Orientador: Luiz Claudio Di Stasi / Banca: Clélia Akiko Hiruma Lima / Banca: Ramon Kaneno / Banca: Adair Roberto Soares dos Santos / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandoJON_TESE.pdf: 1862708 bytes, checksum: c0bcb5ceb1bfbf2e1312b265a0c10350 (MD5) Previous issue date: 2013-09-13 / Periodontal disease is an infectious disease resulting from the immunoinflammatory response of the host to microorganisms present in the dental biofilm which causes tissue destruction. The objective of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of cyclophilin A (CYPA), extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) and matrix metalloproteinase 7 (MMP-7) in human specimens of clinically healthy gingiva (n=32), biofilm-induced gingivitis (n=28), and chronic periodontitis (n=30). Immunopositivity for CYPA, EMMPRIN and MMP-7 differed significantly between the three groups, with higher percentages of staining in chronic periodontitis specimens, followed by chronic gingivitis and healthy gingiva specimens (p < 0.001). Immunoexpression of CYPA and MMP-7 was higher in the intense inflammatory infiltrate observed mainly in cases of periodontitis. Analysis of possible correlations between the immunoexpression of EMMPRIN, MMP-7 and CYPA and between the expression of these proteins and clinical parameters (probing depth and clinical attachment loss) showed a positive correlation of CYPA expression with MMP-7 (r = 0.831; p < 0.001) and EMMPRIN (r = 0.289; p = 0.006). In addition, there was a significant positive correlation between probing depth and expression of MMP-7 (r = 0.726; p < 0.001), EMMPRIN (r = 0.345; p = 0.001), and CYPA (r = 0.803; p < 0.001). These results suggest that CYPA, EMMPRIN and MMP-7 are associated with the pathogenesis and progression of periodontal disease / A doen?a periodontal ? uma entidade infecciosa que resulta da resposta imuno-inflamat?ria do hospedeiro aos microrganismos presentes no biofilme dent?rio, levando ? destrui??o tecidual. O prop?sito do presente estudo foi avaliar a express?o imuno-histoqu?mica da ciclofilina A (CYPA), do indutor de metaloproteinases da matriz extracelular (EMMPRIN) e da metaloproteinase da matriz 7 (MMP-7) em esp?cimes humanos de gengiva clinicamente saud?vel (n=32), gengivite induzida por biofilme dent?rio (n=28) e periodontite cr?nica (n=30). Foram realizadas bi?psias das tr?s condi??es cl?nicas e feita a an?lise imuno-histoqu?mica atrav?s da contagem total do n?mero de c?lulas positivas, correlacionando-a com par?metros cl?nicos. A imunopositividade da CYPA, do EMMPRIN e da MMP-7 revelou diferen?a estatisticamente significativa entre os tr?s grupos, com maiores percentuais de positividade nos esp?cimes de periodontite cr?nica, seguidos pelos esp?cimes de gengivite cr?nica e de gengiva saud?vel (p < 0,001). Foi evidenciada maior express?o de CYPA e MMP-7 nos grupos que tinham infiltrado inflamat?rio mais intenso. Foram observadas correla??es das imunoexpress?es de EMMPRIN, MMP-7 e CYPA, tanto entre si como com par?metros cl?nicos (profundidade de sondagem e perda de inser??o cl?nica). Foram verificadas correla??es positivas entre a express?o de CYPA e as express?es da MMP-7 (r = 0,831; p < 0,001) e do EMMPRIN (r = 0,289; p = 0,006). Al?m disso, a profundidade de sondagem revelou correla??o positiva, estatisticamente significativa, com as express?es de MMP-7 (r = 0,726; p < 0,001), EMMPRIN (r = 0,345; p = 0,001) e CYPA (r = 0,803; p < 0,001). Esses resultados evidenciam que a CYPA, o EMMPRIN e a MMP-7 podem estar associadas ? patog?nese e progress?o da doen?a periodontal

A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica caracterizada por ser uma doença granulomatosa. As formas benignas da doença são caracterizadas por uma infecção localizada, contendo granulomas compactos com poucos fungos; já nas formas mais graves, ocorre um processo granulomatoso frouxo com focos de necrose e intensa disseminação fúngica. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de lesões granulomatosas em baço, fígado, pulmão e epiplon de camundongos, após infecção pela via intraperitoneal com o isolado de alta virulência, Pb18, em diferentes períodos de infecção após tratamento com fármacos, os quais possuem mecanismo de ação relacionado com a alteração no balanço entre a síntese e degradação dos produtos do colágeno, interferindo diretamente na formação do granuloma A citocina IFN-<font face=\"Symbol\">g, o antibiótico Tetraciclina e as drogas antiinflamatórias Lumiracoxib e Celecoxib. Avaliamos a presença de alguns componentes do granuloma (colágeno, células do infiltrado inflamatório, de citocinas primordiais para sintese/degradação da MEC do granuloma, presença de P. brasiliensis). / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis that is endemic in Latin America, whose causative agent is the thermal dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). PCM is a granulomatous disease, and the formation of granulomas can be understood as a mechanism of the body to block and limit the invasiveness of the fungus or its antigenic components, once unable to lyse them. Bening forms of the disease are characterized by a localized infection, where granulomasa are compact and contain few fungi. More severe forms present loose granulomatous processes with foci of necrosis and severe fungal. Studies in which granulomatous response was developed in resistant (A/J) and susceptible (B10.A) mice to the high virulence isolate Pb18 showed the presence of different patterns of injuries related to the type of extracellular matrix (ECM) components and the different cells types in the area, suggesting a important role of these elements in the formation and constitution of the granuloma and thus the outcome of infection. In our project, we aimed to evaluate the development of granulomatous lesions in the spleen, liver, lung and omentum of mice susceptible to PCM after intraperitoneal infection with Pb18, at different periods of infection (acute and chronic) with or without treatment with drugs. These drugs have mechanisms of action closely related to the change in the balance between synthesis and degradation of collagen Thus, they interfere directly in the granuloma formation and in maintaining the viability of fungi and also with the development of fibrosis. Which is a common and devastating sequelae of numerous infections including the PCM, with the characteristic proliferation of fibroblasts and deposition of ECM. The treatments were chosen based on prior knowledge on their effects on the course of experimental murine PCM. IFN-<font face=\"Symbol\">g was chosen due to its antifibrotic effect, being an activator of macrophages in infection by P. brasiliensis and increasing the fungicidal effect of neutrophils. The antibiotic tetracycline was used because of its inhibitory effect on the synthesis of extracellular matrix, limiting antimicrobial activity and the ability of collagenase to degrade ECM. Finally, the antiinflammatory drugs Celecoxib and Lumiracoxib (inhibitors of the COX-2 enzyme) 11 were used because they cause an increase in the expression of collagen type III and type IV. We analyzed the components of the granuloma (collagen, inflammatory cells, cytokines essential for synthesis / degradation of the ECM of the granuloma, the presence of P. brasiliensis). Among the cytokines analyzed, we studied the importance of TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 in the formation of granulomas and regulation of matrix metalloproteinases (MMP) synthesis and function. We analyzed TGF-<font face=\"Symbol\">b because it negatively modulate the secretion of nitric oxide by macrophages and promote the accumulation of ECM and is believed to be the central mediator of the process of fibrosis in several pathologies. IFN-<font face=\"Symbol\">g was studied because of its correlation to the preferential Th1 immune response in diseases and infectious processes of fungal and bacterial infections, and also because it modulates fibroblast function.

Os tumores da cérvice-uterina, que representam uma das principais doenças ginecológicas em mulheres na idade reprodutiva em todo o mundo, estão etiologicamente associados com a infecção pelo papilomavírus humano (HPV). A progressão de uma lesão intraepitelial escamosa de baixo-grau (LSIL) a um carcinoma invasivo de cérvix uterina está acompanhada da degradação da matriz extracelular (MEC) devido à ação progressiva das metaloproteinases de matriz (MMP-2, MMP-9 e MMP-14) no processo de invasão e metástase. Entretanto, o balanço entre as MMPs e seus reguladores como RECK e TIMPs é necessário para controlar esta invasão. O objetivo deste projeto consiste em avaliar a atividade e a expressão das metaloproteinases 2, 9, e 14, e caracterizar a expressão do gene supressor de metástase RECK e do inibidor tecidual de metaloproteinases (TIMP-2), em modelo de queratinócitos humanos infectados com retrovírus recombinantes que expressam os oncogenes E6 e/ou E7 de HPV 16, em culturas cultivadas em monocamada e organotípicas. Para isso, utilizamos ensaios de real-time PCR, zimografia, western blot, imunocitoquímica, ensaio de ELISA e imunohistoquímica. Em culturas em monocamada observamos que as células que expressam as oncoproteínas E6E7 de HPV16 apresentaram menores níveis protéicos de RECK e TIMP-2 em relação ao controle pXLSN. Quando analisamos as culturas organotípicas, também observamos esta diminuição dos níveis de RNAm e protéicos de RECK em rafts que expressam E6E7, acompanhado pelo aumento da atividade de MMP-9, em relação ao controle. Também observamos que o tratamento das culturas com a citocina TNF aumenta a expressão gênica, protéica e atividade de MMP-9 em todas as linhagens analisadas. Além disso, os oncogenes E6 e/ou E7 não afetam a expressão e/ou atividade de MMP-2, MT1-MMP. Nossos dados demonstraram que a expressão das oncoproteínas E6E7 de HPV16 estão relacionadas com o desequilíbrio entre MMPS e seus inibidores, sugerindo que em uma fase pré-invasiva do carcinoma cervical, não somente as MMPs, mas, principalmente seus inibidores são críticos para início da progressão tumoral. / Cervical cancer is etiologically associated with to high-risk human papillomavirus (HPV) infection. It has been observed that matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9, and MT1-MMP are required for basement membrane degradation during cervical carcinoma progression. Moreover, a counterbalancing among MMPs and their regulators, such as TIMPs and RECK, is necessary to modulate invasion. In order to study the effect of HPV oncogenes on MMPs expression, primary human keratinocytes (PHKs) were infected with recombinant retroviruses expressing wild-type HPV16 E6 and/or E7 oncogenes and were used to seed monolayers and organotypic cultures. Quantitative real-time PCR (Q-PCR), western blot, zimography, immunocitochemistry, ELISA assay and immunohistochemistry were used to determine the expression level and activity of MMP-2, MMP-9, MT1-MMP and their inhibitors RECK and TIMP-2. We observed that cultures expressing E6E7 presented lower RECK and TIMP-2 protein levels than control keratinocytes. In addition, rafts cultures presented the same lower RECK levels additionally presenting higher MMP-9 activity than control. Furthermore, we observed that expression of E6 and/or E7 proteins do not affect MMP-2 and MT1-MMP protein levels and/or activity. We also observed that TNF treatment enhance the MMP-9 gene and protein expression and activity in all studied cell lines. Taken together, our results demonstrate that HPV16E6E7 expression is related with the unbalance between MMPs and their inhibitors, suggesting that in the initial steps of HPV-related cervical disease, not only MMPs but also RECK and TIMP-2 are critical for tumor progression.

Introdução: Níveis de fator de necrose tumoral–alfa (TNF-α), N-peptídeo do pró-colágeno III (PIIINP) e metaloproteinase de matriz –1 (MMP-1), marcadores biológicos de remodelamento ventricular, estão elevados em pacientes com insuficiência cardíaca (IC), talvez refletindo elevadas pressões de enchimento. A correlação destes marcadores com variáveis clínicas e hemodinâmicas permanece pouco compreendida, particularmente no contexto ambulatorial da IC. Objetivo: Avaliar níveis séricos de marcadores biológicos de remodelamento ventricular em pacientes com IC, comparando tratamento guiado por ecocardiografia (ECO), buscando redução de pressões de enchimento, versus tratamento convencional (CLÍNICO), baseado em sinais e sintomas. Métodos: Ensaio clínico randomizado. Pacientes estáveis com IC e fração de ejeção menor do que 40% foram alocados entre os grupos de tratamento e submetidos a ecocardiograma e coletas de sangue no início do estudo e em 180 dias. TNF-α e MMP- 1 foram medidos por ELISA, e PIIINP, por radioimunoensaio. Resultados: Incluiu-se 80 pacientes, com 59 ± 15 anos e fração de ejeção de 26 ± 7%; 25% isquêmicos e 52% masculinos. Houve redução dos marcadores biológicos intragrupos, não havendo diferença entre os tratamentos. No grupo CLÍNICO, os níveis de TNF-α, MMP-1 e PIIINP apresentaram diferenças estatisticamente significativas entre os momentos basal e final (respectivamente, 3,11 ± 2,90 versus 1,24 ± 0,60 pg/mL p < 0,0003; 2,66 ± 1,00 versus 1,16 ± 0,40 ng/mL p < 0,0001; 6,12 ± 2,60 versus 3,89 ± 1,60 μg/L p < 0,0001). De maneira semelhante, tal diferença também foi observada no grupo ECO para os três marcadores (respectivamente, 3,90 ± 4,90 versus 1,40 ± 1,30 pg/mL p < 0,0001; 2,50 ± 0,90 versus 1,09 ± 0,40 ng/mL p < 0,0001; 6,09 ± 2,60 versus 3,50 ± 1,30 μg/L p<0,0001). Ao final da intervenção, no entanto, não foi observada diferença significativa dos valores de TNF-α , MMP-1 e PIIINP entre os dois grupos de tratamento (p = 0,7; p = 0,8; e p = 0,2; respectivamente). A combinação dos valores basais das variáveis biológicas gerou um escore que se associou significativamente com o comportamento final das pressões atrial direita e sistólica da artéria pulmonar. Pacientes com marcadores biológicos basais no quartil 75% mantiveram níveis superiores de pressões atrial direita (13 mmHg; p = 0,034) e sistólica de artéria pulmonar (60 mmHg; p = 0,007) ao final do seguimento. Conclusão: Independente do tratamento alocado, houve redução dos níveis de marcadores biológicos ao final do seguimento; no entanto, níveis basais mais elevados destes marcadores foram preditores de menor redução das pressões em átrio direito e sistólica da artéria pulmonar. Os dados sugerem que indicativos de intenso processo de remodelamento ventricular se associam à progressão da IC e a pressões de enchimento elevadas. / Introduction: Levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), N-terminal propeptide of type III collagen (PIIINP) and type 1 matrix metalloproteinase (MMP-1), biological markers of ventricular remodeling, are elevated in heart failure (HF) patients, perhaps reflecting elevated filling pressures. The correlation of these markers with clinical and hemodynamic variables remains poorly understood, particularly in the outpatient setting. Objective: To evaluate serum levels of ventricular remodeling biological markers in patients with HF, comparing a conventional clinically-oriented treatment (Conventional Therapy), based on clinical signs and symptoms, to an echocardiography-guided treatment (Echo-guided Therapy), aiming at a reduction in filling pressure levels. Methods: Randomized trial. Stable patients with HF and ejection fraction lower than 40% were allocated to the treatment groups and submitted to echocardiography and blood sampling at the beginning of the study and after 180 days. TNF-α and MMP-1 were measured by ELISA, and PIIINP, by radioimmunoassay. Results: Eighty patients at 59 ± 15 years and a mean ejection fraction of 26 ± 7% were included; 25% were ischemic and 52%, males. There was a reduction in intragroup biological markers, without difference between treatments. TNF-α, MMP-1 and PIIINP levels were statistically different between baseline and final in patients allocated to Conventional Therapy (respectively, 3.11 ± 2.90 versus 1.24 ± 0.60 pg/mL p < 0.0003; 2.66 ± 1.00 versus 1.16 ± 0.40 ng/mL p < 0.0001; 6.12 ± 2.60 versus 3.89 ± 1.60 μg/L, p < 0.0001). Similarly, such a difference was also observed in the Echo-guided Therapy for the 3 markers (respectively, 3.90 ± 4.90 versus 1.40 ± 1.30 pg/mL p < 0.0001; 2.50 ± 0.90 versus 1.09 ± 0.40 ng/mL p < 0.0001; 6.09 ± 2.60 versus 3.50 ± 1.30 mg/L p<0.0001). By the completion of the intervention, however, no significant difference was observed in the values of TNF-α, MMP- 1 and PIIINP between the 2 treatment groups (p = 0.7; p = 0.8; and p = 0.2; respectively). A composite score incorporating baseline biological marker levels was statistically associated to final right-sided pressure levels (right atrial pressure and pulmonary artery systolic pressure). Patients with baseline biological marker levels over percentile 75 maintained higher right atrial (13 mmHg; p = 0.034) and pulmonary artery systolic pressures (60 mmHg; p = 0.007) at the end of protocol. Conclusion: Regardless of allocated treatment group, biological marker levels were lower at the end of the follow-up; however, higher baseline levels of these markers were predictive of lower reductions in right atrial pressure and pulmonary artery systolic pressure. The data obtained suggest that indicators of an intense remodeling process are associated with elevated filling pressures and progression of HF.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-11T13:20:49Z No. of bitstreams: 1 Flavio de Oliveira Silva.pdf: 672464 bytes, checksum: 70191679dda58a1314e6dce99c1b08da (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T13:20:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavio de Oliveira Silva.pdf: 672464 bytes, checksum: 70191679dda58a1314e6dce99c1b08da (MD5) Previous issue date: 2007-02-05 / Lectins, carbohydrate binding proteins of non immune origin, agglutinate cells and glycoconjugates. Some proteins as the lectins from the Diocleinae tribe have described as pharmacological active molecules. Lectins form an important class of carbohydrate-binding proteins. Canavalia brasiliensis (ConBr) is a sugar-binding specificity [D-mannose (Dglucose)] protein. The aim of this study was evaluate the proteins profile and to evaluate histhopathologically treated wounds with ConBr seeds lectins. Surgical wounds were produced in the dorsal region in albino Swiss mice. Each wound was daily treated topically along 11 days, as follow: ConBr (10μg), ConBr/Manose (10μg in manose 0,1M), manose (0,1M) and NaCl (150mM). Protein profile has done through SDS-PAGE and showed proteins with molecular weight between 30 and 70KDa, suggesting the presence of metalloproteinases in the homogenates gotten from the cutaneous injuries. In 2nd day of postoperative (PO), the ConBr/Manose group was what it presented the highest proteolitic activity, in 7th day of P.O., the highest activity was observed in the ConBr and NaCl groups. Finally, in 12th day of PO ConBr/manose group showed a maxim proteolitic activity. ConBr group showed flogistic signs less intense than others groups, had presented contraction percentile superior during the fibroplasia phase. In the first 48 hours it was observed, in all the studied groups, the presence of polymorphonuclear leukocyte infiltrate, crust and angiogenesis. At 7th day there was presence of fibrovascular (manose, ConBr Manose and ConBr) and vascular granulation tissue (NaCl) in studied groups. Finally, at 12th day, wounds showed reepithelization. In ConBr/manose group there was presence of fibrovascular granulation tissue with more organized collagen network. Results suggests that wound healing it was better in ConBr group, having presented one better effect when used in association with manose. / Lectinas são proteínas de origem não imune que se ligam a carboidratos, podendo aglutinar células e glicoconjugados. Algumas dessas lectinas, como as obtidas de leguminosas da tribo Diocleinae possuem atividade farmacológica, a exemplo da Canavalia brasiliensis (ConBr) a qual exibe especificidade de ligação D-manose/D-glicose. O objetivo desse estudo foi determinar o perfil de proteases e avaliar clínica e histopalogicamente o efeito do tratamento tópico de feridas cutâneas com a ConBr livre e conjugada com o seu açúcar específico. Para isso, lesões cirúrgicas foram produzidas na região dorsal de camundongos, divididos em grupos, de acordo com o tratamento que se segue: NaCl (150mM), manose (0,1M), ConBr (10μg) e ConBr/manose (10μg em solução fisiológioca com manose 0,1M). O perfil das proteínas realizado através de eletroforese SDS-PAGE demonstrou a presença de proteínas com peso molecular compreendidos na faixa de 30 a 67 kDa, sugerindo a presença de metaloproteinases nos homogenatos obtidos a partir das lesões cutâneas. No 2º dia de pósoperatório (P.O.), o grupo ConBr/Manose foi o que apresentou a maior atividade proteolítica, no 7º dia de P.O., a maior atividade foi observada nos grupos ConBr e NaCl, finalmente, no 12º dia de P.O. a maior atividade proteolítica foi observada no grupo ConBr/manose. Na avaliação clínica observou-se que o grupo ConBr apresentou sinais inflamatórios menos intensos que os outros grupos avaliados, tendo evoluído com maior percentual de contração durante a fase de fibroplasia. Nas análises histopatógicas visualizou-se no 2º dia de P.O., a presença de crosta, infitrado polimorfonuclear e neoangiogênese em todos os grupos estudados. No 7º dia de P.O., os grupos Manose, ConBr/Manose e ConBr apresentaram tecido de granulação com padrão fibrovascular enquanto no grupo NaCl foi visualizado tecido de granulação com padrão vascular. No 12º dia todos os grupos apresentaram reepitelização, porém o grupo ConBr/Manose apresentou melhor padrão de organização das fibras colágenas. A lectina isolada das sementes da Canavalia brasiliensis favoreceu o processo cicatricial das lesões cutâneas experimentais, tendo apresentado um melhor efeito sob o ponto de vista histopatológico quando usada em associação com a manose.