Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T12:03:53Z No. of bitstreams: 2 TESE Isabel Renata de Sousa Arruda.pdf: 2598976 bytes, checksum: a300c308fc43e6c6f8760e026ef3ee90 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T12:03:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Isabel Renata de Sousa Arruda.pdf: 2598976 bytes, checksum: a300c308fc43e6c6f8760e026ef3ee90 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / FACEPE / Xiloglucanas são polissacarídeos solúveis em água, não tóxicos, os quais podem formar soluções altamente viscosas a baixas concentrações e em associação com outros polissacarídeos formam géis que controlam a estrutura e a textura de muitos produtos comerciais. A xiloglucana presente nas sementes de Hymenaea courbaril var. courbaril, uma árvore brasileira pertencente à família Fabaceae e subfamília Caesalpiniaceae, popularmente conhecido por Jatobá, tem sido estudadas para a produção de membranas com aplicação biotecnológica. O presente trabalho teve por objetivo a extração e caracterização da xiloglucana contido nas sementes de H.courbaril, produção e caracterização de membranas deste polissacarídeo contendo a lectina concanavalina A (ConA) incorporada e avaliação do efeito no tratamento tópico utilizando as membranas frente a lesões cutâneas experimentais em camundongos. Os rendimentos de extração da xiloglucana apresentaram resultados de 71,71% ± 5 e 81,05% ± 7. A caracterização estrutural e reológica confirmou uma estrutura amorfa com picos característicos do respectivo polissacarídeo, enquanto que a composição monossacarídica realizada por GC/MS mostrou uma relação de glicose:xilose:galactose:arabinose (40:34:20:6). Os espectros de RMN confirmaram a estrutura central da xiloglucana composta por unidades de glicose parcialmente ramificadas com unidades terminais de xilose e galactose. As membranas de xiloglucana com ConA incorporada foram eficientemente produzidos, não apresentando toxicidade e mantendo-se estáveis por aproximadamente 40 dias. A interação entre lectina e polissacarídeo foi confirmada através do pico característico no FTIR. As microscopias de transmissão e fluorescencia confirmaram a boa distribuição morfológica das membranas, enquanto os perfis das propriedades mecanicas mostraram que a incorporação da lectina aumentou a resistencia do mesmo e não alterou as características de cor e permeabilidade aos gases. Uma vez caracterizado, As membranas foram aplicados em feridas cutâneas experimentais em camundongos BALB/C e a avaliação histopatológica ocorreu durante um período de 0-16 dias. As amostras foram divididas em 3 grupos: Membranas de xiloglucana-ConA (MXC), Membranas de xiloglucana (MX) e solução salina (controle negativo). MXC apresentou sinais inflamatórios como edema e hiperemia estatisticamente menos intensos quando comparados a MX e o controle negativo. A análise histopatológica confirmou a completa reepitelização do tecido tratado com a presença de fibras colágenas localizados no tecido fibroso de granulação nos dias 10, 13 e 14, respectivamente para MXC, MX e controle negativo. Devido à eficácia e ao menor tempo de cicatrização de MXC, podemos concluir que a membrana de xiloglucana com ConA incorporada pode ser utilizada em processos de reparação nas lesões cutâneas.

O ponto de partida para a preparação de membranas poliméricas por inversão de fases (IF) é ter uma solução termodinamicamente estável. A teoria de Flory-Huggins guiou a construção dos diagramas ternários para os sistemas água/ácido fórmico/poliamida 66 e água/ácido clorídrico/poliamida 66, comparando os dados experimentais com dados teóricos, identificando o tipo de separação de fases que ocorre e descrevendo o comportamento termodinâmico dos processos de formação de membranas assimétricas preparadas por IF. Neste trabalho foi avaliado o comportamento termodinâmico de soluções de poliamida 66 (PA66) em ácido fórmico (FA) e em ácido clorídrico (HC), quanto à classificação como soluções verdadeiras. Foi determinada a massa molar viscosimétrica média (Mv) da PA66 comercial utilizada, sendo 11 600 g·mol-1. Foram caracterizados a PA66 e os filmes de PA66 em FA e PA66 em HC, por calorimetria diferencial de varredura (DSC), por difração de raios X (DRX), por espectroscopia na região do infravermelho com transformada de Fourier (FT-IR) e por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O método UNIFAC (universal quasi-chemical funtional group activity coefficient) foi usado para a determinação dos parâmetros de interação não-solvente/solvente (g12) para os sistemas H2O/FA e H2O/ HC. A partir de medidas de inchamento (swelling) o parâmetro de interação nãosolvente/ polímero ( 13) para H2O/PA66 encontrado foi de 2,77. Os parâmetros de interação solvente/polímero ( 23) foram determinados por meio de medidas de pressão de vapor (VP) para os sistemas PA66/FA e PA66/HC,sendo de –9,0 e –7,74 respectivamente. A curva do ponto de névoa (cloud point curve) teórica foi calculada com base na “Boom’s LCP Correlation” e comparada à curva do ponto de névoa experimental. A energia livre de Gibbs da mistura (ΔGm) ternária e o 23, indicam que o FA é o melhor solvente para a PA66, porém, a concentração do HC (37-38%), sua volatilidade e a fração volumétrica de PA66 ( 3) dissolvida, mostram que o HC também é um bom solvente para a PA66, fato comprovado pela morfologia das membranas obtidas. / The starting point for the preparation of polymer membranes by phase inversion is having a thermodynamically stable solution. The Flory-Huggins theory guided the construction of the ternary diagrams for water/formic acid/polyamide 66 and water/hydrochloric acid/ polyamide 66 systems by comparing the experimental data with theoretical, identifying the type of phase separation occurring, and describing the behavior of the thermodynamic processes of formation of asymmetric membranes prepared by phase inversion. In this work, the thermodynamic behavior of solutions of polyamide 66 (PA66) in formic acid (FA) and in hydrochloric acid (HC), was studied to evaluate their classification as true solutions. The viscosimetric average molar mass (Mw) of commercial PA66 was determined to be ≈ 11 600 g·mol-1. The PA66 and PA66 films in AF and in HC were characterized by differential scanning calorimetry (DSC), by X-ray diffraction (XRD), by Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) and by scanning electron microscopy (SEM). The UNIFAC method (universal quasi-chemical funtional group activity coefficient) was used for the determination of non-solvent/solvent interaction parameters (g12) for the H2O/FA and H2O/HCsystems. From measurements of swelling, the polymer/non-solvent interaction parameter ( 13) for H2O/PA66 was found to be 2.77. The solvent/polymer interaction parameters ( 23) were determined as –9.0 and –7.74 by measuring the vapor pressure (VP) systems for PA66/FA and PA66/HC, respectively. The theoretical cloud point curve was calculated based on "Boom's LCP Correlation" and compared to the curve of the experimental cloud point. The ternary Gibbs free energy of mixing (ΔGm) and 23, indicate that the FA is the best solvent for the PA66, however, the concentration of HC (37-38%), its volatility and the volume fraction of dissolved PA66 ( 3), show that HC is also a good solvent for the PA66, which is proven by the membrane morphology obtained.

Orientador: Lucia Pereira da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T11:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_ArmindoAntonio_M.pdf: 5893539 bytes, checksum: 3fb5538dc100f360ca6bd135dcc1b6ad (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Neste trabalho estudamos o papel dos íons de ferro na peroxidação lipídica induzida por FeSO4 em mitocôndrias isoladas de fígado de rato (MFR). Na literatura aparecem duas teorias distintas para explicar o papel dos íons de ferro na iniciação da peroxidação lipídica. A primeira propõe que o ferro é o catalisador das reações de Haber-Weiss e de Fenton que produzem o radical hidroxila (OR) que atacaria os ácidos graxos polinsaturados das membranas. Uma segunda hipótese contesta a primeira, por considerar que o 'OH é muito reativo para difundir-se dos sítios onde é formado até a parte hidrofóbica da membrana, onde estão os ácidos graxos passíveis de ataque. Neste caso, a proposta é que a peroxidação lipídica seria induzida por complexos radicalares fonnados por Fe2+, Fe3+ e O2. Estas espécies teriam reatividade suficiente para abstrair átomos de hidrogênio das pontes metilênicas entre as duplas ligações dos ácidos graxos polinsaturados. Nossos resultados. mostram que a peroxidação lipídica induzida por FeSO4 causa alterações na fluidez das membranas mitocôndriais e é dependente de uma relação Fe2+/Fe3+ equimolar para atingir seu efeito máximo. Fatores que levem a um aumento na velocidade de oxidação do Fe2+ a Fe3+ pelo O2 contribuem para um aumento significativo da lipoperoxidação. Entre esses estão a presença de H2O2, o vazamento de elétrons quando as mitocôndrias estão energizadas, e íons como Pi presentes no meio de reação. Os experimentos em que a peroxidação lipídica foi inibida pelo sequestrador de radicais butilhidroxitolueno (BHT) permitem afirmar que a iniciação do processo peroxidativo depende da geração de uma espécie radicalar além da presença de FeSO4. O fato do manitol, conhecido sequestrador do radical hidroxila, não ter apresentado efeito inibitório sobre essa peroxidação, somado à observação anterior, permite descartar a hipótese de ser o radical hidroxila o iniciador do processo. Os resultados aqui apresentados, corroboram a hipótese de que complexos radicalares de valências mistas de ferro e 02 seriam os iniciadores da peroxidação lipídica induzida por FeSO4 em mitocôndrias isoladas, nas condições por nós estudadas / Abstract: Here we have studied the role of iron ions on the mitochondrial lipid peroxidation induced by FeSO4 in isolated rat liver mitochondria. There are two hypothesis to explain the role of iron ions on the initiation of this peroxidative process. The first one suggests that iron catalyses Haber Weiss and Fenton reactions generating the hydroxyl radical (OR). This later would attack the polly saturated fatty acids of the membrane phospholipids. The second explanation discards a direct participation of OIL as it is a very reactive species to difuse from its generating site to the hydrophobic part of the membrane, where are situated the fatty acids. In this case, the proposal is that the peroxidative process would be initiated by complexes of Fe2+ and Fe3+ and O2. These species would be reactive enough to react with the hydrogen from the methylenic bridges between the polly saturated fatty acid double bonds. Our results show that the FeS04-induced lipid peroxidation causes alterations on the mitochondrial membrane fluidity and the maximum effect is reached when an equimolar Fe2+/Fe3+ relation is achieved. Conditions favouring an increase on the Fe2+ to Fe3+ oxidation by O2 contribute to a significant increase on lipid peroxidation. Among these are the presence of H2O2, the electron leak occuring when energized mitochondria were used and phosphate ions in the reaction medium. The experiments showing that the peroxidation is inhibited by butylhydroxytoluene (BHT), a known radical scavenger, lead to the conclusion that to initiate the peroxidative process a radical should be generated besides the presence of FeSO4. As mannitol was found unable to inhibit this process and it is known that mannitol scavenges OH, the hypothesis that hydroxil is the radical species needed to initiate this process can be discarded by our results. Moreover, our data support the proposal that complexes of iron mixed valences and O2 would be the real initiators of the lipid peroxidation induced by FeSO4 in isolated mitochondria / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Salvador Massaguer Roig / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-22T01:33:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peres_Leila_D.pdf: 4586693 bytes, checksum: 5ffea26c2967998036402c83c1c9e7a3 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Neste trabalho efetuou-se um estudo da ultrafiltração de leite integral coagulado enzimaticamente com renina, onde foram utilizadas membranas minerais CARBOSEP para microfiltração (MF ) e para ultrafiltração (DF ). Membranas para MF CARBOSEP M45, 14 e M6, com diâmetros médios de poro respectivamente de 0,45 , 0,14 e 0,08 µm e embranas para DF CARBOSEP com pesos moleculares médios de corte respectivamente de 300000, 150000 e 50000 Daltons, foram usadas. Os processamentos de concentração de leite coagulado por DF, foram realizados em uma unidade piloto de ultrafiltração CARBOSEP 2S 37 (com 1,6 m2 de área de membrana) e em uma unidade de bancada MICROCARBOSEP 40 (com 75 cm2 de área de membrana). Foram também efetuados, para efeito de comparação, processamentos com leite na unidade piloto CARBOSEP 2S 37. Os processamentos foram conduzidos às pressões de 3, 4 e 5 bar, temperatura de 35°C para leite coagulado e 55°C para leite e velocidade de escoamento tangencial de 4,0 m/s para a unidade piloto e de 1,2 m/s para a unidade de bancada. A DF de leite já pré-coagulado oferece como principal vantagem, em relação à do leite, um elevado aumento do fluxo de permeado, devido às características de maior porosidade da camada de polarização por concentração formada pelo leite coagulado. Na ultrafiltração de leite na unidade piloto CARBOSEP 2S 37, realizada a 4 bar, obteve-se para os dois tipos de membrana CARBOSEP utilizadas ( M4 e M6 ) um fluxo de permeado inicial em tomo 60 1/h.m2 e coeficientes de retenção de proteína de 99% para a membrana M4 e de 96% para a membrana M6. Já para o leite coagulado, o melhor desempenho foi da membrana de microfiltração M6, para a qual obtiveram-se um fluxo de permeado inicial de 300 1/h.m2 e um coeficiente de retenção de proteína de 94%, que embora seja inferior ao obtido para o leite, mostra também uma boa eficiência de separação para a membrana M6. Os processamentos de concentração com leite coagulado realizados na unidade de bancada MICROCARBOSEP 40, mostraram também um melhor desempenho em termos de fluxo para as membranas de microfiltração CARBOSEP Ml4 e M45. A possibilidade do uso de membranas de microfiltração CARBOSEP, para realizar a ultrafiltração de leite coagulado, obtendo-se inclusive um maior fluxo que o obtido para as membranas de DF, é conseqüência das características da camada de polarização por concentração formada dinamicamente sobre a membrana, que se comporta durante o processo como uma membrana secundária, de menor porosidade que a membrana primária. Os processamentos de concentração realizados com as membranas M4, na unidade piloto CARBOSEP 2S 37 e M6 e M8 na unidade de bancada, mostraram um aumento de fluxo de permeado com o aumento da pressão de 4 para 5 bar para o leite, enquanto para o leite coagulado o uso de uma pressão maior não resultou em um melhor desempenho da membrana. Os processamentos realizados com leite coagulado na unidade piloto CARBOSEP 2S 37, demonstraram a viabilidade do uso do processo na fabricação de um queijo semelhante ao queijo petit suisse ou outro queijo de massa mole, desde que sua produção não envolva coagulação ácida, já que em todos os processamentos realizados, o pH natural do leite ( 6,6 ¬ 6,7 ) foi mantido constante. Foram estudadas as influências das características da camada de polarização por concentração formada sobre a membrana e da incrustação (fouling ) da membrana, na transferência de massa e capacidade de permeação da membrana / Abstract: In the present work a study of the rennetted curd milk (obtained from whole milk ) ultrafiltration was conducted by using microfiltration (MF) and ultrafiltration (DF) CARBOSEP mineral membranes. (MF) CARBOSEP M45, M14 and M6 membranes, with average pore diameter of 0.45, 0.14 and 0.08 µm, respectively and (DF) CARBOSEP M9, M3 and M8 membranes, with average molecular weight cut-off of 300000, 150000 and 50000 Daltons, respective1y, have been used. The DF concentration experiments have been performed in a CARBOSEP 2S 37 ultrafiltration pilot unit ( 1.6m2 of membrane area ) and in a MICROCARBOSEP 40 bench ultrafiltration unit ( 75 cm2 of membrane area ). In order to compare the results, whole milk DF concentration experiments were also performed in the pilot unit. The DF concentration experiments were conducted at transmembrane pressures of 3, 4 and 5 bar , at a temperature of 35°C for coagulated whole milk and 55°C for whole milk. The tangential velocity was 4,0m/s for the pilot unit and 1,2 m/s for the bench unit. The major advantage in performing the DF of pre-coagulated milk, is the great improvement in the permeate flow obtained (10 times in some cases ), due to the high porosity characteristics of the concentration polarization layer formed by the coagulum on the membrane. An initial permeate flow of 60 l/h.m2 for the two used membranes ( M4 and M6 ) and protein retention coefficients of 97% for M6 membrane and 99% for M4 membrane, have been obtained in the milk DF experiments performed in the CARBOSEP 2S 37 unit, at 4 bar. When using the coagulated milk, the microfiltration M6 membrane showed the best performance, since an initial permeate flow of 300 1/h.m2 and a protein retention coefficient of 94% have been obtained. In spite being this retention coefficient lower than that obtained for milk, this value however represents, a good separation efficiency for M6 membrane Coagulated milk concentration experiments, carried out in the MICROCARBOSEP 40 bench unit, have also showed better performance for microfiltration membranes Ml4 and M45. The possibility of using microfiltration CARBOSEP membranes to perform coagulated milk DF, obtaining indusively a higher permeate flow than that obtained for ultrafiltration CARBOSEP membranes, is a consequence of the concentration polarization layer characteristics, formed dynamically over the membrane, that acts during the process as a secondary membrane with a lower porosity than the primary membrane porosity. The experiments conducted in the pilot unit with M4 membrane and in the bench unit with M6 and M8 membranes have showed, for milk, an improvement in the permeate flow, when the pressure was changed from 4 to 5 bar. For coagulated milk, however, the higher pressure has not resulted in better membrane performance. The experiments conducted in the pilot unit with coagulated milk, have showed the viability in using this process in the manufacturing of a cream cheese, like petit suisse cheese or other soft cheese, not involving acid coagulation, since the natural milk pH ( 6.6 to 6.7 ) was maintained constant throughout all the performed experiments. The influences of the concentration polarization layer characteristics and of the membrane fouling, on the membrane mass transfer and permeation capacity, have been studied / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Pedro L. O. Volpe / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-23T13:54:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sorratini_RodolphoB_M.pdf: 2459675 bytes, checksum: 7573e917d4bc219bb1d4f035717668fd (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado

Orientador: Eneida de Paula / Dissertação (mestrado) - Unversidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T18:12:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prete_PauloSergioCastilho_M.pdf: 7512602 bytes, checksum: 3cde985a4e814dabb7fb0d50b30a4d23 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Surfactantes apresentam efeito concentração dependente sobre membranas de eritrócitos, podendo proteger ou solubilizar essas membranas. Neste trabalho estudamos a interação de surfactantes não-iônicos da série Tween (Polioxietileno-sorbitol) com membranas de eritrócitos humanos. Triton X1O0 (t-octilfenoxi polietoxi etanol), foi usado como controle para os ensaios hemolíticos. Inicialmente fizemos a carActerização físico-auímicA dos surfActAntes atrAvés da determinAção da CMC, e medidAs de lH-RMN, que comprovaram a purezA e composição estruturAI dos surfactantes. Estudos hemolíticos em eritrócitos humAnos (com suspensões de Ht de 5 20%) revelaram que os surfactantes da série Tween (20, 40 e 80) têm efeito protetor e lítico Acima dAS suas respectivAs CMCs (59, 27 e 12 _), enquAnto que com o Triton Xloo estes efeitos ocorrem na faixa dA sua concentrAção micelar críticA (0,25 mM). O ensaio de proteção a hemólise foi feito em condições hipotônicAs (77 mM de NaCI) e o de lise em condições isotônicas. Em Ambos ensAios mediu-se fotometricamente A saída de hemoglobina (Hb), do eritrócito. DAS concentrAções de surfActAnte parA proteção (Cprot), início (csat) e 100% de hemólise (CSOI) determinamos AS razões molares surfActante:lipídio no eritrócito para proteção e lise (RProt, Rsat, Rso respectivamente). Nos ensaios em condições isotônicas medimos também a liberação do I( intracelular (por potenciometria) como um método alternativo de quantificar a hemólise. Assim como as medidas de liberação de Hb, os ensaios de liberação de I( mostraram-se adequados aos estudos hemolíticos. Detectou-se uma estreita correlação entre os valores de csat e esol obtidos pelas duas técnicas, embora a liberação de I( ocorra em concentrações menores de surfactante, indicando que a saída de I( precede a de Hb, na hemólise. Em concentrações muito altas esses surfactantes podem induzir a oxidação da Hb, sendo que o Tween 80 tem maior poder oxidante que os demais da série (Tween 80 > Tween 40 > Tween 20) e o Triton X100 não oxida a Hb. O efeito oxidante do Tween 80 impediu a determinação dos valores de Rso1 em Ht mais altos. O tratamento proposto por Lichtenberg (1985) para a quantificação da razão efetiva surfactante:membrana para solubilização não se mostrou adequado à análise do efeito hemolítico dos surfactantes da série Tween, cujos valores de R são muito altos, caracterizando-os como pouco hemolíticos / Abstract: Surfactants present hemolytic effects and depending on their concentration, they can either protect or solubilize erythrocyte membrane. In this work we have studied the interaction of nonionic surfactants from the Tween series (polyoxyethylenesorbitan) with human erythrocytes membranes. Triton Xl00 (t-octylphenoxypolyethoxyethanol) was used as a control, in hemolytic assays. To assure the purity and structural composition of the surfactants we employed CMC determination and lH-NMR characterization. Hemolytic studies with human erythrocytes (Ht 5 - 20%) showed that surfactants from the Tween series (20,40 and 80) have a protective and Iytic effect upon the membrane above their respective CMCs (59, 27 and 12 _), while Triton Xl00 presents those effects at its CMC range (0,25 mM). The "protection" assays were carried out in a hypotonic media (NaCI 77mM) and the Iysis experiments in isotonic conditions. In both assays Hb release from the erythrocyte was spectrophometrically measured. From the surfactant concentrations for protection (Ol'Ot), onset (csat) and 100% hemolysis (csol) we determined the surfactant:lipid molar ratios for protection and Iysis (RProt, Rsat, R$OI respectively). At isotonic condition we measured also the release of intracelular K'" (by potenciometry) as an alternative method for quantifying hemolysis. As well as Hb release measurements, the assays of K'"-release showed to be quite adequate for the study of hemolysis. There is a good correlation between csat and csol values obtained by the two techniques, although K'"-release occurs at lower surfactant concentrations than Hb-release. In extremely high concentrations, these surfactants induce Hb oxidation, being Tween 80 the one with the highest oxidative power, in comparison to the other Tweens (Tween 80 > Tween 40 > Tween 20). Triton X100 does not oxidise Hb. The oxidative effect of Tween 80 prevented the determination of Rso1 values in the highest Hts. The treatment proposed by Lichtenberg (1985) for the quantification of surfactant:membran ratios for solubilization was not found adequate for the analysis of the hemolytic effect of Tweens, which R values are very high, characterizing them as weak solubilizers / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Sara Terezinha Olalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T08:46:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_PauloRobertoMoura_D.pdf: 4111332 bytes, checksum: 7243dfc06daf8a58f41c137629b12750 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A esferocitose é um tipo comum de anemia hemolítica hereditária cujo primeiro defeito molecular foi caracterizado em 1992. A proteína banda 3, codificada pelo gene AE1, foi a primeira isoforma clonada de uma famma de genes de trocadores de ânions "Anion Exchanger-AE gene family" e é a mais abundante das proteínas integrais