Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6488_1.pdf: 6491873 bytes, checksum: f983e4fc2acdbf9cad9fa03b2ab0c798 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / O estudo dos processos que ocorrem nas células é vital para o entendimento de fenômenos biológicos em organismos inteiros. Tais informações requerem muitas vezes o uso de ferramentas que preservem tanto a morfologia quanto a viabilidade celular. Esse é o caso de técnicas baseadas em fluorescência, capazes de estudar um evento de forma específica e com elevada sensibilidade. Sua análise é baseada no uso das sondas fluorescentes, geralmente pequenas moléculas orgânicas. Entretanto, praticamente todas as sondas convencionais apresentam limitações. O desenvolvimento de nanocristais fluorescentes de semicondutores, mais conhecidos como Quantum Dots (QDs) surge como uma possibilidade de superar os problemas associados aos corantes convencionais. Por serem sondas relativamente novas em Biologia, algumas questões sobre eles ainda precisam ser abordadas. No presente trabalho, nós mostramos que QDs (CdTe/CdS-AMP sintetizados em água) são capazes de se ligar não especificamente à superfície de células sanguíneas periféricas mononucleares ou em estruturas intracelulares após permeabilização de membrana. Esses estudos foram feitos por combinação de técnicas ópticas e mostraram que QDs são potenciais ferramentas para estudo de células sanguíneas por citometria de fluxo. Através de medidas realizadas com pinças ópticas verificamos que a incubação com QDs diminui o potencial zeta, indicando que os mesmos podem causar alterações nesses sistemas biológicos. Além disso, desenvolvemos uma metodologia eficiente de encapsulação de QDs em lipossomas de diferentes composições por ciclos de congelamento e descongelamento e a utilizamos para entregar QDs ao interior de células vivas. Foi possível visualizar a fluorescência das nanopartículas dentro das vesículas para os sistemas QDs-lipossomas estudados. Ademais, o encapsulamento em lipossomas com propriedades fusogênicas (utilizando uma combinação de lipídeos catiônicos e lipídeos fluorescentes) permitiu a entrada das nanopartículas em células-tronco humanas. Pela análise das células por microscopia confocal, foi possível notar que a fluorescência dos QDs co-localizava com a fluorescência das membranas lipossomais. Esses resultados são inovadores; tanto porque podem ser extendidos para a encapsulação de outros tipos de nanopartícula em lipossomas de diferentes composições por um método ainda não descrito, como pela possibilidade de entregar essas nanopartículas diretamente no interior de células vivas

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6456_1.pdf: 1328130 bytes, checksum: c35527d933f665ea518f8ad49ba91fcb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / O ácido úsnico (AU) [2,6-diacetil-7,9-dihidroxi-8,9b-dimetil-1,3-(2H,9H)-dibenzofurano] é um composto derivado do metabolismo secundário de liquens e conhecido pela sua atividade antimicrobiana contra bactérias gram-positivas e micobactérias. A tuberculose pulmonar é caracterizada pelo envolvimento de macrófagos contendo no seu interior elevada quantidade de Mycobacterium tuberculosis. Os lipossomas têm sido usados como carreadores coloidais de fármacos direcionados às células. Há uma necessidade urgente de novos compostos para o tratamento de infecções causadas por micobactérias, uma vez que, nenhum novo antibiótico tem sido desenvolvido desde a década de 70. O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do AU encapsulado em liposomas contra o M. tuberculosis e investigar sua interação com macrófagos. Os lipossomas foram preparados usando a técnica de hidratação do filme lipídico com subseqüente sonicação. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) contra o M. tuberculosis H37Rv foram determinadas segundo o ensaio de microdiluição utilizando Alamar blue. A citotoxicidade do AU foi avaliada para macrófagos J774 e a viabilidade celular foi detectada pelo ensaio padrão de MTT. O estudo de interação celular foi realizado com macrófagos J774 usando a espectroscopia de fluorescência. Os valores de CIM e CBM para o AU livre foram 6,5 e 32 &#956;g/ml, respectivamente. Por outro lado, AU lipossomal exibiu uma CIM de 5,85 &#956;g/ml e CBM de 16 &#956;g/ml. A concentração requerida para inibir 50% da proliferação celular (CI50) foram 22,5 e 12,5 &#956;g/ml para o AU livre e encapsulado, respectivamente. Um incremento do conteúdo intracelular de lipossomas contendo AU foi verificado pela maior emissão de fluorescência detectada (21,57 x 104 c.p.s) em comparação a do AU livre (9,54 x 104 c.p.s). Além disso, a formulação lipossomal proveu uma quantidade intracelular de AU praticamente invariável durante longo período de tempo (30 h, p < 0,05). Estes resultados indicaram uma forte interação entre lipossomas e macrófagos J774, facilitando a penetração do AU nessas células de defesa, como também, considerável aumento de sua atividade contra o M. tuberculosis

Orientadores: Maria Cristina Volpato, Eneida de Paula, Francisco Carlos Groppo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:59:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zago_PatriciaMariaWiziack1982-_M.pdf: 1548841 bytes, checksum: 532fa0a5d09fdd83740f529142e2e993 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Estudos em animais têm demonstrado que a encapsulação lipossomal da prilocaína aumenta sua eficácia anestésica em tecidos moles. Este estudo randomizado, cruzado e cego teve por objetivo avaliar a eficácia anestésica da formulação lipossomal de prilocaína 3% comparada à prilocaína 3% sem aditivos e prilocaina 3% com felipressina 0,03UI/mL, aplicadas por técnica infiltrativa na região vestibular do canino superior direito em 32 voluntários. As formulações foram aplicadas em 3 sessões, com ordem aleatória de aplicação e intervalo mínimo de 1 semana. O sucesso, a latência e a duração da anestesia pulpar foram avaliados com aplicação de estímulo elétrico no incisivo lateral, canino e primeiro pré-molar superiores; a latência e duração da anestesia em tecidos moles foram avaliadas por pressão com instrumento rombo na gengiva inserida da região vestibular do canino superior direito e a dor à injeção por meio da escala analógica visual (EAV). Considerou-se como sucesso anestésico quando a latência foi menor ou igual a 10 minutos com duração mínima de 10 minutos. Os voluntários e o pesquisador que avaliou as anestesias não tinham conhecimento da formulação aplicada. Os resultados foram submetidos aos testes Kruskal-Wallis (latência e duração da anestesia pulpar), Tuckey (EAV), Friedman (duração da anestesia gengival), Log Rank e McNemar (sucesso). A formulação lipossomal apresentou resultados semelhantes à formulação sem aditivos (p>0,05) e estatisticamente inferiores à prilocaína com felipressina (p<0,05), com relação à duração de anestesia gengival e sucesso e duração de anestesia pulpar para o canino e pré-molar. Com relação a latência e sucesso da anestesia no incisivo lateral, a prilocaína lipossomal não diferiu das demais formulações (p>0,05) e a prilocaina sem aditivos apresentou menor sucesso e maior latência (p<0,05) que a prilocaína com felipressina. As formulações não diferiram quanto à duração de anestesia pulpar para o incisivo lateral, dor à injeção e latência anestésica para canino, pré-molar e gengiva (p>0,05). Conclui-se que a prilocaína lipossomal apresenta eficácia anestésica semelhante à solução sem aditivos e menor eficácia do que a solução de prilocaína com felipressina em infiltração na maxila, não havendo, portanto, vantagem no seu uso / Abstract: Animal studies have shown that liposome encapsulation increases prilocaine anesthetic efficacy in soft tissues. This randomized, blind, crossover, three period study evaluated the anesthetic efficacy of liposome-encapsulated 3% prilocaine compared to 3% plain prilocaine and 3% prilocaine with 0.03IU/mL felypressin, after 1.8mL infiltration in the buccal sulcus of the maxillary right canine, in 32 volunteers. The formulations were randomly applied in three sessions, spaced one week apart. Anesthesia success and onset and duration of pulpal anesthesia in the lateral incisor, canine and first premolar were evaluated by using an electric pulp tester; onset and duration of soft tissue anesthesia were evaluated by pinprick test in the buccal attached gingiva of maxillary right canine. Injection pain was analyzed through Visual Analogue Scale (VAS). Anesthesia was considered successful when the onset time was less than 10 minutes and the duration was at least 10 minutes. The volunteers and the researcher who evaluated anesthesia parameters were blind to the formulations injected. Results were submitted to Kruskal-Wallis (onset and duration of pulpal anesthesia), Tuckey (VAS), Friedman (duration of gingival anesthesia), Log-Rank and McNemar tests (anesthesia success), (?=5%). Liposomal prilocaine showed similar results in comparison to plain prilocaine (p>0.05), and lower anesthesia success and duration for canine and premolar and for duration of gingival anesthesia (p<0.05) than prilocaine with felypressin. Liposomal prilocaine did not differ from the other formulations concerning onset and anesthesia success for the lateral incisor (p>0.05); plain prilocaine presented lower success rate and slower onset of anesthesia for this tooth in comparison to prilocaine with felypressin (p<0.05). No differences were observed among the formulations in relation to duration of anesthesia for lateral incisor, VAS scores and onset of gingival and pulpal anesthesia for canine and premolar (p>0.05). In conclusion, liposomal prilocaine presents similar anesthetic efficacy in relation to plain prilocaine and lower efficacy in comparison to prilocaine with felypressin in maxillary infiltration. Therefore, there is no advantage in the use of this formulation / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-23T12:48:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Quinalia_MarianaBeatriz_M.pdf: 3702329 bytes, checksum: 7ed3bbb46f028abad9a9d677dbda482d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Processos de alto cisalhamento têm sido utilizados para redução e homogeneização da distribuição de tamanhos de lipossomas em sua produção escalonável. No entanto, a aplicação do cisalhamento pode modificar estruturalmente essas nanopartículas, influenciando a incorporação de fármacos hidrofóbicos. Neste estudo, a chalcona sintética 3-nitro-2-hidroxi- 4,6-dimetoxichalcona (CH8), fármaco altamente hidrofóbico indicado para tratamento de leishmaniose cutânea, foi incorporada em lipossomas convencionais produzidos por processos escalonáveis de alto cisalhamento. Os lipossomas foram compostos por fosfatidilcolina de ovo e produzidos por injeção de etanol. Foram utilizados agitador mecânico com impelidor Cowles, Ultra Turrax® e microfluidizador para reduzir e homogeneizar o tamanho das partículas. A influência da taxa de cisalhamento foi controlada pelo método de Bangham seguido por extrusão em membranas. Espectros de espalhamento de raios-X a baixo ângulo mostraram que o cisalhamento leva a uma redução na distância interlamelar dos lipossomas, quando comparados ao controle. A distância interlamelar não variou com a intensidade do cisalhamento na faixa de agitação obtida com o impelidor Cowles, mas diminuiu com o aumento do cisalhamento provocado pelo Ultra Turrax®. A constante elástica, relacionada com a rigidez da bicamada e dependente da estrutura dos lipossomas, aumentou proporcionalmente com a taxa de cisalhamento para os dois agitadores. O cisalhamento também diminuiu o diâmetro médio dos lipossomas e a distribuição de tamanhos. Inicialmente, CH8 foi incorporada em lipossomas pré-formados. Os resultados mostraram que a expulsão e precipitação do fármaco incorporado foram proporcionais à intensidade do cisalhamento aplicado. Essa limitação foi contornada pela incorporação de uma baixa concentração de CH8 durante a formação dos lipossomas. A taxa de cisalhamento produzida pelo impelidor Cowles favoreceu a elasticidade da bicamada lipossomal, proporcionando alta eficiência de incorporação e capacidade de carregamento da CH8. Assim, a elasticidade da bicamada é fator determinante para a capacidade de incorporação de fármacos hidrofóbicos em lipossomas. Estas descobertas constituem uma melhoria nos processos de alto cisalhamento utilizados para carreamento de CH8 e contribuem para o desenvolvimento de formas farmacêuticas mais eficazes para o tratamento de leishmaniose cutânea / Abstract: High shear processes have been used to reduce the size and homogenize the size distribution of liposomes in their scalable production. However, high shear rates modify the liposome structure which may affect the loading of hydrophobic drugs. In this study, synthetic chalcone 3-nitro-2-hydroxy-4,6-dimethoxychalcone (CH8), a highly hydrophobic drug indicated to treat cutaneous leishmaniasis, was incorporated in conventional liposomes produced by scalable high shear processes. Liposomes were composed by egg phosphatidylcholine and produced by ethanol injection. Cowles impeller, Ultra Turrax® stirrers and microchannel microfluidizer were used to reduce and homogenize the size of the liposomes. The shear rate was controlled by Bangham's method followed by membrane extrusion. Small angle X-ray scattering spectra showed that the shearing reduced the interlamellar distance of the liposomes compared to the control. The interlamellar distance did not change with the shearing intensity in the range of Cowles stirring, but it decreased for higher shearing provided by the Ultra Turrax®. The elastic constant, which is related to the stiffness and depends on the structure of the liposomes, increased with increasing shearing intensity for both stirrers. The shearing also reduced the mean diameter of the liposomes and the size distributions. Initially, CH8 was incorporated into pre-formed liposomes. The results showed the expulsion and precipitation of loaded CH8 was proportional to the intensity of the applied shear rate. This limitation was circumvented by incorporating a low concentration of CH8 (0.2 mol/m³) during the formation of liposomes. The shear rate provided by the Cowles stirrer favored the elasticity of the bilayer and yielded high incorporation efficiency and CH8-loading. Therefore, the elasticity of the bilayer is a determining factor for the loading of hydrophobic drugs in liposomes. These findings constitute an improvement in the high shear process used to load CH8 and to the development of most effective pharmaceutical forms for the treatment of cutaneous leishmaniasis / Mestrado / Engenharia Química / Mestra em Engenharia Química

Orientador: Maria Cristina Volpato, Francisco Carlos Groppo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T01:41:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_CamilaBatistada_M.pdf: 1077516 bytes, checksum: e1dc439935f8cbbd32841c7929a7872f (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Este estudo avaliou a eficácia anestésica das seguintes formulações: articaína 4% encapsulada em lipossomas multilamelares - Arti-MLV, articaína 4% encapsulada em lipossomas unilamelares - Arti-LUV e solução comercial de articaína 4% com epinefrina 1:100.000 - Arti-Epi, em três modelos animais (bloqueio do nervo infraorbital - BNIO, infiltração subcutânea em ferida cirúrgica - ISFC e bloqueio do nervo alveolar inferior - BNAI). Para o BNIO, 24 ratos (8 animais/grupo) receberam 0,1 mL da preparação próximo ao forame infraorbital. Foi avaliada a duração da anestesia em tecido mole por pinçamento do lábio superior, a cada 5 minutos. Para a ISFC, 36 ratos (6 animais/grupo) receberam 0,1 mL das formulações anestésicas 24h após a realização de uma ferida cirúrgica (incisão e sutura) na superfície plantar da pata traseira direita. A anestesia foi avaliada pela aplicação de força ao lado da ferida com o analgesímetro eletrônico de von Frey. Para o BNAI, 45 ratos (15 animais/grupo) receberam 0,2 mL das formulações próximo ao forame mandibular e os parâmetros latência, duração e sucesso da anestesia pulpar foram avaliados por estímulo elétrico. Nos três modelos estudados foram utilizadas, como controle negativo, as formulações: solução de NaCl 0,9%, suspensão lipossomal multilamelar e suspensão lipossomal unilamelar. Os resultados foram submetidos a ANOVA e avaliados pelos testes de Kruskal-Wallis, Student-Newman-Keuls, Log-Rank e Exato de Fisher, com nível de significância de 5%. No BNIO, a Arti-Epi não diferiu da Arti-MLV (p>0,05) na duração e no sucesso da anestesia, porém foi melhor que a Arti-LUV (p<0,05) na duração da anestesia. Arti-LUV proporcionou menor (p<0,05) sucesso que as demais formulações. No modelo de ISFC, a duração e sucesso da Arti-Epi foram superiores (p<0,05) aos das demais formulações. No BNAI, não houve diferença estatística entre as formulações testadas (p>0,05) com relação a latência, sucesso e duração da anestesia. Conclui-se que, as formulações lipossomais de articaína apresentaram eficácia anestésica equivalente à da solução contendo epinefrina, podendo ser opção de uso para anestesia pulpar (BNAI) e em tecido mole não inflamado (BNIO, apenas com a formulação lipossomal multilamelar). Entretanto, a solução contendo epinefrina foi mais potente em aumentar a duração e taxa de sucesso da anestesia em tecidos com hipernocicepção / Abstract: This study assessed the anesthesic efficacy of the following formulations: 4% articaine encapsulated in multilamellar liposomes (Arti-MLV), 4% articaine encapsulated in unilamellar liposomes (Arti-LUV) and 4% articaine with 1:100,000 epinephrine (Arti-Epi), in three animal models: infraorbital nerve block (IONB), subcutaneous infiltration in surgical wound (SISW) and inferior alveolar nerve block (IANB). For IONB, 24 rats (8/group) received 0.1 mL of the anesthetic formulations near the right infraorbital foramen. The duration of anesthesia was assessed by upper lip pinching every 5 minutes. For SISW, 36 animals (6/group) received 0.1 mL of the anesthesic formulations 24 hours after a surgical wound (incision and suture) was performed in the plantar region of the right hind paw. Paw anesthesia was assessed by force application at the side of the wound with electronic von Frey anesthesiometer. For IANB, 45 rats (15/group) received 0.2 mL of the anesthetic formulations near the right mandibular foramen. The success, onset and duration of pulpal anesthesia were assessed by electric stimulus. 0.9% NaCl solution, multilamellar liposomal suspension and unilamellar liposomal suspension were used as negative controls in the three models studied. Data were submitted to ANOVA, Kruskal-Wallis, Student-Newman-Keuls, Log-Rank, and Fisher's exact tests (5% significance level). For IONB no differences in duration and anesthesic success (p>0.05) were observed between Arti-Epi and Arti-MLV; Arti-Epi presented higher anesthesia duration than Arti-LUV (p<0.05). Arti-LUV provided lower (p<0.05) anesthesia success than other formulations. For SISW, Arti-Epi provided higher success and longer anesthesia duration than the other formulations (p<0.05). For BNAI no differences among the formulations were observed in relation to onset, success and anesthesia duration (p>0.05). In conclusion, the articaine liposomal formulations presented anesthetic efficacy equivalent to that showed by the solution with epinephrine and could be an option for pulpal (IANB) and soft tissue anesthesia in non-inflamed tissues (IONB - only the multilamellar liposome formulation). However, the solution with epinephrine was more potent to improve anesthetic success and duration in tissues with hipernociception / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

Orientadores: Lucimara Gaziola de La Torre, Adriano Rodrigues Azzoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-20T20:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Balbino_TiagoAlbertini_M.pdf: 2581790 bytes, checksum: 674a2d22b439ef811cbfb642774f6d4d (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Esta pesquisa teve como objetivo o desenvolvimento tecnológico de processo microfluídico para a obtenção de vetores não virais, baseados na complexação eletrostática entre lipossomas catiônicos (LC) e DNA plasmideal (pDNA) destinados à terapia e vacinação gênica. O desenvolvimento desse processo foi comparado ao processo convencional "bulk", que, a partir da simples mistura manual entre as soluções ou em sistema de vórtice, gera dificuldade no controle do tamanho destas estruturas e pode produzir variações nos resultados biológicos e na estabilidade coloidal. Já o processo microfluídico, que utiliza dispositivos que processam pequenas quantidades de fluidos (10-9 a 10-18 litros), permite a complexação eletrostática em regime contínuo, com o controle das condições difusionais, o que também permite melhor controle do tamanho destes complexos. Metodologicamente, o trabalho foi dividido em três principais etapas: na primeira parte, foi realizado o estudo físico-químico, estrutural e biológico dos complexos pDNA/LC obtidos por processo "bulk". Nessa etapa, verificou-se a correlação das propriedades físico-químicas e estruturais dos complexos com o processo de transfecção in vitro em células HeLa. A segunda parte do trabalho visou à otimização da produção de lipossomas catiônicos em dois dispositivos microfluídicos, com uma única e com dupla focalização hidrodinâmica, de modo a se obter lipossomas similares aos estudados na primeira parte do trabalho. Na utilização do segundo dispositivo, foi possível operar em vazões volumétricas mais altas quando comparadas ao primeiro. Por fim, na terceira parte, foi realizado o estudo da complexação entre LC e pDNA por processo microfluídico também em dois diferentes dispositivos, um similar ao utilizado na segunda parte do trabalho, com focalização hidrodinâmica única, e outro com blocos regulares nas paredes do microcanal, o que aumenta a área de contato entre os fluidos. Os complexos formados no primeiro dispositivo apresentaram melhores respostas biológicas in vitro, as quais foram similares às do processo "bulk". No segundo dispositivo, ensaios de acessibilidade de sonda de fluorescencência ao DNA indicaram alteração na associação entre LC e DNA. Dessa forma, a partir dos resultados, conclui-se que os dispositivos microfluídicos estudados são uma alternativa promissora para a formação de LC e também sua complexão com pDNA em modo contínuo, tanto pela potencialidade tecnológica quanto biológica, o que contribui para o desenvolvimento de produtos farmacêuticos que veiculam DNA e que são destinados à terapia e vacinação gênica / Abstract: This research aimed at the technological development of microfluidic process for nonviral carriers production based on the electrostatic complexation between cationic liposomes (CL) and plasmidal DNA (pDNA) for gene and vaccine therapy applications. The development of this process was compared to the conventional bulk process, in which the solutions are mixed followed by the simple hand shaking or brief vortexing, what generates difficulties on the particles sizes control and can affect the biological functionality and colloidal stability of the formulations. In contrast, microfluidic process, which uses devices that manipulate small amounts of fluids (10-9 to 10-18 liters), allows the electrostatic complexation in continuous mode, controlling diffusion conditions, which also allows the colloidal control of the obtained formulations. Furthermore, microfluidic devices have minimum dimensions and operate with low energy consumption. Methodologically, the present work was carried out in three mean steps: in the first step, the physicochemical, structural and biological characteristics of the pDNA/CL complexes obtained by the bulk process were studied. In this step, it was possible to verify the correlation of physicochemical and structural properties with the transfection phenomenon in vitro of HeLa cells. The second part of this work focused the optimization of the production of CL through two microfluidic devices, with single and double hydrodynamic focusing, to obtain similar CL to those of the first step of this work. By employing the second device, it was possible to operate at higher volumetric flow rates than the first one. Finally, in the third step, it was explored the complexation between CL and pDNA via microfluidic process also in two different microfluidic devices; the first was similar to that employed in the second part of this work, with a single hydrodynamic focusing, and a second one with patterned microchannel walls, which increase the surface contact area between the fluids. The complexes formed in the first device showed better biological results in vitro, which were similar to the complexes formed in the bulk complexation method. In the patterned device, the experiments of the DNA accessibility to fluorescent probe pointed out modifications between the pDNA and CL association in the complexes. In conclusion, we showed that the studied microfluidic devices are a promising alternative for the production of CL and the complexation with pDNA in continuous mode, because of the technological and biological potentialities, which contributes to the development of feasible processes, for the production of new pharmaceutical products for gene and vaccine therapies / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:14:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Isolado da Cladonia verticillaris, o ácido fumarprotocetrárico (AF) apresenta diversas propriedades biológicas. O seu uso terapêutico ainda é limitado devido a sua baixa hidrofilicidade. As ciclodextrinas são oligossacarídeos cíclicos que podem formar complexos de inclusão com compostos lipofílicos, aumentando a hidrossolubilidade. Os lipossomas vêm se destacando nas pesquisas por incorporar uma variedade de compostos com características fisco-química desfavoráveis. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar complexos de inclusão ácido fumarprotocetrárico:2-hidroxipropil-&#946;-ciclodextrina e incorporar em lipossomas. Os parâmetros de validação foram estudados segundo as exigências da Conferência Internacional de Padronização de Uso Humano (ICH). Os xiv complexos de inclusão foram preparados por liofilização e caracterizados físicoquimicamente. Os lipossomas contendo o AF ou complexo de inclusão AF:HP&#946;CD foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico, submetidos a ensaios de estabilidade e consequentemente a avaliação do perfil cinético de liberação in vitro. A linearidade foi determinada através da equação da reta Absorvância = 0,1119x[AF]+ 0,0071(r2=0,999). A exatidão foi atestada na recuperação do AF no complexo de inclusão. Os coeficientes de variação nos ensaios de precisão intermediária e robustez apresentaram valores inferiores a 5%, caracterizando o método como preciso e robusto. Os limites de detecção e quantificação do AF foram de 0,24 e 0,74 mg.mL-1, respectivamente. O método também demonstrou ser reprodutível, simples e específico. O diagrama de solubilidade de fases de AF:HP&#946;CD apresentou uma curva do tipo AL, com K1:1 = 58 M-1. Na presença de 300 mM de HP&#946;CD, a solubilidade do AF aumentou 19 vezes. O complexo de inclusão AF:HP&#946;CD apresentou modificações no IV, RMN 1H, difração de raios-X, microscopia e DSC, sugerindo a formação do complexo de inclusão. Após o processo de preparação, as formulações lipo-AF e lipo-AF:HP&#946;CD demonstraram-se homogêneas com efeito tyndall. O diâmetro médio e o índice de polidispersão das vesículas foram 85,8 ± 4,5 nm e 0,41 ± 0,14 para lipo-AF e; 86,5 ± 1,41 nm e 0,24 ± 0,05, para lipo-AF:HP&#946;CD. As formulações lipo- AF:HP&#946;CD mantiveram-se estáveis após 60 dias quando as suspensões são armazenadas a 4ºC. Avaliando o perfil cinético de liberação in vitro do AF a partir dos complexos AF:HP&#946;CD e lipo-AF:HP&#946;CD observou-se uma liberação lenta e controlada entre 4 h e 12 h, respectivamente. Estes resultados demonstram que a complexação do AF a ciclodextrina, e sua incorporação em lipossomas, proporcionou uma melhoria na estabilidade e hidrossolubilidade do composto, viabilizando, portanto, seu uso terapêutico

Submitted by Nayara Passos (nayara.passos@ufpe.br) on 2015-03-05T12:13:54Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO JANICE Oliveira.pdf: 1136330 bytes, checksum: a8f4e5393ba47301910ecc5f7919fcdd (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:13:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO JANICE Oliveira.pdf: 1136330 bytes, checksum: a8f4e5393ba47301910ecc5f7919fcdd (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES / O aumento na incidência de neoplasias malignas no mundo tem estimulado pesquisas que visam desenvolver novos fármacos e alternativas terapêuticas que possibilitem debelar o problema. Neste sentido a tecnologia de liberação controlada de fármacos apresenta-se como ferramenta de grande relevância destacando-se os lipossomas. Compostos contendo o núcleo pirimidínico demonstram notável propriedade antineoplásica, descrita na literatura. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar lipossomas contendo composto 4- amino-pirimidínico-bissubstituido, avaliar sua citotoxidade e investigar a ação antitumoral in vivo, frente o Sarcoma 180, do fármaco isolado e encapsulado. Os lipossomas contendo composto 4-amino-pirimidínico-bissubstituido foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico e submetidos a ensaios de estabilidade acelerada e em tempos prédeterminados. Os ensaios de citotoxidade foram realizados utilizando o método colorimétrico MTT. Os experimentos in vivo foram submetidos, aprovados e devidamente protocolados junto à Comissão de Ética em Experimentação Animal (CEEA) da UFPE. Os testes de atividade antitumoral seguiram a metodologia de Santos e colaboradores (2005). Os cortes histológicos do tumor foram corados pela Técnica Hematoxilina-Eosina (HE). Após o processo de preparação, as formulações de lipossomas contendo composto 4-aminopirimidínico- bissubstituido demonstraram-se homogêneas. O diâmetro médio e o índice de polidispersão das vesículas foram 298,75 ± 30,37 nm e 0,37 ± 0,01, respectivamente. A eficiência de encapsulação foi de 82,93 ± 0,04%. Observou-se redução da viabilidade celular diante dos compostos testados. O teste in vivo utilizando lipossomas contendo p-Fpirimidina e sua forma livre demonstrou uma inibição tumoral de 66,47 ± 26,8% e 50,46 ± 16,24%, respectivamente. A determinação do índice mitótico revelou redução do número de mitoses dos grupos tratados. Os resultados demonstram que a incorporação de p-Fpirimidina em lipossomas, potencializou seu efeito citotóxico e antitumoral, viabilizando, portanto, seu uso terapêutico.

