O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da introdução da linhagem materna, representando a herança mitocondrial, no modelo de avaliação genética para características de desenvolvimento (peso ao nascer, aos 120 dias, a desmama, ao ano e ao sobreano), perímetro escrotal e temperamento de um rebanho Nelore. O banco de dados era composto pelo registro de produção de 24.498 animais e o de genealogia, de 27.476. Com o intuito de estimar componentes de (co)variâncias e parâmetros genéticos, os dados foram analisados sob dois modelos, o primeiro igual ao atualmente utilizado nas avaliações genéticas desse rebanho, e o segundo incluiu o efeito de linhagem materna como efeito aleatório. A linhagem materna foi obtida traçando-se a partir de uma fêmea, uma linha até a última fêmea com registro no banco de dados, considerando-a uma fundadora. Dentre as características analisadas, o efeito de linhagem materna foi significativo (P < 0,05) somente para peso à desmama. Para essa característica, o efeito de linhagem materna foi responsável por grande alteração do "ranking" dos 1000 melhores animais, tanto para machos quanto para fêmeas. A variação entre as linhagens maternas pode promover diferenças de mais de 22 kg no peso a desmama, o que corresponde a 12,9% da média fenotípica / The present work had the objective to evaluate the effect of the introduction of the maternal lineage, representing the mitocondrial inheritance, in the model of genetic evaluation for growth characteristics (weights at birth, 120 days, weaning, year and 18 months), scrotal perimeter and temperament of one Nelore herd. The data base was composed of 24.498 animals and pedigree, of 27.476. With intention of estimating the (co)variance components and genetic parameters, data were analyzed under two models: first the equal one that currently used in the genetic evaluations of this herd and second that included the maternal lineage effect as random effect. The maternal lineage was gotten tracing itself from a female, a line until the last female with register in the data base, considering she as a founder. Amongst the analyzed characteristics, the maternal lineage effect was significant (P < 0,05) only for weight weaning. For this characteristic, the maternal lineage effect was responsible for great alteration in the ranking of the 1000 better animals, as much for males and females. The variation of the maternal lineages can promote difference of more than 22 kg in the weight at weaning, corresponding to 12,9% of the phenotypic mean

Introdução: Um dos principais obstáculos para compreensão dos eventos biológicos envolvidos no câncer é a falta de modelos adequados para o estudo in vitro em especial em relação ao câncer de próstata (CaP) e ao câncer de bexiga (CaB). Há um número limitado de linhagens celulares de CaP e de CaB sendo a maioria proveniente de tumores invasivos e metastáticos. Sabe-se ainda, que existem diferenças étnicas entre as populações quanto ao comportamento de neoplasias. Desta forma, a pesquisa baseada em linhagens de uma população homogênea seria fonte de resultados limitados, não contemplando a diversidade que sabidamente ocorre entre os diferentes grupos. Além desse aspecto, as linhagens celulares comerciais são na sua maioria adquiridas na Coleção Americana de Culturas de Tecido (ATCC, do inglês American Tissue Cell Culture) que apesar de serem bem padronizadas, requerem processos de importação com aumento do custo e demandas burocráticas que dificultam a pesquisa. Portanto, consideramos vital para a compreensão dos fenômenos relacionados à carcinogênese, assim como estudos de resistência a drogas, quimioprevenção e novas estratégias terapêuticas, o desenvolvimento de linhagens tumorais derivadas de tumores primários que acometem a nossa população, peculiarmente miscigenada. No presente trabalho, fragmentos de carcinoma urotelial da bexiga e de adenocarcinoma da próstata foram obtidos durante cirurgia para remoção de tumores primários de pacientes tratados e acompanhados na Divisão de Urologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP) e no Hospital Sírio Libanês. As linhagens estabelecidas a partir destes fragmentos foram caracterizadas através da análise da cinética de crescimento, análises imunocitoquímicas e anormalidades cromossômicas incluindo cariótipo e hibridização in situ por fluorescência (FISH). Além disso, as linhagens obtidas foram submetidas a estudos de quimiossensibilidade com o uso dos compostos curcumin e Prima-1. Avaliamos ainda, a tumorigenicidade de nossas linhagens em camundongos atímicos. Os resultados deste trabalho demonstram o desenvolvimento de três linhagens de CaB e três linhagens de CaP sendo as mesmas não tumorigênicas em camundongos atímicos. Além disso, demonstramos que o curcumin na concentração de 50 M induziu morte celular em todas as linhagens estudadas, sendo seu efeito mais evidente nas linhagens de CaP. Por