da membrana eritrocitária. Alterações moleculares neste polipeptídeo estão associadas à formação de esferócitos. Hemácias esferocíticas são osmoticamente frágeis, estando mais sujeitas à lise e ao sequestramento pelo baço, o que encurta seu tempo de vida. A proteína banda 3 também é expressa nos rins, na membrana basolateral de células alfa intercaladas do tubo coletor cortical, onde é responsável pela reabsorção de bicarbonato, compensando a secreção de ácidos pela H+ ATPase vacuolar apical, e participando da regulação fina do equilíbrio ácido-básico. Tanto a banda 3 eritrocitária como a renal são isoformas de um mesmo gene que através de um promotor tecido específico, diferem quanto à transcrição. O mRNA da banda 3 renal não apresenta os três primeiros exons observados na forma eritróide. O presente estudo teve o objetivo de investigar as alterações moleculares e regulação do gene da banda 3 na esferocitose hereditária em 5 pacientes com deficiência de banda 3, e investigar possíveis alterações neste gene em cinco pacientes com acidose renal tubular distal. Este estudo foi baseado no rastreamento de mutações e polimorfismos no gene mencionado, incluindo a região promotora, que também pode estar envolvida na fisiopatologia da doença. Para detecção das alterações moleculares foram utilizadas as técnicas de PCR, análise de polimorfismo de conformação em fita simples, subclonagem e sequenciamento. O estudo do cDNA foi realizado após a transcrição reversa do mRNA extraído de reticulócitos por RT-PCR. Outro objetivo foi investigar as alterações renais de pacientes com esferocitose hereditária e deficiência de banda 3, uma vez que esta proteína também é expressa nos rins. Os estudos renais foram realizados através da avaliação da capacidade de acidificação tubular distal e obtenção de medidas de bicarbonatúria, pH urinário, acidez titulável e excreção de amônia no período basal e após estímulo com furosemida. Também foi avaliado o contratransporte de sódio e lítio em hemácias de pacientes com esferocitose hereditária, uma vez que esta é uma medida indireta do contra-transporte Na+/H+, envolvido na regulação do pH intracelular do eritrócito e na homeostase ácido-básica do organismo, por secretar ácido e reabsorver Na+ em epitélio renal. Nossos resultados caracterizaram duas novas mutações no gene AEI. O estudo da Banda 3 Campinas, uma mutação no sítio doador de clivagem no intron 8, demonstrou a perda de bicarbonato pela urina dos pacientes afetados e um aumento na atividade de contra-transporte de sódio e lítio nas hemácias. A Banda 3 Pinhal, uma substituição de um resíduo de arginina altamente conservado, por histidina no domínio transmembrana, é a segunda mutação afetando o codon 490 da banda 3, e pode ser um "hot spot" para mutações no gene AEI. As hemácias destes pacientes apresentaram menor número de sítios para o inibidor DIDS. Outra mutação caracterizada foi a Banda 3 MODtefiore, previamente descrita. O estudo dos pacientes com acidose renal tubular distal revelou uma nova mutação na região promotora renal em um paciente com acidose renal tubular distal incompleta, que pode estar associada com o defeito na reabsorção de bicarbonato pelos rins. O estudo da acidose também caracterizou um novo polimorfismo no intron 3, a deleção da adenina 1233, com frequência alélica de 0,34 em 120 cromossomos analisados. Um conflito de sequência (quatro guaninas no lugar de três nt. 1272-1274) também foi verificado em todos indivíduos estudados. O polimorfismo Asp38-7Ala (Darmstad) foi encontrado em uma paciente com acidose, mas parece não estar relacionado com a doença. Finalmente concluímos que mutações no gene da banda 3 podem estar associadas com a esferocitose hereditária e com a acidose renal tubular distal incompleta, pois isoformas da proteína são expressas nas hemácias e nas células a-intercaladas. Sugerimos que em casos onde há perda de ânions pelos rins, mecanismos de compensação podem estar ativados, como o aumento da atividade excretora de prótons pela Na+/H+, ou pela H+-ATPase vacuolar apical. A fim de realizar estudos de interações protéicas, foi subclonado o domínio citoplasmático completo da fosfolípide scramblase dos seguintes tecidos humanos: cérebro, testículos e baço. A sequência do cDNA da enzima scramblase usada no ensaio duplo-híbrido resultou no fenômeno de auto-ativação, que é uma razão comum da falha do rastreamento pelo método duplo-híbrido / Abstract: Hereditary spherocytosis is a common type of hemolytic anemia. The first molecular defect in the band 3 gene associated with spherocytosis was characterized in 1992. Band 3, codified by the AEl gene, was the first isoform to be c10ned of a family of genes of anion exchangers (Anion Exchanger-AE gene family) and is the most abundant of the integral proteins of the erythrocyte membrane. The molecular alterations in this polypeptide are associated to spherocyte formation. Spherocytic red cells have osmotic fragility , and are more liable to undergo lise and splenic sequestration, which decreases their life span. Band 3 protein is also expressed in the kidney, in the basolateral membrane of the cortical collecting duct intercalated alpha cells, where it is responsible for the bicarbonate reabsorption, compensating the acid secretion at apical membrane by the H+ ATPase vacuolar, and taking part in the fine regulation of the acid-base equilibrium. Both erythrocyte and renal band 3 are isoforms of the same gene, which differ in transcription due to a tissue-specific promoter. The first three exons are not present in the erythroid form of renal band 3 rnRNA. The aim of this study was to investigate the molecular alterations and gene regulation, of band 3 in hereditary spherocytosis in 5 families with band 3 deficiency. This study was based on the screening of mutations and polymorphisms of the gene formerly mentioned, inc1uding the promoter region, which might be involved in the pathophysiology of the disease. In order to detect the molecular alterations, PCR technique, single strand conformation polymorphism analysis, subc10nning and sequencing were used. The cDNA study was performed afier the reverse transcription of the rnRNA extracted from the reticulocytes using RT-PCR. Another aim was to investigate the renal alterations of patients with hereditary spherocytosis and band 3 deficiency, as this protein is also expressed in the kidneys. Renal studies were performed using urinary acidification tests and measures of. bicarbonate, urinary pH, acid titration and ammonia excretion during the basal period and afier furosemide stimulation. The sodiumllithium countertransport activity in the red blood cells of patients with hereditary spherocytosis was also assessed, as it is an indirect measure of the Na + /Ir countertransport, which is involved in the intracellular pH regulation of the erythrocyte and in the acid-base homeostasis of the organism, secreting acid and reabsorbing Na + in the renal epithelium. Our results caracterized two novel mutations in the AEI gene. The study of Band 3 campinas, a mutation at the splice donor site in the intron 8, revealed a bicarbonate loss by the urine from patients and an increase in the sodiumllithium countertransport activity of their red blood cells. The Band 3 Pinhal is a highly conserved arginine to histidine substitution in the transmembrane domain. This is the second mutation affecting the codon 490 of band 3, and could represent a hot spot for mutations in the AEI gene. The red blood cells of these patients showed a reduced number of sites for DIDS, the band 3 anion exchange inhibitor. Another mutation found was the Band 3 Montefiore, previously described. The study of the patient's tubular acidosis revealed a new mutation neighboring the kidney promoter in a child presenting incomplete distal renal tubular acidosis, which might be associated with the kidney bicarbonate reabsorption defect. The acidosis study also caracterized a novel polymorphysm in intron 3, the adenine 1233 deletion, with an allele frequency of 0.34 in the 120 chromossomes analyzed. A sequence conflict (four guanines in the place of three nt.1272-1274) was also verified in all subjects studied. The polymorphysm Asp38-7Ala (Darmstad) was found in one patient with acidosis, but was not related with the disease. Finally, we conc1uded that mutations in the band 3 gene may be associated with hereditary spherocytosis and with incomplete distal renal tubular acidosis, as the band 3 isoforms are expressed in the red cells and in the renal {X-intercalated cells. We suggest that the proton excretion mechanisms, as the Na+/H+ exchanger or the vacuolar Ir-ATPase, might be activated to compensate the basal bicarbonate loss by the kidney. In order to perform protein interaction studies, we have subc10ned the entire cytoplasmic domain inc1uding part of the transmembrane segment of phospholipid scramblase from the following human cDNA tissues: brain, testis and spleen. The cDNA sequence of phospholipid scramblase used in the two-hybrids system caused auto-activation, a common reason for failure of two-hybrid screens / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores : Enilson Antonio Sallum, Antonio Wilson Sallum / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-28T23:11:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cury_PatriciaRamos_D.pdf: 2411006 bytes, checksum: b526761fe53047c7415b4cdf36760c9a (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O presente estudo avaliou clínica e radiograficamente os resultados da regeneração tecidual guiada (RTG) com uma membrana reabsorvível no tratamento de lesões de bifurcação classe II em molares inferiores durante 24 meses. Nove pacientes, cada um com duas lesões de bifurcação classe II comparáveis (18 lesões) foram avaliados. As lesões de bifurcação em cada paciente foram aleatoriamente designados para o grupo teste (técnica de RTG) ou controle (raspagem e alisamento radicular com acesso cirúrgico). Medidas clínicas e radiografias padronizadas foram obtidas antes do tratamento, e 6, 12, 18 e 24 meses após as cirurgias. A profundidade de sondagem apresentou melhora contínua significante durante 18 meses no grupo teste e 12 meses no grupo controle. Comparando as profundidades de sondagens ao longo de 24 meses à profundidade de sondagem inicial, as reduções foram significantes nos grupos teste e controle (P < 0,007, P < 0,0005, respectivamente), mas as diferenças entre os grupos não foram significantes em qualquer exame. No grupo controle houve uma tendência de ganho de nível clínico de inserção vertical aos 6 e 12 meses (P = 0,074 e P = 0,068, respectivamente); entretanto, houve perda de inserção e o que havia sido ganho foi perdido aos 18 meses. Aos 24 meses, o nível clínico de inserção vertical foi melhor no grupo teste do que no controle (P < 0,04). Houve ganho de nível clínico de inserção horizontal significante no grupo teste comparado ao grupo controle ao longo dos 24 meses (P <0,033). No grupo teste, 2 dos 9 defeitos apresentaram fechamento completo à sondagem, 1 foi convertido para classe I seis meses após as cirurgias, e 1 apresentou reabsorção radicular no fórnice da bifurcação, aos 24 meses, e foi extraído. Nenhum dos sítios controle mostrou completo fechamento ou conversão para classe I, e 2 foram convertidos para classe 111. O grupo teste mostrou perda de altura óssea, e o grupo controle ganho, aos 6 meses, sendo a diferença entre os grupos significante (P = 0,035); entretanto, a diferença entre grupos não foi significante aos 12, 18 e 24 meses. Houve ganhado significante na altura óssea no grupo teste no exame aos 24 meses (P = 0,015). No grupo controle, a altura óssea permaneceu estável durante os 24 meses. Concluindo, a RTG promoveu maior ganho de nível clínico de inserção horizontal e vertical, possibilidade de fechamento de lesões, além de maior estabilidade dos resultados ao longo de 24 meses e ganho de altura óssea comparado ao resultado aos 6 meses / Abstract: This study evaluated the treatment outcomes after guided tissue regeneration (GTR) with a resorbable membrane in class 11 furcation defects in mandibular molars over 24-month period. Nine patients with two comparable class 11 furcation defects (18 defects) were included. GTR was performed on the test group, and open flap debridement (OFD) was used as the control treatment. Clinical measurements and standardized radiographs were performed at baseline, and at 6, 12, 18 and 24 months. Probing depths continued to improve significantly over the 18-months study period in the GTR-group, and over 12-months in the OFD group. Compared to baseline, the reductions in the probing depth were significant over the 24-month period in test and control groups (P < 0.007, P < 0.0005, respectively), however the differences between test and control group were not significant at any exam. In the OFD-group there was a trend of gain of vertical clinical attachment levels for the 6 month-baseline and 12 month-baseline intervals (P = 0.074 and P = 0.068, respectively), however there was loss of CAL-v and the initial gain was lost at 18 months. At 24 months, the vertical clinical attachment evei was 12.31 mm for the GTR-group and 13.78 mm for OFD-group (P < 0.04). A significant improvement in the clinical attachment level horizontal was observed in the GTR-group compared to the OFD-group over 24 months (P < 0.03). In the GTR group, 2 out of 9 defects showed complete closure, one was converted to class I at 6 months, and one tooth was lost at 24 months because of root resorption. None of the control sites showed complete closure, and two of nine defects were class 111 at 12 months and 24 months. There was significant gain in bone height in the GTR group at 24 months (P = 0.015). Comparing GTR-group to OFD-group, there was significant loss of bone height in the GTR-group and gain in the OFD-group at 6 months (P = 0.035), however the inter-groups differences were not significant at 12, 18 and 24 months. In conclusion, GTR provided significant greater improvement than OFD in horizontal and vertical clinical attachment level, possibility of complete closure of lesions, as well as superior stability of the outcomes over the 24-month period and and gain in bone height compared to 6 month result / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Submitted by Marcele Costal de Castro (costalcastro@gmail.com) on 2017-09-06T14:41:57Z No. of bitstreams: 1 EDNA TERESA RUAS BASTOS M.pdf: 3769677 bytes, checksum: daecee079f3bc3c87f7374c4ed2ee90a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T14:41:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EDNA TERESA RUAS BASTOS M.pdf: 3769677 bytes, checksum: daecee079f3bc3c87f7374c4ed2ee90a (MD5) Previous issue date: 2006 / As membranas de nanofiltração (NF) tem despertado atualmente grande interesse para fins de aplicação em tratamento de águas, indústria química fina e também na recuperação de moléculas com alto valor agregado, porque possibilitam a separação de íons multivalentes que estejam dissolvidos na água, bem como compostos orgânicos com massa molar relativamente baixa, na faixa de 200 a 1000 Da. As membranas de NF são constituídas de duas camadas, um suporte polimérico microporoso e uma camada densa e fina que é responsável pela seletividade da membrana. Normalmente, membranas compostas são obtidas em pelo menos duas etapas: preparação do suporte poroso com posterior deposição da pele. Porém, no presente trabalho, as membranas foram preparadas em uma etapa utilizando espalhamento consecutivo de duas soluções poliméricas, utilizando a técnica de inversão de fase por imersão/precipitação. Para formação do suporte foi utilizado como polímero base PES ou PSU e para a formação da "pele" foi utilizada polisulfona previamente sulfonada. As reações de sulfonação foram conduzidas em condições moderadas para minimizar a degradação da cadeia polimérica principal, utilizando como agente sulfonante o (CH3)3SiSO3CI. Os produtos sulfonados foram caracterizados por análise titulométrica, viscosidade, análise térmica, e ressonância magnética nuclear. Para a síntese das membranas compostas foram desenvolvidos estudos da influência de algumas variáveis de síntese, tais como composição da solução do suporte, da pele e do banho de precipitação. As membranas foram caracterizadas quanto a sua morfologia, através de microscopia eletrônica de varredura e quanto as suas propriedades de transporte, tais como permeabilidade hidráulica, fluxo permeado e seletividade. A seletividade das membranas foi avaliada através de testes de permeação de soluções de sulfato e cloreto de amônio ambas na concentração de 100 mgL-1. Os resultados obtidos mostraram que é possível a preparação de membranas compostas pelo espalhamento consecutivo de duas soluções poliméricas, com aderência entre as duas camadas. Com relação aos testes de permeação, as membranas desenvolvidas apresentaram valores de fluxo permeado (2 - 29 L/m2.h) e permeabilidade hidráulica (0,56 – 8,00 L/m2.h.atm) dentro da faixa das membranas comerciais de NF. Os valores de rejeição aos íons amônio (77%) ainda podem ser otimizados pela variação das condições de preparação das membranas compostas / The use of nanofiltration membranes (NF) in water treatment in chemical industries and also on the recovery of high valuable molecules, are of great interest because they make possible the separation of multivalent ions wich are solved in water, as well as organic componds of low molar weight (200 –1000 Da). The NF membranes are constituted of two layers, a micro-porous - base polymer and a dense and fine layer wich is responsible for the selectivity of the membrane . Usually, composite membranes are obtained in at least two stages: initially the preparation of the porous support and afterwards the deposition of the skin. However, in the present method, the membranes were prepared in the step, using consecutive spread of two polymeric solutions, using the technique of phase inversion by immersion/ precipitation. The support was created using a polymer base poliethersulfone or polysulfone and the skin was made from polysulfone previously sulfonated. The sulfonation reactions were driven under moderate conditions to minimize the degradation of the main polymeric chain using trimetylsilylchlrosulfone as .the sulfonation agent. The sulfonated products were characterized by titulometric analysis, viscosity, thermal analysis and nuclear magnetic resonance. Studies of the influence of some synthesis variables were developed for the synthesis of the composite membrane, such as the composition of the support solution, of the skin and of the precipitation bath. The membranes were characterized by their morfology, through a scanning electron microscope and by their transport properties, such as the hydraulic permeability, the permeation flow and the selectivity. The membrane selectivity was evaluated through tests of permeation of ammonium sulfate and chloride solutions both in the concentration of 100mgL-1. The final results showed that it is possible to prepare composite membranes by the consecutive spread of two polymerics solutions, with adherence between the two layers. Regarding the permeation tests, the developed membranes presented values of permeated flow of 2-29 L/m2h and hydraulic permeability of 0,56 – 8,00 L/m2h.atm within the range of commercial NF membranes. The ammonium ions rejection values of 77% can still be optimized by changing the preparation conditions of the composite membranes.

Orientadores : Lireny Aparecida Guaraldo Gonçalves, Jose Carlos Cunha Petrus / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T05:10:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_JulianaMariaLeiteNobregade_M.pdf: 18308062 bytes, checksum: 8a64b95a07eed13a8ebaefea4a2682b9 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Óleos vegetais brutos necessitam submeter-se a um processo de refino, que consiste em etapas, tais como, degomagem, neutralização, branqueamento e desodorização, a fim de adquirir características finais desejáveis para o consumo. O uso de membranas no processamento de óleos vegetais tem se tornado uma importante aplicação na tecnologia de membranas devido a vantagens oferecidas, tais como, baixo consumo de energia, redução do tratamento de águas residuais, não adição de químicos e retenção de compostos desejáveis. A tecnologia de membranas oferece muitas vantagens comparativamente ao processo convencional. Neste trabalho, quatro membranas com massa molecular de corte na faixa de 69 KDa, preparadas laboratorialmente, foram testadas quanto aos seus fluxos permeados, retenção de fosfolipídios e estabilidade frente ao hexano durante a degomagem da miscela de óleo de soja bruto. As membranas utilizadas foram preparadas com dois tipos diferentes de polímeros, Polifluoreto de Vinilideno (PVDF) e Polietersulfona (PES), e preparadas pelo processo de inversão de fases. A ultrafiltração (UF) do óleo de soja bruto e da miscela (óleo/hexano) realizou-se em célula de ultrafiltração perpendicular com agitação e pressurização com N2. Óleos de soja com baixos e altos teores de fosfolipídios foram avaliados sob diferentes condições de tempo e pressões, a 50°C. A redução de fosfolipídios para o óleo de soja bruto e miscela variou entre 54,94 - 56,34% e 63,0 - 84,0%, respectivamente, e 90% para a miscela duplamente ultrafiltrada. A ultrafiltração da miscela apresentou maiores fluxos permeados em relação ao óleo bruto. Os resultados sugerem que as membranas testadas podem ser utilizadas para produzir um óleo comestível de qualidade "premium / Abstract: Crude vegetable oil needs to be submitled to refining, bleaching and deodorization process to improve its quality. Degumming is the first step applied in order to remove phospholipids. The use of membranes in edible vegetable oil processing has become one of the most important application of membrane technology due its main advantages like low energy consumption, reduction of wastewater treatment, no addition of chemicals, retention of desirable components, offering a high potential to improve the oil quality. Membrane technology offers many advantages compared to the conventional processo In this work, four different membranes, with molecular cuttoff of 69 kDa, synthesized in laboratory scale, have been tested for their permeation flux, phospholipids retention and stability in hexane during membrane degumming of crude soybean oi!. Membranes were made of two different polymeric materiais, Poliyinylidenfluoride (PVDF) and Polyethersulfone (PES), and prepared by the phase inversion processo Ultrafiltration (UF) of a crude and soybean oil / hexane extract (miscella - 25% crude soybean oil) was performed in a stirred dead-end UF cell, pressurized with N2.Soybean oils with high and low phospholipids contents were evaluated at 50°C under different pressure and time conditions. The reduction of phospholipids in crude soybean oil and miscella was in the range of 54.94 - 56.34% e 63.0 - 84.0 %, respectively and 90% for miscella double ultrafiltrated. The permeate flux of miscella ultrafiltration was higher than the crude oi! ultrafiltration. The results suggest that the membranes tested can be used to produce a premium quality edible oi! / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos