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La leucemia, es el tipo de cáncer más frecuente en los adolescentes, su diagnóstico no distingue edad, sexo, raza ni condición social; alrededor de ésta circundan mucha creencias, mitos, estigmas y estereotipos que generan ciertos comportamientos de aceptación o rechazo por quien lo padece y su entorno próximo o lejano; el cuidado de enfermería debería considerar la representación social del cáncer por lo insólito y desconocido que resulta ser esta enfermedad. Ante ello, se propuso investigar la representación social de la leucemia, abordándola desde la perspectiva del adolescente. Los objetivos fueron caracterizar y analizar la representación social del cáncer en los adolescentes diagnosticados con leucemia y discutir la implicancia de esta representación social en el cuidado de enfermería. La metodología utilizada fue cualitativa, tuvo como respaldo teórico-metodológico a la representación social propuesta por Serge Moscovici (1961), Denis Jodelet (1988), Llinares (2010) y Regina Waldow (2008); los sujetos de investigación lo constituyeron 15 adolescentes que se encontraron hospitalizados en el servicio de Oncología del Hospital Almanzor Aguinaga Asenjo de Essalud en Chiclayo. Los instrumentos para recolección de datos fueron el cuestionario sociodemográfico y la entrevista semiestructurada a profundidad, para el análisis de los datos se utilizó el método de asociación de contenidos de Isaura Porto Et al (2003). Se consideraron los principios de la bioética personalista según Elio Sgreccia (2007) y los criterios de rigor científico de Lincoln y Guba (1998). Obteniéndose las categorías: la leucemia estigmatizada como proceso largo, doloroso y mortal, ciencia y cuidado humano elementos asociados a la cura, el conocimiento ancorado como mayor expectativa de curación y descubriendo la representación de la leucemia y su ancoraje en la vida del adolescente.

Cuando la leucemia aparece en cualquier circunstancia y en especial en niños, son las madres las que soportan todo el peso de la enfermedad y el tratamiento de sus hijos causándoles diferentes experiencias y sentimientos, ya que vendrán momento difíciles durante el tratamiento de las quimioterapias. La presente investigación cualitativa con abordaje estudio de casos tuvo como objetivo: conocer, describir y comprender las experiencias vividas de las madres durante las quimioterapias realizadas a sus hijos en la unidad de quimioterapia ambulatoria del HNAAA, 2014. Para la recolección de datos se utilizó la entrevista semiestructurada, entrevistando a ocho madres de hijos que se encontraban recibiendo quimioterapia ambulatoria, quienes participaron voluntariamente en el estudio, previa firma del consentimiento informado. El estudio estuvo tutelado bajo los principios éticos: autonomía, no maleficencia, justicia y veracidad. Así también se puede mencionar los siguientes criterios de rigor científico: credibilidad, transferibilidad y confortabilidad. El sustento teórico estuvo basado en la teoría de Regina Waldow. Producto del análisis de contenido temático, se obtuvo las siguientes categorías: (1) Reflexionando sobre las experiencias de las madres en la quimioterapia de sus hijos. (2) Repercusiones y cambios en la vida familiar.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-22Bitstream added on 2014-08-13T18:01:30Z : No. of bitstreams: 1 000747059_20141231.pdf: 713018 bytes, checksum: 1ab0fb998d81d6f1c695a87436169afb (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:49Z: 000747059_20141231.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:47Z : No. of bitstreams: 1 000747059.pdf: 1865474 bytes, checksum: dd3143027092dcd3e421eba81d6f7b3f (MD5) / A lectina vegetal ArtinM, ligante de D-manose, está presente nas sementes da jaca, Artocarpus heterophyllus e possui uma estrutura homotetramérica formada pela associação não covalente de subunidades, sendo que cada subunidade representa um CRD (Carbohydrate Recognition Domain). Por interagir com N-glicanas presente em células de mamíferos, a ArtinM desencadeia diversos processos biológicos, dentre eles a resposta citotóxica sobre células leucêmicas, em especial células NB4 da leucemia promielocitica aguda. Neste trabalho foi estudada a interação ArtinM-NB4 por técnicas piezoeletricas de Microbalança a Cristal de Quartzo (QCM) e eletroquímicas por Espectroscopia de Impedância Eletroquímica (EIS), para tanto foi desenvolvida uma superfície de reconhecimento capaz de realizar a transdução do evento biológico de interação lectina-carboidrato em elétrico. A superfície de reconhecimento foi formada pela imobilização da lectina ArtinM em superfícies metálicas de Au por meio de uma monocamada auto-organizada, utilizando uma mistura de dois alcanotióis, o ácido 11-mercaptoundecanóico (11-MUA), como ancora, e o 6-mercaptoetanol (6-MetOH), como espaçador. As várias concentrações de células NB4 previamente fixadas foram deixadas em contato com a lectina imobilizada no eletrodo para que ocorressem as interações desejadas. Após as medidas terem sido avaliadas utilizando-se QCM e EIS, e aplicando o modelo da isoterma de Langmuir, foi possível determinar as constantes cinéticas e de afinidade. Nas medidas obtidas utilizando a QCM, para além da constante de afinidade aparente, foi possível extrair os parâmetros cinéticos: Ka (constante de associação cinética) = (1,8±1,1)x10-7 mL cel-1, kon (constante de velocidade de associação) = (3,6±1,0)x10-10 mL cel-1s-1 e koff (constante de dissociação) = (20,3±6,6)x10-4 s-1. O valor da constante de afinidade aparente (K') foi de (4,4±0,1)x10-7 mL cel-1 utilizando... / ArtinM, a D-mannose-binding lectin from Artocarpus heterophyllus (jackfruit), interacts with N-glycans on cell surface receptors triggering cell migration, degranulation, and cytokine release. Because malignant transformation is often associated with altered expression of cell surface glycans, this work evaluated the interaction of ArtinM with human myelocytic leukemia cells, such as acute promyelocytic leukemia, NB4, by piezoelectric techniques of the Quartz Crystal Microbalance (QCM) and by electrochemical techniques of Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS). It was developed, for both techniques, a surface recognition capable of performing the biological interaction between lectin-cell and transducte them in electric signal. The surface was formed by immobilization of ArtinM in Au metal surfaces by over a self-organized monolayer constructed by a mixture of two alkanothiols, 11-mercaptoundecanoic acid (11-MUA) as an anchor, and 6-mercaptoethanol (6- MetOH) as a spacer. Concentrations of NB4 cells, previously fixed with paraformaldeide, were left in contact with the immobilized lectin on electrode. After the interaction measurements evaluated by QCM and EIS, and applying the model of Langmuir isotherm, it was possible to obtained both kinetic and affinity constants. Using QCM, beyond the apparent affinity constant, was possible to extract kinetic parameters Ka (association kinetic constant) = (1.8 ± 1.1) 10-7 cel mL-1, kon (association constant) = (3.6 ± 1.0) x10- 10 mL cel- 1 s- 1 and koff (dissociation constant) = (20.3 ± 6.6) x10- 4 s- 1 . The value of the apparent affinity constant (K') was (4.4 ± 0.1) x10- 7 cel mL- 1 by QCM and (9.9 ± 0.2) x10- 5 mL cel- 1 by EIS, the difference between the values comparing both techniques may be related to different factors such as the use of successive addition of NB4 in EIS comparing the in unitary addition in QCM analysis, variation in surface engineering and distinct saturation range.

Orientador: Paulo Roberto Bueno / Banca: Maria Del Pilar Taboada Sotomayor / Banca: Gabriela Silva Bisson / Resumo: A lectina vegetal ArtinM, ligante de D-manose, está presente nas sementes da jaca, Artocarpus heterophyllus e possui uma estrutura homotetramérica formada pela associação não covalente de subunidades, sendo que cada subunidade representa um CRD (Carbohydrate Recognition Domain). Por interagir com N-glicanas presente em células de mamíferos, a ArtinM desencadeia diversos processos biológicos, dentre eles a resposta citotóxica sobre células leucêmicas, em especial células NB4 da leucemia promielocitica aguda. Neste trabalho foi estudada a interação ArtinM-NB4 por técnicas piezoeletricas de Microbalança a Cristal de Quartzo (QCM) e eletroquímicas por Espectroscopia de Impedância Eletroquímica (EIS), para tanto foi desenvolvida uma superfície de reconhecimento capaz de realizar a transdução do evento biológico de interação lectina-carboidrato em elétrico. A superfície de reconhecimento foi formada pela imobilização da lectina ArtinM em superfícies metálicas de Au por meio de uma monocamada auto-organizada, utilizando uma mistura de dois alcanotióis, o ácido 11-mercaptoundecanóico (11-MUA), como ancora, e o 6-mercaptoetanol (6-MetOH), como espaçador. As várias concentrações de células NB4 previamente fixadas foram deixadas em contato com a lectina imobilizada no eletrodo para que ocorressem as interações desejadas. Após as medidas terem sido avaliadas utilizando-se QCM e EIS, e aplicando o modelo da isoterma de Langmuir, foi possível determinar as constantes cinéticas e de afinidade. Nas medidas obtidas utilizando a QCM, para além da constante de afinidade aparente, foi possível extrair os parâmetros cinéticos: Ka (constante de associação cinética) = (1,8±1,1)x10-7 mL cel-1, kon (constante de velocidade de associação) = (3,6±1,0)x10-10 mL cel-1s-1 e koff (constante de dissociação) = (20,3±6,6)x10-4 s-1. O valor da constante de afinidade aparente (K') foi de (4,4±0,1)x10-7 mL cel-1 utilizando... / Abstract: ArtinM, a D-mannose-binding lectin from Artocarpus heterophyllus (jackfruit), interacts with N-glycans on cell surface receptors triggering cell migration, degranulation, and cytokine release. Because malignant transformation is often associated with altered expression of cell surface glycans, this work evaluated the interaction of ArtinM with human myelocytic leukemia cells, such as acute promyelocytic leukemia, NB4, by piezoelectric techniques of the Quartz Crystal Microbalance (QCM) and by electrochemical techniques of Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS). It was developed, for both techniques, a surface recognition capable of performing the biological interaction between lectin-cell and transducte them in electric signal. The surface was formed by immobilization of ArtinM in Au metal surfaces by over a self-organized monolayer constructed by a mixture of two alkanothiols, 11-mercaptoundecanoic acid (11-MUA) as an anchor, and 6-mercaptoethanol (6- MetOH) as a spacer. Concentrations of NB4 cells, previously fixed with paraformaldeide, were left in contact with the immobilized lectin on electrode. After the interaction measurements evaluated by QCM and EIS, and applying the model of Langmuir isotherm, it was possible to obtained both kinetic and affinity constants. Using QCM, beyond the apparent affinity constant, was possible to extract kinetic parameters Ka (association kinetic constant) = (1.8 ± 1.1) 10-7 cel mL-1, kon (association constant) = (3.6 ± 1.0) x10- 10 mL cel- 1 s- 1 and koff (dissociation constant) = (20.3 ± 6.6) x10- 4 s- 1 . The value of the apparent affinity constant (K') was (4.4 ± 0.1) x10- 7 cel mL- 1 by QCM and (9.9 ± 0.2) x10- 5 mL cel- 1 by EIS, the difference between the values comparing both techniques may be related to different factors such as the use of successive addition of NB4 in EIS comparing the in unitary addition in QCM analysis, variation in surface engineering and distinct saturation range. / Mestre

Dissertação (mestrado) - Univesidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T09:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 245165.pdf: 3513206 bytes, checksum: 61c63882ef33006b9918d606992b1f38 (MD5) / As chalconas são compostos intermediários essenciais na biossíntese dos flavonóides. São amplamente distribuídas no reino vegetal e encontradas em pequenas e grandes plantas. Muitos trabalhos demonstraram efeitos biológicos para as chalconas, incluindo efeito antiinflamatório, antioxidante, antimalárico e antitumoral. Diferentes substituintes nos anéis das chalconas podem resultar em compostos com diferentes atividades biológicas. O objetivo deste trabalho foi estudar a atividade antitumoral de dez chalconas derivadas quimicamente do 3,4-metilenodioxibenzaldeído nas células leucêmicas linfoblásticas L1210. Foram analisadas a viabilidade celular, o mecanismo de morte celular, as concentrações intracelulares de GSH e ATP e a toxicidade in vitro das chalconas em células progenitoras da medula óssea. Foi observado que as chalconas 5, 7 e 11 reduziram fortemente o número de células viáveis em 90.5 ± 1.2%, 87.1 ± 1.1% e 86.3 ± 2.2%, respectivamente, quando comparadas com o controle, e induziram a fragmentação do DNA na concentração de 100 µM. Dentre as dez chalconas testadas somente a 5, a 7 e a 11 apresentaram efeito citotóxico acentuado. A chalcona 5 mostrou o menor valor de IC50 em 24h e em 48h, nas concentrações de 45 e 22 µM, respectivamente. Os grupos metóxi que aumentam a densidade eletrônica do anel A, presentes nos compostos 5, 7, e 11, parecem aumentar sua citotoxicidade. A depleção de GSH mostrou-se proporcional à morte celular. As concentrações intracelulares de ATP foram esgotadas de maneira concentração-dependente, sugerindo que os compostos podem interferir no potencial de membrana mitocondrial e na síntese do ATP. A chalcona 7 foi o composto menos tóxico para células normais da medula óssea. Nossos resultados mostraram que as chalconas 5, 7 e 11 induziram à apoptose células L1210 e apresentam a chalcona 7 como a mais promissora para dar continuidade às investigações.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T12:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 259535.pdf: 1515828 bytes, checksum: 9e9db4dc13d0fa48ba892daa2d31a430 (MD5) / A camptotecina (CPT), um alcalóide proveniente do arbusto Camptotheca acuminata (Descaisne, Nyssaceae), é um fármaco que apresenta elevada atividade antitumoral, cujo mecanismo envolve a inibição da Topoisomerase I, uma enzima altamente expressa nos tumores. Entretanto, a utilização deste fármaco na terapêutica foi limitada, durante anos, em virtude de suas características de baixa solubilidade aquosa, elevada instabilidade em meio fisiológico, e elevada toxicidade. Com o intuito de contornar os inconvenientes da administração deste fármaco e melhorar a sua eficácia terapêutica, estudos da encapsulação da CPT em nanocápsulas poliméricas foram realizados, empregando o poli (D,L-ácido lático) (PLA) e copolímeros em bloco do poli (D,L-ácido lático) e polietilenoglicol (PLA-PEG 49 e 66,6 kD). Estes últimos foram empregados com o intuito de obter nanopartículas furtivas, ou seja, que escapam do reconhecimento e captura pelos macrófagos. As suspensões de nanocápsulas foram preparadas pela técnica de deposição interfacial do polímero pré-formado (nanoprecipitação) e caracterizadas quanto ao diâmetro médio das partículas e potencial zeta. A viabilidade da preparação das nanocápsulas em diferentes condições foi avaliada. A eficiência de encapsulação e o teor de fármaco foram determinados por meio de uma metodologia analítica de cromatografia liquida de alta eficiência previamente validada. Um delineamento estatístico fatorial foi aplicado para determinar a influência de duas variáveis independentes (tipo de óleo e tipo do polímero) sobre o teor de camptotecina nas suspensões coloidais. Suspensões coloidais monodispersas, apresentando partículas com diâmetro médio entre 140 e 200 nm e potencial zeta entre -25 e -42 mV, foram obtidas pela técnica de nanoprecipitação. Elevados valores de eficiência de encapsulação foram obtidos em todas formulações testadas. Ambos, tipo de polímero e tipo de óleo afetaram significativamente o teor de fármaco das formulações. Ensaios de liberação foram realizados empregando a técnica de difusão através de membrana e tampão fosfato pH 7,4 contendo Tween 2% como meio de liberação. A concentração de CPT no meio de liberação foi determinada por uma metodologia de espectrofluorimetria. Após 96 horas de ensaio, cerca de 40 a 60% do fármaco foi liberado, dependendo da formulação testada. Estudos de citotoxicidade in vitro da CPT livre e encapsulada foram conduzidos usando linhagens de células de leucemia linfoblástica aguda murina L1210 e de leucemia mielomonocítica murina WEHI-3B. Na concentração de 0,1 µg/mL, tanto a CPT livre como encapsulada reduziram significativamente o número de células leucêmicas L1210 viáveis(P<0,005 versus grupo controle), mas não foi observada diferença significativa quando o grupo tratado com as nanocápsulas foi comparado com o tratado com o fármaco livre. Na mesma concentração, quando as células leucêmicas WeHi-3B foram testadas, somente as nanocápsulas de PLA contendo CPT reduziram significativamente o número de células viáveis (P<0,005). Estudos in vivo necessitam ainda ser conduzidos para demonstrar o interesse da utilização de nanocápsulas no tratamento das leucemias. Camptothecin (CPT), an alkaloid obtained from Camptotheca acuminata (Descaine, Nyssaceae), is a drug that displays high antitumor activity, and its mechanism entails the inhibition of the Topoisomerase I, an enzyme highly expressed in the tumors. Neverthless, camptothecin's use in therapeutics has been limited by its low water solubility, low stability in physiological medium, and high toxicity. In order to overcome these drug drawbacks and to improve the therapeutic efficacy, encapsulation studies of CPT in nanocapsules was done using poly (D,L-lactide) (PLA) and poly (D,L lactide)-poly(ethyleneglycol) diblock copolymers (PLA-PEG 49 e 66.6 kD). These polymers were used in order to obtain stealth nanocapsules, which are able to escape from macrophage uptake. The nanocapsule suspensions were prepared by interfacial deposition of preformed polymer (nanoprecipitation) and were physicochemically characterized. The feasibility of the nanocapsule preparation using diferent conditions was evaluated. The encapsulation efficiency and CPT content in the nanocapsules were estimated by a validated high performance liquid cromatography method. A factorial design was employed to investigate the effect of two independent variables (oil and polymer type) on CPT content. The nanoparticles dysplayed mean diameter varying from 140 to 200 nm and zeta potencial from -25 to -40 mV. The encapsulation efficiency values were high for all tested formulations. Both type of the polymer and oil affected significantly the CPT content in the nanocapsule suspensions. In vitro release studies were done using the membrane difusion method and phosphate buffer solution pH 7.4, containing 2% Tween 80, as releasing medium. The release of CPT varied from 40 to 60% after 96 hours. The cytotoxicity of the free drug and CPT-loaded nanocapsule suspensios was evaluated by MTT method against a mouse lymphocytic leukemia cell line (L1210) and a myelomonocytic leukemia cell line (WeHi-3B). The free drug and CPT-loaded nanocapsules caused significant L1210 cell death in the concentration of 0.1 µg/mL (P<0.005 versus control group). However, statistical significant difference was not observed when cells were treated with the CPT-loaded nanocapsules or free drug. On the other hand, only CPT-loaded PLA nanocapsules reduced significantly the number of WeHi 3B viable cells (P<0.005 versus control group). In vivo studies are still need to evaluated the effect of CPT-loaded nanocapsules on leukemia.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-10T12:21:36Z No. of bitstreams: 1 2008_DanielleGuimaraesADiniz.pdf: 2199801 bytes, checksum: cc54ee6af3a845a15b11244303389829 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-30T15:39:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_DanielleGuimaraesADiniz.pdf: 2199801 bytes, checksum: cc54ee6af3a845a15b11244303389829 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-30T15:39:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_DanielleGuimaraesADiniz.pdf: 2199801 bytes, checksum: cc54ee6af3a845a15b11244303389829 (MD5) Previous issue date: 2008 / Os retinoides são compostos derivados da vitamina A capazes de regular o crescimento e Diferenciação celular. O uso dos retinoides para o tratamento do câncer tem progredido, particularmente para os casos de leucemia, neuroblastoma, cânceres de próstata e pulmão. O uso terapêutico dos retinoides e limitado devido as graves reações adversas apresentadas e a baixa solubilidade destes compostos. A encapsulação dos retinoides em nanocarreadores, como lipossomas e nanocapsulas, pode modificar seu perfil de farmacocinetica, aumentar o aporte celular e melhorar a estabilidade destes compostos. Os lipossomas foram preparados pelo método de hidratação do filme lipidico seco e caracterizados quanto a sua estabilidade por Alves em 2005. As nanocapsulas foram preparadas pelo método de deposição interfacial do polímero pré-formado. As nanocapsulas de PLA foram caracterizadas quanto a estabilidade por Teixeira em 2007. O diâmetro médio dos nanocarreadores foi de 90, 169 e 170 nm para os lipossomas, nanocapsulas de PLGA e nanocapsulas de PLA respectivamente. As nanocapsulas exibiram maior eficiência de encapsulacao para a isotretinoina. A citotoxicidade do fármaco, quando encapsulado, foi dose e tempo dependentes sendo possível observar redução nos valores do IC50. Na avaliação da citotoxicidade tanto pelo método de azul de trypan quanto pelo MTT, foi possível observar que a nanoencapsulacao promoveu aumento na atividade antiproliferativa da isotretinoina tanto em células K562 quanto em células de pacientes, quando comparada a sua forma nao encapsulada. Ja com 24 horas de incubação, foi observado um aumento expressivo no índice terapêutico do fármaco encapsulado quando incubado com células de pacientes. No presente trabalho também foi observada a presença de tretinoina e isotretinoina tanto dentro das células K562 quanto no meio de cultura, demonstrando a isomerização destes compostos durante a incubação. Nos ensaios de biodistribuição tissular foi possível observar que as nanocápsulas de PLGA foram rapidamente sequestradas pelo fígado e pulmão. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Retinoic acid (RA) is the main Vitamim A related compound capable of regulating cellular differentiation and growth. The use of retinoids for the treatment of cancer has progressed, particularly for leukemia, neuroblastoma, prostate and lung tumors. Therapeutic uses of retinoids are limited due to severe adverse reactions, and also their very low aqueous solubility. Encapsulating retinoids in colloidal carriers, such as liposome and nanocapsules, can modify their pharmacokinetic profile, increase the drug uptake into neoplasic cells and also improve the stability of these compounds. Preparation methods of liposomes include the hydration of lipidic film followed by sonication. After preparation, the vesicles are characterized by size, chemical constitution, and amount of encapsulated material for Alves, 2005. Nanocapsules were prepared by solvent displacement method. After preparation, PLA nanocapsules are characterized by size, chemical constitution, and amount of encapsulated material forTeixeira, 2007. The average diameter of the nanocarriers was 90, 167 and 170 nm for liposomes, PLGA and PLA nanocapsules respectively. Nanocapsules exhibited the highest encapsulation efficiency for 13cis RA. Citotoxicity of the drug inside the nanocarrier systems was dose and time dependent and also a marked reduction of IC50 for cultured cells was observed. Nanoencapsulation was able to promote an increase in the in vitro therapeutic index of 13cisRA against the proliferation of both K562 and patient myeloid leukimia cells when compared to that of free drug. With 24 hours of incubation, was noticed a significant increase in therapeutic index of encapsulated drug when incubated with patients cells. In this work it was observed the presence of tretinoin and isotretinoin both within the K562 cells as the growth medium, demonstrating the isomerization of these compounds during incubation. In tests of tissue biodistribution it was possible to see that the nanocapsules of PLGA were quickly kidnapped by the liver and lung.

As leucemias são neoplasias que afetam o sistema hematopoiético e compreendem 2,53% dos casos de câncer relatados. Entre as leucemias, 27,95% correspondem a casos de leucemia mielóide crônica (LMC), que apresenta como marcador genético o cromossomo Philadelphia (Ph). Presente em mais de 80% dos casos, o cromossomo Ph é derivado da translocação t(9;22) (q34;q11), que origina um gene híbrido entre a região 5´ do gene bcr e 3´do gene abl. O produto deste gene é uma proteína Bcr-Abl na qual a atividade reguladora e nuclear do domínio tirosina quinase, originado da proteína Abl, torna-se constitutiva e citoplasmática. Estas mudanças na atividade tirosina quinase afetam diferentes vias de sinalização, com consequências em vários processos celulares como adesão, proliferação e apoptose. Em nível fisiológico, foi mostrado tanto in vitro quanto in vivo que as células hematopoiéticas precursoras Ph+ se diferenciam principalmente em células eritróides. Entretanto, quase 70% dos pacientes com LMC sofrem anemia, mostrando que, as células Ph+ diferenciadas em células eritróides não conseguem amadurecer até hemácias funcionais. Isto faz da LMC um bom modelo para o estudo da diferenciação de células eritróides e suas características, como os fatores que afetam a sintese de hemoglobina (Hb). A linhagem K562 é uma linhagem celular eritroleucêmica Ph+, amplamente utilizada como modelo para estudar drogas com capacidade anti-proliferativa e/ou indutoras da síntese de hemoglobina fetal. Entre estas drogas encontram-se a aclarrubicina (ACLA) e doxorrubicina (DOX) que, embora sejam análogos químicos pertencentes à família das antraciclinas, possuem mecanismos de ação diferentes e ainda não completamente esclarecidos. Neste trabalho, foram investigados vários aspectos da biologia das células K562 durante o tratamento com estas drogas. Foi observado que o tratamento com DOX produz um aumento de tamanho nas células e bloqueio do ciclo celular na fase G2/M, afetando também grandemente a viabilidade celular, com 70% de células mortas no sétimo dia de tratamento. Já durante o tratamento com ACLA a viabilidade, tamanho e ciclo celular foram menos afetados, com aproximadamente 15% de células mortas no sétimo dia de tratamento e um bloqueio transitório do ciclo na fase G1. No entanto, as duas drogas causaram um aumento significativo da síntese de hemoglobina, principalmente DOX que induziu um aumento quase duas vezes maior que o induzido por ACLA. A análise da expressão gênica realizada através da técnica de differential display mostrou várias bandas diferencialmente representadas e com diversas cinéticas de expressão, apresentando semelhanças e diferenças quando são comparados os dois tratamentos ou células tratadas e controle. Destas bandas, 26 estão sequenciadas mostrando genes envolvidos em vários processos celulares como dano do DNA, resistência a drogas, processamento do RNA e codificação de proteinas relacionadas com ferro. Das bandas sequenciadas, 7 foram validadas por RT-PCR (ndrg1, erk2, nf2l2, atp6ap1, rfc1, phf20 e zkscan) sendo observado um aumento na sua expressão durante o tratamento, com exceção de ndrg1 para o qual a expressão foi induzida em vez de aumentada e nf2l2 onde a diferença com o controle foi pequena e não permitiu validar este gene como diferencialmente expresso. Com o objetivo de procurar por mecanismos comuns entre os vários indutores da síntese de hemoglobina em células K562, estes genes foram também analisados durante o tratamento destas células com os indutores hidroxiuréia e dGTP. Além de induzirem a expressão de hemoglobina, os dois tratamentos provocaram um aumento no tamanho das células tratadas e um bloqueio no ciclo celular na fase S. Visando futuros trabalhos envolvendo os genes diferencialmente expressos, foi ainda otimizado um sistema de transferência gênica por eletroporação. Para isto foram testados varios parâmetros como campo elétrico, resistência, capacitância, meios de eletroporação, manipulação das células e uso de inibidores de DNAses. Como resultado, foi alcançado com o eletroporador padrão uma eficiência de transfecção de 81%, similar àquela alcançada pelo nucleoporator (eletroporador de última geração). As condições estabelecidas foram 750 V/cm, resistência infinita, 500 μF, meio RPMI1640, centrifugação e sulfato de zinco pós-pulso. A relação das antraciclinas e a hidroxiuréia, assim como de outros indutores da síntese de hemoglobina, com o ferro intracelular, juntamente com a diferença na expressão, durante o tratamento, de genes afetados direta ou potencialmente pela não disponibilidade de ferro intracelular, nos permitiu gerar uma hipótese para a via de sinalização que leva à síntese de hemoglobina. Nesta, sinais de falta ou não disponibilidade de ferro nas células ativariam a maquinaria celular para a captação e internalização do ferro extra-celular, simultaneamente com síntese de proteínas que utilizam o ferro para realizar as suas funções biológicas, entre elas a hemoglobina. Do mesmo modo, propomos a via de sinalização do ferro como um alvo potencialmente afetado por drogas indutoras da síntese de hemoglobina, como as antraciclinas, cujos alvos são ainda pouco conhecidos. Contudo, mais genes desta via de sinalização, bem como outros indutores, deveram ser estudados para saber se a síntese de hemoglobina pode ser induzida por drogas mais específicas e com menos efeitos colaterais que aquelas usadas atualmente para o tratamento de câncer e outras doenças.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T07:14:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 288983.pdf: 2515716 bytes, checksum: c5d31b0c7e25f6fc3c18ffeeecaa8458 (MD5) / As leucemias agudas (LAs) constituem um grupo de neoplasias malignas caracterizadas pela proliferação descontrolada de células hematopoiéticas, proveniente de mutações que podem ocorrer em diferentes fases da diferenciação de células precursoras, o que a caracteriza como uma doença altamente heterogênea. De acordo com a classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) para neoplasias do sistema hematopoiético e linfoide, publicada em 2008, para um diagnóstico mais preciso e estratificação de prognóstico de pacientes com LA, devem-se pesquisar mutações nos genes FLT3. Fisiologicamente, o receptor FLT3 participa da regulação da apoptose, da proliferação, de sobrevivência e da diferenciação celular. Quando o gene FLT3 sofre mutação, dá origem a um produto final modificado, ou seja, gera um receptor com alterações estruturais. A presença de mutações nesse gene é de prognóstico desfavorável, e a análise das mutações no gene FLT3 tem sido considerada como um fator de prognóstico relevante na decisão terapêutica de pacientes com LA. Dessa forma, é de extrema importância a análise das mutações no gene FLT3 (duplicação interna em tandem DIT e mutação pontual D835) como marcadores moleculares de prognóstico em pacientes com LA. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar a importância das mutações no gene FLT3 (DIT e D835) como marcadores moleculares para no prognóstico de pacientes com suspeita clínica de LA, antes da primeira terapia, atendidos, no período de janeiro de 2009 a dezembro de 2010, pelo Serviço de Hematologia do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC) e pelo Serviço de Oncologia do Hospital Infantil Joana de Gusmão (HIJG), ambos situados em Florianópolis, Santa Catarina. Para tanto, encaminharam-se as amostras de medula óssea (MO) ou de sangue periférico (SP) ao Laboratório de Oncologia Experimental e Hemopatias (LOEH) para investigação das mutações no gene FLT3 utilizando-se a reação em cadeia da polimerase (PCR). Dividiram-se os pacientes em dois grupos: pacientes com idade superior a 16 anos e pacientes com idade igual ou inferior a 16 anos. Para a análise estatística das variáveis numéricas, utilizou-se o teste t de Student e, para as variáveis nominais, o teste do qui quadrado. Para os dois tipos de variáveis analisados, o nível de significância determinado foi de 5% (P < 0,05). Os resultados mostraram que a mutação FLT3-DIT foi mais incidente em indivíduos com LMA com idade igual ou inferior a 16 anos, enquanto nos 10 indivíduos com LLA com idade superior a 16 anos a mutação FLT3- DIT foi rara. Quanto à mutação FLT3-D835, foi rara em indivíduos com idade superior a 16 anos. Constatou-se que as mutações no gene FLT3 (DIT e D835) não têm associação com os seguintes fatores prognósticos: idade, leucometria, níveis de LDH e marcação para CD34, como também para o gênero. A DIT no gene FLT3 parece anular o efeito de prognóstico favorável da t(15;17), além de parecer ter associação com vantagem de proliferação celular, mesmo em indivíduos com LPA. Houve uma associação estatisticamente significante entre a DIT no gene FLT3 e a ausência de remissão e óbito em pacientes com idade igual ou inferior a 16 anos. Esses resultados sugerem que a presença de FLT3-DIT é um fator de prognóstico desfavorável e independente, pois não possuiu relação com outros fatores prognósticos, devendo ser considerado como um marcador molecular no prognóstico de pacientes com suspeita clínica de LA e importante para a decisão terapêutica. / Acute leukemias (ALs) are a group of malignancies characterized by uncontrolled proliferation of hematopoietic cells, which are originated from mutations that can occur at different stages of differentiation of precursor cells, characterizing it as a highly heterogeneous disease. According to the classification of the World Health Organization (WHO) for malignancies of lymphoid and hematopoietic system, published in 2008, for a more precise diagnosis and prognostic stratification of patients with AL, the mutations in FLT3 gene should be investigated. Physiologically, the FLT3 receptor participates in the regulation of apoptosis, proliferation, survival and cell differentiation. When the FLT3 gene is mutated, it originates a modified final product, which means it generates a receptor with structural changes. The presence of mutations in this gene is an unfavorable prognosis, and the analysis of mutations in FLT3 gene has been considered an important prognostic factor in deciding the treatment of patients with AL. Thus, the analysis of mutations in FLT3 (internal tandem duplication - ITD - and D835 point mutation) is extremely important as molecular markers in the prognosis of patients with AL. Therefore, the purpose of this study was to investigate the importance of mutations in FLT3 gene (D835 and ITD) as molecular markers for prognosis of patients with clinical suspicion of AL, before the first therapy, who attended the Serviço de Hematologia do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC) and the Serviço de Oncologia do Hospital Infantil Joana de Gusmão (HIJG), both located in Florianópolis, Santa Catarina, in the period from January 2009 to December 2010. To this end, the samples of bone marrow (BM) or peripheral blood (PB) were forwarded to the Laboratório de Oncologia Experimental e Hemopatias (LOEH) for the investigation of FLT3 gene mutations using the polymerase chain reaction (PCR). The patients were divided into two groups: patients aged more than 16 years and patients aged 16 years or less. For statistical analysis of numerical variables, we used the Student t-test and for nominal variables, the chi square. For both types of variables analyzed, the level of significance was set at 5% (P < 0.05). The results showed that the mutation FLT3-ITD was more common in patients with AML aged 16 years or less, while in patients 12 with ALL aged more than 16 years, FLT3 mutation-ITD was rare. In the same way, the FLT3-D835 mutation was rare in individuals older than 16 years. It was found that mutations in the FLT3 gene (ITD and D835) are not associated with the following prognostic factors: age, WBC count, LDH levels and marking for CD34 and sex. The ITD in the FLT3 gene seems to nullify the effect of favorable prognosis of t(15;17) and seems to be associated with cell proliferation advantage, even in patients with ALL. There was a statistically significant association between the ITD in the FLT3 gene and the absence of remission and death of patients aged 16 years or less. These results suggest that the presence of FLT3-ITD is an unfavorable and independent prognostic factor since it did not seem to have a relationship with other prognostic factors. For this reason, it should be considered as a molecular marker for the prognosis of patients with clinical suspicion of AL and as an important factor in therapeutic decision.