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Produ??o das prote?nas recombinantes AM254, VirB9 e VirB10, de Anaplasma marginale e avalia??o preliminar de sua antigenicidade. / Production of recombinant proteins AM254, VirB9 and VirB10 of Anaplasma marginale and preliminary evaluation its antigenicity.

Costa, C?tia Marques da 28 February 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Catia Marques da Costa.pdf: 899456 bytes, checksum: b8d00f84cefd48cf338e385b27121da0 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Anaplasma marginale (Ricktsialles: Anaplasmataceae) is a ricketsial hemoparasite responsible for causing great economic losses in cattle from tropical and subtropical regions. The objectives of this work were to produce the recombinant membrane proteins AM254, VirB9 and VirB10 and to evaluate its possible antigenicity. The genes am254, virB9 and virB10 were submitted to various experiments and were , linked to pET47 (b) plasmid. After the certification of the recombinant plasmid (pET-47-am254, pET-47-virB9 and pET-47- virB10), it was transformed into E. coli Rosetta cells for expression. The recombinant proteins produced, were analyzed by Western blot assay where the reaction of the anti-histidin monoclonal antibody against rAM254 (47kDa), rVirB9 (31kDa) and rVirB10 (60kDa) was observed. After the confirmation of the production of recombinant proteins the indirect Enzyme-Linked Immnunosorbent Assay (ELISA) was standardized with sera previously confirmed by PCR and ELISA (rMSP1 and rMSP5). The averages of the optic densities (OD) of the positive sera were of 1.339; 1.288 and 1.240 and of the negative sera of 0.470, 0.324 and 0.414 for AM254, VirB9 and VirB10 respectively with significant difference to the level of 5% between positives and negatives for each recombinant protein. The study demonstrated that the proteins rAM 254, rVirB9 and rVirB10 of A. marginale are recognized by sera of bovines immunized by different Brazilian isolates of the ricketsia (homologous and heterologous), showing the antigenicity potential of these proteins. / Anaplasma marginale (Ricktsialles: Anaplasmataceae) ? uma riquetsia intraeritroc?tica, respons?vel por ocasionar grandes perdas econ?micas na pecu?ria bovina das regi?es tropical e sub-tropical. O objetivo desse trabalho foi produzir as prote?nas de membrana recombinantes AM254, VirB9 e VirB10 e avaliar sua poss?vel antigenicidade. Os genes am254, virB9 e virB10 foram submetidos a v?rios procedimentos experimentais at? serem ligados ao plasm?deo pET-47b(+). Ap?s a certifica??o do plasm?deo recombinante (pET-47bam254, pET-47b-virB9 e pET-47bvirB10) este foi transformado em E. coli Rosetta para express?o. As prote?nas recombinantes produzidas foram analisadas pelo ensaio Western blot onde foi observada a rea??o do anticorpo monoclonal anti-histidina contra rVirB9 (31kDa), rVirB10 (60kDa) e rAM254 (47kDa). Ap?s a confirma??o da produ??o das prote?nas recombinantes realizou-se a padroniza??o do ensaio de imunoadsor??o enzim?tica (ELISA) indireto com soros oriundos de sangue total previamente confirmados por PCR; os mesmos soros tamb?m foram testados por ELISA (rMSP1 e rMSP5). As m?dias das densidades ?pticas (DO) dos soros positivos foram de 1,339; 1,288 e 1,240 e dos soros negativos de 0,470, 0,324 e 0,414 para AM254, VirB9 e VirB10 respectivamente com diferen?a significativa ao n?vel de 5% entre positivos e negativos para cada prote?na recombinante. O estudo demonstrou que as prote?nas rAM 254, rVirB9 e rVirB10 de A. marginale s?o reconhecidas por soros de bovinos imunizados com diferentes isolados brasileiros da riqu?tsia (hom?logo e heter?logos), revelando o potencial antig?nico dessas prote?nas.
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Efeito de diferentes fontes de sangue sobre a performance reprodutiva de Aedes aegypti L., 1762 (D?ptera: Culicidae) alimentados atrav?s de membrana de silicone / Effect of different blood sources on the reproductive performance of Aedes aegypti L., 1762 (Diptera: Culicidae) fed through silicone membrane device

PINA, Isabelle Garcia 30 September 1997 (has links)
Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-02-14T17:34:23Z No. of bitstreams: 1 1997 - Isabelle Garcia Pina.pdf: 529649 bytes, checksum: d067fa62978c5955301ef929db0ee4f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-14T17:34:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1997 - Isabelle Garcia Pina.pdf: 529649 bytes, checksum: d067fa62978c5955301ef929db0ee4f8 (MD5) Previous issue date: 1997-09-30 / CNPq / This experimental work with Aedes aegypti L. (1762) was conducted in order to compare the effect of differents blood sources on feeding and egg production of mosquitoes? females. The blood-feeding device consisted of a plastic cage ? used for holding females during blood feeding ? with two lateral windows recovered with thin cloth to allow air exchange during feeding. In the top of the cage, there was an opening where the food?s container, recovered with silicone membrane, was attached. A larger vial filled with water at the initial temperature of 50 ?C was used over the apparatus to keep the food source warm (37,5 ? 0,5%). In each trial, three different treatments were tested: whole blood collected from mouse, bovine and human. To prevent coagulation, a 3,9% solution of sodium citrate was added to the blood. The control group was allowed to feed directly on human volunteers. The experiment was conducted in a climatic chamber, with temperature and humidity controlled at 28?0,5 ?C and 80?5%, respective values and the photoperiod of 12 hours of light and 12 hours of darkness. In each tested group, 30 females and 10 males mosquitoes were used. The females were allowed to feed during a period of 20-30 minutes and after that only the engorged females were transferred to another cages containing the oviposition sites. To evaluate the effect of different sources of blood on A. aegypti, the percentage of engorged females, pre-oviposition time and the number of eggs per engorged female were measured. Highest percentage of engorged females were among mosquitoes fed on human citrated blood (89%) and control (95%). The media oviposition on both treatments were 13,4 eggs for females fed on human citrated blood and 15,3 eggs for females of control group. The lots fed on mice and bovine citrated blood presented the following results respectively: 22,5% of engorged females and 9,2 eggs per female and 25,8% of engorged females and 10,3 eggs per female. / Foi comparado o efeito do sangue de camundongos, bovino e humano sobre o ingurgitamento e oviposi??o do mosquito Aedes aegypti L., 1762 (D?ptera:Culicidae). O aparato para alimenta??o artificial foi constitu?do por gaiolas de pl?stico, com 10 x 6 cm, com orif?cios laterais cobertos com tela de tule, e uma abertura superior, atrav?s da qual foi oferecido o sangue contido em uma c?lula montada em l?mina de microscopia com cola de silicone e membrana de silicone. O sangue foi mantido aquecido a 37,5 ? 0,5 ?C, durante o tempo de alimenta??o que variou de 20 a 30 minutos. O experimento foi conduzido dentro de uma c?mara climatizada, com temperatura de 28 ? 0,5 ?C, umidade relativa de 80 ? 5% e fotoperiodismo de 12 horas di?rias. Um total de 16 grupos de 30 f?meas de A. aegypti, com idades entre 4 a 7 dias, foram pr?-alimentados com solu??o a?ucarada de sacarose. Em cada grupo foram adicionados 10 machos para realiza??o de c?pula. O sangue de cada hospedeiro foi coletado assepticamente e adicionado de citrato de s?dio a 3,9%. O grupo controle foi alimentado diretamente em hospedeiro humano volunt?rio. Ap?s a alimenta??o, as f?meas ingurgitadas foram contadas e colocadas no interior de gaiolas com 50 x 50 x 50 cm, contendo frasco com ?gua limpa para oviposi??o. Foram registrados o n?mero de f?meas alimentadas em cada tratamento, o per?odo de pr?-postura e o n?mero m?dio de ovos por f?mea alimentada. Mosquitos alimentados com sangue de camundongos e de bovino tiveram performances de 22,5 e 25,8% de ingurgitamento e a postura foi em m?dia de 9,2 e 10,3 ovos por f?mea, respectivamente. F?meas alimentadas com sangue humano atrav?s da membrana ou diretamente no hospedeiro humano tiveram comportamentos diferentes com ?ndices de ingurgitamento de 89 e 95% e oviposi??o de, em m?dia, 13,4 e 15,3 ovos por f?mea, respectivamente. N?o houve varia??o no per?odo de pr?-postura (tr?s dias) entre os tratamentos realizados.
