O complexo de espécies crípticas de Anastrepha fraterculus compreende oito morfotipos dos quais três ocorrem no Brasil. Anastrepha sp.1 aff. fraterculus é o morfotipo Brasil-1 e é uma espécie de ampla distribuição no planalto sudeste/sul do Brasil e no norte da Argentina. O comportamento reprodutivo dessa espécie é complexo, envolvendo uma série de movimentos desempenhados pelos machos para atrair as fêmeas para acasalamento, e ocorre, preferencialmente, nas primeiras horas do dia. Dois genes, period e fruitless, entre outros, são conhecidos por participar do controle do comportamento reprodutivo de vários organismos, incluindo algumas espécies de moscas-das-frutas. O presente trabalho buscou informações sobre a atuação desses genes no comportamento reprodutivo de A. sp.1, utilizando o silenciamento transitório desses genes pela metodologia de RNA interferente. Foram, primeiramente, desenhados iniciadores específicos para amplificar fragmentos do DNA genômico desses genes, sendo demonstrado que apresentaram uma similaridade entre 97 a 99% com os genes equivalentes de outras espécies de Anastrepha. A seguir, após padronização e adaptação de protocolos, foram sintetizados os RNA de dupla-fita (dsRNA) dos dois genes, que foram, então, utilizados nos experimentos de silenciamento. Análises, para verificação se os genes foram realmente silenciados foram feitas a partir a injeção dos dsRNAfru e/ou dsRNAper no abdomên de machos sexualmente maduros, tendo sido demonstrado que os genes estavam silenciados ao máximo, sete a oito dias após a injeção. Interferências no comportamento de machos sexualmente maduros, com um ou outro gene silenciado, foram avaliados por testes relacionados com dois parâmetros do comportamento reprodutivo: alterações nas atividades gerais (qualquer tipo de movimentação dos insetos) dos machos durante o ciclo circadiano (dia/noite) e mais especificamente, a atividade relacionada ao comportamento reprodutivo. Ao injetar dsRNAfru em machos adultos de A. sp.1 foi observado que não houve alteração significativa nas suas atividades gerais. Porém, foi observado que houve uma diminuição significativa no número de machos que realizavam atividades reprodutivas, sugerindo que o silenciamento de fruitless no macho adulto altera o funcionamento normal do comportamento sexual masculino. Em contrapartida, ao injetar dsRNAper em machos adultos de A. sp.1 não foi observada alteração significativa tanto nas suas atividades reprodutivas quanto nas atividades gerais. O silenciamento dos genes aparentemente não afeta a produção de espermatozóides. Apesar de controverso, esses dados corroboram com o que foi observado em D. melanogaster, em que o mutante nulo per04 não apresenta alteração significativa nos seus comportamentos em relação aos machos selavagens em um regime cíclico Dia/Noite. Dessa forma, análises adicionais serão necessárias com o objetivo de elucidar as implicações desses dois genes no comportamento locomotor e reprodutivo de Anastrepha sp.1 aff. fraterculus. / The complex of cryptic species Anastrepha fraterculus comprises eight morphotypes three of which occur in Brazil. Anastrepha sp.1 aff. fraterculus correspond to the morphotype Brazil-1 and is a species of wide distribution in the southeast/south plateau of Brazil and in north of Argentina. The reproductive behavior of this species is complex, involving a series of movements performed by males to attract females for mating, and occurs in the early hours of the day. Two genes, period and fruitless, among others, are known to participate in the control of reproductive behavior of various organisms, including some species of fruit flies. The present work aimed to get information about the presumable role of these genes in the reproductive behavior of A. sp.1, using transient silencing of these genes by interfering RNA methodology. Specific primers were first designed to amplify fragments of the genomic DNA of these genes, showing they have a similarity between 97 to 99% with the equivalent genes of other Anastrepha species. After standardization and adaptation of protocols, the double-stranded RNA (dsRNA) of the two genes were synthesized, and used in the silencing experiments. Tests to verify that the genes were actually silenced, were made after injection of the dsRNAfru and/or dsRNAper into the abdomens of sexually mature males. These tests showed that the genes were silenced to the maximum, seven to eight days after the injection. Interferences in the behavior of sexually mature males with one or other silenced gene were evaluated by tests related to two parameters of reproductive behavior: changes in the general activities (any type of movement of insects) of males during the circadian cycle (day/night) and more specifically, activity related to reproductive behavior. Injection of dsRNAfru in adult males of A. sp.1 showed that they did not cause significant alterations in general activities, but it was observed that they cause a significant decrease in the number of males that performed reproductive activities, suggesting that silencing of fruitless. alters the normal functioning of male sexual behavior. In contrast, when injecting dsRNAper. in adult males of A. sp.1, no significant alteration was observed neither in their reproductive activities nor in their general activities. Moreover, silencing of the genes seems not to affect the production of spermatozoa. Although controversial, the data are in line with observations in D. melanogaster, in which the null mutant per04 did not present significant alterations in behaviors relatives to the control males in a Day/Night cyclic regime. Thus, additional analyzes will be needed to elucidate the participation of the two genes in the coordination of behaviors in Anastrepha sp.1 aff fraterculus.

Este trabalho teve por objetivo esclarecer a identidade de duas espécies próximas a Doryctobracon areolatus (Szépligeti) e de uma relacionada a Opius bellus Gahan, mencionada na literatura nacional como Opius sp. aff. bellus, por meio da morfometria geométrica e da análise das regiões do ITS2 do rDNA e 28S rDNA D2. As medidas das asas de D. areolatus, Doryctobracon sp. 1 e Doryctobracon sp. 2, O. bellus e Opius sp. aff. bellus, provenientes de diversas localidades brasileiras, foram estudadas por meio da morfometria geométrica. A avaliação de 20 pontos anatômicos nas asas, por meio de análise multivariada revelou a existência de variabilidade interpopulacional em 11 populações de D. areolatus, provenientes de localidades das cinco regiões brasileiras. O estudo morfométrico ainda revelou que Doryctobracon sp. 1 (estigma claro) e Doryctobracon sp. 2 (estigma escuro) diferem entre si e também de D. areolatus (Szépligeti). No entanto, entre os espécimes de O. bellus Gahan e Opius sp. aff. bellus, os resultados apontaram a coespecificidade desses indivíduos. Com base no tamanho do centróide, os resultados apontam a existência de dimorfismo sexual em relação ao tamanho das asas, ou seja, as fêmeas possuem asas relativamente maiores que as dos machos. Nas análises moleculares, os resultados indicaram a ocorrência de variabilidade intraespecífica, com relação ao tamanho do fragmento entre as populações de D. areolatus provenientes dos estados do AP, SP, GO e TO com a utilização dos dois marcadores moleculares (ITS2 e 28S rDNA D2). Porém, entre os espécimes de Doryctobracon sp. 1 (estigma claro) e de Doryctobracon sp. 2 (estigma escuro), essas regiões não variaram quanto ao tamanho, mas diferiram na composição das sequências, revelando que correspondem realmente a duas espécies. Portanto, houve congruência entre os resultados morfométricos e moleculares para essas espécies de Doryctobracon. Entre os espécimes identificados como Opius bellus e Opius sp. aff. bellus, a região do ITS2 indicou a ocorrência de variabilidade intrapopulacional, semelhante à interpopulacional, com elevada similaridade entre as morfoespécies analisadas. No entanto, a região do 28S rDNA D2 apresentou elevada similaridade entre as sequências obtidas, fortalecendo as indicações de que os espécimes considerados como O. bellus Gahan e Opius sp. aff. bellus, na realidade, pertencem à uma única espécie, conclusão também sustentada pelas análises morfométricas. / This study aimed to elucidate the identity of two-closely related species of Doryctobracon areolatus (Szépligeti) and a closely related species of Opius bellus Gahan, commonly referred to as Opius sp. aff. bellus, by using geometric morphometry and molecular analysis (ITS2 rDNA and 28S rDNA D2 regions). The analysis based on 20 landmarks through the multivariate analysis (CVA) revealed the existence of interpopulation variability in the wing morphology of 11 populations of D. areolatus, from five Brazilian regions. The morphometric study also showed that specimens of Doryctobracon sp. 1 (clear stigma) and Doryctobracon sp. 2 (dark stigma) were distinct between themselves and also from D. areolatus (Szépligeti). However, specimens of O. bellus Gahan and Opius sp. aff. bellus were found to be cospecifics. Analysis based on the centroid size indicated the existence of sexual dimorphism in relation to the size of the wings, ie, females had relatively larger wings than males. The molecular analysis indicated intraspecific variability in the size of the fragment between populations of D. areolatus from Amapá, São Paulo, Goiás and Tocantins states for both of the molecular markers used (ITS2 and 28S D2 rDNA). But these markers had similar sizes for Doryctobracon sp. 1 (stigma clearly) and Doryctobracon sp. 2 (dark stigma), with a very different base composition, indicating the existence of two distinctive species. Both molecular and morphometric analysis gave similar results. Among the specimens identified as Opius bellus and Opius sp. aff. bellus, analysis of the ITS2 region indicated the intrapopulation variability was similar to the interpopulation, with high similarity between the morphospecies analyzed. However, the region of the 28S D2 rDNA showed high similarity between the sequences obtained, reinforcing the indication that the specimens taken as O. bellus Gahan and Opius sp. aff. bellus in fact, belong to the same species, which was also supported by morphometric analysis.

This work is part of a wider project than it seeks to make risings, revise, describe, publish the taxonomy and help on the systematic, with publication of the illustrations of species morphology of parasitoids species acurring the Rio Grande do Sul. The data of the parasitoids associated were related with Brassolis astyra Godart, 1824 and Opsiphanes invirae amplificatus Stichel (1904) bionomy, from observations and capture in four places of the state of Rio Grande do Sul: São Martinho da Serra (SMS), Tupanciretã (TP), Santa Maria (SM) and Camobi-Berleze (BE). The parameters analyzed to Brassolis astyra were: postures biometry, pupae longevity average, adults' average emergency rates, adult s body wight and volume, pupae and wings morfometrics from anatomic landmarks. Eggs collected in Tupanciretã (TP), urban area, hatched 46%, and were parasited 43% and 11% failure. However, eggs of the São Martinho da Serra (SMS), natural area, 4% hatched, 95% were parasited and 1% failure. With base in the adults emergency from pupae 77% of males and females presented a normal morphology (viable) and 23% were malformed. Xanthozona melanopyga was registered (Wiedmann, 1830) (Diptera: Tachinidae) as parasite of Brassolis astyra pupae. In Opsiphanes invirae amplificatus the parasitoids observed were: Conura maculata (Fabricius, 1787) and Cotesia alius (Muesebeck, 1958) (Hymenoptera: Braconidae: Microgastrinae). Conura maculata, pupae parasitoid, is the first record to the Rio Grande do Sul. Are presented too data about the emergency time, the adults' longevity and sexual rate. It is presented, also, an ilustrated description of the main external morphologic characteristics of the species. Cotesia alius, caterpillar parasitoid, is the first record for Rio Grande do Sul state, also. The study present data about the cocoons and average cocoons number, by posture, and the emergency time elapsed, the adults' longevity and sexual rate. Four Eulophidae family species were observed hyperparasiting C. alius cocoons: Horismenus opsiphanis Schrottky, 1909 and Horismenus sp. (Entedoninae), a new specie according