Orientadores: Anibal E. Vercesi, Helena Coutinho F. de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:06:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alberici_LucianeCarla_M.pdf: 3634932 bytes, checksum: 7f2907392bf75e9d1b5a14672e665945 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Elevados níveis de triglicérides são uma característica comum na aterosclerose, obesidade, diabetes, alcoolismo, estresse e infecções. Uma vez que a mitocôndria tem sido implicada na morte celular diante de uma variedade de desordens metabólicas, neste trabalho examinamos as funções mitocondriais em camundongos transgênicos hipertrigliceridêmicos. A hipertrigliceridemia aumentou a respiração de repouso e aumentou a predisposição à transição de permeabilidade mitocondrial (TPM). A terapia com ciprofibrato reduziu os níveis plasmáticos de triglicérides, normalizou a respiração e a TPM. A respiração de repouso na mitocôndria do animal transgênico permaneceu elevada na presença de carboxitractilozídeo (inibidor do translocador de nucleotídeos de adenina), BSA (quelante de ácidos graxos) e de GDP (inibidor de UCPs). O conteúdo de UCPs foi similar em ambas as mitocôndrias de animais controles e transgênicos. Nós propomos que a rápida respiração de repouso representa uma adaptação regulada para oxidar o excesso de AGL em mitocôndrias dos camundongos transgênicos / Abstract: High plasma leveI of triglycerides is a common feature in atherosclerosis, obesity, diabetes, alcoholism, stress and infection. Since mitochondria have been implicated in cell death under a variety of metabolic disorders, we examined liver mitochondrial functions in hypertriglyceridemic transgenic mice. Hypertriglyceridemia increased resting respiration and predisposed to mitochondrial permeability transition (MPT). Ciprofibrate therapy reduced plasma triglyceride levels, normalized respiration and prevented MPT. The higher resting respiration in transgenic mitochondria remained in the presence of the adenine nucleotide carrier inhibitor, carboxyatractyloside, BSA and the UCPs inhibitor, GDP. UCP2 content was similar in both control and transgenic mitochondria. We propose that faster resting respiration represents a regulated adaptation to oxidize excess ftee fatty acid in the transgenic mice / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Edi Lucia Sartorato, Andrea T. Maciel Guerra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:24:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brianti_MitsueTaukeuti_M.pdf: 3392678 bytes, checksum: 88dc15b47c9245c79d493f2070d20835 (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientadores: Roger Frigerio Castilho, Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:12:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maciel_EveliseNeves_D.pdf: 7570947 bytes, checksum: a2bcb8b26411e9cea4c1f4afb5255b6a (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A permeabilidade mitocondrial transitória (PMT) tem sido implicada na morte celular em diversos modelos de desordens neurodegenerativas, incluindo hipoglicemia, isquemia e trauma cerebral. No presente trabalho, estudamos a PMT em mitocôndrias isoladas de cérebro de rato. A PMT induzida por Ca2+ foi estimulada por Na+ e prevenida pela combinação de ADP e ciclosporina A (CsA), inibidores da PMT. EGTA, um quelante de Ca2+,ou a inibição da captação de Ca2+por vermelho de rutênio, revertem parcialmente a dissipação do potencial de membrana mitocondrial associada à PMT. Esta foi significantemente inibida por catalase, indicando a participação de espécies reativas de oxigênio (EROs) neste processo. Pela detecção de EROs por meio da oxidação do marcador diclorodihidrofluoresceína(H2DCF), observamos um aumento de EROs após a captação de Ca2+pela mitocôndria;este aumento de produção de EROs foi estimuladopor Na+ e totalmente revertido pela adição de ADP e CsA, indicando que a PMT promove estresse oxidativo mitocondrial. Este processo pode ser, em parte, explicado pela depleção de NAD(P)H na indução da PMT induzida por Ca2+,em mitocôndrias de cérebro de rato. Sabe-se que NADPH mantém a função antioxidante dos sistemas glutationa redutase/peroxidase e tioredoxina redutase/peroxidase. Além disto, a PMT está associada com a peroxidação lipídica de membrana. Estes resultados indicam que a PMT, decorrente do aumento de EROs induzido por Ca2+em mitocôndrias isoladas de cérebro, leva a danos oxidativos secundários, como a peroxidação lipídica. Para estudar o envolvimento da PMT e proteínas Bcl-2 na excitotoxicidade mediada pelo receptor de glutamato N-metil-D-aspartado (NMDA), foram realizadas em camundongos transgênicos que hiperexpressam Bcl-2 e em ratos, injeções intra-estriatais de ácido quinolínico, um agonista específico deste receptor. O ácido quinolínico causou uma degeneração de aproximadamente 50% do volume estriatal em ratos e camundongos. Camundongos transgênicos que hiperexpressam a proteína Bcl-2, uma proteína que inibe estímulos apoptóticos, e o tratamento de ratos com CsA não mostraram redução da toxicidade ao ácido quinolínico. Mitocôndrias isoladas de cérebro de ratos tratados com CsA mostraram resistência à indução de permeabilização induzida por Ca2+, indicando proteção contra a PMT. Concluímos que a excitotoxicidade estriatal mediada por ácido quinolíniconão é dependente da PMT e da morte celular por apoptose, sensívela Bcl-2. Mudanças na integridade mitocondrial, liberação de ERas e homeostase de Ca2+ estão envolvidas na patogênese de várias desordens neurológicas, incluindo a acidemia metilmalônica e a doença de Huntington (HD). Estas desordens neurodegenerativas cursam com inibição parcial do complexo II da cadeia respiratória itocondrial.Neste trabalho, nós estudamos os mecanismos pelos quais os inibidores do complexo 11 da cadeia respiratória, malonato (MA), metilmalonato (MMA) e 3-nitropropionato (3-NP) afetam a função mitocondrial e a sobrevivência neuronal in vitro. Observou-se que estes três inibidores, em concentrações que inibem aproximadamente 50% a respiração, induzem permeabilização mitocondrial quando na presença de concentrações micromolares de ci+. ADP, CsA e catalase preveniram este efeito, indicando que é mediado por ERas e PMT.Os efeitos de MA, MMA e 3-NP também foram observados em mitocôndrias isoladas de figado e rim, mas necessitaram uma maior inibição respiratória. Em cérebro, a PMT promovida por inibidores do complexo II foi estimulada pelo aumento da captação/liberação de Ca2+ mitocondrial e foi inibida quando a mitocôndria foi précarregada com Ca2+ou a entrada de Ca2+na matriz mitocondrial foi somente passiva. Em adição aos experimentos com mitocôndrias isoladas, o efeito de MMA também foi estudado em cultura de células PC12 e fatias de estriado de ratos adultos. MMA promoveu morte celular nas fatias de estriado e cultura de células PC12, num mecanismo sensível à CsA e bongkrekato, e não diretamente relacionado à inibição respiratória. Conclui-se que, em condições em que o complexo II da cadeia respiratória mitocondrial está parcialmente inibidano sistema nervoso central, a morte neuronal envolve a participação da PMT / Abstract: Mitochondrial permeability transition (MPT) may be involved in several central nervous system disorders including ischemic and hypoglicemic neuronal death. In this study, we show that Ca2+-induced brain mitochondrial PT was stimulated by Na+ and tota1ly prevented by the combination of ADP and cyclosporinA (CsA). Removal of Ca2+ITom the mitochondria suspension by EGTA or inhibition of Ca2+uptake by ruthenium red partia1ly reverted the dissipation ofthe membrane potential associated with PT. Ca2+-inducedbrain mitochondrial PT was significant1yinhibited by catalase, indicating the participation of reactive oxygen species (ROS) in this processoAn increased detection of ROS, measured through dichlorodihydrotluorescein oxidation, was observed after mitochondrial Ca2+ uptake. Ca2+-induced dichlorodihydrotluorescein oxidation was enhanced by Na+ and prevented by ADP and CsA, indicating that PT enhances mitochondrial oxidative stress. This could be at least in part a consequence of the extensive depletion in NAD(p)H that accompanied Ca2+-inducedbrain mitochondrial PT. NADPH is known to maintain the antioxidant function of the glutathione reductase/peroxidase and thioredoxin reductase/peroxidase systems. In addition, the occurrence of mitochondrial PT was associated with membrane lipid peroxidation. Our results showed that PT further increases Ca2+-inducedoxidative stress in brain mitochondrialleading to secundary damage such as lipid peroxidation. We studied the participation of PT and the Bcl-2-sensitive apoptotic cell death pathway in glutamate receptor-mediated excitotoxicity. Intrastriatal infusions of the N-methyl-Daspartate (NMDA) receptor agonist quinolinic acid caused massive striatal neurodegeneration in both rats and mice. Interestingly, transgenic mice overexpressing human Bcl-2 and rats systemica1lytreated with CsA did not exhibit reduced sensitivity to quinolinic acid-induced striatal toxicity. In addition, isolated brain mitochondrial ITom CsA-treated rats showed resistance to Ca2+-induceddissipation ofthe membrane potential, indicating protection against PT. We conclude that quinolinic acid-mediated striatal excitotoxicity is not dependent on PT and Bcl-2-sensitiveapoptotic cell death pathways. Changes in mitochondrial integrity, reactive oxygen species release and Ca2+handling are proposed to be involved in the pathogenesis of many neurological disorders including methy1malonic acidemia and Huntington's disease (HD), which exhibit partial mitochondrial complex II inhibition. We studied the mechanisms by which the respiratory chain complex II inhibitors malonate (MA), methyl-malonate (MIMA) and 3- nitropropionate (3-NP) affect mitochondrial function and neuronal survival. We observed that all three inhibitors, at concentrations which inhibit respiration by 50%, induced mitochondrial permeabilization when in the presence of low Ca2+ concentrations. ADP, CsA and catalase prevented this effect, indicating it is mediated by ROS and PT. The effects of MA, MMA and 3-NP were also present in mitochondria isolated ftom liver and kidney, but required more significant respiratory inhibition. In brain, PT promoted by complex II inhIoitors was stimulated by increasing Ca2+ cycling and absent when mitochondria were pre-Ioaded with Ca2+or when only passive Ca2+uptake was present. In addition to the experiments on isolated mitochondria, we determined the effect ofMMA on cultured neural cells model and fteshly prepared brain slices. MMA promoted cell death in striatal slices and PC12 cells, in a manner attenuated by CsA and bongkrekate and unrelated to direct respiratory inhibition. We propose that under conditions in which complex 11is partially inhibited in the central nervous system, neuronal cell death involves the inductionofM PT / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Roger Frigerio Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sousa_SolangeCarvalhode_D.pdf: 8647096 bytes, checksum: 0aa4779081afe1b1db010e8af36ac579 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Concentrações micromolares de Ca2+ (>10 uM)estimularam fortemente a liberação de espécies reativas de oxigênio (EROs) em mitocôndrias isoladas de cérebro de rato tratadas com rotenona. O estímulo proporcionado pelo Ca2+na liberação de EROs foi associado à peroxidação lipídica de membrana e diretamente correlacionado ao grau de inibição do complexo I por rotenona. Entretanto, Ca2+ não estimulou o aumento da liberação mitocondrial de EROs na presença do inibidor do complexo I 1-metil-4-fenilpiridinium. Ciclosporina A não teve efeito na liberação mitocondrial de EROs, indicando que a permeabilidade mitocondrial transitória não está envolvida neste processo...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Micromolar Ca2+ concentration (>10 uM) strongly stimulated the release of reactive oxygen species (ROS) in rotenone-treated isolated rat forebrain mitochondria. Ca2+-stimulated mitochondrial ROS release was associated with membrane lipid peroxidation and was directly correlated with the degree of complex I inhibition by rotenone. However, Ca2+did not increase mitochondrial ROS release in the presence of the complex I inhibitor l-methil-4phenylpyridinium. Cyclosporin A had no effect on mitochondrial ROS release, indicating that mitochondrial permeability transition is not involved in this process...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Ione Salgado Martins / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T08:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saviani_ElziraElizabeth_D.pdf: 6632332 bytes, checksum: 5d396f775a48750d5159f8a260450f0f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: No presente trabalho foi utilizado 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP para identificar a proteína desacopladora (PUMP) presente em mitocôndrias de tubérculos de batata. Um sítio para a ligação de nucleotídeos, distinto daquele presente no translocador de ADP/ATP, foi caracterizado. Este sítio de ligação de nucleotídeos de adenina se mostrou sensível ao GTP, apresentando uma constante de dissociação para 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP de 21 'mu¿M, com ligação máxima em pH baixo. A sensibilidade ao GTP e a dependência ao pH, do sítio de ligação para nucleotídeos de adenina, identificado em mitocôndrias de tubérculos de batata, não foi detectada em mitocôndrias de fígado de rato, mas se assemelha ao presente na proteína desacopladora de mitocôndrias do tecido adiposo marrom. O marcador 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP foi covalentemente incorporado em mitocôndrias de tubérculos de batata através de irradiação ultravioleta. Duas bandas principais de 30 e 32 Kda foram identificadas na auto-radiografia do gel eletroforético em SDS das proteínas mitocondriais. Estas bandas correspondem ao translocador de ADP/ATP e à PUMP, uma vez que não ocorreu na presença de carboxiatractilosídeo (CAT) ou , respectivamente, que são ligantes destas proteínas. O presente trabalho também verificou se o translocador de ADP/ATP, além da PUMP, participa do desacoplamento de mitocôndrias de batata, mediado por ácidos graxos livres (AGL)... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: In the present work we used 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP to identify the uncoupling protein of potato tuber mitochondria (PUMP). An adenine binding site is described which is distinct from the one present in the ADP/ATP translocator. This adenine nucleotide binding site is sensitive to GTP with a dissociation constant for 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP of 21 'mu¿M and an optimum at acidic ph. The GTP sensitivity and pH dependence of the adenine nucleotide binding site, detected in potato tuber mitochondria, was not apparent in rat liver mitochondria, and closely corresponds to the uncoupling mitochondrial protein of brown adipose tissue mitochondria. The probe 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP was covalently incorporated into potato tuber mitochondria by near ultraviolet irradiation. Two major radioactive bands of 30 and 32 Kda were identified in the autoradiography of the SDS gel electrophoresis of potato mitochondrial proteins. These bands correspond to the ADP/ATP translocator and PUMP, since labeling was prevented by carboxyatractyloside (CAT) of GTP, ligands of these proteins, respectively. The present work also examined whether the ADP/ATP translocator, other than PUMP, participates in free fatty acid (FFA)-mediated uncoupling of potato tuber mitochondria. The basal respiration rate of succinate-energized mitochondria was stimulated by a low concentration of palmitate... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Lucia Pereira da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T21:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mamede_MariaEugeniadeOliveira_M.pdf: 3815005 bytes, checksum: 9cd7800aa3a8a08dac8e767c681a7efd (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O Dipiridamol (DIP) é um vasodilatador coronário, antiplaquetário que atua de maneira sinergística com várias drogas antitumorais, além de possuir atividade antioxidante em diferentes sistemas de membrana, interagindo com micelas, monocamadas de fosfolipídios, vesículas e membranas biológicas. O efeito antioxidante do DIP sobre a lipoperoxidação mitocondrial induzida por Fé2+ já foi estudado, observando-se boa correlacão com sua característica lipofílica (Nepomuceno et alii, 1997). Neste trabalho, utilizando mitocôndrias e mitoplastos o papel do DIP como inibidor da peroxidação lipídica induzida por Fé2+, foi melhor estudado. A utilização de baixas concentrações de DIP não provocou mudanças no estado respiratório 4 nem no estado respiratório 3 e portanto, a interação do DIP com os receptores periféricos de benzodiazepínicos foi descartada. A constante de associação do DIP com mitoplastos foi estimada em torno de 1,1 ± 0,2 (mg/mL)-1. Este valor é ligeiramente superior ao obtido para mitocôndrias, 0,8 ± 0,1 (mg/mL)-1. Observou-se para os mitoplastos que o DIP não foi totalmente recuperado após incubação com essas membranas, provavelmente devido à metabolização da droga formando um produto não fluorescente. Os estudos de consumo de oxigênio na presença de FeSO4 mostraram que o efeito antioxidante do DIP não provocou mudanças na oxidação do Fé2+. Nossos dados permitem-nos sugerir que o efeito antioxidante do DIP está relacionado com a sua partição na membrana e não à sua ligação específica a proteínas de membrana. A proteção contra a peroxidação lipídica pode ser devida à inibição direta das reações de propagação ou à ação do DIP em sequestrar as espécies radicalares que poderiam iniciar o processo peroxidativo / Abstract: Dipyridamole (DIP), a coronary vasodilator, presents activity for a number of antitumor drugs as well as antioxidant activity in membrane systems. DIP and derivatives interact with membrane systems such as micelles, phospholipid monolayers, vesicles and biological membranes. The antioxidant effect of DIP upon iron induced lipoperoxidation on mitochondria has been reported and a good correlation between the hydrophobicity and its protective effect was found (Nepomuceno et alii, 1997). In the present work an effort is made to betler understand the role of DIP as inhibitor of Fe2+induced lipid peroxidation in mitochondria and mitoplasts. At low concentration, no significant effect on either state IV or state III respiration was found, discarding a possible direct interaction of DIP with the peripheral benzodiazepine receptor. The association constants for DIP in mitoplasts were estimated, being 1.1 ± 0.2 (mg/mL)-1. This value is slight1y higher than that obtained for mitochondria, 0.8 ± 0.1 (mg/mL)-1. It was observed that under mitoplast was used, some of the drug was not recovered, probably due to DIP metabolization into a no fluorescent species. Oxygen consumption studies in the presence of FeSO4 showed that the antioxidant effect of DIP did not involved the initial step of Fé2+ oxidation. Our data strongly support the hypothesis that the antioxidant effect of DIP is related to its partition in the lipid phase of the mitochondrial or mitoplast membrane and not to a specific interaction with membrane proteins. This protection may be due either to a direct inhibition of the propagation steps or a scavenger effect, removing the radicalar species that would trigger the peroxidative process / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Lucia Pereira da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T00:25:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morselli_AnaLia_M.pdf: 4367604 bytes, checksum: 93c7e171933a30bca94c0c0c5bec2363 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: Neste trabalho procuramos estudar as alterações causadas na permeabilidade da membrana mitocondrial por agentes capazes de promover efluxo de 'Ca¿++. Após incubação de mitocôndrias isoladas de diferentes tecidos de rato. fígado. cérebro e rim ou de vegetais, milho, batata, em condições de ¿stress¿ oxidativo ou na presença de altas concentrações de 'Ca¿++ e Pi. extraíram-se dos sobrertadantes os lipídeos presentes e analisou-se qualitativamente a presença de ácidos graxos livres através de cromatografia em camada delgada em sílica gel ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Intramitochondrial phospholipase activity has been correlated with Ca++ efflux from mitochondria incubated in the presence of different Ca++ releasing agents. We compared the phospholipase 'A IND. 2¿ activity in mitochondria isolated from rat liver, brain and kidney and from corn and potato. These mitochondria show different sensitivities to the Ca++ releasing agents t-butylhydroperoxide, diamide and Pi ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T00:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MarcoAurelioPedrone_D.pdf: 10964647 bytes, checksum: 4c2f2a52f92774ecf5130af723c937e0 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: Com o objetivo de acrescentar dados que pudessem ajudar a esclarecer algumas particularidades da fisiologia de mitocôndrias de plantas, foram investigadas algumas das características do funcionamento de mitocôndrias isoladas de milho, batata e beterraba. Numa primeira parte de deste trabalho foram estudados alguns aspectos relacionados ao transporte de 'Ca IND. 2+¿, em mitocôndrias isoladas de coleóptiles de milho. Foi possível observar que o fosfato é estequiometricamente acumulado com o 'Ca IND. 2+¿, mantendo uma razão 'Ca IND. 2+¿/Pi próxima a 1,5 e que a atividade do transportador é independente da idade dos coleóptiles utilizados ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The first part of this work was dedicated to some aspects related to 'Ca IND. 2+¿ transport by corn coleoptile mitochondria. It was observed that the activity of the 'Ca IND. 2+¿ carrier is independent of the coleoptile age and that phosphate is accumulated together with 'Ca IND. 2+¿ keeping a 'Ca IND. 2+¿/Pi ratio near to 1.5 ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Ivany Ferraz Marques Valio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T00:44:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Villar_MariaLuizaDomingues_D.pdf: 3437707 bytes, checksum: dbe40137313d0eff1cf5845bc24949bf (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: Pachvrhizus tuberosus é uma espécie que possui um potencial alimentar expressivo nas raízes tuberosas. É nativa da região Amazônica, onde é cultivada comercialmente. Suas sementes são ricas em proteínas e lipídeos, porém são tóxicas ao consumo dos animais, pois apresentam um alto nível de isoflavonóides, rotenona e pachyrhizina. Entretanto, com exceção das sementes, nenhum trabalho foi desenvolvido para verificar a presença desses componentes nos vários órgãos da planta. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi determinar, através das extrações e dosagens, a quantidade de rotenona e pachyrhizina, na fase de crescimento inicial e nos vários órgãos da planta. Além disso, verificou-se também o efeito dessas substâncias na atividade respiratória em mitocôndrias isoladas desta espécie. Neste trabalho foi possível estabelecer o método por cromatografia líquida de fase reversa para determinar e identificar a rotenona e pachyrhizina de P. tuberosus. A partir da fração de rotenóides extraídos das sementes de P. tuberosus, foi possível identificar e determinar a rotenona e pachyrhizina no mesmo cromatograma. Observou-se que a rotenona elue em 13 minutos e a pachyrhizina em 11 minutos aproximadamente, utilizando ácido acético 0.5% e metanol 70%, numa velocidade de fluxo de 1ml por minuto. Após várias análises feitas por HPLC, observou-se que as sementes secas possuem cerca de 0.59mg de rotenona e 20.mg de pachyrhizina por miligrama de matéria seca. Durante o período de embebição em luz e escuro, verificou-se que rotenona e pachyrhizina estão em maior quantidade nos cotilédones do que nos eixos embrionários. Parece não ocorrer síntese dessas substâncias nos embriões e cotilédones, durante a embebição dessas sementes , pois, de acordo com os resultados, não houve variações significativas na quantidade dessas substâncias. Não existe uma relação entre o aumento do peso de matéria seca, com a quantidade de rotenona e pachyrhizina encontrada durante a embebição das sementes. É proposto que os níveis dessas substâncias, não interfiram no desenvolvimento das plântulas desta espécie. Rotenona e pachyrhizina foram encontradas também em sementes fervidas, com alta temperatura e pressão. Neste trabalho, foi possível estabelecer os níveis de rotenona e pachyrhizina nas folhas de P. tuberosus, utilizando a cromatografia líquida de fase reversa. Nas folhas primárias analisadas, observou-se um aumento na quantidade de pachyrhizina e principalmente de rotenona, concomitante com o aumento de matéria seca. Essas substâncias se apresentam em maior quantidade nas folhas primárias do que nas sementes em desenvolvimento. Não foram detectadas, rotenona e pachyrhizina no exsudato do caule e no pedúnculo da inflorescência nesta espécie. Além disso, nenhum desses isoflavonóides foi encontrado na inflorescência de P. tuberosus. E sugerido que rotenona e pachyrhizina não sejam transportadas no caule, indicando que possam ser sintetizadas independentemente nos diferentes órgãos (sementes, folhas e raízes).Nos frutos, rotenona e pachyrhizina não foram determinadas nos extratos das vagens e sementes imaturas. Estes isoflavonóides só foram detectados nas sementes das vagens com 15.8cm, 18.4cm e 20.9cm de comprimento. Rotenona e pachyrhizina foram observadas nas raízes de plântulas com 28 dias de idade crescidas no escuro. Nas raízes tuberosas de plantas com 10 meses de idade, verificou-se uma pequena quantidade de rotenona concentrada principalmente na região do colo. Porém, pachyrhizina não foi encontrada na raiz tuberosa de P. tuberosus. Sendo assim é possível utilizar na alimentação somente a raiz tuberosa sem a casca e sem o tecido da região do colo da raiz. Rotenona nas concentrações de 10-2M, 10-3M e 10-4M e pachyrhizina a 10-4M não afetaram significativamente as porcentagens finais de germinação de sementes mantidas na luz e escuro contínuos. Foi observado, também, que rotenona e pachyrhizina, nas concentrações utilizadas neste trabalho, não afetaram o desenvolvimento em peso de matéria fresca e comprimento dos eixos embrionários isolados dos cotilédones, mantidos na luz e escuro contínuos. Portanto, sugere-se que estes isoflavonóides não interferem no desenvolvimento inicial da planta de P. tuberosus. Nos experimentos com mitocôndrias isoladas de P. tuberosus, os resultados mostram que rotenona e pachyrhizina nas concentrações utilizadas, adicionadas ao meio de reação, não inibem o consumo de oxigênio em plântulas estioladas do Jacatupé. Sendo assim, supõe-se que estas substâncias, não interferem no transporte eletrônico da cadeia respiratória na mitocôndria desta espécie / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T19:01:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fagian_MarciaMarilia_M.pdf: 2846231 bytes, checksum: 62b0fe54049a5a247549286aa9e0c1d3 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Nossos resultados mostram que 'Sr POT.2+¿ intramitocondrial, similarmente ao 'ca POT.2+¿, inibe a fosforilação oxidativa em mitocondria de figado de rato. Ambos, 'Ca POT.2+¿ e 'Sr POT.2+¿ também inibem a atividade hidrolítica da ATPase em partículas submitocondriais. Metade da inibição máxima dessa atividade ATPásica foi encontrada numa concentração de 2,5mM de 'Ca POT.2+¿ ou 5,0 mM de 'Sr POT.2+¿ , quando a concentraçao de 'Mg POT.2+¿ no meio era 1,0 mM. A inibição da atividade ATPásica por ambos os cátions foi rapidamente decrescida com o aumento da concentração de 'Mg POT.2+¿ no meio de reaçao. Dados cinéticos, na presença de dlferentes concentraçoes de 'Ca POT.2+¿ ou 'Sr POT.2+¿ e a determinação nessas condições da concentração de MgATP, o substrato da ATPase, indicam fortemente que estes cátions inibem a hidrólise de ATP competindo com 'Mg POT.2+¿ para a formação do complexo MgATP. Com base na concordância entre estes resultados obtidos em partículas submitocondriais e os resultados de titulações da fosforilação oxidativa com carbo xiatractilato ou oligomicina,em mitocondrias carregadas com 'Sr POT.2+¿, concluímos que Ca POT.2+¿ ou 'Sr POT.2+¿ intramitocondrial inibem a fosforilação oxidativa em mitocondrias intactas pelo decréscimo da disponibilidade de nucleotídeos de adenina tanto para o translocador ADP/ATP quanto para a ATPsintetase. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Intramitochondrial 'Sr POT.2+¿, similarly to 'ca POT.2+¿, inhibits oxidative hosphorylation in intact rat liver mitochondria. Both Ca2+ and Sr2+ also inhibits the hydrolytic activity of ATPase in submitochondrial particles. Half-maximal inhibition of ATPase activitywas attained at a concentration of 2,5mM 'Ca POT.2+¿ or 5,0 mM 'Sr POT.2+¿,when the concentration of 'Mg POT.2+¿in the medium was l,0 mM. The inhibition of ATPase activity by both cations was rapidly decreased by increasing the 'Mg POT.2+¿concentrations in the reaction medium. In addition, kinetical data and the determination of the concentrations of MgATP, the substrate of the ATPase, in the presence of different concentration of 'Ca POT.2+¿ or 'Sr POT.2+¿ strongly indicate that these cations inhibit ATP hydrolysis by competing with Mg for the formation of MgATP. On the basis of a good agreement between these results with submitochondrial particles and the results of titrations of oxidative phosphorylationwith carboxyatractylosideor oligomycinin mitochondria loaded with 'Sr POT.2+¿ it can be concluded that intramitochondrial Ca or Sr inhibits oxidativephosphorylation inintact mitochondria by decreasing the availability of adenine nucleotides to both the ADP/ATP carrier and the ATP synthase. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas