Realiza la detección fenotípica de mecanismos de resistencia a betalactámicos, quinolonas y aminoglucósidos de aislados de Escherichia coli mediante el uso de la técnica de Kirby Bauer siguiendo las recomendaciones del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Se utilizaron 36 aislados de Escherichia coli provenientes del cepario del Laboratorio de Microbiología y Parasitología sección de Bacteriología y Micología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se trabajó con un total de 15 antibióticos de importancia humana y veterinaria. Se encontraron altas frecuencias de resistencia antimicrobiana al ácido nalidíxico 89%(32/36), cloxacilina 83% (30/36) y amoxicilina-ácido clavulánico 69%(25/36). Del total de aislados, un 3% (1/36) presentó AmpC inducible. De los mecanismos de resistencia a quinolonas un 42% (15/36) evidenció una posible mutación en gyrA, el 14% (5/36) al menos dos posibles mutaciones en gyrA o gyrA+parC, además el 33% (12/36) presentó altas probabilidades de genes qnr. Finalmente, las enzimas del mecanismo de resistencia a aminoglucósidos evidenciadas fueron un 39% (14/36) de AAC (6’), 28% (10/36) ANT (2”), 11% (4/36) AAC (3) IV. El conocimiento de los mecanismos de resistencia antimicrobiana son de suma importancia para entender su constante desarrollo en nuestro medio, de manera que el médico veterinario pueda tomar conciencia de esta problemática, que afecta tanto a la población humana como animal y le permita intervenir mediante el uso racional de los antibióticos. / Tesis

Orientador: Henrique Ferreira / Resumo: Xanthomonas citri subsp. citri (X. citri) é o agente etiológico do cancro cítrico, uma doença que ataca todas as variedades comerciais de citros, causando prejuízos econômicos em vários países produtores. Em áreas endêmicas, o cancro cítrico é controlado principalmente por aplicação de bactericidas cúpricos. Compostos alternativos para controlar a doença são desejáveis, pois os bactericidas cúpricos causam impactos ambientais e podem induzir resistência em X. citri. Um passo importante para a descoberta e avaliação de novos compostos para controle de X. citri é a caracterização de genes/proteínas que são alvos em potencial. O gene mreB codifica para uma proteína que é uma actina bacteriana com papel-chave na determinação da morfologia celular. Esses genes foram caracterizados em algumas bactérias, nas quais foi demonstrado que são essenciais. Não existem relatos da caracterização de mreB em X. citri. A proteína MreB e a actina tem baixa similaridade de sequência, apesar de serem homólogos funcionais. Essas características fazem de MreB um alvo interessante para novos compostos antibacterianos. Os objetivos deste trabalho foram descrever a função e determinar a localização subcelular de MreB em X. citri. Para estudar a função de MreB, duas estratégias foram usadas para deletar o gene mreB em X. citri. Entretanto, não foi possível obter mutantes deletados para mreB nem na ausência, nem na presença de complementação. Esse resultado evidenciou que mreB é essencial para X. citri e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Xanthomonas citri subsp. citri (X. citri) is the etiological agent of Citrus canker, a widespread plant disease that attacks all varieties of commercial citrus plants, causing economic loss worldwide. In endemic areas, citrus canker is controlled mainly by the application of cupric bactericides. Alternative compounds to control this pathogen are desirable, since copper based bactericides have negative environmental impact and induce resistance in X. citri. An important step for the discovery and evaluation of new compounds to control X. citri is the characterization of genes/proteins that are potential targets. The mreB gene codes for a protein that is a bacterial actin homologue with a key role in rod shape morphogenesis. This gene was characterized in some bacteria, in which it was shown to be essential. There are no reports of characterization of mreB in X. citri. MreB and actin have a weak sequence similarity, despite being functional homologues. These characteristics make MreB an interesting target for new antibacterial chemical compounds. The objectives of this work were to study the function and subcellular localization of MreB in X. citri. To study the function of MreB in X. citri, two strategies were used to delete the mreB gene. However, neither strategy produced deleted mutants. This result confirmed that mreB is essential to X. citri and showed that the complementation method used was not adequate to ensure the viability of X. citri. To investigate MreB subcellula... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carlos Alexandre Costa Crusciol / Banca: Fernando Dini Andreote / Banca: Heitor Cantarella / Banca: Antonio Carlos de Azevedo / Banca: Eder de Souza Martins / Resumo: Since the sugarcane production mostly in highly weathered Brazilian soils, an alternative to increasing its yields, renewing these soils is required. Remineralization consists in add milled rock into the soils, as a soil conditioner, providing some minerals and elements. Besides the low cost, the consequences of their application are not totally elucidated. Therefore, the hypothesis of this study include the basalt rock dust treatment can improve the sugarcane yield, soil and plant chemical attributes; basalt rock dust increases the microbial index of soil quality; the rock application change microbial communities in the soil; and the rock weathering change the soil mineralogy. The aim of this study was evaluate the effects basalt rock dust application on sugarcane crops its consequences in soil mineralogy and microbiology. Despite not consistent to the four areas, basalt rock dust treatment can improve the sugarcane yield, soil chemical attributes, and microbial index of soil quality but a little is noticed in plant chemical attributes. The microbial diversity was not the same to the four areas, but it can be more related to geographical patterns than rock application, even with a little shift occurring, it cannot be attributed to the treatment. Weathering signals were noticed but there are two questionable points: the time to occur this weathering, may be quicker than it was thought, and the amount of weathered minerals. Basalt rock dust application improves sugarcane yield... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Visto o cultivo de cana-de-açúcar principalmente em solos brasileiros altamente intemperizados, é necessária uma alternativa para aumentar essa produção, renovando os solos. A remineralização consiste em adicionar rocha moída nos solos, como um condicionador de solo, fornecendo alguns minerais e elementos, além do baixo custo, as consequências desta aplicação não são totalmente elucidadas. Portanto, a hipótese deste estudo inclui o tratamento do pó de rocha basáltica, que pode melhorar o rendimento da cana-de-açúcar, os atributos químicos do solo e da planta; o pó de rocha de basalto aumenta o índice microbiano de qualidade do solo; a aplicação da rocha altera as comunidades microbianas no solo; e o intemperismo das rochas altera a mineralogia do solo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplicação de pó de rocha de basalto na cultura da cana-de-açúcar, suas consequências na mineralogia e na microbiologia do solo. Apesar de não ser consistente com as quatro áreas, o tratamento de pó de rocha de basalto pode melhorar o rendimento da cana-de-açúcar, os atributos químicos do solo e o índice microbiano de qualidade do solo, mas pouco é notado nos atributos químicos da planta. A diversidade microbiana não foi a mesma para as quatro áreas, mas pode estar mais relacionada aos padrões geográficos do que à aplicação da rocha, mesmo com uma pequena mudança ocorrendo, não pode ser atribuída ao tratamento. Sinais de intemperismo foram notados, mas há dois pontos questionáveis: o tempo para ocorrer este intemperismo, pode ser mais rápido do que se pensava, e a quantidade de minerais intemperizados nesse tempo. A aplicação de pó de rocha de basalto melhora o rendimento da cana-de-açúcar, destacando-se suas mudanças mineralógicas no solo e não causa danos à diversidade microbiana do solo. A atividade microbiana e as pistas da microbiologia do solo ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:05:59Z : No. of bitstreams: 1 coan_rm_dr_jab.pdf: 739372 bytes, checksum: d0c819f0449b35ba00623b9983d65bc0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estudo foi desenvolvido na UNESP, Câmpus de Jaboticabal e na APTA, de Colina - SP, utilizando-se da ensilagem dos capins Tanzânia e Marandu sob os tratamento controle, adição de 5% e 10% de polpa cítrica peletizada (PCP). Foram realizados cinco experimentos com o objetivo de avaliar: 1) a dinâmica fermentativa, a composição química e o perfil microbiológico; 2) a produção e a composição do efluente; 3) a degradabilidade ruminal da MS e da FDN das silagens; 4) a estabilidade em aerobiose e o desenvolvimento de microrganismos e 5) o desempenho de bovinos em confinamento. No experimento 1, o padrão fermentativo e microbiológico foi melhorado pela adição de polpa cítrica peletizada. No experimento 2, observou-se produção de efluentes nas silagens dos capins Tanzânia e Marandu sem adição de PCP. As concentrações médias de DQO e DBO no efluente das silagens dos capins Tanzânia e Marandu foram de 36.161 mg/L e 20.914 e 40.080 mg/L e 23.250 mg/L, respectivamente. No experimento 3, não foram observadas variações nos teores de MS, N-FDA, FDN, FDA, LIG, HEM, CEL e valores de pH, nas silagens dos capins Tanzânia e Marandu. Detectou-se a presença de Listeria monocytogenes em 2,53% e 2,33%, das silagens dos capins Tanzânia e Marandu, respectivamente. No experimento 4, as silagens do capim Tanzânia apresentaram maiores valores de DP e DE da MS e da FDN. No experimento 5, não foram observadas diferenças no consumo de MS, desempenho, rendimento de carcaça, espessura de gordura de cobertura e na área de olho de lombo dos animais. O uso da polpa cítrica peletizada promoveu melhora da composição química, do perfil fermentativo e microbiológico das silagens. / This study was carried out at FCAV/UNESP - Jaboticabal (SP) and at APTA - Colina (SP) to evaluate the addition of 5% and 10% (wet basis) of citrus pulp (CP) or without treatment (control) to Tanzânia and Marandu silages. Five trials were developed aiming to measure the effect of inclusion of citrus pulp at: 1) fermentative dynamic, chemical composition, and microbiological profile; 2) effluents production and composition; 3) rumen degradabilities of silage DM and NFD; 4) aerobic stability and microorganism growth in silages; 5) performance of beef cattle in feed lot. In trial 1, the citrus pulp utilization improved the fermentative profile. Enterobacterium population was detected at the first day of Tanzânia ensilage and until 28th day of Marandu ensilage. In trial 2, effluent production was found only in no-PCP-Tanzânia silage until thirty-third and fifty day. Mean concentrations of OBD and OQD in Tanzânia and Marandu silages were 36.161 mg/L e 20.914 e 40.080 mg/L e 23.250 mg/L. In trial 3, no ranges were observed in pH and in contents of DM, N-ADF, NDF, ADF, LIG, HEM, CEL of Tanzânia and Marandu silages. The Listeria spp. was found in 33.4% and in 26.41% of samples from Tanzânia and Marandu silages, respectively. Among them, 2.53% and 2.33%, respectively, were classified as Listeria monocytogenes. In trial 4, the PCP increased potential and effective degradability of dry matter. The Tanzânia grass silage presented higher values of potential and effective degradability of dry matter and NDF. In trial 5, there were no differences among treatments in terms of animal performances, carcass yields, backfat thickness and ribeye area. The citrus pulp utilization improved the chemical composition, fermentative and microbial profile of silages.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-09Bitstream added on 2014-08-13T18:01:37Z : No. of bitstreams: 1 000741182_20140930.pdf: 395072 bytes, checksum: 127ce5ee4bdf12a8f76953cc23531f21 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:24:44Z: 000741182_20140930.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:27:41Z : No. of bitstreams: 2 000741182_20140930.pdf.txt: 31713 bytes, checksum: a6a381f0975530bddc3e0a62f9b75201 (MD5) 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:33:18Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:43:32Z : No. of bitstreams: 2 000741182_20140930.pdf.txt: 31713 bytes, checksum: a6a381f0975530bddc3e0a62f9b75201 (MD5) 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:48:58Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:49:49Z : No. of bitstreams: 1 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-27T11:47:13Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-27T11:48:06Z : No. of bitstreams: 1 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) / Os Enterococcus spp habitam normalmente o trato gastrointestinal de seres humanos e de animais. Desde 1980, foram identificados como importantes agente de infecções hospitalares. As espécies E. faecalis e E. faecium são agentes de diversas infecções, como bacteriemia, sepse, endocardite, infecção do trato urinário, infecções de feridas e meningite. A resistência adquirida, mais predominantemente a penicilina/ampicilina, aminoglicosídeos (alto nível de resistência) e glicopeptídeos são relatados em um número crescente de isolados e o espectro terapêutico nestes casos é limitado. A principal preocupação é que os genes que codificam a resistência para todos esses antibióticos poderiam ser transferidos para outros enterococos ou mesmo para muitos outros patógenos virulentos. A resistência adquirida aos glicopeptídeos é mediada por vários mecanismos (tipos VanA/B/D/E/G/L), sendo que os genótipos VanA e VanB são transferíveis. Fatores relacionados com o hospedeiro, com o hospital, procedimentos invasivos, meio ambiente, e o uso de antibióticos podem aumentar o risco de colonização ou infecção com VRE. Este estudo visa investigar a ocorrência destes microrganismos, em pacientes de hospitais de Manaus - Amazonas, identificando a distribuição das espécies e o perfil de resistência aos antimicrobianos e dos genes de resistência a vancomicina envolvidos. Foram analisados 38 isolados de Enterococcus spp. provenientes de pacientes internados ou de atendimento ambulatorial no período de outubro de 2011 a setembro de 2012. Foram confirmados 29 isolados de E. faecalis e 8 de E. faecium por testes bioquímicos convencionais, pela metodologia automatizada e por Reação da Polimerase em Cadeia (PCR). Um isolado de Enterococcus spp. foi identificado pelo equipamento automatizado como E. casseliflavus, identificação não confirmada pela PCR. A avaliação dos perfis de suscetibilidade aos ... / The Enterococcus spp. normally inhabit the gastrointestinal tract of humans and animals. Since 1980, have been identified as a major cause of nosocomial infections. The species E. faecalis and E. faecium are agents of various infections, such as bacteremia, sepsis, endocarditis, urinary tract infections, wound infections and meningitis. Acquired resistance, most predominantly penicillin / ampicillin, aminoglycosides (high-level resistance) and glycopeptides are reported in an increasing number of isolates and therapeutic spectrum in these cases is limited. The main concern is that the genes which encode resistance to these antibiotics could all be transferred to other Enterococci or for many other virulent pathogens. Acquired resistance to glycopeptides is mediated by several mechanisms (types VanA/B/D/E/G/L), with VanA and VanB genotypes are transferable. Factors related to the host, with the hospital, invasive procedures, environment, and the use of antibiotics may increase the risk of colonization or infection with VRE. This study aims to investigate the occurrence of these microorganisms in hospital patients of Manaus - Amazonas, identifying species distribution and antimicrobial resistance profile and vancomycin resistance genes involved. We analyzed 38 Enterococcus spp. from inpatient or outpatient care from October 2011 to September 2012. 29 isolates E. faecalis and 8 E. faecium were confirmed by conventional biochemical tests, the automated methodology and Polymerase Chain Reaction (PCR). An isolate of Enterococcus spp. was identified by automated equipment as E. casseliflavus, identification was not confirmed by PCR. The evaluation of the antimicrobial susceptibility profiles commonly used in clinical practice were performed by disk diffusion methods and automated. There were differences in the results of sensitivity to penicillin and ampicillin between the two methods. There were no isolated ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-04-15Bitstream added on 2014-06-13T19:16:45Z : No. of bitstreams: 1 shiomi_hf_me_botfca.pdf: 1002815 bytes, checksum: aa3a55c9b04258872a970f0e010f3cdf (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Experimentos sob condições controladas e testes de campo com bactérias endofíticas isoladas de folhas e caules de Coffea arabica e Coffea robusta, provenientes das cidades de Pedreira-SP, Mococa-SP e Pindorama-SP, foram realizadas com o objetivo de avaliar a inibição da germinação de urediniosporos de Hemileia vastatrix, raça II e o controle do desenvolvimento da ferrugem alaranjada do cafeeiro, em testes em discos de folhas, folhas destacadas e em plantas da cv. Mundo Novo, pela aplicação de suspensões de bectérias endofíticas 72 e 24 horas antes e após à inoculação de H. vastatrix e concomitantemente à inoculação com o patógeno. Isolados de bactérias endofíticas testados demonstraram eficácia na inibiação da germinação de urediniosporos e/ou no desenvolvimento da ferrugem, com valores acima de 50%, embora os resultados obtidos nos testes de germinação de urediniosporos tenham sido inferiores ao tratamento com o propiconazole. Nos testes em discos de folhas, folhas destacadas e em plantas de cafeeiro, os isolados endofíticos T G4-Ia, T F2-IIc, T F7-Ib e T F9-Ia, demonstraram melhor controle da ferrugem do cafeeiro. Os isolados endofíticos T G4-Ia e T F9-Ia foram identificados como Bacillus lentimorbus e Bacillus cereus, respectivamente. Os resultados indicam a ocorrência de isolados endofíticos eficientes em controlar a ferrugem alaranjada do cafeeiro. Alguns isolados de bactérias edonfíticas podem aumentar a severidade da doença. / Experiments under controlled conditions and field tests with endophytic bacteria from leaves and stem of Coffea arabica and Coffea robusta plants from Pedreira-SP, Mococa-SP and Pindorama-SP, were carried out with th objective to evaluate the inhibition of germination of urediniospores of Hemileia vastatrix, race II and control the development of coffea leaf rust cv. Mundo Novo leaf disk, datached-leaf and coffee plants, by dripping of bacterial suspensions 72 e 24 hours prior and after the H. Vastatrix and also concomitant the aplication of the pathogen. Endophytes tested demonstrated inhibition efficacy of urediniospores germination and/or the development of leaf rust over 50%, althought the results obtained in urediniospores germination was below of propiconazole treatment. In leaf dsk and datached-leaf inoculations, the endophytes strains T G4-Ia, T F2-IIc, T F7-Ib and T F9-Ia demonstrated better control of coffee leaf rust disease. The endophytic strains T G4-Ia and T F9-Ia was identified as Bacillus lentimorbus and Bacillus cereus. The results the ocorrence of efficiente endophytes controlling the coffee leaf rust. Some endophytes can partially improve severity of coffee leaf rust.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-12Bitstream added on 2014-06-13T21:05:13Z : No. of bitstreams: 1 blanco_kc_dr_rcla_parcial.pdf: 165788 bytes, checksum: 441eba3e7f81a4045fd71fd169810c38 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-03T11:42:26Z: blanco_kc_dr_rcla_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-03T11:43:59Z : No. of bitstreams: 1 000722980_20150710.pdf: 153337 bytes, checksum: ef6f673ca2880afc3824d702fd97308c (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:21:09Z: 000722980_20150710.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:22Z : No. of bitstreams: 1 000722980.pdf: 702124 bytes, checksum: 076acfb344282eec1bfa2c15d2efa0a1 (MD5) / As ciclodextrinas (CDs) resultam da degradação do amido por ciclodextrina glicosiltransferase (CGTases) produzidas principalmente pelo gênero Bacillus. As CDs são oligossacarídeos cíclicos capazes de formar complexos de inclusão com uma grande variedade de moléculas modificando suas características indesejadas sendo assim muito utilizadas em vários setores industriais. A linhagem bacteriana Gram-positiva e formadora de esporos nomeada como CGII foi isolada de águas residuárias de uma fábrica de farinha de mandioca em Ribeirão Bonito, São Paulo, Brasil e submetidos a estudos filogenéticos e testes bioquímicos. O planejamento composto central foi então utilizado para optimizar a composição do meio e as condições de cultivo para a produção da enzima ciclodextrina glicosiltransferase (CGTase) em frascos agitados e em biorreatores. As características físico-químicas e bioquímicas da CGTase como pH e temperatura óptima; estabilidade em temperatura e pH; a influência de substâncias; cinética enzimática e produção de ciclodextrina foram avaliadas após purificação em cromatografia de afinidade usando a β-CD como ligante. Neste trabalho também foram investigadas novas aplicações da ciclodextrina produzida pela CGTase de B. lehensis: A síntese de fases sólidas de nanopartículas de óxido de ferro magnético (Fe4O3), óxido de cobre (CuO) e prata metálica (Ago) a partir de CDs por síntese hidrotérmica, usando CDs. As nanopartículas foram caracterizadas por difração de raios-x, espectroscopia de infravermelho e microscopia eletrônica de varredura. A enzima CGTase também foi imobilizada por ligação covalente no suporte magnetita síntetizada anteriormente, a qual foi silinalizado com 3-aminopropiltrimetilsilano e ativada com glutaraldeido. A sequência do gene 16S rRNA apresentou maior grau de similaridade com... / Cyclodextrins (CDs) are obtained from starch degradation by enzyme cyclodextrin glycosyltransferase (CGTases) produced mainly by Bacillus genus. The CDs are cyclic oligosaccharides capable of forming inclusion complexes with a wide variety of molecules, modifying their unwanted characteristics and, therefore are widely used in various industrial sectors. The bacterial strain Gram-positive and spore-forming named CGII was isolated from wastewater from a cassava mill in São Paulo, Brazil and subjected to phylogenetic studies and biochemical tests. A central composite design was then used to optimize the medium composition and culture conditions for the production of the enzyme cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase) in bioreactors. The physicochemical and biochemical proprieties of CGTase as pH and temperature optimum, stability to pH and temperature, the influence of substances, enzyme kinetics and production of cyclodextrin were evaluated after purification by affinity chromatography using β-CD as a ligand. In this work new applications of cyclodextrin produced by CGTase from B. lehensis were also investigated. The solid phase synthesis of nanoparticles magnetic iron oxide (Fe4O3), copper oxide (CuO) and metallic silver (Ag) by hydrothermal synthesis using CDs were characterized by x-ray, infrared, and scanning electron microscopy. The enzyme CGTase was also immobilized on the support by covalent bond to the synthesized magnetite, which has been silylazed with 3- aminopropil-trimetilsilano and activated with glutaraldehyde. The 16S rRNA gene sequence indicated the highest degree of similarity to strains of Bacillus genomic MLB2 lehensis (100%). The response surface methodology showed that the model for the optimization of CGTase of B. lehensis reached a good level of agreement with experimental... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-16Bitstream added on 2014-06-13T20:24:24Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_am_dr_rcla.pdf: 1319026 bytes, checksum: b6ad03694a53b696678fbabde842876e (MD5) / O presente trabalho teve por objetivo otimizar a autólise de levedura fresca de cervejaria (Saccharomyces cerevisiae), visando a extração máxima de ácido ribonucléico da biomassa na produção do extrato de levedura. As variáveis estudadas foram pH, temperatura, % de NaCl, % de NH3, tempo de processo e, métodos de recuperação de RNA do autolisado. Os experimentos foram realizados por meio de quatro ensaios delineados segundo Box & Benken (1989) e avaliado pela Metodologia da Superfície de Resposta, utilizando-se o Software Statística 5.1 e a análise estatística ANOVA. A otimização foi concluída por meio do quinto ensaio com a produção do extrato nas condições otimizadas (55,2ºC, 9,8% de NaCl em pH=5,1 por 24 horas e, 12,2% de NH3 a 60ºC sob agitação a 200 rpm/15minutos. Três métodos foram avaliados para recuperação do RNA e das frações de extrato e parede celular: 1) autólise/plasmólise; 2) choque térmico por 1 minuto a 68ºC seguido da autólise/plasmólise 3) hidrólise química alcalina. Pelo processo de autólise em combinação com 9,8% de NaCl, a taxa de extração de RNA em 24 horas foi de 89,7%, com um rendimento de 51,3% em massa de extrato com 57,9% de proteína e, 48,7% de parede celular desidratada com 21,7 % de proteína. A utilização de 12,2% de NH3 em base seca de levedura permitiu o aumento na taxa de extração de RNA de 89,7 para 93,6%, mas um forte escurecimento foi verificado no extrato obtido. Na recuperação do RNA após precipitação protéica em pH 4,3 com posterior uso de 2 volumes de etanol em pH=2, recuperou-se 15,47%, 13,80% e 7,42% de RNA respectivamente com purezas de 49,85%, 51,70% e 38,70%. As taxas de extração de RNA da biomassa foram de 87,45% para o método 1; 91,40% para o método 2 e 78,80% para o terceiro método, indicando uma boa alternativa para redução do teor de RNA da biomassa e produção do extrato rico... / The present work had for objective to optimize the autolysis of fresh brewery’s yeast (Saccharomyces cerevisiae), aiming the maximum extraction of ribonucleic acid of biomass in the yeast extract production. The studied variables were pH, temperature, % of NaCl, % NH3, processing time and RNA recovering methods from autolysed. The experiments were accomplished by mean of four delineated assays according to Box & Benken (1989) and evaluated by Surface Methodology of Answer, utilizing the software Statistica 5.1. and the analysis statistics “ANOVA”. The optimization was concluded by mean of the fifth assay with an extract production in the optimized conditions (55.2ºC, 9.8% of NaCl in pH 5.1 for 24 hours and, 12.2% of NH3 at 60ºC under agitation at 200 rpm/15 minutes. Tree methods were evaluated for RNA recovering and of the extract fractions and cell wall: 1) autolysis/plasmolysis; 2) thermic shock during 1 minute at 68ºC followed of autolysis/plasmolysis; 3) alkaline chemical hydrolysis. The process of autolysis in combination with 9.8% of NaCl, the RNA extraction yield in 24 hours was of 89.7%, with a yield of 51.3% in extract mass with 57.9% of protein and, 48.7% of dehydrated cell wall with 21.7% of protein. The utilization of 12.2% of NH3 in dried base of yeast allowed the increase in the RNA yield extraction from 89.7 to 93.6%, but a strong darkness was observed in the obtained extract. The RNA recovering after 4.3 pH proteic precipitation with posterior use of 2 ethanol volumes in pH 2.0, it was recovered 15.47%, 13.8% and 7.42% of RNA respectively with purities of 49.85%, 51.70% and 38.70%. The RNA extraction yields of biomass were of 87.45% for the method 1; 91.40% for the method 2 and 78.80% for the third method, indicating a good alternative for RNA content reduction of biomass and rich extract production in nucleotides. The extract fractions were evaluated... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-14Bitstream added on 2014-06-13T19:22:47Z : No. of bitstreams: 1 romeiro_rl_dr_sjc.pdf: 889307 bytes, checksum: b97ee7a898e0c8f57f25ac75008f2fc8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desse trabalho foi analisar in vitro a aderência de Streptococcus sanguinis, Candida albicans e associações destes microrganismos com Streptococcus mutans às superfícies dos implantes dentários tratados com jateamento de fosfato de cálcio, anodização, duplo ataque ácido e os de superfície lisa, com ou sem a prévia incubação em saliva ou plasma sanguíneo. Foram selecionados 120 implantes, sendo 30 de cada superfície para cada microrganismo e associações estudadas. Para análise da aderência, foram preparadas suspensões de microrganismos contendo 106 células/ml em espectrofotômetro. Além disso, cada microrganismo e associações foram divididos em três grupos: em um, o implante foi removido da embalagem e colocado diretamente no caldo, em outro, foi previamente embebido em saliva humana por uma hora e no último em plasma humano, também por uma hora. Os implantes foram acondicionados separadamente em poços de placas de cultura de células contendo caldo sacarosado (placa in vitro) e a suspensão do microrganismo. Após 24h de incubação a 37 °C e 5% de CO2, os implantes foram lavados três vezes durante um minuto em solução salina estéril e colocados em sonicador com 10 ml de salina para dispersão das células aderidas. A seguir, foram realizadas diluições seriadas e semeaduras em meios de cultura específico para cada microrganismo. Após 48h de incubação a 37 °C e 5% de CO2, foi realizada a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/ml) e os dados foram submetidos a análise de variância (ANOVA), teste de tukey, com nível de significância de 5%. Para ilustrar a aderência dos microrganismos, foram selecionados o microrganismo Streptococcus sanguinis, e as associações Streptococcus sanguinis e Candida albicans e Streptococcus sanguinis, Streptococcus mutans... / The aim of this study has been to analyze, in vitro the adherence of Streptococcus sanguinis, Candida albicans and associations of those microorganisms with Streptococcus mutans to the surfaces of dental implants treated with calcium phosphate jetting, anodization, double acid attack and to those of smooth surface, with or without previous saliva or blood plasma incubation. Ten implants from each surface were selected for every studied microorganism and association. In order to analyze the adherence, suspensions of microorganisms bearing 106 viable cells/ml in spectrophotometer were prepared. Additionally, every microorganism and association was divided in three groups: in the first, an implant was removed from its wrap and put right away into the sauce; the second, it was previously drenched into saliva for one hour; and the last one, into plasma, for one hour, as well. The implants were separately placed in culturing plaque wells of cells containing saccharose sauce (in vitro plaque) and the microorganism’s suspension. After 24 hours of incubation time at 37 °C and 5% of CO2, the implants were taken washed three times for a minute in saline sterile solution and put in a sonicator holding 10 ml of saline in order to disperse adherent cells. Then, seriated dilutions were done, and sowing in culture media specific for each of the. After a 48hincubation time at 37°C and 5% of CO2, a counting was carried, of the colony forming units (UFC/ml) and the data were submitted to the ANOVA, Tukey test, at a significance level of 5%. To illustrate the adherence of the microorganisms, some samples were exposed to electronic sweeping microscopy. The results did show great microorganism adherence to the surfaces studied, mainly when associated forming a biofilm. The anodized surface... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: Os Staphylococcus aureus são os principais microrganismos causadores de infecções nosocomiais, com uma grande variedade de manifestações clínicas, a variação deste espectro de manifestações geralmente depende dos numerosos fatores de virulência que cada cepa produz, entretanto, a importância desses patógenos está inserida na combinação da virulência mediada por suas toxinas, seu caráter invasivo e seu perfil de resistência a antibióticos. O presente estudo teve por objetivos documentar a disseminação de clones endêmicos e identificar os fatores individuais relacionados à sua aquisição, e relacioná-los a prevalência de fatores de resistência e virulência em cepas de MRSA isoladas de culturas clínicas e/ou de vigilância de pacientes de um hospital de ensino. No presente trabalho 1078 amostras de Staphylococcus aureus provenientes de pacientes internados no Hospital Estadual Bauru foram identificadas e testadas fenotipicamente frente a oxacilina (1 g), cefoxitina (30 g), vancomicina (30 g), eritromicina (15 g) e gentamicina (10 g) sendo que dessas, 810 (75.1%) apresentaram perfil fenotípico para Staphylococcus aureus Resistentes a Meticilina - MRSA. A avaliação genotípica do perfil de resistência foi realizada através da amplificação do gene mecA pela técnica de PCR onde foi observado que das 443 amostras testadas foi detectado o gene mecA em 336 amostras (75.8%), e que dessas, 305 amostras (90.8%) apresentaram perfil SCCmec Tipo III ou Tipo IIIA, 6 amostras (1.8%) Tipo II e 25 amostras (7.4%) Tipo IV. A avaliação do perfil genotípico de virulência mostrou a seguinte distribuição, 15.6% (n=69) genes da Leucocidina de Panton Valentine (lukPV), 14% (n=62) gene da Síndrome do Choque Tóxico (tst), 31.8% (n=141) gene da Enterotoxina A (sea), 19.8% (n=88) gene da Enterotoxina B (seb), 38.1% (n=169) gene da... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Staphylococcus aureus are the most common microorganisms causing nosocomial infections, with a wide variety of clinical manifestations, the variation of the spectrum of manifestations generally depends upon the numerous virulence factors that each strain produces, however, the importance of these pathogens is included in the combination of virulence mediated by their toxins, its invasive nature and profile of antibiotic resistance. This study aimed to document the spread of endemic clones and identify the individual factors related to its acquisition, and relate them to the prevalence of resistance and virulence factors in strains of MRSA isolated from clinical cultures and / or surveillance patients a teaching hospital. In this study 1078 samples of Staphylococcus aureus from hospitalized patients in Bauru State Hospital were identified phenotypically and tested against oxacillin (1  g), cefoxitin (30  g), vancomycin (30  g), erythromycin (15  g) and gentamicin (10  g) and that these, 810 (75.8%) showed phenotypic profile for Methicillin Resistant Staphylococcus aureus - MRSA. The evaluation of genotypic resistance profiles was performed by amplification of the mecA gene by PCR where it was observed that of 443 samples tested was detected mecA gene in 336 samples (75.8%), and that these, 305 samples (90.8%) profile were SCCmec type III or type IIIA, six samples (1.8%) type II and 25 samples (7.4%) type IV. The evaluation of virulence genotype was distributed as follows, 15.6% (n = 69) genes of Panton Valentine Leukocidin (lukPV), 14% (n = 62) gene for toxic shock syndrome (tst), 31.8% (n = 141) gene of enterotoxin A (sea), 19.8% (n = 88) gene of enterotoxin B (seb), 38.1% (n = 169) gene of enterotoxin C (sec-1), 100% (n = 443) Delta Hemolysin gene (hld), 99.5% (n = 441) Alpha Hemolysin gene (hla), 0.9% (n = 4) Exfoliative toxin A (eta), 3.6% (n = 16) Exfoliative... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Coorientador: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Banca: Antonio Carlos Pignatari / Banca: Maria Clara Padoveze Fonseca Barbosa / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Doutor