Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. / A tese de doutorado intitulada “Avaliação dos efeitos citotóxicos e antiproliferativos da secreção cutânea e de peptídeos bioativos do anuro Physalaemus nattereri (steindachner, 1863)” desenvolvida por Andréa Cruz e Carvalho sob a orientação da profa. Dra. Mariana S. Castro teve o apoio financeiro do CNPq (processos n°. 563972/2010-6, Edital MCT/CNPQ/FNDCT/FAPS/MEC/CAPES/PRÓ-CENTROOESTE nº 31/2010, n°. 302925/2012-0, Produtividade em Pesquisa - PQ – 2012 e n°. 407801-2013, Rede Centro-Oeste De Pós-Graduação , Pesquisa E Inovação - REDE PRÓ-CENTRO-OESTE), da FAPDF (processo n°. 193. 000.461/2011, Edital MCT/CNPQ/FNDCT/FAPS/MEC/CAPES/PRÓ-CENTRO-OESTE nº 31/2010), do CNPq por meio da concessão de bolsa de estudos (nível doutorado), da FINEP (CT-INFRA) E DA FUB-UNB. / As secreções cutâneas de anuros são fontes naturais de peptídeos antimicrobianos. A realização de novas pesquisas nessa área tem revelado que alguns peptídeos com atividade antimicrobiana também apresentam efeitos tóxicos sobre células tumorais. O objetivo do presente estudo foi investigar o potencial terapêutico da secreção cutânea de Physalaemus nattereri sobre células tumorais e determinar os mecanismos da ação citotóxica sobre céluluas de melanoma murino da linhagem B16F10. Nossos resultados demonstraram que a secreção bruta reduz a viabilidade de células B16F10, causando alterações na morfologia celular, (p.ex., arredondamento e encolhimento), ruptura da membrana plasmática, redução do potencial de membrana mitocondrial e parada do ciclo celular na fase S; tais mudanças em conjunto sugerem que as células tumorais morreram por apoptose. A secreção cutânea também foi submetida ao fracionamento cromatográfico empregando RP-HPLC e as frações eluídas foram avaliadas quanto à suas atividades antiproliferativas e antimicrobiana. Três frações ativas exibiram componentes de massa molecular compatíveis com peptídeos. Os três componentes majoritários presentes em tais frações foram purificados por RP-HPLC e analisados por MALDI-TOF/MS. Tais peptídeos mostraram-se ativos sobre bactérias e células tumorasi e foram identificados como pertencentes ao grupo das nattererinas, peptídeos antibacterianos previamente isolados desse animal por nosso grupo. Embora, o mecanismo específico envovlido na redução da viabilidade celular e citotoxicidade após o tratamento com essa secreção bruta ainda não seja conhecido, podemos supor que a atividade de moléculas, como peptídeos, presentes nessa secreção seja efetivos contra as células de melanoma murino (B16F10). Considerando-se a necessidade crescente por novas drogas anticâncer, o presente estudo fortemente reforça a validade do uso da secreção cutânea de P. nattereri como uma rica fonte de novas moléculas anticâncer, principalmente peptídeos. / Anuran secretions are rich natural sources of antimicrobial peptides. The emergence of new research in this area has shown that some peptides with antimicrobial activity also exert toxic effects against cancer cells. The aims of this study were to investigate the therapeutic potential of Physalaemus nattereri skin secretion against cancer cells, and to verify the mechanisms of its cytotoxic action on the murine melanoma cell line B16F10. Our results demonstrated that the crude secretion reduces the viability of B16F10 cells, causing changes in cell morphology (e.g., round shape and structure shrinkage), rupture of the plasma membrane, reduction in mitochondrial membrane potential, fragmentation of DNA, and cell cycle arrest in Sphase; together, these changes suggest that tumor cells die by apoptosis. This skin secretion was also submitted to chromatographic fractionation using RP-HPLC and the eluted fractions were assayed for antiproliferative and antibacterial activities. Three active fractions showed molecular masses components with a molecular range compatible to peptides. Thes major petidic components present on these fractions were purified by RP-HPLC and analysed by MALDI-TOF/MS. These peptides were active against bacteria and cancel cells, and were identified as nattererins, antibacterial peptides previously isolated from this animal by our group. Although, the specific mechanism causing the reduction in cell viability and cytotoxicity after treatment with the crude secretion is still unknown, we can consider that the activity of molecules, such as peptides, within the secretion is effective against murine melanoma (B16F10) tumor cells. Considering the growing need for new anticancer drugs, the present data strongly reinforce the validity of crude secretion of P. nattereri as a rich source of new anticancer molecules, mainly peptides.

Existem atualmente oito espécies de tuco-tucos, roedores subterrâneos do gênero Ctenomys descritas para o Brasil. Quatro delas, que habitam a região sul, são bem conhecidas e estudadas: C. flamarioni, C. minutus, C. lami e C. torquatus. As outras: C. brasiliensis, C. nattereri, C. rondoni e C. bicolor, que habitam a região noroeste possuem como conhecimento científico apenas a descrição de cada uma delas. Pouco ou nenhum material testemunho de suas descrições e um abandono por parte da ciência em uma lacuna de tempo de mais de cem anos sem que seu status taxonômico, evolutivo ou qualquer tipo de conhecimento tenha sido pesquisado levaram ao questionamento destas entidades como espécies válidas. Sabendo da existência de populações de tuco-tucos habitando os estados de Mato-Grosso e Rondônia, foram realizadas expedições de levantamento e coleta de dados objetivando abranger a distribuição noroeste brasileira do gênero Ctenomys tratando de elucidar as questões evolutivas e taxonômicas existentes. Foram coletados cinquenta indivíduos em cinco populações distintas e analisados quanto ao cariótipo, através de análises moleculares utilizando o DNA mitocondrial, quanto a morfologia externa e a morfometria geométrica craniana dos espécimes encontrados. Com base nos resultados obtidos este trabalho eleva novamente ao nível de espécie C. nattereri, que havia sido sinonimizado a C. boliviensis por falta de trabalhos mais consistentes de comparação entre as duas espécies. Também redescobrimos e validamos como espécie C. bicolor, a espécie que habita mais ao norte dentre as 60 espécies conhecidas do gênero. Propõesse a descrição de uma nova espécie, C. amazonicus, habitando o interior da floresta amazônica na sua porção leste, o que é uma novidade para o gênero, que habitualmente ocupa áreas de vegetação aberta. O presente trabalho aduda a resolver questões importantes ao entendimento de parte da biodiversidade brasileira, que só pode ser realizado com o uso de diferentes abordagens, que permitiram um parecer irrevogável da situação destas entidades biológicas e traz a luz do conhecimento científico um novo grupo de espécies que possui características evolutivas únicas. / There are currently eight species of tuco-tucos, subterranean rodents of the genus Ctenomys described for Brazil. Four of them, who inhabit the southern region, are well known and studied: C. flamarioni C. minutus, C. lami and C. torquatus. The others: C. brasiliensis, C. nattereri, C. rondoni and C. bicolor, inhabiting the northwest have only the description of each as scientific knowledge. Little or no material witness to their description and abandonment by science in a time gap of more than one hundred years without their taxonomic status, evolution or any kind of knowledge has been investigated led to the questioning of these entities as valid species. Knowing the existence of populations of tuco-tucos inhabiting the states of Mato Grosso and Rondonia, expeditions were carried out to survey and collect data aiming to cover the distribution of the genus Ctenomys in the northwestern Brazil trying to clarify the existing taxonomic and evolutionary questions. Fifty individuals were collected in five distinct populations and analyzed for karyotype, molecular analysis using mitochondrial DNA, plus external morphology and cranial geometric morphometrics of specimens. This work elevates to the level of species C. nattereri, which had been synonymized to C. boliviensis for lack of more consistent comparison between the two species. Also rediscovered and validated as a species C. bicolor, the species that inhabits farther north among the 60 known species of the genus. A new species was discovered, C. amazonicus, inhabiting the interior of the Amazon rainforest in its eastern portion, which is new to the genus, which usually occupies open vegetated areas. Necessary issues were resolved to the understanding of Brazilian biodiversity, which can only be achieved by using different approaches, which allowed an irrevocable opinion of the situation of these biological entities and bring the light of scientific knowledge to a new group of species that have exclusive evolutionary characteristics.

Existem atualmente oito espécies de tuco-tucos, roedores subterrâneos do gênero Ctenomys descritas para o Brasil. Quatro delas, que habitam a região sul, são bem conhecidas e estudadas: C. flamarioni, C. minutus, C. lami e C. torquatus. As outras: C. brasiliensis, C. nattereri, C. rondoni e C. bicolor, que habitam a região noroeste possuem como conhecimento científico apenas a descrição de cada uma delas. Pouco ou nenhum material testemunho de suas descrições e um abandono por parte da ciência em uma lacuna de tempo de mais de cem anos sem que seu status taxonômico, evolutivo ou qualquer tipo de conhecimento tenha sido pesquisado levaram ao questionamento destas entidades como espécies válidas. Sabendo da existência de populações de tuco-tucos habitando os estados de Mato-Grosso e Rondônia, foram realizadas expedições de levantamento e coleta de dados objetivando abranger a distribuição noroeste brasileira do gênero Ctenomys tratando de elucidar as questões evolutivas e taxonômicas existentes. Foram coletados cinquenta indivíduos em cinco populações distintas e analisados quanto ao cariótipo, através de análises moleculares utilizando o DNA mitocondrial, quanto a morfologia externa e a morfometria geométrica craniana dos espécimes encontrados. Com base nos resultados obtidos este trabalho eleva novamente ao nível de espécie C. nattereri, que havia sido sinonimizado a C. boliviensis por falta de trabalhos mais consistentes de comparação entre as duas espécies. Também redescobrimos e validamos como espécie C. bicolor, a espécie que habita mais ao norte dentre as 60 espécies conhecidas do gênero. Propõesse a descrição de uma nova espécie, C. amazonicus, habitando o interior da floresta amazônica na sua porção leste, o que é uma novidade para o gênero, que habitualmente ocupa áreas de vegetação aberta. O presente trabalho aduda a resolver questões importantes ao entendimento de parte da biodiversidade brasileira, que só pode ser realizado com o uso de diferentes abordagens, que permitiram um parecer irrevogável da situação destas entidades biológicas e traz a luz do conhecimento científico um novo grupo de espécies que possui características evolutivas únicas. / There are currently eight species of tuco-tucos, subterranean rodents of the genus Ctenomys described for Brazil. Four of them, who inhabit the southern region, are well known and studied: C. flamarioni C. minutus, C. lami and C. torquatus. The others: C. brasiliensis, C. nattereri, C. rondoni and C. bicolor, inhabiting the northwest have only the description of each as scientific knowledge. Little or no material witness to their description and abandonment by science in a time gap of more than one hundred years without their taxonomic status, evolution or any kind of knowledge has been investigated led to the questioning of these entities as valid species. Knowing the existence of populations of tuco-tucos inhabiting the states of Mato Grosso and Rondonia, expeditions were carried out to survey and collect data aiming to cover the distribution of the genus Ctenomys in the northwestern Brazil trying to clarify the existing taxonomic and evolutionary questions. Fifty individuals were collected in five distinct populations and analyzed for karyotype, molecular analysis using mitochondrial DNA, plus external morphology and cranial geometric morphometrics of specimens. This work elevates to the level of species C. nattereri, which had been synonymized to C. boliviensis for lack of more consistent comparison between the two species. Also rediscovered and validated as a species C. bicolor, the species that inhabits farther north among the 60 known species of the genus. A new species was discovered, C. amazonicus, inhabiting the interior of the Amazon rainforest in its eastern portion, which is new to the genus, which usually occupies open vegetated areas. Necessary issues were resolved to the understanding of Brazilian biodiversity, which can only be achieved by using different approaches, which allowed an irrevocable opinion of the situation of these biological entities and bring the light of scientific knowledge to a new group of species that have exclusive evolutionary characteristics.

Existem atualmente oito espécies de tuco-tucos, roedores subterrâneos do gênero Ctenomys descritas para o Brasil. Quatro delas, que habitam a região sul, são bem conhecidas e estudadas: C. flamarioni, C. minutus, C. lami e C. torquatus. As outras: C. brasiliensis, C. nattereri, C. rondoni e C. bicolor, que habitam a região noroeste possuem como conhecimento científico apenas a descrição de cada uma delas. Pouco ou nenhum material testemunho de suas descrições e um abandono por parte da ciência em uma lacuna de tempo de mais de cem anos sem que seu status taxonômico, evolutivo ou qualquer tipo de conhecimento tenha sido pesquisado levaram ao questionamento destas entidades como espécies válidas. Sabendo da existência de populações de tuco-tucos habitando os estados de Mato-Grosso e Rondônia, foram realizadas expedições de levantamento e coleta de dados objetivando abranger a distribuição noroeste brasileira do gênero Ctenomys tratando de elucidar as questões evolutivas e taxonômicas existentes. Foram coletados cinquenta indivíduos em cinco populações distintas e analisados quanto ao cariótipo, através de análises moleculares utilizando o DNA mitocondrial, quanto a morfologia externa e a morfometria geométrica craniana dos espécimes encontrados. Com base nos resultados obtidos este trabalho eleva novamente ao nível de espécie C. nattereri, que havia sido sinonimizado a C. boliviensis por falta de trabalhos mais consistentes de comparação entre as duas espécies. Também redescobrimos e validamos como espécie C. bicolor, a espécie que habita mais ao norte dentre as 60 espécies conhecidas do gênero. Propõesse a descrição de uma nova espécie, C. amazonicus, habitando o interior da floresta amazônica na sua porção leste, o que é uma novidade para o gênero, que habitualmente ocupa áreas de vegetação aberta. O presente trabalho aduda a resolver questões importantes ao entendimento de parte da biodiversidade brasileira, que só pode ser realizado com o uso de diferentes abordagens, que permitiram um parecer irrevogável da situação destas entidades biológicas e traz a luz do conhecimento científico um novo grupo de espécies que possui características evolutivas únicas. / There are currently eight species of tuco-tucos, subterranean rodents of the genus Ctenomys described for Brazil. Four of them, who inhabit the southern region, are well known and studied: C. flamarioni C. minutus, C. lami and C. torquatus. The others: C. brasiliensis, C. nattereri, C. rondoni and C. bicolor, inhabiting the northwest have only the description of each as scientific knowledge. Little or no material witness to their description and abandonment by science in a time gap of more than one hundred years without their taxonomic status, evolution or any kind of knowledge has been investigated led to the questioning of these entities as valid species. Knowing the existence of populations of tuco-tucos inhabiting the states of Mato Grosso and Rondonia, expeditions were carried out to survey and collect data aiming to cover the distribution of the genus Ctenomys in the northwestern Brazil trying to clarify the existing taxonomic and evolutionary questions. Fifty individuals were collected in five distinct populations and analyzed for karyotype, molecular analysis using mitochondrial DNA, plus external morphology and cranial geometric morphometrics of specimens. This work elevates to the level of species C. nattereri, which had been synonymized to C. boliviensis for lack of more consistent comparison between the two species. Also rediscovered and validated as a species C. bicolor, the species that inhabits farther north among the 60 known species of the genus. A new species was discovered, C. amazonicus, inhabiting the interior of the Amazon rainforest in its eastern portion, which is new to the genus, which usually occupies open vegetated areas. Necessary issues were resolved to the understanding of Brazilian biodiversity, which can only be achieved by using different approaches, which allowed an irrevocable opinion of the situation of these biological entities and bring the light of scientific knowledge to a new group of species that have exclusive evolutionary characteristics.

nÃo hà / A peÃonha da serpente Philodryas nattereri à uma mistura de proteÃnas e peptÃdeos tÃxicos com diversas aÃÃes locais e sistÃmicas importantes, similares Ãs que ocorrem nos acidentes botrÃpicos. Os mecanismos envolvidos nas aÃÃes locais e sistÃmicas desta peÃonha sÃo pouco conhecidos. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos renais, cardiovasculares, citotÃxicos e a identificaÃÃo molecular da peÃonha bruta. O teor proteÃco total da peÃonha foi de 85-90% de proteÃnas. Foram utilizados ratos Wistar nos experimentos de perfusÃo de rim isolado, em que o orgÃo foi perfundido com a peÃonha da serpente Philodryas nattereri em diversas concentracÃes para se determinar as possÃveis alteraÃÃes em parÃmetros funcionais, alÃm de alteraÃÃes vasculares em anel de aorta e pressÃo arterial. A peÃonha foi utilizada em cÃlulas epiteliais de tÃbulos renais de cachorro (MDCK) e macrÃfago peritonial de rato (RAW) e mensurada por pletismografia. O edema de pata, as contorÃÃes abdominais e a injeÃÃo intramuscular foram realizados em camundongos Swiss. A peÃonha foi testada em cepas de bactÃrias Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella choleraesuis subsp, Staphylococcus aureus e as culturas foram diluidas 100x. Para a determinaÃÃo do nÃmero de cromossomos da serpente Philodryas nattereri e Philodryas olfersil, utilizou-se uma cultura temporÃria de leucÃcitos. Da glÃndula de Duvernoy construiu-se uma Biblioteca de cDNA com o objetivo de identificar seus genes. A peÃonha bruta foi submetida a RMN (RessonÃncia MagnÃtica Nuclear). Os resultados encontrados demonstraram que a peÃonha da Philodryas nattereri promoveu alteraÃÃes em todos os parÃmetros renais estudados, principalmente na diminuiÃÃo da pressÃo renal (PP) e da resistÃncia vascular renal (RVR), assim como um aumento do fluxo urinÃrio (FU) e do ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG). O resultado mais relevante à que essa peÃonha à altamente lesiva aos tÃbulos renais, sendo tal fato comprovado com a reduÃÃo do percentual de transporte dos eletrÃlitos de sÃdio (Na+), (K+) e cloreto (CIÂ) nas concentraÃÃes estudadas, independente da reduÃÃo da PP. O clearance osmÃtico e as alteraÃÃes nos glomÃrulos e tÃbulos com material proteÃco e hemorrÃgico. As lesÃes foram observadas por anÃlise histolÃgica, mediante indÃcios de apoptose/ necrose e verificadas na cultura das cÃlulas MDCK. A reduÃÃo da pressÃo arterial e da frequÃncia cardiaca parecem estar relacionadas ao relaxamento de vasos renais, cujos efeitos vasodilatadores foram comprovados nos protocolos de anel de aorta. A peÃonha da Philodryas nattereri parece comprometer os tÃbulos renais, independentemente das aÃÃes vasculares. O edema de pata causado pela peÃonha atingiu o mÃximo 2 horas apÃs a inoculaÃÃo e foi inibido pelo dexametasona e o soro anti-bothrops jà a indometacina nÃo foi capaz de interferir significativamente no edema. A injeÃÃo intramuscular de 50μg da peÃonha produziu efeitos de desorganizaÃÃo das fibrilas musculares, hemorragia interfibrilar, edema infiltrado inflamatÃrio e mionecrose dos tipos coagulativa e miolÃtica. Verificou-se que estas alteraÃÃes diminuiram com o passar do tempo. As contorÃÃes abdominais causadas pela peÃonha parecem ser tÃo agressivas quanto o acido acÃtico quando comparado ao controle salino. A atividade da peÃonha em cultura de bactÃrias foi significante para as culturas S. aureus, P. aeruginosa e Salmomela entretanto nÃo apresentou significÃncia para E. Coli. As serpentes Philodryas nattereri e Philodryas olfersii possuem um nÃmero de cromossomos 2n = 36. Da extraÃÃo do RNAtotal da glÃndula da peÃonha, junto com a enzima transcriptase reversa in vitro produziu-se RNAm transcrito a partir de vÃrios genes diferentes. Assim, os DNAc clonados constituem uma biblioteca de cDNA com uma coleÃÃo de genes. Os resultados espectrofotÃmÃtrico de RMN da peÃonha bruta da serpente Philodryas nattereri revelaram na identificaÃÃo da presenÃa de acoplamentos 13C, !H por comprimento de onda de rÃdio. / A peÃonha da serpente Philodryas nattereri à uma mistura de proteÃnas e peptÃdeos tÃxicos com diversas aÃÃes locais e sistÃmicas importantes, similares Ãs que ocorrem nos acidentes botrÃpicos. Os mecanismos envolvidos nas aÃÃes locais e sistÃmicas desta peÃonha sÃo pouco conhecidos. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos renais, cardiovasculares, citotÃxicos e a identificaÃÃo molecular da peÃonha bruta. O teor proteÃco total da peÃonha foi de 85-90% de proteÃnas. Foram utilizados ratos Wistar nos experimentos de perfusÃo de rim isolado, em que o orgÃo foi perfundido com a peÃonha da serpente Philodryas nattereri em diversas concentracÃes para se determinar as possÃveis alteraÃÃes em parÃmetros funcionais, alÃm de alteraÃÃes vasculares em anel de aorta e pressÃo arterial. A peÃonha foi utilizada em cÃlulas epiteliais de tÃbulos renais de cachorro (MDCK) e macrÃfago peritonial de rato (RAW) e mensurada por pletismografia. O edema de pata, as contorÃÃes abdominais e a injeÃÃo intramuscular foram realizados em camundongos Swiss. A peÃonha foi testada em cepas de bactÃrias Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella choleraesuis subsp, Staphylococcus aureus e as culturas foram diluidas 100x. Para a determinaÃÃo do nÃmero de cromossomos da serpente Philodryas nattereri e Philodryas olfersil, utilizou-se uma cultura temporÃria de leucÃcitos. Da glÃndula de Duvernoy construiu-se uma Biblioteca de cDNA com o objetivo de identificar seus genes. A peÃonha bruta foi submetida a RMN (RessonÃncia MagnÃtica Nuclear). Os resultados encontrados demonstraram que a peÃonha da Philodryas nattereri promoveu alteraÃÃes em todos os parÃmetros renais estudados, principalmente na diminuiÃÃo da pressÃo renal (PP) e da resistÃncia vascular renal (RVR), assim como um aumento do fluxo urinÃrio (FU) e do ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG). O resultado mais relevante à que essa peÃonha à altamente lesiva aos tÃbulos renais, sendo tal fato comprovado com a reduÃÃo do percentual de transporte dos eletrÃlitos de sÃdio (Na+), (K+) e cloreto (CIÂ) nas concentraÃÃes estudadas, independente da reduÃÃo da PP. O clearance osmÃtico e as alteraÃÃes nos glomÃrulos e tÃbulos com material proteÃco e hemorrÃgico. As lesÃes foram observadas por anÃlise histolÃgica, mediante indÃcios de apoptose/ necrose e verificadas na cultura das cÃlulas MDCK. A reduÃÃo da pressÃo arterial e da frequÃncia cardiaca parecem estar relacionadas ao relaxamento de vasos renais, cujos efeitos vasodilatadores foram comprovados nos protocolos de anel de aorta. A peÃonha da Philodryas nattereri parece comprometer os tÃbulos renais, independentemente das aÃÃes vasculares. O edema de pata causado pela peÃonha atingiu o mÃximo 2 horas apÃs a inoculaÃÃo e foi inibido pelo dexametasona e o soro anti-bothrops jà a indometacina nÃo foi capaz de interferir significativamente no edema. A injeÃÃo intramuscular de 50μg da peÃonha produziu efeitos de desorganizaÃÃo das fibrilas musculares, hemorragia interfibrilar, edema infiltrado inflamatÃrio e mionecrose dos tipos coagulativa e miolÃtica. Verificou-se que estas alteraÃÃes diminuiram com o passar do tempo. As contorÃÃes abdominais causadas pela peÃonha parecem ser tÃo agressivas quanto o acido acÃtico quando comparado ao controle salino. A atividade da peÃonha em cultura de bactÃrias foi significante para as culturas S. aureus, P. aeruginosa e Salmomela entretanto nÃo apresentou significÃncia para E. Coli. As serpentes Philodryas nattereri e Philodryas olfersii possuem um nÃmero de cromossomos 2n = 36. Da extraÃÃo do RNAtotal da glÃndula da peÃonha, junto com a enzima transcriptase reversa in vitro produziu-se RNAm transcrito a partir de vÃrios genes diferentes. Assim, os DNAc clonados constituem uma biblioteca de cDNA com uma coleÃÃo de genes. Os resultados espectrofotÃmÃtrico de RMN da peÃonha bruta da serpente Philodryas nattereri revelaram na identificaÃÃo da presenÃa de acoplamentos 13C, !H por comprimento de onda de rÃdio.

Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-01-28T19:23:02Z No. of bitstreams: 2 Tese_Aprigio Mota Morais.pdf: 7861659 bytes, checksum: 9f1b7e3e49918559637f6795a6901b71 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-28T19:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Aprigio Mota Morais.pdf: 7861659 bytes, checksum: 9f1b7e3e49918559637f6795a6901b71 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-12-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / 355 specimens were studied Pygocentrus captured for four nattereri expeditions, in March, June, September and December 2008 in six lakes lowland river Solimões: Baixio Black Iauara, Anana, Campina and Maracá. The points of collections are situated between the cities of Manaus and Coari in Amazonas State in a path of approximately 400 km which is the route for oil and gas transportation in the Amazon Central, therefore, sensitive to accidents arising out of such transport. Fish measured 15,4cm ± 3.5 and 2.7 ± weighed 230,9g. The objectives of this study were to describe taxonomically the parasitic fauna of Pygocentrus nattereri (red bitch) and through qualitative, quantitative methods (ecological descriptors) and assess the bioaccumulative Use of parasitic species as bioindicators tool for environmental changes in Central Amazon. All fish were infected by at least one sort of metazoan. They were collected and identified 52 664 parasites belonging to 4 phyla recorded in 9 different taxonomic groups: Filo Platyhelminthes (Monogenoidea, Cestoda and Trematoda), Acantocephala Filo, Filo Nematoda, and Phylum Arthropoda (Copepoda, Branchiura, Pentastomida and Isopoda). Rose from 47 to 57 the number of cited species P. nattereri. The parasitological indexes, ecological descriptors, and statistical analysis, highlighted species Monogenoidea and Nematodes as bioindicator effect. The analysis by qualitative spectroscopy enegia Dispersive (EDS) recorded the presence of Al, C, Co, Fe, Mg, O, P, S, Si, Zn, Pt, Po, K, PSA, Na, Er, Tm, Ru, Hf, Ti, Cu, Br, W, Cl, Cd, Pd, Ni and Pb the nematode Procamallanus (Spirocamallanus) inopinatus. Elements such as Zn, Co, Pd, Cu, Hf and Er have known biological function at low concentrations while Pb, Cd, Ni, Tm, W, Ru, Pt, Po and Ti do not have a defined biological function and can be due to small leaks from vessels sailing through the area. In the nematode Procamallanus (S.) inopinatus been detected bioaccumulating ability for trace elements, mainly heavy metals such as Cu, Pb, Cd and Ni, at levels concentrations above those found in the host and collection environment. The study He concluded that the parasitic fauna P. nattereri can be used as an effective bioindicator tool effect and accumulation, contributing to monitoring the studied environment. / Foram estudados 355 espécimes de Pygocentrus nattereri capturados durante quatro expedições, nos meses de março, junho, setembro e dezembro de 2008 em seis lagos de várzea do rio Solimões: Baixio, Preto, Iauara, Ananá, Campina e Maracá. Os pontos de coletas estão situados entre os municípios de Manaus e Coari, no Estado do Amazonas em um trajeto de aproximadamente 400 km que é rota do transporte de petróleo e gás na Amazônia Central, Portanto, sensível a acidentes decorrentes desse transporte. Os peixes mediam 15,4cm ± 3,5 e pesavam 230,9g ± 2,7. Os objetivos deste trabalho foram descrever taxonomicamente a fauna parasitária de Pygocentrus nattereri (piranha vermelha) e, por meio de métodos qualitativos, quantitativos (descritores ecológicos) e bioacumulativos avaliar o uso de espécies parasitas como ferramenta de bioindicação para alterações ambientais na Amazônia Central. Todos os peixes estavam parasitados por pelo menos uma espécie de metazoário. Foram coletados e identificados 52.664 parasitos pertencentes a 4 filos constituídos em 9 grupos taxonômicos distintos: Filo Platyhelminthes (Monogenoidea, Cestoda e Trematoda), Filo Acantocephala, Filo Nematoda, e Filo Arthropoda (Copepoda, Branchiura, Pentastomida e Isopoda). Elevou-se de 47 para 57 o número de espécies citadas para P. nattereri. Os índices parasitológicos, descritores ecológicos, e a análise estatística, destacaram espécies de Monogenoidea e Nematoda como bioindicadoras de efeito. A análise qualitativa por Espectroscopia de Enegia Dispersiva (EDS) registrou a presença de Al, C, Co, Fe, Mg, O, P, S, Si, Zn, Pt, Po, K, Sl, Na, Er, Tm, Ru, Hf, Ti, Cu, Br, W, Cl, Cd, Pd, Ni e Pb no nematóide Procamallanus (Spirocamallanus) inopinatus. Elementos como Zn, Co, Pd, Cu, Hf e Er possuem função biológica conhecida em pequenas concentrações enquanto que Pb, Cd, Ni, Tm, W, Ru, Pt, Po e Ti, não possuem função biológica definida e podem ser decorrentes de pequenos vazamentos provenientes de embarcações que navegam pela área. No nematóide Procamallanus (S.) inopinatus foi detectada uma habilidade bioacumuladora para elementos traço, principalmente para metais pesados, como Cu, Pb, Cd e Ni, com níveis de concentrações acima das encontradas no hospedeiro e no ambiente de coleta. O estudo concluiu que a fauna parasitária de P. nattereri pode ser utilizada como uma eficiente ferramenta bioindicadora de efeito e de acumulação, contribuindo para o monitoramento no ambiente estudado.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-08T15:05:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3526349 bytes, checksum: 439f28e5b6e1d484bf08aafe26e01502 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-08T15:05:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3526349 bytes, checksum: 439f28e5b6e1d484bf08aafe26e01502 (MD5) Previous issue date: 2017-06-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O caminheiro-grande Anthus nattereri é uma ave de hábito terrestre e especialista obrigatória em campos nativos de grande interesse conservacionista e de alta prioridade de pesquisa, sendo considerada globalmente e regionalmente ameaçada de extinção. Sua história natural ainda é pouco conhecida bem como seus requerimentos de área e habitat. Nesse contexto, este estudo se propôs a investigar aspectos da biologia reprodutiva e a estratégia territorial utilizada por A. nattereri, relacionando-os ao uso do habitat. Também se investigou sobre os efeitos em potencial do regime de queimadas atualmente empregado como manejo nos campos nativos locais sobre sua reprodução e seus territórios. O trabalho de campo ocorreu principalmente entre janeiro e dezembro de 2016 no setor nordeste dos Campos do Alto Rio Grande, situado no município de São João del-Rei, região sul de MG. Um ninho recém-queimado de A. nattereri foi oportunamente encontrado em setembro de 2014 e um recém-predado e outros três ninhos ativos foram encontrados entre outubro e novembro de 2016. Os ninhos possuíam um formato de cesto baixo, sendo construídos inteiramente com gramíneas secas e diretamente sobre o solo, assemelhando-se ao padrão documentado para outras espécies do gênero Anthus. O padrão de coloração dos ovos também se enquadrou dentro da variação conhecida para espécies congêneres, assim como o tamanho da postura (de dois a três ovos) para espécies de aves tropicais. Anthus nattereri utilizou locais com maior cobertura vegetal de gramíneas para nidificar, inclusive manchas não queimadas que remanesceram em meio aos campos cuja vegetação foi predominantemente comprometida em relação ao último evento de fogo. Entre janeiro e abril, A. nattereri se mostrou silencioso e de comportamento críptico. De junho até dezembro, os machos da espécie demarcaram e anunciaram territórios através de exibições aéreas e vocalizações. Anthus nattereri ocupou exclusivamente campos limpos, utilizando um amplo espectro de estágios de sucessão pós-queimada dessa vegetação. A espécie parece evitar terrenos fortemente inclinados, aparentemente preferindo grandes manchas de campo limpo em áreas com declividade mais amena. Com base nas localizações obtidas e no Estimador de Densidade Kernel delimitou-se o território de 21 machos. A área média ± DP (mín-máx) estimada a partir da isopleta de 95% foi de 2,04 ± 1,12 ha (0,46-5,26 ha), e a partir da isopleta de 80%, de 1,18 ± 0,61 ha (0,28-2,77 ha), com marcada sobreposição entre territórios adjacentes. Mesmo com uma baixa frequência de interações entre vizinhos, indivíduos estranhos, potencialmente flutuantes, são tenazmente excluídos dos territórios. Fêmeas raramente foram detectadas, nunca associadas aos machos em atividade de displays. Os indivíduos tenderam a permanecer em seus territórios ao longo do ano, exceto quando influenciados por queimadas severas, que provocaram a desestabilização dos territórios. Alguns dos indivíduos afetados permaneceram próximos dos territórios onde foram primeiramente detectados, inclusive se reestabelecendo com o avanço da regeneração da vegetação. Outros indivíduos estabeleceram novos territórios em áreas íntegras não ocupadas e não muito distantes (c. de 500 m) dos territórios de origem queimados. Indivíduos que tiveram seus territórios parcialmente queimados não abandonaram as áreas atingidas. Embora A. nattereri seja relativamente abundante na área de estudo, a maior incidência temporal de queimadas coincide com seu período reprodutivo na região, o que pode afetar a população local da espécie através da queima de ninhos e pela potencial eliminação de locais adequados para nidificação. Deste modo, urge a realização de estudos direcionados e de longo prazo para se avaliar o impacto de diferentes regimes de queimadas sobre seu desempenho reprodutivo, e, consequentemente, a conservação de A. nattereri. / The Ochre-breasted Pipit Anthus nattereri is a ground dwelling bird and an obligate grassland specialist of high conservation and research priorities, being considered globally and regionally Vulnerable to extinction. Its natural history is poorly known as well as habitat-area requirements. Here we studied the breeding biology, territorial strategy and habitat use by the Ochre-breasted Pipit. We also investigated the potential effects of the burning regime adopted by local cattle ranchers upon the territoriality and reproduction of the species. Field work was conducted mainly from January to December 2016 in the northeastern sector of the Upper Rio Grande Grasslands, municipality of São João del-Rei, southern state of Minas Gerais. One recently-burned nest was opportunistically found in September 2014 and one recently-preyed and three actives nests were found on October and November 2016. Nests are a low cup constructed with dry grasses and placed directly on the ground, in a pattern similar to that observed in other Anthus species. The egg color pattern fits within the known variation for congeners, and the clutch size (two to three eggs) is the typical for tropical birds. Anthus nattereri nests in sites with high and dense grass cover, usually in patches that have remained unburned since the last widespread fire event. From January to April 2016, A. nattereri was silent and showed cryptic behavior. From June through December, males demarcated and announced territories through aerial displays and vocalizations. Anthus nattereri inhabits pure open grasslands (campos limpos), using a wide spectrum of grassland types along the different stages of the post-burning succession. The species seems to avoid heavily sloping terrain, favoring large patches of open grasslands. We used the Kernel Density Estimator to delimit the territory of 21 males based on the locations obtained. The mean ± SD (min-max) area estimated from the 95% isopleth was 2.04 ± 1.12 ha (0.46-5.26 ha), and from the 80% isopleth, 1.18 ± 0.61 ha (0.28-2.77 ha), with marked overlap between adjacent territories. Even though agonistic interactions between neighbors were low, non-neighbor individuals, possibly floaters, were tenaciously excluded from the territories. Females were rarely detected and never associated with males in display activity. Individuals usually use year-round territories, except when burnings occur, what may lead to territory destabilization. Some of the affected individuals remain nearby, even reestablishing until the vegetation of their territory of origin regenerated. Others individuals established new territories in unoccupied areas not burned, not too far (c. 500 m) from their burned territory. Individuals who had their territories partially burned did not abandon the affected areas. Although A. nattereri is relatively abundant in the study area, the major temporal incidence of fires coincides with its breeding season, what may somewhat impact the local population of the species by burning some nests and/or eliminating suitable nesting sites. Thus, it is urgent to carry out long-term and targeted studies to evaluate the impact of different burning regimes upon the reproductive performance, and, consequently, the conservation of the species.

Diante da importância das lectinas no sistema imunológico avaliamos o papel da Nattectina, lectina tipo C identificada no veneno de Thalassophryne nattereri, no desenvolvimento das respostas imunes inata e específica. A Nattectina induziu peritonite em camundongos, caracterizada pelo influxo de neutrófilos e macrófagos, acompanhada da liberação de PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10 e IL-12p70. A resposta imune específica induzida pela Nattectina foi caracterizada pela produção de anticorpos específicos IgG, IgG1 e principalmente IgG2a com síntese de IL-10 e IFN-<font face=\"symbol\">g pelas células esplênicas re-estimuladas in vitro. A incubação de células dendríticas imaturas com a Nattectina gerou maturação destas células com aumento da expressão de moléculas MHC classe II, CD40, CD80, CD86 e expressão de MMP-2 e MMP-9 distribuídas no núcleo e no citoplasma celular, produção das citocinas IL-10 e IL-12p70 e eficiente apresentação antigênica. Concluímos que a Nattectina é capaz de induzir inflamação e resposta imune específica do tipo Th1 mediante a ativação de células dendríticas. / Due to the importance of the lectins in the immunological system we evaluated the role of Nattectin a C-type lectin identified in the venom of Thalassophryne nattereri on development of the innate and specific immune responses. Nattectin induced a significant cellular recruitment into peritoneal cavity of mice, mainly by influx of neutrophils, followed by macrophages, with synthesis of PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10, and IL-12p70. The specific immune response induced by Nattectin was characterized by the production of specific antibodies IgG, IgG1 and mainly IgG2a with IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g synthesis by splenic cells. Incubation of immature dendritic cells with Nattectin resulted in maturation with up-regulation of MHC class II, CD40, CD80, CD86, and expression of MMP-2 e MMP-9 distributed in nucleus and cytoplasm. Mature dendritic cells produced and release IL-10 and IL-12p70 and present the antigen efficiently. We concluded that Nattectin is able to induce inflammation and Th1 specific immune response through the activation of dendritic cells.

Diante da importância das lectinas no sistema imunológico avaliamos o papel da Nattectina, lectina tipo C identificada no veneno de Thalassophryne nattereri, no desenvolvimento das respostas imunes inata e específica. A Nattectina induziu peritonite em camundongos, caracterizada pelo influxo de neutrófilos e macrófagos, acompanhada da liberação de PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10 e IL-12p70. A resposta imune específica induzida pela Nattectina foi caracterizada pela produção de anticorpos específicos IgG, IgG1 e principalmente IgG2a com síntese de IL-10 e IFN-<font face=\"symbol\">g pelas células esplênicas re-estimuladas in vitro. A incubação de células dendríticas imaturas com a Nattectina gerou maturação destas células com aumento da expressão de moléculas MHC classe II, CD40, CD80, CD86 e expressão de MMP-2 e MMP-9 distribuídas no núcleo e no citoplasma celular, produção das citocinas IL-10 e IL-12p70 e eficiente apresentação antigênica. Concluímos que a Nattectina é capaz de induzir inflamação e resposta imune específica do tipo Th1 mediante a ativação de células dendríticas. / Due to the importance of the lectins in the immunological system we evaluated the role of Nattectin a C-type lectin identified in the venom of Thalassophryne nattereri on development of the innate and specific immune responses. Nattectin induced a significant cellular recruitment into peritoneal cavity of mice, mainly by influx of neutrophils, followed by macrophages, with synthesis of PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10, and IL-12p70. The specific immune response induced by Nattectin was characterized by the production of specific antibodies IgG, IgG1 and mainly IgG2a with IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g synthesis by splenic cells. Incubation of immature dendritic cells with Nattectin resulted in maturation with up-regulation of MHC class II, CD40, CD80, CD86, and expression of MMP-2 e MMP-9 distributed in nucleus and cytoplasm. Mature dendritic cells produced and release IL-10 and IL-12p70 and present the antigen efficiently. We concluded that Nattectin is able to induce inflammation and Th1 specific immune response through the activation of dendritic cells.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-01Bitstream added on 2014-06-13T19:01:01Z : No. of bitstreams: 1 zieri_r_dr_sjrp.pdf: 889017 bytes, checksum: 170c2d62d9c91d29ca0d8ba71a162b3b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os vertebrados ectotérmicos apresentam um desenvolvido sistema de células com pigmentos melânicos em seu citoplasma, localizado em diversos órgãos e membranas. A dispersão dos grãos de melanina dentro dos melanócitos responde fortemente à exposição ao hormônio estimulante de melanócitos (MSH) e aos hormônios sexuais, promovendo alteração na coloração. Este trabalho buscou avaliar o efeito dos esteróides cipinato de testosterona, 17 β-estradiol e do MSH sobre a pigmentação hepática e testicular de Eupemphix nattereri, mediante análise histológica, e ultra-estrutural. Foram coletados 60 machos adultos na região de São José do Rio Preto, SP. Para cada experimento, dez machos adultos receberam doses subcutâneas contendo 0,5 mg/kg de cipionato de testosterona e 0,5 mg/kg de 17 β-estradiol, dissolvidos em óleo vegetal e, 2,5x10-7 mmol/10g de α-MSH dissolvido em PBS, durante 7 dias, a cada 48h. O grupo controle recebeu apenas óleo vegetal ou PBS. Grupos com cinco animais foram eutanasiados 24h após do término do tratamento, e outros cinco, após 15 dias. Foram realizados estudos morfológicos utilizando microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. No tecido hepático foram encontradas células de Kupffer. No interstício testicular observou-se melanócitos, com inúmeros melanossomos. Para o grupo tratado com cipionato de testosterona, foi observado um aumento de aproximadamente 2x na área ocupada pelas células pigmentadas no fígado e 4x nos testículos mediante analise a curto prazo. Para o mesmo tratamento, foi observado aumento de 1,8x no fígado dos animais eutanasiados após 15 dias. Tal resposta pode ser decorrente do aumento da atividade melanossintética, do aumento do número de células, ou ambos. Os animais tratados com 17 β-estradiol e α- MSH não apresentaram alterações na pigmentação hepática e testicular mediante... / Ectothermic vertebrates have a well-developed system of melanin-containing cells, which are distributed throughout several organs and tissues. The dispersion of melanin-containing granules within melanocytes responds to prolonged exposure to high concentration of MSH and sexual hormones inducing color change. The present study aimed to characterize morphological and stereological patterns of pigmented cells in liver and testis of the Eupemphix nattereri under effect of testosterone cypionate, 17 β-estradiol and α-MSH. Sixty adult males were collected in São José do Rio Preto, São Paulo State, Brazil. For each experiment, ten adult males were treated with the following hormones injected in the dorsal lymph sac during seven days: (1) 5 mg/kg dose of testosterone cypionate or (2) 5 mg/kg dose of 17 β-estradiol (dissolved in vegetal oil) or (3) 2,5x10-7 mmol/10g of α-MSH (dissolved in PBS). The control group received only vegetal oil or PBS solution at the same hormonal concentration. Groups of five animals were euthanatized after 24h and the other five, after 15 days. Morphological studies with light and transmission electron microscopy were carried out in the groups. In the hepatic tissue were found Kupffer cells, which are characterized by multivesicle bodies in the cytoplasm and large amount of melanosomes. In the testis, melanocytes-like cells are present in the interstitium. They presented large and irregular aspect and a great amount of intensely pigmented cytoplasm. For the groups treated with testosterone cypionate an increase of approximately 2x in the occupied area by the pigmented cells in the liver and 4x in the testis was observed in the treatment group against the control. The observed response can be due to increase of melanosynthesis Introdução 3 Zieri et al., 2010 activity, increase in the number of pigmented cells, or both. Moreover, for the same treatment... (Complete abstract click electronic access below)