Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2009. / Submitted by Kelly Marques (pereira.kelly@gmail.com) on 2009-11-16T17:48:39Z No. of bitstreams: 1 2008_AnaMariaQuinteiroRibeiro.pdf: 722506 bytes, checksum: a724ba85f9f6c24dfa6f8951382e7363 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-11-17T12:23:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_AnaMariaQuinteiroRibeiro.pdf: 722506 bytes, checksum: a724ba85f9f6c24dfa6f8951382e7363 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-17T12:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_AnaMariaQuinteiroRibeiro.pdf: 722506 bytes, checksum: a724ba85f9f6c24dfa6f8951382e7363 (MD5) Previous issue date: 2009 / O melanoma é um câncer que acomete, sobretudo a pele, é o terceiro mais freqüente depois do carcinoma basocelular e do carcinoma espinocelular e se caracteriza clinicamente na maioria das vezes pela presença de mácula hipercrômica irregular. É considerado o mais grave dos cânceres de pele por induzir metástase mais freqüente, apresentar uma alta mortalidade, sobretudo em lesões com diagnóstico tardio e por ser resistente as terapêuticas disponíveis (quimio e radioterapia). A presente pesquisa propõe-se a descrever os fatores prognósticos de pacientes com melanoma cutâneo do Registro de Câncer de Base Populacional de Goiânia (RCBPG), entre janeiro de 1998 a dezembro de 2003, período em que foram registrados 245 casos novos de melanoma. Destes, 185 foram incluídos no estudo por serem portadores de melanoma cutâneo residirem no município de Goiânia. Os sessenta pacientes restantes foram excluídos da pesquisa por apresentarem melanoma com primário desconhecido, melanoma extracutâneo ou por residirem em outro município. Foram coletados, por meio de um questionário, dados do RCBPG dos pacientes que apresentavam diagnóstico apenas de melanoma cutâneo primário. Após a coleta desses dados, foi realizado um estudo descritivo do tipo coorte de base populacional. A importância prognostica de quatro variáveis histológicas (Breslow, Clark, tipo histológico e número de neoplasias primárias) e três variáveis clínicas (sexo, localização da lesão e extensão) foram estudadas no grupo de 185 pacientes com melanoma cutâneo e foram comparados com a literatura mundial. Os resultados do estudo evidenciaram que os homens apresentaram melanomas mais espessos em comparação com as mulheres, dado que se refletiu em uma maior mortalidade e uma menor sobrevida para o sexo masculino. Nos homens, as lesões localizadas no tronco foram mais freqüentes e, nas mulheres, as das extremidades inferiores. A localização na cabeça e pescoço foi mais freqüente em homens e mulheres acima de sessenta anos. O melanoma extensivo superficial foi o tipo histológico mais freqüente. O melanoma nodular, o segundo de maior freqüência (17%), estava associado a tumores mais espessos. O melanoma cutâneo localizado, sem metástase detectada, foi à extensão de maior freqüência. A metástase à distância foi mais freqüente do que a loco-regional para linfonodos. As principais características dos pacientes e do tumor relacionados a pior prognóstico foram: melanomas do tipo histológico nodular (RH: 5,11; p=0,001) tumores com maior espessura (> 1,70 mm) (RH:12,7; p≥0,02) e os localizados nos pés (RH:4,84; p=0,005). Esses fatores contribuíram para um maior número de óbito e uma menor sobrevida dos pacientes. O aumento do nível de Clark apresentou relação direta com maior número de óbito e com menor sobrevida, o que, não se traduziu em uma associação significativa com pior prognóstico. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Melanoma is a cancer that affects mostly the skin. It is the 3rd most frequent type of cancer, after basal cell carcinomas and squamous carcinomas and is clinically characterized by the presence of an irregular hyperchromic macula. It is considered the most serious type of skin cancer because it induces metastases more frequently, the mortality rate is high, especially in lesions diagnosed at a later stage, and finally because it is resistant to the therapeutic options currently available (chemotherapy and radiotherapy).This study aims to describe prognostic factors of patients with cutaneous melanoma, listed in the Population-Based Cancer Registry of Goiânia (RCBPG), from January, 1998 to December, 2003. During that period of time, 245 new cases of melanoma were recorded. From these 245 cases, 185 were included in the study as these individuals with cutaneous melanoma lived in the county of Goiânia. The remaining 60 individuals were excluded because they presented with a melanoma with an unknown primary, ocular melanoma, melanoma of the mucosa, genital melanoma, visceral melanoma or because they lived in another county. RCBPG data from the patients with a diagnosis of primary cutaneous melanoma were obtained by means of a questionnaire and served to perform a population-base cohort descriptive study. The prognostic importance of four histological variables (Breslow, Clark, histogenic type and number of primary neoplasms) and three clinical variables (sex, lesion site and extension) were studied in the series of 185 patients with cutaneous melanoma. The results of this study showed that men presented with thicker melanomas, when compared to women. This information translated into higher mortality and shorter survival time for male individuals. Lesions located in the trunk, followed by those in the head and neck were more frequently found in men and lesions in the lower limbs, followed by locations in the head and neck were more commonly found in women. A head and neck location was more frequent in men and women above 60 years of age. Extensive superficial melanomas were the predominant histogenic type. Nodular melanomas were the second more frequent types (17%) and were associated to thicker tumors. The most frequent extension was the in situ cutaneous melanoma. Distant metastases were more frequent than those in loco or regional, for lymph nodes. During the time this study was conducted, no sentinel lymph node biopsies were performed to evaluate micrometastases of melanomas and this may have contributed to the result. The main characteristics of patients and of tumors related to the worst prognosis were: nodular melanomas (RH: 5,11; p=0,001), thicker tumors (>1.70 mm) (RH:12,7; p≥0,02) and those located in the feet (RH:4,84; p=0,005). These factors contributed to more deaths and a shorter survival time of the patients included in this study. The increase in the Clark level showed a direct relationship to a higher number of deaths, with a shorter survival time. However, this was not translated as a negative association with the worst prognosis in this study.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-23T10:37:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2300731 bytes, checksum: d8cd620baef33c7e3c5968d3accaefda (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T10:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2300731 bytes, checksum: d8cd620baef33c7e3c5968d3accaefda (MD5) Previous issue date: 2017-08-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O melanoma cutâneo é um problema de saúde pública mundial, por ser um tumor sólido altamente metastático. Compostos sintéticos têm sido desenvolvidos no intuito de combater atividades das células tumorais, como migração, invasão, adesão e proliferação. Dentre eles, compostos derivados do ácido cinâmico e isobenzofuranonas têm apresentado importante atividade antimetastática. Por isso, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimetastática in vitro de dois grupos de compostos, 26 compostos derivados do ácido cinâmico e 25 isobenzofuranonas, frente ao comportamento metastático de células de melanoma cutâneo murino B16-F10. Inicialmente, determinou-se a concentração não citotóxica de derivados destes dois grupos químicos frente à linhagem B16-F10. Como a concentração de 100 μmol L −1 foi aquela considerada não citotóxica, todos os ensaios subsequentes foram realizados utilizando concentrações inferiores ou iguais a esta. Posteriormente, os compostos derivados do ácido cinâmico e as isobenzofuranonas foram avaliados quanto ao efeito antimigratório sobre células B16-F10. Os compostos 9a e 1f foram mais efetivos nas concentrações de 100 μmol L −1 e 50 μmol L −1 . Tanto o composto 9a, um derivado do ácido cinâmico com porção 1,2,3-triazólica contendo um grupo fenilo, quanto o composto 1f, uma isobenzofuranona funcionalizada na posição C3 contendo hidroxilas nas posições C-2' e C-6' do anel aromático, apresentaram atividade antimetastática e antiproliferativa significativa contra células B16-F10. No caso do composto 9a, seu efeito biológico foi atribuído à sua interação com o sítio ativo das metaloproteinases -9 e -2 pelo estudo de docking molecular. Já para o composto 1f, sugerimos que seu efeito inibidor é devido à sua interação com proteínas PKC. Os dois compostos derivados apresentam uma característica em comum, que é a presença de estruturas químicas heterocíclicas na sua composição. Em conclusão, nossos resultados mostraram que derivados do ácido cinâmico podem inibir o comportamento metastático de células B16-F10 in vitro, possivelmente por interferir na atividade de metaloproteinases de matriz. Adicionalmente, nossos resultados mostraram pela primeira vez que isobenzofuranonas sintéticas podem inibir a invasividade de células B16-F10 in vitro. Portanto, os compostos 9a e 1f apresentam potencial para o uso no desenvolvimento de novos candidatos para o tratamento do melanoma cutâneo. / Cutaneous melanoma is a worldwide public health problem because it is a highly metastatic solid tumor. Synthetic compounds have been developed in order to inhibit activities of tumor cells, such as migration, invasion, adhesion and proliferation. Among them, compounds derived from cinnamic acid and isobenzofuranones have shown important antimetastatic activity. Therefore, the objective of this study was to evaluate the in vitro antimetastatic activity of two groups of compounds, 26 compounds derived from the cinnamic acid and 25 isobenzofuranones, against the metastatic behavior of murine cutaneous melanoma cells B16- F10. Initially, the non-cytotoxic concentration of the derivatives was determined against the B16-F10 cells. As the concentration of 100 μmol L −1 was non-cytotoxic, all subsequent assays were performed using concentrations below or equal to this. Subsequently, the compounds derived from cinnamic acid and isobenzofuranone were evaluated for the anti-migratory activity on B16-F10 cells. Compounds 9a and 1f were more effective at 100 μmol L −1 and 50 μmol L −1 concentrations. Both compound 9a, a 1,2,3-triazolic-cinnamic acid derivative containing a phenyl group, and compound 1f, a isobenzofuran derivative functionalized at C-3 position, showed significant antimetastatic and antiproliferative activities against B16-F10 cells. In the case of compound 9a, its biological effect was attributed to its interaction with the active site of metalloproteinases -9 and -2 by the molecular docking study. For compound 1f, we suggest that its inhibitory effect is due to its interaction with PKC proteins. Both derivatives have one feature in common, which is the presence of heterocyclic chemical structures in their composition. In conclusion, our results showed that cinnamic acid derivatives can inhibit the metastatic behavior of B16-F10 cells in vitro, possibly by interfering with the activity of matrix metalloproteinases. In addition, our results showed for the first time that synthetic isobenzofuranone derivatives can inhibit the invasiveness of B16- F10 cells in vitro. Therefore, compounds 9a and 1f have potential structures for the development of novel candidates for the treatment of cutaneous melanoma. / O autor não colocou seu nome completo na ficha catalográfica. Faltou "de Almeida".

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-22T18:55:44Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Parcial (Cap. 1-4) - Gleyce Jobim.pdf: 2210980 bytes, checksum: 9e8c7525474f1ea2b8e5a9f527b325cb (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-22T18:56:02Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Parcial (Cap. 1-4) - Gleyce Jobim.pdf: 2210980 bytes, checksum: 9e8c7525474f1ea2b8e5a9f527b325cb (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-22T18:56:02Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Parcial (Cap. 1-4) - Gleyce Jobim.pdf: 2210980 bytes, checksum: 9e8c7525474f1ea2b8e5a9f527b325cb (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2017-04-28 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Unlike most other tumors, the incidence of malignant cutaneous melanoma has increased in the last 30 years. This is responsable for 75% of skin cancer deaths. Many molecular pathways involved in melanomogenesis have already been identified. However, there is still no chemotherapy protocol that guarantees long-term life expectancy. Nitrostyrene compounds are related to antitumor activities since 1975, however, there are no reports of this efficacy on melanoma. In vitro and in vivo antineoplastic effects of the synthetic nitrostyrene derivative 4-chloro-1-nitro-2-phenylethene (7E) were tested in several cell lineages, especially melanoma (SK-Mel-3 and B16F10). Cell viability was assessed by the Alamar Blue® test. Cell cycle, apoptosis, reactive oxygen species (ROS) and mitochondrial depolarization were evaluated by flow cytometry. Caspases 9 and 3, JNK, p38, Bcl-2 and ERK expressions were determined by western blotting. We performed the murine melanoma model to verify the efficacy and toxicity in vivo. Our observations indicate that 7E is cytotoxic to several neoplastic lines, especially melanoma, IC50 of 3.13 μg/mL in SK-Mel-3 and 1.48 μg/mL in B16F10. We found out that 7E increased the level of intracellular reactive oxigen and nitrogen species (ROS/RNS). Furthermore, it increased expression of JNK, p38 and ERK, and reduced expression of Bcl-2. This leads to mitochondrial depolarization, possibly permeabilization of the outer membrane of the mitochondria and the release of cytotoxic proteins (DIABLO / Smac, AIF, ENDOG and CYTC), and the activation of caspase-9 and caspase-3, resulting in apoptotic cell death. The effects of 7E are antagonized by antioxidant pretreatment, confirming the unequivocal importance of increased ROS/RNS in this process. 7E also suppressed in vivo tumor growth by up to 47.8% under the tested conditions. The systemic toxic effect investigation revealed few significant alterations, highlighting the increase of serum urea biochemical dosage. There were no relevant changes in body mass, organ mass and haematological parameters. Tumor histology revealed necrosis and inflammation with microabcess areas, as well as invasion of adipose tissue with phagocytic reaction in animals treated with 7E. Animals treated with 7E had moderate hepatic alterations including necrosis, degeneration and congestion, renal alterations such as focal congestion, hemorrhage and glomerular sclerosis, reduction of the occurrence of pulmonary metastasis and maintenance of the architecture and normal cardiac morphology. Our findings suggest that 7E may have the potential to be further developed as an anticancer compound, especially for melanoma. / Diferente da maioria dos outros tumores, a incidência de melanoma cutâneo maligno vem aumentando nos últimos 30 anos. Esse subtipo de neoplasia é responsável por 75% das mortes por câncer de pele. Muitas vias moleculares envolvidas na melanomogênese já foram identificadas. No entanto, ainda não há um protocolo quimioterápico que garanta expectativa de vida a longo prazo. Compostos nitroestirenos são relacionados a atividades antitumorais desde 1975, no entanto, não há relatos dessa eficácia sobre o melanoma. A atividade antineoplásica in vitro e in vivo do derivado nitroestireno sintético 4-cloro-1-nitro-2-fenileteno (7E) foi testada em diversas linhagens celulares, com destaque para as de melanoma (SK-MEL-3 e B16F10). A viabilidade celular foi avaliada pelo teste de Alamar Blue®. Ciclo celular, apoptose, acúmulo de espécies reativas de oxigênio e despolarização mitocondrial foram avaliadas por citometria de fluxo. A expressão de caspases 9 e 3, JNK, p38, Bcl-2 e ERK foram determinadas por western blotting. E a eficácia e toxicidade in vivo foram verificadas em modelo de melanoma murino. Nossas observações experimentais indicam que o composto 7E é citotóxico sobre diversas linhagens neoplásicas, sobretudo as de melanoma, com CI50 de 3,13 μg/mL em SK-MEL-3 e 1,48 em B16F10. O composto induz ao acúmulo de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio (EROs/ERNs), causando aumento da expressão de JNK, p38 e ERK e redução da expressão de Bcl-2. Isso leva à despolarização mitocondrial, provável permeabilização da membrana externa da mitocôndria e liberação de proteínas citotóxicas (DIABLO/Smac, AIF, ENDOG e CYTC), ativação de caspase-9 e caspase-3, resultando em morte celular por apoptose. Os efeitos de 7E são antagonizados pelo pré-tratamento com antioxidante, confirmando a inequívoca importância do acúmulo de EROs/ERNs nesse processo. 7E possui ainda efetiva ação in vivo promovendo inibição do crescimento tumoral de até 47,8% do volume nas condições testadas. A investigação do efeito tóxico sistêmico revelou poucas alterações significativas, destacando-se a elevação bioquímica da dosagem sérica de ureia. Não foram observadas alterações relevantes de massa corporal, massa dos órgãos e parâmetros hematológicos. A histologia do tumor revelou necrose e inflamação com áreas de microabcesso, além de invasão de tecido adiposo com reação fagocitária nos animais tratados com 7E. A histologia dos órgãos dos animais tratados com 7E revelou alterações hepáticas moderadas incluindo necrose, degeneração e congestão, alterações renais como congestão focal, hemorragia e esclerose glomerular, redução da ocorrência de metástase pulmonar e manutenção da arquitetura e morfologia cardíaca normal. Sendo assim, 7E tem potencial para ser desenvolvido como agente quimioterápico, sendo necessário mais estudos pré-clínicos e clínicos, que confirmarão sua utilidade na terapia antitumoral, sobretudo sobre o melanoma.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-04-18T13:37:34Z No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Entre os tipos de câncer de pele, o melanoma é responsável por 4% dos casos. É o mais agressivo, por possuir um alto potencial metastático. Como proposta para um tratamento mais efeciente e que cause menos danos estéticos, foi utilizada a Terapia Fotodinâmica (TFD) como um sistema que proporcionasse uma futura utilização por via tópica. No presente trabalho as micelas de Pluronic® F127 contendo 1, 5 e 10 μg/mL do fotossensibilizante alumínio-cloro-ftalocianina (NP F127/AlClPc), as micelas foram utilizadas para investigar os efeitos da TFD em células de melanoma murino. NP F127/AlClPc foram avaliadas quanto a sua estabilidade e caracterização fotofísica e fotoquímica O diâmetro hidrodinâmico (DH) médio de NP F127/AlClPc com 1 μg/mL de ALCLPc foi de 22 nm ; 42,03 nm para 5 μg/mL e 152,9 nm para 10 μg/mL a ~25 °C. O índice de polidispersão foi 0,43 para 1 μg/mL; 0,68 para 5 μg/mL; 0,37 para 10 μg/mL, e o potencial zeta (PZ) de -2,71mV para 1 μg/mL; -0,11mV para 5 μg/mL e -0,58 mV para 10 μg/mL, mostrando que as micelas são polidispersas. NP F127/AlClPc apresentou máxima absorbância a 670 nm e fluorescencia a 680 nm.Duas linhagens celulares foram utilizadas: B16F10 (melanoma murino) e B16F10FF (melanoma murino modificadas com FireFly Luciferase). Somente a irradiação com a luz LED ou a exposição das células a diferentes concentrações de NP F127/AlClPc não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. Quando aplicada a TFD com fluência de 85,1 J/cm2. Os resultados de citotoxicidade da NP F127/AlClPc, com vários tempos de incubação, mostrou uma maior eficácia em células B16F10 do que em células B16F10FF. A concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL;10 μg/mL mostraram-se mais eficaz no tempo de incubação de 20 e 25 minutos para as células B16F10. Pelo mesmo tempo de exposição de 25 minutos, as células B16F10FF mostraram-se mais resistentes ao tratamento. A citotoxicidade sem irradiação e com irradiação do LED mostrou que as micelas não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. As células expostas à NP F127/AlClPc nas concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL; 10 μg/mL por 15, 20 e 25 minutos e irradiadas com a fluência de 85,1 J/cm2, mostraram que células B16F10 tratadas com a NP F127/AlClPc 10 μg/mL apresentaram viabilidade de 25%, enquanto as células B16F10FF sob as mesmas condições apresentaram viabilidade de 64%. A citotoxicidade nas células B16F10FF foi de 7% para o tempo de incubação de 20 minutos e de 3 a 4% nos tempos de 15 e 25 minutos, quando estas células sofream duas incubações (24-48 horas) e duas aplicações de TFD (24-48 horas). Pode-se concluir então que, a NP F127/AlClPc apresentou características fotofísicas e fotoquímicas favoráveis para o seu uso da TFD. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Melanoma accounts for 4% of cases among skin cancer types. But it is the most aggressive with a high metastatic potential. Photodynamic therapy (PDT) was used as an alternative efficient and less damage inducing treatment in comparison to chemotherapy for topical application. In the present work Pluronic® F127 micelles containing 1, 5 and 10 μg /mL of the photosensitizer aluminum-chlorophthalotocyanine (F127/AlClPc). The micelles were used to investigate the effects of PDT on murine melanoma cells. Their stability, photophysical characteristics and photochemistry was evaluated. The hydrodynamic diameter for the micelles carrying 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL was 22nm, 42.04nm and 152.9nm respectively. The poly dispersity index for the micelles with 1mg/mL, 5mg/mL and 10mg/mL were 0.43, 0.68 and 0.37 respectively. The zeta potential for the micelles with 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL F127/AlClPc were -2.7mV,-0.11mV and -0.58mV. The micelles showed maximum absorbance at 670nm and fluorescence at 680nm. Two cell lines were evaluated B16F10 (murine melanoma) and B16F10FF (murine melanoma modified with firefly luciferase). The irradiation of LED with light or with different concentration of F127 / AlClPc did not cause toxicity to both cell lines when the PDT fluent was 85.1 J / cm2. The cytotoxity results of the micelles F127/AlClPc at various incubation times was more prominent with B16F10 than B16F10FF. The concentration of 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL were more effective against B16F10 cells when incubated for 20 minutes and 25 minutes. However, for B16F10FF cells they were resistant to treatment after 25 minutes of incubation. The cytotoxicity with either irradiation or without showed that the micelles did not cause toxicity to both cells. Upon exposure to 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL for 15, 20 and 25 minutes and irradiation of fluency 85.1 J / cm2 B16F10 presented a viability of 25% while B16F10FF had 64%. After incubation of 15, 20 and 25 minutes the cytotoxicity of B16F10FF cells was 3%, 7% and 4% respectively when the cells were incubated (24-48 hours) and PDT was applied twice (24-48 hours). It can be concluded that the micelles with F127 / AlClPc presented photophysical and photochemical characteristics favorable for use in photodynamic therapy.

Submitted by Lúcia Brandão (lucia.elaine@live.com) on 2015-12-09T17:59:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Carolina Lima Ralph.pdf: 3508510 bytes, checksum: b16bff00de46cca4fb42ff6771b3f824 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T19:19:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Carolina Lima Ralph.pdf: 3508510 bytes, checksum: b16bff00de46cca4fb42ff6771b3f824 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T19:21:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Carolina Lima Ralph.pdf: 3508510 bytes, checksum: b16bff00de46cca4fb42ff6771b3f824 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-19T19:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Carolina Lima Ralph.pdf: 3508510 bytes, checksum: b16bff00de46cca4fb42ff6771b3f824 (MD5) Previous issue date: 2014-03-28 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cancer is a public health problem and thesecond cause of death worldwide. Among many types of cancer, cutaneous melanoma has a notable increasing incidence, high aggressiveness and poor survival. Alternative therapy has been investigated like signaling pathways and molecular mechanisms of target specific genes and proteins of melanoma. Taking into account the antitumor activity of biflorin, substance isolated from Capraria bifloraroots, which is cytotoxic in vitro in many tumor cell lines and antitumor activity in vivolike Erlich and Sarcoma 180. This study aimed to show the activity of biflorin in three different strains of human melanoma - SK -Mel 19, 28 and 103. The study model with three cell lines provided a comparison of the effect of biflorin in different common mutations of human melanomas cell lines.Were evaluated the cytotoxic capacity, cell death mechanism, genotoxic capacity and changes in the expression of BRAF, MELK, TYMS, RAD, MGMT, DNMT1, DNMT3B, MBD1, MBD2, MBD3, MBD4, MeCP2. The biflorin, as well as the agents doxorubicin and dacarbazine (positive control), inhibited proliferation of the three human melanoma cell lines studied and was more cytotoxic against SK-Mel 103, followed by SK-Mel 19 and SK-Mel 28.The IC50mean of biflorin at all times and tested strains were 3.23 ± 0.83 μM, ranging from 1.54 to 9.2 μM. Through crystal violet staining of cells treated with biflorin revealed morphological changes like cytolysis with increased of scattered cellular debris, cytoplasm vacuolization, disruption of chromatin with empty nuclear space. Additionally, in the differential staining LA /BE , we observed an increase in the number of apoptotic cells as there was an increase in the concentration of biflorin, however, the number of necrotic cells did not change. Comet assay revealed a production of single and double strand breaks after treatment with biflorin at concentrations of 2.5 and 5.0 μM. At modified comet assay was observed inhibition of methylationat all concentrations tested at SK-Mel 19 and 28. Biflorin also have shown to decrease the expression of methylation genes DNMT1, MBD1, MBD2, MBD3, MBD4 andMeCP2,genes of cell cycle progressionMELK, gene of DNA replication TYMS,and DNA repair genesRAD and MGMT. The results presented here may indicate the biflorin as animportant cytotoxic agent. / O câncer é um problema de saúde pública e a segunda causa de morte no mundo. Dentre os variados tipos de neoplasias, o melanoma cutâneo destaca-se por sua crescente incidência, alta agressividade e baixa sobrevida. Como alternativa terapêutica tem se investigado as vias de sinalização e mecanismos moleculares de genes e proteínas alvo-específicas do melanoma. Levando-se em consideração a atividade antitumoral da biflorina, substância isolada das raízes da Capraria biflora, que já possui comprovada atividade citotóxica in vitro em diversas linhagens tumorais e in vivoem modelo de carcinoma de Erlich e sarcoma 180. O presente trabalho objetivou mostrar a atividade da biflorinafrente três diferentes linhagens de melanoma humano - SK-Mel 19, 28 e 103. O modelo de estudo com as três linhagens celulares proporcionou a comparação do efeito da biflorina em diferentes mutações comuns em melanomas humanos quanto à sua capacidade citotóxica, mecanismo de morte celular, capacidade genotóxica e alteração na expressão dos genes BRAF, MELK, TYMS, RAD, MGMT,DNMT1, DNMT3B, MBD1, MBD2, MBD3, MBD4, MeCP2. A biflorina, assim como os agentes quimioterápicos doxorrubicina e dacarbazina (controles positivos), inibiu a proliferação celular das três linhagens de melanoma humano estudados, sendo mais citotóxica contra SK-Mel 103, seguida pela SK-Mel 19, e menos citotóxica à SK-Mel 28.A média da CI50 da biflorina em todos os tempos e linhagens testados foi de 3,23 ± 0,83μM, variando de 1,54 μMa 9,2 μM pelo método alamar blue. Avaliando a citotoxicidade pelo teste de exclusão por azul de tripan, a biflorina causou diminuição de células viáveis com consequente aumento de células não-viáveis de forma concentração e tempo dependentes. Através da coloração cristal violeta das células tratadas com biflorina, observaram-se alterações morfológicas de citólise com aumento de restos celulares dispersos, vacuolização do citoplasma, desarranjo da cromatina com áreas claras ou espaço nuclear vazio. Adicionalmente, na coloração diferencial LA/BE, foi observado um aumento no número de células apoptóticas de forma concentração dependente, entretanto, o número de células em necrose não variou. No teste do cometa evidenciou-se a produção de quebras de fita simples e dupla de DNA pela biflorina nas concentrações de 2,5 e 5,0 μM. Já no teste do cometa modificado observou-se inibição da metilação em todas as concentrações testadas nas SK-Mel 19 e 28, o mesmo não ocorreu na SK-Mel 103. A biflorina também se mostrou capaz de diminuir a expressão de genes da metilação DNMT1, DNMT3A, MBD1, MBD2, MBD3, MBD4, MeCP2, de progressão do ciclo celular MELK, replicação do DNA TYMS e reparo do DNA RAD e MGMT. Os resultados aqui apresentados apontam a biflorina como um importante agente citotóxico em linhagem de melanoma humano.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JULIANA SAYURI SUGITA INUMARU.pdf: 977119 bytes, checksum: dd9451c21f0c8b8df529c718c8cf5860 (MD5) Previous issue date: 2012-08-24 / Melanoma comprises about 4% of skin cancers, however, more than 95% of stage IV melanoma patients will die within five years and most patients will succumb in a year. The most commonly mutated gene in melanoma is BRAF V600E mutation, described in 40-70% of cutaneous melanomas. This mutation results in the substitution of valine for glutamic acid in codon 600, resulting in the active form of the protein. The objective of this study was to investigate the frequency of BRAF V600E mutation in patients diagnosed with melanoma in Goiânia, as well as the possible associations between this mutation and clinical-pathological aspects of the cases analyzed. Seventy seven cases of melanoma from the Pathology Departament of Araújo Jorge Hospital, in Goiânia, Goiás were analized. Molecular analysis was performed by PCR and RFLP. Descriptive and comparative statistical analysis with Chi-square test were used in this study. The results demonstrated the presence of V600E mutation in 54 (70,1%) patients with cutaneous melanoma and no statistically significant association was found between the presence of mutation with other prognostics parameters such as age, gender, sun exposure, anatomic location, presence of metastasis, histological subtypes and histological parameters (Breslow thickness, presence of ulceration, signs of regression, lymphocytic infiltration and presence of satellites). Our results suggest that BRAF V600E mutation is a common event in melanomas and represents an important molecular target for therapeutic approaches in the treatment of this neoplasia. / O melanoma representa 4% das neoplasias malignas da pele, no entanto, mais de 95% dos pacientes com melanoma estágio IV irão morrer em cinco anos e a grande parte dos pacientes irá sucumbir em um ano. O gene mutado mais comumente no melanoma é o BRAF e a mutação V600E é descrita em 40 a 70% dos melanomas cutâneos. Tal mutação resulta na substituição da valina por ácido glutâmico no códon 600, resultando na forma ativa desta proteína. O objetivo desse estudo consistiu em investigar a frequência da mutação V600E do gene BRAF, em pacientes diagnosticados com melanoma em Goiânia, bem como as possíveis associações, entre tal mutação e os aspectos clinico-patológicos dos casos analisados. Para isso foram analisados 77 casos de melanoma do Setor de Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge, em Goiânia, Goiás. A análise molecular foi realizada por PCR e RFLP. Análise estatística descritiva e comparativa com o teste Chi-quadrado foi usado neste estudo. A mutação V600E do gene BRAF foi encontrada em 54 (70,1%) pacientes portadores de melanoma cutâneo e nenhuma associação estatisticamente significativa foi detectada entre a presença de mutação com outros parâmetros prognósticos como idade, gênero, exposição solar, localização anatômica, presença de metástases, subtipo histológico e parâmetros histológicos (índice de Breslow, presença de ulceração, sinais de regressão, infiltração linfocitária e presença de satélites). Nossos resultados permitem concluir que a mutação V600E de BRAF é um evento comum nos melanomas e que representa um alvo molecular importante para as abordagens alvo dirigidas no tratamento desta neoplasia.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1122324 bytes, checksum: af57866f20e8ad39229542ca779884e9 (MD5) Previous issue date: 2005-04-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Thirty nine cases (42 lesions) of melanocytoma and nineteen cases (19 lesions) of canine cutaneous melanoma were analyzed clinic and histopathologically. The melanocytomas affected the young animals as well as the old ones, without a sexual predisposition. The most affected dogs were the ones of the Schnauzer and Doberman breed, being followed by those without a defined breed. Most lesions appeared solitarily and located in the eyelid, interdigital and thoraxes regions. Generally, the lesions were papuled, no haired, non adhering, black colored, with a firm consistency and a mean diameter of 1,2 cm. Recurrence and metastases were not seen. Such fact confirms the good prognostic associated to melanocytomas. Histopathologically, was observed that the dermal sub-type was the most frequent. There was no significant difference among the various regions affected by the dermal and compound melanocytomas. Four cell types were observed, with most lesions showing a combination of fusiform and big round cells. The cells presented different modes of arrangements and, the most observed was the solid, associated or not with the teaks. Collagenous bars, not very cellular, more eosinofilic, dense and hialin than the normal, composed the stroma. The benign biological behavior of melanocytomas corresponded to the histological appearance. The melanomas affected the older animals, without a sexual predisposition. The most affected dogs were the ones without a defined breed, being followed by those of the Rottweiler, Pinscher, Cocker Spaniel and Airedale breed. The lesions appeared solitarily and located on the lips and eyelid. Most tumors were ulcerated and nodular, with a firm consistency, with a mean diameter of 2,5cm. Some lesions presented recurrence. Metastases could not be proven. Among the cases with a known clinical segment, some were cured through a surgical procedure, however, the majority died, probably related to a neoplasm disease, confirming the bad prognostic related to melanoma. Histopathologically, lesions with dermal and junction activities were observed, being the pagetoid infiltration a not frequent finding. Four cell types were observed, however, the fusiforms and epithelioid groupings were the most frequent. The cell presented different modes of arrangements, but the solid, associated or not to teaks, was the most observed. The stroma came, most of the times, scarce, not very cellular, desmoplastic and with discreet collagenous bars. The histopathology analysis could predict approximately 60% of the melanoma malign behavior. / Foram analisados os aspectos clínicos e histopatológicos de 39 casos (42 lesões) de melanocitoma e 19 casos (19 lesões) de melanoma cutâneos caninos. Os melanocitomas acometeram tanto animais jovens como idosos, sem predisposição sexual. Neste estudo, os cães mais acometidos foram os da raça Schnauzer e Doberman, seguidos por aqueles sem raça definida. Clinicamente, a maioria das lesões apresentou-se solitária e localizada na região palpebral, interdigital e torácica. Geralmente, as lesões eram papulares, alopécicas, não aderidas, enegrecidas, com consistência firme e diâmetro médio de 1,2 cm. Recidivas e metástases não foram observadas, confirmando o bom prognóstico associado aos melanocitomas. Histopatologicamente, observou-se que o subtipo dérmico foi o mais freqüente. Quatro tipos celulares foram observados, tendo a maioria das lesões apresentado a combinação de células fusiformes e redondas grandes. As células apresentaram diversos arranjos celulares e os mais observados foram o sólido associado ou não a tecas. O estroma mostrou-se composto por traves colagênicas, pouco celular, mais eosinofílico, denso e hialino que o normal O comportamento biológico benigno dos melanocitomas correspondeu à aparência histológica Os melanomas acometeram animais mais idosos, sem predisposição sexual. Os cães mais acometidos foram os sem raça definida, seguida por aqueles das raças Rottweiler, Pinscher, Cocker Spaniel, Airedale. Clinicamente, as lesões apresentaram-se solitárias e localizadas freqüentemente no lábio e na pálpebra. A maioria dos tumores apresentou-se ulcerado, nodular, com consistência firme e diâmetro médio de 2,5 cm. Algumas lesões apresentaram recidivas. Metástases não puderam ser comprovadas. Dos casos com seguimento clínico conhecido, alguns foram curados pelo procedimento cirúrgico, entretanto, a maioria apresentou óbito, provavelmente relacionado à doença neoplásica, confirmando o prognóstico ruim associado ao melanoma. Histopatologicamente, freqüentemente foram observadas lesões com atividade juncional e dérmica, tendo sido a infiltração pagetóide um achado pouco freqüente. Observaram-se quatro tipos celulares, porém, o grupamento de células fusiformes e epitelióides foi o mais freqüente. As células apresentaram diversos arranjos celulares, mas o sólido associado ou não a tecas foi o mais observado. O estroma apresentouse, na maioria das vezes, escasso, pouco celular, desmoplásico e com discretas traves colagênicas. O exame histopatológico permitiu predizer aproximadamente 60 % do comportamento maligno do melanoma.