to Dr. Christer Hansson (Lund University, Sweden); and the Oomyzus Sokolowskii Kurdjumov, 1912 and Aprostocetus sp., (Tetrastichinae), new specie also, according to Dr. John La Salle (Commonwealth Scientific Industrial and Research Organisation, Australia), can be considered a new specie too. Diagnoses of all parasitoids are presented, including the new species. / Este trabalho faz parte de um projeto mais amplo que visa efetuar levantamentos, revisar, descrever, divulgar a taxonomia e auxiliar na sistemática com a publicação de ilustrações da morfologia das espécies de parasitóides ocorrentes no Rio Grande do Sul. Neste estudo são analisados dados relacionados á bionomia de Brassolis astyra Godart, 1824 e Opsiphanes invirae amplificatus Stichel (1904) e dos parasitóides associados, com base em observações e coletas em quatro localidades do estado do Rio Grande do Sul: São Martinho da Serra (SMS), Tupanciretã (TP), Santa Maria (SM) e bairro Camobi - Berleze (BE). Em Brassolis astyra os parâmetros analisados foram: biometria das posturas, longevidade média das pupas, taxa média de emergência de adultos, massa das pupas e dos adultos, volume das pupas, e morfometria das pupas e das asas a partir de marcos anatômicos. Dos ovos coletados em Tupanciretã (TP), área urbana, 46 % eclodiram, 43 % foram parasitados e 11% malograram. Entretanto, dos ovos coletados em São Martinho da Serra (SMS), área natural, 4% eclodiram, 95% foram parasitados e 1% malograram. Com base nos adultos emergidos a partir das pupas, verificou-se que 77% dos machos e das fêmeas apresentaram uma morfologia normal (viável) e 23% eram malformadas. Neste estudo foi registrada Xanthozona melanopyga (Wiedmann, 1830) (Díptera: Tachinidae), parasita de pupas de Brassolis astyra. Em Opsiphanes invirae amplificatus os parasitóides observados foram: Conura maculata (Fabricius, 1787) e Cotesia alius (Muesebeck, 1958) (Hymenoptera: Braconidae: Microgastrinae). Conura maculata, parasitóide de pupas, é o primeiro registro para o Rio Grande do Sul. São apresentados dados sobre o tempo de emergência, longevidade dos adultos e proporção sexual. Apresentada, também, uma descrição ilustrada das principais características morfológicas externas da espécie. Cotesia alius, parasitóide de larvas é, também, primeiro registro para o estado do Rio Grande do Sul. Neste estudo são apresentados dados sobre o número de casulos e número médio de casulos por postura e dados sobre o tempo e emergência, longevidade dos adultos e proporção sexual. Além destas duas espécies, foram observadas quatro espécies de Eulophidae hiperparasitando casulos de C. alius: Horismenus opsiphanis Schrottky, 1909 e Horismenus sp. (Entedoninae), espécie nova, segundo Dr. Christer Hansson (Lund University, Suécia) e, ainda, Oomyzus Sokolowskii Kurdjumov, 1912 e Aprostocetus sp. (Tetrastichinae), que segundo Dr. John La Salle (Commonwe a l th Sc i ent i f i c and Indus t r i a l Re s e a r ch Organi s a t ion, Aus t r á l i a ) pode s er t ambém uma nova e spé ci e . São apresentadas diagnoses de todos os Hymenopteros e Dipteros coletados, incluindo as espécies novas.

Submitted by Katiane Souza (katyane.souza@gmail.com) on 2016-04-21T20:39:52Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 509498 bytes, checksum: 4940c4b10d51a38a097202050e82acb4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-21T20:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 509498 bytes, checksum: 4940c4b10d51a38a097202050e82acb4 (MD5) Previous issue date: 2007-05-25 / Matinhas municipality with approximately 1.3 million of tangerine tree (Citrus reticulata Blanco) ‘Dancy’ variety is responsible for 90% by tangerine production of the State of Paraíba. Frugivorous flies assumed economic importance in commercial tangerine groves because they cause premature dropping of fruits and significantly decrease of havest. The research was carried out in five geographic regions of Matinhas, municipality where twenty fruits on plant and twenty fruits under the plant had been collected, with the aim to search the occurrence of frugivorous flies and its levels of infestation in tangerine. Gotten results on occurrence showed that tangerine is infested by frugivorous flies Ceratitis capitata (Wiedmann, 1824), Neosilba zadolicha (McAlpine & Steyskal) and Neosilba glaberrima (Wiedmann, 1830). The infestation index mean of C. capitata in five regions did not exceed 0.5 pupae/fruit. The emergence percentage of (EP) of adults of C. capitata in fruits collected in plant and soil varied among 14.0 and 54.0% of adults/fruit. The gotten infestation index for N. zadolicha had variation among 0.4 and 4.3 pupaes/fruit. The data of emergence percentage (EP) of N. zadolicha had variation among 49.9 and 65.9% of adults/fruit, that specie being considered the most abundant and with high tax of survival. N.zadolicha specie was chosen as a primary and economic importance pest to tangerine fruit in Matinhas conditions. This is, also, the first report of these species N. zadolicha and N. glaberiima causing infestation in tangerine fruits in State of Paraíba. / O município de Matinhas com aproximadamente 1,3 milhões de plantas de tangerina (Citrus reticulata Blanco) variedade ‘Dancy’ é responsável por 90% da produção do Estado da Paraíba. As moscas frugívoras assumiram importância econômica devido à infestação em frutos e redução significativa na colheita. A pesquisa foi conduzida em cinco regiões geográficas do município de Matinhas, onde foram coletados vinte frutos na copa e vinte sob a copa da planta, objetivando pesquisar a ocorrência de moscas frugívoras e seus níveis de infestação em tangerina. Os resultados obtidos evidenciaram que a tangerina é infestada por Ceratitis capitata (Wiedmann,1824), Neosilba zadolicha (McAlpine & Steyskal) e Neosilba glaberrima (Wiedmann,1830). O índice médio de infestação de C. capitata nas cinco regiões não ultrapassou 0,5 pupa/fruto. A percentagem de emergência (PE) de C. capitata em frutos coletados na planta e solo variou entre 14,0 a 54,0% de adultos/fruto. Os índices de infestação de N. zadolicha em frutos coletados na planta e solo, variaram entre 0,4 a 4,3 pupários/fruto. Os dados da percentagem de emergência (PE) de N. zadolicha variaram entre 49,9 a 65,9% de adultos/fruto sendo considerada a espécie mais abundante, freqüente, dominante e com uma alta taxa de sobrevivência. N. zadolicha foi considerada praga primária da tangerina nas condições de Matinhas. Este é, também, o primeiro relato das espécies N. zadolicha e N. glaberrima infestando tangerina na Paraíba.

Desenvolvemos um protocolo experimental para estudar a codificação do movimento horizontal pelo neurônio H1 de moscas varejeiras Chrysomya megacephala durante o voo. Tradicionalmente, o neurônio H1 é considerado puramente sensorial, e a maioria dos trabalhos tem utilizado o trem de potenciais de ação deste neurônio para explorar o código neural visual da mosca enquanto esta se encontra imobilizada (cabeça, asas, patas) e observa passivamente uma imagem que se move de maneira controlada. Nosso laboratório já dispunha de um aparato para registrar de maneira adequada a atividade do H1, enquanto a mosca imobilizada observava um padrão de barras verticais se movendo de acordo com uma sequência de velocidades previamente escolhidas pelo experimentador. Por meio de um novo suporte, especialmente desenvolvido neste trabalho, pudemos obter as medidas eletrofisiológicas quando apenas parte do corpo do inseto se encontra fixo. Além disso, conseguimos encontrar uma maneira de estimular a mosca para que esta apresentasse períodos de atividade, com batimentos de asa, similares ao voo. Utilizamos estes períodos de atividade de voo para registrar a atividade dos músculos que controlam a direção do voo. Também utilizamos microfones que captam pequenas diferenças de pressão do batimento das asas para inferir quando a mosca quer mudar a direção do voo e validamos estas medidas com o auxílio de um pequeno acelerômetro adaptado à haste de fixação da mosca. Mostramos que a taxa média de disparo do H1 é mais alta quando a mosca está voando do que quando está com as asas paradas. Além disso, a resposta ao estímulo visual é mais rápida e mais intensa quando a mosca está voando. Estes resultados são evidências de que a codificação da informação visual é diferente nos dois casos. Nossos experimentos com registro da atividade de controle motor do voo através de microfones permitiram encontrar padrões que podem ser usados para inferir a tentativa do inseto de mudar a direção do voo, em um intervalo de poucas batidas de asas e de maneira não invasiva. Esta informação poderá ser utilizada no futuro para produzir um equipamento em que a própria mosca controle o movimento da imagem em tempo real. / We developed a protocol do address the movement information coding in flying Chrysomya Megacephala by the horizontal sensitive H1neuron. H1 is traditionally considered a purely sensory neuron and his sequence of action potentials is used to explore the visual neural code while an immobilized fly passively watch a movie generated by the experimenter. We improved an apparatus to perform such experiments, that was already working in our laboratory, by developing a new holder for the fly and electrode that allowed to record from H1 while only part of the fly was fixed, keeping wings and legs free to move. Moreover we found a protocol to stimulate the fly to present long periods of wing beating activity, very similar to the insect flying. During these flying periods of activity, we also recorded from the steering muscles that control fly direction as well as from small microphones sensitive to subtle pressure variations of the beating wings when the fly try to change direction. These recordings were validated by using an accelerometer adapted to the fly fixation rod. According to our results, the firing rate of H1 increases during the flying periods. Moreover, the response to visual stimuli is faster and more intense during the flying than the response when the wings are not beating. These are evidences that the information coding is different in both cases. We could also find some patterns in the time series of the microphones recordings that allowed us to infer, in a small number of wing beatings, when the insect tries to turn and what is the turning direction. This information can be useful to perform new experiments in the future, were the fly controls in real-time the image movement.

Tanto as técnicas de controle biológico quanto a Técnica do inseto estéril (TIE), são utilizadas em vários países para o controle, supressão e até mesmo erradicação de moscas-das-frutas e outras pragas da agricultura, pecuária e saúde publica. O uso de tais técnicas minimiza o emprego contínuo de inseticidas, protege o ambiente e se adequa aos padrões de segurança alimentar. No entanto, é necessário para a implementação de tais programas, tecnologia para produzir milhões de parasitóides e a própria praga em laboratório com qualidade biológica similar aos insetos encontrados na natureza e com custo competitivo com o controle químico. Os objetivos deste trabalho foi estabelecer protocolos para criação artificial de A. sp. 1 aff. fraterculus em dieta larval líquida que permita atingir níveis de criação massal, para uma possível diminuição no custo da criação e determinar a dose de radiação esterilizante para adultos de A. sp. 1 aff. fraterculus atendendo os parâmetros de qualidade exigidos pela Técnica do Inseto Estéril com insetos provenientes da criação do Laboratório de Radioentomologia do CENA/USP. Foram testadas sete dietas em relação à dieta convencional utilizada no laboratório de Radioentomologia do CENA/USP, que foi usada como controle. Todas as sete dietas tiveram em comum a exclusão do ágar na sua formulação. Somente duas das dietas testadas foram adequadas para o desenvolvimento larval da mosca, estas quando comparadas com a dieta padrão, apresentaram resultados inferiores com relação ao volume de larvas recuperadas, emergência e o peso das pupas, porém, não apresentaram diferenças significativas quanto aos períodos de desenvolvimento, recuperação pupal, razão sexual e longevidade sob estresse. Concluí-se que é possível a substituição da dieta com ágar por dietas líquidas para criação artificial de A. sp.1 aff. fraterculus, de custo reduzido e com maior praticidade de manejo,porém devidos aos seus parâmetros de qualidade inferiores aos da dieta padrão, são necessários maiores testes principalmente quanto à adaptabilidade do inseto ao novo meio. Para determinar a dose esterilizante o presente trabalho analisou a fertilidade, fecundidade, emergência, habilidade de vôo e longevidade sob estresse de A. fraterculus irradiadas com doses de 40, 50, 60, 70 e 80 Gy. A fonte de radiação gama foi um irradiador de Co-60 (Gammabeam-650) localizado no mesmo laboratório. Os testes foram realizados sob as seguintes condições ambientais: 26 ± 1 ° C, 70 ± 5% RH, e fotofase de 12:12. A dose de r adiação gama esterilizante para machos de A. sp. 1 aff. fraterculus foi determinada sendo 70 Gy. Fêmeas irradiadas, mesmo com a dose mais baixa de 40 Gy, não ovipositaram, possivelmente pela atrofia dos ovários causada pela radiação. A radiação não afetou os demais parâmetros de qualidade do inseto como emergência, longevidade e habilidade de vôo / Both the biological control techniques as the Sterile Insect Technique (SIT), are used in many countries to control, suppress and even eradicate fruit flies and other pests in agriculture and public health. The use of such techniques minimizes the continuous employment of insecticides, protects the environment and conforms to standards for food safety. However, it is necessary to implement such programs, technology to produce millions of parasitoids and the pest in its own laboratory with biological quality similar to the insects found in nature and cost competitive with chemical control. The objectives of this study was to establish protocols for artificial rearing of A. sp. 1 aff. fraterculus in liquid larval diet that will achieve levels of mass production for a possible reduction in the cost of establishing and determining the dose of radiation sterilization of adult A. sp. 1 aff. fraterculus meeting the quality parameters required by the Sterile Insect Technique with insects from the creation of Radioentomologia Laboratory of CENA / USP. Seven experimental diets compared to the conventional diet used in laboratory Radioentomologia of CENA / USP, which was used as control. All seven diets have in common the exclusion of agar in its formulation. Only two of the diets tested were suitable for larval development of the fly, they compared with the standard diet, showed inferior results with respect to the volume of recovered larvae, pupae and weight of emergency, however, no significant differences regarding the periods of development , pupal recovery, sex ratio and longevity under stress. It is possible to replace the diet with agar for liquid diets for artificial creation of A. sp.1 aff. fraterculus, reduced cost and greater convenience of handling, but due to their quality standards lower than the standard diet, more tests are needed especially regarding the adaptability of the insect to the new environment. To determine the sterilizing dose this study examined the fertility, fecundity, emergence, flight ability and longevity under stress in A. fraterculus irradiated with 40, 50, 60, 70 and 80 Gy. The radiation source was a gamma irradiator with a Co-60 (Gammabeam-650) located in the same laboratory. The tests were performed under the following environmental conditions: 26 ± 1 ° C, 70 ± 5% RH and photoperiod of 12:12. The dose of gamma radiation sterilization for male A. sp. 1 aff. fraterculus was determined with 70 Gy. Irradiates females, even with the lower dose of 40 Gy, layed no eggs, possibly due to atrophy of the ovaries caused by radiation. The radiation did not affect the other quality parameters such as insect emergence, longevity and ability to fly

Entre os inimigos naturais das moscas-das-frutas, os representantes da subfamília Opiinae (Hymenoptera: Braconidae) têm sido os mais utilizados em programas de controle biológico. Entretanto, algumas espécies da subfamília Alysiinae são comumente relacionadas ao parasitismo desses dípteros, em particular Asobara anastrephae (Muesebeck). No estudo da eficiência desses parasitóides é de fundamental importância o conhecimento dos estímulos utilizados para a localização do hábitat de seus hospedeiros. Dessa forma, foram avaliadas as respostas olfativas do parasitóide exótico Diachasmimorpha longicaudata Ashmead, e dos nativos, Doryctobracon areolatus (Szépligeti) e A. anastrephae a frutos de goiaba (Psidium guajava L.) com e sem larvas de moscasdas- frutas, em condições de laboratório. D. longicaudata e D. areolatus foram também estudados em telado. As fêmeas de D. longicaudata e de D. areolatus responderam aos odores de frutos podres não-infestados, embora D. areolatus também tenha sido atraído aos frutos em maturação inicial (de vez). As fêmeas dessas espécies demonstraram reconhecer os voláteis de frutos com larvas de Ceratitis capitata (Wied.). No entanto, em bioensaios realizados com frutos contendo larvas de diferentes instares, as fêmeas de D. longicaudata não foram capazes de separar frutos com larvas dos primeiros instares dos de terceiro instar de C. capitata. Nas avaliações dos voláteis liberados dos frutos com larvas de C. capitata e de Anastrepha fraterculus (Wied.), as fêmeas de D. longicaudata orientaram-se aos voláteis dos frutos com ambas as espécies de hospedeiros, mas diferiram significativamente dos voláteis com larvas de C. capitata. As fêmeas de D. areolatus também demonstraram respostas para ambas as espécies, mas diferiram significativamente dos voláteis de frutos com larvas de A. fraterculus. As fêmeas de A. anastrephae orientaram-se de forma similar para os campos com odores de frutos infestados com ambas as espécies de moscas-dasfrutas. Em área coberta (telado), as fêmeas de D. longicaudata orientaram-se pelos voláteis de frutos podres com e sem larvas, porém não diferenciaram significativamente os hospedeiros. As fêmeas de D. areolatus não foram atraídas para os frutos nas gaiolas no solo independentemente do hospedeiro, sugerindo que este parasitóide não forrageia em frutos caídos. / Parasitoids of the Opiinae subfamily (Hymenoptera: Braconidae) are among the most used natural enemies in fruit fly control programs. Furthermore, some species of the subfamily Alysiinae, such as Asobara anastrephae (Muesebeck), are commonly associated to the parasitism of these dipterans. The study of efficiency of parasitoids is essential in order to understand the mechanisms that regulate both prey and habitat searching behavior of natural enemies. In this work we evaluated the behavioral response of the native parasitoid species Doryctobracon areolatus (Szépligeti), A. anastrephae as well as the exotic species Diachasmimorpha longicaudata Ashmead, to guava fruit (Psidium guajava L.) with and without fruit flies larvae under laboratory conditions. In addition, behavioral response of D. longicaudata and D. areolatus were also determined under natural conditions. Parasitoid females of D. longicaudata and D. areolatus responded to volatiles from non-infested fermented fruits, moreover D. areolatus also attracted to fruits on initial maturation. Both species recognized volatiles from fruits infested with Ceratitis capitata (Wied.) larvae; however D. longicaudata females were unable to differentiate volatiles from fruit infested with different larval instars of C. capitata. Olfactometer choice bioassays showed that females of both parasitoid species oriented to volatiles released from fruits infested with C. capitata and Anastrepha fraterculus (Wied.) larvae, however preference differed significantly for volatiles associated with each fruit fly species. Under natural conditions, D. longicaudata was attracted to volatiles released from infested and non-infested fermented fruits. Nevertheless, D. areolatus did not respond to volatiles from infested fruits placed on the ground, suggesting that this species do not prey on fallen fruits.

Este trabalho teve por objetivo esclarecer a identidade de duas espécies próximas a Doryctobracon areolatus (Szépligeti) e de uma relacionada a Opius bellus Gahan, mencionada na literatura nacional como Opius sp. aff. bellus, por meio da morfometria geométrica e da análise das regiões do ITS2 do rDNA e 28S rDNA D2. As medidas das asas de D. areolatus, Doryctobracon sp. 1 e Doryctobracon sp. 2, O. bellus e Opius sp. aff. bellus, provenientes de diversas localidades brasileiras, foram estudadas por meio da morfometria geométrica. A avaliação de 20 pontos anatômicos nas asas, por meio de análise multivariada revelou a existência de variabilidade interpopulacional em 11 populações de D. areolatus, provenientes de localidades das cinco regiões brasileiras. O estudo morfométrico ainda revelou que Doryctobracon sp. 1 (estigma claro) e Doryctobracon sp. 2 (estigma escuro) diferem entre si e também de D. areolatus (Szépligeti). No entanto, entre os espécimes de O. bellus Gahan e Opius sp. aff. bellus, os resultados apontaram a coespecificidade desses indivíduos. Com base no tamanho do centróide, os resultados apontam a existência de dimorfismo sexual em relação ao tamanho das asas, ou seja, as fêmeas possuem asas relativamente maiores que as dos machos. Nas análises moleculares, os resultados indicaram a ocorrência de variabilidade intraespecífica, com relação ao tamanho do fragmento entre as populações de D. areolatus provenientes dos estados do AP, SP, GO e TO com a utilização dos dois marcadores moleculares (ITS2 e 28S rDNA D2). Porém, entre os espécimes de Doryctobracon sp. 1 (estigma claro) e de Doryctobracon sp. 2 (estigma escuro), essas regiões não variaram quanto ao tamanho, mas diferiram na composição das sequências, revelando que correspondem realmente a duas espécies. Portanto, houve congruência entre os resultados morfométricos e moleculares para essas espécies de Doryctobracon. Entre os espécimes identificados como Opius bellus e Opius sp. aff. bellus, a região do ITS2 indicou a ocorrência de variabilidade intrapopulacional, semelhante à interpopulacional, com elevada similaridade entre as morfoespécies analisadas. No entanto, a região do 28S rDNA D2 apresentou elevada similaridade entre as sequências obtidas, fortalecendo as indicações de que os espécimes considerados como O. bellus Gahan e Opius sp. aff. bellus, na realidade, pertencem à uma única espécie, conclusão também sustentada pelas análises morfométricas. / This study aimed to elucidate the identity of two-closely related species of Doryctobracon areolatus (Szépligeti) and a closely related species of Opius bellus Gahan, commonly referred to as Opius sp. aff. bellus, by using geometric morphometry and molecular analysis (ITS2 rDNA and 28S rDNA D2 regions). The analysis based on 20 landmarks through the multivariate analysis (CVA) revealed the existence of interpopulation variability in the wing morphology of 11 populations of D. areolatus, from five Brazilian regions. The morphometric study also showed that specimens of Doryctobracon sp. 1 (clear stigma) and Doryctobracon sp. 2 (dark stigma) were distinct between themselves and also from D. areolatus (Szépligeti). However, specimens of O. bellus Gahan and Opius sp. aff. bellus were found to be cospecifics. Analysis based on the centroid size indicated the existence of sexual dimorphism in relation to the size of the wings, ie, females had relatively larger wings than males. The molecular analysis indicated intraspecific variability in the size of the fragment between populations of D. areolatus from Amapá, São Paulo, Goiás and Tocantins states for both of the molecular markers used (ITS2 and 28S D2 rDNA). But these markers had similar sizes for Doryctobracon sp. 1 (stigma clearly) and Doryctobracon sp. 2 (dark stigma), with a very different base composition, indicating the existence of two distinctive species. Both molecular and morphometric analysis gave similar results. Among the specimens identified as Opius bellus and Opius sp. aff. bellus, analysis of the ITS2 region indicated the intrapopulation variability was similar to the interpopulation, with high similarity between the morphospecies analyzed. However, the region of the 28S D2 rDNA showed high similarity between the sequences obtained, reinforcing the indication that the specimens taken as O. bellus Gahan and Opius sp. aff. bellus in fact, belong to the same species, which was also supported by morphometric analysis.

O complexo de espécies crípticas de Anastrepha fraterculus compreende oito morfotipos dos quais três ocorrem no Brasil. Anastrepha sp.1 aff. fraterculus é o morfotipo Brasil-1 e é uma espécie de ampla distribuição no planalto sudeste/sul do Brasil e no norte da Argentina. O comportamento reprodutivo dessa espécie é complexo, envolvendo uma série de movimentos desempenhados pelos machos para atrair as fêmeas para acasalamento, e ocorre, preferencialmente, nas primeiras horas do dia. Dois genes, period e fruitless, entre outros, são conhecidos por participar do controle do comportamento reprodutivo de vários organismos, incluindo algumas espécies de moscas-das-frutas. O presente trabalho buscou informações sobre a atuação desses genes no comportamento reprodutivo de A. sp.1, utilizando o silenciamento transitório desses genes pela metodologia de RNA interferente. Foram, primeiramente, desenhados iniciadores específicos para amplificar fragmentos do DNA genômico desses genes, sendo demonstrado que apresentaram uma similaridade entre 97 a 99% com os genes equivalentes de outras espécies de Anastrepha. A seguir, após padronização e adaptação de protocolos, foram sintetizados os RNA de dupla-fita (dsRNA) dos dois genes, que foram, então, utilizados nos experimentos de silenciamento. Análises, para verificação se os genes foram realmente silenciados foram feitas a partir a injeção dos dsRNAfru e/ou dsRNAper no abdomên de machos sexualmente maduros, tendo sido demonstrado que os genes estavam silenciados ao máximo, sete a oito dias após a injeção. Interferências no comportamento de machos sexualmente maduros, com um ou outro gene silenciado, foram avaliados por testes relacionados com dois parâmetros do comportamento reprodutivo: alterações nas atividades gerais (qualquer tipo de movimentação dos insetos) dos machos durante o ciclo circadiano (dia/noite) e mais especificamente, a atividade relacionada ao comportamento reprodutivo. Ao injetar dsRNAfru em machos adultos de A. sp.1 foi observado que não houve alteração significativa nas suas atividades gerais. Porém, foi observado que houve uma diminuição significativa no número de machos que realizavam atividades reprodutivas, sugerindo que o silenciamento de fruitless no macho adulto altera o funcionamento normal do comportamento sexual masculino. Em contrapartida, ao injetar dsRNAper em machos adultos de A. sp.1 não foi observada alteração significativa tanto nas suas atividades reprodutivas quanto nas atividades gerais. O silenciamento dos genes aparentemente não afeta a produção de espermatozóides. Apesar de controverso, esses dados corroboram com o que foi observado em D. melanogaster, em que o mutante nulo per04 não apresenta alteração significativa nos seus comportamentos em relação aos machos selavagens em um regime cíclico Dia/Noite. Dessa forma, análises adicionais serão necessárias com o objetivo de elucidar as implicações desses dois genes no comportamento locomotor e reprodutivo de Anastrepha sp.1 aff. fraterculus. / The complex of cryptic species Anastrepha fraterculus comprises eight morphotypes three of which occur in Brazil. Anastrepha sp.1 aff. fraterculus correspond to the morphotype Brazil-1 and is a species of wide distribution in the southeast/south plateau of Brazil and in north of Argentina. The reproductive behavior of this species is complex, involving a series of movements performed by males to attract females for mating, and occurs in the early hours of the day. Two genes, period and fruitless, among others, are known to participate in the control of reproductive behavior of various organisms, including some species of fruit flies. The present work aimed to get information about the presumable role of these genes in the reproductive behavior of A. sp.1, using transient silencing of these genes by interfering RNA methodology. Specific primers were first designed to amplify fragments of the genomic DNA of these genes, showing they have a similarity between 97 to 99% with the equivalent genes of other Anastrepha species. After standardization and adaptation of protocols, the double-stranded RNA (dsRNA) of the two genes were synthesized, and used in the silencing experiments. Tests to verify that the genes were actually silenced, were made after injection of the dsRNAfru and/or dsRNAper into the abdomens of sexually mature males. These tests showed that the genes were silenced to the maximum, seven to eight days after the injection. Interferences in the behavior of sexually mature males with one or other silenced gene were evaluated by tests related to two parameters of reproductive behavior: changes in the general activities (any type of movement of insects) of males during the circadian cycle (day/night) and more specifically, activity related to reproductive behavior. Injection of dsRNAfru in adult males of A. sp.1 showed that they did not cause significant alterations in general activities, but it was observed that they cause a significant decrease in the number of males that performed reproductive activities, suggesting that silencing of fruitless. alters the normal functioning of male sexual behavior. In contrast, when injecting dsRNAper. in adult males of A. sp.1, no significant alteration was observed neither in their reproductive activities nor in their general activities. Moreover, silencing of the genes seems not to affect the production of spermatozoa. Although controversial, the data are in line with observations in D. melanogaster, in which the null mutant per04 did not present significant alterations in behaviors relatives to the control males in a Day/Night cyclic regime. Thus, additional analyzes will be needed to elucidate the participation of the two genes in the coordination of behaviors in Anastrepha sp.1 aff fraterculus.

Os estudos de diversidade de espécies são importantes para compreender os aspectos ecológicos das comunidades de moscas-das-frutas. Todavia, nos estudos de diversidade de moscas-das-frutas, têm sido discutidos principalmente os espécimes coletados em armadilhas tipo McPhail. Entretanto, no presente estudo, além dos dados de armadilhas, a diversidade foi também baseada nas moscas-das-frutas obtidas diretamente dos hospedeiros. Destsa forma, foi realizada, pela primeira vez, uma análise comparativa de espécies de Anastrepha coletadas em uma mesma área em armadilhas e nos hospedeiros. A diversidade de espécies de Anastrepha foi discutida, pela primeira vez, por meio da modelagem espacial. O levantamento de moscas-das-frutas foi realizado em 48 pontos de coleta distribuídos pelo campus \"Luiz de Queiroz\", Piracicaba, SP. Uma armadilha, contendo proteína hidrolisada de milho, foi instalada em cada ponto de coleta e os hospedeiros foram amostrados nas proximidades. As coletas com armadilhas foram realizadas semanalmente de julho de 1998 a junho de 1999. Os hospedeiros (26 espécies) foram amostrados de janeiro a dezembro de 1999. As espécies de Anastrepha coletadas nos dois métodos foram comparadas por meio de parâmetros faunísticos, índices de diversidade e flutuação populacional. As moscas-das-frutas obtidas nos hospedeiros foram comparadas por meio da análise de agrupamento (Sorensen e Bray-Curtis). A interação das espécies, nos dois métodos de coleta, foi baseada no heat map graph. O padrão de distribuição da diversidade foi analisado por meio de modelagem espacial (Krigagem). Foram coletadas 19.660 fêmeas de espécies de Anastrepha em armadilhas e 10.453 nos hospedeiros. Foram capturadas mais espécies de Anastrepha nas armadilhas (18) do que nos hospedeiros (7). Nas armadilhas, A. fraterculus, A. obliqua, A. bistrigata, A. pseudoparallela, A. barbiellinii e A. sororcula foram predominantes, mas somente A. fraterculus foi a mais abundante. Nos frutos, A. obliqua, A. fraterculus e A. bisgrigata foram predominantes, mas somente A. obliqua foi a mais abundante. A maior abundância de espécimes foi obtida em seriguela e a maior riqueza de espécies foi obtida em goiaba e em citros. Sete grupos foram formados pela presença e ausência de espécies de Anastrepha pelo coeficiente de similaridade de Sorensen e cinco grupos foram formados pela abundância de espécimes pelo coeficiente de Bray-Curtis. As características da comunidade (diversidade, riqueza, equitabilidade e dominância) diferiram nos dois métodos de coleta. Das seis espécies compartilhadas nas armadilhas e nos hospedeiros, apenas A. fraterculus e A. obliqua tiveram interação mais forte com os dois métodos de coleta. O pico populacional de espécies de Anastrepha ocorreu em setembro (armadilhas) e em fevereiro (hospedeiros). A disponibilidade de hospedeiros foi o fator que mais interferiu na dinâmica populacional. A diversidade de espécies de Anastrepha se concentrou nas áreas próximas aos fragmentos de mata. A maior diversidade ocorreu nas proximidades dos fragmentos acima de 100.000 m2. / Studies on diversity of fruit fly species are crucial for understanding ecological aspects of their communities of fruit flies. These studies have been carried out mostly on fruit flies collected in McPhail-type traps. Consequently, diversity of fruit flies has been discussed mostly on trapped specimens. Nonetheless, in this study, besides trapped specimens, diversity was also based on specimens obtained directly from hosts. Thus, it was performed, for the first time, a comparative analysis of Anastrepha species from same area collected in traps and from hosts. Additionally, diversity of Anastrepha species was discussed, for the first time, based on spatial modeling. Fruit fly survey was performed in 48 collecting points distributed throughout \"Luiz de Queiroz\" campus, in Piracicaba, state of São Paulo, Brazil. A trap, baited with hydrolyzed corn protein, was installed at each collecting point, and fruits nearby were sampled. Collections with traps were carried out weekly from July 1998 to June 1999. Hosts (26 species) were sampled from January to December 1999. Anastrepha species collected in both methods were compared by mean of faunistic parameters, diversity indices and population fluctuation. Fruit flies obtained from hosts were compared by mean cluster analysis (Sorensen e Bray-Curtis). The species interaction, in both collecting methods, was based on heat map graph. The diversity distribution pattern was analysed by mean of the spatial modelling (Kriging). A total of 19,660 females of Anastrepha species were collected in the traps, and 10,453 were obtained from hosts. It was captured more Anastrepha species (18) in the traps than in the hosts (7). In the traps, A. fraterculus, A. obliqua, A. bistrigata, A. pseudoparallela, A. barbiellinii and A. sororcula were more abundant, but only A. fraterculus was predominant. In the hosts, A. obliqua, A. fraterculus and A. bistrigata were predominant, but only A. obliqua was more abundant. The greatest abundance of specimens was obtained in red mombin and the greatest species richness in guava and citrus. Seven groups were formed by presence and absence of Anastrepha species for the Sorensen similarity coefficient, and five groups for the abundance of specimens for the Bray-Curtis coefficient. The community characteristics (diversity, richness, equitability, and dominance) differ in both collecting methods. Six species were collected in both traps and hosts, but only A. fraterculus and A. obliqua had stronger interaction with these collecting methods. The population peak of Anastrepha species occurred in September (traps) and in February (hosts). The host availability was the main factor that interfered with population dynamic. The Anastrepha species diversity concentrated in areas nearby of forest fragments. The highest diversity was adjacent to forest fragments above 100,000 m2.