Orientador : Lucia Regina Durrant / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:17:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Matsuura_AniBeatrizJackisch_D.pdf: 1945993 bytes, checksum: 4d44d0d3841173fb299443a3960ccc2b (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-01-03T15:04:06Z No. of bitstreams: 1 2013_AlinnePereiraCastro.pdf: 2909244 bytes, checksum: 2dcb0a7b746745636241cbabd0df1664 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-01-09T16:59:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AlinnePereiraCastro.pdf: 2909244 bytes, checksum: 2dcb0a7b746745636241cbabd0df1664 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-09T16:59:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AlinnePereiraCastro.pdf: 2909244 bytes, checksum: 2dcb0a7b746745636241cbabd0df1664 (MD5) / O Cerrado, bioma exclusivamente brasileiro, compreende alta heterogeneidade de vegetação e duas estações bem definidas durante o ano sendo estes invernos secos e verões chuvosos. Embora uma quantidade considerável de informação esteja disponível sobre a diversidade de fauna e flora presente no Cerrado, pouco se conhece sobre a composição, estrutura e funcionamento biológico das comunidades microbianas nas diferentes fitofisionomias nativas associados a este bioma. Nesse contexto, genes do rRNA (16S em procariotos e 18S em eucariotos) e posteriormente do DNA total (metagenoma) extraídos diretamente de solo a partir de quatro tipos de vegetação ontrastantes (cerrado denso, campo sujo, cerrado sensu stricto e mata de Galeria) durante as estações secas e chuvosas foram analisados por meio de pirosequenciamento. As análises comparativas das quatro fitofisionomias revelaram uma distinta distribuição de filos de Bactérias, Archaea e Fungos. De acordo com a riqueza de OTU estimada pelo índice de Chao1, a estação chuvosa apresentou maior riqueza de OTUs para as comunidades de bactérias e fungos. Em contraste, a estação seca demonstrou possuir maior riqueza de OTUs para a comunidade de archaea. Aparentemente, houve forte influência da umidade do solo com a composição da comunidade microbiana sugerindo que o teor gravimétrico de água nas amostras de solo pode ser considerado como um dos preditores de variabilidade dentro da diversidade microbiana presente em amostras de solo do bioma Cerrado. Além disso, análises dos dados metagenômicos revelaram aumento significativamente estatístico na abundância relativa de genes associados com o metabolismo e aquisição de ferro, elementos transponíveis, dormência e esporulação durante a estação seca. Em adição, genes relacionados ao metabolismo de DNA e gados à respiração tiveram sua abundância relativa enriquecida durante a estação chuvosa. Essas categorias funcionais geralmente podem estar associadas aos mecanismos de adaptação da comunidade microbiana a estresse hídrico. Em suma, estes resultados podem ajudar a construir conclusões mais compreensivas sobre a capacidade funcional das comunidades microbianas de solos nas estações seca e chuvosa. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Cerrado occurs primarily in Brazil. Its vegetation varies considerably in physiognomy and there are two well-marked and seasonal climates, one wet summer and one drought winter. Although a considerable amount of information is available regarding the fauna and flora diversity present in the Cerrado, little is known about the composition, structure and biological function of microbial communities in different native physiognomies associated to this biome. Using barcode pyrosequencing of the rRNA (16S/18S rRNA) genes and shotgun metagenomics analysis with DNA directly extracted from four contrasting physiognomies (cerrado denso, campo sujo, cerrado sensu stricto and mata de galeria) in the two different time points (drought and rain) were performed. Comparative analysis of the four type vegetation soil samples revealed a distinct distribution of bacterial, archaea and fungal phyla. According to the OTU richness estimated by Chao 1, the rain season is more species rich than drought season for bacterial and fungal communities; by contrast, the archaeal community showed is more species rich in the drought when compared with rainy season. Apparently, there was a strong influence of soil moisture on the composition of the microbial community suggesting that the gravimetric water content of soil samples can be considered as one of the predictors of variability within the microbial diversity present in soil samples from the Cerrado biome. Furthermore, analysis of metagenomic data revealed statistically significantly increased in relative abundance of genes associated with metabolism and iron acquisition, transposable elements, dormancy and sporulation during the dry season. In addition, genes related to metabolism of DNA and proteins as well as genes linked to respiration had enriched their relative abundance during the rainy season. These functional categories can generally be associated with the mechanisms of adaptation of the microbial community to water stress. Indeed, these results can help build more comprehensive conclusions about the functional capacity of microbial communities in soils of dry and rainy seasons.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Gastric cancer is a serious health problem. Several risk factors have been identified to contribute to its development, such as virulence genes of H. pylori, SNPs in hostâs key genes and epigenetic events. The aim of this study was to investigate the relationship between genes methylation in gastric cancer, its association with H. pylori virulence genes, and verify the influence of CDH1 and MLH1 SNPs in the methylation status and correlate methylation of the promoter of miR-34b/c expression of MET protein in those cases. The promoter genes methylation was assessed by MS-PCR and HRM (for miR-34b/c) techniques. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. The genes of higher and lower methylation frequency were MSH2 and MLH1, respectively. Patients aged ≥ 50 had CDH1 more frequently methylated than those younger. The MLH1 gene was significantly less methylated in cardia tumors. As for the TNM, the CDH1-M gene was associated with advanced tumor extension, even when subdivided by subtype, since same association has been shown in tumors of intestinal subtype. Already the combination CDKN2A-M/MLH1-U was associated with absence of distant metastases. Taking into account the virulence genes of H. pylori, it was seen that patients infected vacAm1+ or cagG+ strains had a higher frequency of CDKN2A-U vacAs1 + was associated with COX-2-U and CDH1-U, while hopQII with MLH1-U. Patients infected with cagE+ and virB11+ strains had higher frequency of MSH2-M. It was also observed that less virulent strains tended to non-methylation for CDH1 and MLH1 genes. The classification trees made according to the histological subtype, showed that in tumors of diffuse subtype cagE+ and virB11 + strains (separately or together) were also attached to a methylator character of some of the analyzed genes. Already strains virB11+cagA+ did not lead to methylation in two genes. In intestinal subtype tumors was not observed a pattern having a variation in the combinations of H. pylori genes leading to the methylation. CDH1 SNPs presented no relation to the methylation of this gene, while the GA genotype of MLH1 SNP showed a tendency to not methylation of the gene. As regards the promoter methylation of miR-34b/c, the distribution percentage of the cases showed that the majority of cases presented methylation above 50%. The larger frequency among tumors of the intestinal subtype was in the methylation range of 50-75%, and to diffuse subtype from 75%. Already c-MET expression was positive in 86.36% of cases were not found differences among the different locations and subtypes. There was no correlation between the methylation percentage of miR-34b/c and c-MET expression. Observing each case, it was seen that in most cases whose c-MET expression was negative (H-score 0) had a high percentage of methylation of miR-34b/c. In conclusion, the methylation status of the studied genes appear to be dependent on the tumor location and is also related to the TNM staging and tumor subtype. In addition, more virulent H. pylori strains may be involved in this process by increasing inflammatory response leading to methylation of these genes. Already c-MET is overexpressed in cases of gastric cancer and the promoter region of miR-34b/c hipermethylated, indicating a possible involvement of these factors in carcinogenesis of the stomach, although it was not found a direct relationship between the two variables. / O cÃncer gÃstrico constitui um sÃrio problema de saÃde pÃblica. Diversos fatores de risco parecem estar envolvidos na contribuiÃÃo para o seu desenvolvimento, tais como: genes de virulÃncia de H. pylori, SNPs em genes-chave no hospedeiro e eventos epigenÃticos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar a relaÃÃo entre a metilaÃÃo de genes em casos de cÃncer gÃstrico, sua associaÃÃo com genes de virulÃncia de H. pylori, verificar a influÃncia dos SNPs de CDH1 e MLH1 em seu status de metilaÃÃo, bem como correlacionar a metilaÃÃo do promotor de miR-34b/c e a expressÃo da proteÃna MET nesses mesmos casos. A metilaÃÃo dos genes foi obtida atravÃs da realizaÃÃo da tÃcnica MS-PCR e HRM (para miR-34b/c). Os genes de H. pylori foram detectados por PCR e os SNPs, por PCR-RFLP. Os genes de maior e menor frequÃncia de metilaÃÃo foram MSH2 e MLH1, respectivamente. O corte de idade mostrou que pacientes com idade ≥ 50 anos tiveram CDH1 mais frequentemente metilado que aqueles mais jovens. O gene MLH1 foi significativamente menos metilado em tumores da cÃrdia. Quanto ao TNM, o gene CDH1-M foi associado à extensÃo tumoral avanÃada, inclusive quando subdividido por subtipo, jà que mesma associaÃÃo foi mostrada em tumores do subtipo intestinal. Jà a combinaÃÃo CDKN2A-M/MLH1-U foi associada à ausÃncia de metÃstase à distÃncia. Levando em consideraÃÃo os genes de virulÃncia de H. pylori, foi visto que pacientes infectados por cepas vacAm1+ ou cagG+ tiveram uma maior frequÃncia de CDKN2A-U, vacAs1+ foi associado com COX-2-U e CDH1-U, enquanto hopQII, com MLH1-U. Pacientes infectados por cepas cagE+ e virB11+ tiveram maior frequÃncia de MSH2-M. Foi observado tambÃm que cepas menos virulentas apresentaram uma tendÃncia à nÃo-metilaÃÃo para os genes MLH1 e CDH1. As Ãrvores de classificaÃÃo, feitas de acordo com o subtipo histolÃgico, mostraram que em tumores do subtipo difuso, cepas cagE+ e virB11+ (separados ou em concomitÃncia) tambÃm estavam associadas a um carÃter metilador em alguns dos genes analisados. Jà cepas virB11+cagA+ nÃo levavam à metilaÃÃo em dois genes. Nos tumores do subtipo intestinal, nÃo foi observado um padrÃo, havendo uma variaÃÃo nas combinaÃÃes dos genes de H. pylori que levavam à metilaÃÃo. Os SNPs de CDH1 e nÃo apresentaram relaÃÃo com a metilaÃÃo desses gene, enquanto o genÃtipo GA de MLH1 apresentou uma tendÃncia à nÃo metilaÃÃo do gene. Quanto à metilaÃÃo do promotor de miR-34b/c, a distribuiÃÃo dos casos por percentual mostrou que a maioria dos casos apresentou metilaÃÃo acima de 50%. A maior frequÃncia de casos entre os tumores do subtipo intestinal estava na faixa de metilaÃÃo de 50-75%, e para os do subtipo difuso, a partir de 75%. Jà a expressÃo de c-MET foi positiva em 86,36% dos casos, nÃo sendo encontradas diferenÃas entres as diferentes localizaÃÃes e subtipos. NÃo foi encontrada uma correlaÃÃo entre o percentual de metilaÃÃo de miR-34b/c e a expressÃo da proteÃna c-MET. Observando caso a caso, foi visto que na maioria dos casos cuja expressÃo de c-MET era negativa (H-score 0) possuia um elevado percentual de metilaÃÃo de miR-34b/c. Assim, pode-se concluir que os status de metilaÃÃo dos genes estudados parecem ser dependentes da localizaÃÃo tumoral e està relacionado tambÃm ao estadiamento TNM e ao subtipo tumoral. AlÃm disso, cepas de H. pylori mais virulentas podem estar envolvidas nesse processo, aumentando a resposta inflamatÃria e levando à metilaÃÃo desses genes. Jà a proteÃna c-MET està superexpressa em casos de cÃncer gÃstrico e a regiÃo promotora de miR-34b/c, hipermetilada, indicando um possÃvel envolvimento desses fatores na carcinogÃnese do estÃmago, embora nÃo tenha sido encontrada uma relaÃÃo direta entre as duas variÃveis.

El presente trabajo reporta la actividad antimicrobiana y antifúngica de extractos obtenidos de hojas y flores de Nicotiana paniculata L, especie endémica del Perú cuyas muestras fueron colectadas en las Lomas de Lachay, en el Departamento de Lima. Se estudió la actividad antimicrobiana comparando los métodos de Kirby Bauer o disco difusión y el método de excavación placa cultivo encontrando que el método de excavación es más sensible para evaluar actividad antimicrobiana. Las cepas utilizadas fueron Escherichia coli ATCC 10536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 6538-P Candida albicans ATCC 10231 y una muestra hospitalaria de Pseudomonas aeruginosa, mostrando actividad antimicrobiana frente a cepas como Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus (16 a 30mm) y ligera inhibición del crecimiento para Escherichia coli y Candida albicans (11 a 15mm). / This study report the bacterial and mycotic activity of the extracts from leaves, and flowers from the Nicotiana paniculata L (NPL) samples collected at Lomas de Lachay, Lima region, Perú. The antibacterial activity of the standard strains Escherichia coli ATCC 10536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 6538-P, Candida albicans ATCC 10231, and a wild Pseudomona aeruginosa strain was determined by comparison of sensitivity tests using a plate dilution method in which the drugs were provided by impregnated filter papers, and the culture plate hole method recommended by Standard Microbiological Methods (2001). The standard Straits Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and Staphylococcus aureus ATCC 6538-P showed to be susceptibility to the NPL extracts with inhibitory zone from 16 mm to 30 mm; while the Escherichia coli ATCC 10536, and Candida albicans ATCC 10231 displayed intermediate sensitivity (from 11 to 15 mm) to the testing extracts.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-10-27Bitstream added on 2014-06-13T20:44:15Z : No. of bitstreams: 1 rosa_mm_dr_rcla.pdf: 4775636 bytes, checksum: 3a910249e344253877ee9051e3958b03 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As leveduras são microrganismos importantes em diferentes processos biotecnológicos, sendo amplamente empregadas industrialmente. Apesar de se apresentarem em grande número em ambientes naturais, como na superfície de plantas (folhas, flores e frutos) e na rizosfera, pouco é conhecido sobre sua função nestes habitats. O controle de fitopatógenos tem sido estudado como um potencial papel das leveduras, principalmente inibindo fungos que causam podridões em frutas no período pós-colheita, e controlando doenças de diversas culturas de interesse econômico no campo, pois são ótimas competidoras por nutrientes e espaço. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi isolar, avaliar e caracterizar leveduras de áreas agrícolas quanto ao controle de fungos fitopatogênicos in vitro e in vivo. Foram isoladas mais de uma centena de linhagens de leveduras, as quais foram avaliadas inicialmente quanto ao antagonismo à três fungos fitopatogênicos (Colletotrichum sublineolum, Colletotrichum graminicola e Thielaviopsis paradoxa) em testes in vitro. Os isolados com comportamento antagônico foram identificados através do sequenciamento da região ITS do rDNA e por fingerprinting utilizando-se a técnica de ISSR (Inter Simple Sequence Repeats). Foram realizados testes de antagonismo em meios de cultura sólidos (pela avaliação do crescimento micelial do fitopatógeno) e líquidos (pela avaliação da germinação dos esporos fúngicos), além de experimentos in vivo em plantas de sorgo e toletes de cana-de-açúcar, verificando-se o controle das doenças antracnose e podridão abacaxi, respectivamente. Foram realizadas análises para detecção de possíveis mecanismos de ação das leveduras, como competição por nutrientes; produção de toxina killer, compostos voláteis, enzimas hidrolíticas e sideróforos, além da avaliação de possíveis danos causados pela levedura... / The yeasts are important microorganisms for different purposes in biotechnological processes and widely utilized industrially. Although in high numbers in natural environments, as plant surfaces (leaves, flowers and fruits) and rhizosphere, a little is known about their functions in the habitats. The control of phytopathogens by the yeasts has been studied, mainly inhibiting molds which cause fruit rots in the postharvesting period, and controlling diseases of economically important cultures in the field, once they are good competitors for nutrients and space. In this context, the aim here is the isolation, screening and characterization of yeasts from agricultural areas regarding their ability to control phytopathogenic molds in vitro and in vivo. More than a hundred of strains were isolated, which were initially screened for the in vitro antagonism against three phytopathogenic molds (Colletotrichum sublineolum, Colletotrichum graminicola and Thielaviopsis paradoxa). The isolates with antagonistic behavior were identified by the sequencing of ITS region in the rDNA and by fingerprinting with the ISSR (Inter Simple Sequence Repeats) technique. Antagonism tests in solid media (evaluating the mycelial growth of the phytopathogen) and liquid media (evaluating the fungal spore germination) were carried out, besides in vivo experiments with sorghum and sugar cane to verify the control of anthracnose and pineapple disease, respectively. Mechanisms of action by yeasts towards the molds were evaluated as competition for nutrients; production of killer toxin, volatile compounds, hydrolytic enzymes and siderophores. The damage caused by the yeast in the fungal hyphae was also approached. The results indicated three yeast species with good results as antagonists (Torulaspora globosa, Candida intermedia and Rhodotorula mucilaginosa). All the yeasts exhibited antagonism against the phytopathogenic... (Complete abstract click electronic access below)

El presente trabajo reporta la actividad antimicrobiana y antifúngica de extractos obtenidos de hojas y flores de Nicotiana paniculata L, especie endémica del Perú cuyas muestras fueron colectadas en las Lomas de Lachay, en el Departamento de Lima. Se estudió la actividad antimicrobiana comparando los métodos de Kirby Bauer o disco difusión y el método de excavación placa cultivo encontrando que el método de excavación es más sensible para evaluar actividad antimicrobiana. Las cepas utilizadas fueron Escherichia coli ATCC 10536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 6538-P Candida albicans ATCC 10231 y una muestra hospitalaria de Pseudomonas aeruginosa, mostrando actividad antimicrobiana frente a cepas como Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus (16 a 30mm) y ligera inhibición del crecimiento para Escherichia coli y Candida albicans (11 a 15mm). / This study report the bacterial and mycotic activity of the extracts from leaves, and flowers from the Nicotiana paniculata L (NPL) samples collected at Lomas de Lachay, Lima region, Perú. The antibacterial activity of the standard strains Escherichia coli ATCC 10536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 6538-P, Candida albicans ATCC 10231, and a wild Pseudomona aeruginosa strain was determined by comparison of sensitivity tests using a plate dilution method in which the drugs were provided by impregnated filter papers, and the culture plate hole method recommended by Standard Microbiological Methods (2001). The standard Straits Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and Staphylococcus aureus ATCC 6538-P showed to be susceptibility to the NPL extracts with inhibitory zone from 16 mm to 30 mm; while the Escherichia coli ATCC 10536, and Candida albicans ATCC 10231 displayed intermediate sensitivity (from 11 to 15 mm) to the testing extracts. / Tesis

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-08T20:28:44Z No. of bitstreams: 1 Tese_Ieda Maria S Torres.pdf: 1184324 bytes, checksum: 1a8f013e18ff6a2485e7ff6182415423 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-09-09T15:08:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Ieda Maria S Torres.pdf: 1184324 bytes, checksum: 1a8f013e18ff6a2485e7ff6182415423 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-09T15:08:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Ieda Maria S Torres.pdf: 1184324 bytes, checksum: 1a8f013e18ff6a2485e7ff6182415423 (MD5) Previous issue date: 2008 / Pseudomonas aeruginosa é um microrganismo oportunista e tem a capacidade de responder a uma variedade de mudanças ambientais, apresentando alta resistência intrínseca a numerosos agentes antimicrobianos. Cefalosporinas, especialmente ceftazidima e cefepima são efetivas contra Pseudomonas aeruginosa, contudo sua intensa resistência tem limitado o uso desses antimicrobianos. Uma estratégia utilizada para evitar este problema é encapsular esses antimicrobianos em lipossomas unilamelares. Neste estudo, foi comparada a capacidade inibitória de ceftazidima e cefepima encapsuladas em lipossomas com a dos antibióticos na forma livre, contra a cepa de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Foram determinados diâmetro, eficiência de encapsulação, estabilidade dos lipossomas e concentração inibitória mínima (CIM) dos antimicrobianos na forma livre e encapsulada. A concentração bactericida mínima (CBM) da ceftazidima e cefepima livre e encapsuladas em lipossomas unilamelares foram determinadas a 1, 2 ou 4 vezes o CIM. O diâmetro médio dos lipossomas foi de 131,88 nm, com eficiência de encapsulação da cefepima e ceftazidima de 2,29 % e 5,77 %, respectivamente. A CIM da ceftazidima e da cefepima encapsuladas em lipossomas foi 50% inferior àquela do fármaco livre. Ceftazidima e cefepima encapsuladas em lipossomas foram mais eficientes quanto ao efeito bactericida sobre a Pseudomonas aeruginosa, não havendo recuperação microbiana após 24 horas de incubação. Isto demonstra o potencial destes sistemas transportadores de fármacos para contribuir na redução do aparecimento de resistência bacteriana a estes antibióticos. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Pseudomonas aeruginosa is an opportunistc microorganismi which is able to respond to a large variety of environmental changes exhibits intrinsic resistance to several aintimocrobial agents. Cephalosporins, particularly ceftazidime and cefepime are effective against Pseudomonas aeruginosa, however, its increasing resistance has limites the usage of these antibiotics. Encapsulating antimicrobial drugs into unilamellar liposomes is an approach that has been investigated in order to overcome microorganism resistance. In this study, antimicrobial activity of liposomal ceftazidime and cefepime against Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 was investigated and compared to that of the free drugs. Liposomal characterization included diameter, encapsulations efficiency and stability. Minimal inhibitory concentration (MIC) was determined for free and liposomal forms of both drugs. Minimal bactericidal concentration (MBC) was determined at concentrations 1,2 and 4 times the MIC. Liposome average diameter was 131.88 nm and encapsulation efficiency for cefepime and ceftazidime were 2,29% and 5,77%, respectively. Mic for liposomal antibiotics was 50% lower than that for the free drugs. Liposomal Ceftazidime and cefepime exhibited a more efficient bactericidal effect over Pseudominas aeruginosa, with no microbial regrowth whithin 24 hours of incubation. This demonstrates the ability of these drug delivery sistems in contributing for the reduction of the development of bacterial resistance.

Uma das formas de se realizar estudos epidemiológicos de dispersão de patógenos é pela discriminação intra-específica (biotipagem) desses microrganismos em subgrupos (biotipos). Métodos fenotípicos que permitem a discriminação de linhagens clínicas são almejados principalmente pela facilidade de execução e por terem menor custo, quando comparados com os métodos moleculares. O sistema killer, baseado em padrões de sensibilidade à toxina, pode representar uma ferramenta simples, barata, sensível e reprodutível para biotipagem de microrganismos de importância clínica. Neste estudo, foi pesquisada a presença deste fenótipo em 595 isolados de alimentos e de fontes ambientais, de onde foram selecionadas 32 cepas para testes de identificação molecular, caracterização genética do fenótipo killer, caracterização morfológica do mecanismo de ação da toxina e aplicação em painéis de biotipagem.A linhagem KYQU89 (CBS10423), proveniente de queijo, foi detectada como uma espécie nova, com seqüência idêntica a dois isolados killer oriundos de insetos. As três linhagens demonstraram ser relacionadas ao clado Ovoides no gênero Trichosporon, sendo caracterizadas por sequenciamento da região D1/D2 do rDNA , da região interespaçadora ITS e perfil bioquímico. A espécie nova foi denominada Trichosporon insectorum. Vinte linhagens killer foram selecionadas para compor um painel de biotipagem sobre cem isolados clínicos e ambientais de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. A partir dos padrões de sensibilidade à toxina, foi gerado um dendrogramademonstrando a total discriminação das linhagens. A ação letal da toxina sobre as células destas duas espécies de Cryptococcus foi observada por microscopia eletrônica de varredura e óptica, evidenciando que não houve a formação de poros na parede celular, mas sim uma provável interferência no ciclo celular da célula. Da mesma forma, um painel de 11 linhagens killer selecionadas foi utilizado para a biotipagem de cepas multi-resistentes de Staphylococcus epidermidis, provenientes de dois hospitais em Porto Alegre, RS, também sendo capaz de discriminá-las totalmente. / One of the forms of performing epidemiological studies of dispersion of pathogenic microorganisms is by means of intra-specific discrimination (biotyping) of these microorganisms in sub-groups (biotype). Phenotypic methods that allow the clinical discrimination of strains are needed, especially because they are easy to perform and have low cost, when compared to molecular methods. The killer system, based on patterns of sensitivity towards the toxin, can represent a simple, cheap, sensible and reproductive tool for biotyping of microorganisms of clinical importance. In our study, the presence of this phenotype was evaluated in 595 isolates from natural environments and food and 32 killer strains were selected for molecular identification, genetic characterization of killer phenotype, morphologic characterization of the mechanism of action, and application in biotyping panels.The strain KYQU89 (CBS10423), isolated from cheese, was found to be a new species, with D1/D2 sequence identical to two killer isolates from insects. The three strains were shown to be related to the Ovoides clade of the genus Trichosporon, and were characterized bysequencing of the D1/D2 region of the LSU rDNA and physiological profiles the new species was called Trichosporon insectorum. Twenty killer strains were selected to compose a panel of biotyping against one hundred clinical and environmental isolates of Cryptococcus neformans and Cryptococcus gattii. Basedon the killer sensitivity patterns, a dendrogram demonstrating the total discrimination of the strains was done. The lethal action of the toxin on the cells of Cryptococcus was observed by means of optical and scanning electron microscopy, showing that there was no formation of pores on the cell surface of the sensitive cells in contact with the toxins, but a probable interference in the cell cycle. In the same way, a panel of 11 selected killer strains was used for the biotyping of multi-resistant Staphylococcus epidermidis strains, provenient from two hospitals in Porto Alegre, RS, being also capable of discriminating all the strains.

98 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-27T13:28:00Z No. of bitstreams: 1 Priscilla Pereira dos Santos.pdf: 1657272 bytes, checksum: f4598deae9dac5b281816007402625ab (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-01T17:33:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Priscilla Pereira dos Santos.pdf: 1657272 bytes, checksum: f4598deae9dac5b281816007402625ab (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-01T17:33:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Priscilla Pereira dos Santos.pdf: 1657272 bytes, checksum: f4598deae9dac5b281816007402625ab (MD5) / CAPES / O presente estudo objetivou desenvolver um sorvete de leite fermentado que apresentasse em sua composição microrganismos probióticos, avaliando-se suas propriedades físico-químicas, microbiológicas e a viabilidade desses microrganismos durante o período de estocagem. Foram utilizados diferentes estabilizantes na elaboração do sorvete, sendo selecionadas aquelas que apresentaram melhores resultados de Overrun (Gelatina e Goma guar). Os produtos formulados com estes estabilizantes, isolados ou combinados, foram avaliados quanto a sua composição (pH, acidez titulável, açúcares, lipídios, proteínas, umidade e cinzas), além da qualidade microbiológica (Salmonela, bolores e leveduras, coliformes termotolerantes e estafilococos coagulase positivo) e viabilidade dos microrganismos probióticos. Os resultados obtidos demonstraram que a adição de estabilizantes distintos, na formulação do sorvete, não interferiu (P<0,05) na composição dos produtos finais. Quanto à qualidade microbiológica, apesar do sorvete apresentar níveis de fungos filamentosos e coliformes termotolerantes, estes foram menores que os padrões estabelecidos pela legislação para qualidade microbiológica de gelados comestíveis, mostrando que os sorvetes foram desenvolvidos seguindo os padrões de segurança e higiene. Com relação à viabilidade das culturas probióticas nos sorvetes, após 120 dias de estocagem a -18°C, o número de células viáveis permaneceu acima de 107 UFC/g, demonstrando ser um produto estável por manter os níveis das bactérias probióticas em maior número do que o mínimo exigido pela legislação, para que um produto seja caracterizado como probiótico (106 UFC/g). Verificou-se que a estimativa da vida de prateleira do sorvete probiótico desenvolvido, quando armazenado em condições adequadas de temperatura, pode atingir até um ano (P<0,05), demonstrando ser um bom produto veiculador de microrganismos probióticos. Além disso, este trabalho faz uma avaliação das novas tecnologias e novos produtos que vem sendo desenvolvidos e protegidos através de patentes.A prospecção tecnológica presente neste trabalho visou entender como as grandes empresas estão investindo nessa nova fatia do mercado e qual será a tendência de crescimento deste segmento. Através de um levantamento de patentes existentes no banco de dados Espacenet, observou-se que existem apenas 185 patentes sobre sorvete com uso de microrganismos probióticos. Os microrganismos começaram a ser aplicados em sorvete desde a década de 90, tendo seu salto em aplicação em 2006. A maioria das patentes pertence aos Estados Unidos, sendo a Nestlé a empresa que mais investe em depósitos para proteção de novas tecnologias nesse setor. A Dinamarca também tem investido e é o segundo país nessa corrida dos depósitos. No entanto, esses números ainda não são tão expressivos no cenário mundial e explorar esse campo da indústria de alimentos tem sido uma tarefa lenta. Apesar disso, o mercado continua em expansão para esses produtos e acredita-se que nos próximos anos esses números tenham um crescimento significativo no que se refere a depósito de patentes e ao desenvolvimento de novas tecnologias que contemplem o mercado de alimentos probióticos. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2012.

156 f. / Submitted by Ana Valéria de Jesus Moura (anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-22T14:09:21Z No. of bitstreams: 1 TARSIS BARRETO OLIVEIRA - Dissertação.pdf: 608602 bytes, checksum: 5482c81ae0dd02ddad8b66fe73addaae (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Valéria de Jesus Moura(anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-22T14:09:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TARSIS BARRETO OLIVEIRA - Dissertação.pdf: 608602 bytes, checksum: 5482c81ae0dd02ddad8b66fe73addaae (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-22T14:09:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TARSIS BARRETO OLIVEIRA - Dissertação.pdf: 608602 bytes, checksum: 5482c81ae0dd02ddad8b66fe73addaae (MD5) Previous issue date: 2007 / O presente trabalho tem como objetivo investigar as possibilidades de patenteamento de seres vivos, bem como seus limites e conseqüências. Indo além, busca-se definir, dentro da atual sistemática das patentes e à luz dos acordos internacionais sobre a matéria, quais as modalidades de seres vivos sujeitas à concessão deste privilégio pelo Direito Brasileiro. A propriedade intelectual na área da Biotecnologia é aqui analisada nos seus contornos jurídicos, éticos e econômicos, no plano dos impactos provocados pelas novas tecnologias sobre o espírito humano, marcados pela exploração econômica de estruturas vivas no fenômeno da “comercialização da vida humana”. Neste contexto, abordam-se os conflitos éticos concomitantes aos novos avanços científicos, em especial na manipulação genética das espécies vivas. Neste esforço elucidativo, examinam-se as disposições normativas nacionais e os acordos internacionais sobre a matéria, o Projeto Genoma, a biopirataria e as tentativas de apropriação do patrimônio genético da humanidade. O trabalho parte da exceção feita pela Lei 9.279/96 (Lei de Propriedade Industrial Brasileira), que, em seu artigo 18, III, admite o patenteamento de seres vivos na modalidade “microorganismos”. Investiga-se, nesse sentido, em uma perspectiva hermenêutico-biológica, todos os seres vivos compreendidos nesta modalidade, analisando-se as mais variadas formas vivas que compõem o Reino Protista, destacando-se, ainda, as possibilidades de patenteamento dos genes, das células humanas e de estruturas vivas mais diferenciadas. Busca-se, assim, encontrar respostas quanto aos limites e conseqüências da concessão de patentes sobre seres vivos, como condição única de delimitação do alcance das práticas científicas no campo da propriedade intelectual em Biotecnologia. / Salvador