Orientador: Everlon Cid Rigobelo / Banca: Mariana Carina Frigieri Salaro / Banca: Fábio Camilotti / Resumo: Devido ao grande número de antibióticos de uso veterinário que estão sendo liberados no solo através da urina e dejetos fecais dos animais de produção, algumas pesquisas têm verificado o impacto desses antibióticos na microbiota do solo. O presente estudo teve como objetivo avaliar o impacto dos antibióticos sobre a microbiota do solo em condições de microcosmos, de um solo de pastagem de bovinos e um solo de floresta, submetidos à presença de três antibióticos utilizados na produção animal, sendo estes, ampicilina, enrofloxacina e estreptomicina, nas concentrações de 0, 30 e 100 mg/kg de solo seco. A concentração de 0 mg/kg foi usada como controle. Os solos foram incubados em frascos de vidro de tampa rosca e mantidos a temperatura ambiente no escuro para reproduzir as condições reais encontradas na natureza. Foram avaliadas atividade respiratória microbiana, atividade da enzima desidrogenase e contagem de unidades formadoras de colônias (UFC) para estabelecer se existia ou não inibição do crescimento bacteriano nos dias 0, 1, 20 e 35. Os resultados mostram um aumento considerável nas UFC nos solos que receberam a ampicilina em ambas às concentrações durante o primeiro dia com relação ao controle. No dia 35 estas contagens se tornaram semelhantes ao controle ou menores. Os solos que receberam enrofloxacina e estreptomicina tiveram uma contagem menor que o controle inicialmente e com o tempo essas UFC aumentaram. A atividade respiratória microbiana e a atividade da enzima... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Due to the large number of veterinary antibiotics that are being released into the soil through urine and fecal waste of livestock, some research has linked the impact of those antibiotics in soil microflora. In the current study was evaluated the impact of antibiotics in the soil microbial community under microcosms conditions, cattle pasture soil and a forest soil under the presence of three antibiotics used in animal husbadry; ampicilin, enrofloxacyn and streptomycin, using a concentration of 0, 30 e 100 mg/kg dry soil. The concentration of 0mg/kg was used as control. The soils were incubated in screw cap glass jars and kept at room temperature in the dark to reproduce actual conditions found in nature. It was evaluated the microbial respiratory activity as well as the activity of dehydrogenase enzyme and colony forming units (CFU) to establish whether there was inhibition of bacterial growth or not at day 0, 1, 20 and 35. The results show a considerable increase in CFU in soils that received both concentrations of ampicillin during the first day compared with control. At day 35 these counting became similar to control or lower. The soils that received enrofloxacin and streptomycin, initially had lower countings than the control and over time these CFU increased. The microbial respiratory activity and the activity of dehydrogenase also confirmed these findings. These results suggest that some microorganisms are using a compound of ampicillin to grow. The other antibiotics decrease the soil microbial population, especially streptomycin. Probably some microorganisms are being selected / Mestre

Orientador: Henrique Ferreira / Coorientadora: Isabel Cristiane da Silva / Banca: Alessandra Alves de Souza / Banca: Fernando Carlos Pagnocca / Resumo: O agente etiológico do cancro cítrico, Xanthomonas citri subsp. citri (X.citri), infecta todas as variedades de citros de interesse econômico ao redor do mundo. Sem controle químico eficaz, a única forma aconselhada de se evitar a propagação da doença é a erradicação de plantas. Essa prática, porém, não é aceita pelos citricultores e demanda grandes investimentos em inspeção de pomares por pessoal treinado no reconhecimento da doença. Nos últimos anos, a legislação para controle do cancro cítrico tem sofrido afrouxamentos que resultaram em um progressivo aumento da doença no maior produtor mundial de laranja, o estado de São Paulo. Esta pesquisa teve como objetivo estender um projeto que vem sendo realizado em nosso grupo que é o desenvolvimento de substâncias inibidoras de crescimento de X. citri (galatos de alquila). No presente trabalho, quatro novas moléculas, originadas a partir de galatos de alquila - galatos de alquila acetilados - demonstraram inibir o crescimento de X.citri de modo similar ao da canamicina (controle positivo), observado pelo ensaio Resazurin Microtiter Assay Plate (REMA). Em observações com microscopia de fluorescência e utilizando-se uma linhagem de X.citri com septo marcado, a localização da proteína GFP-ZapA foi rapidamente perturbada após o tratamento, sugerindo que as substâncias poderiam ter a maquinaria de divisão celular como alvo. Entretanto, em ensaios bioquímicos com FtsZ purificada de X. citri na presença dos galatos de alquila acetilados, verificou-se que essas drogas têm pouca ou nenhuma ação na sedimentação e na inibição da atividade GTPásica de FtsZ, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico) / Abstract: Xanthomonas citri subsp. citri (X.citri) is the etiological agent of citrus canker, a disease that affects all the varieties of citrus of economic importance around the world. Currently, eradication of infected trees constitutes the only effective practice to control the spread of X. citri. This disease has enormous social and economic impact in the orange juice production industry, especially concerning the difficulties to inspect plantations and to persuade growers to eliminate foci of the disease. Regarding this, recent relaxations in the policies of eradication within the state of São Paulo, the main orange producer in the world, indicate that citrus canker may become endemic in this area. The current proposal aims to extend the work that is being done in our research group, developing inhibitors of X. citri growth (alkyl gallates). In this study, four new molecules originated from alkyl gallates - acetylated alkyl gallates - were able to inhibit the X.citri growth, similarly to kanamycin (positive control), assessed by Resazurin Microtiter Plate Assay (REMA). In fluorescent microscopy assay, using a mutant strain of X. citri labeled with green fluorescent protein (GFP) in ZapA, the drugs were able to disrupt the location of septa, suggesting that the substances may have the cell division machinery as a target. However, in biochemical assays using FtsZ purified from X. citri in the presence of the drugs, the drugs showed low or no effect on the sedimentation or GTPase activity of FtsZ. Instead of this, they showed reasonable effect on membrane permeability and probably ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O meduloblastoma é o tumor cerebral maligno mais comum em crianças de zero a quatro anos e uma das principais causas de morbidade e mortalidade infantil. Diversos estudos têm suportado a hipótese de que a ativação de genes tipicamente expressos em células-tronco confere características mais primitivas e agressivas a células tumorais, frequentemente associadas a prognóstico clínico desfavorável. Nesse contexto, tanto fatores proteicos quanto miRNAs poderiam estimular uma reprogramação em células cancerosas, induzindo um fenótipo semelhantes ao de células-tronco. Estudos recentes apontam o envolvimento do miR-367 na reprogramação de fibroblastos ao estado pluripotente e sua expressão aberrante foi correlacionada com prognóstico desfavorável em alguns tipos de câncer. Neste trabalho, verificou-se um possível papel funcional do miR-367 na agressividade de meduloblastoma. Células de meduloblastoma de quatro diferentes linhagens, Daoy, D283-Med, CHLA-01-Med e USP-13-Med apresentaram níveis baixos de expressão de pri-miR-367 e miR-367 maduro, em relação aos níveis encontrados em células-tronco embrionárias humanas. Uma superexpressão transiente