Pythium insidiosum é o oomiceto causador da pitiose uma doença de caráter crônico de difícil tratamento que acomete humanos e animais. Este microrganismo aquático semelhante aos fungos possui características distintas de parede celular e ausência de ergosterol na membrana celular, particularidades estas que dificultam o tratamento da doença com antifúngicos tradicionais. O presente estudo teve por objetivos: avaliar as interações sinérgicas das associações de antibacterianos, antifúngicos e compostos fenólicos sobre P. insidiosum; comparar, in vivo e in vitro, a monoterapia e combinação de azitromicina, claritromicina, minociclina e tigeciclina em coelhos com pitiose experimental. Para os testes in vitro de microdiluição em caldo foram utilizados 30 isolados de P. insidiosum, conforme o protocolo de M38-A2 do CLSI. Para os testes in vivo, os animais foram distribuídos nos grupos: Infectados com zoósporos de P. insidiosum, tratados com placebo (Controle positivo, n=6) e não infectados tratados com placebo (controle negativo, n=5), tratados com azitromicina; claritromicina; minociclina; e tigeciclina (n=6); e com as combinações minociclina com azitromicina; minociclina com claritromicina; minociclina com tigeciclina (n=6). Amostras de sangue, medidas da área da lesão, e tecidos foram coletados para análise antes, durante e ao término do tratamento. Índices mais elevados de sinergismo foram obtidos com a associação de claritromicina com micafungina (73,33%); minociclina com claritromicina ou azitromicina (93,33%); itraconazol com os compostos fenólicos timol ou carvacrol (96,60%) e minocilina com claritromicina, azitromicina (93,33%) ou tigeciclina (86,67%). Interações antagônicas das associações de timol ou carvacrol com antibacterianos ou antifúngicos, e antibiótico com antibiótico, não foram observadas. Porém nas associações de antibacterianos com antifúngicos os percentuais mais altos foram vistos em claritromicina ou azitromicina com itraconazol (6,67%) e minociclina com caspofungina (6,67%). A completa regressão da pitiose foi comprovada pela queda nos níveis de anticorpos, regressão das lesões e negatividade nos testes de detecção de hifas em tecido: PCR, histopatologia e isolamento. Nos tratamentos in vivo todos os grupos diferiram do controle positivo. Cura clínica e completa regressão da lesão foram obtidos nos tratamentos com azitromicina (n=5∕6), minociclina (n=1∕6), azitromicina com minociclina (n=4∕6), minociclina com claritromicicna (n=1∕6) e minociclina com tigeciclina (n=1∕6). A comparação in vitro das associações de minociclina com azitromicina ou claritromicina (93,33%), e tigeciclina (86,67) revelou percentuais de sinergismo elevados, no entanto a correlação destes dados com o in vivo demonstra o cuidado na escolha da associação, pois claritromicina (93,33%) e tigeciclina (86,67%) mesmo apresentando altos índices de sinergismo com minociclina nos testes in vivo tiveram um baixo percentual de regressão das lesões (16,66%). Além disso, os tecidos coletados submetidos à análise molecular e histopatológica revelaram que a tigeciclina mesmo em associação com minociclina não foi capaz de conter a metástase da pitiose para os pulmões. A azitromicina em monoterapia demonstrou ser a melhor terapia para a regressão completa das lesões causadas pela pitiose. / Pythium insidiosum is the cause of the oomycete pythiosis one chronic nature of the disease is difficult to treat that affects humans and animals. This water organism similar to fungi has distinct characteristics of cell wall and absence of ergosterol in the cell membrane, these peculiarities that make it difficult to treat the disease with traditional antifungal agents. This study aimed to: assess the synergistic interactions of antibiotics associations, antifungal and phenolic compounds on P. insidiosum; comparison, in vivo and in vitro, monotherapy and combination of azithromycin, clarithromycin, tigecycline with minocycline in rabbits with pythiosis experimental. For testing in vitro broth microdilution were used 30 strains of P. insidiosum as the M38-A2 CLSI protocol. For tests in vivo, the animals were divided into groups: Infected with zoospores of P. insidiosum treated with placebo (positive control, n = 6) and uninfected treated with placebo (negative control, n = 5) treated with azithromycin; clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6); and minocycline + azithromycin combinations; minocycline and clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6). Blood samples, the lesion area of measures, and tissues were collected for analysis before, during and after treatment. Higher rates of synergism were obtained with the clarithromycin association with micafungin (73.33%); minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%); itraconazole with phenolic compounds thymol or carvacrol (96.60%) and minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%) and tigecycline (86.67%). Antagonistic interactions of thymol or carvacrol associations with antibiotics or antifungal and antibiotic and antibiotic, were observed. However, the associations with antifungal antibiotics the highest percentages were seen in clarithromycin or azithromycin with itraconazole (6.67%) and minocycline with caspofungin (6.67%). The regression of lesions caused by pythiosis was confirmed by the fall in antibodies, regression of lesions and negativity in hyphae detection tests in tissue: PCR, histopathology and isolation. In treatments in vivo all groups differed from positive control. Clinical cure and complete regression of the lesion were obtained in the treatments with azithromycin (n = 5/6), minocycline (n = 1/6), azithromycin or minocycline (n = 4/6), clarithromycin and minocycline (n = 1/6) and tigecycline with minocycline (n = 1/6). In vitro comparisons of minocycline associations with azithromycin or clarithromycin (93.33%), and tigecycline (86.67) showed high percentages of synergism, however the correlation of these data with in vivo demonstrates the care in the association of choice, for clarithromycin (93.33%) and TIG (86.67%) even with high rates of synergism with minocycline in vivo tests had a low percentage of cure (16.66%). In addition, the collected tissues subjected to molecular and histological analysis revealed that even in tigecycline and tigecycline with minocycline association was not able to contain the disease metastasis to the lungs.The azithromycin monotherapy was shown to be the best therapy to the regression of lesions caused by pythiosis.

Aves domésticas são um dos principais alvos da contaminação alimentar com micotoxinas. O que contribui para o aumento dos prejuízos da indústria avícola devido a problemas como: alta mortalidade, redução do ganho de peso, alteração da conversão alimentar, imunossupressão, anormalidades embrionárias e morte embrionária precoce. Além disso, o acúmulo residual de micotoxinas na carne é uma preocupação da Saúde Pública. Diversos métodos são utilizados para a avaliação da citotoxicidade induzida por agentes tóxicos, incluindo a inibição do crescimento celular, a avaliação da capacidade celular de sintetizar macromoléculas necessárias para a replicação e da capacidade desse agente tóxico para induzir a peroxidação lipídica. Sendo assim, o objetivo geral do presente estudo foi avaliar os efeitos in vitro de ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona sobre o sistema imunológico de frangos de corte, utilizando como parâmetros, a viabilidade celular, a atividade enzimática e o estresse oxidativo. Realizou-se cultivo primário de linfócitos das aves e o seu isolamento através da técnica de centrifugação por gradiente de densidade. Cada micotoxina foi adicionada ao meio celular, em uma confluência de 80%, em diferentes concentrações (0,001; 0,01; 0,1 e 1 μg/mL), analisando-se viabilidade celular, atividade de ecto-adenosina desaminase e acetilcolinesterase por ensaios colorimétricos e peroxidação lipídica através dos níveis de malondialdeído mensurados pela técnica de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. Todos esses parâmetros foram analisados em 24, 48 e 72 h, em triplicata e os resultados expressos como média e erro padrão da média, utilizando nível de significância P<0,05. Os resultados obtidos demonstraram que tanto ocratoxina A como deoxinivalenol induziram proliferação linfocitária e baixa atividade de adenosina desaminase, enquanto zearalenona também induziu proliferação, mas nenhuma alteração na atividade da respectiva enzima. Quanto à avaliação da peroxidação lipídica, demonstrou-se a seguinte relação crescente de citotoxicidade: deoxynivalenol> ocratoxina A> zearalenona; enquanto que na avaliação da atividade de acetilcolinesterase esta relação foi inversamente proporcional. Este é o primeiro estudo in vitro realizado com ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona sobre o cultivo primário de linfócitos de frangos de corte na avaliação desses parâmetros. / Poultry is one of the main targets of food contamination with mycotoxins. This contributes to the increase in the poultry industry losses due to problems such as high mortality, reduced body weight gain, change in feed conversion, immunosuppression, embryonic abnormalities and early embryonic death. Furthermore, the residual accumulation of mycotoxins in the meat is a public health concern. Various methods are used to assess the cytotoxicity induced by toxic agents, including inhibition of cellular growth, the evaluation of cell ability to synthesize macromolecules necessary for replication and the ability of this toxic agent to induce lipid peroxidation. Thus, the general objective of this study was to evaluate the in vitro effects of ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone on the immune system of broiler chickens using as parameters, cell viability, enzymatic activity and oxidative stress. It was realized a primary culture of lymphocytes of birds and their isolation through density gradient centrifugation technique. Each mycotoxin has been added to the cell medium, at 80% confluence, at different concentrations (0.001, 0.01, 0.1 and 1 μg/ mL), analyzing cell viability, ecto-adenosine deaminase and acetylcholinesterase activity by colorimetric assays and lipid peroxidation through the malondialdehyde levels measured by thiobarbituric acid-reactive species test. All these parameters were evaluated at 24, 48 and 72 h, in triplicate and the results expressed as mean and standard error of the mean, using P<0.05 as significance level. The results showed that both ochratoxin A and deoxynivalenol induced lymphocyte proliferation and low adenosine deaminase activity, while zearalenone also induced proliferation, but no change in their enzyme activity. The assessment of lipid peroxidation demonstrated the following increasing cytotoxicity relation: deoxynivalenol>ochratoxin A>zearalenone; while in the evaluation of acetylcholinesterase activity this relationship was inversely proportional. This is the first in vitro study performed with ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone on the primary culture of broiler chicken lymphocytes evaluating these parameters.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-20Bitstream added on 2014-06-13T18:45:08Z : No. of bitstreams: 1 okamoto_as_dr_botfmvz.pdf: 316486 bytes, checksum: 9da72cf8a36b7e04e7b42adc80fe9b71 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Neste trabalho foram analisadas 100 cepas de Salmonella Enteritidis (SE) isoladas de material avícola, visando à detecção dos genes de virulência spvC e invA e resistência a antimicrobianos integron classe 1. Comparando-se com a possível expressão dos fatores de virulência para sobrevivência em condições impróprias de temperatura, pH e concentração de nutrientes e o teste de inibição em placa, respectivamente. Também a capacidade de transferência horizontal do gene integron classe 1 foi avaliada em SE. Das cepas analisadas, duas apresentaram os genes spvC e invA, simultaneamente, com uma provável expressão destes sendo verificada no crescimento com pH 10,0 ou temperatura de 25ºC. Porém em relação à concentração de nutriente, ambas as cepas não cresceram na menor concentração (0,5%). Não houve relação direta entre a presença do gene integron classe 1 com a multiresistência de SE aos 14 antimicrobianos testados, já que 80% das cepas pesquisadas foram resistentes a até três antimicrobianos e não apresentaram o referido gene. Entretanto, a transferência horizontal desse gene e da resistência antimicrobiana foi realizada in vitro, de um Escherichia coli para uma Salmonella Enteritidis, demonstrando a capacidade de disseminação do gene presente em integron classe 1. / In this work, 100 strains of Salmonella Enteritidis (SE) isolated from avian material were studied, aiming to detect the genes of virulence spvC and invA, as well as the antimicrobial resistance type 1 integron genes using the polymerase chain reaction (PCR), comparing it with the possible expression of the virulence factors to survive under inappropriate conditions of temperature, pH and nutrient concentration, and the plaque inhibition assay, respectively. Capacity of horizontal transfer of type 1 0,integron gene was also evaluated in SE. Two of the analyzed strains showed spvC and InvA genes simultaneously, with a probable expression verified through growing in pH 10.0 or 25°C temperature. However, regarding to nutrient concentration, the aforementioned strains did not grow at the lowest concentration (0.5%). There was no direct relation between type 1 integron gene and the multiresistance of SE to the 14 tested antibiotics, because 80% of the strains did not showed the gen, but was resistant till three antibiotics. However, horizontal transfer of this gene was performed in vitro, showing the capacity of dissemination of the type 1 integron gene between bacteria.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:16Z : No. of bitstreams: 1 000837592.pdf: 1010768 bytes, checksum: 0d21622784468b2026cb50619c6f97b0 (MD5) / O objetivo desse experimento foi avaliar a eficiência do uso de desinfetantes aprovados para uso na indústria alimentícia na água de frangos de corte, desde o início da restrição alimentar até o fim do período de jejum e início da apanha, para a diminuição de Escherichia coli e enterococos no inglúvio e no conteúdo cecal das aves, que são microrganismos indicadores da presença de patógenos intestinais. Também foi avaliado se esses desinfetantes associados ao jejum causaram algum dano intestinal que poderia facilitar a disseminação de microrganismos para a carcaça. Foram utilizados 60 frangos de corte da linhagem Cobb, distribuídos em boxes de acordo com o tratamento. O período de jejum aplicado foi de 12 horas e os desinfetantes adicionados na água de bebida do jejum pré-abate eram à base de iodo, amônia quaternária, biguanida e ácido peracético. Foram coletadas amostras de conteúdo cecal e inglúvio, para análise microbiológica; e o duodeno e jejuno para análise histológica. Concluiu-se que é recomendável associar a prática do jejum pré-abate com algum método de antissepsia do inglúvio. Os desinfetantes à base de iodo, amônia quaternária e ácido peracético não demonstram bons resultados para o uso na água de bebida de frangos de corte, visando a diminuição das populações de microrganismos do inglúvio. O desinfetante à base de biguanida, em associação com o jejum pré-abate, foi eficiente na redução da quantidade de enterococos no inglúvio. Porém, deve-se ter cautela ao recomendar o seu uso na água de bebida de frangos de corte, já que ocorreu aumento da quantidade de Escherichia coli no conteúdo cecal. O desinfetante à base de ácido peracético promoveu a integridade dos vilos intestinais quando associado ao jejum, o que significa menor risco de disseminação de microrganismos patogênicos presentes no conteúdo intestinal para a carcaça / The objective of this experiment was to test whether the addition of disinfectants approved for use in food industry to broiler drinking water during pre-slaughter feed withdrawal period was efficient in reducing the quantities of microorganisms, such as Escherichia coli and Enterococci, in broiler crops and ceca. Reduction of these microorganisms would likely also reduce pathogenesis post-slaughterhouse. It was also investigated if these disinfectants caused some intestinal damage that could lead to dissemination of microorganisms to the carcass. A total of 60 Cobb male broilers were distributed in pens according to the treatments. The preslaughter period was 12 hours and the disinfectants added to water during this period were based on iodine, quaternary ammonium, biguanide, and peracetic acid. Samples of crop and cecal content were collected for microbiological analysis; and duodenum and jejunum for histological analysis. The conclusion was that preslaughter feed withdrawal should be coupled with methods for crop disinfection. Disinfectants based on iodine, quaternary ammonium and peracetic acid did not present satisfactory results for use in broiler drinking water to decrease the microorganism populations from crop. Biguanide-based disinfectant, in association with preslaughter feed withdrawal, reduced the enterococci amount from crop. However, the recommendation of its addition to broiler drinking water must be done with caution, because cecal content presented higher quantities of E. coli when biguanide was used. Peracetic-acid based disinfectant promoted intestinal villi integrity when associated to preslaughter feed withdrawal, decreasing the risk of dissemination of pathogenic microorganisms from intestinal content to the carcass

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-22Bitstream added on 2014-12-02T11:21:22Z : No. of bitstreams: 1 000799460.pdf: 800786 bytes, checksum: cd0f247b24020afc29b5a1ee55611100 (MD5) / Pertencente a família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae, o Herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5), é o agente causal da meningoencefalite bovina não supurativa, que atinge majoritariamente bovinos jovens. No Brasil, os casos de encefalite por BoHV-5 são a segunda maior causa de óbitos no rebanho. A infecção viral geralmente resulta em alteração no processo de morte celular programada, pela via mitocondrial, estimulando ou inibindo genes relacionados à apoptose, favorecendo a replicação e disseminação viral. O presente estudo teve como objetivo a análise da expressão de genes relacionados à apoptose (Apaf-1, α, FasL e citocromo c) em células MDBK infectadas ou não com o BoHV-5. Foi possível observar um aumento (p<0,05) na expressão dos genes estudados para o grupo infectado comparado ao controle, em diferentes momentos pós-infecção experimental. No caso da família Herpesviridae, a modulação da apoptose parecer ser uma etapa chave para sua patogênese, apesar da associação das atividades anti e pró-apoptóticas com o BoHV-5 ser completamente desconhecida. Este estudo demonstra a capacidade do BoHV-5 em modular, seja ativando ou inibindo, a via extrínseca da apoptose / Belonging to the family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae, bovine Herpesvirus type 5 ( BoHV-5) is the causative agent of bovine non-suppurative meningoencephalitis, which predominantly affects young cattle. In Brazil, cases of encephalitis caused by BoHV-5 are the second leading cause of deaths in the herd. Viral infection usually results in a change in the programmed cell death via mitochondrial, stimulating or inhibiting apoptosis related genes, promoting viral replication and dissemination process. The present study aimed to analyze the expression of apoptosis related genes (Apaf-1, TNFα-R1, FasL and cytochrome c) in infected or uninfected MDBK cells with BoHV-5. We observed an increase ( p < 0.05 ) in expression of the genes studied for the infected group compared with controls, in different times post-infection experimental. In the case of the Herpesviridae family, modulation of apoptosis appears to be a key step in its pathogenesis, despite the association of anti and pro-apoptotic activities with BoHV-5 is completely unknown. This study demonstrates the ability of BoHV-5 in modulating either activating or inhibiting the extrinsic pathway of apoptosis

Pythium insidiosum, classificado no Reino Stramenipila e Classe Oomycetes, é o agente etiológico da pitiose, uma doença diagnosticada principalmente em equinos, caninos e humanos. A secreção de enzimas por micro-organismos é considerada um fator importante na invasão tecidual. O presente estudo teve como objetivo analisar a atividade enzimática de isolados de P. insidiosum obtidos de lesões equinas (n=13), coelhos infectados experimentalmente (n=2) e uma amostra padrão (ATCC). Para isso, utilizou-se o kit comercial API ZYM. Zoósporos foram cultivados em caldo RPMI 1640 por 24h a 37 oC. Após esse período, a presença de hifas foi observada, as quais foram separadas e 65μl do líquido restante foram inoculados em cada um dos 20 poços (um controle e 19 com substratos específicos para cada enzima) do kit. As galerias foram então incubadas por 4 h a 37 oC. Os resultados foram obtidos através da leitura visual das reações. As análises foram feitas em triplicata e submetidas à análise de variância utilizando um nível de significância de 5%. Houve uma variação intraespecífica na atividade enzimática entre os isolados, sendo que enzimas dos grupos fosfohidrolases e éster hidrolases foram as mais prevalentes. Esses dados demonstram a capacidade de P. insidiosum em secretar enzimas que degradam substratos presentes em animais e em plantas, bem como a variabilidade enzimática entre os isolados. / Pythium insidiosum is classified in the kingdom Stramenipila, class Oomycetes. It causes pythiosis, a disease mainly diagnosed in horses, dogs, and humans. This study aimed at analyzing the enzymatic activity of P. insidiosum isolates obtained from equine lesions (n=13), experimentally infected rabbits (n=2) and a standard strain (ATCC 58637). To address this issue, the API ZYM commercial kit was used. Zoospores were cultivated in RPMI 1640 broth for 24 h at 37oC. After this period, the presence of hyphae was observed and they were carefully separated from the liquid phase. Then, 65 μl of this liquid were inoculated in each of the 20 microwells (one control, 19 containing specific substrates for each enzyme) of the API ZYM kit. The strips were incubated for 4h at 37oC. Results were obtained by visual observation of the reactions. The tests were carried out in triplicate and submitted to an analysis of variance using a significance level of 5%. An intraspecific variation among the enzymatic activities was observed among the isolates, where the group of phosphohydrolases and ester hydrolases were conspicuous among most of the isolates. Data here obtained highlighted the capacity of P. insidiosum in secreting enzymes capable of degrading substrates present in animals and plants, besides the enzymatic variability among the isolates.

Orientador: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Edna Teresa de Lima / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Julio Lopes Sequeira / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Resumo: Neste trabalho foram analisadas 100 cepas de Salmonella Enteritidis (SE) isoladas de material avícola, visando à detecção dos genes de virulência spvC e invA e resistência a antimicrobianos integron classe 1. Comparando-se com a possível expressão dos fatores de virulência para sobrevivência em condições impróprias de temperatura, pH e concentração de nutrientes e o teste de inibição em placa, respectivamente. Também a capacidade de transferência horizontal do gene integron classe 1 foi avaliada em SE. Das cepas analisadas, duas apresentaram os genes spvC e invA, simultaneamente, com uma provável expressão destes sendo verificada no crescimento com pH 10,0 ou temperatura de 25ºC. Porém em relação à concentração de nutriente, ambas as cepas não cresceram na menor concentração (0,5%). Não houve relação direta entre a presença do gene integron classe 1 com a multiresistência de SE aos 14 antimicrobianos testados, já que 80% das cepas pesquisadas foram resistentes a até três antimicrobianos e não apresentaram o referido gene. Entretanto, a transferência horizontal desse gene e da resistência antimicrobiana foi realizada in vitro, de um Escherichia coli para uma Salmonella Enteritidis, demonstrando a capacidade de disseminação do gene presente em integron classe 1. / Abstract: In this work, 100 strains of Salmonella Enteritidis (SE) isolated from avian material were studied, aiming to detect the genes of virulence spvC and invA, as well as the antimicrobial resistance type 1 integron genes using the polymerase chain reaction (PCR), comparing it with the possible expression of the virulence factors to survive under inappropriate conditions of temperature, pH and nutrient concentration, and the plaque inhibition assay, respectively. Capacity of horizontal transfer of type 1 0,integron gene was also evaluated in SE. Two of the analyzed strains showed spvC and InvA genes simultaneously, with a probable expression verified through growing in pH 10.0 or 25°C temperature. However, regarding to nutrient concentration, the aforementioned strains did not grow at the lowest concentration (0.5%). There was no direct relation between type 1 integron gene and the multiresistance of SE to the 14 tested antibiotics, because 80% of the strains did not showed the gen, but was resistant till three antibiotics. However, horizontal transfer of this gene was performed in vitro, showing the capacity of dissemination of the type 1 integron gene between bacteria. / Doutor

Orientador: Mara Corrêa Lelles Nogueira / Coorientador: Gabriel Osvaldo Gutkind / Coorientador: Jean-Yves Madec / Banca: Angelo Berchieri Junior / Banca: Renata Katsuko Takayama Kobayashi / Banca: Leonardo Neves de Andrade / Banca: Nilton Erbet Lincopan Huenuman / Resumo: A resistência a cefalosporinas de espectro estendido (ESC) mediada pela produção de β- lactamases de espectro estendido (ESBL) por Enterobacteriaceae é um problema de saúde pública global. Neste contexto, o aumento da resistência a ESC entre Escherichia coli isoladas de animais de produção é uma questão importante, uma vez que bactérias comensais de animais de produção podem contaminar os produtos alimentícios e chegar ao intestino humano via cadeia alimentar. O Brasil é um importante produtor e o maior exportador de carne de frango no mundo. Assim, é de extrema importância monitorar a presença dessas bactérias neste setor alimentar. No presente estudo, foi realizada uma comparação do genótipo de resistência a ESC em E. coli isoladas a partir de carnes de frango no Brasil e na França, considerando que não há relação comercial de carne de frango entre esses dois países. Esta abordagem pode ser útil para compreender as dinâmicas dos fatores de resistência na cadeia de produção de frangos. Além disso, linhagens isoladas do trato gastrointestinal de frangos no Brasil foram também estudadas. Para isso, amostras de carnes de frango de diferentes pontos do varejo e swabs de cloaca de frangos de três diferentes fazendas foram coletadas no Estado de São Paulo, Brasil. Também, amostras de carnes de frango de diferentes pontos do varejo de Lyon, França, foram amostradas. As amostras de carne e os swabs de cloaca de frangos foram inoculados em ágar MacConkey acrescido com ESC. As colônias foram identificadas por sistema automatizado, e a suscetibilidade aos antimicrobianos foi testada por disco-difusão. PCR para detecção de genes blaESBL e blapAmpC e para a determinação dos grupos filogenéticos de E. coli foram realizadas. Os genes bla foram sequenciados e os plasmídeos foram caracterizados pelo esquema PBRT e por southern blot/hibridação de... / Abstract: Resistance to extended spectrum cephalosporins (ESC) mediated by the production of extended-spectrum β-lactamases (ESBL) by Enterobacteriaceae is a global public health concern. In this context, the raise in ESC-resistance among Escherichia coli isolated from foodproducing animals is an important issue, since commensal bacteria from producing animals may contaminate food products and reach the human gut through the food chain. Brazil is an important producer and the greatest exporter of chicken meat in the world, so, it is of utmost importance to monitor the presence of these bacteria in this food sector. In this study, a comparison of the resistance genotype to ESC in E. coli isolated from chicken meat produced in Brazil and France was performed, considering that there is no commercial relationship of chicken meats between these countries. This approach may be useful to understand the dynamics of the resistance factors in chicken production chain. Also, isolates from cloacal swabs collected in Brazil were studied. For this, samples of chicken meat from different markets and chicken cloacal swabs from three separate farms were sampled in the State of São Paulo, Brazil. In addition, chicken meat samples were acquired from markets in Lyon, France. Meat samples and cloacal swabs were inoculated on MacConkey agar supplemented with ESC. Colonies were identified by an automated system, and antimicrobial susceptibility was tested by disc diffusion. PCRs for detection of blaESBL and blapAmpC genes were performed and phylogenetic groups were determined. The bla genes were sequenced, and plasmids were characterized by rep-typing and southern blot/hybridization on S1-PFGE gels. Almost all pieces of chicken meat presented at least one ESC-resistant E. coli, and 53.8% of chickens were also colonized by ESC-resistant E. coli. Resistance to phenicols, quinolones, aminoglycoside and ... / Doutor

Orientador: Luiz Augusto do Amaral / Coorientador: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Karina Paes Bürguer / Banca: Lizandra Amoroso / Banca: Douglas Emygdio de Faria / Banca: Hinig Isa Godoy Vicente / Resumo: O objetivo desse experimento foi avaliar a eficiência do uso de desinfetantes aprovados para uso na indústria alimentícia na água de frangos de corte, desde o início da restrição alimentar até o fim do período de jejum e início da apanha, para a diminuição de Escherichia coli e enterococos no inglúvio e no conteúdo cecal das aves, que são microrganismos indicadores da presença de patógenos intestinais. Também foi avaliado se esses desinfetantes associados ao jejum causaram algum dano intestinal que poderia facilitar a disseminação de microrganismos para a carcaça. Foram utilizados 60 frangos de corte da linhagem Cobb, distribuídos em boxes de acordo com o tratamento. O período de jejum aplicado foi de 12 horas e os desinfetantes adicionados na água de bebida do jejum pré-abate eram à base de iodo, amônia quaternária, biguanida e ácido peracético. Foram coletadas amostras de conteúdo cecal e inglúvio, para análise microbiológica; e o duodeno e jejuno para análise histológica. Concluiu-se que é recomendável associar a prática do jejum pré-abate com algum método de antissepsia do inglúvio. Os desinfetantes à base de iodo, amônia quaternária e ácido peracético não demonstram bons resultados para o uso na água de bebida de frangos de corte, visando a diminuição das populações de microrganismos do inglúvio. O desinfetante à base de biguanida, em associação com o jejum pré-abate, foi eficiente na redução da quantidade de enterococos no inglúvio. Porém, deve-se ter cautela ao recomendar o seu uso na água de bebida de frangos de corte, já que ocorreu aumento da quantidade de Escherichia coli no conteúdo cecal. O desinfetante à base de ácido peracético promoveu a integridade dos vilos intestinais quando associado ao jejum, o que significa menor risco de disseminação de microrganismos patogênicos presentes no conteúdo intestinal para a carcaça / Abstract: The objective of this experiment was to test whether the addition of disinfectants approved for use in food industry to broiler drinking water during pre-slaughter feed withdrawal period was efficient in reducing the quantities of microorganisms, such as Escherichia coli and Enterococci, in broiler crops and ceca. Reduction of these microorganisms would likely also reduce pathogenesis post-slaughterhouse. It was also investigated if these disinfectants caused some intestinal damage that could lead to dissemination of microorganisms to the carcass. A total of 60 Cobb male broilers were distributed in pens according to the treatments. The preslaughter period was 12 hours and the disinfectants added to water during this period were based on iodine, quaternary ammonium, biguanide, and peracetic acid. Samples of crop and cecal content were collected for microbiological analysis; and duodenum and jejunum for histological analysis. The conclusion was that preslaughter feed withdrawal should be coupled with methods for crop disinfection. Disinfectants based on iodine, quaternary ammonium and peracetic acid did not present satisfactory results for use in broiler drinking water to decrease the microorganism populations from crop. Biguanide-based disinfectant, in association with preslaughter feed withdrawal, reduced the enterococci amount from crop. However, the recommendation of its addition to broiler drinking water must be done with caution, because cecal content presented higher quantities of E. coli when biguanide was used. Peracetic-acid based disinfectant promoted intestinal villi integrity when associated to preslaughter feed withdrawal, decreasing the risk of dissemination of pathogenic microorganisms from intestinal content to the carcass / Doutor

Orientador: Julieta Rodini Engrácia Moraes / Coorientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Gustavo da Silva Claudiano / Banca: Rogério Salvador / banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Resumo: Bactérias do gênero Aeromonas causam infecção caracterizada por septicemia, sendo a forma aguda desta afecção a mais prevalente em peixes. Esta bacteriose é responsável por altas taxas de morbidade e mortalidade, ocasionando grandes perdas no setor de produção aquícola. Deste modo, o entendimento de sua fisiopatogenia é de suma importância ao desenvolvimento de estratégias voltadas à intervenção e controle da aeromonose em peixes. Este trabalho visou caracterizar por meio de estudos morfológicos e microbiológicos a fase aguda do processo séptico em diferentes tecidos de pacus (Piaractus mesopotamicus) infectados experimentalmente com Aeromonas hydrophila. Para isso, 160 pacus com peso médio de 250g foram inoculados por via celomática com A. hydrophila (1,78 x 109 UFC/mL) e nos tempos pré-estipulados de 0 (controle), 1, 3, 6 e 9 horas pós-inoculação (hpi) os animais foram anestesiados e o material biológico coletado para realização de exames microbiológicos, histopatológicos e ultraestruturais. Foi evidenciada a presença de necrose, processos degenerativos, alterações vasculares e associação da bactéria a essas lesões nos tecidos estudados, principalmente 6 e 9 horas após a inoculação. / Abstract: Aeromonas bacteria cause infection characterized by septicaemia and acute septicemic form of this disease is the most prevalent in fish. This bacteriosis is responsible for high morbidity and mortality rates, causing considerable losses in the aquaculture sector. Thus, understanding its pathophisiology is crutial to the development of strategies for intervention and control of fish aeromonosis. This study aimed to characterize by morphological and microbiological studies the acute phase of septic process in different tissues of pacu (Piaractus mesopotamicus) experimentally infected with Aeromonas hydrophila. Hence, 160 pacus weighing approximately 250g were inoculated via coelomic route with A. hydrophila (1.78 x 109 CFU / mL) and pre-operative times of 0 (control), 1, 3, 6, and 9 hours post-inoculation (hpi) the animals were anesthetized and the biological material collected for performing microbiological, histopathological and ultrastructural analysis. They showed the presence of necrosis, degenerative processes, vascular damage and close association of the bacteria to these lesions in tissues, mainly 6 and 9 hours after inoculation / Mestre