fim, Prima-1 reduziu a viabilidade celular independente do status de p53 nas linhagens de CaB / Introduction: One of the main obstacles for understanding biological events involved in cancer is the lack of appropriated models for in vitro studies especially for prostate cancer (PC) and bladder cancer (BC). There are a limited number of PC and BC cell lines being the majority originated from metastatic and invasive tumors. Also it is well known that there are ethnic differences between populations concerning the behavior of tumors. In such a way, the research based on cell lines derived from a homogenous population should be source of limited results, not contemplating the diversity known to occur among different groups. In addition the commercial cell lines are generally acquired at American Tissue Cell Culture (ATCC) that although wellestablished requires importation processes with cost increase and bureaucratic demands that difficult the research. Therefore we consider vital to the comprehension of the carcinogenesis phenomena, as well as drug resistance studies, chemoprevention and new therapeutic strategies, the development of tumor lineages derived from primary tumors that assail our miscigenated population. At the present work, fragments of bladder urothelial carcinoma and prostate adenocarcinoma were obtained by surgical resection of primary tumors from patients treated and followed in the Division of Urology of the Clinical Hospital of the São Paulo University (FMUSP) and Syrian Lebanese Hospital. The cell lines established from these fragments were characterized through growth kinetic, immunocytochemistry and chromosome abnormalities including karyotyping and Fluorescence in situ hybridization (FISH). Moreover, the cell lines were submitted to chemosensitivity studies using curcumin and Prima-1 and analyzed regarding their tumorigenicity in athymic mice. The results of this work show the development of three BC and three PC cell lines that were not tumorigenic in athymic mice. Curcumin at 50 M concentration induced cell death in all studied lineages, being more effective in PC cell lines. Finally, PRIMA-1 reduced the cellular viability independent of the p53 status in BC cell lines

No ano de 1392, João d\'Arras começa a escrever um romance a pedido de um poderoso príncipe francês e conhecido mecenas da época: o duque João de Berry. Essa obra descreve a fundação de uma fortaleza e conta as aventuras da linhagem que lá se originou: os Lusignan. No entanto, aquela não era uma história de pessoas comuns. Os Lusignan eram descendentes da fada Melusina que todos os sábados se transformava em serpente da cintura para baixo. Mas Romance de Melusina ou a História dos Lusignan não deve ser interpretado tendo em vista apenas o aspecto surpreendente da história narrada. O interesse do duque de Berry em encomendar uma narrativa dessa natureza é de importância fundamental para que se compreenda o motivo pelo qual se elaborou uma narrativa sobre uma linhagem, cujos descendentes já haviam se extinguido na França. O objetivo desse trabalho é a análise do Romance de Melusina, sob o ponto de vista histórico, levando em conta a especificidade desse gênero narrativo e as estratégias textuais do autor na construção dessa história. Nela são marcantes as idéias de linhagem, pecado e penitência e a forma como são evocadas para ligar os Lusignan a sua ancestral mítica, Melusina. Algumas questões como a justiça, a guerra e as Cruzadas estão presentes nesse romance tendo relação com o contexto de sua elaboração. / In the year of 1392, João D\'Arras starts to write a romance at request of a powerful prince and known patron of the period: the duke of Berry. That work describes the foundation of a fortress and tells the adventures of a lineage that there originated itself: the Lusignan. However, that was not a story of ordinary people. The Lusignan were the descendant of the fairy Melusina that, every Saturday, turned into a serpent from her waist to below. The Romance of Melusina or the History of the Lusignan must not be interpreted only by having in mind the surprising aspect of the story narrated. The interest of the Duke of Berry in ordering a narrative of that nature is of fundamental importance so that can be understood the motivation behind the creation of a story about a lineage that had already been extinguished in France. The purpose of this work is the analysis of the Romance of Melusina under the historical perspective, taking in consideration the particularity of its narrative type and the author\'s textual strategies in the production of that story. In the romance are quite notable the ideas of lineage, sin, and penitence and the way they are evoked to connect the Lusignan to their mythical ancestor, Melusina. Some questions such as justice, war and the Crusades that are noticed in the Romance of Melusina have an important connection with the context of its creation.

Os índices de seleção foram inicialmente propostos para a seleção simultânea de diversos caracteres e, por requerem a obtenção de estimativas de variâncias e covariâncias, são mais apropriados para programas de seleção recorrente. Posteriormente, desenvolveram-se outros índices, que por não requererem o conhecimento de tais estimativas, podem ser aplicados tanto em programas de seleção recorrente, como para a seleção de genótipos já fixados, como clones, linhagens e híbridos. Recentemente, Garcia (1998) desenvolveu um índice específico para a seleção de genótipos fixados, que se baseia no cálculo da distância de cada genótipo a um ideótipo. As principais vantagens são que este índice permite a aplicação de testes de comparações de médias, bem como a identificação de genótipos com performances aquém daquela exigida para os cultivares comerciais para um dado caráter. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência do índice de Garcia (1998) para a seleção de linhagens de soja na fase de pré-cultivares. O material experimental consistiu de 88 linhagens (Geração F7), derivadas pelo método S.S.D. e oriundas do cruzamento entre os genitores BR-80-14853 x PI-123439, e três testemunhas comerciais: IAC-12, IAC-Foscarin-31 e IAS-5. Os experimentos foram conduzidos no delineamento em blocos casualizados em seis anos agrícolas, com diferentes números de repetições por ano: 3 (1995/6), 4 (1996/7), 6 (1998/9), 6 (1999/0), 10 (2000/1) e 10 (2001/2). Os caracteres avaliados foram: produção de grãos (PG: g/parcela) altura das plantas na maturação (AM: cm/planta), e acamamento (AC: notas de 1 a 5). No cálculo das distâncias utilizaram-se a Distância Euclidiana e a Distância de Mahalanobis. Os resultados obtidos mostraram que os índices baseados tanto na Distância Euclidiana quanto na de Mahalanobis foram eficientes para a discriminação dos genótipos, embora os melhores resultados tenham sido obtidos com a Distância de Mahalanobis. Devido a isso, sugere-se o uso da Distância de Mahalanobis para identificar e selecionar pré-cultivares de soja e também, como proposto por Garcia (1998), que esta seleção seja acompanhada da avaliação de caracteres individuais, para evitar que genótipos promissores sejam descartados por apresentarem pequenos defeitos em caracteres de importância secundária. / Selection indices were first proposed for the selection of several traits at the same time, and because of the requirement of variances and covariances estimates, they are useful for recurrent selection programs. Later on, other indices were proposed, which do not require the knowledge of these estimates, and thus are useful for both recurrent selection programs and for the selection of fixed genotypes, such as clones, inbred lines and hybrids. Recently, Garcia (1998) proposed a new index for the selection of fixed genotypes which is based on the distance of each genotype to and ideotype. The main advantages of this index is that multiple comparison tests can be done and also the identification of genotypes that perform below than those required by commercial cultivars for a given trait. The objective of this work was to evaluate the efficiency of Garcia (1998)´s index for the selection of pre-cultivars in soybeans. Experimental material comprised 88 lines (F7 generation) derived by the S.S.D. method from the cross between the BR-80-14853 and PI-123439 parents, and three cultivars as checks: IAC-12, IAC-Foscarin-31 and IAS-5. The evaluation trials were carried out in randomized block designs across six growing seasons, with different number of replications each: 3 (1995/6), 4 (1996/7), 6 (1998/9), 6 (1999/0), 10 (2000/1) and 10 (2001/2). The following traits were evaluated: grain yield (PG: g/plot), plant height at maturity (AM: cm/plant) and lodging (AC: scale: 1 to 5). For the calculation of the distance of each genotype to the ideotype, the Euclidean and Mahalanobis methods were used. General results have shown that the index based on both Euclidean and Mahalanobis distances were efficient to discriminate the genotypes, but the best results were reached by using Mahalanobis distance. Consequently, in order to identify and select fixed genotypes of soybeans we suggest the use of Mahalanobis distance, and as proposed by Garcia (1998), that the selection be based on the index and also on the evaluation of each trait, in order to avoid the discard of superior genotypes showing small problems in traits of minor importance.

Orientadores: Patrícia Maria Bergamo Favaro, Sara Teresinha Olalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T08:01:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_JoaoKleberNovais_M.pdf: 3579832 bytes, checksum: 2f21cc28ac6161522a1ab6a958a04389 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As neoplasias linfoides constituem um grupo heterogêneo de doenças originadas por alterações genéticas das células progenitoras hematopoéticas de origem linfoide, levando à proliferação clonal desordenada de células B ou T, e ao desenvolvimento de leucemias linfoides e linfomas. É notória a participação de diferentes vias de sinalização envolvidas tanto no desenvolvimento como na manutenção das neoplasias hematológicas. A ativação constitutiva da via de sinalização PI3K/AKT/mTOR é bem descrita na leucemia linfoide aguda de células T (LLA-T) e recentemente identificou-se, em modelos animais, que a atividade da PI3K coopera com o desenvolvimento do linfoma de Burkitt (LB). Deste modo, o papel da via PI3K/AKT/mTOR no crescimento e sobrevivência celular, duas características importantes da leucemogênese, transformou-a em um potencial alvo farmacológico. Seguindo essa perspectiva, o presente trabalho procurou avaliar o potencial terapêutico de NVP-BKM120, um pan-inibidor de PI3K de classe I, em linhagens celulares de LLA-T (Jurkat e MOLT-4) e LB (Daudi e NAMALWA). NVP-BKM120 foi capaz de diminuir a viabilidade celular e capacidade clonogênica dessas células. Foi observada uma parada na fase G2/M do ciclo celular, com subsequente diminuição de Ciclina B1 e aumento da apoptose pelas vias intrínseca e extrínseca, nas linhagens Jurkat, MOLT-4 e NAMALWA. Também foi observada diminuição da fosforilação da AKT e dos alvos downstream ao mTORC1, P70S6K e 4EBP1, e aumento da razão BAX:BCL2. Houve um aumento da produção de AVOs nas linhagens celulares após o tratamento com a droga, o que sugere ativação da autofagia. Portanto, este estudo demonstra a capacidade antitumoral de NVP-BKM120 contra linhagens celulares de LLA-T e LB. Nossos resultados sugerem que a diminuição da proliferação celular, após o tratamento com a droga, seja devido à redução da Ciclina B1 e que o aumento da razão BAX:BCL2 seja um dos mecanismos envolvidos na indução da apoptose / Abstract: The lymphoid neoplasms are a heterogeneous group of diseases caused by genetic alterations that were originated from hematopoietic progenitor cells of lymphoid origin, leading to uncontrolled clonal proliferation of B or T cells, and to the development of lymphoid leukemias and lymphomas. These findings emphasize the involvement of different signaling pathways involved in both the development and the maintenance of hematological malignancies. Constitutive activation of the PI3K /AKT/mTOR signaling pathway is well described for acute lymphoblastic leukemia T cells (T-ALL), recently been identified in animal models, that the activity of PI3K cooperates with the development of Burkitt's lymphoma (LB).Thus, the role of the PI3K / AKT / mTOR pathway in cell growth and survival, two important features of leukemogenesis, morphed into a potential drug target. Following this perspective, the present study aimed to evaluate the therapeutic potential of NVP-BKM120, a pan-PI3K inhibitor class I in cell lines of T-ALL (Jurkat and MOLT-4) and LB (Daudi and NAMALWA). NVP-BKM120 was able to decrease cell viability and clonogenic capacity of these cells. A blocked phase was observed in G2/M phase of the cell cycle with subsequent reduction of Cyclin B1 and increased apoptosis by the intrinsic and extrinsic pathways in the lines Jurkat and MOLT-4 NAMALWA. It was also observed, decreased phosphorylation of AKT and of the downstream targets mTORC1, p70S6K and 4EBP1, and an increase of BAX:BCL2 ratio. There was an increase in AVOs production in the cell lines after treatment with the drug, suggesting activation of autophagy. Therefore, this study demonstrates the antitumor ability of NVP-BKM120 against cell lines of T-ALL and LB. Our results suggest that the decrease in cell proliferation after treatment with the drug, is due to the reduction of Cyclin B1 and the increase of the BAX:BCL2 ratio is one of the mechanisms that are involved in the induction of apoptosis / Mestrado / Fisiopatologia Médica / Mestre em Ciências

