linhagem de L. infantum expressando uma cópia extra de otubaína (OtuLi), caracterização da atividade enzimática e funcional da OtuLi recombinante produzida em E. coli (rOtuLi). Com relação ao estabelecimento das linhagens, o gene otuli foi amplificado, clonado no vetor pLEXSY-hyg2 e linearizado. Os promastigotas de L. infantum foram transfectados com os cassetes e selecionados. A integração dos cassetes ao locus gênico da 18S rRNA foi confirmada por PCR e a expressão da OtuLi fusionada ao peptídeo FLAG ou a cauda de 6 histidinas foi verificada por western blot. A citolocalização da FLAG-OtuLi indica que a enzima encontra-se em pequenas vesículas no citoplasma da célula com fortes marcações perto da região do cinetoplasto, corroborando o resultado visto utilizando anticorpos específicos para a OtuLi. A OtuLi não co-localiza com a mitocôndria marcada por duas sondas diferentes e com o retículo endoplasmático imunomarcado pela Proteína Dissulfato Isomerase em promastigotas. A rOtuLi apresentou atividade em pH ácido com substrato de tetra-ubiquitina ligado pela lisina 48 e o perfil de inibição indica que os inibidores NEM e Ub-aldeído são capazes de inibi-la. Através de mutações sítio-dirigidas realizadas na OtuLi, foi observado que tanto os resíduos próximos ao sítio catalítico quanto aqueles envolvidos na interação com a ubiquitina ocasionaram mudanças estruturais, conforme dinâmica molecular, resultando na redução ou perda da atividade da enzima. A rOtuLi foi capaz de estimular a formação de corpúsculos lipídicos em macrófagos peritoniais e induzir a secreção de IL-6 e TNF-α, citocinas pró-inflamatórias. O estabelecimento das linhagens com a cópia extra de otuli representa o primeiro passo para futura identificação de proteínas capazes de interagir com a OtuLi e assim, elucidar seu mecanismo de ação no parasito. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Deubiquitylating enzymes (DUBs) play an important role in regulating protein degradation and other non-degradative processes, by deconjugation of ubiquitin (Ub) from marker proteins, such as immune response modulation, signalling of double strand breaks at DNA and endocytosis. Exploring the role of deubiquitination in Leishmania infantum demonstrates a promising alternative to search for new therapeutic targets for leishmaniasis, since its primary chemotherapy is expensive, toxic and tending to be inefficient. This study aimed to establish two L. infantum strains expressing an extra copy of otubain (OtuLi), characterization of enzymatic and functional activity of recombinant OtuLi (rOtuLi). Regarding the establishment of the strains, the otuli gene was amplified, cloned in pLEXSY-hyg2 and the vector was linearized. The promastigotes of L. infantum were transfected with the cassette and selected. The integration of the cassettes into the 18S rRNA gene locus was confirmed by PCR and the expression of OtuLi fused to the FLAG peptide or to a 6 histidine tail was accessed by western blot. The citolocalization of FLAG-OtuLi indicates that the enzyme is in small vesicles in the cytoplasm of the cell with strong markings near the kinetoplast region, confirming the results seen using antibodies specific for OtuLi. The OtuLi is not co-located with the mitochondria marked by two different probes and with the endoplasmic reticulum immunolabeled by protein disulfide-isomerase. The rOtuLi showed activity at acid pH with lysine 48-linked tetra-ubiquitin substrate and the inhibition profile indicates that NEM and Ub-aldehyde inhibitors are able to inhibit it. Through site-directed mutations in OtuLi, it was observed that the residues near the catalytic site or those involved in the interaction with the ubiquitin caused structural changes as shown by molecular dynamics, resulting in a reduction or loss of enzyme activity. The rOtuLi was able to stimulate the formation of lipid body in peritoneal macrophages and to induce the secretion of IL-6 and TNF-α, pro-inflammatory cytokines. The establishment of these strains with the extra copy of otuli is the first step for future identification of proteins that interact with OtuLi and thus elucidate its mechanism of action in the parasite.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2016. / Texto liberado parcialmente pelo autor. Conteúdo restrito: Resultados e Discussão. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-15T16:44:15Z No. of bitstreams: 1 2016_TatianaGuerreroMarçola_Parcial.pdf: 4029867 bytes, checksum: 687fe7732a92c58f931225d527f324c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-13T16:36:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_TatianaGuerreroMarçola_Parcial.pdf: 4029867 bytes, checksum: 687fe7732a92c58f931225d527f324c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-13T16:36:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_TatianaGuerreroMarçola_Parcial.pdf: 4029867 bytes, checksum: 687fe7732a92c58f931225d527f324c3 (MD5) / Leishmaniose é uma doença complexa que envolve diversas sinalizações principalmente via resposta imune inata através dos macrófagos. O estudo da doença é normalmente realizado in vitro, entretanto há uma grande variedade de macrógfagos usados, formas do parasita, espécies do parasita e linhagens de animais. Sabe-se que o parasita Leishmania spp. de alguma forma consegue subverter o tipo de polarização de macrófagos, desta forma manipula etapas imunes essenciais do hospedeiro, permanecendo e proliferando dentro do seu organismo. O padrão de citocinas produzido por macrófagos tem retroalimentação com linfócitos T, citocinas como IL-12, INF- e IL-6 que possuem perfil pró-inflamatório e estimulam linfócitos Th1, os quais estão associados com animais de linhagens resistentes como C3H/he. Por outro lado o perfil de citocinas anti-inflamatório tende a estimular linfócitos Th2, que estão bem associados a animais susceptíveis como Balb/c. Trabalhos mostram que diversos patógenos são capazes de manipular diferentes etapas da resposta imune inata, autores já descrevem que parasitas, vírus e bactérias são capazes de modificar etapas epigenéticas do hospedeiro. Epigenetica envolve mecanismo capazes de alterar e coordenar a expressão dos genes, um deste mecanismos é a metilação de DNA. Metilação de DNA é uma modificação química no carbono 5 de citosinas, tal modificação é encontrada normalmente em vertebrados e invertebrados, em situações fisiológicas e patológicas. Existem diversas metodologias para verificação dos níveis de metilação de DNA, a técnica de RRBS (Reduced representation bisulfite sequencing) é uma técnica barata, acessível e comparável as demais metodologias. O presente trabalho investigou os sítios de metilação de DNA em macrófagos peritoneais de duas diferentes linhagens (Balb/c e C3H/he), recuperados com lavagem ou estimulo por Tioglicolato de sódio. As células de ambas linhagens sem estímulo foram infectadas com L. infantum e L. amazonenses; as células com estímulo foram infectadas apenas com L. amazonenses. Após o período de 72 horas o DNA das células foi extraído e purificado para a preparação de bibliotecas de RRBS e sequenciamento em Hi-seq 2500. A análise das sequências foi feita pela ferramenta Rnbeads, que realizou as comparações – infecção x controle; linhagem resistente x susceptível; e macrófagos estímulo x sem estímulo. Através da distribuição beta e redução dimensional geradas pela ferramenta sugere-se que há diferenças consistente entre células recuperadas por Tioglicolato e células recuperadas com lavagem. As células estimuladas apresentam menor concentração de sítios metilados em regiões como promotores, genes e tiling. Entre animais resistentes (C3H/he) e susceptíveis (Balb/c) também foi observado que animais Balb/c tendem a ter menor concentração de metilação de DNA quando comparados a C3H/he, tal perfil não é devido a infecção. Apesar da sutil diferença na metilação de DNA entre infecção e controle, as linhagens demonstraram padrões opostos de metilação de DNA. Não foi possível distinguir mudanças nos sítios de metilação entre Leishmaniose cutânea e visceral. O presente trabalho sugere que há diferenças na metilação de DNA, sendo sutil no status de infecção e controle, moderado em animais resistentes e susceptíveis, e intenso entre células estimuladas e não estimuladas, e tais modificações são vistas em regiões importantes do genoma como promotores. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis is a complex disease involving many signals pathways in innate immune response mainly by macrophages. The study of the disease is usually in vitro, however, there are many of macrophages types, parasite form, parasite species and animals strains. It is known that the parasite Leishmania spp. can subvert the macrophages polarization, handles essential immune steps of the host, to live and spread within the host body. The cytokines pattern produced by macrophages has T lymphocytes feedback, cytokines such as IL-12, INF-γ and IL-6 which have a pro-inflammatory profile stimulate Th1 lymphocytes, which are associated with animal resistant strains as C3H / He. Furthermore, the anti-inflammatory cytokine profile stimulates Th2 lymphocytes which are associated with susceptible animals as Balb / c. Many pathogens are able to handle different stages of the innate immune response, the authors have described that parasites, virus and bacteria are able to modify the host epigenetic steps. Epigenetic are mechanism able to change and coordinate the gene expression, as DNA methylation. DNA methylation is a chemical modification of 5 carbon in cytosines, such modification is usually found in vertebrates and invertebrates, in physiological and pathological situations. There are several methodologies to investigate DNA methylation levels, RRBS technique (Reduced representation bisulfite sequencing) is an inexpensive and accessible technique, comparable to other methodologies. This study investigated the DNA methylation sites on peritoneal macrophages of two different strains (BALB/c and C3H/he), recovered by washing or stimulation by sodium thioglycolate. The cells of both strains without stimulation were infected with L. infantum and L. amazonensis; the cells with stimulus were just infected with L. amazonensis. After 72 hours the cell DNA was extracted and purified to the RRBS libraries preparation and sequencing by Hi-seq 2500. Sequence analysis was done by Rnbeads tool wich compared: infection x control; resistant x susceptible mice strain; and macrophages stimulated x without a stimulus. Through beta distribution and dimensionality reduction generated by the Rnbeads it is suggested that there are consistent differences between stimulated cells with thioglycollate and cells recovered by washing. Stimulated cells have a lower concentration of methylated sites in regions such as promoters, genes and tiling. Between resistant (C3H/He) and susceptible (BALB/c) animals was also observed that Balb/c animals have a lower concentration of DNA methylation than C3H/He, which is not due the infection. Although subtle differences in DNA methylation between infection and control, the strains response to infection showed opposite patterns of DNA methylation. It was not possible to distinguish changes in DNA methylation sites between cutaneous and visceral leishmaniasis. This study suggests that there are differences in DNA methylation in host-parasite interaction, which are subtle in infection and control status, moderate in resistant and susceptible animals, and intense between stimulated and unstimulated cells, such modifications can be seen in important regions of the genome as promoters.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T14:31:19Z No. of bitstreams: 1 2015_MayaraGabrieleCarvalhodeOliveira_Parcial.pdf: 433650 bytes, checksum: 4672460144554243a06ba83032134a4e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-15T18:13:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_MayaraGabrieleCarvalhodeOliveira_Parcial.pdf: 433650 bytes, checksum: 4672460144554243a06ba83032134a4e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-15T18:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_MayaraGabrieleCarvalhodeOliveira_Parcial.pdf: 433650 bytes, checksum: 4672460144554243a06ba83032134a4e (MD5) / A leishmaniose coloca em risco atualmente 350 milhões de pessoas em 88 países ao redor do mundo e estima-se que existam 12 milhões de pessoas infectadas no mundo. Os medicamentos utilizados no tratamento da leishmaniose são tóxicos e podem provocar resistência farmacológica. Portanto, é importante a busca por novos princípios ativos com ação leishmanicida. Entre eles, a dermaseptina-01 é um peptídeo catiônico e anfifílico que potencialmente pode ser introduzido em novas formulações terapêuticas devido a sua capacidade de interagir com as membranas das células resultando em um processo de permeabilização e rompimento da membrana do micro-organismo. No entanto, devido a sua capacidade lítica e por ser um princípio ativo novo, faz-se necessário compreender seu efeito nos macrófagos, que por um lado, são as células hospedeiras da infecção, e por outro são importantes na resposta inata contra o parasito. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da dermaseptina-01 na função e na viabilidade dos macrófagos infectados com Leishmania amazonensis. Macrófagos de camundongos Swiss coletados por lavagem peritoneal foram infectados ou não com formas amastigotas e tratados ou não com 0,06, 0,13, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 32 ou 64 μg/mL de dermaseptina-01 para avaliar funções celulares como aderência, formação de corpúsculos lipídicos (coloração com Óleo Vermelho), a capacidade fagocitária e a microbicida pela produção de peróxido de hidrogênio (Método de Pick) e óxido nítrico (Método de Greiss), bem como avaliar seu efeito sobre a viabilidade dos macrófagos (coloração com laranja de acridina) e células (Método de exclusão com nigrosina). Os resultados, analisados por testes pareados mostraram que a dermaseptina-01: 1) reduziu o índice de infecção de macrófagos em todas as concentrações testadas (Teste t-pareado, p<0,05) de forma dose-dependente; 2) todas as concentrações reduziram o percentual de aderência dos macrófagos em relação ao controle (t-pareado, p<0,01); 3) reduziu o percentual de células viáveis nas concentrações de 1 (p<0,005) e 16 (p<0,021) μg/mL, enquanto que a concentração de 4 μg/mL não afetou a viabilidade celular (p>0,05); 4) diminuiu a viabilidade em cultivos de macrófagos nas concentrações de 1, 4 e 16 μg/mL (p=0,009); 5) inibiu a produção de peróxido de hidrogênio na presença ou não da infecção nas concentrações de 1, 4 e 16 μg/mL (p<0,05); 6) aumentou a produção de óxido nítrico quando as concentrações 4 e 16 μg/mL foram utilizadas (p<0,05); 7) aumentou o índice corpuscular de forma dose-dependente pelo aumento do número de corpúsculos no citoplasma dos macrófago (p<0,05). Em conjunto, os resultados obtidos demonstram que a dermosseptina foi capaz de diminuir a infecção pela L. amazonensis, possivelmente por melhorar a capacidade microbicida e modular as funções dos macrófagos, sem, contudo provocar a morte dessas células. Esses dados indicam o potencial leishmanicida da dermaseptina-01 e apontam para futuras aplicações biomédicas. / Leishmaniasis currently affects 350 million people in 88 countries around the world and it is estimated that there are 12 million people infected worldwide. The drugs used in the treatment of leishmaniasis are toxic and can cause drug resistance. Therefore, it is important to search for new active ingredients with leishmanicide action. Among them, dermaseptin-01 is a cationic and amphiphilic peptide which can be potentially introduced into new therapeutic formulations due to their ability to interact with cell membranes resulting in a process of permeabilization and disruption of the microorganism membrane. However, due to their lytic capacity and due to them being a new active ingredient, it is necessary to understand its effect on macrophages, which are both the host cells for the infection and important in the innate response against the parasite. The objective of this study was to evaluate the effect of dermaseptina-01 in the function and viability of macrophages infected with Leishmania amazonensis. Macrophages collected from Swiss mice by peritoneal lavage were infected or not with amastigotes and treated or not with 0.06, 0.13, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 32 or 64 μg/mL of dermaseptin-01 to assess cellular functions such as adhesion, formation of lipid bodies (coloring Red Oil), the phagocytic capacity and the microbicide for the production of hydrogen peroxide (Pick Method) and nitric oxide (Method Greiss) and to assess its effect on the viability of macrophages (stained with acridine orange) and cells (deletion method with nigrosine). The results, analyzed by paired t tests showed that the dermaseptina-01: 1) reduced the infection rate of macrophages in all tested concentrations (paired t-test, p <0.05) in a dose-dependent pattern; 2) all concentrations reduced the percentage of macrophage adhesion when compared to the control (paired t, p <0.01); 3) reduced the percentage of viable cells at concentrations of 1 (p <0.005) and 16 (p <0.021) mg/mL, while the concentration of 4 μg/mL did not affect cell viability (p>0.05); 4) decreased viability in macrophage cultures at concentrations of 1, 4 or 16 μg/mL (p=0.009); 5) inhibit hydrogen peroxide production in the presence or absence of infection with the concentrations of 1, 4 and 16 μg/mL (p<0.05); 6) increased the nitric oxide production when concentrations 4:16 μg/mL were used (p<0.05); 7) increased in a dose-dependent pattern the corpuscular index by increasing the number of corpuscles in the cytoplasm of macrophages (p <0.05). Together, the results demonstrate that dermosseptina was able to reduce the infection by L. amazonensis, possibly due to the enhancing the microbicidal capacity and modulating macrophage functions, without however causing the death of these cells. These data indicate the potential of dermaseptina-01 againt leishmaniasis and point to future biomedical applications of this peptide.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-09-14Bitstream added on 2014-06-13T20:56:02Z : No. of bitstreams: 1 penha_ta_me_jabo.pdf: 999907 bytes, checksum: 65a051d69be1b9f6360131e9bb8dadf6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose de distribuição mundial. No Brasil foi descrita em várias regiões, mas na região sudeste vem ocorrendo de forma significativa desde 1998, na região de Araçatuba, SP. O cão é o principal reservatório doméstico do protozoário Leishmania chagasi e a principal fonte de contaminação para o homem. A resposta imune do hospedeiro canino frente ao parasito é variável e por este fato, os cães apresentam sinais clínicos acentuados ou ausência destes. Os animais que apresentam maior carga parasitária e sinais clínicos mais severos são considerados susceptíveis à infecção pelo parasito. Este padrão está associado ao perfil de citocinas produzidas, ou seja, na predominância de citocinas Th1 são resistentes ou Th2 susceptíveis. No entanto existem muitas variações neste padrão de resposta, ou seja, muitos animais apresentam a produção de citocinas Th1 e Th2, sugerindo um desequilíbrio na proporção de citocinas pró e antiinflamatórias, que favorecem a multiplicação e sobrevivência dos parasitos. Este desequilíbrio tem influência direta sobre a ativação de macrófagos e sobre sua capacidade microbicida e de apresentação antigênica, levando a uma anergia de linfócitos T e a manutenção e cronicidade da infecção. As quimiocinas são citocinas com potente atividade quimiotática sobre leucócitos. Na LV existem estudos no homem e em modelos experimentais, mas no cão apenas um estudo avalia o seu papel no baço. Existe muita controvérsia sobre o seu verdadeiro papel na LV, pois descreve-se tanto a sua ação próinflamatória quanto a sua ação deletéria, que favorece o parasito. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel das quimiocinas MIP-1a e MCP-1 no baço e fígado de 30 cães... / Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis of worldwide distribution. In Brazil has been described in several regions, but has been occurring in the Southeast significantly since 1998 in Araçatuba, SP. The dog is the main domestic reservoir of Leishmania chagasi and the main source of contamination for humans. The canine host immune response against the parasite is variable. Dogs have severe intensity or absence of clinical symptoms. Animals that have a higher parasite load and clinical signs are considered more susceptible to infection by the parasite. This pattern is associated with the profile of cytokines produced, in the predominance of Th1 they are resistant or in the predominance of Th2 they are susceptible. However there are many variations on this response pattern, many animals have the production of Th1 and Th2 cytokines, suggesting an imbalance in the proportion of pro and anti-inflammatory cytokines, which favor the multiplication and survival of parasites. This imbalance has a direct influence on the activation of macrophages and their microbicidal activity and antigen presentation, leading to anergy of T lymphocytes and the maintenance and chronicity of infection. Chemokines are cytokines with potent chemotactic activity on leukocytes. In the VL are studies in humans and experimental models, but the dog only one study assessing its role in the spleen. There is much controversy over its true role in VL, because it describes both its pro-inflammatory action and its deleterious effects, which favors the parasite. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of chemokines MIP-1α and MCP-1 in the spleen and liver of 30 dogs naturally infected with Leishmania spp. and compare the findings with the parasite load of each organ. For this purpose, samples of liver and spleen were analyzed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T19:51:03Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_me_me_botfmvz.pdf: 982475 bytes, checksum: cc23ec2107c58b4368971366d301352a (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / The identification of Leishmania spp. in the skin is an important tool for the canine visceral leishmaniasis (CVL) control. The aim of this study was to investigate which would be a better clinically normal skin region to perform skin biopsies for the diagnosis of the naturally Leishmania-infected dogs and to associate this finds to clinical signs. Thirty dogs from an endemic visceral leishmaniasis area and positive diagnose for CVL were selected for the study. Five asymptomatics dogs, negative for Leishmania were included as a fourth group. Clinically normal skin samples were collected from the six different sites by punch biopsy: upper part of the muzzle, ear, thorax, abdomen, forelimb and mucocutaneous junction. Immunohistochemistry detection of Leishmania was performed in all skin biopsy specimens and polymerase chain reaction (PCR) was performed in samples that were Leishmania-negative by immunohistochemistry. Weight loss (95%), lymphadenomegaly (55%) and pale mucous membrane (30%) were the main clinical signs observed. The most frequent skin abnormalities were alopecia and desquamation (90%), ulcerative dermatitis (60%), onychogryphosis (50%) and hyperpigmentation (40%). The immunohistochemistry demonstrated 100% of positivity in all skin samples of symptomatics dogs with skin lesions, independing on the region. Symptomatics dogs without skin lesions showed a lower positivity percentage, 40% and 30% depending on the region and asymptomatics dogs showed 30% and 20%. All regions from group 4 showed negative results. PCR showed positivity rates higher when compared to immunohistochemistry (P< 0,05) for the forelimb region from symptomatics dogs without skin lesions. These findings demonstrated that clinically normal skin of dogs from endemic area have parasites independently of clinical signs.

Resumo: A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecciosa não contagiosa causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania, que acomete pele e mucosas. É uma das doenças dermatológicas que exigem mais atenção, devido à sua magnitude e risco de deformidades em humanos. No Brasil, a LTA é amplamente distribuída, com relatos de caso em todas as regiões brasileiras. O presente trabalho trata da identificação da fonte alimentar de flebotomíneos, que fornece informações valiosas sobre a interação vetor/hospedeiro e possibilita entender os mecanismos de transmissão de Leishmania. O objetivo do estudo foi identificar a fonte alimentar sanguínea de Lutzomyia (Nyssomyia) intermedia s.l. em área endêmica de leishmaniose tegumentar americana (LTA) no estado do Paraná pela técnica de precipitina e amplificação parcial e sequenciamento do gene Prepronociceptina (PNOC). Os flebotomíneos foram coletados na localidade de Epitácio Pessoa, no município de Adrianópolis, estado do Paraná. Para o teste de precipitina foram capturados 3.357 flebotomíneos, sendo 864 fêmeas, dessas 862 (99,8%) pertenciam a espécie Lutzomyia (Nyssomyia) intermedia s.l., e dois espécimes não identificados, os quais foram considerados como pertencentes ao gênero Lutzomyia (0,2%). Do total de fêmeas analisadas, 396 apresentaram reação a algum tipo de antissoro testado, sendo a maioria do tipo simples, (67,9%) as quais se alimentaram principalmente em ave, gambá e roedor, respectivamente, mas também foram encontradas fêmeas alimentadas em sangue de humano, cão, cavalo, boi e gato. As demais apresentaram reações cruzadas (32,1%) predominando ave/roedor, ave/gambá, ave/cão, ave/humano e cavalo/cão, dentre outros. O teste de digestão mostrou que é possível detectar sangue de mamífero no conteúdo intestinal sanguíneo de flebotomíneos até 24 horas após o ingurgitamento, não sendo possível detectar após este período de tempo. Para a identificação da fonte de repasto por método molecular foram coletados 2.851 flebotomíneos durante o período do estudo, sendo 1.263 fêmeas, todas pertencentes à espécie L. (N.) intermedia s.l. Destas, 93 (3,26%) estavam ingurgitadas com conteúdo intestinal sugestivo para sangue. Foi possível identificar a fonte alimentar através do sequenciamento do gene PNOC em 27 fêmeas (29%) ingurgitadas com sangue, sendo que 1 (3,7%) se alimentou em cavalo (Equus caballus), 16 (59,3%) em porco (Sus scrofa) e 10 (37%) em cão (Canis lupus familiaris). Esses resultados mostram um comportamento alimentar eclético de L. intermedia s.l., podendo ser um potencial vetor de Leishmania na região de estudo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-19Bitstream added on 2014-06-13T20:59:18Z : No. of bitstreams: 1 rogerio_ap_me_araiq_parcial.pdf: 372353 bytes, checksum: e4b51ffdb02e907e357f0d48683b6f59 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-28T18:32:03Z: rogerio_ap_me_araiq_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-28T18:32:38Z : No. of bitstreams: 1 000719114.pdf: 1558312 bytes, checksum: c8ac59ded5e6a28a3b47b4e17d05ceb9 (MD5) / Os compostos de coordenação de paládio(II) possuem extensas aplicações nas mais diferentes áreas da química. Nos últimos anos, eles estão sendo cada vez mais estudados para catálise homogênea, química supramolecular, materiais líquidocristalinos e Medicina. Dentre esses compostos de paládio(II) destacam-se os ciclopaladados, por apresentarem em alguns casos atividade antitumoral comparável ou superior a da cisplatina e recentemente atividade antileishmanicida. Este trabalho teve como propósito sintetizar cinco novos complexos ciclopaladados mononucleares do tipo [PdCl(C2,N-bzox)L], onde bzox = benzaldeidooxima e L = tiouréia (1), N,N’-dimetiltiouréia (2),N-metiltiouréia (3), N-feniltiouréia (4) e tioacetamida (5) através de reações entre o precursor dimérico [Pd(μ-Cl)(C2,Nbzox)] 2 e os ligantes. Posteriormente os compostos foram caracterizados por Análise Elementar, Espectroscopia no IV (Infra-Vermelho), RMN (Ressonância Magnética Nuclear) e Espectrometria de Massas. Os complexos e a cisplatina tiveram sua citotoxicidade investigada, in vitro, pelo método do MTT frente à linhagem celular LM3 (adenocarcinoma mamário), onde os compostos 1, 2 e 4 apresentaram valores citotóxicos comparáveis a cisplatina. Os compostos também foram testados frente ao protozoário do gênero Leishmania e a concentração inibitória, IC50 foi determinada. O composto 4 com o ligante feniltiouréia mostrou-se o mais ativo com um IC50 de 1,56 μg mL-1, inclusive quando comparado a droga de referência Anfotericina B (IC50 = 6,95 μg mL-1) / Palladium (II) compounds been the subject of intense studies in various areas of chemistry, such as homogeneous catalysis, supramolecular chemistry, liquid crystalline materials and Bioinorganic chemistry. Among them, special attention has been devoted to palladacycles, because of their promising cytotoxic activity towards tumor cells as well their some cases they have antitumor activity comparable or superior to cisplatin and antileishmanicidal activity. This research aimed to synthesize five new mononuclear palladacycles complexes of the type [PdCl(C2,N-bzox)L], where bzox = benzaldeidooxima and L = thiourea (1), N,N’-dimethylthiourea (2), N-methylthiourea (3) N-phenylthiourea (4) and thioacetamide (5) through bridge splitting reaction between the dimeric precursor [Pd(μ-Cl)(C2,N-bzox)]2 and the ligands. Subsequently the compounds were characterized by Elemental Analysis, IR spectroscopy (Infra-Red), NMR (Nuclear Magnetic Resonance) and Mass Spectrometry. All the complexes and cisplatin have been tested in vitro by MTT assay for their cytotoxicity against the cell line LM3 (mammary adenocarcinoma), where the compounds 1, 2 and 4 showed to be as cytotoxic as cisplatin. The compounds were also tested against the Leishmania protozoa and the inhibitory concentration, IC50 was determined. Compound 4 with the ligand phenylthiourea proved to be the most active with an IC50 of 1.56 mg mL-1, even when compared to reference drug Amphotericin B (IC50 = 6.95 mg mL-1)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-20Bitstream added on 2014-06-13T18:07:44Z : No. of bitstreams: 1 troncarelli_mz_me_botfmvz.pdf: 617296 bytes, checksum: 0bb02025e5f4c289eb247fa956c3898c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido à proximidade filogenética entre Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi (T. cruzi), podem ocorrer reações cruzadas e resultados falso-positivos à sorologia. O objetivo do presente estudo foi contribuir com o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e da tripanossomíase caninas, utilizando a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), o exame parasitológico direto e a pesquisa de DNA, tanto de Leishmania spp., quanto de T.cruzi, pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) em amostras de fígado e baço. Para tanto, foram utilizados 100 cães eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses da cidade de Bauru-SP, onde a leishmaniose visceral é endêmica, e 100 cães eutanasiados no canil municipal da cidade de Botucatu-SP, área indene. Sessenta e cinco amostras de soros dos cães de Bauru foram positivas pela RIFI para Leishmania spp. e 40 foram positivas para T.cruzi, enquanto que todas as 100 amostras de cães de Botucatu foram negativas pela RIFI para leishmaniose e somente quatro amostras foram positivas para T. cruzi. Do total de 200 soros testados, 33 (16,5%) apresentaram resultado positivo à sorologia para ambos parasitos. Em 30 amostras de fígado e/ou de baço dos 33 cães que apresentavam anticorpos contra Leishmania spp. e T.cruzi, tanto o exame parasitológico direto como a PCR para Leishmania spp. resultaram positivos, indicando a verdadeira infecção por este parasito. Nenhuma amostra de fígado e baço dos 200 cães de Bauru e Botucatu foi positiva pela PCR para T. cruzi. Estes resultados reforçam a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e T. cruzi pela RIFI, bem como a necessidade da realização do exame parasitológico direto e/ou da PCR para o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e das tripanossomíases caninas. / Due Leishmania spp. and Trypanosoma cruzi (T. cruzi) phylogenetical closely, some serological cross-reactions and false-positives results can occur. The objective of this study was to contribute with the elucidative canine leishmaniasis and trypanossomiasis’ diagnosis, using Indirect Immunofluorescence (IIF) serologic test, direct parasitological exam and Leishmania spp. and T.cruzi DNA investigation by Polimerase Chain Reaction (PCR) in liver and spleen samples. For this purpose, it were used 100 culled dogs of Zoonosis Control Center in Bauru-SP where Visceral Leishmaniasis (VL) is endemic, and 100 culled dogs of the municipality kennel in Botucatu-SP where VL is non-endemic. Sixty-five (65%) serum samples of dogs from Bauru were positive by IFI for Leishmania spp. and 40 (40%) were positive for T. cruzi. All serum samples (100%) of dogs from Botucatu were negative by IFI for leishmaniasis and only 4 samples were positive for T. cruzi. Of a total of 200 tested serum samples, 33 (16.5%) showed serologic positive results for both parasites. In 30 liver and/or spleen samples of 33 dogs that presented antibodies anti-Leishmania spp. and anti-T.cruzi, both direct parasitological exam and PCR for Leishmania spp. resulted positive, indicating the true dog’s infection by this parasite. No liver and spleen samples of 200 dogs from Bauru and Botucatu were positive by PCR for T. cruzi. These results reinforce the occurrence of antibodies cross reactions for Leishmania spp. and T. cruzi by IFI, and also confirm the necessity of a parasitological exam and/or a PCR test for the canine leishmaniasis and trypanosomiasis elucidative diagnosis.