do miR-367 em células das linhagens CHLA-01-Med e USP-13-Med resultaram em uma redução significativa dos níveis proteicos de RYR3, bem como dos transcritos preditos de ITGAV e RAB23, respectivos alvos do miR-367, envolvidos em câncer. Além disso, a superexpressão de miR-367 aumentou significativamente a proliferação celular, indicada pela cinética de crescimento in vitro e pela maior porcentagem de células presentes nas fases S+G2/M do ciclo celular. Embora a sensibilidade ao tratamento com cisplatina não tenha sido alterada após superexpressão de miR-367, a capacidade de geração de neuroesferas in vitro foi significativamente aumentada. Este último resultado é interessante do ponto de vista clínico, uma vez que a capacidade de geração de neuroesferas está significativamente correlacionada com menor sobrevida de pacientes com meduloblastoma. Portanto, esses achados sugerem uma função pró-oncogênica ao miR-367, a qual pode afetar a agressividade de meduloblastoma por meio de efeitos positivos sobre a proliferação celular e propriedades de células-tronco neurais / Medulloblastoma is the most common malignant brain tumor in children aged four and younger, and is the leading cause of infant morbidity and mortality. Several studies have reported the activation of stem cell genes leading to more primitive and aggressive characteristics in tumor cell often associated with unfavorable clinical prognosis. Cell reprogramming, stimulated by tumor microenvironment factors, might induce tumor stem cells phenotype. Recent researches suggest an involvement of miR-367 in fibroblasts reprogramming into pluripotent state, as well as a correlation with poor prognosis in some cancers. In this study, we observed a possible functional role of miR-367 in medulloblastoma aggressiveness. Four different medulloblastoma cell lines, Daoy, D283-Med, CHLA-01-Med and USP-13-Med showed low rates of pri-miR-367 and mature miR-367 expression. Overexpression of miR-367 down-regulated the protein levels of its target RYR3 and of two bioinformatically predicted transcript targets encoding ITGAV and RAB23, which are involved in cancer in CHLA-01-Med and USP-13 Med cell lines. Furthermore, transfection with the miRNA mimic significantly increased cell proliferation and the percentage of cells observed in S + G2 / M phase of the cell cycle. Although the sensitivity to cisplatin treatment was not changed after overexpression of miR-367, the ability to generate neurospheres in vitro was significantly increased. This last result can be related to clinical ones because cells from medulloblastoma patients with low survival show great ability to generate neurospheres. In sum, these findings suggest a pro-oncogenic role to miR-367, which can affect medulloblastoma aggressiveness by cell proliferation and neural stem cells positive modifications

Os tricomas são estruturas de origem epidérmicas que podem ser classificados em dois tipos: glandulares e não glandulares (tectores) e estão relacionados, principalmente, com estratégias de defesas de plantas. Pouco se conhece sobre a via de desenvolvimento dos tricomas glandulares, já que a maior parte dos estudos é em Arabidopsis thaliana, modelo no qual os tricomas glandulares são ausentes. O gênero Solanum possui uma grande diversidade de tricomas, em especial glandulares (tipos I, IV, VI e VII). O estudo de tais estruturas vem ganhando cada vez mais destaque, já que são fontes de diversos metabólitos secundários de importância econômica e ecológica. Espécies selvagens são consideradas recursos genéticos para o tomateiro (S. lycopersicum), tais como S. galapagense, a qual possui variações genéticas naturais que lhe confere maior resistência ao ataque de herbívoros. Entre essas variações está a presença de tricomas glandulares do tipo IV, uma fonte do aleloquimico acilaçúcar. A ausência de tricomas glandulares do tipo IV é considerada uma das causas da suscetibilidade do tomateiro cultivado a insetos. No presente trabalho, foi demonstrado que o tomateiro cultivado na verdade forma tricomas do tipo IV, mas estas estruturas estão presentes somente até o primeiro par de folhas, além dos cotilédones. Desse modo, a presença de tricomas tipo IV em espécies selvagens seria considerada uma neotenia, ou seja, a manutenção de estruturas juvenis na fase adulta. Além de se determinar que mutantes de tomateiro afetando a juvenilidade (e.g. Mouse ears e fasciated) apresentam tricomas tipo IV na fase adulta, a formação dessas estruturas correlacionou se com a expressão de miR156, sendo também presentes em grandes quantidades em uma linhagem transgênica superexpressando esse micro RNA relacionado à juvenilidade. Quanto à base genética da presença de tricomas tipo IV nas espécies selvagens, no presente trabalho foi criada uma linhagem quase isogênica ao modelo genética Micro-Tom (MT) contendo a variação genética natural por nós denominada Galapagos enhanced trichomes (Get). Tal variação é derivada de S. galapagense e condiciona a presença de tricomas tipo IV em folhas adultas, quando introgredida em tomateiro cultivado (cv. Micro-Tom). O mapeamento preliminar de Get no cromossomo 2 de tomateiro também foi realizado através do mapa de \"single nucleotide polymorphism\" (SNPs) entre MT e a linhagem MT-Get. A eventual clonagem de GET irá contribuir não somente para se desvendar a base genética da formação de tricomas glandulares, como também contribuir para se criar variedades resistentes a insetos, reduzindo o uso de agrotóxicos. / Trichomes are epidermal structures that can be classified into two types: glandular or non-glandular, and they are mainly related to plant defense strategies. Little is known about the glandular trichome development pathway, since most of the studies are in Arabidopsis thaliana, a model in which this kind of trichome is absent. The Solanum genus has a wide variety of trichomes, especially glandular ones (Types I, IV, VI and VII). The study of these structures are gaining more prominence, since they are sources of several secondary metabolites of economic and ecological importance. Wild species are considered genetic resources for tomato (S. lycopersicum), such as S. galapagense which has natural genetic variations that gives resistance to herbivores attack. Among these variations is the presence of type IV glandular trichomes, a source of the acyl sugar allelochemical. The absence of type IV glandular trichomes is considered to be one of the causes of tomato susceptibility to insects. In this study, it was determined that tomato actually has type IV trichomes, but these structures are present only in the cotyledons and the first pair of leaves. Thus, the presence of type IV trichomes in wild species would be considered a neotenic feature, i.e. the maintenance of juvenile structures in adulthood. In addition, it was determined that tomato mutants affecting youthfulness (e.g. Mouse ears and fasciated) have type IV trichomes in adulthood. Moreover, the presence of these structures was correlated with the expression of miR156, besides the increased formation of type IV trichomes in a transgenic line overexpressing this micro RNA related to youthfulness. On the genetic basis of type IV trichomes presence in wild species, in this work it was created a near isogenic line (NIL) containing the natural genetic variation here named Galapagos enhanced trichomes (Get). This variation is derived from S. galapagense and harbors type IV trichomes in adult leaves, when introgressed in cultivated tomato (cv. Micro-Tom). The preliminary genetic map of Get in the tomato chromosome 2 was conducted through the analysis of \"single nucleotide polymorphism\" (SNPs) between MT and MT-Get. The eventual cloning of GET will contribute not only to unravel the genetic basis of glandular trichomes formation, but will also contribute to create varieties resistant to insects, reducing the pesticides use.

A incidência de doenças crônicas atinge índices epidêmicos, sendo responsável por mais de 60% da mortalidade mundial. Medidas preventivas são adotadas e, entre elas, uma alimentação balanceada. Nesta inclui-se o consumo de frutos e vegetais, especialmente os de coloração vermelha e laranja, ricos em carotenoides, fitonutrientes que muitas vezes assumem papel de antioxidantes, prevenindo a incidência destas doenças. No presente trabalho foram obtidas linhagens quase isogênicas (NILs) de tomateiro contendo os alelos at, B, Del, gf, og, r, t e y, os quais afetam a composição de carotenoides. Tais linhagens constituem uma importante ferramenta para estudos de nutracêutica, como os testes de biodisponibilidade de diferentes tipos de carotenoides no plasma sanguíneo, após ingestão, o que foi testado no presente trabalho através do emprego de HPLC e ratos da linhagem Wistar. Além disso, frente às diferentes ofertas de cores e composições metabólicas de tomates disponíveis no mercado, as NILs permitiram o ajuste de parâmetros de colorimetria como um método rápido para identificar os principais mutantes da via de biossíntese de carotenoides presentes em linhagens comerciais. Ressalta-se que, muitas vezes as cores podem enganar e não trazer vantagens nutricionais, como é o caso do consumo de linhagens comerciais contendo a mutação yellow flesh (r). Por fim, as NILs foram utilizadas para verificar se as mutações alterando a composição de carotenoides possuíam alguma penalidade em termos de produtividade ou outros parâmetros de qualidade de fruto (Teor de Sólidos Solúveis, acidez). Os resultados mostraram-se de aplicabilidade e geraram um banco de dados passível de expansão, para novos mutantes que alterem a cor do tomate e fazendo uso de outros backgrounds. Tais dados podem ser usados tanto para programas de melhoramento visando a qualidade nutricional, quanto para o comércio atacado, beneficiando o consumidor final. / The incidence of chronic disease reaches epidemic levels, accounting for over 60% of global mortality. Preventive measures are adopted, and among them, a balanced diet. This includes the fruits and vegetables consumption, especially the red and orange ones, rich in carotenoids, phytonutrients which often assumes the role of antioxidants preventing these diseases incidence. In this study, tomato near isogenic lines (NILS) containing the alleles B, Del, gf, og, r, t and y, were obtained, affecting the carotenoid fruit content. Such lines are an important tool for nutraceutical studies, like different carotenoids bioavailability tests in blood plasma after ingestion, which was tested in this work by HPLC employment and Wistar rats. Moreover, in the face of different colors and metabolic contents offerings of tomatoes available at the market, NILs allowed the adjustment of colorimetric parameters as a fast way to identify carotenoids biosynthetic pathway key mutants present in commercial strains. It is highlighted that many times colors can mislead and not bring nutritional benefits, like the consumption of commercial strains containing the mutation yellow flesh (r). At the end, NILs were used to verify if the carotenoid content mutations had some penalty in terms of productivity or other fruit quality parameters (Soluble Solids Content, acidity). The results showed relevant and generated a database capable of expansion to new fruit color tomato mutants even in other genetic backgrounds. Such data can be used both for nutritional quality breeding programs, both for the wholesale trade, benefiting the end user.

Made available in DSpace on 2016-04-27T17:26:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luisa Magoulas de Castro Duarte.pdf: 13581082 bytes, checksum: f2113f824b422c785bfcad07411f746d (MD5) Previous issue date: 2010-10-19 / The target of this dissertation is to gather a portion of visual arts production of the years 2000 and think it under the light of contemporary temporality, marked by the eclipse of utopias. After that, the work tries to emphasize its relations with the notions of the present, micro-politics and possibility, in contraposition to a modernity marked by the notions of future, impossible and macro. Analyzing the body of questions, the intention is to think how art reacts to a contemporary world situation, making us look at this same world in a different manner / O objetivo da dissertação é analisar uma parcela da produção em artes visuais dos anos 2000 e pensá-la à luz da temporalidade contemporânea, marcada pelo eclipse das utopias. A partir disso, buscou-se ressaltar as suas relações com as noções de presente, micro-política e possível, em contraposição a uma modernidade marcada pelas noções de futuro, utopia, impossível e macro. Ao analisar este corpo de questões se pretendeu pensar como a arte reage a uma situação de mundo contemporânea, nos fazendo olhar este mesmo mundo de maneira diferente

Na Endodontia, a microtomografia (CT) tem sido amplamente utilizada como método de análise tridimensional. Atualmente, três movimentos mecanizados para o preparo do canal radicular tem sido introduzidos na rotina endodôntica, oscilatório, rotatório e recíproco. Existem diferentes sistemas de limas acionadas por motores capazes de realizar esses movimentos. Sendo assim, os objetivos deste trabalho são utilizar a CT para avaliar, em canais mesiais achatados de molares inferiores, a qualidade e modelagem final de preparo do canal radicular, utilizando-se sistemas oscilatório, recíproco e rotatório e avaliar a obturação do canal radicular com cone único ou ondas contínuas de condensação, no que diz respeito ao volume de material obturador e de espaços vazios. Os resultados não mostraram diferença estatísitica significativa no volume de desgaste entre os grupos testados. Para a porcentagem de superfície não tratada os grupos oscilatório e rotatório tocaram mais paredes nos terços cervical e médio do que o grupo recíproco. A técnica de ondas contínuas de condensação e cone único apresentaram preenchimento de obturação semelhantes nos terços médio e apical, sendo que no terço cervical a técnica de ondas contínuas deixou menor porcentagem de espaços vazios. / Endodontics in the microtomography (CT) has been widely used as a method for three-dimensional analysis. Currently, three mechanized movements for root canal preparation has been introduced in endodontic, oscillatory, rotational and reciprocal routine. There are different files systems driven by motors capable of these movements. Thus, the objectives of this work are using CT to evaluate, in flattened mesial canals of mandibular molars, the quality and final modeling of root canal preparation, using oscillatory, reciprocal and rotational systems and evaluate the root canal filling with single cone or continuous waves of condensation, with respect to the volume of filling material and voids. The results showed no significant difference in estatísitica wear volume between the tested groups. For the percentage of untreated surface and the oscillating rotating groups played more walls in the cervical and middle thirds of the reciprocal group. The technique of continuous wave of condensation and single cone showed similar fillings fill in the middle and apical thirds, and in the cervical third of the technique of continuous wave left lower percentage of voids.

Esta tese investiga como ocorre o processo de negociação entre os pequenos pecuaristas de gado de corte e seus principais fornecedores de insumos agropecuários, tendo a negociação e suas variáveis (poder, tempo, informação e ética) como arcabouço teórico. Embora as negociações ocorram de maneira semelhante entre esses atores, o processo de negociação se faz necessário, quando se avaliam o preço, o prazo para pagamento aos fornecedores, o local de entrega dos insumos ou dos animais, a quantidade comprada e a qualidade do que se adquire para a produção da carne bovina e seus derivados. Esta tese tem por objetivo analisar o processo de negociação entre os pequenos pecuaristas (negociadores) e seus fornecedores de insumos e propor recomendações visando a maior efetividade do processo. Como conseqüência, um referencial teórico pode reunir a importância do Sistema Agroindustrial da Carne Bovina, Negociação e suas variáveis (tempo, poder, informação e ética), a Visão Sistêmica e o Agribusiness, e as Estratégias de redução de Custos utilizadas pelos pecuaristas. O desafio desta tese de Doutorado foi contribuir com o avanço teórico da cadeia produtiva da pecuária de corte, das negociações na pequena empresa da pecuária e contribuir para que o atual Secretário do Planejamento de São José do Rio Preto desenvolva políticas públicas capazes de fortalecer a atividade da pecuária daquela cidade. Concluindo, é apresentado um estudo empírico abrangendo cinqüenta pequenos pecuaristas de corte, que foram entrevistados em suas propriedades com o auxílio de um questionário estruturado com perguntas abertas e fechadas, envolvendo as negociações entre pequenos pecuaristas e seus fornecedores de insumos. O objetivo foi avaliar as formas de negociação, as variáveis envolvidas e as alternativas de compras que restam para que esses produtores obtenham melhores resultados na atividade exercida. / This thesis describes how the negotiation process occurs between small beef cattle producers and their main suppliers of inputs, having the negotiation and its variables as its theoretical foundation. Although negotiation occurs in a similar manner between these players, the process of negotiation becomes necessary when price deadlines for supplier payments, delivery location of inputs or animals, amount purchased and quality of the purchased goods are evaluated for the production of beef and beef products. This thesis aims to analyze the negotiation process between small beef cattle producers and their input suppliers, and to provide recommendations aiming to a more effective process. As a consequence, a referential theory can bring together the importance of the Beef Cattle Production System, Negotiation and its variables (time, power, information and ethics), Systemic Vision for Agribusiness and cost-reduction strategies used by the beef producers. The challenge for this Doctoral thesis was to contribute for the theoretical advance of the beef cattle supply chain, the negotiation process in the small beef cattle companies and to serve as a basis for the current City Planning Superintendent of São José do Rio Preto to develop public policies that are able to strengthen the cattle-raising activity in the city. At the end, an empirical study on fifty small beef cattle producers, at their own properties, is presented, based on a questionnaire structured with discursive and alternativebased questions. These questions encompass the negotiation between the producers and their input suppliers. The goal was to assess the forms of negotiation, the variables involved and the remaining alternatives of purchase for the producers to attain better results on their activities.

Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Andrei Moroz / Banca: Maria de Lourdes R. da Cunha / Banca: Flávia Karina Delella / Resumo: As infecções por MRSA podem ser consideradas um problema de saúde pública, com alta taxa de mortalidade. Desta maneira, com a ampla disseminação do MRSA é necessário adotar programas de vigilância que avaliem o perfil de sensibilidade dos isolados, além estimular o desenvolvimento tecnológico objetivando métodos mais rápidos e confiáveis que antecipem a escolha da terapêutica mais adequada propondo métodos de prevenção e vacinas para o avanço no controle da infecção hospitalar. Diante deste desafio este projeto tem como objetivo a caracterização de anticorpos monoclonais anti-MRSA obtidos por protocolos de imunização clássica e a obtenção de outros anticorpos com método de imunização subtrativa. Foram utilizados 10 camundongos Balb/C que receberam como tolerógeno proteínas de cepas de E.coli e MSSA associados a 100mg/kg/d de ciclofosfamida (CFM) em D1, D2,D3,D15, D16 e D17. Em D+31, 38, 45 e 54 foram feitas injeções de 50μg de proteínas da cepa de MRSA, anteriormente genotipada e confirmada a presença do gene mec A. Foram preparados extratos antigênicos por 3 métodos diferentes: fervura, morte à temperatura ambiente seguida de filtração 0,22μm e morte à temperatura ambiente e exposição ao banho ultrassônico. Pelo método de fervura obteve-se em média 5,31mg/mL enquanto que as técnica de morte a TA ambiente, filtrado ou submetido ao banho ultrassônico obtiveram em média uma concentração protéica duas vezes maior indicando a existência de proteínas termolábeis. Foi identificado uma taxa de mortalidade de 30% nos animais provavelmente associado ao uso da CFM. Foram realizadas 7 fusões celulares com a construção de 4.402 híbridos com uma taxa de eficiência de fusão de 2,42 vezes menor do que aquela obtida nos protocolos de imunização clássica. Dois hibridomas foram escolhidos para a clonagem pelo método de diluição limitante, cuja caracterização imunoquímica identifica... / Abstract: The MRSA infections are considered a public health problem, with a high mortality rate. Thus, with the wide spread of MRSA it's necessary to embrace monitoring programs to evaluate the sensitivity profile of the isolates, as well as to stimulate technological development aiming faster and more reliable methods to anticipate the choice of the most appropriate therapy by proposing methods of prevention and vaccines to advance the control of hospital infections. Therefore, this study aims the characterization of anti-MRSA monoclonal antibodies obtained by classical immunization protocols and the obtaining of other antibodies with the subtractive immunization method. We used 10 Balb/C mice that received as tolerogen proteins of strains of E. coli and MSSA associated with 100mg/kg/d of cyclophosphamide (Cy) in D1, D2, D3, D 15, D16 and D17. On D+31, 38, 45 and 54 we made injections of 50 μg of the MRSA strain protein, previously genotyped and with confirmed presence of mec A. We prepared antigenic extracts by 3 different methods: boiling, death at ambient temperature followed by 0.22 μm filtration and death at ambient temperature and exposure to ultrasonic wash.The boiling method resulted on average 5.31mg/mL, whereas the technique of death at ambient temperature, filtered or exposed to ultrasonic wash culminated on average in a protein concentration two times higher, indicating the existence of heat labile proteins.We identified a mortality rate of 30% in the animals, which was probably associated with the use of Cy. We performed seven cellular fusions with the construction of 4.402 hybrids with a fusion efficiency rate of 2.42 times smaller than that obtained in protocols of classical immunization.We selected two hybridomas for cloning by the limiting dilution method, whose immunochemical characterization identifies bands of 30 and 50 kDa. The proteomic analysis of protein bands that was recognized by the two clones confirm that the ... / Mestre

Neste trabalho, foi investigado o processo de crescimento de fibras monocristalinas (FMc) para aplicação em sistemas laser. Para o aperfeiçoamento na fabricação de FMc de fluoretos, foi projetada e construída uma nova câmara de crescimento para um forno comercial de micro-pulling down (μ-PD), permitindo um rígido controle da atmosfera de processamento, (sob vácuo, fluxo e atmosferas estáticas). Paralelamente, foi investigado o processo de crescimento de FMc de molibdatos duplos de terras raras, sendo crescidas e caracterizadas fibras puras e dopadas com Nd3+ do composto LiLa(MoO4)2 (LLM) com concentrações na faixa de 0,5 a 10mol%. A câmara de crescimento projetada para o controle de atmosfera foi avaliada em diversas condições de operação. Em particular, a mesma foi testada com o puxamento de fibras de LiF, sob atmosfera de CF4, para observação da sua eficiência no controle da atmosfera de crescimento. Foram obtidas FMc de LLM, homogêneas e transparentes; nas fibras puras foi observada a presença de facetas, entretanto, a adequação dos parâmetros de crescimento e a adição de dopantes permitiu a redução significativa destes defeitos. A difração de raios-x mostrou a cristalização no grupo espacial I41/a; medidas de tomografia por coerência ótica permitiram a detecção de centros de espalhamento em regiões onde ocorreram instabilidades no processo de crescimento. Foi possível observar que o coeficiente de segregação do íon Nd3+ é próximo à unidade nesta matriz. O ganho potencial para ação laser foi determinado utilizando-se uma solução numérica das equações de taxa do sistema em 805nm e regime CW. O ganho máximo da emissão laser em 1,064 μm foi previsto para a dopagem de 5% mol Nd3+. / In this work we investigated crystal growth procedures aiming the development of single crystal fiber (SCF) for laser applications. For quality optimization in the fabrication of fluorides SCF a new growth chamber for a micro-pulling down furnace (μ-PD) was constructed targeting the fibers fabrication with strict atmosphere control (high vacuum, gas flux and static atmospheres). Simultaneously, the SCF growth process of rare earth double molybdates was studied. The growth of pure and Nd3+-doped SCF of LiLa(MoO4)2 (LLM) was studied in the range of 0,5 - 10mol% doping. The designed furnace growth chamber with controlled atmosphere was successfully constructed and tested under different conditions. Specially, it was tested with the growth of LiF SFC under CF4 atmosphere showing the expected results. Transparent and homogeneous SCF of Nd:LLM were grown. In the pure fibers was observed facets formation, however, these defects were minimized after tuning of the growth parameters and additionally with the fibers doping. X-ray analysis showed the crystallization of a single phase (space group I41/a); the optical coherence tomography showed the presence of scattering centers only in regions were some growth stability occurred due to the manual process control. The measured Nd3+ distribution showed uniform incorporation, indicative of a segregation coefficient close to unity in LLM. The potential laser gain of the system was determined using a numerical solution of the rate equations system for the 805nm, CW pumping regime, showing the maximum laser emission gain at 1.064 μm for a Nd3+-doping of 5mol%.