Orientadores: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira, Juan Lucas Argueso Gomes de Almeida / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T04:49:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sampaio_NadiaMariaVieira_M.pdf: 5240623 bytes, checksum: 83a8fd832d725a15f52ace4fb49f9106 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Nos últimos anos, a busca por fontes renováveis de energia tem sido intensificada em todo o mundo e, atualmente, o processo fermentativo de produção de bioetanol destaca-se como uma alternativa energética economicamente viável e menos poluente do que os combustíveis fósseis. Diferentes etapas do processo de produção desse biocombustível vêm sendo aprimoradas e, recentemente, o melhoramento genético de linhagens da levedura Saccharomyces cerevisiae é apontado como um ponto chave para tornar a produção do bioetanol ainda mais rentável. No Brasil, a linhagem JAY270/PE-2 é amplamente utilizada pelo setor industrial devido a sua elevada produtividade e robustez, consideravelmente superiores em relação à linhagem padrão de laboratório S288c. Em busca da compreensão das características genéticas associadas ao fenótipo da linhagem JAY270/PE-2, nosso grupo de pesquisa realizou o sequenciamento de um isolado haploide dessa linhagem, denominado JAY291, o qual revelou um total de 21 genes preditos não identificados no genoma da linhagem S288c. As significativas diferenças fenotípicas observadas entre essas linhagens motivou a investigação do envolvimento destes genes nas características de interesse industrial da linhagem JAY270/PE-2. Para isso, foi realizada uma investigação funcional de 4 desses genes, por meio da avaliação fenotípica de linhagens knockout, testadas quanto às suas principais características de interesse industrial. A partir dos testes realizados, não foi possível correlacionar estes genes a uma função específica. Apesar disso, a anotação dessas sequências, a conservação desses genes em outras linhagens industriais e, adicionalmente, a observação de que alguns deles apresentam-se diferencialmente expressos ao longo de uma fermentação industrial forneceram fortes indícios de que os mesmos apresentam um papel importante para a fisiologia da linhagem em condições industriais. Dessa forma, os dados gerados por este trabalho deverão servir como base para futuros estudos focados na elucidação do papel desses genes, a qual é de fundamental importância, tanto para a geração de conhecimento básico acerca da biologia dessa espécie, como para a identificação de potenciais alvos para o melhoramento genético da linhagem JAY270/PE-2 / Abstract: In the past years, the search for renewable energy sources has increased worldwide and, recently, the bioethanol fermentation process rises as an economically viable and less pollutant alternative supply. Several steps of the production process have been enhanced and the genetic improvement of Saccharomyces cerevisiae strains plays a key role on that effort. In Brazil, the yeast strain JAY270/PE-2 is widely used in the industrial sector due to its high productivity and robustness, being remarkably superior to the reference laboratory strain S288c. In order to shed light to the genetic characteristics underlying these traits, our group sequenced the genome of the derivative haploid JAY291, which unveiled a total of 21 predicted genes absent in the S288c reference genome. The substantial differences observed between these strains motivated us to investigate the relationship between these predicted genes and the industrially relevant phenotype of JAY270/PE-2 strain. Thus, we accomplished the functional investigation of 4 putative genes through phenotypic evaluation of knockout strains. It was not possible to correlate those genes to a specific function. Although, considering their functional annotation, their conservation between industrial strains and also their differential expression during an industrial fermentation strengthens their potential to be related to these industrially valuable traits. Therefore, this study might work as a backbone for the future functional characterization of these genes. This knowledge is of cardinal importance for a comprehensive understanding of the biology of this specie and could possibly provide new targets for the genetic manipulation of the industrial strain JAY270/PE-2 / Mestrado / Genetica de Microorganismos / Mestra em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Luiz Augusto Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T01:25:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_CarlosHenriquedeCastro_M.pdf: 1323584 bytes, checksum: cb80ede9e4cd507f38be3a2f17428875 (MD5) Previous issue date: 1976 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed / Mestrado / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Novas alternativas são necessárias para controlar o mosquito transmissor da dengue, como a manipulação genética. Baseada na técnica do inseto estéril (SIT) que compreende a esterilização, a criação em massa e a liberação de grandes números de insetos machos estéreis em uma área alvo, a tecnologia RIDL, baseada em SIT, compreende criação em massa e liberação de mosquitos machos que carregam gene letal para sua prole, neste caso a linhagem OX513A de Aedes aegypti é testada nesse projeto, através da avaliação em testes laboratoriais e em testes de campo com marcação liberação e recaptura, comparando esta linhagem com linhagens selvagens. Foi mensurada a competitividade, longevidade e dispersão. Os testes foram realizados no bairro de Itaberaba (Juazeiro/BA) e na Universidade de São Paulo. Além da avaliação foi realizado o monitoramento com armadilhas ovitrampa, captura de mosquitos adultos com aspirações em residências. E o desenvolvimento de um plano de comunicação para a sociedade. Os resultados apontam que a compatibilidade entre as linhagens (transgênica e selvagem) foi positiva e a competitividade não apresentou tendência entre as fêmeas de escolherem uma linhagem ou outra. Estatisticamente não há diferença entre o número de ovos e larvas (logo a fertilidade) entre a linhagem selvagem e transgênica. O monitoramento da área de estudo confirmou a presença de A. aegypti, e não foi capturado nenhum indivíduo de Aedes albopictus. Para avaliar a dispersão, os mosquitos machos transgênicos foram liberados no ambiente e esses apresentaram uma sobrevivência no campo de 2,3 dias e um raio de vôo de 80 metros do ponto de liberação. O índice de esterilidade relativa foi determinado baseado na competitividade e proporção de ovos fluorescentes encontrados. Foi possível estabelecer uma produção em massa para realizar a fase de pré-supressão com a liberação de 540.000 machos ao longo de seis semanas e obtenção de 17% de larvas transgênicas oriundas do cruzamento desses machos com fêmeas do campo. Baseado nesses dados iniciou-se a fase de supressão com a liberação alvo de 400.000 por semana, aproximadamente 05 vezes mais esperando alcançar o estágio de supressão. / New alternatives are needed to control mosquitoes that transmit Dengue. Based on insect technique Sterile (SIT), which comprises sterilizing, mass rearing and release a large number of sterile males in an area target, RIDL technology based on SIT, but using transgenesis instead of radiation. Doing the same process for mass rearing and release of male mosquitoes carrying lethal gene to their offspring, in this case the strain OX513A of Aedes aegypti is under test in this project, through the evaluation of laboratory and field trials with mark-release-recapture (MRR), comparing transgenic with wild-type. We measured competitiveness, longevity and dispersal. The tests were performed in Itaberaba neighborhood (Juazeiro / BA) and at University of São Paulo. The evaluation was carried out with monitoring through ovitraps and adult mosquitoes collection with aspiration in houses. It was also developed a communication plan to society/community in general. The results indicate that the compatibility between the lines (transgenic and wild-type) was positive, and competitiveness showed no trend among females to choose one lineage or another. Statistically there were no difference between the number of eggs and larvae (resulting fertility) between the transgenic line and wild-type. The study area monitoring confirmed the presence of Ae. aegypti, and no Aedes albopictus was captured. To evaluate dispersion, transgenic males were released into the environment and they showed a field survival of 2.3 days and a flight range of 80 meters from the release point. The relative sterility index was determined based on the competitiveness and fluorescent proportion of eggs. Mass production was established to perform the pre-suppression phase releasing 540,000 males over six weeks and obtaining 17% of transgenic larvae in response of transgenic males mating field females. Based on these data suppression process have started with a release target of 400,000 per week, this is about 05 times more to reach the suppression stage briefly.

Muitos estudos de câncer têm sido desenvolvidos, mas os mecanismos moleculares da tumorigênese e a resposta imune contra tumores não foi completamente elucidada. RMAS é uma linhagem celular mutante derivada de RMA. Ao contrário da última, RMAS é deficiente de MHC I e, portanto, é avlvo de células NK. O objetivo deste trabalho foi o uso deste par de células para estabelecer modelos murinos que possam ser usados para entender a resposta imune entre células CD8 e NK contra tumor e investigar o efeito da expressão de moléculas antiapoptóticas no comportamento tumoral in vivo. Essa abordagem pode prover informações relevantes para o desenvolvimento de novas terapias. Para desenvolver células EGFP, foi usado um vetor retroviral bicistrônico contendo o gene Egfp. Para desenvolver os modelos experimentais, camundongos C57BL6 WT foram injetados iv com diferentes números de células e curvas de sobrevivência foram geradas. Os padrões de doença e infiltração tumoral foram observadas por análises macroscópica, microscópica e por detecção de EGFP em tecidos. In vivo, células RMA. induziram paralisia enquanto RMA-S.Egfp, ascite. RMA.Egfp infiltrou a medula óssea enquanto RMA-S.Egfp, tecidos diferentes como fígado, rins e peritôneo, mas não a medula óssea. Os sinais clínicos apareceram após 15 dias da inoculação de >104 células e a morte, em 30 dias. Números <103 células não induziram doença nem morte, mas protegeram de ambas quando re-inoculadas 106 células RMA.Egfp. Camundongos CD4KO e CD8KO paralisaram e morreram antes do que os WT. Células RMA.BclW.Egfp foram mais resistentes a apoptose do que células RMA.Egfp in vitro e provocaram características clínicas piores: paralisia e morte anteriores, inchaço de membros e hemorragia de fígado e rins. / Many cancer studies have been developed, however the molecular mechanisms of tumorigenesis and immune responses to tumor is not completely elucidated. RMAS cells are a mutant lymphoma line derived from RMA cells. In contrast to the latter, RMAS are deficient in MHCI and, therefore, are targets for NK cells. Our aims were use these pair of cells to establish mouse models that can be used to understand CD8T vs NK cell immune responses to tumors and investigate the effect of expression of antiapoptotic molecules in tumor behavior in vivo. The combination of these approaches should provide relevant information for the development of novel immunotherapy. To develop EGFP cells we used a bicistronic retroviral vector containing Egfp gene. To develop the experimental models, WT C57BL/6 mice were iv injected with different cell numbers and survival curves were produced. In addition, clinical features and tumor spread was observed by macroscopy, microscopy and EGFP detection of tumor cell analysis in tissues. When injected in vivo, RMA.Egfp cells induced progressive paralysis while RMA-S.Egfp promoted ascites. RMA.Egfp cells infiltrated the bone marrow, while RMA-S.Egfp were found in different tissues such as liver, kidney and the peritoneum cavity, but were not found in bone marrow. The symptoms appeared 15 days post injection of >104 cells and the death was 30 days. Numbers of <103 cells do not induced pathology or death, but protected to paralysis and death when re-injected 106 RMA.Egfp cells. CD4KO and CD8KO mice showed paralysis and death earlier than WT mice. RMA.BclW.Egfp cells were more resistant to apoptosis than RMA.Egfp in vitro and induced worse clinical features in vivo: earlier paralysis and death, swelling of members, haemorragia of liver and kidneys.

A maioria das proteínas organelares são codificadas pelo núcleo, sintetizadas no citosol e direcionadas especificamente ao seu destino final. O direcionamento aos diferentes subcompartimentos subcelulares é feito por uma complexa e ampla maquinaria que envolve sequências de direcionamento, proteínas citossólicas e receptores organelares específicos. Entretanto, relativamente pouco se conhece sobre o processo na qual uma proteína recém sintetizada é transportada ao seu destino final. Parte significativa das proteínas destinadas às organelas possui a informação necessária ao seu transporte localizada na extremidade N-terminal. Vários estudos têm buscado caracterizar as etapas que envolvem a localização de uma proteína, desde os estágios iniciais após a sua síntese até os fatores que regulam o seu correto endereçamento. Modificações pós-traducionais, regiões 5-UTR, região C-terminal, transporte por vias alternativas e interações proteína-proteína podem agir na localização subcelular de proteínas. O estudo de redes biomoleculares se tornou um dos focos de estudo da biologia de sistemas e demonstra um enorme potencial na descoberta de diversos processos biológicos, como as interações proteína-proteína. As proteínas que possuem duplo direcionamento (DD) em Arabidopsis thaliana foram analisadas em redes de interação proteína-proteína (PPI) e proteínas que interagem com proteínas de DD foram escolhidas quanto a função e localização para a verificação de um eventual papel dessas proteínas na localização subcelular de outras proteínas. Para tanto, foram realizadas varreduras em ensaios de duplo-híbrido em levedura para os genes de GRF9 (14-3-3) e ATH7 (tiorredoxina tipo h). Os resultados para GRF9 incluem as proteínas peroxidase PRXR1 e dihidrolipoamida acetiltransferase. Já os resultados para ATH7 mostram a interação com glutamina sintetase (AT5G35630.3). A combinação dos estudos in silico com a varredura via duplo-híbrido de levedura abrem novas perspectivas no entendimento do controle da localização subcelular de proteínas. / Most organellar proteins are nuclear encoded, synthesized in the cytosol and then targeted to their destination. Specific subcellular targeting is conducted by a complex machinery for the specific localization of the proteins, which includes targeting sequences, cytosolic proteins and specific organelar receptors. However, little is known about the process that happens from the synthesis of a protein and the transport to its final destination. Most organellar proteins contain the information for their localization in the N-terminal sequence. Many studies have searched to characterize the steps involved in protein targeting, from the early stages after its synthesis to the cytosolic factors regulating its correct localization. Post-translational modifications, 5-UTR regions, the C-terminal extension on the protein, alternative transport pathways and proteinprotein interactions may influence the subcellular location of some proteins. The use of biomolecular netwoks has become one of the main focus of systems biology studies and possess a major potential in the discovery of several biological processes, such as protein-protein interactions (PPI). Dual-targeted (DT) proteins in Arabidopsis thaliana were analyzed through a PPI network, and the proteins displaying interactions with DT proteins were selected by their funtion and location. The selected proteins were analyzed for their eventual role in the subcellular targeting of other proteins. Screenings in yeast two-hibrid assays were performed for the genes GRF9 (14-3-3) and ATH7 (h-type thioredoxin). The results for GRF9 include a peroxidase (PRXR1) and dihydrolipamide acetyltransferase. The results for ATH7 include glutamine synthetase (AT5G35630.3). Combination of in silico analysis with yeast two-hibrid screenings provide new perspectives for understanding the control of subcellular localization.