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Desenvolvimento de membranas de poliuretano com rapamicina e seu potencial uso em regenera??o vascular

Cabral, Emanuelli Louren?o 19 April 2016 (has links)
Submitted by Salete Sartori (ssartori@pucrs.br) on 2017-01-16T13:46:11Z No. of bitstreams: 1 DIS_EMANUELLI_LOURENCO_CABRAL_COMPLETO.pdf: 2324920 bytes, checksum: cdf79816569d7d9b352a5a2d9b93437f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T13:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_EMANUELLI_LOURENCO_CABRAL_COMPLETO.pdf: 2324920 bytes, checksum: cdf79816569d7d9b352a5a2d9b93437f (MD5) Previous issue date: 2016-04-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The use of biomaterials that can replace or restore damaged tissues in the human body is necessary to improve the quality and life expectancy of the population. In this sense, the present project aims the study and development of different membranes based on biostable polyurethane, the incorporation of rapamycin, an antithrombogenic drug that can help about the inhibition of blood vessel narrowing, and the evaluation to verify its potential application in vascular area. Therefore, the obtained membranes showed three different morphologies, a membrane with porous surface (average pore size 3,3 ?m ? 0,8 ?m) ? named porous PU ? other membrane with an irregular surface, but without porous ? dense PU ? and for the last, a membrane with internal interconnections ? leached PU. There were realized for each membrane the tests of wettability and contact angle. The leached PU showed higher average of body fluid absorption and porous PU showed higher hydrophilicity, however after the addition of rapamycin, dense PU showed more hydrophilicity. About calcification test, both of three membranes showed minerals deposition, but this did not happen with dense PU after incorporation of drug. The thermal characterizations of the membranes were according with literature for polyurethanes, as the mechanical behavior. Lastly, the membranes did not showed in vitro cytotoxicity, which means that they could be used within our bodies. Thus, the obtained membranes showed their interesting and high potential for use and improvement / O uso de biopol?meros que possam substituir ou restaurar tecidos danificados no corpo humano ? necess?rio para a melhoria na qualidade e expectativa de vida da popula??o. Neste sentido, o presente projeto visa o estudo e desenvolvimento de diferentes membranas baseadas em poliuretano bioest?vel, a incorpora??o da rapamicina, um f?rmaco antitrombog?nico que pode auxiliar na inibi??o do estreitamento dos vasos sangu?neos, e a avalia??o para verificar sua potencial aplica??o na ?rea vascular. Sendo assim, as membranas obtidas apresentaram tr?s morfologias distintas, uma membrana com superf?cie totalmente porosa (tamanho m?dio de poros de 3,3 ?m ? 0,8 ?m) ? denominada PU poroso ? outra com irregularidades em sua superf?cie, por?m sem poros ? PU denso ? e por fim, uma membrana com interconex?es internas ? PU lixiviado. Para cada membrana foram realizados ensaios como teste de inchamento e an?lise do ?ngulo de contato. O PU lixiviado apresentou maior m?dia de absor??o de fluido corp?reo e o PU poroso apresentou maior hidrofilicidade, contudo, ap?s a adi??o da rapamicina o PU denso mostrou-se mais hidrof?lico. Em rela??o ao teste de calcifica??o, as tr?s membranas apresentaram dep?sito de minerais, o que n?o ocorreu para o PU denso ap?s a adi??o do f?rmaco. As caracteriza??es t?rmicas das membranas mostraram-se de acordo com a literatura para poliuretanos, assim como o comportamento mec?nico. Por fim, os estudos de citotoxicidade mostraram que as membranas n?o s?o citot?xicas, podendo ser utilizadas dentro do nosso organismo. Dessa maneira, as membranas obtidas mostram-se interessantes e com grande potencial de uso e aperfei?oamento
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Produ??o da prote?na recombinante anexina V humana em cultivos de Escherichia coli em batelada alimentada

Marder, Laura Schirmbeck 27 March 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451784.pdf: 974193 bytes, checksum: b53f42e8acb1653e7c655d1d1345a38b (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Annexin V is an endogenous human protein Ca+2 dependent, with a molecular weight of 35.8 kDa, widely distributed intracellularly, with very high concentrations in the placenta and lower concentrations in endothelial cells, kidneys, myocardium, skeletal muscle, skin, red cells, platelets and monocytes. Annexin V binds preferably to phosphatidylserine, a phospholipid commonly present on inner leaflet of lipid bilayer, which during cell apoptosis is translocated to outer leaflet of cell membrane. Despite of Annexin V is a relatively large protein, it was shown early on that the protein can be internalized at sites of ischemic injury both in the heart and in the brain and cross the intact blood-brain barrier, being increasingly used as a tool to detect apoptosis in several diseases such as Alzheimer and Ischemia and in drug. Therefore, production of recombinant human Annexin V using recombinant DNA technique along with High Cell Density Culture and protein purification becomes applicable to commercialize it in Brazil, increasing and facilitating the access of pharmaceutical industries and research laboratories in purchase product. We developed a protocol to produce recombinant human annexin V in large scale, in which approximately 20 mg of recombinant protein was yielded from 3 g of E. coliBL21(DE3) wet cells. N-terminal amino acid sequencing and massspectrometry analysis provided evidence for the identity and purity of therecombinant protein, as well as an apoptosis/necrosis in vitro detectionkit produced performed similarities with an imported commercialized kit in Brazil. / A Anexina V ? uma prote?na humana end?gena dependente de Ca+2, com peso molecular de 35,8 kDa, amplamente distribu?da intracelularmente em altas concentra??es na placenta e em concentra??es mais baixas nas c?lulas endoteliais, renais, mioc?rdicas, epiteliais, esquel?ticas musculares, eritr?citos, plaquetas e mon?citos. Apresenta como principal caracter?stica a capacidade de se ligar ? fosfatidilserina, um fosfolip?deo presente na camada interna da bicamada lip?dica, que durante a apoptose celular ? translocada para a camada externa da membrana celular. Apesar de ser uma prote?na de tamanho relativamente grande, a Anexina V apresentou a capacidade de penetrar em s?tios de inj?ria isqu?mica tanto mioc?rdica quanto cerebral, atravessando a Barreira Hemato-Encef?lica, sendo cada vez mais utilizada para dete??o de apoptose em diversas doen?as como Alzheimer e Isquemia e em monitoramento de drogas antic?ncer. Por esses motivos, se torna relevante a produ??o da prote?na Anexina V humana atrav?s da t?cnica do DNA recombinante em larga escala para que possa ser comercializada no Brasil, aumentando e facilitando o acesso de laborat?rios de pesquisa e ind?strias farmac?uticas na aquisi??o deste produto. Desenvolvemos um protocolo para cultivoem biorreator de grandes quantidades de Anexina V recombinante, no qual aproximadamente 20 mg de prote?na recombinante podem ser obtidos a partir de 3 g de c?lula ?mida de E. coli BL21(DE3). As an?lises porsequenciamento N-terminal de amino?cidos e espectrometria de massas proveram evid?ncias para a identidade e pureza da prote?na recombinante, assim como um desenvolvimento de um kit para marca??o de apoptose in vitro apresentou muita semelhan?a com outro kit importado j? comercializado no Brasil.