Orientador: Francisco Benedito Teixeira Pessine / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-22T06:49:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_MileneHeloisa_D.pdf: 5657297 bytes, checksum: 0591f1d89a55f401bdc492136908b11b (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Este trabalho teve como objetivos preparar, caracterizar, verificar a estabilidade e avaliar a permeação na pele e a irritação cutânea de formulações lipossomais contendo isotretinoína (ISOTN), destinadas ao tratamento dermatológico de casos severos de acne, com a finalidade de reduzir os efeitos adversos e a degradação do fármaco. As formulações lipossomais foram obtidas através da técnica de hidratação do filme lipídico seco. Foi observado que nos lipossomas constituídos apenas de fosfatidilcolinas saturadas (HPC) houve vazamento do fármaco inicialmente encapsulado. O máximo de encapsulação (> 98%), com aumento da fluidez das bicamadas lipídicas, foi obtido com as seguintes suspensões lipossomais: (a) mistura de HPC com 40% mol de surfatante insaturado Lipopeg 4DO (DO) - Lipo_HPC/DO; (b) mistura de HPC com 40% mol de fosfatidilcolinas insaturadas (PC) - Lipo_HPC/PC; (c) lipossomas contendo apenas PC - Lipo_PC; (d) mistura de PC com 20% mol de colesterol (Col) - Lipo_PC/Col e (e) mistura de PC com 10% mol de fosfatidilserina (PS) - Lipo_PC/PS. Devido ao elevado teor de encapsulação da ISOTN nestes lipossomas, foi desnecessário separar o fármaco não encapsulado. A razão molar ISOTN/lipídios foi ~0,026:1. Análises usando microscopia eletrônica de transmissão e de varredura das suspensões lipossomais confirmaram a estrutura lamelar e a geometria esférica dos lipossomas, respectivamente. A encapsulação da ISOTN nas bicamadas lipossomais foi monitorada por microscopia óptica, avaliando a presença de cristais do fármaco na suspensão. A comprovação da encapsulação da ISOTN nas bicamadas lipídicas foi verificada através da fluorescência de pireno (aumento do grau de anisotropia e diminuição da intensidade de fluorescência da sonda). As suspensões lipossomais mantiveram-se estáveis durante 3 meses de armazenamento a 8 oC, em relação ao diâmetro médio (~300 nm) e à porcentagem de ISOTN encapsulada. A encapsulação lipossomal de ISOTN diminuiu sua fotodegradação em comparação com este fármaco dissolvido em etanol. Géis aquosos contendo ISOTN lipossomal apresentaram maior estabilidade fotoquímica que o gel alcoólico convencional contendo ISOTN. Os géis lipossomais apresentaram menor fluxo através da pele de orelha de porco, indicando menor absorção sistêmica in vivo. Géis contendo Lipo_PC/PS e Lipo_HPC/DO retiveram mais fármaco na pele em comparação ao fármaco permeado. Com exceção do gel contendo Lipo_HPC/DO, todos os demais géis lipossomais foram menos irritantes à pele de coelho em relação aos géis alcoólicos convencionais. Portanto, a encapsulação da ISOTN em lipossomas aumentou sua estabilidade e diminuiu efeitos adversos em relação aos produtos comerciais / Abstract: The mail goals of this work were the preparation, characterization, verification of the stability, skin permeation and cutaneous irritation of isotretinoína (ISOTN) liposomal formulations used in dermatological treatment and designed to reduce adverse effects and drug degradation. The liposomal formulations were obtained by the technique of dry film hydration. Liposomes made of only saturated phosphatidylcholine (HPC) caused leakage of the encapsulated drug. The maximum encapsulation was obtained (> 98%) by increasing the fluidity of the lipidic bilayers, with the following liposomal suspensions: (a) a mixture of HPC with 40% mol of the unsaturated surfactant Lipopeg4DO (DO) - Lipo_HPC/DO; (b) a mixture of HPC with 40% mol of unsaturated phosphatidylcholine (PC) - Lipo_HPC/PC; (c) liposomes with only PC - Lipo_PC; (d) a mixture of PC with 20% mol of cholesterol (Col) - Lipo_PC/Col, and (e) a mixture of PC with 10% mol of phosphatidylserine (PS) - Lipo_PC/PS. Due to the high yield of encapsulation of ISOTN in these liposomes, the suspensions didn't require separation of non encapsulated drug. The molar ratio ISOTN/lipids was approximately 0,026: 1. Transmission and scanning electron microscopy of the liposomal suspensions showed the lamellar structure and spherical geometry of the vesicles. ISOTN encapsulation in the lipid bilayers was monitored by optical microscopy, since this drug crystallizes outside the vesicles. This encapsulation was also confirmed by increase of the degree of anisotropy of the fluorescent probe pyrene and the decrease of its fluorescence intensity due to quenching processes. The liposomal suspensions were stable for 3 months at 8 oC, maintaining the diameter and the percentage of encapsulated drug. The encapsulation in liposomes decreased ISOTN photodegradation in comparison to the drug dissolved in ethanol. Aqueous gels containing liposomal ISOTN were more protect after photolysis than ISOTN in the conventional alcoholic gel. The liposomal gels presented a slower rate of permeation through the skin of a piglet ear, indicating a tendency of present a lower systemic absorption in vivo. Gels containing Lipo_PC/PS and Lipo_HPC/DO were able to retain more drug at the skin than the free drug. With the exception of the gel containing Lipo_HPC/DO, the other liposomal gels were less irritating to the rabbit skin in relation to the conventional alcoholic gels. Therefore, the encapsulation of ISOTN in liposomes increased its stability and diminished its adverse effects in comparison to the commercial products / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientador: Marlus Chorilli / Resumo: O câncer de próstata (CP) é a neoplasia maligna urológica mais comum e a segunda principal causa de mortalidade de homens associada ao câncer no mundo. O tratamento é iniciado por meio de intervenções cirúrgicas que abrangem a prostatectomia radical, tratamentos radioterápicos, terapias envolvendo privação androgênica e as imunoterapias. A quimioterapia também é bastante utilizada e recentes estudos demonstraram um controle notável do crescimento do CP utilizando docetaxel (DTX). No entanto, o DTX apresenta efeitos colaterais associados à toxicidade, tanto do fármaco como da formulação, Taxotere®. Em consequência disso, o desenvolvimento de sistemas nanotecnológicos de liberação de fármacos, como lipossomas, tem sido promissor para o tratamento do CP, em virtude das múltiplas características favoráveis desses nanosistemas, como biocompatibilidade e biodegradabilidade. Uma abordagem atrativa é a modificação superficial dos lipossomas com ligantes específicos dos receptores regulados nas superfícies de células tumorais, como os receptores de transferrina, que podem ser superexpressos em células tumorais de próstata. O atual trabalho visou desenvolver, caracterizar e avaliar a citotoxicidade in vitro de lipossomas funcionalizados com transferrina para veiculação do DTX no tratamento do CP. Os lipossomas foram obtidos por meio da técnica clássica da hidratação do filme lipídico e foram constituídos pela mistura de fosfatidilcolina de soja (SPC): colesterol (Col) : DSPE-PEG (2000)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prostate cancer (PC) is the most common urological malignancy and the second leading cause of cancer-related mortality in men worldwide. Treatment is initiated through surgical interventions that include radical prostatectomy, radiotherapy treatments, androgen deprivation therapies and immunotherapies. Chemotherapy is also widely used and recent studies have shown remarkable control of CP growth using docetaxel (DTX). However, DTX has side effects associated with the toxicity of both the drug and the formulation Taxotere®. As a result, the development of nanotechnological drug delivery systems, such as liposomes, has been promising for the treatment of CP, due to the multiple favorable characteristics of these nanosystems, such as biocompatibility and biodegradability. An attractive approach is the superficial modification of liposomes with receptor-specific ligands regulated on tumor cell surfaces, such as transferrin receptors, which can be overexpressed in prostate tumor cells. The present work aimed to develop, characterize and evaluate the in vitro cytotoxicity of transferrinfunctionalized liposomes for DTX delivery in the treatment of CP. The liposomes were obtained by the classical technique of hydration of the lipid film and consisted of soybean phosphatidylcholine (SPC): cholesterol (Col): DSPE-PEG (2000) -Maleimide and SPC: Col: DSPE-PEG (2000) mixture. ) -Maleimide: DTX, in the molar ratios 10: 2: 0.78 and 10: 2: 0.78: 0.52, respectively. The characterizations were... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre