O presente trabalho visou analisar padrões de atividade e uso de habitats por mamíferos de médio e grande porte, bem como dieta e sobreposição de nicho trófico de espécies de felinos e canídeos, numa região fragmentada do estado de São Paulo. Na paisagem estudada, existem duas unidades de conservação de proteção integral com vegetação de cerrado e floresta semidecídua, além de fragmentos de floresta nativa (semidecídua) em propriedades privadas. As hipóteses gerais do trabalho são: em ambientes mais impactados, i. as espécies de mamíferos de médio e grande porte tendem a generalizar seu comportamento de uso de habitat e padrão de atividade e ii. predadores de topo de cadeia alimentar aumentam a competição por recursos alimentares. Para explorá-las, foram estudados, por meio de armadilhas fotográficas e triagem de fezes, os seguintes aspectos: a) a freqüência do uso de diferentes habitats por mamíferos de médio e grande porte; b) o padrão de atividade de mamíferos de médio e grande porte; c) a dieta e a sobreposição de nicho de três carnívoros de topo de cadeia alimentar: lobo-guará (Chrysocyon brachyurus), onça-parda (Puma concolor) e jaguatirica (Leopardus pardalis). As coletas foram distribuídas em sete fragmentos, onde existem fitofisionomias nativas - cerrado sensu stricto, cerradão e floresta semidecídua - e também reflorestamento com espécies de eucaliptos. Foram obtidas 165, fotografias, nas quais identificou-se 17 espécies. Foram coletadas e identificadas 233 amostras de fezes, sendo 93 de lobo-guará, 68 de onça-parda, 38 de jaguatirica, 30 de outros pequenos felinos e 4 de cachorro-do-mato. Os resultados mostraram que, de forma geral, os mamíferos de médio e grande porte utilizam a área como um todo; os mamíferos mais especialistas, como o tapiti (Sylvilagus brasiliensis), mantiveram sua preferência por um habitat específico. Testes de correlação de Spearman mostraram que algumas espécies mais suscetíveis a alterações antrópicas mostraram-se correlacionadas a áreas com maior tamanho e grau de conectividade. Em relação aos padrões de atividade, os dados indicam que as espécies estão generalizando o seu comportamento: espécies que tinham atividade em alguns períodos do dia estão permanecendo ativas também em outros períodos. Quanto à dieta, o lobo-guará foi a espécie que utilizou mais itens entre os carnívoros estudados, alimentando-se de aves, répteis, frutos, mamíferos de diversos portes e insetos. A onça-parda e a jaguatirica apresentaram uma dieta mais restrita, sendo que os mamíferos representaram 90% dos itens consumidos. Houve uma alta sobreposição de nicho trófico entre lobo-guará e jaguatirica, indicando competição entre essas espécies. Os resultados, obtidos tanto por meio de armadilhamento fotográfico como por análise da dieta, indicam que pode existir uma relação entre áreas com maior grau de conservação (áreas maiores, menos isoladas estruturalmente e imersas em matrizes mais permeáveis) e a freqüência de mamíferos, a sobreposição de nicho dos carnívoros de topo e a densidade de fezes encontradas / The following study analyzed activity patterns and habitat use of large and medium size mammals as well as diet and trophic niche overlapping of feline and canid species in a fragmented area of the State of São Paulo. The landscape studied contains two fully protected conservation units with cerrado and semi-deciduous vegetation and also remnants of native semi-deciduous forest located in private properties. The general hypothesis of this study are: in more impacted environments, i, large and medium size mammal species tend to generalize their behavior regarding habitat use and activity patterns and ii, top food chain predators increase the competition for resources. The following aspects were studied through photographic traps and fecal sorting: a) frequency of different habitat use by large and medium size mammals; b) activity pattern of large and medium size mammals; c) diet and niche overlapping of three top food chain carnivores: Chrysocyon brachyurus, Puma concolor and Leopardus pardalis. Samples were withdrawn from seven fragments of native phytophysiognomies - cerrado sensu stricto, cerradão and semideciduous forest - and from areas of eucalyptus plantations. One hundred and sixty five photographs were obtained, where 17 species were identified. Two hundred and thirty three samples of feces were collected and identified, of which 93 of Chrysocyon brachyurus, 68 of Puma concolor, 38 of Leopardus pardalis, 30 of other small felines and 4 of Cerdocyon thous. The results show that, generally, large and medium size mammals use the entire area. However, more specialist mammals, such as the Sylvilagus brasiliensis, kept their preference for a more specific habitat. Spearman correlation tests demonstrated that those species which are more susceptible to anthropic alterations were more correlated with areas containing a higher connectivity and bigger size. The data also indicated that species are generalizing their behavior regarding the activity patterns: species that were active in some periods of the day are now remaining active in other periods as well. Among the carnivore species studied, Chrysocyon brachyurus was the specie with the most diversified diet, feeding on birds, reptiles, fruits, insects and mammals. Puma concolor and Leopardus pardalis had more restricted diets, where 90% of the items ingested belonged to other mammals. The trophic niche of C. brachyurus and L. pardalis species were strongly overlapped, indicating competition between them. The results obtained through photographic traps and diet analysis indicate that there might be a relation between more conserved areas (less isolated larger areas immersed in more permeable matrixes) and the frequency of mammals, the overlapping niche of top food chain carnivores ad the density of feces found.

Sistemas agroflorestais abrigam grande biodiversidade quando comparados a outros usos da terra e representam uma ferramenta importante para conciliar produção agrícola e conservação de recursos naturais em paisagens modificadas pelo homem. Esta tese é composta de três capítulos que sintetizam e ampliam o conhecimento a respeito da influência do manejo das agroflorestas e da cobertura florestal remanescente sobre a distribuição dos organismos e apontam ações visando a conservação de biodiversidade em mosaicos agroflorestais. No primeiro capítulo revisamos a informação científica publicada até 2008 sobre a diversidade da fauna e flora nativas nas agroflorestas de cacau do sul da Bahia. Com base nesta síntese, identificamos recursos chave presentes nessas plantações que se relacionam com a maior riqueza de espécies ou presença de táxons ameaçados e evidenciamos a importância da manutenção de florestas nativas em mosaicos agroflorestais. Finalizamos esta revisão com recomendações para um manejo adaptativo visando a conservação de biodiversidade em propriedades e mosaicos agroflorestais e levantamos questões para serem respondidas por estudos futuros. Nos capítulos 2 e 3, apresentamos dois estudos empíricos realizados a partir da amostragem de mamíferos por armadilhas fotográficas em 30 agroflorestas e remanescentes florestais adjacentes a nove delas. No segundo capítulo, construímos e testamos hipóteses que descrevem quais espécies de mamífero de maior porte com ocorrência na região devem ser positiva e negativamente influenciadas pela conversão de florestas em agroflorestas e como estas respostas diferenciais deveriam se refletir na estrutura, composição e diversidade das assembléias. O valor de conservação das agroflorestas é apoiado pela presença de espécies endêmicas ou ameaças de extinção e pela composição de espécies similar entre florestas e agroflorestas. Entretanto, ao identificar que espécies caçadas e mortas por retaliação são raras ou ausentes na nossa amostragem e que agroflorestas são menos usadas por espécies arborícolas e mais usadas por espécies exóticas do que as florestas, nós explicitamos porque o valor de conservação das agroflorestas deve ser visto com cuidado, destacando questões que podem contribuir para a viabilidade das populações de mamíferos de maior porte em paisagens agroflorestais. No terceiro capítulo, contrastamos a importância relativa da intensificação do manejo e da cobertura florestal do entorno sobre o uso das agroflorestas de cacau por mamíferos de maior porte. Nossos resultados indicam que, na paisagem de estudo, fatores diretamente e indiretamente relacionados à intensificação do manejo das agroflorestas são mais importantes para a distribuição das espécies de mamíferos do que a quantidade de florestas remanescentes no entorno. A taxa de registro de cães domésticos (fator indireto) teve efeito negativo sobre várias espécies de mamíferos, enquanto a redução da conectividade do dossel das agroflorestas (diretamente associada ao manejo do sombreamento) teve um efeito negativo sobre espécies arborícolas e a redução da altura do estrato herbáceo (diretamente associada à freqüência de roçagem) um efeito positivo pequeno sobre espécies generalistas. Por outro lado, nesse mosaico agroflorestal com grande quantidade de florestas nativas remanescentes, apenas as espécies generalistas responderam à variação da quantidade de florestas no entorno, sendo mais comuns em agroflorestas circundadas por menor quantidade de floresta. Assim, em mosaicos agroflorestais com elevada cobertura florestal, restringir os efeitos negativos decorrentes da intensificação do uso da terra, como o controle das populações de cães domésticos e das atividades de caça e o planejamento cuidadoso do sombreamento das agroflorestas, deve resultar em maiores benefícios para o uso das agroflorestas por mamíferos de maior porte do que alterações na configuração espacial dos remanescentes florestais. Entretanto, a importância da cobertura florestal em relação a intensificação do manejo deve aumentar em paisagens mais desmatadas. Em conjunto, os três capítulos desta tese mostram que o conhecimento científico atual pode embasar o desenho de práticas e políticas públicas para conciliar produção agrícola e conservação em mosaicos agroflorestais. Tais práticas devem ser continuamente avaliadas, contribuindo e sendo repensadas com o avanço do conhecimento científico / Agroforestry systems harbor high levels of biodiversity if contrasted to other land uses and represent an important tool to reconcile agricultural production and conservation in humanmodified landscapes. This thesis is composed of three chapters that synthesize and expand the knowledge on the influence of agroforest management and remaining forest cover on the distribution of organisms, and highlight practices aiming biodiversity conservation in agroflorestry mosaics. In the first chapter we review the scientific information published until 2008 on the diversity of native fauna and flora in cacao agroforests in southern Bahia. Based on this synthesis, we identify key agroforest resources associated with higher species richness or the presence of threatened taxa, and emphasize the importance of Forest cover maintenance in agroforestry mosaics. We end this review with recommendations to an adaptive management aiming biodiversity conservation on farms and agroforestry mosaics and consider issues to be developed by future studies. On chapters 2 and 3 we present two empirical studies based on photographic records of large mammals in 30 agroforests and forest remnants adjacent to nine of them. In the second chapter we constructed and tested hypotheses describing which mammals from the regional species pool should be positively and negatively influenced by the conversion of forest to agroforests and how these differential responses should change assemblage structure, composition, and diversity. The high conservation value of agroforests is supported by the presence of species of conservation concern, and a similar species composition between forests and agroforests. However, by identifying that hunted and persecuted species are rare or absent in our samples, and that agroforests are less used by arboreal species and more used by non-native species than forest, we explicit why the conservation value of agroforests should be viewed with caution and underline issues that should be addressed to improve the viability of large mammal populations in agroforestry mosaics. In the third chapter we contrast the relative importance of management intensification and surrounding forest cover for the use of agroforests by large mammals. Our results indicate that, in the studied landscape, factors directly and indirectly related to management intensification are more important to define large mammal distribution than the amount and spatial arrangement of surrounding forest cover. High domestic dog capture rate (an indirect factor) had a negative effect on several species, while low canopy connectivity (directly associated to shade management) was negative correlated to the distribution of arboreal species and lower herbaceous vegetation (directly associated to ground vegetation clearance) had a minor positive influence on generalist species. On the other hand, in this agroforestry mosaic highly covered by native forests, only generalist species responded (positively) to the decrease in surrounding forest cover. In agroforestry mosaics from highly forested regions, restricting the negative effects of land-use intensification, such as the control of domestic dog populations and overhunting, and the careful planning of shade management, is likely to bring greater benefit to large mammal use of agroforests than the spatial arrangement of forest remnants. However, the importance of forest cover relative to management intensification is likely to be higher as deforestation increases. The three chapters show that current scientific knowledge can already support policy and management practices to conciliate agricultural production and biodiversity conservation in agroforestry mosaics. Such practices should be continuously evaluated, contributing to and being supported by improvement of scientific knowledge

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-15T13:12:39Z No. of bitstreams: 1 Joao Carlos Gomes Borges.pdf: 1260294 bytes, checksum: 43236ab101e2f29881f9f2d010f259b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T13:12:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joao Carlos Gomes Borges.pdf: 1260294 bytes, checksum: 43236ab101e2f29881f9f2d010f259b3 (MD5) Previous issue date: 2016-01-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / With five significant biomes and the largest river system in the World, Brazil has the richest continental biota on the planet, which has led to the country being classified as megadiverse. In Brazil, several species of aquatic mammals have been suffering almost constantly form the anthropogenic, and sometimes triggering, effects of different parasitic agents. However, our scientific knowledge of the parasitic fauna of aquatic mammals remains limited. Thus, the aim of the present study was to diagnose infections caused by Cryptosporidium spp., Giardia sp. and endoparasites among aquatic mammals in Brazil. To do this, 553 samples were collected from fecal content and the gastrointestinal tract of several species of cetaceans, sirenians (Antillean and Amazonian manatees) and mustelids (neotropical and giant otters) in the North (Amapá, Amazonas, Pará and Rondônia) and Northeast (Alagoas, Bahia, Ceará, Sergipe, Paraíba, Pernambuco, Rio Grande do Norte) of Brazil. Samples were obtained from animals that were kept in captivity and others in the wild, including specimens that lived in rivers, coastlines and oceans. For Cryptosporidium spp., the fecal samples were processed by Kinyoun technique. Concerning the identification of Giardia sp. cysts and helminth eggs, the material collected was submitted to flotation (Willis and Faust) and sedimentation (Hoffman) methods, followed by the Flotac technique. All samples were subjected to the direct immunofluorescence test. In the results obtained, a notable infection was caused by the digenetic trematode of the Opistothrematidae family (Pulmonicola cochleotrema), with an infection prevalence of approximately 7.95% (07/88) among Antillean manatees. The presence of Cryptosporidium spp. was confirmed in five species: Lontra longicaudis (15.28%); Pteronura brasiliensis (41.66%); Sotalia guianensis (9.67%); Trichechus inunguis (16.03%) and Trichechus manatus (13.79%). Giardia sp. was diagnosed in the following species: L. longicaudis (9.23%); P. brasiliensis (29.16%); Kogia breviceps (100%); Kogia sima (25%); S. guianensis (9.67%); T. inunguis (3.81%) and T. manatus (10.34%). The identification of Cryptosporidium spp. and Giardia sp. in aquatic mammals, allied to the capacity of their oocysts and cysts, respectively, to remain infective in the environment for a long period of time, increases the possibility of the transmission of these agents to other aquatic and land organisms, as well as the human population. / Abrigando cinco importantes biomas e o maior sistema fluvial do mundo, o Brasil tem a mais rica biota continental do planeta, o que rendeu o título de país megadiverso. Dentro deste contexto, encontram-se várias espécies de mamíferos aquáticos, as quais vem sofrendo constantemente com os efeitos antropogênicos e por vezes desencadeantes de diversos agentes parasitários. Entretanto, o conhecimento científico da fauna parasitária dos mamíferos aquáticos ainda é bastante limitado. Desta forma, este trabalho teve por objetivo diagnosticar infecções ocasionadas por Cryptosporidium spp., Giardia sp. e endoparasitos em mamíferos aquáticos no Brasil. Para isto foram realizadas coletas de 553 amostras de conteúdo fecal e do trato gastrointestinal de diversas espécies de cetáceos, sirênios (peixe-boi marinho e amazônico) e mustelídeos (lontra neotropical e ariranha), nas regiões Norte (Amapá, Amazonas, Pará e Rondônia) e Nordeste (Alagoas, Bahia, Ceará, Sergipe, Paraíba, Pernambuco, Rio Grande do Norte). Entre os animais envolvidos foi possível obter amostras de espécimes mantidos em cativeiro e de vida livre, bem como, de espécies que habitavam os recursos fluviais, costeiros e oceânicos. Para a pesquisa de Cryptosporidium spp. as amostras fecais foram processadas pela técnica de Kinyoun. Ao que concerne à identificação dos cistos de Giardia sp. e ovos de helmintos, o material coletado foi submetido aos métodos de flutuação (Willis e Faust) e sedimentação (Hoffman), assim como à técnica do Flotac. Todas as amostras foram submetidas ao Teste de Imunofluorescência Direta. Entre os resultados obtidos destaca-se a infecção ocasionada pelo trematódeo digenético da família Opistothrematidae, espécie Pulmonicola cochleotrema, sendo a frequência da infecção de aproximadamente 7,95% (07/88) em peixes-bois marinhos. A presença de Cryptosporidium spp. foi constatada em cinco espécies, sendo estas, a Lontra longicaudis (15,28%), Pteronura brasiliensis (41,66%), Sotalia guianensis (9,67%), Trichechus inunguis (16,03%) e Trichechus manatus (13,79%). No que concerne à ocorrência de Giardia sp., este coccídio foi diagnosticado em um maior número de espécies, conforme pode ser constatado em L. longicaudis (9,23%), P. brasiliensis (29,16%), Kogia breviceps (100%), Kogia sima (25%), S. guianensis (9,67%), T. inunguis (3,81%) e T. manatus (10,34%). A identificação de Cryptosporidium spp. e Giardia sp. acometendo os mamíferos aquáticos, aliado à capacidade dos oocistos e cistos respectivamente destes protozoários permanecerem infectantes em condições ambientais por um longo período de tempo, amplia a possibilidade de transmissão destes agentes para outros organismos aquáticos, terrestres e populações humanas.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T12:55:53Z No. of bitstreams: 1 Joubert Santana Pimentel.pdf: 331586 bytes, checksum: a5ad502fe9d1ea2473615213205a4a88 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T12:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joubert Santana Pimentel.pdf: 331586 bytes, checksum: a5ad502fe9d1ea2473615213205a4a88 (MD5) Previous issue date: 2009-03-02 / Modern zoological gardens are institutions to wild fauna maintenance, aiming its conservation, the performance of scientific research and leisure, recreation and environmental education activities. The variety of wild species living in conditions different from the one found in its natural habitats represents a propitious environment for diseases spread, specially the zoonotic ones. Due to data shortage and wild mammals’ epidemiological relevance both for toxoplasmosis as for leptospirosis, this study aimed to determine the seroprevalence of toxoplasmosis and leptospirosis in neotropical wild mammals, from “Zoológico do Parque da Cidade Governador José Rollemberg Leite”, Aracaju, Sergipe, Brazil. Blood samples were collected from 32 wild mammals, adults and from both sexes: 14 tufted capuchins (Cebus apella), four golden-bellied capuchins (Cebus xanthosternus), three pumas (Puma concolor), one jaguar (Panthera onca), one fox (Pseudolopex vetulus), six crab-eating raccoons (Procyon cancrivorus), two South American coatis (Nasua nasua), and one tayra (Eira Barbara). Sera were tested by the modified agglutination test (MAT) using formalin-fixed whole tachyzoites and mercaptoetenhol (cut-off point 1:25) to Toxoplasma gondii antibodies, and by the microscopic seroagglutination test (cut-off point: 1:100) using 24 serovar of,pathogenic leptospiras and 2 serovar of saprophyte leptospiras. Antibodies to T. gondii were found in 17 of 32 wild mammals (53.1%), and antibodies to Leptospiras spp were found in 4 of 32 wild mammals (12.5%). In relation to gender, 9 of 15 (60%) males, and 8 of 17 (47.1%)females had antibodies to T. gondii, and 4 of 15 (26.7%) males had antibodies to Leptospira spp. Considering the origin of wild seropositive mammals to T. gondii, 8 of 17 (47%) was born in zoo, 7 of 17 (41.2%) were from other zoos, and 2 (11.8%) was from the wild, and 3 of4 (75%) seropositive to Leptospiras spp was born in zoo, and 1 of 4 (25%) was from the wild. This is the first serological survey of Leptospiras spp in neotropical primates and carnivores from Northeast zoo from Brazil, and the first found to antibodies to Leptospira spp (serovar Copenhageni) in the threaten specie of primate golden-bellied capuchins (Cebus xanthosternus). / Os zoológicos modernos são instituições destinadas à manutenção da fauna selvagem com objetivo de conservação, pesquisa cientifica, lazer, recreação e educação ambiental. A ampla variedade de espécies selvagens, vivendo em condições diferentes do seu habitat natural, representa um ambiente propício à disseminação de doenças, muitas delas zoonóticas. Devido à escassez de dados e à relevância dos mamíferos selvagens no contexto epidemiológico, tanto na toxoplasmose, quanto na leptospirose, objetivou–se determinar a soroprevalência de toxoplasmose e de leptospirose em mamíferos selvagens neotropicais do Zoológico do Parque da Cidade Governador José Rollemberg Leite, Aracaju, Sergipe. Para tanto foram colhidas amostras sanguíneas de 32 mamíferos selvagens, adultos e de ambos os sexos, das espécies: 14 macacos-prego (Cebus apella), quatro macacos-prego-do-peito-amarelo (Cebus xanthosternus), três onças-suçuaranas (Puma concolor), uma onça-pintada (Panthera onca), uma raposa-do-campo (Pseudolopex vetulus), seis guaxinins (Procyon cancrivorus), dois quatis (Nasua nasua) e um papa-mel (Eira barbara). Para pesquisa de anticorpos anti- Toxoplasma gondii foi utilizado o teste de Aglutinação Modificada com taquizoítos inativados na formalina e 2-mercaptoetanol (ponto de corte na diluição 1:25) e para pesquisa de anticorpos anti-Leptospira spp foi utilizado o teste de Soroaglutinação Microscópica (ponto de corte na diluição 1:100) com uma coleção de antígenos vivos que incluiu 24 variantes sorológicas de leptospiras patogênicas e duas leptospiras saprófitas. Dentre os 32 mamíferos, 17 (53,1%) apresentaram anticorpos anti-T. gondii e quatro (12,5%) foram positivos para anticorpos anti-Leptospira spp. De acordo com o sexo, 60% (9/15) dos machos e 47,1% (8/17) das fêmeas foram soropositivos para T. gondii e 26,7% (4/15) dos machosapresentaram anticorpos anti-Leptospira spp. Com relação à procedência, dos mamíferos que apresentaram anticorpos anti-T. gondii, 47% (8/17) nasceram no zoológico, 41,2% (7/17) foram oriundos de outras instituições e dois (11,8%) foram provenientes da natureza. Em relação aos quatro mamíferos soropositivos para Leptospira spp, três (75%) foram procedentes da natureza e um (25%) nasceu no zoológico. Este trabalho representou o primeiro inquérito sorológico para a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp em primatas e carnívoros neotropicais em um zoológico do Nordeste do Brasil e descreveu pela primeira vez a ocorrência de anticorpos anti-T. gondii e anti-Leptospira spp com sorovar mais provável Copenhageni no primata ameaçado de extinção macaco-prego-de-peito-amarelo (C. xanthosternus).

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-01T13:35:46Z No. of bitstreams: 1 Marcio Andre da Silva.pdf: 5241571 bytes, checksum: dd6c19190122b09d3dc1755501398c93 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-01T13:35:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcio Andre da Silva.pdf: 5241571 bytes, checksum: dd6c19190122b09d3dc1755501398c93 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Toxoplasma gondii is a wide world distribution parasite and has a clonal population structure. Recent studies have shown greater genetic variability of this protozoan in Brazil in domestic and wild animals, needing more research with this last group. The aim of this study was to isolate and make genotypic characterization of Toxoplasma gondii in tissues of naturally infected wild mammals and birds, from free ranging and captivity at Pernambuco, and verify antibodies occurrence against this parasite in samples were sera was obtained. From 2014 March to 2015 September, 233 biological samples were collected from 113 birds and 120 mammals. Considering origin, 77 animals were from free ranging and 156 were from captivity, from a zoo and a wildlife rehabilitation center. Serological exam was performed in 165 animals (59 birds and 106) mammals) by Modified Agglutination Test (MAT). In 105 animals there was gathering of heart, brain, skeletal muscle and diaphragm fragments. From those 105 samples, 32 were submitted to mouse bioassay and 73 were submitted to direct molecular diagnosis by PCR from a fragment of B1 gene 155-pb. For virulence analysis, mice used in bioassays were evaluated for four weeks in search of toxoplasmosis clinical signs. Positive samples of wild animals and mice were submitted to genotyping by PCR-RFLP technique, using markers SAG1, 5’3’SAG2, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3. Anti-T. gondii antibodies were found in 52,7% (87/165) of the samples, with higher percentages in captivity animals (61,6%, 78/125), than in free ranging ones (22,5%, 9/40). In bioassays, one non virulent sample was isolated, of genotype #13 from a free ranging striated heron (Butorides striata) from Recife. From the 73 primary samples submitted to PCR, seven were positive, with identification of genotype Type BrIII in a captive tropical otter (Lontra longicaudis). Both genotypes identified corroborate with the existence of genetic variability of T. gondii in Pernambuco. Two blonde capuchin monkeys (Sapajus flavius) positive by PCR had necropsy findings compatible with death by acute toxoplasmosis. The enhancement of preventive veterinary medicine and biosecurity programs for toxoplasmosis must be performed in institutions that keep captive wildlife. / Toxoplasma gondii é um parasito de ampla distribuição mundial e apresenta uma estrutura populacional clonal. Estudos recentes evidenciaram maior variabilidade genética deste protozoário no Brasil em animais domésticos e silvestres, necessitando-se de maiores pesquisas neste último grupo. Objetivou-se isolar e caracterizar genotipicamente Toxoplasma gondii em tecidos de mamíferos e aves silvestres naturalmente infectados, provenientes de vida livre e de cativeiro, no estado de Pernambuco e verificar a ocorrência de anticorpos contra o parasito nas amostras em que foi possível obter o soro. De março de 2014 a setembro de 2015, foram colhidas amostras biológicas de 233 animais, sendo 113 aves e 120 mamíferos. Considerando a origem, 77 foram de vida livre e 156 de cativeiro, oriundos de um zoológico e de um Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS). O exame sorológico foi realizado em 165 animais (59 aves e 106 mamíferos) por meio do Teste de Aglutinação Modificado (MAT). Em 105 animais (71 aves e 34 mamíferos) houve colheita de fragmentos de coração, cérebro, músculo esquelético e diafragma. Destas 105 amostras, 32 foram submetidas ao bioensaio em camundongos e 73 foram submetidas a diagnóstico molecular direto por PCR a partir de um fragmento de 155-pb do gene B1. Para a análise de virulência das cepas, os camundongos utilizados nos bioensaios foram avaliados por quatro semanas quanto à manifestação de sinais clínicos de toxoplasmose. As amostras positivas de animais silvestres e camundongos foram submetidas à genotipagem pela técnica de PCR-RFLP, utilizando os marcadores SAG1, 5’3’SAG2, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Anticorpos anti-T. gondii foram encontrados em 52,7% (87/165) das amostras, com maiores percentuais em animais de cativeiro (61,6%, 78/125) do que em animais de vida livre (22,5%, 9/40). No bioensaio, isolou-se uma amostra não virulenta, do genótipo #13 em um socozinho (Butorides striata) de vida livre proveniente de Recife. Das 73 amostras primárias submetidas à PCR, sete foram positivas, com identificação o genótipo Type BrIII em uma lontra (Lontra longicaudis) de cativeiro. Os dois genótipos identificados corroboram com a existência da variabilidade genética de T. gondii em Pernambuco. Dois macacos-pregos-galegos (Sapajus flavius) positivos pela PCR tiveram achados de necropsia compatíveis com óbito por toxoplasmose aguda. O aprimoramento de programas de medicina veterinária preventiva e biossegurança para o controle da toxoplasmose deve ser realizado em instituições que mantém fauna silvestre ex situ.

Orientador: Emygdio Leite de Araujo Monteiro-Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T08:06:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nakano-Oliveira_Eduardo_D.pdf: 2929828 bytes, checksum: ec08e52b7a82274d549faf563c6bd37f (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Na Floresta Atlântica, existe uma grande deficiência de informações sobre os mamíferos da ordem Carnívora, principalmente em ambientes estuarinos e insulares, assim esse estudo teve o objetivo geral de fornecer as primeiras informações sobre a comunidade de mamíferos carnívoros em três ilhas da região do Complexo Estuarino Lagunar Iguape/Cananéia, litoral sul de São Paulo e tentar identificar as principais ameaças ambientais locais utilizando essas espécies como indicadores ecológicos. Para isso, foi utilizada uma combinação de métodos acreditando que essa seria a forma mais eficiente de reunir dados variados. A riqueza foi estimada através de identificação de pegadas e fezes, além de avistamentos, capturas e armadilhas fotográficas. A dieta foi estudada através da análise de conteúdo fecal. A impressão dos moradores locais em relação aos carnívoros da região foi possível através da aplicação de questionários fechados. A influência do contato antrópico sobre carnívoros onívoros foi analisada através do monitoramento de sete cachorros-do-mato por rádio telemetria, sendo que três pertenciam a um grupo que freqüentava constantemente áreas habitadas e quatro indivíduos pertenciam a um grupo sem contato com humanos. Além desses métodos, durante todo o trabalho foram registrados todos os tipos de distúrbios ambientais encontrados. A Ilha do Cardoso foi a que apresentou maior riqueza de carnívoros silvestres (n=9), seguido pela Ilha Comprida (n=6) e Ilha de Cananéia (n=5). Em relação à dieta, as lontras c onsumiram peixes e caranguejos, os mão-peladas se alimentaram principalmente de crustáceos e frutos e os cachorros-do mato apresentaram uma dieta bastante variada, incluindo caranguejos, insetos, frutos e pequenos vertebrados. Os felídeos consumiram vertebrados sendo que os de maior porte foram predados apenas por onça-parda. De maneira geral, os moradores entrevistados tem afinidade com a natureza, mas ainda demonstram um certo receio em relação aos carnívoros silvestres, principalmente devido a problemas de predação sobre animais de criação como galinhas e patos, e sobre peixes em ¿viveiros¿ naturais. Os cachorros-do-mato monitorados indicaram alguns problemas devido ao contato antrópico. O grupo selvagem ocupava áreas bem maiores, forrageava por mais tempo e consumia apenas presas e frutos nativos. Os indivíduos do grupo antrópico visitavam constantemente áreas com lixo orgânico, ocupavam áreas bastante reduzidas e apresentavam menos atividade. De maneira geral os problemas ambientais detectados estavam direta ou indiretamente relacionado à espécie humana. Entre eles foram destacados a presença de animais domésticos e lixo em áreas naturais, o conflito entre animais silvestres e donos de criações, destruição de margens de rios, entre outros. A última parte da tese expõe os problemas, recomenda algumas soluções possíveis e cita os projetos desenvolvidos ou em desenvolvimento que estão tentando resolver esses problemas ou levantar informações mais específicas para esse fim / Abstract: Considering that in the Atlantic Forest, there is a lack of information on the mammals of the Carnivora order, mainly in the estuaries and islands, this study had the general objectives of providing primary information on the community of carnivore mammals of three islands in the area of Iguape/Cananéia region, south coast of São Paulo and trying to identify the main local environmental threats using these species as ecological indicators. For that, a combination of methods was used because it was believed that this would be the most efficient way of gathering varied data. The richness was estimated using the identification of footprints and feces and also direct observation, captures and photographic traps. The diet was studied through the analysis of the fecal content and a preliminary analysis of the local residents' impression regarding the carnivores of the area was possible due to the use of questionnaires. The influence of the antropic contact on carnivorous omnivores was analyzed by monitoring seven crab-eating- foxes by radio telemetry. Three of them belonged to a group that was constantly in inhabited areas and four individuals belonged to a group without any humans contact. Besides these methods, during the whole study all types of environmental disturbances found were registered. The Cardoso Island presented the greatest richness of wild carnivorous (n=9) followed by the Comprida Island (n=6) and the Cananéia Island (n=5). About the diet, the otters consumed fish and crabs, the crab-eating-raccoons fed mainly on crustaceans and fruits and the crabeating-foxes had a quite varied diet, including crabs, insects, fruits and small vertebrates. The felids consumed vertebrates and the largest ones were predated only by the puma. In general, the residents interviewed have some affinity with nature, but they still demonstrate a certain fear of the wild carnivores, mainly due to predation problems with animal breeds such as chickens, ducks, and fish. The crab-eating- foxes monitored indicated some problems due to the antropic contact. The wild group was in much larger areas, foraged for more time and consumed just prays and native fruits. The individuals of the antropic group were constantly in areas with organic garbage; they occupied quite reduced areas and were less active. In general, the environmental problems detected were direct or indirectly related to the human species. Among other problems, the presence of domestic animals and garbage in natural areas, the conflict between wild animals and breeders and the destruction of river banks were emphasized. The last part of the thesis presents the problems, recommends some possible solutions and mentions the projects developed or being developed that are trying / Doutorado / Doutor em Ecologia

Orientador: Eleonore Zulnara Freire Setz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T17:03:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castilho_CamilaPaulade_M.pdf: 1116230 bytes, checksum: e9733bf18b309857ead4034f314a0bca (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: No presente estudo avaliei a comunidade de mamíferos de médio e grande porte em 13 fragmentos pequenos (1 a 12 ha) e um fragmento controle (220 ha) da Área de Proteção Ambiental de Campinas, estado de São Paulo. A comunidade foi estudada através de parcelas de areia iscadas com dois tipos de iscas odoríferas (Pro's Choice e Canine Call) ao longo das quatro estações do ano, durante o período de julho de 2007 a junho de 2009. O esforço variou de 15 a 170 parcelas-noite entre os fragmentos, com um esforço total de 665 parcelas-noite para o conjunto de fragmentos. A comunidade foi composta por 20 espécies, variando de uma a sete espécies por fragmento e 11 no controle, sendo a maioria espécies generalistas e oportunistas, incluindo três espécies exóticas: o cachorro-doméstico (Canis lupus familiaris), a lebre européia (Lepus europaeus) e o ratão-do-banhado (Myocastor coypus). A riqueza da comunidade não esteve relacionada com a área dos fragmentos (rs = 0,083; p>0,05). A análise de similaridade também não evidenciou nenhum padrão na composição entre os fragmentos. Grandes carnívoros predadores de topo não foram verificados no interior dos fragmentos através das parcelas de areia, sendo a jaguatirica (Leopardus pardalis) o maior carnívoro registrado. No entanto, a riqueza registrada para o conjunto dos fragmentos foi superior em relação a outros fragmentos florestais maiores em tamanho e número em outras regiões do estado de São Paulo. A análise de abundância e de freqüência de ocorrência revelou o domínio da comunidade por três espécies mesopredadoras, o gambá (Didelphis sp), o cachorrodoméstico e o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) e uma presa, o tatu-galinha (Dasypus novemcinctus). Esse predomínio aparentemente parece estar relacionado à ausência de grandes predadores de topo, devido à liberação dessas espécies do controle demográfico imposto por esses últimos, bem como à plasticidade comportamental dessas espécies. Na ausência de predadores, essas espécies estiveram negativamente correlacionadas às áreas dos fragmentos, exceto o gambá. Em conclusão, a comunidade da APA de Campinas demonstrou-se simplificada e dominada por espécies generalistas. Os últimos remanescentes da região representam os últimos refúgios para a comunidade de médios e grandes mamíferos / Abstract: I evaluated the medium and large mammal community in 13 small fragments (1 to 12ha) and a control (220ha) in the Environmental Protected Area of Campinas, São Paulo state. The community was sampled using baited track stations (Pro's Choice and Canine Call bait) over a year (once each quarter) from July 2007 to June 2009, giving 15 to 170 track-station nights among the fragments and 665 track-station nights for all the remnants. Twenty species were recorded, varying from one to ten species per fragment, and eleven in the control. Most species was generalist and opportunist. Three exotic species (domestic dog, Canis lupus familiaris; European hare, Lepus europaeus; and nutria, Myocastor coypus) were among those recorded. No correlation between richness and fragment size was found (rs = 0,083; p> 0,05). No pattern in similarity was found among them. Although the smaller fragments had fewer species than the control, the species were often distinct. Large carnivores, top predators, were not sampled in the fragments interior by the track-stations and ocelot was the biggest carnivore registered. Opossums, domestic dog, nine-banded armadillo and crab-eating fox were the most abundant and frequent species in the community. As expected, the generalist species (except opossums) were negatively correlated with fragment area. Interactions between predator-prey and competitor abundances among those species were not detected. In conclusion, the mammal community was simplified and dominated by a few generalist species. The fragments seem representative of the last refuges to the community of the medium and large mammals / Mestrado / Ecologia / Mestre em Ecologia

O processo de fragmentação florestal, além do isolamento e da redução de hábitat, produz um aumento do microhábitat de borda. Este aumento leva à gradual perda de diversidade devido a alterações abióticas e bióticas fazendo com que remanescentes florestais não comportem a mesma diversidade que hábitats contínuos. O estabelecimento de espécies vegetal depende crucialmente do local onde as sementes são depositadas no ambiente, porém muito pouco se sabe sobre os efeitos da fragmentação florestal para a manutenção das características abióticas e bióticas dos microhábitats e seus efeitos na sobrevivência de sementes pós-dispersas, uma vez que a maioria dos estudos foi conduzida em florestas contínua. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da fragmentação florestal na predação de sementes da palmeira Syagrus romanzoffiana (“jerivá") em três microhábitats (clareira, borda e interior de mata), testando oito fragmentos de Floresta Semidecídua (de 9,5 a 33.845 ha). Os objetivos deste trabalho foram os de avaliar (1) se existe diferenças bióticas e abióticas entre os microhábitats de borda, interior de mata e clareira; (2) se o tamanho do fragmento florestal exerce influência para a manutenção das características do microhábitats amostrados; (3) se os microhábitats testados diferem na sobrevivência de sementes de S. romanzoffiana pós-dispersas; (4) se o tamanho do fragmento influencia na taxa de predação de sementes; (5) quais das características estruturais avaliadas estão relacionadas com a predação de sementes de S. romanzoffiana e (6) quais as características estruturais que estão correlacionadas com o tamanho do fragmento. Foi concluído que fragmentos menores que 20 ha não possuem diferenças abióticas e bióticas por extrapolação da borda da mata a todo o fragmento, não sendo registrada nenhuma semente predada nestas áreas. Fragmentos de 230 a 380 ha possuem alta taxa de predação de sementes, sendo encontradas em todo o remanescente independente do microhábitat à medida que os fragmentos florestais com área superior a 1000 ha possuem uma menor taxa de predação e distinções abióticas e bióticas entre clareira, interior e borda de mata. Para a conservação de populações de jerivá em fragmentos florestais com área inferior a 1.000 ha são necessários planos de manejo, como medidas que visem o desenvolvimento de sub-bosque em fragmentos que estejam inteiramente sob efeito de borda, e a proteção de sementes pós-dispersas em fragmentos onde haja forte pressão de predadores de sementes. Investigações sobre os efeitos das alterações decorrentes do processo de fragmentação florestal na biologia reprodutiva de angiospermas são de suma importância para planos efetivos de planejamento, conservação e restauração, gerenciamento de áreas florestais. / The effects of forest fragmentation, more than isolation and habitat reduction, increase the microhabitat edge. This increasing leads to gradual biodiversity loss because of abiotic and biotic alterations, doing that forest fragments support less species when compared with continuous forest. The establishment of plants depends crucially on the place where their seeds were deposited on the environment, but very little is known about the effects of forest fragmentation on microhabitats abiotic and biotic conditions maintenance and their effects for seed survival, once that most studies have been carried out in large forest. In this study, we evaluate the effects of forest fragmentation on Syagrus romanzoffiana seed predation in three microhabitats (gaps, understory and forest edge), testing eight semi-deciduous forest fragments (9.5 to 33,845 ha). Our objectives were to test (1) if there are abiotic and biotic differences among gap, understory and forest edge; (2) if the size of forest fragment influence the maintenance of microhabitats condition; (3) if the microhabitats differs on S. romanzoffiana seed survival; (4) if forest size influence on seed predation rate; (5) which structure characteristics evaluated are related with S. romanzoffiana seed predation; and (6) which structure characteristics are related with forest fragment area. We conclude that forest with less than 20 ha do not support abiotic and biotic distinction, with the forest edge overspread the whole reminiscent. In these forest fragments, we did not find any seed predated. Fragments with 230 to 380 ha had higher seed predation rates, with no differences among the tested microhabitats. Forest fragments with more than 1,000 ha differ among microhabitats biotic ally and idiotically, and had lower seed predation. We conclude that for Syagrus romanzoffiana populations be conserved in isolated forest areas with less than 1,000 ha are necessaries managing plans, as developing understory at remnants with the whole area under edge effect, and post-dispersed seed protection at fragments with high seed predation. The knowledge of the effects of forest fragmentation on angiosperms reproductive processes is essentially for managing, planning, restoration and conservation of forested areas.

Estudos de fauna em florestas homogêneas de plantio comercial são ainda incipientes no país. Essas áreas de reflorestamento apresentam poucos recursos necessários à vida silvestre, quando comparadas às florestas nativas. Entretanto, sub-bosques presentes nessas florestas homogêneas podem fornecer ofertas de alimento, abrigo, proteção, e o estabelecimento de um ambiente favorável à movimentação dos animais - otimizando assim o uso desses locais pela fauna silvestre. Este estudo foi realizado no Horto Florestal de Itatinga, uma área com predomínio de florestas de eucalipto (Eucalyptus spp), e com remanescentes de vegetação nativa (floresta estacional semidecidual, cerrado, cerradão e áreas ripárias), localizada no município de Itatinga, no estado de São Paulo. A fim de verificar se a presença e a densidade do sub-bosque nas florestas de eucaliptos influenciam no uso desses locais pelos mamíferos de médio e grande porte, foram comparados três tipos de ambientes de eucalipto: um talhão de eucalipto sem subbosque, um talhão de eucalipto com sub-bosque intermediário, e um talhão de eucalipto com subbosque denso. Em cada um desses ambientes foram colocadas 24 parcelas de areia (armadilhas de pegadas) com iscas alimentares (banana, bacon e sal), para a observação do número de pegadas dos animais nas mesmas. Foram verificados os números de registros, as freqüências de ocorrência e as abundâncias relativas das espécies de mamíferos em cada ambiente, durante 15 dias do inverno de 2004 (estação seca) e 15 dias do verão de 2005 (estação chuvosa). O número de registros foi maior no ambiente de eucalipto com sub-bosque denso, e a riqueza de espécies foi maior no eucalipto com sub-bosque intermediário. O teste do Qui-quadrado (χ2) mostrou diferença significativa no número de registros entre os três ambientes, e entre os períodos inverno e verão. Foram verificadas as categorias tróficas dos mamíferos levantados nesses locais, e observou-se que os animais encontrados foram, em sua maioria, animais de hábitos mais generalistas e pouco exigentes quanto ao habitat. Foram encontradas no total 10 espécies de mamíferos de médio e grande porte nesses ambientes de eucalipto. A curva do coletor não mostrou estabilização, indicando que ainda havia espécies a serem levantadas nesses três ambientes de eucaliptos. Foi também realizado um levantamento qualitativo dos mamíferos de médio e grande porte na área de estudo em geral. Para isso, foram observados registros diretos e indiretos da mastofauna, como visualização de animais, pegadas, fezes, pêlos, tocas e carcaças; foram efetuadas também entrevistas, e houve a instalação de uma câmera trap (armadilha fotográfica). Este levantamento geral ocorreu durante 75 dias (entre julho de 2004 e abril de 2005). Foram encontradas 27 espécies de mamíferos nesse levantamento, mas a curva do coletor aplicada a esses registros também não se estabilizou. A maioria dos animais levantados são de hábitos alimentares generalistas; entretanto, foram registrados pelo menos quatro espécies de carnívoros (mais exigentes quanto à qualidade do habitat). Foram acusadas as presenças de oito espécies de mamíferos ameaçados de extinção no Horto de Itatinga. / Fauna studies in homogeneous forests for commercial plantation purposes are still incipient in the country. These reforestation areas present a few resources necessary to the maintenance of wild life, when compared to the native forests. However, understories present in these homogeneous forests can provide food, shelter, protection and the establishment of a favorable environment to animal movement - thus, optimizing the use of these reforestation areas by the wild fauna. This study took place in the Horto Florestal de Itatinga, an area of mostly eucalypts forests (Eucalyptus ssp) and remaining fragments of native vegetation (semideciduous seasonal forests, savannah and riparian forests), located in Itatinga, state of São Paulo, Brazil. In order to verify if the presence and density of the understories in the eucalypt forests influence in the use of these locations by medium and large-sized mammals, three types of eucalypt environment were compared: a stand of eucalypt without understory, a stand of eucalypt with intermediate understory an a stand of eucalypt with dense understory. Each of these environments received 24 sand plots (tracking traps) containing alimentary baits (banana, bacon and salt), for the observation of the number of animal tracks in each one of them. Registry numbers, frequency of occurrence and the relative abundance of mammals species in each environment, throughout 15 winter days in 2004 (dry season) and 15 summer days in 2005 (wet season), were verified. In the eucalypt environment with dense understory record numbers were higher, and in the eucalypt environment with intermediate understory the richness of species was bigger. The chi-square test (χ2) showed significant difference in registry numbers among these three environments, as well as between winter and summer periods. Dietary categories of the mammals observed in these sites were verified, and most of the observed animals belonged to generalist species, and they were not so demanding concerning their habitat. Ten species of medium and large-sized mammals were found in these eucalypts environments all told. The collector’s curve was not stabilized, indicating that there were still other species to be surveyed in these three environments with eucalypts. A qualitative survey of medium and large-sized mammals in the study area in general, was also carried out. For this purpose, direct and indirect records of the mammals, as well as the visualization of these animals, their tracks, feces, hairs, burrows and carcasses were observed. Local people were interviewed and one camera trapping installed. This survey took place throughout 75 days (between July, 2004 e April, 2005). Twenty-seven species of mammals were found in this survey, but the collector’s curve was not stabilized too. Most of the animals observed in this study belonged to generalist species; but at least four species of carnivores (animals are more demanding concerning their habitat) were recorded. This study also accused the presence of eight endangered species in the Horto de Itatinga.

O câncer cervical é um dos tipos de câncer mais comuns entre as mulheres, e a infecção persistente pelos HPV-16 e HPV-18 é responsável por 70% dos casos. As vacinas profiláticas disponíveis possuem alta eficácia na prevenção da infecção pelos tipos mais prevalentes de HPV. No entanto, este tipo de abordagem não beneficia mulheres que já apresentam lesões precursoras ou tumores cervicais avançados, e a busca por abordagens terapêuticas para esse tipo de câncer é considerada uma necessidade. A qualidade do antígeno representa um aspecto fundamental para o sucesso de vacinas terapêuticas baseadas em proteínas recombinantes. Neste sentido, os sistemas de expressão em células eucarióticas, como leveduras e células de mamíferos são considerados adequados para a produção de proteínas com aplicação biotecnológica. O objetivo principal deste trabalho contemplou a expressão das proteínas de fusão gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 e a oncoproteína E7 do HPV-16 em células da levedura Pichia pastoris e expressão da gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 em células de mamífero HEK293T e CHODG-44 para obtenção de antígenos purificados com futura aplicação em vacinas terapêuticas contra tumores associados ao HPV-16 e HPV-18. Os genes que codificam as proteínas gDE7E6 dos HPV-16 e HPV-18 e da E7 do HPV-16 foram clonados no vetor pPIC9K, os quais foram linearizados por digestão enzimática e utilizados na transformação da P. pastoris. A expressão das proteínas foi analisada nos tempos de 24, 48, 72 e 96 horas, no entanto, não foi observada a produção das proteínas no sobrenadante e nem no lisado celular. Diante desta constatação, iniciamos a expressão das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e gDE7E6 do HPV-18 em células de mamíferos HEK293T e CHODG-44. As sequências genéticas das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 foram clonadas no vetor de expressão pNU1 e analisadas por digestão enzimática. Análises de SDS-PAGE e western blot demonstraram a expressão das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 em até 96 horas em células HEK293T. Em paralelo, realizamos a transfecção estável dos plasmídeos contendo as sequencias da gDE7E6 do HPV-16 e gDE7E6 do HPV-18 em células CHO-DG44. Com o intuito de aumentar a expressão das proteínas de interesse na população mista de CHODG-44, realizamos amplificação genômica com metotrexato (MTX), sendo possível observar aumento da expressão das proteínas, conforme aumento gradativo nas concentrações de MTX. Posteriormente, foram feitas tentativas para isolar um clone produtor das proteínas gDE7E6 HPV-16 e HPV-18, através de clonagem por diluição limitante e sistema automatizado, sendo possível isolar um clone para cada construção através de matriz semisólida, confirmado por western blot e citometria de fluxo. Apesar de demonstrar a expressão das proteínas de interesse em sistema de expressão baseado em células de mamífero, o rendimento obtido após a purificação por afinidade ao níquel foi extremamente baixo, o que dificulta a obtenção dos antígenos para fins vacinais. / Cervical cancer is one of the most common cancers among women, and persistent infection with HPV-16 and HPV-18 accounts for 70% of the cases. Available prophylactic vaccines are highly effective in preventing infection by the most prevalent types of HPV. However, this type of approach does not benefit women who already have precursor lesions or advanced cervical tumors, and the search for therapeutic approaches to this type of cancer is considered a necessity. Antigen quality represents a key aspect for the success of therapeutic vaccines based on recombinant proteins. In this sense, expression systems based in eukaryotic cells such as yeast and mammalian cells are considered suitable for the production of proteins with biotechnological applications. The main objective of this work was to express the gDE7E6 fusion proteins HPV-16 and HPV-18 and the E7 oncoprotein HPV-16 in Pichia pastoris and expression of gDE7E6 HPV-16 and HPV-18 in mammalian cells HEK293T and CHODG-44 to obtain purified antigens with future applications in therapeutic vaccines against HPV-16 and HPV-18 associated tumors. The genes encoding the gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 and E7 HPV-16 were cloned into the pPIC9K vector, which were linearized by enzymatic digestion and used in the transformation of P. pastoris. Expression of the proteins was analyzed at 24, 48, 72 and 96 hours, however, the production of the proteins in the supernatant and in the cell lysate was not observed. In light of this finding, we initiated the expression of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 in mammalian cells HEK293T and CHODG-44. The genetic sequences of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 were cloned into the pNU1 expression vector and analyzed by enzymatic digestion. SDSPAGE and western blot analyzes demonstrated expression of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 within 96 hours in HEK293T cells. In parallel, we performed stable transfection of plasmids containing gDE7E6 HPV-16 and HPV-18 sequences into CHODG44 cells. In order to increase the expression of the proteins in the mixed population of CHODG-44, we performed genomic amplification with methotrexate (MTX), and it was possible to observe an increase in protein expression, as a gradual increase in MTX concentrations. Therefore, attempts were made to isolate a clone producing gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 by limiting dilution and automated system, being possible to isolate one clone for each construct through a semisolid matrix, confirmed by western blot and flow cytometry. Despite observing protein expression in mammalian cell-based expression system, the yield obtained after nickel affinity purification was extremely low, which makes it difficult to obtain the antigens for vaccine purposes.