A melatonina (MLT) é um hormônio responsável pela regulação dos ritmos circadianos, com ampla atuação na fisiologia animal, incluindo os seres humanos. Sua ação moduladora sobre o sistema imune possibilitou estudar seu efeito sobre a estimulação de monócitos na diferenciação em células dendríticas (DCs). Monócitos estimulados com MLT, durante a etapa de adesão de duas horas, apresentaram aumentada presença dos receptores para citocinas GM-CSF, IL-4 e TNF-a, necessários à geração de DCs in vitro. DCs geradas sob estímulo de MLT mostraram um aumento nas moléculas de membrana como CD40, CD80 e CD83. Foram detectadas as citocinas IL-6, IL-8 e IL-10 nos sobrenadantes de DCs imaturas, bem como IL-6, IL-8 e TNF-a para as DCs maduras. Lys estimulados por estas DCs mostraram um elevado índice de proliferação e detectou-se variação nas concentrações das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g, dos sobrenadantes das co-culturas. O uso do inibidor da MLT, Luzindol mostrou tendência a inibição dos efeitos desse hormônio. / Melatonin (MLT) is a hormone responsible for the circadian rhythm regulation, with wide range of actions in animal physiology, including the human beings. Its modulatory action on immune system permited to study its effects on monocyte stimulation to differentiate into dendritic cells (DCs). Monocytes stimulated with MLT, kept for two hours adhesion time, presented enhanced cytokine membrane receptors for GM-CSF, IL-4, TNF-a, needed to in vitro DCs generation. DCs obtained by MLT stimuli show an enhanced presence of membrane molecules, as CD40, CD80 and CD83. The cytokines IL-6, IL-8 e IL-10 were present in the supernatants of imature DCs, as well the IL-6, IL-8 e TNF-a in mature DCs supernatants. Lymphocytes supernatants from DCs co-culture showed an enhanced proliferation index and, were detected a variation for IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g cytokines. The MLT inhibitor Luzindole show a tendency to inhibition of this hormone.

Investigamos o agonista de Guanilato Ciclase solúvel, BAY 41-2272, como alternativa para compensar falhas nas funções de monócitos. Avaliamos in vitro o efeito do fármaco em células humanas de linhagem e de sangue periférico. O BAY, em células THP-1 e monócitos, aumentou a expressão de CD11b, CD18, CD14, TLR4, TLR2 e CD163 e induziu a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a, IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-6 e IL-12p70. Além disso, o fármaco aumentou a expressão gênica (CYBB, CYBA e NCF2) e protéica (p67PHOX e gp91PHOX) da NADPH oxidase. Ainda, o BAY ativa a via do NF-kB (p65) (dependente de PKG). Mais importante, o fármaco aumentou a atividade microbicida de monócitos de pacientes com DGC e deficiência de MPO a S. aureus e C. albicans. Em animais, o BAY 41-2272 induziu intenso influxo de macrófagos para o peritônio e inflamação. Ainda, potencializou o espraiamento, atividade fagocítica, atividade microbicida, produção espontânea de óxido nítrico e de peróxido de hidrogênio induzida por PMA, em macrófagos peritoneais, aumentando a proteção dos animais desafiados com C. albicans. Em conjunto, nossos resultados confirmam o potencial do BAY 41-2272, ou sua via (GCs/PKG), como alternativa para o desenvolvimento de terapias contra infecções. / We investigated the soluble guanylate cyclase agonist, BAY 41-2272, as an alternative to compensate for failures in of monocytes function. We evaluated the in vitro effect of the drug on human cells lines and peripheral blood cells. The BAY increased expression of CD11b, CD18, CD14, TLR4, TLR2 and CD163 and induce the production of TNF-<font face=\"Symbol\">a, IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-6 and IL-12p70 in THP-1 cells and monocytes. Furthermore, the drug increased NADPH oxidase gene (CYBB, CYBA and NCF2) and protein (gp91phox and p67phox) expression. Also, BAY activates the PKG-dependent NF-kB pathway (p65). More importantly, the drug increased microbicidal activity against S. aureus and C. albicans of monocytes from patients with CGD and MPO deficiency. In animals, BAY 41-2272 induced intense influx of macrophages to the peritoneum and inflammation. BAY potentiated the spreading, phagocytic activity, microbicidal activity, spontaneous production of nitric oxide and PMA-induced hydrogen peroxide release by peritoneal macrophages, increasing host protection against C. albicans. Taken together, our results confirm the potential of BAY 41-2272, or its pathway (sGC / PKG), as an alternative for the development of therapies against infections.

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Coorientador: Leandro Gustavo de Oliveira / Banca: Alessandra Pontillo / Banca: Francisco Lázaro Pereira de Souza / Resumo: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez, caracterizada por hipertensão arterial e proteinúria, identificadas após a 20a semana de gestação. Essa patologia está associada com hiperuricemia, valores séricos elevados de citocinas inflamatórias, ativação de leucócitos e estresse oxidativo. Cristais de ácido úrico podem ativar um complexo intracelular denominado inflamassoma, uma estrutura multi-proteica importante para o processamento e liberação das citocinas inflamatórias interleucina-1 beta (IL-1β) e IL-18. Este estudo investigou, em gestantes portadoras de PE, o estado de ativação de monócitos, tanto endógeno como estimulado por urato monossódico (MSU), por meio da expressão gênica dos inflamassomas NLRP1 e NLRP3, bem como a associação destes complexos com a expressão de citocinas inflamatórias por estas células. Monócitos foram obtidos do sangue periférico de 23 gestantes pré-eclâmpticas e 23 gestantes normotensas (GN) no terceiro trimestre de gestação e de 23 mulheres saudáveis, não grávidas (MNG) e cultivados na presença ou ausência de 50 μg/mL de MSU por 18 h. A presença do inflamassoma foi avaliada por meio da expressão gênica de NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β, IL-18 e TNF-α por RT-qPCR em células não estimuladas (expressão endógena) ou após estímulo com MSU (expressão estimulada). A concentração das citocinas foi avaliada pelo método de ELISA. Os resultados foram analisados por meio de testes não-paramétricos com nível de significância de 5%. Em gestantes pré-eclâmpticas, a expressão gênica de NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β e TNF-α em monócitos estimulados ou não com MSU, foi significativamente maior do que nos grupos GN e MNG. Além disso, observou-se maior expressão endógena de IL-18 em gestantes com PE em comparação às gestantes normotensas, enquanto a expressão estimulada da citocina foi maior no grupo PE em relação aos grupos GN e... / Abstract: Preeclampsia (PE) is a specific syndrome of pregnancy, characterized by hypertension and proteinuria, identified after the 20th week of pregnancy. This pathology is associated with hyperuricemia, elevated serum levels of inflammatory cytokines, leukocyte activation and oxidative stress. Uric acid crystals may activate an intracellular complex called inflammasome, a multi-protein structure which is important for processing and release of inflammatory cytokines such as interleukin-1 beta (IL-1β) and IL-18. This study investigated, in pregnant women with PE, the state of monocyte activation both endogenous and stimulated with monosodium urate (MSU), by gene expression of NLRP1 and NLRP3 inflammassomes as well as their association with inflammatory cytokines expression by these cells. Monocytes were obtained from peripheral blood of 23 preeclamptic pregnant women, 23 normotensive pregnant women (NT) in the third trimester of pregnancy and 23 healthy non-pregnant women (NP), and cultured in the presence or absence of 50 μg/mL of MSU for 18 h. Inflammasome activation was evaluated by the gene expression of NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β, IL-18 and TNF-α by RT-qPCR in unstimulated monocytes (endogenous expression), or after cell stimulation with MSU (stimulated expression). The concentration of cytokines was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results were analyzed using non-parametric tests at 5% significance level. In preeclamptic pregnant women, gene expression of NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β and TNF-α by monocytes, stimulated or not with MSU, was significantly higher than in NT and NP groups. In addition, there was a higher endogenous expression of IL-18 in pregnant women with PE compared with NT pregnant women, while the stimulated cytokine expression was higher in the PE group than in the other two groups studied. Stimulation of monocytes from preeclamptic and non-pregnant women with MSU induced increased ... / Mestre

O vírus da imunodeficiência humana (HIV) é o responsável pela pandemia mundial da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Uma vez infectado pelo HIV, o hospedeiro apresenta a forma aguda da doença, caracterizada por aumento da carga viral circulante, rápido declínio das células TCD4+ e ativação da resposta imune inata. Quando o HIV se estabelece no organismo, induz latência em algumas células e leva à cronicidade da infecção e nessa fase o principal alvo do HIV são as células T CD4+, observa-se então constante diminuição desta população, que tem como consequência a imunodeficiência, com desativação de outras células imunes, como os monócitos, macrófagos, células Natural Killer e neutrófilos. Portanto, há o favorecimento das infecções oportunistas por fungos, bactérias, parasitas e outros vírus, além do surgimento de neoplasias principais responsáveis pela morbidade e mortalidade relacionadas à AIDS. Para conter a destruição do sistema imune pelo vírus, inicia-se a terapia antirretroviral (TARV), sendo que o parâmetro disponível na clínica para início da terapia é a carga viral e contagem de células TCD4+. Neste sentido, investigamos se fatores relacionados à função e fenótipo de monócitos de pacientes HIV+ poderiam servir como biomarcadores da progressão da infecção. Para tanto, monócitos provenientes do sangue periférico de indivíduos HIV+, virgens ou não de tratamento e de indivíduos controle foram ou não infectadas in vitro com Salmonella Enteritidis. A capacidade fagocítica, a atividade microbicida, a produção de óxido nítrico (NO) e de citocinas foi avaliada e para avaliar a produção de espécies reativas do oxigênio (EROs), os monócitos foram ainda estimulados ou não com PMA. Concluímos que a infecção pelo HIV leva ao aumento da capacidade fagocítica de monócitos de homens quando comparados à mulheres nas mesmas condições, entretanto a infecção não altera funções como a atividade microbicida, produção de EROs ou NO, entretanto, o perfil de citocinas entre os grupos foi muito diferente, entretanto o uso de TARV é capaz de recuperar parcialmente as correlações formadas entre citocinas comparadas ao grupo controle. Desta forma uma bioassinatura funcional poderia ser descrita, tendo como base a produção diferencial de citocinas e quimiocinas, como IL-1?, IL-6 e IL-12p70. / The human immunodeficiency virus (HIV) is the responsible for the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) global pandemic. Once infected with HIV, the host has an acute form of the disease, characterized by a very high circulating level of virus and a rapid decline in CD4+ T cells, and then, the activation of innate immune response. The HIV is established in the body, inducing latency in some cells and leads to chronic infection, phase which the main target of HIV are the CD4+ T cells, and then what we observe is the constant decline of this population, which brings the immunodeficiency as a consequence, characterized by the deactivation of other immune cells, such as monocytes, macrophages, natural killer and neutrophils. In this way, opportunistic infections by fungal, bacteria, parasites and others viuses in adition to the neoplasm are established, being the main responsible for the morbidity and mortality related to AIDS. To contain the immune system destruction by the virus, the antiretroviral therapy (HAART) can be initiated, and the clinical parameter available considered to the onset of therapy to is the viral load and CD4+ T cell counts. In this sense, we have investigated if the factors related to the function and phenotype of monocytes from HIV+ patients could serve as biomarkers of the progression of infection. To this end, monocytes from the peripheral blood of HIV+ patients treated or not with HAART and control subjects were infected or not in vitro with Salmonella Enteritidis. The phagocytic capacity, microbicidal activity, the production of nitric oxide (NO) or cytokines were evaluated and when monocytes were stimulated or not with PMA, the production of reactive oxygen species (ROS) was evaluated. We conclude that HIV infection leads to increased phagocytic ability of monocytes of men compared to women in the same conditions, however, the infection does not alter functions such as microbicidal activity and ROS and NO production, however, the cytokine profile between groups was very different, however the use of HAART is able to partially recover the correlations formed between cytokines compared to the control group. Thus a functional biosignature could be described based on the differential production of cytokines and chemokines such as IL-1?, IL-6 and IL-12p70.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Lipoxinas (LXs) são metabólitos do ácido araquidônico com reconhecidas atividades antiinflamatórias e pró-resolução. Apesar do grande número de trabalhos publicados descrevendo o papel das LXs e seus análogos em leucócitos e outros tipos celulares envolvidos em doenças inflamatórias, pouco é sabido a respeito dos mecanismos de ação que desencadeiam estas respostas. Neste trabalho investigamos o papel do 15-epi-16-(para-flúor)-fenoxi-lipoxina A4 (ATL-1), um análogo sintético da 15-epi-lipoxina A4, sobre diversos processos de ativação de monócitos. Caracterizamos, pela primeira vez, o receptor da lipoxina A4 (ALX) na linhagem monocítica U937, através da avaliação de sua expressão gênica e protéica e de sua funcionalidade analisando a ativação de ERK-2, o que torna esta célula uma ferramenta apta para estudo dos mecanismos de ação das LXs e seus análogos sobre os monócitos. Além disso, demonstramos que o ATL-1 aumenta a expressão da enzima heme oxigenase (HO) -1 em células U937 via ativação da p38 MAP quinase (MAPK) e diminui a secreção da Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), uma quimiocina envolvida com o recrutamento de monócitos para o foco inflamatório, em células U937 estimuladas com LPS. A inibição da secreção de MCP-1 foi revertida pela utilização do SB203580, sugerindo que este efeito é dependente da ativação da via p38 MAPK. O presente estudo elucida alguns dos mecanismos envolvidos na ativação de monócitos pelas lipoxinas que podem levar a novas abordagens para o controle de diversas doenças nas quais o componente inflamatório é importante / Lipoxins (LXs) are arachidonic acid metabolites with well recognized anti-inflammatory and pro-resolution activities. Despite the large number of studies describing the role of LXs and their analogs in leukocytes and other cell types involved in inflammatory diseases, little is known about the mechanisms of action that trigger these responses. This work investigated the role of 15-epi-16-(para-fluoro)-phenoxy-lipoxin A4 (ATL-1), a synthetic analog of 15-epi-lipoxin A4 on various processes of monocyte activation. We characterized, for the first time, the lipoxin A4 receptor (ALX) in the monocytic lineage U937, through the assessment of its gene expression and protein and its functionality through the activation of ERK-2, which makes this cell line a suitable tool to study the mechanisms of action of LXs and their analogs on the monocytes. Furthermore, we demonstrated that ATL-1 increases the expression of the enzyme heme oxygenase (HO)-1 in the U937 cells via activation of p38 MAP kinase (MAPK) and decreases the secretion of Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), a chemokine involved in the recruitment of monocytes to the inflammatory focus in LPS-stimulated U937 cells. MCP-1 secretion inhibition by ATL-1 was reverted by SB203580 indicating that this effect is dependent on the activation of p38 MAPK pathway. This study clarifies some of the mechanisms involved in the activation of monocytes by lipoxins which may lead to new approaches for the control of different pathologies where the inflammatory component is relevant

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-07-06T13:51:21Z No. of bitstreams: 1 cp030881.pdf: 1866671 bytes, checksum: 931ecf51552cd91f944a4fae40324ffd (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-07-06T13:51:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp030881.pdf: 1866671 bytes, checksum: 931ecf51552cd91f944a4fae40324ffd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-06T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp030881.pdf: 1866671 bytes, checksum: 931ecf51552cd91f944a4fae40324ffd (MD5) Previous issue date: 2005 / A sepse apresenta crescente incidência e elevada morbidade e mortalidade, sendo a principal causa de óbito nas unidades de terapia intensiva. O controle da infecção depende do adequado reconhecimento dos microrganismos pelas células do hospedeiro e de resposta efetora competente. Paradoxalmente, na sepse, os mecanismos de proteção estão também envolvidos no processo de doença, sendo o limite entre resposta protetora e de lesão ainda impreciso. Objetivos: Avaliar o estado de ativação dos neutrófilos no continuum da sepse através da expressão de receptores de superfície e do metabolismo oxidativo; avaliar o estado de ativação de monócitos pelo metabolismo oxidativo; avaliar a associação do estado de ativação com disfunção orgânica. Métodos: Foram incluídos 41 pacientes sendo 14 em sepse, 12 em sepse grave e 15 em choque séptico, classificados de acordo com o consenso de 1992. Também foram incluídos 17 voluntários sadios (grupo controle). Por citometria de fluxo, foram estudadas a expressão dos receptores TLR2, TLR4, CD11b, CD11c e CD66b na superfície de neutrófilos em sangue total, e foi avaliada a produção de espécies reativas de oxigênio em neutrófilos e monócitos através da oxidação de DCFH em sangue total. Disfunção orgânica foi mensurada pelo SOFA. Resultados: Houve diminuição da expressão de TLR2 (p=0,05) e tendência a diminuição de TLR4 (0,06) no grupo de choque séptico em relação aos indivíduos sadios. Não houve diferença na expressão de CD11b e CD11c. Houve aumento da expressão de CD66b no conjunto de pacientes em relação ao grupo controle (p=0,01). O metabolismo oxidativo de neutrófilos foi maior no conjunto de pacientes em relação ao grupo controle na condição basal e após estímulos com PMA, fMLP, LPS e S. aureus (p<0,001 em todas as condições). O metabolismo oxidativo de monócitos também foi significativamente menor no conjunto de pacientes em todas as condições testadas (p<0,01). O metabolismo oxidativo em neutrófilos na sepse grave foi maior que o grupo controle em todas as condições, entretanto foi menor que o grupo de sepse após estímulo com PMA (p=0,04) e menor que o grupo de choque séptico após LPS (p=0,02) e S. aureus (p=0,04). O mesmo foi observado no metabolismo de monócitos na sepse grave em relação ao grupo de sepse após LPS (p=0,01) e ao grupo de choque séptico em relação a fMLP (p=0,03) e LPS (p=0,008). Houve correlação forte entre metabolismo oxidativo de neutrófilos e monócitos SOFA foi capaz de discriminar entre sobreviventes e não sobreviventes com curva ROC de 0,78 (p=0,02). Houve correlação entre disfunção de órgãos e metabolismo oxidativo em neutrófilos e monócitos nos grupos de sepse grave e choque séptico, embora o metabolismo oxidativo tenha sido maior no grupo de choque séptico. O metabolismo oxidativo do grupo de sepse esteve igualmente aumentado em relação ao grupo de choque séptico, porém o primeiro não desenvolve disfunção orgânica. Conclusões: Observou-se maior estado de ativação de neutrófilos e monócitos na sepse avaliados pelo maior metabolismo oxidativo. Todavia, nas fases iniciais da sepse a produção elevada de espécies reativas de oxigênio está relacionada a uma resposta efetiva para resolução do processo infeccioso e em fases mais avançadas parece estar relacionada a maior dano tecidual com conseqüente aumento do número de disfunções e morte. Dessa forma, a produção de espécies reativas de oxigênio no continuum da sepse deve ser interpretada à luz da observação clinica. / Sepsis is the leading cause of mortality in Intensive Care Unit. Sepsis morbidity and mortality are increasing through years. Infection control depends on adequate microbes recognition and satisfactory cell activation. Paradoxically it has been seen that in sepse cell activation can be both good and harmful to the host. Objectives: To evaluate neutrophil activation in the continuum of sepsis measuring cell surface receptors and oxidative metabolism; to evaluate monocyte activation measuring oxidative metabolism; to evaluate the correlation between cell activation and organ dysfunction. Methods: Regarding the 1992 ACCP/SCCM consensus, 41 patients were included: 14 with sepsis, 12 with severe sepsis and 15 with septic shock. 17 healthy volunteers were included as control group. TLR2, TLR4, CD11b, CD11c and CD66b expression on neutrophil surface using whole blood were measured using flow cytometry. Reactive oxygen species formation due to DCFH oxidation was also measured by flow cytometry. Organ dysfunction was characterized and measured using SOFA score. Results: It was observed diminished TLR2 and TLR4 expression in septic shock compared to healthy volunteers (p=0.05 and p=0.06, respectively). There were no differences found in CD11b and CD11c expression. CD66b expression was increased comparing the whole group of patients and the control group (p=0.01). Neutrophil oxidative burst has been increased in the whole group of patients compared to the control group at baseline and under PMA, fMLP, LPS and S. aureus stimulation (p<0.001 for all conditions tested). Monocyte oxidative metabolism was also significantly increased in the whole patient group compared to the control group in all conditions tested (p<0,01). Neutrophil and monocyte oxidative metabolismo due to PMA, LPS and S.aureus stimulation in severe sepsis have been diminished compared to sepsis and septic shock. A strong correlation was observed between neutrophil and monocyte oxidative metabolism. SOFA score discriminated patients between survivors and non survivors (ROC curve was 0.78; p=0.02). It has been observed positive correlation between organ dysfunction and oxidative metabolism in neutrophils and monocytes considering severe sepsis and septic shock. However, despite oxidative burst in sepsis has been as high as in septic shock, no organ dysfunction was found in sepsis. Conclusions: Neutrophils and monocytes are activated in the continuum of sepsis considering reactive oxygen species formation. Nonetheless, in the onset of sepsis increased oxidative metabolism was probably involved in resolution of the infectious course, but on late stages of sepsis it was associated with tissue damage and consequently organ dysfunction and death.

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-06T12:23:16Z No. of bitstreams: 1 jorgenilce_s_sales_ioc_bp_0022_2010.pdf: 2120746 bytes, checksum: 319e0b7b0dce67008dbde7aeb9028520 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-06T12:23:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jorgenilce_s_sales_ioc_bp_0022_2010.pdf: 2120746 bytes, checksum: 319e0b7b0dce67008dbde7aeb9028520 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Os mecanismos que levam a ausência de resposta imune celular no pólo lepromatoso da hanseníase frente ao Mycobacterium leprae permanecem obscuros. Estudos anteriores mostraram que fatores secretados pelos macrófagos de pacientes lepromatosos inibem a proliferação de linfócitos de indivíduos saudáveis, sugerindo que fatores endógenos produzidos por células da linhagem mielóide podem exercer uma atividade supressora nas células T. Recentemente, diversos estudos têm demonstrado a participação da enzima indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) na supressão das células T, indicando que mudanças bioquímicas devido ao catabolismo do triptofano têm efeitos na proliferação dessas células. No presente trabalho nós demonstramos que os pacientes com a forma clínica lepromatosa apresentam uma maior expressão de IDO em biópsias de pele e maior atividade de IDO no soro quando comparados com pacientes com a forma tuberculóide e que o M. leprae induz a expressão e a atividade de IDO em monócitos de indivíduos saudáveis e de pacientes lepromatosos. Além disso, observamos que o M. leprae induz aumento na atividade de IDO nas células dendríticas derivadas de monócitos de indivíduos saudáveis e que esta atividade aumentada de IDO contribui para o aumento percentual de linfócitos expressando a molécula supressora CTLA-4, sugerindo que IDO participe na anergia T antígeno específico observada em pacientes com a forma lepromatosa da doença / The absence of cellular immune response to M. leprae in lepromatous pole of leprosy remains unclear. Previous studies showed that factors secreted by macrophages of lepromatous patients inhibit the proliferation of lymphocytes from healthy individuals, suggesting that endogenous factors produced by cells of myeloid lineage may have suppressive activity on T cells. Recently, several studies have been demonstrating the involvement of the enzyme indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) in the suppression of T cells, indicating that biochemical changes due to the catabolism of tryptophan affects on the proliferation of these cells. In this study we demonstrated that patients with lepromatous clinical form showed higher IDO expression in skin biopsies and increased IDO activity in serum when compared with patients with the tuberculoid form. In addition, M. leprae induces the expression and activity of IDO in monocytes of healthy subjects and lepromatous patients. Moreover, we observed that M. leprae induces increased activity of IDO in monocyte-derived dendritic cells of healthy individuals and that this increased IDO activity may contribute to the increase in percentage of T lymphocytes expressing CTLA-4, which suggest that IDO may play a role in T-specific anergy observed in lepromatous leprosy patients

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-10-22T13:46:44Z No. of bitstreams: 1 Jessica Dias Petrilli.Avaliação ... 2015.pdf: 2014197 bytes, checksum: 11dd7ed8b03eff8645c6f34b778cc32e (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-10-26T11:29:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Jessica Dias Petrilli.Avaliação ... 2015.pdf: 2014197 bytes, checksum: 11dd7ed8b03eff8645c6f34b778cc32e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T11:29:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Dias Petrilli.Avaliação ... 2015.pdf: 2014197 bytes, checksum: 11dd7ed8b03eff8645c6f34b778cc32e (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Os macrófagos são componentes importantes da resposta imune inata contra o Mycobaterium tuberculosis (Mtb) e podem desempenhar um papel importante na patogênese da tuberculose (TB). Macrófagos são derivados dos monócitos, os quais são classificados em subpopulações a partir da expressão da molécula de superfície CD14 e CD16. São denominados de clássicos, intermediários e não clássicos, e possuem diferenças funcionais e fenotípicas. Os fatores que levam ao desenvolvimento de TB ativa ainda não são claros. Um desequilíbrio entre subpopulações de monócitos circulantes pode estar envolvido na imunopatogênese da TB, uma vez que macrófagos são células importantes da resposta imune inicial da doença. Assim, neste estudo avaliou-se os subgrupos de monócitos em pacientes com TB ativa e latente (TBL). Voluntários com TB ativa, TBL e indivíduos saudáveis foram recrutados para avaliação de frequência, níveis de ativação e produção de citocinas dos subgrupos de monócitos circulantes e após a estimulação antigênica por citometria de fluxo. Nossos resultados não demonstraram diferenças significativas nas frequências, níveis de ativação e produções de citocinas das subpopulações de monócitos entre os grupos estudados. No entanto, pacientes com TB ativa tiveram um aumento na frequência dos monócitos clássicos ativados após estimulação antigênica comparados com os controles saudáveis. Não observou-se uma expansão das subpopulações CD16+ em pacientes TB. Por outro lado, se observou uma expansão dos monócitos CD16- e maior ativação dessa subpopulação após estimulação antigênica em indivíduos TB e TBL. Diante disso, os monócitos clássicos parecem desempenhar algum papel na infecção da TB, uma vez que esta subpopulação se expande e apresenta-se mais ativada após estimulação antigênica principalmente em resposta a Mce1A. Entretanto, esta expansão de monócitos clássicos na TB ainda precisa ser avaliada / Macrophages are important components of the innate immune response against Mycobacterium tuberculosis (Mtb) and may play an important role in the pathogenesis of tuberculosis (TB). Macrophages are derived from monocytes, which are classified into subpopulations from the expression of CD14 and CD16 surface molecule. They are denominated classics, intermediate and non-classical, and have functional and phenotypic differences. The factors that lead to the development of active tuberculosis are not clear yet. However, an imbalance between subpopulations of monocytes may be involved in the immunopathogenesis of TB, since macrophages are important cells in the initial immune responses of the disease. In this study we evaluated the monocyte subsets in patients with active and latent TB (ILTB). Volunteers with active TB, ILTB and healthy subjects were recruited to evaluate the frequency, levels of activation and cytokine production of blood monocytes subsets circulating and after the antigenic stimulation by flow cytometry. Our results did not show significant differences in the frequency, activation levels and cytokine production of monocytes subsets between studies groups. However, patients with active TB have an increased of frequency and activated levels of classical monocytes after antigenic stimulation compared to healthy controls. An expansion of CD16+ in monocytes subsets of TB patient was not observed. Moreover, it was observed an expansion and increased activation of CD16- monocytes after antigenic stimulation in individuals TB and LTB. Thus, the classical monocytes seems to play a role in TB infection, since this subpopulation expands and appears more active primarily after antigenic stimulation in response to Mce1A. However, this expansion of classical monocytes in TB still needs to be evaluated.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-25T15:21:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ludmila Porto Mendes Polari.pdf: 1622619 bytes, checksum: 95b9c669923025a1b43b0a5623e3ab64 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-25T15:21:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ludmila Porto Mendes Polari.pdf: 1622619 bytes, checksum: 95b9c669923025a1b43b0a5623e3ab64 (MD5) / Introdução. A leishmaniose cutânea (LC) causada por Leishmania braziliensis é caracterizada por forte resposta imune do tipo Th1, importante para a eliminação do parasito, mas associada com o desenvolvimento das lesões. Apesar dos vários estudos sobre a imunologia da LC, vários aspectos sobre os estágios iniciais da infecção permanecem desconhecidos. Os receptores toll-like (TLR) são expressos em diversos tipos celulares, como monócitos, e a ativação desses receptores está associada à síntese de citocinas pró-inflamatórias, que iniciam a resposta imune inata. Entretanto, ainda não se tem certeza do papel dos TLRs na LC humana. Objetivo: Caracterizar a expressão dos TLRs 2 e 4 nas subpopulações de monócitos de pacientes com leishmaniose cutânea. Materiais e métodos: As expressões dos TLRs 2 e 4 e de TNF e de IL-10 foram avaliadas por citometria de fluxo nas subpopulações de monócitos de 37 pacientes com LC e 21 indivíduos sadios (CS), ex-vivo e após infecção in vitro com L. braziliensis marcados com CFSE. Resultados: A expressão dos TLRs 2 e 4, ex-vivo e após infecção com L. braziliensis, foi maior nos pacientes com LC quando comparada com CS. A expressão desses receptores é maior nos monócitos infectados com L. braziliensis em relação aos não infectados, e também é maior nas células CD14highCD16+ (monócitos intermediários) quando comparado com células CD14highCD16- (monócitos clássicos) e CD14lowCD16+ (monócitos não-clássicos). A expressão intracelular de TNF e de IL-10 foi maior nos monócitos CD14high (clássicos e intermediários) infectados com L. braziliensis que expressam os TLRs 2 e 4. Conclusão: O aumento na expressão dos TLRs 2 e 4 em monócitos de pacientes com LC, após infecção com L. braziliensis, está associado ao aumento intracelular de TNF, sugerindo que a ativação desses receptores pode contribuir para a forte resposta inflamatória observada na leishmaniose tegumentar.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Lipoxinas (LXs) são metabólitos do ácido araquidônico com reconhecidas atividades antiinflamatórias e pró-resolução. Apesar do grande número de trabalhos publicados descrevendo o papel das LXs e seus análogos em leucócitos e outros tipos celulares envolvidos em doenças inflamatórias, pouco é sabido a respeito dos mecanismos de ação que desencadeiam estas respostas. Neste trabalho investigamos o papel do 15-epi-16-(para-flúor)-fenoxi-lipoxina A4 (ATL-1), um análogo sintético da 15-epi-lipoxina A4, sobre diversos processos de ativação de monócitos. Caracterizamos, pela primeira vez, o receptor da lipoxina A4 (ALX) na linhagem monocítica U937, através da avaliação de sua expressão gênica e protéica e de sua funcionalidade analisando a ativação de ERK-2, o que torna esta célula uma ferramenta apta para estudo dos mecanismos de ação das LXs e seus análogos sobre os monócitos. Além disso, demonstramos que o ATL-1 aumenta a expressão da enzima heme oxigenase (HO) -1 em células U937 via ativação da p38 MAP quinase (MAPK) e diminui a secreção da Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), uma quimiocina envolvida com o recrutamento de monócitos para o foco inflamatório, em células U937 estimuladas com LPS. A inibição da secreção de MCP-1 foi revertida pela utilização do SB203580, sugerindo que este efeito é dependente da ativação da via p38 MAPK. O presente estudo elucida alguns dos mecanismos envolvidos na ativação de monócitos pelas lipoxinas que podem levar a novas abordagens para o controle de diversas doenças nas quais o componente inflamatório é importante / Lipoxins (LXs) are arachidonic acid metabolites with well recognized anti-inflammatory and pro-resolution activities. Despite the large number of studies describing the role of LXs and their analogs in leukocytes and other cell types involved in inflammatory diseases, little is known about the mechanisms of action that trigger these responses. This work investigated the role of 15-epi-16-(para-fluoro)-phenoxy-lipoxin A4 (ATL-1), a synthetic analog of 15-epi-lipoxin A4 on various processes of monocyte activation. We characterized, for the first time, the lipoxin A4 receptor (ALX) in the monocytic lineage U937, through the assessment of its gene expression and protein and its functionality through the activation of ERK-2, which makes this cell line a suitable tool to study the mechanisms of action of LXs and their analogs on the monocytes. Furthermore, we demonstrated that ATL-1 increases the expression of the enzyme heme oxygenase (HO)-1 in the U937 cells via activation of p38 MAP kinase (MAPK) and decreases the secretion of Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), a chemokine involved in the recruitment of monocytes to the inflammatory focus in LPS-stimulated U937 cells. MCP-1 secretion inhibition by ATL-1 was reverted by SB203580 indicating that this effect is dependent on the activation of p38 MAPK pathway. This study clarifies some of the mechanisms involved in the activation of monocytes by lipoxins which may lead to new approaches for the control of different pathologies where the inflammatory component is relevant