Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T17:09:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Monik Oprea - 2013.pdf: 1967380 bytes, checksum: 406bdd6925672cd697798a30f89bc4d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T17:32:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Monik Oprea - 2013.pdf: 1967380 bytes, checksum: 406bdd6925672cd697798a30f89bc4d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-16T17:32:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Monik Oprea - 2013.pdf: 1967380 bytes, checksum: 406bdd6925672cd697798a30f89bc4d5 (MD5) Previous issue date: 2013-06-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Microsatellite markers are important tools for molecular ecology studies, particularly for bats, whose information is difficult to obtain through direct observations. In the first chapter, we conducted searches for scientific articles about the use of microsatellite markers in bats in order to evaluate the current knowledge about the genetic patterns and also to unravel sociological aspects of this knowledge. We found that the use of microsatellite markers to study bats is quite new and little spread. Many questions in molecular ecology can be addressed with a limited number of polymorphic markers, such as microsatellites. This will not only contribute to the knowledge of the species biology, but also to design effective strategies for conservation of bat species. In the second chapter, we report the development and characterization of ten microsatellite loci for the bat Glossophaga soricina isolated from a shotgun genomic library. Among 67 individuals, the number of alleles per locus ranged from 2 to 20, and the observed and expected heterozygosity ranged from 0.015 to 0.606 and from 0.016 to 0.915, respectively. The high combined probability of genetic identity (4.369x10-8) and probability of paternity exclusion (0.996) showed that the microsatellite loci are useful for population genetic structure and detailed parentage studies in natural populations of G. soricina. In the third chapter, we used the nine developed microsatellite loci and spatially explicit analysis to unravel population genetic structure and how landscape features affected genetic diversity of G. soricina at 17 localities in the Brazilian Cerrado. Our results showed that G. soricina populations already have higher inbreeding in fragmented landscapes in small geographic scales. Also, some pairs of populations showed genetic discontinuity as the outcome of landscape modification. / Marcadores microssatélites são ferramentas importantes para estudos de ecologia molecular, principalmente para estudos sobre morcegos, cujas informações são difíceis de acessar através de observações diretas. No primeiro capítulo, buscamos artigos científicos sobre o uso de microssatélites em morcegos para avaliar o conhecimento atual dos padrões genéticos e revelar os aspectos sociológicos desse conhecimento. Nós observamos que o uso de marcadores microssatélites é relativamente recente e ainda pouco difundido. Muitas questões em ecologia molecular poderiam ser respondidas com um número limitado de marcadores moleculares, como os microssatélites. Isso não só contribuiria para o conhecimento da biologia, mas também para desenhar estratégias efetivas para conservação das espécies de morcegos. No segundo capítulo, apresentamos o desenvolvimento e caracterização de dez locos de microssatélites para o morcego Glossophaga soricina, isolados a partir de uma biblioteca shotgun. Foram analisados os genótipos de 67 indivíduos, sendo que o número de alelos por locos variou de 2 a 20, e a heterozigozidade observada e esperada variaram entre 0.015 a 0.606 e entre 0.016 a 0.915, respectivamente. A alta probabilidade de identidade genética (4.369x10-8) e a probabilidade de exclusão de paternidade (0.996) mostraram que os locos de microssatélites desenvolvidos são úteis para estudos de estrutura genética e paternidade em populações naturais de G. soricina. No terceiro capítulo, foram usados nove locos de microssatélites desenvolvidos, juntamente com análises espacialmente explícitas para acessar a estrutura genética, e verificar como as características da paisagem afetam a diversidade genética de G. soricina em 17 localidades do Cerrado brasileiro. Nossos resultados mostraram que populações de G. soricina já apresentam altos índices de endogamia em paisagens fragmentadas em pequenas escalas geográficas. Além disso, alguns pares de populações apresentaram descontinuidade genética como resultado da modificação da paisagem.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disleo.pdf: 1471264 bytes, checksum: 151b79297445d34eca5163f1481eec31 (MD5) Previous issue date: 2007-02-09 / Bats were captured with mist-nets for 36 days along one year in the legal reserve of Anglo American Brasil/Codemin, in the municipality of Niquelândia, north of Goiás State. Three areas of three different fitofisionomias were inventoried: Dry Forest, cerrado and cerrado stricto sensu. Three expeditions were accomplished in the dry period and three in the rainy period during the new moon phase. Seven hundred and twenty-five bats belonging to nineteen species were recorded: Carollia perspicillata, Glossophaga soricina, Platyrrhinus lineatus, Pteronotus parnellii, Anoura geoffroyi, Desmodus rotundus, Molossops temminckii, Micronycteris minuta, Lonchophylla dekeyseri, Artibeus planirostris, Artibeus cinereus, Diphylla ecaudata, Platyrrhinus helleri, Lophostoma brasiliense, Artibeus concolor, Artibeus lituratus, Mimon bennettii, Phyllostomus discolor e Phyllostomus hastatus. The family Phyllostomidae represented 95,8% of the captures; the family Mormoopidae 3,0%, and Molossidae 1,2%. Carollia perspicillata was the dominant species (64,4%% of the sample) , followed for Glossophaga soricina (20%). The research still raised the presence of the one species threatened of extinction Lonchophylla dekeyseri. Artibeus concolor was recorded for the first time to Central Brasil. The Shannon-Wienner index (H') and Eqüitabilility (E) calculated for the areas it was: forest: H' = 0,716 E: 0,3260); cerrado area: H'=1,456 (E: 0,5677) and cerrado stricto sensu: H'=1,397 (E: 0,6068). The largest abundance was observed in the riverine forest (54,4%) and the largest number of species in the cerrado (13 species). Frugivorous species were predominantly in this study. The most similar areas were the two cerrado areas. It was observed a seasonal variation with relationship to the number of captures of bats, with a larger frequency observed in the rainy period. The three nectarivorous species found had picks of annual activities. The pattern of occurrence of species taxonomic or ecologically related revealed that P. lineatus and C. perspicillata didn't demonstrate correlation in the pattern occurrence (r = 0.72; p = 0,106) and a positive correlations were found for: M. minuta and M. temminckkii (r=0,917; p <0,05); M. minuta and P. parnellii (r=0,157; p=765); P. parnellii and M. temminckkii (r=-0,025; p=0,96). The study demonstrated that reserves legal of Anglo American Codemin it can be considered quite several when compared to other areas of Cerrado / Durante 36 dias ao longo de um ano procurou-se levantar a quiropterofauna da reserva legal da Anglo American Brasil/Codemin, no município de Niquelândia, mesorregião Norte do Estado de Goiás, amostrando três áreas com três fitofisionomias diferentes: Mata Seca, cerrado e cerrado strictu sensu. Foram realizadas três expedições no período seco e três no período chuvoso durante a fase de lua nova. Os morcegos foram capturados com redes de neblina. Setecentos e vinte e cinco morcegos de três famílias e dezenove espécies foram capturados: Carollia perspicillata, Glossophaga soricina, Platyrrhinus lineatus, Pteronotus parnelli, Anoura geoffroyi, Desmodus rotundus, Molossops temminckkii, Micronycteris minuta, Lonchophylla dekeyseri, Artibeus planirostris, Artibeus cinereus, Diphylla ecaudata, Platyrrhinus helleri, Lophostoma brasiliense, Artibeus concolor, Artibeus lituratus, Mimon bennettii, Phyllostomus discolor e Phyllostomus hastatus. A família Phyllostomidae representou 95,8% das capturas; a família Mormoopidae 3,0% e a Molossidae apenas 1,2%. Carollia perspicillata foi a espécie dominante (64,4%% da amostra) seguida por Glossophaga soricina (20%). A pesquisa relevou ainda a presença de Lonchophylla dekeyseri, espécie constante da lista atual de espécies brasileiras ameaçadas de extinção e o primeiro registro de Artibeus concolor para a região centro-oeste. O índice de Shannon-Wienner (H ) e a Eqüitabilidade (E) calculados para as áreas foi: mata: H = 0,716 (E: 0,3260); cerrado: H =1,456 (E: 0,5677) e cerrado stricto sensu: H =1,397 (E: 0,6068). A maior abundância foi observada na Mata (54,4%) e a maior riqueza para o cerrado (13 espécies). Espécies frugívoras foram dominantes neste estudo, tanto em número de espécie quando na abundância. As áreas mais similares entre os períodos foram os dois cerrados. Ocorreu uma variação sazonal quanto ao número de capturas de morcegos, com uma maior freqüência observada no período chuvoso. As três espécies nectarívoras encontradas tiveram picos de atividades em diferentes épocas. O padrão de ocorrência de espécies taxonomicamente ou ecologicamente relacionadas revelou que P. lineatus e C. perspicillata não demonstraram correlação entre seus padrões de ocorrência de (r = 0.72; p = 0,106) e uma correlação positiva foi encontrada para: M. minuta e M. temminckkii (r=0,917; p<0,05); M. minuta e P. parnellii (r=0,157; p=765); P. parnellii e M. temminckkii (r=-0,025; p=0,96). O estudo demonstrou que reserva legal da Anglo American Codemin pode ser considerada bastante diversa quando comparada a outras áreas de Cerrado

O presente trabalho visou estudar o comportamento biológico em camundongos de 10 amostras de vírus da raiva isoladas de morcegos hematófagos e não-hematófagos, no Estado do Rio de Janeiro, sua caracterização genética quanto aos genes N e G, além da resposta de camundongos vacinados com a vacina anti-rábica produzida pela replicação da amostra Pitman-Moore em cultivo celular, frente ao desafio com estas amostras virais. As passagens sucessivas em camundongos determinaram uma redução do período de incubação e a obtenção de amostras virais com altos títulos. A vacina anti-rábica utilizada na imunização dos camundongos ofereceu proteção em mais de 80% dos camundongos vacinados com a diluição 1:5 da vacina, frente à maioria das amostras. A análise filogenética do gene da proteína N apresentou um padrão de agregação dividido em variante de morcego hematófago e variante de morcego insetívoro, com diferenças filogenéticas entre as variantes de morcego hematófago isoladas na Região Noroeste do Estado do Rio de Janeiro e aquelas isoladas nas Regiões Metropolitana e Sul do Estado. A substituição do resíduo ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 118, encontradas na caracterização genética da proteína G das amostras 704/97 e 151/98, permite inferir que esta posição esteja relacionada à antigenicidade viral. Não foram observadas diferenças genéticas temporais entre as amostras estudadas. / In the present study we analyzed the biological behavior in mice of 10 rabies virus samples isolated from haematophagous and non-haematophagous bats in Rio de Janeiro State, its genetic characterization from genes N and G, and we also studied the response of mice vaccinated with cell culture rabies vaccine, produced with the Pitman-Moore strain, after viral challenge with bat rabies virus samples. Viral passages in mice resulted in reduced incubation period and high virus titrers. The vaccine used conferred protection in more than 80% of the mice vaccinated with 1:15 vaccine dilution, after viral challenge. N gene genetic analysis divided the samples in haematophagous bat strains and insectivorous bat strains, with phylogenetic differences between samples isolated in Northeast Region and those isolated in the Metropolitan and South Regions of Rio de Janeiro State. The substitution of an aspartic acid to a glutamic acid found in the position 118 of G gene genetic characterization from samples 704/97 and 151/98 seems to be related to viral antigenicity. There were no time-related genetic differences between the studied samples.

Pouco se conhece a respeito da incidência ou prevalência da infecção pelo vírus da raiva em morcegos, ou ainda sobre a distribuição do vírus em tecidos e órgãos não nervosos. Os objetivos deste trabalho foram: i) verificar as espécies de morcegos mais freqüentemente envolvidas com a raiva no Estado de São Paulo, Sudeste do Brasil; ii) estudar a distribuição do vírus da raiva em tecidos e órgãos não nervosos de morcegos; iii) estudar os períodos de mortalidade das amostras de vírus da raiva encontradas nos cérebros e glândulas salivares de morcegos, após inoculação intracerebral em camundongos, e iv) comparação do isolamento do vírus da raiva no sistema camundongo e cultura de células de neuroblastoma (N2A). Entre abril de 2002 a novembro de 2003, 4.393 morcegos capturados de diferentes municípios do Estado de São Paulo foram enviados à Seção de Diagnóstico da Raiva do Instituto Pasteur de São Paulo. Destes, 82 (1,87%) foram positivos para raiva pela técnica de imunofluorescência aplicada aos materiais do cérebro e 33 morcegos pertenciam ao gênero Artibeus sp; 15 Myotis sp; 10 Epitesicus sp; 5 Lasiurus sp; 4 Nyctinomops sp; 4 Tadarida sp; 3 Histiotus sp; 1 Molossus sp; 1 Eumops sp e 6 vampiros Desmodus rotundus. A distribuição do vírus em diferentes órgãos foi examinada pela inoculação de camundongos e células N2A com suspensões a 20% preparadas a partir de fragmentos do cérebro, glândula salivar submandibular, pulmão, língua, coração, bexiga urinária, rins, gordura interescapular, músculo peitoral, trato genital (testículos ou ovários e útero) e estômago. O vírus foi prontamente recuperado de tecidos e órgãos não nervosos com diferentes graus de sensibilidade, tanto em camundongos como em células N2A, e os órgãos mais apropriados para o isolamento viral foram os cérebros e glândulas salivares. Os períodos máximos de mortalidade observados para os vírus presentes nos cérebros usualmente foram mais curtos que os das glândulas salivares, a média do período máximo &plusmn; desvio padrão calculado para os cérebros de morcegos hematófagos foi de 15,33 &plusmn; 2,08 dias e para as glândulas salivares, 11,33 &plusmn; 2,30 dias; para os morcegos insetívoros, 16,45 &plusmn; 4,48 dias para os cérebros e para as glândulas salivares, 18,91 &plusmn; 6,12 dias; e para os morcegos frugívoros, as suspensões cerebrais apresentaram período máximo médio 12,60 &plusmn; 2,13 dias e para as glândulas salivares, 15,67 &plusmn; 4,82 dias. O teste de ANOVA indicou existir diferenças significantes entre os períodos de mortalidade correspondentes às suspensões preparadas a partir dos cérebros de morcegos insetívoros (período mínimo) e glândulas salivares de morcegos insetívoros (período máximo) e entre glândulas salivares de morcegos insetívoros (período máximo) e cérebros de morcegos frugívoros (período mínimo), com p<0.001. O uso de células N2A para o primo-isolamento do vírus da raiva a partir de tecidos e órgãos não nervosos de morcegos, diferente de cérebros, não mostraram resultados consistentes, especialmente devido à contaminação bacteriana e fator toxicidade / Little is known about the incidence of infection or the prevalence rate of rabies in bats, or the distribution of virus in non-nervous tissues and organs. The aim of this work was to study: i) the most frequent species of bats involved with rabies virus infection in the State of São Paulo, Southeast Brazil; ii) the distribution of rabies virus in tissues and non-nervous organs of bats; iii) the mortality periods of virus found in brains and salivary glands of bats after intracerebral inoculation of mice, and iv) comparison of virus isolation in mice and N2A neuroblastoma cell culture. From April 2002 to November 2003, 4,393 bats captured from different municipalities of the State of São Paulo were sent to Rabies Diagnostic Section of the Instituto Pasteur de São Paulo - SP. Among these, 82 (1.87%) were found positive by the immunofluorescence technique applied to brain specimens and 33 bats were of the genus Artibeus sp; 15 Myotis sp; 10 Epitesicus sp, 5 Lasiurus sp, 4 Nyctinomops sp, 4 Tadarida sp, 3 Histiotus sp; 1 Molossus sp, 1 Eumops sp, and 6 vampires Desmodus rotundus. The distribution of virus in the organs was examined by inoculating mice and N2A cells with the 20% suspensions prepared from brain, submaxillary salivary gland, lungs, tongue, heart, urinary bladder, kidneys, brown fat, pectoral muscle, genital tract (testicles or ovaries and uterus), and stomach. The virus was promptly recovered from tissues and non-nervous organs at different degrees of sensitivity in both mice and N2A cells, and the most appropriate organs for the virus isolation were the brains and salivary glands. The maximum mortality periods found for the brain specimens usually were shorter than the salivary glands, the maximum mean perio &plusmn; standard deviation calculated for the brains taken from the vampire bats was 15.33 &plusmn; 2.08 days and for salivary glands, 11.33 &plusmn; 2.30 days; for the insectivorous bats the maximum for the brain suspensions was 16.45 &plusmn; 4.48 days and for the salivary glands, 18.91 &plusmn; 6.12; and for the frugivorous bats, the brain suspensions showed the maximum of 12.60 &plusmn; 2.13 days and the salivary glands, the mean maximum period of 15.67 &plusmn; 4.82 days. The ANOVA test indicated that the most significant differences in the mortality periods were between the suspensions prepared by the brains of insectivorous bats (minimum period) and salivary glands of insectivorous bats (maximum period); salivary glands of insectivorous bats (minimum period) and brains of frugivorous bats (minimum period) with p<0.001. The use of N2A cells for the prime isolation of rabies virus from tissues and non-nervous organs other than brains of bats did not show consistent results, especially due to bacterial contamination and toxicity factor

No Estado de São Paulo, a Coordenadoria de Defesa Agropecuária CDA, Unidade da Administração Direta, subordinada à Secretaria Estadual da Agricultura, foi criada em 1998. Subseqüentemente a elevada freqüência de surtos de raiva paralítica em herbívoros na parte leste do Estado, incluindo as regiões do Vale do Paraíba e Grande São Paulo, entre 1999 e 2001, obrigou mudanças nas estratégias de controle para a doença, que vinha sendo adotada anteriormente no Estado. Em 2001, a vacinação dos herbívoros domésticos foi declarada obrigatória nas regiões sobre a circunscrição dos Escritórios de Defesa Agropecuária EDAs, localizados nas áreas classificadas como áreas epidêmicas e endêmicas para a raiva e com o reforço das medidas de controle direto contra o Desmodus rotundus, morcegos vampiros, utilizando redes de neblina e vampiricidas (pasta nticoagulante), além do registro e do georreferenciamento para a localização dos abrigos, nas regiões estratégicas em ordem contrária a progressão da doença, causando a redução da população de morcegos vampiros e da circulação viral. Neste estudo, foi considerado o número de herbívoros com raiva com confirmação laboratorial e de acordo com o ano de ocorrência, espécie animal, distribuição por EDAs e por Municípios, providenciados pelo Instituto Pasteur de São Paulo. Com respeito à data de 2001, as porcentagens de vacinação, foram agrupadas sem as divisões por EDAs, devido à ausência de dados. A partir de 2002, os dados foram divididos por EDAs, onde a vacinação foi declarada obrigatória e os dados foram discriminados entre estabelecimentos que vacinaram e herbívoros vacinados contra raiva. O número de morcegos vampiros capturados agrupados por EDAs. Analisando as tendências, indicando os estabelecimentos que vacinaram, herbívoros vacinados contra raiva e a quantidade de morcegos vampiros capturados, foi observado um decréscimo nos casos de raiva em 90% ou mais e com estes resultados, concluiu-se que para o controle da raiva nos herbívoros, as medidas adotadas devem ser focadas, primeiramente na vacinação das espécies alvo e no bom planejamento e organização das medidas de controle diretamente nos principais reservatórios de Desmodus rotundus. / In the State of São Paulo, the Coordenadoria de Defesa Agropecuária-CDA, an administrative unit directly subordinated to the State Secretary of Agriculture was established in 1998. Subsequently, the frequent outbreaks of paralytic rabies in herbivores in Eastern part of the State, including the region of Vale do Paraiba and the Greater São Paulo, between 1999 and 2001, have led to change the strategies for controlling the disease being conducted up to that time in the State. In 2001, the vaccination of domestic herbivores was declared obligatory in regions under the jurisdiction of Escritórios de Defesa Agropecuária - EDAs located in areas classified as rabies epidemic and endemic, and by the reinforcement of the control measures directed against the Desmodus rotundus vampire bats by means of joint effort of EDAs to capture and control the bats using mist nets and the vampiricides (anticoagulant paste), besides the registration, revision and the use of geographical information systems to locate the bats roosts and shelters in strategic regions, in order to interrupt the progression of the disease through the reduction of the bat population density and the viral circulation. In this study, it was considered the number of rabies in herbivores with laboratorial confirmation and according to the year of occurrence, animal species, and distributed by EDAs and by municipalities, provided by the Pasteur Institute-São Paulo. Data regarding 2001, the percentages of vaccination were grouped without the division into EDAs, due to the absence of data. From 2002, the data were divided into EDAs where vaccination has been declared obligatory, and data discriminated into properties that vaccinated and herbivores vaccinated against rabies. The number of captured vampire bats was provided by the respective EDAs. By analyzing the trends indicated by the properties that vaccinated against rabies and the herbivores vaccinated and the amount of vampire bats captured, it was observed a decrease in rabies cases in 90% or more, and with these results we conclude that for the control of rabies in herbivores, the easures adopted must be focused primarily in vaccinating the target animal species and in a well planned and organized measures of control directed to the main reservoirs, i.e., the Desmodus rotundus bats.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a memória de morcegos (Glossophaga soricina). Foram realizados quatro experimentos. No Experimento I, avaliou-se a preferência dos animais por soluções de sacarose cuja concentração variou entre 10 e 50%; mostrou-se que os animais exibem marcada preferência pela solução de sacarose a 20%. No Experimento II oito bebedouros, dois de cada um dos quatro tipos de formas utilizadas, foram disponibilizados em posições específicas de um painel, sendo que apenas dois deles, com a mesma forma, continham solução de sacarose a 20%; as formas associadas à sacarose assim como os locais variaram diariamente, ao longo de 25 dias de teste. Os resultados mostraram que (1) os animais aprendem rapidamente a lidar com o painel, (2) optam, em cerca de 80% das visitas de cada dia, pelos bebedouros que contêm a sacarose, e (3) nas tentativas iniciais de cada dia de testes, visitam preferencialmente os locais, mas não as formas, reforçados na noite anterior, indicando que sua memória espacial mantém a informação espacial por pelo menos 15 horas; porém, (4) abandonam esta última estratégia prontamente ao constatarem que ela não é efetiva, já que em cada dia os bebedouros reforçados encontram-se em locais distintos. O Experimento III essencialmente repetiu o Experimento II; porém, foram introduzidas uma ou duas alterações espaciais, mas mantida a forma, ao longo da mesma noite, como forma de avaliar a flexibilidade da alteração da estratégia espacial dos animais. Os resultados mostraram que nas tentativas iniciais após a alteração espacial na mesma noite os animais visitam os locais anteriormente reforçados, mas re-organizam suas visitas passando a direcionar-se para os novos locais que contém sacarose; porém, essa resposta é mais lenta que aquela observada em relação à noite anterior, sugerindo que a proximidade temporal em relação às visitas às últimas localidades reforçadas dificulta o abandono da visita a essas localidades. Além disso, quando da introdução de duas alterações na disposição espacial dos bebedouros numa mesma noite, observou-se que a reorganização das visitas aos novos locais reforçados é mais rápida. O Experimento IV reproduziu os resultados do Experimento II. No conjunto, esses resultados permitem concluir que morcegos da espécie G. soricina priorizam o uso de informações sobre locais em que alimento foi obtido, ao invés da forma, sendo capazes de re-orientar prontamente suas visitas face às alterações espaciais introduzidas no ambiente. / This study aimed at investigating memory functions of bats (Glossophaga soricina). Four experiments were run. In the Experiment I, preference for sucrose solutions which concentration varied between 10 and 50% was tested; it was shown that these animals exbibit a marked preference for 20% sucrose. In the Experiment II, eight drinkers, being two with the same shape of a total of four different shapes, were made available in specific locations of a panel such that only two of these drinkers, with the same shape, offered 20% sucrose; the shapes of the drinkers and places where they were made available in the panel varied daily, along 25 days. Results showed that (1) the bats promptly learned to obtain food from the drinkers in the panel, (2) 80% of the visits to drinkers in the panel were directed towards drinkers offering sucrose, and (3) at the early visits of every testing day the bats preferably visited the places, but not the shapes, where sucrose was made available the day before, indicating that their spatial memory lasted for at least 15 hours; however, (4) the animals abandomned this search as soon as they detected that it was not effective because in each day the drinkers offering sucrose were placed in different locations. Experiment III reproduced the Experiment II; however, either one of two spatial changes were introduced within the same day, while maintaining the shape rewarded, in order to evaluate the animals´ ability to flexibly react to the spatial change. Results showed that shortly after the spatial the animals direct their visits towards previously rewarded places, but that re-direct their visits towards the new locations; interestingly, this search change was slower when compared to that seen for the spatial change relative to the day before, indicating that the shorter was the time interval relative to the last rewarded locations, the harder was for the bats to re-directed their choices. In addition, when two spatial changes were introduced within the same day, the animals´ re-directioning was quicker after the second change relative to the first change. Experiment IV replicated the results of the Experiment II. Together, these results indicate that bats of this species priorize the use of spatial information about food sources, instead of the shape of these souces, being capable of quickly re-orient their seach when changes are detected.

Anticorpos monoclonais (AcMo) contra proteínas do vírus da raiva (RABV) foram produzidos para adequar a caracterização antigênica dos isolados no Brasil. Foram selecionados dois isolados de morcegos insetívoros, sendo um de Nyctinomops laticaudatus e outro de Eptesicus furinalis que apresentaram perfis não compatíveis (NC) com os pré-estabelecidos. As suspensões virais foram adaptadas para crescimento em cultura de células N2A. Para o preparo de AcMo foram utilizadas como antígeno as ribonucleoproteínas dos isolados selecionados. Foram obtidos dois AcMo, o 3A7 e o 4E10. Analisando 57 isolados de RABV com esses AcMo, o 3A7 reagiu com 21 (36,84%) e o 4E10 com 25 (43,85%). Dos 13 isolados caracterizados como variante antigênica 3 (Desmodus rotundus) o 3A7 reagiu com 8 (61,53%) e o 4E10 com 11 (84,61%). Dos 9 isolados com perfil NC em morcegos o 3A7 reagiu com 5 (55,55%) e o 4E10 com 4 (44,44%). Os anticorpos produzidos poderão auxiliar na complementação do painel existente de caracterização antigênica o que poderá aprimorar a vigilância epidemiológica da doença. / Monoclonal antibodies (MAb) against the rabies virus (RABV) proteins were produced to improve the antigenic characterization of the isolates in Brazil. Two isolates from insectivorous bats were selected; one was from the species Nyctinomops laticaudatus and the other from Eptesicus furinalis, which showed non-compatible (NC) profiles from pre-established ones. The viral suspensions were adapted for growth in N2A cells. Ribonucleoproteins from selected isolates were used as antigen for the preparation of Mab. We obtained two Mab, the 3A7 and the 4E10. Of the 57 RABV isolates analyzed with these MAb, the 3A7 reacted with 21 (36.84%) and 4E10 with 25 (43.85%). Of the 13 isolates characterized as antigenic variant 3 (Desmodus rotundus), the 3A7 MAb reacted with 8 (61.53%) and 4E10 with 11 (84.61%). Of the nine isolates with the profile NC of bats the 3A7 reacted with 5 (55.55%) and the 4E10 with 4 (44.44%). The antibodies produced may help to complement the existing panel to antigenic characterization which could improve the disease epidemiological surveillance.

O isolamento do vírus da raiva (genótipo 1) a partir de morcegos não hematófagos está se tornando cada vez mais freqüente nas grandes cidades do Brasil. Este trabalho foi delineado para investigar a patogenicidade de um isolado do vírus da raiva, do morcego insetívoro Lassiurus ega, procedente do município de Presidente Prudente SP, em comparação ao vírus fixo da raiva, amostra CVS/32 (Challenge Vírus Standard). Os vírus foram reativados por meio de inoculação intracerebral em camundongos e os experimentos de patogenicidade foram realizados em camundongos e hamsters, desafiando-os pelas vias intramuscular (IM), intradérmica (ID), intranasal (IN) e abrasão superficial da pele (AP). A presença do vírus nos cérebros de animais que haviam manifestado sinais compatíveis à raiva, foi confirmada mediante a prova de imunofluorescência direta. Foram considerados para a avaliação da patogenicidade o quadro clínico, proporção de mortos, e a duração dos períodos de incubação (PI) e clínicos (PC) em dias. Em hamsters, o isolado de L. ega exibiu um quadro furioso, com proporção total de mortos de 2.60%; assim discriminada: 2.08% IM (PI: 11 dias; PC: 6 dias) e 8.33% IN (PI:10.66 ± 1.15 e PC: 7.33 ± 1.54). A presença do vírus no SNC foi detectada apenas em animais inoculados por essas vias. Por outro lado, o vírus CVS produziu um quadro paralítico com mortalidade total de 39.84%, com a seguinte distribuição: 62.50% IM (PI 7.50 ± 2.33; PC: 5.13 ± 1.89) 78.12% ID (PI 9.13 ± 2.23; PC 3.88 ± 2.23) 18.75% IN (PI 12.00 ± 2.77; PC 7.14 ± 2.54). Em camundongos, o isolado do L. ega manifestou sinais de agressividade e a raiva foi confirmada em animais inoculados IM e IN. A proporção de mortos observados em camundongos foi de 50.00% (PI 16.80 ± 2.20; PC 1.4 ± 0.54) e 30% (PI 14 ± 4.35; PC: 2.66 ± 0.57) respectivamente e o vírus CVS produziu mortalidade de 45.00% (PI: 6.30 ± 0.67; PC: 1.5 ± 0.70), 70% (PI: 7.14 ± 1.34; PC 2.28 ± 1.25) e 30% (PI:10.00; PC:1) pelas vias mencionadas acima, com quadro clínico de paralisia. O isolado de L. ega mostrou diferenças na proporção de mortos e quadro clínico furioso quando comparado com o CVS nos dois modelos animais. Os resultados sugerem que o contato com os morcegos insetívoros infectados pelo vírus da raiva representa um risco de transmissão da doença, por meio de ferimentos superficiais da pele provocadas pelas mordeduras ou ainda pela via respiratória, supostamente por meio de aerossóis. Pelo sequenciamento completo da proteína G viral do isolado do L. ega, foram observadas substituições na seqüência de aminoácidos nos sítios antigênicos AI, AII, assim como no domínio de fusão dependente de baixo pH. Os resultados obtidos, sugerem que as diferenças no comportamento biológico podem estar associadas às substituições encontradas na sequencia de aminoácidos da proteína G. / The isolation of rabies virus (genotype 1) from the non-hematophagous bats is becoming frequent in heavy urbanized areas in Brazil. This work intended to investigate the pathogenicity of a Brazilian rabies virus isolate from the insectivorous bat Lassiurus ega, from PresidentePrudente-SP, comparing with the CVS/32 (Challenge Virus Standard) fixed rabies virus strain. The viruses were reactivated through intracerebral inoculation into mice and the pathogenicity experiments were made in hamsters and mice, challenged by intramuscular (IM), intradermal (ID) and intranasal (IN) routes and by superficial abrasion of skin. The presence of virus in the brain of animals manifesting the signs compatible with rabies was confirmed by the direct immunofluorescence test. For the evaluation of the pathogenicity, the clinical manifestations, incubation (IP) and clinical (CP) periods in days and the mortality were considered. In hamsters, the isolate of L. ega exhibited a furious form of rabies with total mortality rate of 2.60%, with following distribution: 2.08% IM (IP: 11 days; CP: 6 days) and 8.33% IN (IP: 10.66 ± 1.15 and PC: 7.33 ± 1.54). The presence of rabies virus in the CNS was detected only in animals inoculated through IM and IN routes. The CVS strain has provoked paralytic disease with a total mortality rate of 39.84% as the follow: 62.50% IM (IP 7.50 ± 2.33; CP: 5.13 ± 1.89), 78.12% ID (IP 9.13 ± 2.23; CP 3.88 ± 2.23) and 18.75% IN (IP 12.00 ± 2.77; CP 7.14 ± 2.54). In mice, the isolate of L. ega manifested signs of aggressiveness and rabies was confirmed in animals that were inoculated intramuscularly and intranasally. The total mortality rate observed in mice was 20%, by the IM route was 50% (IP 16.80 ± 2.20; CP 1.4 ± 0.54) and 30% by the intranasal route (IP 14.00 ± 4.35; CP: 2.66 ± 0.57) respectively. The CVS strain showed a total mortality rate of 45.00% and by the IM route, 100% (PI: 6.30 ± 0.67; CP: 1.5 ± 0.70), by the ID route, 70% (IP: 7.14 ± 1.34; CP 2.28 ± 1.25) and by IN, 30% (IP: 10, 00; C: 1.00) showing signs of paralysis. Compared to the CVS strain, the isolate of L. ega showed difference in mortality rate and signs of aggressiveness were found both in hamster and mouse model. The results suggest that the contact with the insectivorous bats infected with rabies virus would represent a risk of disease transmission, by means of superficial wounds of the skin inflicted by bites or by inhalation of aerosols. By the complete sequencing of the viral G protein of the isolate of L. ega, sequencings of amino acids substitutions were observed at antigenic sites AI, AII, as well as the in domain of fusion dependent on low pH. According to the results, differences in the biological behavior may be associated to the substitutions found in the amino acids sequence of the G protein.

Embora os morcegos sejam hospedeiros de tripanossomas de vários subgêneros, o conhecimento sobre a diversidade genética, variedade de hospedeiros, vetores, ciclos de vida, distribuição geográfica e relações filogenéticas desses tripanossomas é muito limitado. Neste estudo, caracterizamos tripanossomas de morcegos do Brasil e de Moçambique (África). A diversidade morfológica, biológica e genética e o relacionamento filogenético de espécies de Schizotrypanum revelaram os clados T. dionisii e T. c. marinkellei (restritos a morcegos) e T. cruzi. Nossos resultados permitiram descrever um novo genótipo de T. cruzi e uma nova espécie desse subgênero em morcegos africanos. Confirmamos, com análises filogenéticas, a presença de T. rangeli em morcegos e caracterizamos uma nova espécie, tradicionalmente classificada como Megatrypanum, mas filogeneticamente não posicionada neste subgênero. Novas análises, visando melhor resolver as filogenias e estimar tempos de divergências, são necessárias para inferir a hipótese mais provável para a história evolutiva desses tripanossomas. / Although bats are hosts of trypanosomes from several subgenera, our knowledge regarding their genetic diversity, host-range, vectors, life-cycles, geographical distribution and phylogenetic relationships is very limited. Here, we characterized bat trypanosomes from Brazil and Mozambique (Africa). Morphological, biological and genetic diversity, and phylogenetic relationships of Schizotrypanum species disclosed T. dionisii, T. c. marinkellei (bat restricted) and T. cruzi clades. Our findings also enabled the description of a new genotype of T. cruzi and a new species of this subgenus infecting African bats. We also reported T. rangeli in bats confirmed by phylogenetic analysis and characterized a new species of bat trypanosome traditionally classified as Megatrypanum, but not phylogenetically supported in this subgenus. Further analyses aiming better-resolved phylogenies and reliable molecular-clock model to estimate divergence times are required to infer the most likely hypothesis for the evolutionary history of bat trypanosomes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-26Bitstream added on 2014-06-13T19:25:11Z : No. of bitstreams: 1 bianconi_gv_dr_rcla.pdf: 2615245 bytes, checksum: e626d43cffce5b3b04c96086c87decdf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Filostomídeos frugívoros são considerados elementos-chave na conservação e restauração florestal dado à sua representatividade numérica (espécies e indivíduos), alto potencial de deslocamento e eficiência na dispersão de sementes. Técnicas que potencializem esse papel ecológico podem ter grande aplicação na recuperação de hábitats degradados, comuns à Mata Atlântica brasileira. Estudos com óleos essenciais isolados de frutos quiropterocóricos maduros sugeriram que eles podem ser utilizados para atrair e capturar morcegos frugívoros no interior de áreas florestais. Assim, a presente tese foi desenvolvida para fundamentar o caráter prático-funcional desta nova ferramenta, na medida em que se propôs a investigar os movimentos e o uso do hábitat fragmentado por espécies frugívoras, bem como as suas respostas a atrativos odoríferos instalados na matriz agropecuária de uma paisagem intensamente fragmentada no sul do Brasil (municípios de Fênix e São Pedro do Ivaí, estado do Paraná). Seus resultados indicaram uma atração altamente significativa dos morcegos aos óleos, um elevado potencial de dispersão de um grande número e diversidade de propágulos, e a possibilidade de manter os indivíduos por algum tempo sobrevoando pontos específicos da matriz, o que incrementaria, sobremaneira, a chuva-de-sementes no local. Os métodos de marcação/recaptura e radiotelemetria demonstraram existir uma alta mobilidade de Artibeus lituratus (Olfers, 1818) e Carollia perspicillata (Linnaeus, 1758), morcegos frugívoros mais comuns na região, dentro e entre os remanescentes florestais, com a utilização conjunta de diferentes elementos da paisagem (fragmentos, matriz agropecuária, pomares, rios, etc.). A matriz agropecuária da região parece não inibir os deslocamentos das espécies, padrão este relevante para o processo de dispersão de sementes e para a eficácia... / Frugivorous phyllostomids are considered key elements to forest conservation and restoration due to their representative number (species and individuals), high mobility, and efficiency as seed dispersers. Techniques to improve this ecological role can find great application in the recovery of degraded habitats, usually found in the Brazilian Atlantic Forest. Previous tests with essential oils from ripe chiropterochoric fruits suggested they can be used to attract and capture fruit-eating bats inside forest remnants. The present thesis was conducted to provide the basis to functional and practical characteristics of this new tool. Thus, we investigated the movements and use of a fragmented habitat by frugivorous species, as well as bats’ response to odor attractives installed in the agropecuary matrix of an extremely fragmented field at South Brazil (city of Fênix and São Pedro do Ivaí, State of Paraná). The results indicate a significant bat attraction to the essential oils, a great potential for dispersion of a large number and diversified seeds, the possibility of keeping bats flying for some time over specific locations of the matrix, which can increase significantly seeds dispersion in specific spots. By using mark/recapture and radiotelemetry techniques we observed high mobility of Artibeus lituratus (Olfers, 1818) and Carollia perspicillata (Linnaeus, 1758), the most common frugivorous bats in the study region , inside and between forests remnants with the combined use of different habitat attributes (fragments, agropecuary matrix, orchards, rivers, etc.). So, the regional agropecuary matrix does not seem to inhibit the movement of the species, which is an important behavior for seed dispersal and for the efficacy of the tool used for restoration of degraded areas.