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AVALIAÇÃO DAS ATIVIDADES ANGIOGÊNICA/ANTIANGIOGÊNICA, MUTAGÊNICA/ANTIMUTAGÊNICA DA FOSFOETANOLAMINA

Costa, Claudia Rachid 19 April 2018 (has links)
Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-04-19T11:44:34Z No. of bitstreams: 1 CLÁUDIA RACHID COSTA.pdf: 740066 bytes, checksum: 10863a04e188cbf0c2ad0d2d4fd873fd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T11:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CLÁUDIA RACHID COSTA.pdf: 740066 bytes, checksum: 10863a04e188cbf0c2ad0d2d4fd873fd (MD5) Previous issue date: 2018-04-19 / The malignant neoplasms are a public health problem worldwide, being the biggest cause of premature mortality of the planet. In Brazil, in 2012, more than 200 thousand people died, and it is estimated that within 20 years, there will be an increase of approximately 70% of new cases. Therefore, since a long time, the alternative therapies constitute a way of promoting "miracle" for the cure of cancer. However, the miraculous empiricism has no scientific basis and not enough documentation to prove the efficacy and quality these substances used in this self-treatment. Thus, the fosfoetanolamina, an experimental substance caused a great international repercussion and expos Brazil to an embarrassing situation. A governmental law, imposed the use of synthetic fosfoetanolamina for cancer treatment, without scientific bases for the confirmation of the effects and efficacy of anticancer treatment, by means of experimental laboratory studies and clinical trials. Thus the objective of this work was to evaluate the angiogenic activity/Antiangiogenic, mutagênica/antimutagênica this substance. The test of angiogenesis was performed using an experimental model (MCA) corioalantóide membrane of chicken egg. While the tests for mutagenicity and antimutagenicity, were performed by a micronucleus test in mouse bone marrow. The results were significant in all tests performed. / As neoplasias malignas são um problema de saúde pública mundial, sendo a maior causa de mortalidade prematura do planeta. No Brasil, em 2012, mais de 200 mil pessoas foram a óbito, e estima-se que num prazo de 20 anos, haverá aumento de cerca de 70% de novos casos. Por isso, desde muito tempo, as terapias alternativas constituem uma forma de promover o "milagre" para a cura do câncer. Contudo, o empirismo milagroso não tem base científica e nem documentação suficiente para comprovar a eficácia e qualidade destas substancias utilizadas neste autotratamento. Assim sendo, a fosfoetanolamina, uma substância experimental causou uma grande repercussão internacional e expos o Brasil a uma situação embaraçosa. Uma lei governamental, impôs a utilização da fosfoetanolamina sintética para o tratamento do câncer, sem bases científicas para a confirmação dos efeitos e eficácia do tratamento anticâncer, por meio de estudos laboratoriais experimentais e ensaios clínicos. Assim o objetivo deste trabalho, foi avaliar as atividades angiogênica/antiangiogênica, mutagênica/antimutagênica desta substância. O teste de angiogênese foi realizado através do modelo experimental em membrana corioalantóide (MCA) de ovo de galinha. Enquanto os testes de mutagenicidade e antimutagenicidade, foram realizados pelo Teste de Micronúcleo em medula óssea de camundongo. Os resultados foram significativos em todos os testes realizados.
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Variação primeira e segunda para o primeiro autovalor de um problema elíptico / First and second variation of the first eigenvalue of an elliptic problem

Martins, Sergio Tadao 21 November 2007 (has links)
Consideraremos o problema elípitco $-\\Delta u + \\alpha\\chi_Du = \\lambda u$ em $\\Omega$, onde $\\Omega$ é um domínio de R^n com fronteira regular, e $D\\subset \\Omega$ é um subconjunto fechado de medida de Lebesgue fixada. A motivação para este problema vem da Mecânica, onde esta equação é encontrada no estudo de vibrações de uma membrana composta. Seja $\\lambda_1(D)$ o primeiro autovalor do problema, como função do conjunto D. Nesse trabalho mostraremos que $\\lambda_1$ é um autovalor simples, e estudaremos o problema de minimizar $\\lambda_1$ ao variarmos D no conjunto de todos os subconjuntos de medida fixada de $\\Omega$. Mais especificamente, determinaremos fórmulas para a variação primeira e segunda de $\\lambda_1$. / We will consider the elliptic problem $-\\Delta u + \\alpha\\chi_Du = \\lambda u in $\\Omega$, where $\\Omega$ is a domain in R^n with regular boundary, and $D \\subset\\Omega$ is a closed subset with prescribed Lebesgue measure. The motivation for this problem comes from Mechanics, where this equation models the vibrations of a composite membrane. Let $\\lambda_1(D)$ be the first eigenvalue of the problem, which is seen as a function of the set D. In this work, we will show that $\\lambda_1$ is a simple eigenvalue, and we will study the problem of minimizing $\\lambda_1(D)$ when D varies in the family of all closed subsets of $\\Omega$ with a given Lebesgue measure. More precisely, we will determine formulas for the first and the second variation of $\\lambda_1$.
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Construção e avaliação de eletrodos de membrana sólida cristalina seletivos a cobre e prata / Construction and evolution copperand silver ion selective electrode based on crystalline solid membranes

Serrano, Silvia Helena Pires 12 February 1988 (has links)
O presente trabalho visou a construção e avaliação de eletrodos de membrana sólida cristalina seletivos a cobre e prata. Obteve-se o sulfeto de prata, material eletroativo usado na preparação de membranas seletivas a íons Ag+, por precipitação com gás sulfídrico em meio ácido. Eletrodos com membranas de 1,0 e 0,50 mm de espessura apresentaram respectivamente limites nernstianos de 10-4 e 10-5 Mol.L-1 e precisão de ± 0,1 e 1 mV nas leituras de potencial. Os sulfetos de cobre e prata, usados na preparação de membranas seletivas para determinação de cobre, foram obtidos por precipitação simultânea com gás sulfídrico, tioacetamida em meio ácido e tiouréia em meio amoniacal. Difratogramas de Raios X revelaram que o material obtido com tiouréia corresponde ao sulfeto ternário, Cu2S.3Ag2S ou Ag1,55Cu0,45S, responsável pela resposta seletiva do sensor em soluções de Cu2+. O eletrodo construído a partir deste sulfeto, onde o cobre aparece no estado monovalente, apresentou limite nernstiano da ordem de10-7Mol.L-1, fornecendo resultados satisfatórios na determinação deste metal em amostras de aguardente e álcool. Cálculos termodinâmicos mostraram que quando membrana é constituída de CuS, um contacto elétrico efetuado através de cobre ou prata é instável, uma vez que ocorre a formação de Cu2S. Os resultados experimentais conduziram a um novo modelo para explicar o mecanismo de resposta do eletrodo, o qual se baseia na reação: Cu2S (memb) + Cu2+ (sol) ↔ CuS (memb) + 2 Cu + (sol). A atividade de Cu+ na interface eletrodo / solução é controlada pela atividade de Cu2+ nas soluções de medida, de modo que o sensor funciona como um eletrodo de Cu2S/CuS em contacto com o sistema Cu2+/Cu+. / Present work deals with the assembling and testing of solid membrane electrodes for copper and silver. The silver sulphide used to prepare the membrane selective to Ag+ was precipitated with hydrogen sulphide in acidic medium. Electrodes 1,0 and 0,50 mm thick present Nernstian limits of 10-4 and 10-5 Mol.L-1 order with a ± 0,1 and 1 mV respectively. A mixture of silver sulphide and copper sulphides were used for the copper (II) selective electrode. This solid was prepared from Cu2+ and Ag+ in the same solution with hydrogen sulphide or thioacetamide both in acid medium and with thiourea in ammoniacal medium. X-Ray diffractograms shows that the solid prepared from thiourea solutions presents significant contribution of jalpaite Ag1,55Cu0, 45S (in fact Cu2S.3Ag2S). An important finding was the presence of copper (I) in the matrix and this has been also found to the responsible for the higher performance of this electrode with a limiting response to 10-7 Mol.L-1 copper (II). In fact thermodinamic calculation has show instability of a contact of Ag or Cu with CuS solid, as Cu2S must be formed in any case. On this basis, the theory of the electrode is based in the following reaction which takes place on the electrode surface: Cu2S (memb) +CU2+ (sol) ↔ CuS (memb) + 2 Cu+(aq) K = 10-13 M. On this basis the Cu+ activity at the electrode / solution interface is controled by the activity of Cu2+ of the solution and the Cu2+/ Cu+ system in contact with the solid matrix is defined.
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Obtenção e caracterização de linhagens celulares de membrana e líquido sinoviais equinos / Obtention and characterization of cell lines from equine synovial membrane and synovial fluid

Prado, Aline Ambrogi Franco 10 December 2012 (has links)
A cartilagem articular é um tecido avascular, com baixa celularidade, composta principalmente de colágeno extracelular e proteoglicanos, com uma capacidade limitada de regeneração. Nos últimos anos, diversas abordagens clínicas e de pesquisa têm sido adotadas para reparar danos na cartilagem articular, como transplante de condrócitos, enxerto de periósteo, células-tronco mesenquimais e tecidos derivados dessas células. O isolamento de células-tronco mesenquimais foi relatado a partir de diferentes tecidos, incluindo medula óssea, tecido adiposo, sangue do cordão umbilical, sangue periférico e saco vitelino em equinos. As células-tronco mesenquimais derivadas de líquido e membrana sinoviais foram obtidas em humanos, cães, suínos e caprinos e são fontes promissoras para regeneração articular, já que são tecido-específicas e de fácil obtenção e cultivo. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e caracterizar a linhagens de células obtidas de membrana e líquido sinoviais equinos. Os fragmentos foram obtidos por meio de artroscopias e cultivados em meios de cultura DMEM-H e MEM para obtenção das linhagens. Para análise da morfologia celular foi realizada a fotodocumentação das garrafas em microscopia invertida. A expressão de marcadores de células-tronco (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 e Ly6a), marcadores inflamatórios (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a e MCP-1) e marcadores envolvidos na checagem e progressão do ciclo celular (Caspase-3 fosforilada, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 e P53) mostraram diferencialmente expressos, sugerindo que podemos considerá-las uma possível fonte de células-tronco mesenquimais. Devido ao grande impacto que patologias na articulação têm sobre o desempenho atlético em cavalos, os resultados demonstrados neste trabalho será uma base para conduzir outros experimentos na avaliação das aplicações terapêuticas dessas células. / The articular cartilage is an avascular tissue with low cellularity composed of extracellular collagen and proteoglicans. It has a limited capacity of regeneration. Condrocyte transplantation, mesenchymal stem cells and tissues derived from these cells has been used by several researches to repair damage to the articular cartilage. The isolation of mesenchymal stem cells has been reported from different tissues such as bone marrow, adipose tissue, blood, umbilical cord, and yolk sac. The mesenchymal stem cells from synovial fluid and synovial membrane were obtained from humans, dogs, pigs and goats. These cells are tissue specific and easy to obtain and cultivate. The objective of this research is to obtain and characterize cells from equine synovial fluid and synovial membrane. The samples were obtained by arthroscopy and cultivated in the DMEM-H and MEM media. Cell morphology analyses were made by photodocumentation in inverted microscopy. The expression of stem cell markers (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 and Ly6a), inflammation markers (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a and MCP-1) and markers involved in checking and cell cycle progression (Caspase-3, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 and P53) showed differentially expressed. Mesenchymal stem cells from synovial membrane and synovial fluid provide promise for cell-based therapies for articular cartilage repair. These results may lead other experiments to use these cells to new therapeutic applications.
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Tratamento avançado de esgoto sanitário em sistema seqüencial composto por processo biológico anaeróbio, flotação, filtração em areia e em membranas / Advanced treatment of sewage by sequence system formed with anaerobic biologycal process, flotation, sand and membranes filtration

Porto, Tatiana Gonçalves 31 August 2001 (has links)
Neste trabalho avaliou-se a eficácia de dois sistemas sequenciais de tratamento de esgoto sanitário envolvendo processo biológico anaeróbio (em escala piloto) com processos físico-químicos de flotação (escala de laboratório), microfiltração tangencial (escala industrial) e osmose reversa (escala industrial). Foram realizadas cinco baterias de ensaios (primeira etapa de estudos) utilizando um sistema seqüencial composto por: reator anaeróbio biológico, flotação por ar dissolvido, filtração em areia, filtração em cartucho de 5 &#956m, filtração em papel de filtro de 1,2 &#956m/filtração em cerâmica microporosa e filtração em membrana de nanofiltração. Numa segunda etapa de estudos foi realizada uma bateria de ensaios utilizando um sistema seqüencial composto por: reator anaeróbio biológico, flotação por ar dissolvido, microfiltração tangencial e osmose reversa. Todos os efluentes gerados pelos dois sistemas de tratamento foram avaliados, e a possibilidade de reuso (agrícola e industrial) dos mesmos foi investigada, os efluentes da filtração em areia, filtração em cartucho, filtração de papel de filtro/filtração em cerâmica e nanofiltração (primeira etapa de estudos) apresentaram características compatíveis com a água necessária para a maioria dos processos industriais. Por outro lado, os efluentes da microfiltração tangencial e da osmose reversa (segunda etapa de estudos) se mostraram como uma boa alternativa para reuso agrícola e também para reuso industrial(principalmente o efluente da osmose reversa). / This work evaluates the efficiency of two sequence systems of treatment of sewage involving anaerobic biologycal and physical-chemical processes. Five sets of experiments were done in the first stage of the study, using a sequence system formed with: anaerobic biologycal reactor, dissolved - air flotation, sand filtration, cartridge filtration (5 &#956m), filter paper filtration (1,2 &#956m)/ceramic filtration and nanofiltration. Another set of experiments was carried out using a different sequence system formed with: anaerobic biologycal reactor, dissolvid-air flotation, crossflow microfiltration and reverse osmosis. Every effluent resulted from the two treatment systems was evaluated and the reuse possibility (agricultural and industrial) was invetigated. The sand filtration, cartridge filtration, filter paper filtration/ceramic filtration and nanofiltration effluents (of the first step of studies) showed compatible characteristics with irrigation water but they were not compatible with water used in the majority industrial processes. On the other hand the crossflow microfiltration and reverse osmosis effluents (of the second step of studies) can be said as a good alternative to agricultural reuse and industrial reuse as well (mainly the reverse osmosis effluent).
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Incorporação de aminoácidos in vitro por uma fração microssomal / Incorporation of amino acids into a microsomal fraction

Torres, Bayardo Baptista 27 December 1972 (has links)
Foi isolada uma sub-fração de microsomas, constituída por membranas do retículo endoplasmático, através do tratamento do sobrenadante pós-mitocondrial por detergente. Em testes de microscopia eletrônica e ultracentrifugação analítica, esta preparação de membranas apresentou-se livre de contaminação por outras organelas celulares. Quando incubada em condições adequadas, a fração de membranas incorpora vários aminoácidos em um produto insolúvel em TCA a quente. O tratamento do material incorporado com enzimas proteolíticas acarreta a perda de cerca de 60% da radioatividade derivada de aminoácidos marcados. Não há liberação de radioatividade por tratamento com RNase, DNase, lecitinase ou α-amilase. A remoção de aminoácidos terminais não implica em diminuição considerável de radioatividade. As melhores condições de pH e concentração de Mg para o processo são próximas às fisiológicas. O requerimento de ATP e enzima pH 5 no meio de incubação não é absoluto, mas sua adição estimula o processo. Há indicações de que a independência de fornecimento externo de GTP para o processo resulta de um conteúdo endógeno da partícula. o processo de incorporação é inibido em parte por RNase, NaF, puromicina e anisomicina. / Not available

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