Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-04T19:56:34Z No. of bitstreams: 1 Aryele Pinto Izaguirry.pdf: 1079082 bytes, checksum: 55e00f827b5ec4212e6829f225964fd8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T19:56:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aryele Pinto Izaguirry.pdf: 1079082 bytes, checksum: 55e00f827b5ec4212e6829f225964fd8 (MD5) Previous issue date: 2013-08-03 / O cádmio é um dos poluentes mais tóxicos, amplamente distribuído no meio ambiente. A exposição humana não-ocupacional ao cádmio resulta predominantemente da fumaça do cigarro, da poluição do ar e do consumo de alimentos e água contaminados por cádmio. Este metal apresenta uma baixa taxa de excreção no organismo e um elevado tempo de meia-vida biológico e por esta razão, o cádmio se acumula no sangue, rins e fígado, bem como nos órgãos reprodutivos, incluindo placenta, testículos e ovários. A exposição ao cádmio está fortemente associada com toxicidade reprodutiva em animais e humanos, culminando em infertilidade e câncer nos tecidos reprodutivos. A patogênese do dano ovariano e a redução da viabilidade folicular após exposição ao cádmio tem sido associada a danos oxidativos. Assim, compostos antioxidantes poderiam ser uma terapia alternativa frente a toxicidade do cádmio. Estudos tem sugerido que a ingestão de frutas e vegetais com propriedades antioxidantes podem ajudar na prevenção de várias doenças. A fruta mirtilo (Vaccinium ashei Reade) é uma das fontes mais ricas de antioxidantes fitoquímicos, entre frutas e legumes. Sendo assim, verificou-se o potencial antioxidante do extrato de mirtilo in vitro, o qual demonstrou atividade scavenger de espécies de reativas (ER) e radical DPPH. Este extrato apresentou elevado conteúdo de polifenóis (558,27 μg EAG/mL). Posteriormente, avaliou-se o efeito do extrato hidro-alcoólico de mirtilo sobre o dano ovariano induzido por exposição sub-crônica de camundongas ao cádmio. Os animais receberam CdCl2 (2,5 mg/Kg) por via subcutânea e extrato de mirtilo (2,5mg/Kg) por via oral por 3 semanas (5 dias por semana). Os animais foram eutanasiados 24 horas após a última administração, e os ovários foram removidos para determinar atividade das enzimas glutationa peroxidase (GPx), glutationa-S-transferase (GST), δ-aminolevulinato-desidratase δ-(ALA-D), 17 β-hidroxiesteróide desidrogenase (17β-HSD), determinação dos níveis de espécies reativas, quantificação de cádmio e avaliação da viabilidade folicular. Os resultados demonstraram que os animais que receberam cádmio apresentaram um aumento de 2 vezes nos níveis de espécies reativas, redução na atividade das enzimas δ-ALA-D e 17β-HSD (30 e 39% de redução, respectivamente) e uma redução de 69% da viabilidade folicular em comparação ao grupo controle. Nenhuma alteração foi observada na atividade das enzimas GPx e GST ovarianas. A terapia foi eficaz em restaurar os níveis de ER, a atividade da δ-ALA-D e melhorou parcialmente a viabilidade folicular alterada pela exposição sub-crônica ao cádmio. No entanto, esta terapia não foi capaz de restaurar a atividade 17β-HSD, o que sugere que o efeito protetor do mirtilo não está relacionado com a atividade hormonal. Desta forma, verificou-se que o cádmio se acumula em ovários de camundongas após exposição subcrônica causando dano neste tecido e o extrato hidroalcoólico de mirtilo apresenta propriedades antioxidantes que poderiam proteger, ao menos em parte, o tecido ovariano dos efeitos tóxicos do cádmio. / Cadmium is one of the most toxic pollutants which is widely distributed in the environment. Non-occupational human exposure to cadmium predominantly results from cigarette smoke, air pollution and consumption of cadmium contaminated foods and water. This metal presents a low rate of excretion from the body and a long biological half-life and for this reason cadmium accumulates over time in blood, kidney, and liver as well as in the reproductive organs, including the placenta, testis, and ovaries. Cadmium exposure is strongly associated with reproductive toxicity in both animal and human populations culminating in infertility and cancers in reproductive tissues. The pathogenesis of ovarian damage and reduction of follicle viability following cadmium exposure is generally ascribed to oxidative damage. Thus, antioxidant compounds could be an alternative therapy against cadmium toxicity. Emergent evidences suggest that eating more fruits and vegetables with antioxidant properties could help in preventing of several diseases. The blueberry (Vaccinium ashei Reade) fruit is one of the richest sources of antioxidant phytochemicals among fruits and vegetables. This way, we verified the in vitro antioxidant potential of the blueberry extract, which demonstrated a significant DPPH radical and reactive species (RS) scavenger activities. This extract showed high total polyphenol content (558.27 μg GAE/mL). After, this study evaluated the protective role of hydro-alcoholic extract of blueberry on the follicular viability and ovarian oxidative damage induced by sub-chronic cadmium exposure in mice. Mice received CdCl2 (2.5 mg / kg) subcutaneously and blueberry extract (2.5 mg/ kg) orally for 3 weeks (5 days weekly). Animals were euthanized after 24 hours the last administration, and ovaries were removed to determinate the glutathione peroxidase (GPx), glutathione-S-transferase (GST), δ-aminolevulinate dehydratase (δ-ALA-D) and 17 β-dehydrogenase hydroxysteroide (17β-HSD) enzymatic activities, RS levels, cadmium content and the follicles viability. The results demonstrated that animals cadmium-exposed presented a enhance of 2-folds on reactive species levels, reduction in δ-ALA-D and 17β-HSD activities (30 and 39% of reduction, respectively) as well as a decrease around 69% on follicular viability when compared with control group. No alteration was observed on ovarian GPx and GST activities. The therapy was effective in restoring RS levels, δ-ALA-D activity and partially improves the follicles viability altered by sub-chronic cadmium exposure. However, this therapy was not able to restore 17β-HSD activity, which suggest that the protective effect of blueberry is not related to hormonal activity. Thus, we verified that cadmium accumulates in mice ovary after sub-chronic exposure causing damage on this tissue and blueberry hydro-alcoholic extract presents antioxidant properties that could protect, at least in part, ovarian tissue from cadmium toxic effect.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to investigate the influence of different parameters (concentration of solvent, time, temperature and power) in extraction methods (focused microwave, conventional and ultrasound) bioactive compounds in blueberries, seeking higher yield of compounds biativos, antioxidant and antimicrobial activity of the extracts.The extracts were characterized regarding the phenolic compounds, flavonoid and anthocyanins content. The in vitro antioxidant activity was quantified by the methods of DPPH, ABTS, FRAP, and β-carotene, was calculed the IC50 and evaluated the antimicrobial activity.The results for focused microwave extraction generally indicated that the antioxidant activity (FRAP, ABTS and DPPH), total phenolics and total anthocyanins showed a positive linear trend in relation to the extraction temperature, with no significant difference between the solvent concentrations (60 and 80%). The IC50 and β-carotene showed the greatest inhibition at 60°C at solvent concentrations of 60% and 80%, respectively. The flavonoids showed no significant difference in terms of the extraction temperature or the concentration of solvent that was used. No antimicrobial activity was detected in the extracts in relation to the tested microorganisms. In the conventional method of extracting the best extraction conditions for phenolic compounds, flavonoids and anthocyanin employed 60% solvent, 60 minutes at 40ºC; however, the anthocyanins did not suffer any influence from time and temperature. The best results for the antioxidant activity using the DPPH and FRAP methods were obtained with 60% solvent, 30 minutes at 30ºC, and the DPPH was not influenced by temperature. Regarding ABTS+ the best results were reached with 60% solvent, 120 minutes, at 40ºC, while the β-carotene required 80% solvent at 40ºC, regardless of the time. The different extracts tested did not show antimicrobial activity. Ultrasound provided better phenolic extraction conditions, flavonoids and anthocyanins using 60% solvent, 20 minutes and 80 watts of power, and phenolic compounds not influenced by the power and flavonoids were not affected by the solvent. The antioxidant activity by DPPH and IC50 showed the best results com 60% solvent, 60 minutes and 80 W of power, the same conditions were found for β-carotene, but with 20 minutes of extraction. FRAP methodology is presented more efficient solvent 60%, 60 minutes and 220W power, whereas for the ABTS assay was 80% solvent and 80 W of power, independent of the extraction time. The extracts obtained through different methods of extraction showed no antimicrobial activity. However, the study confirms the antioxidant capacity of blueberries, which can be used as a functional ingredient or as a natural antioxidant in the preparation of food products. / Este trabalho teve como objetivo investigar a influência de diferentes parâmetros (concentração de solvente, tempo, temperatura e potência) nos métodos de extração (assistida por micro-ondas focalizada, convencional e por ultrassom) de compostos bioativos de mirtilo, visando maior rendimento dos compostos biativos, atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos. Os extratos foram caracterizados quanto o teor de fenólicos totais, flavonoides totais e antocianinas totais. As atividades antioxidante in vitro foram quantificadas pelos métodos de DPPH, ABTS, FRAP e β-caroteno, foi calculado o IC50 e avaliada a atividade antimicrobiana. Os resultados encontrados para a extração através das micro-ondas focalizadas apontam que as atividades antioxidantes medidas por FRAP, ABTS+ e DPPH, compostos fenólicos totais e antocianinas totais apresentaram uma tendência linear positiva em relação à temperatura de extração, sem diferença significativa entre as concentrações dos solventes (60 e 80%). O IC50 e o β-caroteno apresentaram maior inibição na temperatura de 60°C, porém estes somente nas condições de solvente 60% e 80%, respectivamente. Os flavonóides não tiveram diferenças significativas na temperatura de extração e nem no solvente utilizado. No método convencional de extração as melhores condições de extração para os compostos fenólicos, flavonóides e antocianinas foi utilizando 60% de solvente, 60 minutos e à 40ºC, porém as antocianinas, não sofreram influencia do tempo e da temperatura. O melhores resultados para as atividades antioxidantes, pelos métodos DPPH e FRAP, foram obtidos com solvente 60%, 30 minutos e à 30ºC, sendo que o DPPH não foi influenciado pela temperatura. Para o ABTS+ os melhores rendimentos foram com 60% solvente, 120 minutos e à 40ºC, enquanto que para o β-caroteno, 80% de solvente a 40ºC, independentemente do tempo. O ultrassom proporcionou melhores condições de extração de fenólicos, flavonóides e antocianinas utilizando 60% de solvente, 20 minutos e 80 W de potência, sendo que os compostos fenólicos não sofreram influência da potência e os flavonoides não foram influenciados pelo solvente. A atividade antioxidante pelo método DPPH e o IC50 apresentaram os melhores resultados com 60% de solvente, 60 minutos e 80 W de potência, as mesmas condições foram encontradas para o β-caroteno, porém com 20 minutos de extração. A metodologia de FRAP apresentou-se mais eficiente com solvente 60%, 60 minutos e 220W de potência, enquanto que para o método ABTS+ foi com 80% de solvente e 80 W de potência, independente do tempo de extração. Os extratos obtidos através das diferentes metodologias de extração não apresentaram atividade antimicrobiana. Contudo, o estudo confirma a capacidade antioxidante do mirtilo, podendo este ser utilizado como ingrediente funcional ou como antioxidante natural na elaboração de produtos alimentícios.

O presente estudo teve como objetivos: determinar o teor dos polifenóis: flavonóides e antocianos totais presentes nos extratos de mirtilo (Vaccinium ashei) e amora preta (Rubus sp) por espectrofotometria; desenvolver e validar uma metodologia analítica para a caracterização dos extratos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), identificar, isolar e quantificar os principais compostos; avaliar a atividade anticolinesterásica, antioxidante frente à difenilpicrilhidrazol (DPPH) e anti-quimiotática in vitro; realizar a dosagem de aminas biogênicas no cérebro, investigar as possíveis atividades antinociceptiva, antiinflamatória, antiepiléptica, cognitiva e neuroprotetora do extrato de Vaccinium ashei, e o efeito neuroprotetor de um composto isolado a partir de Rubus: a cianidina, em vários modelos experimentais in vivo, em ratos e camundongos. Os perfis cromatográficos apresentaram compostos comuns às duas amostras; onde foram identificados 4 flavonóides, sendo hiperosídeo, quercitrina e isoquercitrina comuns a ambos extratos, e a rutina confirmada apenas em Rubus. Cinco antocianidinas foram identificadas em Vaccinium: delfinidina, cianidina, petunidina, peonidina e malvidina, e a cianidina em Rubus. Os resultados demonstraram, diferenças nas quantidades totais de polifenóis, flavonóides e antocianos. Todos os extratos, apresentaram atividade seqüestradora do radical DPPH in vitro. A atividade antiquimiotática in vitro foi comprovada para a fração flavonoídica. Os ensaios biológicos realizados in vivo demonstraram que o extrato preparado a partir de uma mistura de diferentes cultivares de Vaccinium ashei apresentou efeitos antinociceptivos nos testes da formalina sub-plantar, contorções abdominais, placa quente e tail flick. Produziu também efeito neuroprotetor, avaliado pelo ensaio cometa e pelo método de TOSC. Também causou aumento da atividade locomotora, assim como exerceu um efeito ansiolítico em roedores adultos. Facilitou a memória de curta duração e a Memória de longa duração e produziu um aumento de 5-HT no estriado e hipocampo de ratos adultos. Foi observado também que a cianidina isolada exerceu atividade neuroprotetora conforme avaliado pelo método de TOSC em ratos adultos. Não foram observadas diferenças significativas no modelo de epilepsia, entre o grupo tratado e o grupo controle, assim como não foram detectadas alterações no sistema dopaminérgico. Em síntese, os dados analisados em conjunto, permitem sugerir que o extrato de Vaccinium ashei e compostos isolados a partir de Rubus sp., como a cianidina, apresentam importante efeito neuroprotetivo, antinociceptivo e cognitivo, e nesta ação está envolvida a participação direta ou indireta dos receptores serotonérgico, acetilcolinérgicos, opióides e de citocinas pró-inflamatórias. Neste sentido, foram obtidos avanços significativos acerca dos mecanismos de ação de ambos gêneros o que torna o seu extrato e seus princípios ativos interessantes para o aproveitamento e desenvolvimento de novos alimentos funcionais e/ou nutracêuticos. / The objectives of this study were: comparing total phenolics, total anthocyanins and antioxidant capacity in appropriate berry samples from selected cultivars of the Vaccinium ashei and Rubus. A reliable HPLC procedure for determining the profile, quantifying and isolating of major compounds present in the extracts have been developed. The potential effects of the extracts were observed by chemotaxis assay, by acetilcholinesterasic inhibition, and their antioxidant properties evaluated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) in vitro. Otherwise, we examined the antinociceptive, antiinflammatory, cognitive, anti-epileptic and neuroprotective effects of the extract of Vaccinium ashei in several experimental models in vivo, as well as biogenic amine concentration, in specific brain regions in rats and mice. In addition, it was tested the efficacy of oral administration of cyanidin-3-glucoside extracted from Rubus sp. in lipid peroxidation in brain rats (TOSC). An HPLC method for the analysis of anthocyanidins and flavonoids in berries extracts have been developed. The data obtained show that various compounds are common in the fruits analyzed, and four flavonoids were identified: hyperoside, quercetrin and isoquercitrin occurring in both fruits, and rutin occurring only in Rubus. Five anthocyanidins were identified in Vaccinium: delphinidin, cyanidin, peonidin, petunidin, and malvidin, and in Rubus cyanidin 3-glucoside was the major anthocyanin. We found that the flavonoids fractions significantly have inhibited migration celullar and acetilcholynestarase, and both total extract and fractions exhibited strong antioxidant activity. The extract (a mixture from the different cultivars) significantly enhanced short and long-term memory in the inhibitory avoidance task, induced an increase in the number of crossings during open field habituation, and had an anxiolytic effect in the elevated plus-maze task. These processes are accompanied by alterations in serotonin (5-HT) in the striatum, and the hippocampus. Cyanidin 3-glucoside isolated significantly reduced lipid peroxidation in hippocampal tissue in rats. In conclusion, the data from the current study show that the Vaccinum extract produce an important neuroprotective, cognitive and antinociceptive effect, which could be related with a direct or indirect interaction with the serotonergic, cholinergic, opioids receptors and pro-inflammatory cytokines. On the other hand, the extract don’t have protected the pentilenotetrazole-induced convulsions in mice, or influenced the memory retention in old rats when accessed in the step-down inhibitory avoidance, and showed no anxiolytic action in an elevated plus maze. The Vaccinium ashei extract did not alter locomotor activity, and the dopamine concentration in adult or old rats.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The chemical profile of a fermented product depends upon the raw basic material and the fermentative microbiota. The yeast microbiota is responsible for fermentation and contributes to fermented product aroma by several mechanisms. The study of this microbiota is relevant because the microorganisms utilize the constituents of the raw basic material and transform them into aroma or flavour impacting components. Autochthonous yeasts belonging to the blueberry microbiota of two different cultivars, Florida M and Climax, were investigated by analyzing the fermentative capacity, the hydrogen sulfide (H2S) production, the film-forming ability, killer feature, sensitivity and neutrality to killer factor. Three methods employed to distinguish autochthonous yeast species were used: MALDI-TOF MS, PCR and PCR-RFLP of ITS region of rRNA gene and, if necessary, genetic sequencing of the D1/D2 26S rRNA region. The species Hanseniaspora uvarum, Hanseniaspora opuntiae, Candida sorboxylosa, Metschnikovia kunwiensis, Candida bentonensis, Candida oleophila/Candida railenesis and Candida quercitrusa were found on the surface of Florida M. Hanseniaspora uvarum, Issatchenkia terricola, Candida sorboxylosa, Candida asiatica, Candida oleophila/railenensis, Issatchenkia hanoiensis and Kazachstania intestinalis were of berries of Climax variety. Only three species were found in both varieties: H. uvarum, C. sorboxylosa and C. oleophila/railenensis. The species H. uvarum was the predominant in both cultivars, representing 70.4% and 78% of yeasts isolated from the surface of the Florida M and Climax, respectively. The killer feature was not detected in any strain isolated from Florida M. From strains isolated from Climax, only one strain C. asiatica 133 MCMCF/14 was killer against the 26B. Moreover, the K. intestinalis 91 MCMCF/14 was the only sensitive when tested against both the patterns killer S. cerevisiae K1 (Lallemand), EMBRAPA 1B, EMBRAPA 91B and the killer yeast C. asiatica 133 MCMCF/14. All strains showed low fermentative capacity and all of them were non-Saccharomyces yeasts. All yeasts isolated from Florida M produced H2S. Only four strains from Climax did not produce H2S. The highest evolution of H2S was observed with the genus Issatchenkia and with the majority strains of C. sorboxylosa. The species C. oleophila/C. railenensis showed low production of this parameter. The fermentation process of fermented products from blueberries of both Florida and Climax can be severely affected by this kind of autochthonous yeasts. / O perfil químico de um produto fermentado depende da matéria prima de base e da microbiota que participam do processo fermentativo. No presente estudo, leveduras pertencentes à microbiota do mirtilo foram investigadas, isolando-se estes micro-organismos da superfície de duas diferentes cultivares de mirtilo, Florida M e Climax. Foram avaliadas a capacidade fermentativa, produção de sulfeto de hidrogênio (H2S), formação de filme, característica killer, sensibilidade e neutralidade a este fator. Três metodologias para identificação foram empregadas: espectrometria de massas MALDI-TOF, análise da região ITS do gene rRNA por PCR-RFLP e, quando necessário, sequenciamento genético da região D1/D2 do 26S do gene rRNA. A cultivar Florida M apresentou em sua superfície as espécies Hanseniaspora uvarum, Hanseniaspora opuntiae, Candida sorboxylosa, Metschnikovia kunwiensis, Candida bentonensis, Candida oleophila/Candida railenensis e Candida quercitrusa. Na cultivar Climax, foram encontradas as espécies Hanseniaspora uvarum, Issatchenkia terricola, Candida sorboxylosa, Candida asiatica, Candida oleophila/Candida railenesis, Issatchenkia hanoiensis e Kazachstania intestinalis. Apenas três espécies foram comuns as duas cultivares, sendo elas H. uvarum, C. sorboxylosa, Candida oleophila/Candida railenesis. H. uvarum foi a espécie predominante em ambas cultivares, representando 70,4% e 78% do total de leveduras isoladas da cv. Florida M e Climax, respectivamente. A característica killer não foi detectada em nenhuma linhagem isolada da cv. Florida M. Na cv. Climax, apenas a linhagem C. asiatica 133 MCMCF/14 se comportou como killer. A linhagem K. intestinalis 91 MCMCF/14 foi a única que demonstrou sensibilidade em relação a todas as linhagens killer padrão K1 (Lallemand), EMBRAPA 1B, EMBRAPA 91B. Esta mesma linhagem se mostrou sensível também à linhagem isolada da cultivar Climax C. asiatica 133 MCMCF/14. Todas as linhagens isoladas de ambas cultivares apresentaram baixa capacidade fermentativa e todas elas foram identificadas como sendo não-Saccharomyces. Houve de moderada a alta produção de H2S em 21 e 34% nas linhagens isoladas das cultivares Florida M e Climax, respectivamente. A produção máxima de H2S se destacou principalmente em linhagens das espécies I. terricola e C. sorboxylosa. A maioria das linhagens de leveduras da espécie C. oleophila/C. railenensis apresentaram baixa produção deste gás. O processo de produção de fermentados de mirtilo tanto da cultivar Florida M como da cultivar Climax pode ser severamente afetado por este tipo de leveduras autóctones.

O presente estudo teve como objetivos: determinar o teor dos polifenóis: flavonóides e antocianos totais presentes nos extratos de mirtilo (Vaccinium ashei) e amora preta (Rubus sp) por espectrofotometria; desenvolver e validar uma metodologia analítica para a caracterização dos extratos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), identificar, isolar e quantificar os principais compostos; avaliar a atividade anticolinesterásica, antioxidante frente à difenilpicrilhidrazol (DPPH) e anti-quimiotática in vitro; realizar a dosagem de aminas biogênicas no cérebro, investigar as possíveis atividades antinociceptiva, antiinflamatória, antiepiléptica, cognitiva e neuroprotetora do extrato de Vaccinium ashei, e o efeito neuroprotetor de um composto isolado a partir de Rubus: a cianidina, em vários modelos experimentais in vivo, em ratos e camundongos. Os perfis cromatográficos apresentaram compostos comuns às duas amostras; onde foram identificados 4 flavonóides, sendo hiperosídeo, quercitrina e isoquercitrina comuns a ambos extratos, e a rutina confirmada apenas em Rubus. Cinco antocianidinas foram identificadas em Vaccinium: delfinidina, cianidina, petunidina, peonidina e malvidina, e a cianidina em Rubus. Os resultados demonstraram, diferenças nas quantidades totais de polifenóis, flavonóides e antocianos. Todos os extratos, apresentaram atividade seqüestradora do radical DPPH in vitro. A atividade antiquimiotática in vitro foi comprovada para a fração flavonoídica. Os ensaios biológicos realizados in vivo demonstraram que o extrato preparado a partir de uma mistura de diferentes cultivares de Vaccinium ashei apresentou efeitos antinociceptivos nos testes da formalina sub-plantar, contorções abdominais, placa quente e tail flick. Produziu também efeito neuroprotetor, avaliado pelo ensaio cometa e pelo método de TOSC. Também causou aumento da atividade locomotora, assim como exerceu um efeito ansiolítico em roedores adultos. Facilitou a memória de curta duração e a Memória de longa duração e produziu um aumento de 5-HT no estriado e hipocampo de ratos adultos. Foi observado também que a cianidina isolada exerceu atividade neuroprotetora conforme avaliado pelo método de TOSC em ratos adultos. Não foram observadas diferenças significativas no modelo de epilepsia, entre o grupo tratado e o grupo controle, assim como não foram detectadas alterações no sistema dopaminérgico. Em síntese, os dados analisados em conjunto, permitem sugerir que o extrato de Vaccinium ashei e compostos isolados a partir de Rubus sp., como a cianidina, apresentam importante efeito neuroprotetivo, antinociceptivo e cognitivo, e nesta ação está envolvida a participação direta ou indireta dos receptores serotonérgico, acetilcolinérgicos, opióides e de citocinas pró-inflamatórias. Neste sentido, foram obtidos avanços significativos acerca dos mecanismos de ação de ambos gêneros o que torna o seu extrato e seus princípios ativos interessantes para o aproveitamento e desenvolvimento de novos alimentos funcionais e/ou nutracêuticos. / The objectives of this study were: comparing total phenolics, total anthocyanins and antioxidant capacity in appropriate berry samples from selected cultivars of the Vaccinium ashei and Rubus. A reliable HPLC procedure for determining the profile, quantifying and isolating of major compounds present in the extracts have been developed. The potential effects of the extracts were observed by chemotaxis assay, by acetilcholinesterasic inhibition, and their antioxidant properties evaluated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) in vitro. Otherwise, we examined the antinociceptive, antiinflammatory, cognitive, anti-epileptic and neuroprotective effects of the extract of Vaccinium ashei in several experimental models in vivo, as well as biogenic amine concentration, in specific brain regions in rats and mice. In addition, it was tested the efficacy of oral administration of cyanidin-3-glucoside extracted from Rubus sp. in lipid peroxidation in brain rats (TOSC). An HPLC method for the analysis of anthocyanidins and flavonoids in berries extracts have been developed. The data obtained show that various compounds are common in the fruits analyzed, and four flavonoids were identified: hyperoside, quercetrin and isoquercitrin occurring in both fruits, and rutin occurring only in Rubus. Five anthocyanidins were identified in Vaccinium: delphinidin, cyanidin, peonidin, petunidin, and malvidin, and in Rubus cyanidin 3-glucoside was the major anthocyanin. We found that the flavonoids fractions significantly have inhibited migration celullar and acetilcholynestarase, and both total extract and fractions exhibited strong antioxidant activity. The extract (a mixture from the different cultivars) significantly enhanced short and long-term memory in the inhibitory avoidance task, induced an increase in the number of crossings during open field habituation, and had an anxiolytic effect in the elevated plus-maze task. These processes are accompanied by alterations in serotonin (5-HT) in the striatum, and the hippocampus. Cyanidin 3-glucoside isolated significantly reduced lipid peroxidation in hippocampal tissue in rats. In conclusion, the data from the current study show that the Vaccinum extract produce an important neuroprotective, cognitive and antinociceptive effect, which could be related with a direct or indirect interaction with the serotonergic, cholinergic, opioids receptors and pro-inflammatory cytokines. On the other hand, the extract don’t have protected the pentilenotetrazole-induced convulsions in mice, or influenced the memory retention in old rats when accessed in the step-down inhibitory avoidance, and showed no anxiolytic action in an elevated plus maze. The Vaccinium ashei extract did not alter locomotor activity, and the dopamine concentration in adult or old rats.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:25:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ Tania_Regina_Pelizza.pdf: 1759590 bytes, checksum: b5a9c36983f13efd79f7249a3d65731b (MD5) Previous issue date: 2009-12-14 / The present study aimed to group several aspects related to blueberry propagation (Vaccinium spp). Therefore, the trial was separated into five chapters. The first chapter investigated the ex vitro rooting of blueberry cultivars (Bluebelle, Woodard and Georgiagem) in the substrates (Plantmax®; Plantmax® + old saw (1:1); old saw; Plantmax® + vermiculite (1:1) and vermiculite. It was evaluated the percentage of rooting, callus formation, surviving explants, length and number of roots, length of the largest root, height of explants, number of shoots and total fresh mass. In the second chapter it was studied the process of acclimatization and growth of micropropagated blueberry plants cultivar Climax by using different substrates (carbonized rice hull + Húmus Fértil®, Plantmax® + vermiculite and soil + young saw of pinus) and two covering systems (with or without plastic covering on plants). The trial was assessed during 210 days. In this work it was evaluated the surviving percentage, increment of height, fresh and dry biomass of the aerial part and root of the plants. The third chapter investigates the microcuttings process of the blueberry Climax by comparing different substrates (Plantmax® + carbonized rice rusks (1:1); Húmus Fértil® and Vermicompound of cattle) and two types of microcuttings (median and apical). It was evaluated the rooting percentage, surviving, callus formation, number and length of roots, length of the largest root, number of leaves and shoots. The effect of phytorregulators Benzylaminopurine (BAP) and gibberellins (GA3) in different concentrations (control, 250mg/L of BAP, 250mg/L of BAP + 250mg/L of GA3) on growth of minicuttings O neal at five evaluations (0, 30, 60, 90 and 120 days) is assessed in the fourth chapter. It was measured: minicuttings height, number of leaves, number and mean length of lateral shoots. And, the fifth chapter evaluated the growth of micropropagated blueberry plants cultivar Georgiagem, using different concentrations of GA3 (0, 50, 100 and 150 mg/L) regarding period (0, 30 and 60 days). It was measured: plant height, number and mean length of shoots, fresh and dry biomass of aerial part and root. The best substrates for ex vitro rooting of blueberry explants were vermiculite and old saw. Among cultivars, Bluebelle and Woodard showed the greatest results. The substrate and covering system indicated for acclimatization and growth of blueberry plants Climax are Plantmax® + carbonized rice hull without plastic covering. Median microcuttings promoted better results for rooting of the blueberry Climax . The combination of Plantmax® + carbonized rice rusks is the best substrate for microcutting rooting of blueberry. The phytoregulators BAP + GA3 showed similar behavior to the control treatment regarding mean length of shoot and number of leaves. The growth in height and shoots number of the blueberry minicuttings O Neal increased by time and are independent of the use of phytoregulator. Blueberry plants Georgiagem positively responds to gibberellins action, mainly the aerial part of the plant. The concentration at 50mg L-1 de GA3 is sufficient to obtain blueberry plant response regarding growth. / presente estudo teve por objetivo abordar vários aspectos relacionados à propagação do mirtileiro (Vaccinium spp). Para isso, os trabalhos foram divididos em cinco capítulos, sendo no primeiro capítulo abordado o enraizamento ex vitro de (três) cultivares de mirtileiro (Bluebelle, Woodard e Georgiagem) (em cinco diferentes) nos substratos Plantmax®; Plantmax® + serragem curtida (1:1); serragem curtida; Plantmax® + vermiculita (1:1) e vermiculita. Foi avaliada a percentagem de enraizamento, formação de calo, explantes sobreviventes, comprimento e número de raízes, comprimento da maior raiz, altura dos explantes, número de brotações e massa fresca total. No segundo capítulo é abordado o processo de aclimatização e crescimento de plantas micropropagadas de mirtileiro da cultivar Climax com o uso de diferentes substratos (casca de arroz carbonizada + Húmus Fértil®, Plantmax® + vermiculita e solo + serragem jovem de pinus) com o uso de dois sistemas de cobertura (com e sem cobertura plástica sobre as plantas) avaliado ao longo de 210 dias. Neste trabalho foi avaliada a percentagem de sobrevivência, o incremento de altura, a biomassa fresca e seca da parte aérea e do sistema radicular das plantas. O terceiro capítulo aborda o processo da microestaquia de mirtileiro Climax comparando substratos (Plantmax® + casca de arroz carbonizada (1:1); Húmus Fértil® e Vermicomposto Bovino) e duas porções do ramo (mediana e apical). Foi avaliada a percentagem de enraizamento, sobrevivência, formação de calo, número e comprimento médio de raízes, comprimento da maior raiz, número médio de folhas e de brotações. O uso de fitorreguladores benzilaminopurina (BAP) e giberelina (GA3) em diferentes concentrações (testemunha sem reguladores, 250 mg/L de BAP, 250 mg L-1 de BAP + 250 mg L-1 de GA3), no crescimento de miniestacas de O Neal em cinco tempos de avaliação (0, 30, 60, 90 e 120 dias) é abordado no quarto capítulo. Foi avaliada a altura das miniestacas, número de folhas, número e comprimento médio de brotações laterais. A seguir aborda-se o crescimento de plantas micropropagadas de mirtileiro Georgiagem com o uso de diferentes concentrações de GA3 (0, 50, 100 e 150 mg L-1) em função do tempo (0, 30 e 60 dias) onde foi avaliada a altura de planta, número e comprimento médio de brotações, biomassa verde e seca da parte aérea e da raiz. Os melhores substratos para enraizamento ex vitro de explantes de mirtileiro foram vermiculita e serragem curtida. Dentre as cultivares, Bluebelle e Woodard apresentaram melhores resultados. O substrato e sistema de cobertura indicados para a aclimatização e o crescimento de plantas de mirtileiro Climax são Plantmax® + vermiculita sem cobertura plástica. Microestacas medianas proporcionaram melhores resultados para o enraizamento de mirtileiro Climax . A combinação de Plantmax® + casca de arroz carbonizada é (mostrou ser) o melhor substrato para enraizamento de microestacas de mirtileiro. Os fitorreguladores BAP + GA3 apresentaram respostas iguais à testemunha quanto ao comprimento médio de brotações e número de folhas. O crescimento em altura e o número de brotações das miniestacas de mirtileiro O Neal aumentaram com o tempo e foram independentes do uso de fitorregulador. Plantas de mirtileiro Georgiagem respondem positivamente à ação da giberelina, sendo que está se dá principalmente sobre a parte aérea da planta. A concentração de 50 mg L-1 de GA3 é suficiente para obter resposta das plantas de mirtileiro quanto ao seu crescimento.

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Tais ocorrências tendem a gerar um desequilíbrio bioquímico no organismo denominado de estresse oxidativo, que se caracteriza por uma produção exacerbada de radicais livres, e que tem sido associado ao desenvolvimento das chamadas doenças crônicas não transmissíveis. Diante das potencialidades funcionais antioxidantes do arroz parboilizado e do mirtilo como coadjuvantes na prevenção e manutenção de um equilíbrio oxidativo no organismo, o que reflete na prevenção de diversas patologias, no presente estudo objetivou-se analisar a eficiência nutricional e funcional de arroz parboilizado e mirtilo bem como avaliar seu potencial antioxidante em um modelo animal submetido a um protocolo de estresse. Para tanto, o trabalho foi estruturado em três estudos, desenvolvidos da seguinte forma: experimento I, II e III. No experimento I foram caracterizadas duas variedades de mirtilo (Misty e O’Neal) determinando a composição bromatológica dos frutos, antocianinas totais, compostos fenólicos totais e individuais, atividade antioxidante por DPPH, ABTS e FRAP. No experimento II foram avaliadas as respostas biológicas de ratos wistar machos adultos, cepa UFPEL, submetidos a um protocolo de estresse por contenção, alimentados com dietas normocalóricas, recebendo 1ml de extrato de mirtilo (41,66% fruta) através de gavagem para cada 200g de peso do animal. No experimento III foram avaliados a eficiência nutricional e funcional da mistura de arroz parboilizado e mirtilo através de ensaio biológico com ratos wistar machos adultos, cepa UFPEL, submetidos a um protocolo de estresse por contenção, alimentados com dieta desenvolvida com arroz parboilizado e mirtilo O`Neal, administrados sob a forma de ração. Com os resultados do estudo I foi possível concluir que a variedade de mirtilo Misty destacou-se apresentando maior teor de fenóis totais, bem como apresentou uma maior capacidade antioxidante nos diferentes métodos. No estudo II, o fator estresse refletiu em uma menor deposição de peso em especial nos animais que consumiram mirtilo O’Neal, resultado acompanhado de um consumo de ração similar ao grupo que recebeu mirtilo Misty, concomitante a uma menor deposição de gordura epididimal. O mirtilo O’Neal, se mostrou efetivo na redução dos níveis de glicose. A expressão de superóxido dismutase (SOD) foi menor na região hipotalâmica, inferindo que o antioxidante se mostrou ativo na linha de defesa. Nosso estudo ponderou que a exposição ao protocolo de estresse por contenção aumentou a enzima superóxido dismutase, sendo sua expressão significativamente maior quando comparado com a testemunha. Em contrapartida a exposição ao estresse diminuiu a Glutationa peroxidase. A atividade da enzima catalase no córtex foi significativamente aumentada nos grupos não submetidos ao protocolo de estresse, que receberam extrato aquoso de mirtilo. Seguido de maior expressão nos animais que receberam extrato aquoso de mirtilo da variedade Misty. O estudo III nos inferiu que: O estresse por contenção, o consumo de arroz parboilizado e mirtilo O´Neal administrados separados induz ao menor ganho de peso. Concomitante o consumo de alimentos foi diferente de acordo com a dieta administrada dentro do grupo de animais estressados,sendo que os que consumiram dieta AP e dieta APM exibiram um maior consumo alimentar. A deposição de gordura epididimal foi significativamente maior no grupo que recebeu a ração APM independente do fator estresse. Os animais que receberam dieta MO depositaram menos gordura epididimal, em relação a testemunha e 30,4% menos de gordura epididimal quando comparado a dieta AP. Quando comparadas as dietas dentro dos diferentes níveis de estresse, os animais submetidos ao estresse por contenção independente da dieta recebida demonstraram aumento dos níveis de glicose, sendo apenas o aumento nos animais que receberam a dieta AP. / The global progress that has occurred in the last century in the various areas has had a direct impact on the routine of individuals, generating an expressive number of stressed people who have adopted erroneous eating habits. Such occurrences tend to generate a biochemical imbalance in the so-called oxidative stress system, which is characterized by an exacerbated production of free radicals, and has been associated with the development of so-called non-transmissible chronic diseases. In view of the functional antioxidant potentials of parboiled rice and blueberry as a coadjuvant in the prevention and maintenance of an oxidative balance in the body, which reflects in the prevention of several pathologies, the present study aimed to analyze the nutritional and functional efficiency of parboiled rice and blueberry As well as to evaluate its antioxidant potential in an animal model submitted to a stress protocol. For this, the work was structured in three studies, developed as follows: experiment I, II and III. In the experiment I were characterized two varieties of blueberry (Misty and O'Neal) determining the bromatological composition of the fruits, total anthocyanins, total and individual phenolic compounds, antioxidant activity by DPPH, ABTS and FRAP. In the experiment II, the biological responses of adult male wistar rats, strain UFPEL, submitted to a contention stress protocol, fed with normocaloric diets, were evaluated, receiving 1ml of blueberry extract (41.66% fruit) through gavage for each 200g Weight of the animal. In the experiment III the nutritional and functional efficiency of the mixture of parboiled and blueberry rice were evaluated through biological assay with adult male wistar rats, strain UFPEL, submitted to a contention stress protocol, fed with a diet developed with parboiled rice and blueberry O` Neal, administered as a feed. With the results of the study I it was possible to conclude that the blueberry variety Misty stood out presenting higher total phenol content, as well as presented a greater antioxidant capacity in the different methods. In study II, the stress factor reflected in a lower weight deposition, especially in the animals that consumed blueberry O'Neal, a result accompanied by a feed intake similar to the group that received blueberry Misty, concomitant to a lower deposition of epididymal fat. O'Neal blueberry was shown to be effective in reducing glucose levels. The expression of superoxide dismutase (SOD) was lower in the hypothalamic region, inferring that the antioxidant was active in the line of defense. Our study considered that the exposure to the protocol of contention stress increased the enzyme superoxide dismutase, being its expression significantly greater when compared with the control. In contrast, exposure to stress decreased Glutathione peroxidase. The activity of the catalase enzyme in the cortex was significantly increased in the groups not submitted to the stress protocol, which received aqueous extract of blueberry. This was followed by greater expression in the animals that received aqueous blueberry extract of the Misty variety. Study III inferred that: Containment stress, consumption of parboiled rice and O'Neal bilberry administered separately induces the lowest weight gain. Concomitant consumption of food was different according to the diet administered within the group of stressed animals, and those who consumed AP diet and APM diet exhibited a higher food intake. The deposition of epididymal fat was significantly higher in the group that received the APM ration independent of the stress factor. The animals that received an OM diet had less epididymal fat compared to controls and 30.4% less epididymal fat when compared to the AP diet. When comparing the diets within the different stress levels, the animals submitted to stress by independent containment of the received diet showed an increase in the glucose levels, being only the increase in the animals that received the AP diet.