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-05-25T14:19:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Dafne_C_A_Quixabeira.pdf: 2494498 bytes, checksum: df9aad949df97edff70e2580bdd977c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-25T14:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Dafne_C_A_Quixabeira.pdf: 2494498 bytes, checksum: df9aad949df97edff70e2580bdd977c5 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CAPES / CNPQ / FACEPE / O câncer de colo do útero apresenta distribuição a nível mundial, correspondendo ao quarto mais incidente entre as mulheres. Está associado à infecção prévia pelo Papillomavírus Humano (HPV) em quase a totalidade dos casos. Diversos cofatores atuam em consonância ao HPV para o surgimento de lesões cervicais e posterior carcinoma. Importante destaque como cofator deve ser dado às metaloproteinases de matriz (MMP), enzimas proteolíticas que participam da lise tanto de componentes da matriz extracelular (MEC), como os que não pertencem a matriz. Particularmente a MMP-2 tem destaque relevante no câncer cervical, por favorecer a progressão de lesões in situ para a invasão ao lisar a membrana basal. Polimorfismos na região promotora desse gene têm sido associados ao aumento do risco da progressão do câncer e formação de metástases. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a possível associação dos polimorfismos de base única (SNP) -1306C/T e -735C/T, presentes na região promotora do gene da MMP-2 em lesões cervicais em mulheres de dois Estados da região Nordeste do Brasil. Foram avaliados 52 casos de lesões intraepiteliais de baixo grau (LSIL) e 67 lesões intraepiteliais de alto grau (HSIL) para o polimorfismo -1306 C/T. Enquanto que 63 casos de LSIL e 73 casos de HSIL foram selecionados para a avaliação do SNP 735C/T. 95 casos com citologia normal foram selecionados como grupo controle do -1306C/T e 91 casos para o -735 C/T. A amplificação gênica e posterior genotipagem foram feitas por meio de PCR-RFLP, com o uso das enzimas Pvu II e Hinf I, para os SNP-1306C/T e -735C/T, respectivamente. A MMP-2 C1306T não apresentou associação significativa entre os grupos LSIL e o controle (p=0,1734OR=0.37; 95 % CI=0.3-1.58). Assim como entre os grupos controle e HSIL (p=0,7118 OR=0.08; 95 % CI=0.93-3.3). O mesmo foi observado para a avaliação do MMP-2 C735T, pois não foi encontrada associação significativa entre o grupo LSIL e o controle (p=0,7948; OR=0,94; 95 % CI=0,56-2,15), bem como entre o grupo HSIL e o controle (p=0,7398; OR=1,07; 95 % CI=0,50-1,64). A presença do genótipo TT no modelo recessivo apresentou-se como fator protetor da progressão das lesões cervicais (p=0,03566; OR=0,66; 95 % CI=0,10-0,96). Em relação ao uso de contraceptivo oral como cofator, não foram encontradas associações, tanto entre os casos LSIL (p=0,370 OR=0.65; 95 % CI=0.35-1.93) e HSIL (p=0,6527; OR=0.08; 95 % CI=0.93-3.3) -1306C/T, quanto para os casos LSIL (p=0,57649; OR= 0,9; 95% CI=0.60-2.54) e HSIL (p=0,6269; OR= 0,74; 95% CI=0.47-1.57) do -735C/T. A associação entre a infecção pelo HPV e os genótipos C735T e C1306T não foi significativa (p >0,05). No presente estudo, apenas a presença do genótipo TT do MMP-2 C735T apresentou relevância estatística como fator protetor da progressão das lesões cervicais para a malignidade. / Cervical cancer is a global health problem being the fourth most incident cancer in women. This type of cancer is associated with prior infection with Human Papillomavirus (HPV) in almost all cases. Some cofactors act with HPV in the development of lesions and posterior cervical carcinoma. An important cofactor are matrix metalloproteinases (MMP). Proteolytic enzymes that participate in the lysis component of the extracellular matrix (ECM). Particularly MMP-2 excels in cervical cancer progression by promoting the intraepithelial lesions to invasion due to lysis of the basal membrane. Polymorphisms in the promoter region of the MMP-2 gene has been associated with increased risk of progression to cancer and metastasis. This study aimed to evaluate the possible association of single nucleotide polymorphisms (SNP) -1306C / T and 735C / T, present in the promoter region of the MMP-2 gene in cervical lesions in women in States of northeastern Brazil. We evaluated 52 cases of low grade intraepithelial lesions (LSIL) and 67 cases of high grade (HSIL) for the polymorphism -1306 C/T. While other 63 LSIL cases and 73 HSIL cases were evaluated for SNP -735C/T. 95 cases with normal cytology were selected with the control group -1306C / T and 91 cases for the -735 C / T. Gene amplification and subsequent genotyping were performed by PCR-RFLP. For this we used the restriction enzyme Pvu II (for SNP-1306C / T) and Hinf I (for SNP -735C / T). The MMP-2 C1306T showed no significant association between the LSIL group and the control (p = 0,1734OR = 0:37; 95% CI = 0.3-1.58). As well as between the control group and HSIL (p = 0.7118 OR = 0:08; 95% CI = 0.933.3). The same was observed for the evaluation of MMP-2 compared C735T LSIL group and the control group (p = 0.7948, OR = 0.94; 95% CI = 0.56 to 2.15). There was also no association between HSIL group and the control (p = 0.7398; OR = 1.07; 95% CI = 0.50 to 1.64). The presence of the TT genotype in recessive model was presented as a protective factor in the progression of cervical lesions (p = 0.03566; OR = 0.66; 95% CI = .10-.96). Regarding the use of oral contraceptive as a cofactor, no significant associations found between LSIL cases (p = 0.370 OR = 0.65; 95% CI = 0.35-1.93) and HSIL (p = 0.6527; OR = 0:08; 95% CI = 0.93-3.3) from -1306C / T group, as well as LSIL (p = 0.57649; OR = 0.9; 95% CI = 0.60-2.54) and HSIL (p = 0.6269, OR = 0 74; 95% CI = 0:47 to 1:57) of -735C / T group. The association between HPV infection and the C735T and C1306T genotypes was not significant (p> 0.05). In the present study, only the presence of the TT genotype of MMP-2 C735T showed statistically significant protective factor in the progression of cervical lesions to malignancy.

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_AnnaLauraBecharaJacob_D.pdf: 12479529 bytes, checksum: a0414f163dce135319bdfb549308977a (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A exposição ao mercúrio (Hg) causa efeitos deletérios à saúde, incluindo doenças cardiovasculares. Embora os mecanismos não estejam precisamente definidos, metaloproteinases (MMPs) -2 e -9 podem estar envolvidas. Expressão e atividades aumentadas destas MMPs são demonstradas em diversas condições patológicas, e estudos demonstraram que os níveis circulantes de MMPs poderiam ser usados como marcadores de risco cardiovascular. O gene que codifica a MMP-9 apresenta polimorfismos que afetam a expressão e o nível de atividade desta enzima, sendo que dois deles, presentes na região promotora [C- 1562T e (CA)n], são funcionalmente importantes, tendo sido associados a diversas doenças. Investigamos se existe associação entre os níveis circulantes de MMP-2, MMP-9 e seus inibidores endógenos (TIMPs) -2 e -1 com os níveis circulantes de Hg, em indivíduos expostos ao metal por consumo de peixes, na Amazônia Brasileira. Em seguida, examinamos se os polimorfismos da MMP-9 afetam os níveis circulantes de MMP-9, nestes indivíduos. Para isso, analisamos as concentrações de Hg no sangue e plasma desses indivíduos por espectrometria de massas com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS). As concentrações de MMPs e TIMPs foram medidas nas amostras de plasma por zimografia e ELISA, respectivamente. Espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) foram medidas no plasma, para dosar estresse oxidativo. Os níveis de selênio (Se) foram determinados por ICP-MS, por este ser um antioxidante. O DNA genômico foi extraído das amostras de sangue e os genótipos dos polimorfismos C- 1562T e (CA)n foram determinados. A relação entre os bioindicadores de Hg e os níveis de MMPs, assim como a relação entre os genótipos da MMP-9 e os níveis de MMP-9 foram examinados usando modelos de regressão múltipla. Não foi encontrada relação entre Hg no sangue ou plasma e MMPs. Contudo, Hg no plasma foi negativamente associado com os níveis de TIMPs, resultando em aumento nas razões MMP-9/TIMP-1 e MMP-2/TIMP-2, o que indica uma associação positiva entre Hg no plasma e o grau de atividade de MMP-9 e MMP-2. Os polimorfismos da MMP-9 não se relacionaram aos níveis de MMP-9 quando todos os indivíduos foram analisados juntos. No entanto, quando dividimos a população estudada em terços, com base nas concentrações plasmáticas de Hg, o polimorfismo (CA)n afetou o grau de atividade da MMP-9 no grupo com níveis mais baixos de Hg no plasma. Os níveis de MMP-9 foram mais altos em pessoas com genótipos que incluíam o alelo com mais de 21 repetições CA (alelos H), e menos naqueles cujo genótipo incluía alelos com menos de 21 repetições CA (alelos L). Nos grupos com níveis intermediários ou altos de Hg no plasma, este polimorfismo não teve efeito. Nenhuma associação foi encontrada entre o polimorfismo C- 1562T e os níveis de MMP-9, nos três grupos. Esses achados mostram o efeito do Hg sobre o grau de atividade de MMPs,e que o efeito do Hg sobre a MMP-9 é modulado pelo polimorfismo (CA)n da MMP- 9. O aumento do grau de atividade poderia aumentar o risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares em pessoas expostas ao Hg, principalmente nas que apresentam o genótipo HH. / Abstract: Mercury (Hg) exposure causes health problems, including cardiovascular diseases. Although the mechanisms are not precisely defined, metalloproteinases (MMP) -2 and -9 may be involved. Increased expression and activities of these MMPs are demonstrated in several pathological conditions, and recent studies have demonstrated that circulating levels of MMPs could be used as a blood-borne biomarker for cardiovascular risk, even in healthy individuals. The gene encoding MMP-9 presents genetic polymorphisms which affects the expression and activity level of this enzyme, two of them, present in the promoter region [C- 1562T and (CA)n] are functionally relevant, having been involved in several diseases. We investigated if the association between circulating levels of MMP-2, MMP- 9 and their endogenous inhibitors (TIMPs) -2 and -1 with circulating levels of Hg in individuals exposed to metal through consumption of fish in the Brazilian Amazon. Then, we examined whether these MMP-9 polymorphisms affect circulating MMP-9 net levels in persons exposed to mercury. For this purpose, we analyzed the concentrations of blood and plasma Hg by inductively coupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS). MMPs and TIMPs concentrations were measured in plasma samples by zymography and ELISA, respectively. Thiobarbituric acid-reactive species (TBARS) were measured in plasma to assess oxidative stress. Selenium (Se) levels were determined by ICPMS, because it is an antioxidant. Genomic DNA was extracted from whole blood, and genotypes for the C- 1562T and the microsatellite (CA)n polymorphisms were determined. The relationships between biomarkers of Hg and MMPs levels, as well as the relationship between MMP-9 genotypes and MMP-9 levels, were examined using multivariate regression models. No relationship was found between Hg in blood or plasma and MMPs. However, plasma Hg levels were negatively associated with TIMPs levels, and thereby with increasing MMP-9/ TIMP-1 and MMP-2/TIMP-2 ratios, thus indicating a positive association between plasma Hg and circulating net MMP-9 and MMP-2 activities. The polymorphisms of MMP-9 were not related to MMP-9 net levels when all subjects were analyzed together. However, when we divided the population into tertiles of plasma Hg concentrations, the polymorphism (CA)n affected MMP-9 concentrations and MMP-9/TIMP-1 ratios in people with lower levels of Hg. MMP-9 levels were higher in persons with genotypes including alleles with more than 21 CA repeats (H alleles) and lower in those whose genotype including alleles with less than 21 CA repeats (L alleles). Conversely, this polymorphism had no effects in persons with intermediate or high plasma Hg level. No association was found between the C-1562T polymorphism and MMP-9 levels in the three groups. These findings show the effect of Hg on MMP-9 net, and that this effect is modulated by the (CA)n polymorphism of MMP-9. The increase in MMPs levels could increase the risk of developing cardiovascular diseases in persons exposed to Hg, especially those with HH genotype. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T08:56:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palei_AnaCarolinaTaveiros_D.pdf: 6616764 bytes, checksum: 3e220ef5f104375086227af04101b5d6 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A pré-eclâmpsia é uma síndrome caracterizada por hipertensão associada à proteinúria. As metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) são enzimas zinco-dependentes que degradam vários componentes da matriz extracelular, cuja atividade é modulada pelos inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMPs). Uma vez que as MMP-2 e MMP-9 são fundamentais para os processos de formação e remodelamento dos tecidos feto-placentários e participam da regulação do tônus vascular, os níveis dessas enzimas podem estar alterados em desordens hipertensivas da gestação. É possível ainda que polimorfismos localizados no gene da MMP-9 possam influenciar na susceptibilidade a essas doenças. Logo, os objetivos desse trabalho foram: 1) comparar as concentrações plasmáticas de MMP-2, MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 entre grávidas saudáveis (GS), grávidas com hipertensão arterial gestacional (HAG) e com pré-eclâmpsia (PE); 2) comparar as frequências genotípicas e haplotípicas dos polimorfismos C-1562 T e (CA)n da MMP-9 entre GS, HAG e PE. E ta mbém correlacionar as concentrações de MMP-9 aos genótipos e haplótipos da MMP-9; 3) comparar as frequências genotípicas e haplotípicas desses polimorfismos entre HAG ou PE que respondem ou não à farmacoterapia com anti-hipertensivos. Inicialmente, determinaram-se os níveis de pro-MMP-9 e pro-MMP-2 no plas ma, por zimografia, e as concentrações plasmáticas de TIMP-1 e TIMP-2 nos grupos GS, HAG e PE, por ELISA. Nossos resultados revelaram um aumento da atividade líquida de MMP-9 (relação pro-MMP-9/TIMP-1) em HAG, mas em PE, comparados com GS. Em seguida, extraiu-se o DNA das voluntárias GS, HAG e PE, e determinaram-se as frequências genotípicas dos polimorfismos C-1562 T e (CA)n, por PCR seguida de eletroforese, e as frequências haplotípicas, pelo programa PHASE. Observou-se que o genótipo CT para o polimorfismo C-1562 T e o haplótipo H4 (T H) estão mais frequentes em HAG, mas não em PE, comparados com GS. Quando avaliamos as concentrações plasmáticas de MMP-9 segundo as distribuições genotípicas e haplotípicas, não se observam diferenças estatisticamente significantes nos grupos GS e PE, apesar de que o genótipo LH do polimorfismo (CA)n foi associado positivamente com a concentração de MMP-9 em HAG. Por último, determinaram-se as frequências genotípicas e haplotípicas nas pacientes HAG e PE classificadas conforme a responsividade à metildopa ou à terapia anti-hipertensiva total. Verificamos que os genótipos CT+TT estão mais freqüentes nas pacientes HAG que não respondem aos anti-hipertensivos, comparadas com as HAG responsivas, em ambas as abordagens. O haplótipo H2 (C H) está mais frequente nas HAG responsivas à terapia total, enquanto o haplótipo H4 nas HAG não-responsivas à terapia total. Além disso, verificou-se que haplótipo H2 está mais frequente nas pacientes PE que não respondem aos anti-hipertensivos em ambas as abordagens, comparadas com as PE responsivas. Portanto, nossos resultados sugerem que a MMP-9 apresenta um papel relevante na fisiopatologia da HAG e que o polimorfismo C-1562 T e o haplótipo H4 estão associados com a susceptibilidade e com a não-responsividade à terapia anti-hipertensiva dessa doença. E ainda que o haplótipo H2 está associado com a não-responsividade aos anti-hipertensivos em PE / Abstract: Preeclampsia is a syndrome characteriz ed by hypertension plus proteinuria. Matrix metalloproteinases (MMPs) are zinc-dependent enzymes that break down several extracellular matrix components, whose activity is modulated mainly by tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). Since MMP-2 and MMP-9 ar e essential for the processes of placental and uterine artery remodeling, and they can participate in vascular tone control, levels of these enzymes may be altered in hypertensiv e disorders of pregnancy. It is also possible that polymorphisms in the MMP-9 gene may influence susceptibility to t hese diseases. Thus, the objectives of this study were: 1) to compare plasma MMP-2, MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 concentrations among healthy pregnant (HP), pregnant women with gestational hypertension (GH) and preeclampsia (PE); 2) to compare the genotype and haplotype frequencies of MMP-9 polymorphisms (C T and (CA)n) among HP, GH and PE. And to correlate the MMP-9 concentrations with MMP-9 genotypes and haplotypes too; 3) to compare genotype and haplotype frequencies of these polymorphisms between GH or PE who respond or non-respond to pharmacotherapy with antihypertensives. To achieve our first goal, we determined the plasma pro-MMP-9 and pro-MMP-2 leve ls by zymography, and plasma TIMP-1 and TIMP-2 concentrations by ELISA in GS, HAG and PE. Ou r results showed a net increase in the MMP-9 activity (ratio pro-MMP-9/TIMP-1) in GH, but not in PE, compared with HP. Moreover, to achieve ou r second goal, we firstly extracted DNA from HP, GH and PE volunteers, and then we determined the genotype frequencies of C T and (CA)n polymorphisms by PCR followed by electrophoresis, and the haplotype fr equencies by the program PHASE. It was observed that CT genotype for the C T polymorphism and H4 haplotype (T H) are more frequent in GH, but not in PE, compared with the HP. When we evaluated plasma MMP-9 concentrations according to genotype and haplotype distributions, no statistically significant differences were observed in HP and GH groups; although the LH genotype for (CA) n polymorphism was associated significantly and positively with GH. To approach our third goal, we determined the genotype and haplotype frequenc ies in GH and PE patients classified as responsiveness to methyldopa or to glo bal antihypertensive treatment. We found -1562 -1562 -1562 that CT+TT genotypes are more frequent in GH patients who do not respond to antihypertensives in both approaches, compared with GH who respond. We also found that H2 haplotype (C H) is more common in GH women Who respond to global therapy, and that H4 hap lotype is more common in GH women who do not respond to global therapy. In addi tion, it was found he haplotype H2 are more frequent in PE patients who do not respond to antihypertensives in both approaches, compared with PE who respond. Therefore, our results suggest that MMP-9 has a role in the pat hophysiology of GH and the C T polymorphism and H4 haplotype are associ ated with susceptibility and non-responsiveness to antihypertensive treatment of this disease. While the H2 haplotype is associated with non-responsiveness to antihypertensives in PE / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T23:52:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Belo_VanessadeAlmeida_M.pdf: 3576019 bytes, checksum: c9ba06079f310fba660d5bfb890b000a (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A obesidade em crianças e adolescentes constitui-se num importante fator de risco para doenças cardiovasculares, em especial, aterosclerose. Esta condição é caracterizada por acúmulo de lipídeos e elementos fibrosos em artérias de grande calibre em que mecanismos inflamatórios e remodelamento vascular estão envolvidos. Neste contexto, a metaloproteinase-9 de matriz extracelular (MMP-9) - endopeptidase capaz de degradar componentes da matriz extracelular - e seu inibidor endógeno preferencial, inibidor tecidual de MMP (TIMP-1) são importantes mediadores deste remodelamento e um equilíbrio entre MMP-9 e TIMP-1 deve existir a fim de manter a integridade do sistema cardiovascular. Ademais, níveis aumentados de MMP-9 são observados em pacientes com doenças cardiovasculares e estudos genéticos têm mostrado ainda que polimorfismos funcionais no gene da MMP-9 têm sido relacionados à presença e severidade de doenças cardiovasculares. Contudo, ainda não se sabe como a associação desses polimorfismos com a obesidade infantil pode afetar as concentrações de MMP-9 no plasma. Logo, os objetivos desse trabalho foram: 1) comparar as concentrações plasmáticas de MMP-9, TIMP-1 e razão MMP-9/TIMP-1 (atividade líquida da MMP-9) entre crianças e adolescentes obesos e controles; 2) comparar as frequências genotípicas e haplotípicas dos polimorfismos C-1562T, -90(CA)14-24 e Q279R da MMP-9 entre obesos e controles e 3) correlacionar as concentrações de MMP-9 aos genótipos e haplótipos da MMP-9. Inicialmente, determinaram-se os níveis de pro-MMP-9 e no plasma, por zimografia, e as concentrações plasmáticas de MMP-9 e TIMP-1 em obesos e controles por ELISA. Nós não encontramos diferenças nas concentrações plasmáticas de MMP-9 e razão MMP-9/TIMP-1 entre obesos e controles. No entanto, nossos resultados revelaram que em obesos houve diminuição de TIMP-1. Em seguida, extraiu-se o DNA dos voluntários e determinaram-se as frequências genotípicas dos polimorfismos C -1562T e (CA)n, por PCR seguida de eletroforese, do polimorfismo Q279R, por PCR em tempo real, e as frequências haplotípicas, pelo programas PHASE. Não houve diferenças nas frequências genotípicas e haplotípicas entre os grupos. Nós avaliamos a relevância de diferentes genótipos e haplótipos nas concentrações plasmáticas de MMP-9. Para os polimorfismos C-1562T e Q279R, nós encontramos que no grupo de obesos, portadores dos genótipos CC apresentaram menores níveis de MMP-9 quando comparados aos portadores dos genótipos CT+TT e aos controles com mesmo genótipo. No grupo de obesos, portadores do genótipo QQ apresentaram menores níveis de MMP-9 quando comparados aos portadores do genótipo RR e aos controles com mesmo genótipo. Para o polimorfismo -90(CA) 14-24 não observamos diferenças nos níveis de MMP-9 entre os grupos genotípicos. Em relação aos haplótipos, no grupo de obesos, portadores do haplótipo H2 apresentaram menores concentrações de MMP-9 e da razão MMP-9/TIMP-1 (atividade líquida de MMP-9) quando comparados aos outros haplótipos e aos controles com mesmo haplótipo. No grupo controle, não observamos influência dos genótipos e haplótipos nas concentrações plasmáticas de MMP-9. Portanto, nossos achados que sugerem que genótipos (CC e QQ) e o haplótipo H2 podem diminuir os níveis circulantes de MMP-9 em crianças e adolescentes obesos, mas não em crianças saudáveis, consequentemente, estes genótipos e haplótipo poderiam oferecer proteção contra doenças cardiovasculares somente em crianças obesas / Abstract: The childhood obesity is important risk factor for cardiovascular diseases, in particular, atherosclerose. This condition is characterized by the accumulation of lipids and fibrous elements in the large arteries in which inflammatory mechanisms and vascular remodeling are involved. In this context, matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) - endopeptidade capable of degrading components of extracellular matrix - and its endogenous inhibitor preferential, the tissue inhibitors of MMP (TIMP-1) are important mediators of this remodeling and a critical equilibrium between MMP-9 and TIMP-1 must exist in order to maintain the integrity of cardiovascular system. Moreover, elevated levels of MMP-9 have been reported in patients with cardiovascular diseases, and genetic studies showing that functional polymorphism MMP-9 gene were related to presence and severity of cardiovascular diseases. However, it remains unclear how the association of these polymorphisms with childhood obesity can affect MMP-9 plasma concentrations. Thus, the objectives of this study were: 1) to compare plasma MMP-9, TIMP-1 and MMP-9/TIMP-1(activity) ratio between obese and control groups; 2) to compare the genotype and haplotype frequencies of MMP-9 polymorphisms (C-1562T and (CA)14-24 and Q279R) between obese and control and, 3) correlate the MMP-9 concentrations with MMP-9 genotypes and haplotypes. To achieve our first goal, we determined the plasma pro-MMP-9 levels by zymography, and plasma MMP-9 and TIMP-1 concentrations by ELISA in obese and control. We not found differences in MMP-9 plasma concentratios and MMP-9/TIMP-1 between obese and control. However, our results showed that obese had lower plasma TIMP-1 concentrations than control. Moreover, to achieve our second goal, we firstly extracted DNA from volunteers, and then we determined the genotype frequencies of C-1562T and (CA)14-24 polymorphisms by PCR followed by electrophoresis, of and Q279R polymorphism by real time PCR, and the haplotype frequencies by the programs PHASE. We found similar genotype and allelic distribution for the three polymorphisms when study groups were compared. We evaluated the relevance of different genotypes in plasma MMP-9 concentrations in study groups. To the C-1562T and Q279R polymorphisms, we found that in the obese group, CC genotype carries had lower MMP-9 levels when compared with CT+TT genotype carries and control with the same genotype. In the obese group, QQ genotype carries had lower MMP-9 levels when compared with RR genotype carries and control the same genotype. To the -90(CA)14-24 polymorphism, we did not observe differences in the MMP-9 levels among different genotypic groups. In relation to haplotypes, we found that in the obese group, H2 haplotype carriers had lower MMP-9 levels and MMP-9/TIMP-1 ratio when compared other haplotypes and control with the same haplotype. Therefore, our findings suggest that (CC and QQ) genotypes and H2 haplotype decrease circulating MMP-9 levels in obese but not in healthy children, thus genotypes and haplotype could offer protection against cardiovascular diseases in those children / Mestrado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia