OBJETIVO: demonstrar as alterações histológicas secundárias ao uso de bevacizumabe na aorta descendente de suínos submetida à interrupção dos vasa vasorum. MATERIAIS E MÉTODOS: em doze suínos, divididos em grupos tratamento e controle (n=6 cada) foi realizada dissecção por 5 cm da aorta torácica, ligadura das artérias intercostais e cobertura com polivinil; o grupo tratamento recebeu uma dose endovenosa única de bevacizumabe. Após quinze dias, os animais foram sacrificados para retirada da artéria e preparo das lâminas histológicas dos grupos tratamento, controle e área não manipulada dos dois grupos. As lâminas foram analisadas com relação aos graus de angiogênese, injúria, inflamação e espessamento intimal. A análise estatística foi conduzida através da média e do desvio-padrão dos escores e as comparações entre os grupos foram realizadas pelo teste de Mann-Whitney. Para obtenção de intervalos de confiança de 95% para as médias das contagens dos escores utilizou-se a distribuição de Poisson, a fim de determinar o efeito estatístico. RESULTADOS: o bevacizumabe causou parefeitos em todos os suínos tratados, com um óbito. As variáveis analisadas através da Escala de Magnitude para Efeito Estatístico, demonstram tendência de redução da angiogênese e da injúria e de aumento da inflamação no limite do moderado. Não ocorreu modificação do espessamento intimal entre os grupos. CONCLUSÃO: a medicação utilizada na lesão da parede arterial induzindo hipóxia, mostrou tendência de redução da angiogênese e da injúria, mas não reduziu o processo inflamatório ou o espessamento intimal da parede arterial. O bevacizumabe mostrou toxicidade no modelo suíno. / OBJECTIVE: To demonstrate histological changes secondary to the use of bevacizumab in the descending aorta of pigs after interruption of vasa vasorum flow. METHODS: Twelve pigs were divided into control and treatment groups (n = 6 each). It was performed a 5-cm dissection of the thoracic aorta, ligation of the intercostal arteries and protection with polyvinyl chloride. Pigs in the treatment group received a single intravenous dose of bevacizumab. After 15 days, the animals were euthanized and the aorta removed. Histological slides were prepared for control and treatment groups and for the non-surgically manipulated part of the aorta in both groups. The slides were analyzed for the degree of angiogenesis, injury, inflammation, and intimal thickening. Data were expressed as mean (SD) of scores and groups were compared using the Mann-Whitney test. The Poisson distribution was used to calculate 95% confidence intervals for the mean scores in order to determine effect statistics. RESULTS: Bevacizumab had adverse effects on all treated pigs, leading to one death. The analysis using a scale of magnitudes for effect statistics showed a trend toward a decrease in angiogenesis and injury and an increase in inflammation for moderate effects. There was no change in intimal thickening in either group. CONCLUSION: The medication used for arterial wall injury inducing hypoxia showed a trend toward reduced angiogenesis and injury, but with no reduction in the inflammatory process or intimal thickening of the arterial wall. Bevacizumab showed toxicity in the porcine model.

OBJETIVO: demonstrar as alterações histológicas secundárias ao uso de bevacizumabe na aorta descendente de suínos submetida à interrupção dos vasa vasorum. MATERIAIS E MÉTODOS: em doze suínos, divididos em grupos tratamento e controle (n=6 cada) foi realizada dissecção por 5 cm da aorta torácica, ligadura das artérias intercostais e cobertura com polivinil; o grupo tratamento recebeu uma dose endovenosa única de bevacizumabe. Após quinze dias, os animais foram sacrificados para retirada da artéria e preparo das lâminas histológicas dos grupos tratamento, controle e área não manipulada dos dois grupos. As lâminas foram analisadas com relação aos graus de angiogênese, injúria, inflamação e espessamento intimal. A análise estatística foi conduzida através da média e do desvio-padrão dos escores e as comparações entre os grupos foram realizadas pelo teste de Mann-Whitney. Para obtenção de intervalos de confiança de 95% para as médias das contagens dos escores utilizou-se a distribuição de Poisson, a fim de determinar o efeito estatístico. RESULTADOS: o bevacizumabe causou parefeitos em todos os suínos tratados, com um óbito. As variáveis analisadas através da Escala de Magnitude para Efeito Estatístico, demonstram tendência de redução da angiogênese e da injúria e de aumento da inflamação no limite do moderado. Não ocorreu modificação do espessamento intimal entre os grupos. CONCLUSÃO: a medicação utilizada na lesão da parede arterial induzindo hipóxia, mostrou tendência de redução da angiogênese e da injúria, mas não reduziu o processo inflamatório ou o espessamento intimal da parede arterial. O bevacizumabe mostrou toxicidade no modelo suíno. / OBJECTIVE: To demonstrate histological changes secondary to the use of bevacizumab in the descending aorta of pigs after interruption of vasa vasorum flow. METHODS: Twelve pigs were divided into control and treatment groups (n = 6 each). It was performed a 5-cm dissection of the thoracic aorta, ligation of the intercostal arteries and protection with polyvinyl chloride. Pigs in the treatment group received a single intravenous dose of bevacizumab. After 15 days, the animals were euthanized and the aorta removed. Histological slides were prepared for control and treatment groups and for the non-surgically manipulated part of the aorta in both groups. The slides were analyzed for the degree of angiogenesis, injury, inflammation, and intimal thickening. Data were expressed as mean (SD) of scores and groups were compared using the Mann-Whitney test. The Poisson distribution was used to calculate 95% confidence intervals for the mean scores in order to determine effect statistics. RESULTS: Bevacizumab had adverse effects on all treated pigs, leading to one death. The analysis using a scale of magnitudes for effect statistics showed a trend toward a decrease in angiogenesis and injury and an increase in inflammation for moderate effects. There was no change in intimal thickening in either group. CONCLUSION: The medication used for arterial wall injury inducing hypoxia showed a trend toward reduced angiogenesis and injury, but with no reduction in the inflammatory process or intimal thickening of the arterial wall. Bevacizumab showed toxicity in the porcine model.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Observa-se exacerbaÃÃo do processo angiogÃnico em diversas doenÃas, entre elas pode ser citada a neovascularizaÃÃo de cÃrnea. Para o tratamento dessas doenÃas, sÃo estudados diversos fÃrmacos com propriedades antiangiogÃnicas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficÃcia do fÃrmaco LASSBIO-596, estruturalmente designado como um hÃbrido da talidomida, sildenafil e arilsulfonamida, na angiogÃnese corneana inflamatÃria. Dezoito coelhos foram submetidos a uma cauterizaÃÃo alcalina pontual na regiÃo superior da cÃrnea direita. Os animais foram randomicamente alocados em trÃs grupos: veÃculo, dexametasona 4,0% e LASSBio-596 1,0%. Os tratamentos foram administrados em forma de colÃrio trÃs vezes por dia durante 21 dias. AvaliaÃÃes foram realizadas nos dias 3, 6, 9, 12, 15, 18 e 21 pÃs-cauterizaÃÃo. Nesses momentos, imagens digitalizadas da cÃrnea foram capturadas de uma forma padronizada. A resposta angiogÃnica foi mensurada utilizando-se um software que foi desenvolvido especificamente para esta finalidade. Foram calculados os seguintes parÃmetros: Ãrea de neovascularizaÃÃo (AN), comprimento vascular total (CT) e nÃmero de vasos sanguÃneos (NV). A partir da AN, calculou-se a taxa de angiogÃnese (TA) em cada grupo estudado. Observou-se que a dexametasona diminuiu significativamente AN, CT e NV durante todas as avaliaÃÃes. Portanto, a dexametasona inibiu completamente a angiogÃnese inflamatÃria da cÃrnea com uma TA de -0,001  0,006 mm2/dia, que foi significativamente menor (p < 0,001) do que a observada apÃs o tratamento com o veÃculo (0,078  0,024 mm2/dia) e LASSBio-596 (0,054  0,012 mm2/dia). Apesar de o LASSBio-596 ter reduzido o processo de angiogÃnese em relaÃÃo ao veÃculo, conforme AN, CT e NV, essa diferenÃa nÃo foi estatisticamente significante. No entanto, verificou-se que a TA medida no grupo LASSBio-596 foi significativamente menor (p < 0,05) do que a observada nos animais controle, indicando um potencial efeito antiangiogÃnico. ConcluÃmos que a aplicaÃÃo tÃpica de LASSBio-596 a 1,0% tem um efeito inibitÃrio parcial sobre a angiogÃnese corneana inflamatÃria em coelhos. / There is exacerbation of the angiogenic process in various diseases, especially in corneal neovascularization. For the treatment of these diseases, several drugs were studied with antiangiogenic properties. The aim of this study was to evaluate the effect of LASSBio-596, structurally designed as a hybrid of thalidomide, sildenafil and arilsulfonamide, on inflammatory corneal angiogenesis. Eighteen rabbits were submitted to an alkaline cauterization in the right cornea. The animals were randomly allocated in three groups: vehicle, dexamethasone, and LASSBio-596 group. Drugs were administrated by eye drops three times per day for 21 days. Evaluations were performed on days 3, 6, 9, 12, 15, 18, and 21 post-cauterization. At these time points, digital images of the cornea were captured in a standard fashion. Angiogenic response was measured using software that was developed specifically for this purpose. It calculated the following parameters: neovascularization area (NA), total vascular length (TVL), and blood vessel number (BVN). It was observed that dexamethasone significantly decreased NA, TVL, and BVN during all assessments. From NA it was calculated the angiogenesis rate (AR) in each group. Therefore, dexamethasone completely inhibited the inflammatory corneal angiogenesis with angiogenesis rate (AR) of -0.001  0.006 mm2/day, which was significantly lower (p < 0.001) than that observed after treatment with vehicle (0.078  0.024 mm2/dia) and LASSBio-596 (0.054  0.012 mm2/dia). Although LASSBio-596 reduced angiogenesis in relation to vehicle, according to NA, TVL and BVN values, this difference was not statistically significant. However, it was found that the AR as measured in the LASSBio-596 group was significantly lower (p < 0.05) than that seen in control animals, indicating a potential antiangiogenic effect. We conclude that topical application of LASSBio-596 at 1.0% has a partial inhibitory effect on inflammatory corneal angiogenesis in rabbits.

Orientador: Radovan Borojevic / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T18:37:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_IsabellaMarianade_M.pdf: 8539134 bytes, checksum: fcbe68b90d8af44acaf0dc538b030450 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Terapias celulares para o tratamento de doença isquêmica cardíaca estão atualmente sob investigação. Foram anteriormente publicados pelo nosso grupo os resultados de ensaio clínico na fase I, onde células autólogas mononucleares da medula óssea foram injetadas por via transendocárdica em pacientes com doença cardíaca isquêmica terminal. O estudo atual reporta os achados anatomopatológicos do estudo post-mortem de um dos pacientes tratados, que morreu 11 meses após a terapia celular objetivando verificar a presença de neovascularização nas zonas tratadas assim como descrever a possibilidade de ter havido transdiferenciação de populações celulares. Trata-se de estudo necroscópico de paciente de 55 anos com cardiomiopatia isquêmica, com defeito parcial reversível na parede anterolateral e defeito fixo (cicatriz) na parede posterior, pertencente à classe funcional III (NYHA ¿ New York Heart Association) e angina classe III (CCS ¿ Canadian Cardiovascular Society). O paciente recebeu um total de 30 milhões de células mononucleares da medula óssea colhidas 2 horas antes da injeção, obtidas através de punção óssea. As células foram injetadas por via transendocárdica na parede anterolateral do ventrículo esquerdo com o auxílio de mapeamento eletromecânico. Fragmentos das paredes ventriculares, anterolateral (a que recebeu a terapia celular), septal (septo interventricular, a qual tinha perfusão normal e que não recebeu terapia celular) e a inferoposterior (a qual tinha cicatriz extensa e sem terapia celular) foram retiradas durante a necropsia e processados em parafina e congeladas. Anticorpos foram utilizados contra fator VIII para células endoteliais, actina a de músculo liso para pericitos, troponina T, actina a sarcomérica e actinina a sarcomérica e desmina para identificação de cardiomiócitos. Estudo histomorfométrico da densidade capilar nas diferentes paredes ventriculares e da densidade de capilares contendo pericitos foi realizado, assim como foi quantificado o número de capilares/mm2 das paredes anterolateral e posterior, dados estes submetidos a testes estatísticos. Nossos resultados demonstraram não haver crescimento excessivo de nenhuma população celular, havendo aumento significativo da densidade de capilares com e sem pericitos na parede anterolateral. Nas zonas de cicatrizes comparando-se a parede anterolateral com a posterior foi verificado também haver aumento significativo do número de capilares. Nesta mesma parede houve uma hiperplasia dos pericitos, algumas destas células adquiriram elementos do citoesqueleto e proteínas contráteis (desmina e troponina). Em conclusão, nosso estudo demonstrou que o procedimento utilizado é seguro e que leva ao aumento da densidade capilar, hiperplasia pericitária com provável transdiferenciação de pericitos em cardiomiócitos / Abstract: Cell-based therapies for treating ischemic heart disease are currently under investigation. We previously reported the results of a human phase I trial of transendocardial injection of autologous mononuclear bone marrow cells in patients with end-stage ischemic heart disease. The current report focuses on post mortem cardiac findings from one of the treated patients, who died 11 months after cell therapy in order to verify modifications on cardiac structure produced by the procedure. The heart of study was obtained on necropsy of a 55 years old patient suffering of an ischemic cardiomiopathy with a reversible partial defect on anterolateral ventricular wall (scar), a fixed one in the posterior wall. At enrollment, he was in New York Heart Association (NYHA) functional class III and Canadian Cardiovascular Society (CCS) angina class III. Patient was treated with 30 millions bone marrow mononuclear cells collected 2 hours and injected transendocardially with the guidance of electromechanical mapping, into the anterolateral wall of the left ventricle. Fragments of ventricular wall, anterolateral, septal (interventricular) and posterior walls were collected for histology and frozen. Immunohistological detection of endothelial and pericytic population allowed the quantification of capillaries and pericytic containing capillaries in anterolateral, septal and posterior walls (surface density). The amount of capillaries present in fibrotic zones of anterolateral and posterior walls were also quantified. No signs of adverse events were found in the cell-injected areas. Capillary density was significantly higher (P<0.0001) in the anterolateral wall than in the previously infarcted tissue in the posterior wall. The increased vascularity of the anterolateral wall was associated with hyperplasia of pericytes, mural cells, and adventitia. Some of these cells had acquired cytoskeletal elements and contractile proteins (troponin, sarcomeric a-actin, actinin). In conclusion, our morphological and immunocytochemical analysis of the area that received autologous bone marrow cell injections showed no abnormal cell growth or tissue lesions, thereby suggesting the safety of transendocardial cell injections. The treated areas had a heightened capillary density. Pericyte hyperplasia and pericytes with cytoskeletons and early cardiomyocyte morphology were seen only at injected sites / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

INTRODUÇÃO: As adaptações cardiovasculares decorrentes do treinamento físico aeróbio de natação são bem descritas na literatura, entre ela temos a angiogênese. O treinamento físico aeróbio é um dos estímulos que promove angiogênese. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de RNA não codificadora de proteínas de diferentes células em diversos tecidos e estão envolvidos em processos angiogênicos, mas o papel dos miRNAs na angiogênese cardíaca decorrente ao treinamento aeróbico ainda não foi esclarecido. OBJETIVO: Analisar os efeitos de diferentes volumes de treinamento físico de natação sobre a expressão de microRNAs envolvidos na angiogênese cardíaca de ratos. MATERIAIS E MÉTODOS: Ratas Wistar (n=21) foram divididas em grupos Sedentário (SC), Treinado 1 (P1): natação 60min/dia, 5x/sem/10sem, com 5% de sobrecarga, Treinado 2 (P2): mesmo protocolo P1 até a 8ªsem, 9ªsem 2x/dia, e na 10ªsem 3x/dia. Após o período de treinamento, os corações foram retirados e o RNA total foi isolado para a análise da expressão de miRNAs no coração por microarray de miRNA e os miR-126, -let-7f, -221 e -222 foram confirmados por RT-PCR em tempo real. Analisamos ainda os alvos do miR-126, Spred-1 e PI3KR2, e a expressão de proteínas que compõem as vias de sinalização em que esses alvos interferem por Western Blotting. Avaliamos também: Frequência cardíaca (FC) e pressão arterial (PA) por pletismografia caudal, VO2 pico, hipertrofia cárdica (HC) pelo peso do Ventrículo esquerdo/Peso corporal (mg/g), razão capilar/fibra (C/F) por histologia, expressão proteica de VEGF e seus receptores. RESULTADOS: O treinamento aeróbico diminuiu a FC sem alterar a PA, VO2 pico aumentou 11% e 15% em P1 e P2, a HC foi de 17% e 30% em P1 e P2, a razão C/F aumentou 57% e 100% em P1 e P2, acompanhada de um aumento da expressão de VEGF (P1 =42%, P2 =109%). A expressão do miR-let-7f foi aumentada em P2 (140%) comparado aos outros dois grupos (SC = 100%; P1 = 113%), o miR- 221 teve sua expressão diminuida em ambos os grupos treinados comparados xiii ao grupo SC (SC = 100%; P1 = 71%; P2 = 74%), o miR-222 não apresentou diferença na sua expressão entre os grupos (SC = 100%; P1 = 76%; P2 = 81%) e a expressão do miR-126 foi aumentada em P1 (126%) e P2 (142%) comparados ao grupo SC, a expressão de ambos os alvos desse miRNA foi diminuida nos grupos treinados (Spred-1 SC = 100 ± 12,4; P1 = 60 ± 5,6; P2 = 61 ± 8,4; PI3KR2 100 ± 12,3; P1 = 61 ± 12,3; P2 = 21 ± 7,1). Essa diminuição da expressão dos alvos desse miRNA favoreceu um aumento da expressão de proteínas pertencentes as vias de sinalização da PIK3 e MAPKs. CONCLUSÃO: O treinamento aeróbico foi eficaz em promover um aumento da angiogênese cardíaca comprovada por uma maior razão capilar/fibra no coração dos animais treinados e por maior expressão proteica de VEGF, sendo ainda mais evidente nos animais que realizaram um maior volume de treinamento. Os miRNAs relacionados à angiogênese parecem estar envolvidos na regulação desse processo. Além disso, o miR-126 parece ser um dos principais miRNAs envolvidos nesse processo / INTRODUCTION: The cardiovascular adaptations resulting from aerobic physical swimming training are well described in the literature, between these adaptations we have the angiogenesis. The aerobic physical training is one of the stimulus that promotes angiogenesis. The micro RNAs are a class of non coding protein RNAs of different cells in different tissues and are involved in angiogenic processes, but the role of micro RNAs in cardiac angiogenesis due to aerobic training is not clear. OBJECTIVE: To analyze the effects of different volumes of swimming physical training on the expression of micro RNAs involved in angiogenesis in heart of rats. MATERIALS AND METHODS: Wistar female rats (n=21) were divided into groups Sedentary (SC), Trained 1 (P1): 60min/day swimming, 5x/week/10weeks with 5% overload, Trained 2 (P2): same protocol of P1 until the 8th week, 9th week 2x/day, and at 10th week 3x/day. After the training period, the hearts were removed and the total RNA was isolated to analyze the miRNAs expression in the heart by microarray of miRNA and the miRs-126, -let-7f, -221 and -222 were confirmed by real time RT-PCR. We also analyzed the targets miR-126, Spred-1 and PI3KR2, and the protein expression that form the signaling pathways that affect those targets by Western Blotting. We evaluated: heart rate (HR) and blood pressure (BP) by tail plethysmography, peak VO2, cardiac hypertrophy (CH) by weight left ventricle/ corporal weight (mg/g), capillary/fiber (C/P) ratio for histology, VEGF protein expression and its receptors. RESULTS: The aerobic training decreased the HR without change the BP, peak VO2 increased 11% and 15% in P1 and P2, the HR was 17% and 30% in P1 and P2, the ratio C/F increased 57% and 100% in P1 and P2, followed by an increase of VEGF expression (P1=42%, P2=109%). The miR-let-7f had its expression increased in P2 (140%) compared to the other two groups (SC = 100%; P1 = 113%), o miR-221 had its expression decreased in both trained groups compared to SC group (SC = 100%; P1 = 71%; P2 = 74%), the miR-222 showed no difference on its expression between the groups (SC = 100%; P1 = 76%; P2 = 81%) and the miR-126 expression xv was higher in P1 (126%) and P2 (142%) compared to SC group, the expression of both targets of this miRNA was decreased on trained groups (Spred-1 SC = 100 ± 12,4; P1 = 60 ± 5,6; P2 = 61 ± 8,4; PI3KR2 100 ± 12,3; P1 = 61 ± 12,3; P2 = 21 ± 7,1). This decrease of expression of this miRNA targets favor an increase of protein expression belonging to the PIK3 and MAPKs signaling pathways. CONCLUSIONS: The aerobic training was effective on promoting an increased of cardiac angiogenesis comproved by a higher ratio capillary/ fiber on the heart of trained animals and by a higher VEGF protein expression, being even more evident in animals that realized a higher volume training. The miRNAs related to angiogenesis seem to be involved in the regulation of this process. Besides that, the miR-126 seems to be one of the principal miRNA involved on this process

Tumores são definidos como microambientes compostos não só pelas células malignas, mas também por células endoteliais, fibroblastos e leucócitos, que promovem o crescimento tumoral e a angiogênese. Galectina-3, uma proteína que se liga a b- galactosídeos, é abundantemente expressa por monócitos/macrófagos, dentre outros leucócitos. Inúmeras evidências sugerem que galectina-3 atua como uma molécula reguladora da resposta inflamatória. Tendo em vista que o infiltrado inflamatório pode promover a progressão de tumores, o objetivo do presente trabalho foi avaliar se galectina-3, expressa tanto pela célula tumoral como pelas células estromais, modula o crescimento de melanoma. Para tal, células de melanoma murino Tm1 foram transfectadas com o gene de galectina-3. Ambos clones celulares (galectina-3 positivos e negativos) foram injetados na intrafáscia ou no subcutâneo de camundongos (fêmeas) C57BL/6 selvagens e/ou nocautes para o gene de galectina-3 para análise da implantabilidade e crescimento tumoral. Com relação à implantabilidade, não foi observado diferenças no estabelecimento de uma massa tumoral proliferativa em animais selvagens inoculados com células Tm1 transfectadas ou não com o gene de galectina-3 em animais selvagens. Em relação a taxa de crescimento dos tumores, nenhum animal nocaute inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentou tumores de dimensões mensuráveis até o 11º dia pós-inóculo. Independente do nível de expressão de galectina- 3 pela célula tumoral, os tumores originados nos animais nocautes apresentavam menor massa em gramas comparados ao grupo selvagem, sugerindo que galectina-3 expressa pelas células estromais promove o crescimento tumoral. Ainda, os tumores originados nos animais nocautes e no grupo selvagem inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentavam menor extensão de área necrótica do que os animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. Interessantemente, os animais selvagens e nocautes inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas apresentaram tumores com menor área vascular e menor número de estruturas vasculares funcionais quando comparados aos animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. A análise de expressão gênica nos tumores mostrou que os níveis relativos de RNAm de VEFG (fator de crescimento de endotélio vascular) foram menores nos animais inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas em relação aos inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas, indicando que galectina-3 expressa pelas células tumorais atua como uma molécula anti-angiogênica. Finalizando, o presente trabalho sugere que galectina-3 pode atuar como uma molécula pró- ou anti-tumoral, dependendo do tipo celular que a expressa no microambiente tumoral. / Tumors have been described as microenvironments composed not only by malignant cells, but also by endothelial cells, fibroblasts and leukocytes, which can promote tumor growth and angiogenesis. Galectin-3, a b-galactoside binding protein, is expressed by monocytes/macrophages and others leukocytes. In fact, several lines of evidence suggest that galectin-3 act as master regulators of the inflammatory response. Based on the fact that the inflammatory infiltrate can promote tumor progression, the proposal of this study was to evaluate if galectin-3, either from tumor or stromal cells could modulate melanoma growth. Tm1 murine melanoma cell line was transfected with the galectin-3 gene. Both clones (galectin-3 negative and positive) were injected in the foot pad or subcutaneous in female C57BL/6 wild-type (WT) and galectin-3 knock-out (KO) mice to tumor engraftment and growth analysis. There was no difference in the tumor engraftment between animas injected with Tm1 galectin-3 positive or negative cells. In addition, any knock-out mice injected with galectin-3 positive cells had measurable tumors up to day 11 post inoculation. Regardless the galectin-3 expression level in the melanoma cell, tumors from galectin-3 KO mice were smaller than those from WT animals, suggesting that galectin-3 expressed by stromal cells promotes tumor growth. Moreover, tumor necrotic area was smaller in KO mice and in wild-type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to wild type animals injected with Tm1 galectin-3 negative cells. Interestingly, both vascular area and the number of functional vessels in animals injected with galectin-3 positive Tm1 cells were smaller in WT as well as in KO mice compared to the same animals injected with galectin-3 negative Tm1 cells. Gene expression analysis showed that VEGF (vascular endothelial growth factor) mRNA levels were smaller in wild type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to those injected with Tm1 galectin-3 negative cells, indicating that galectin-3 expressed by tumor cells can act as an anti-angiogenic molecule. The present study suggests that galectin-3 can act either as a pro or antitumoral molecule, depending on which type of cell (tumoral or stromal) this lectin is expressed within tumor microenvironment.

INTRODUÇÃO: A propriedade de induzir angiogênese torna o omento um promissor pedículo para pré-fabricar retalhos. OBJETIVO: Estabelecer a área abdominal a ser pré-fabricada por um pedículo omental e analisar o potencial de pré-fabricação (PPF) conforme o tempo de espera entre a introdução do pedículo e a elevação do retalho. MÉTODOS: Foram utilizados 44 coelhos divididos em quatro grupos (A, B, C e D). No grupo A, um fragmento de pele, tecido subcutâneo e músculo cutâneo abdominal foi totalmente separado e ressuturado. Nos demais grupos, um pedículo omental, contendo os vasos gastromentais ligados distalmente, com área equivalente a 9 cm² foi transposto e suturado ao músculo cutâneo abdominal. Um segundo procedimento de incisão e elevação de um retalho contendo pele, subcutâneo e músculo cutâneo abdominal pediculado apenas pelo omento transposto, foi realizado, variando apenas o período de espera entre os dois procedimentos de 7, 21 e 56 dias para os grupos B, C e D respectivamente. Após 15 dias do último procedimento, os retalhos foram visualizados e as áreas viáveis foram calculadas através do programa de computador Image Tool®. Cortes de áreas viáveis foram imunocoradas pelo anti-CD31 para cálculo da densidade microvascular (DMV). RESULTADOS: Os valores médio e máximo das áreas viáveis no grupo D foram respectivamente 45,29 cm² e 99,37 cm² (PPF mediano = 5,03 e PPF máximo = 11,04). Não houve diferença significativa entre as áreas viáveis do grupo D e C. As médias da DMV dos grupos B, C e D foram respectivamente 24,54 vasos/mm², 33,20 vasos/mm² e 27,03 vasos/mm² e maiores do que as médias da DMV das áreas controles de 14,63 vasos/mm², 17,33 vasos/mm² e 18,12 vasos/mm². No grupo A, houve necrose total em todos os retalhos. CONCLUSÃO: O PPF mediano do pedículo omental foi de 5,03 vezes sua área e o tempo de espera para o segundo procedimento foi de, no mínimo, 21dias / INTRODUCTION: The angiogenic induction property of the omentum makes it a promising pedicle to prefabricate flaps. OBJECTIVE: To establish the abdominal area to be prefabricated by the omental pedicle and to analyze the prefabricate potential according to the time delay between the pedicle introduction and the flap release. METHODS: 44 rabbits were divided into four groups (A, B, C and D). In group A, a piece of skin, subcutaneous tissue and abdominal cutaneous muscle has been fully released and sutured again in its place. In other groups, a 9 cm2 omental pedicle containing the gastromental vessels distally tied has been transposed and sutured to abdominal cutaneous muscle. A second procedure, an incision and release of the flap that contained skin, subcutaneous and cutaneous abdominal muscle pediculated only by the omentum, has been carried out. The only variation was the time delay between the two procedures: 7, 21and 56 days for groups B, C and D, respectively. The flaps have been inspected 15 days after the last procedure, and the viable areas have been estimated using the software Image Tool®. The pieces of viable area have been immunostained using anti-CD31 allowing the estimation of the microvascular density. RESULTS: The mean and maximum viable areas in group D were 45.29 cm2 and 99.37 cm2 respectively (average prefabricate potential = 5.03 and maximum prefabricate potential = 11.04). There was no significant difference between the viable areas in groups C and D. The mean microvascular densities of groups B, C and D were 24.54 vessels/mm2, 33.20 vessels/mm2 and 27.03 vessels/mm2 respectively. This was higher than the mean microvascular densities of the control areas, which were 14.63 vessels/mm2, 17.33 vessels/mm2 and 18.12 vessels/mm2. In group A, there were total necrosis in all flaps. CONCLUSION: The prefabricate potential of the omentum was found to be 5.03 times its area and the delay time for the second procedure was, at least, 21 days

Orientadores: Eliane Maria Ingrid Amstalden, Mauricio Etchebehere / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T18:23:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cintra_FranciscoFontes_D.pdf: 8878005 bytes, checksum: 10099149390ddadf73aa7dcc9cbabe33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: Os condrossarcomas são tumores cartilaginosos com manifestações clínicas e morfológicas diversas. A identificação do comportamento biológico em processos neoplásicos é essencial para definir a conduta terapêutica e a estimativa prognóstica. Distinguir condrossarcoma de baixo grau de encondroma é difícil. A angiogênese tem sido relacionada à taxa de crescimento tumoral e prognóstico, e a expressão de marcadores, como a COX-2, com o comportamento biológico. A análise da angiogênese induzida pelo tumor e da imuno-expressão da COX-2 poderia auxiliar na determinação do prognóstico do paciente, bem como na distinção entre encondroma e condrossarcoma de baixo grau. Objetivos: estudar o valor da angiogênese, do uso de marcadores de estimativa de índole biológica maligna e padrão arquitetural dos vasos (padrão vascular), por meio da técnica de imuno-histoquímica, no diagnóstico diferencial do encondroma e condrossarcoma de baixo grau, assim como na estimativa do prognóstico dos pacientes com estes tumores. Métodos: 21 encondromas e 58 condrossarcomas convencionais foram selecionados para este estudo, sendo separados em 3 grupos: I- 21 encondromas; II- 31 condrossarcomas grau 1; III- 27 condrossarcomas graus 2 e 3. Os espécimes foram estudados quanto às suas características histopatológicas, marcadores de angiogênese (VEGF, CD34 e CD105) e expressão da COX-2. As informações clínicas foram resgatadas dos prontuários. Os tumores foram avaliados de forma cega e simultânea, por dois observadores, para a escolha de cinco áreas com a maior concentração de células/vasos imuno-marcados ("hot-spots"), definidas em consenso, em aumento de X400. A estimativa da expressão do VEGF e da COX-2 foi mensurada por meio da contagem das células positivas e negativas nas áreas de maior expressão ("hot spots") e determinada a proporção média. A vascularização foi aferida com o marcador CD34, utilizando-se do método de Chalkley. A análise da neoangiogênese foi medida por meio do anticorpo anti-CD105. A avaliação do padrão vascular dos tumores foi feita segundo o método de Kalinski. Os resultados foram tabulados e tratados por métodos estatísticos. Resultados: Foi encontrada associação entre evolução desfavorável e as seguintes variáveis: 1- condrossarcomas de moderado e alto graus; 2- localização em ossos chatos; 3- alta densidade microvascular; 4- padrão arquitetural caracterizado por diminuição do tamanho dos lóbulos com aumento de vasos na sua periferia (subtipo B de Kalinski) ou franca vascularização intra-lobular (subtipo C de Kalinski). Também foi observada associação entre o aumento da angiogênese e condrossarcomas de ossos chatos. Houve correlação entre aumento da densidade microvascular e hiperexpressão da COX-2. A hiperexpressão do VEGF relacionou-se com os padrões vasculares Kalinski B e C. As variáveis analisadas não permitiram diferenciar condrossarcoma de baixo grau de encondroma. Não foi encontrada associação entre o prognóstico e idade, sexo, ou expressão da COX-2, CD105 e VEGF. Conclusão: A avaliação da densidade microvascular e do padrão vascular podem ser uma ferramenta prognóstica adicional no manejo de pacientes com condrossarcoma. A densidade microvascular maior em condrossarcomas de ossos chatos pode estar associada à evolução desfavorável, nesta localização. Nenhuma das variáveis estudadas mostrou-se útil para diferenciar os condrossarcomas de baixo grau dos encondromas / Abstract: Background: Chondrosarcomas are a heterogeneous group of cartilaginous tumors with varied clinical and morphological features. Like any other cancer, the distinction between benign and malignant nature, in cartilaginous bone tumors, is essential for the determination of treatment modality and prognosis evaluation. The distinction between enchondroma and grade 1 chondrosarcoma is very difficult. Angiogenesis has been associated with tumor growth and prognosis, and the expression of COX-2, with the biological nature. Analysis of tumor-induced angiogenesis and immuno-expression of COX-2 could possibly assist in determining patient prognosis as well as distinguish between enchondroma and low grade chondrosarcoma. Objectives: To study the value of immunohistochemical markers of angiogenesis, biological malignancy in the differential diagnosis of cartilaginous tumors and architectural vascular pattern, as well as in estimating prognosis of patients. Methods: 21 enchondromas and 58 conventional chondrosarcomas were chosen and classified in three groups: I- enchondromas (n=21); II- low grade chondrosarcomas (n=31); III- moderate and high grade chondrosarcomas (n=27). All specimens were evaluated for their clinical findings, histopathological markers of angiogenesis (VEGF, CD34 and CD105) and expression of COX-2. The clinical data were retrieved from the medical records. Tumors were evaluated, blindly and simultaneously, by two observers for the analysis of the immunohistochemical preparations. VEGF and COX-2 immunostaining evaluation was determined by the proportion of positive cells in five "hot spots", defined by consensus, in X400 magnification. For CD34 and CD105, five areas were chosen with the highest concentration of micro-vessels ("hot spots"), through the use of the Chalkley graticule for counting. We further evaluated the vascular pattern of the tumor according to Kalinski. The results were tabulated for statistical analysis. Results: Fourteen patients had poor evolution (recurrence, metastasis and death). There were no significant differences regarding the follow-up time between groups. The following factors were statistically associated with poor prognosis: 1- chondrossarcomas of intermediate and high grades; 2- localization in flat bones; 3- increased micro-vascular density (over-expression of CD34); 4- tumor architectural pattern characterized by decrease of the size of the lobules with increased vascularization in their periphery (Kalinski vascular pattern B) and marked intra-lobular vascularization (Kalinski vascular pattern C). A positive association was found between increased angiogenesis and flat bones chondrosarcomas. COX-2 expression was high in tumors with high microvascular density. VEGF over-expression correlated with Kalinski B/C vascular patterns. None of the variables proved to be useful to differentiate low-grade chondrosarcoma from enchondroma. No statistical correlation was found between the prognosis and the following variables: age, gender, and expression of COX-2, CD105 and VEGF. Conclusion: Evaluation of microvessel density and vascular pattern can be useful as additional prognostic tools in the management of patients with chondrosarcoma. Higher microvessel density in chondrosarcomas of flat bones may be associated with unfavorable outcome in this location. None of the variables studied in this work proved useful to differentiate low-grade chondrosarcomas from enchondromas / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-20T11:59:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferre-Souza_Viviane_D.pdf: 26854945 bytes, checksum: 441886ad35f5447c17df51c40a2db348 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O ácido hialurônico (AH) é um polissacarídeo natural composto de unidades dissacarídeas alternadas entre o N-acetil-D-glicosamina e o ácido D-glicurônico que desempenha um papel fundamental na manutenção da integridade tecidual, facilitando a adesão e diferenciação de células durante a inflamação, e o reparo de feridas com formação de vasos sanguíneos. A espécie vegetal Arrabidaea chica (Humb. & Bonpl.) Verlot é encontrada em quase todo o Brasil e são atribuídos a ela propriedades terapêuticas para enfermidades da pele. Técnicas de micro e nanoencapsulação são empregadas através de processos químicos, físicos ou fisico-químicos visando o aumento das interações com tecidos, pelo aumento da área superficial. Neste trabalho, foi proposto o estudo de variáveis operacionais para a produção de micro e nanopartículas de AH através do método de emulsão a/o reticuladas com dihidrazida adípica (ADH), com encapsulação do extrato vegetal da Arrabidaea chica para avaliação da atividade angiogênica e cicatrizante. Os resultados obtidos mostraram que a formação e propriedades físico-químicas das partículas de AH produzidas por emulsificação são diretamente relacionadas com a velocidade de agitação, ao pH e a razão do reticulante e do extrato bruto com o AH. Ensaios in vitro em fibroblastos humanos tanto com as partículas vazias como com o extrato da A. chica não apresentaram toxicidade celular, e ensaios in vivo realizados em CAM, tegumento do dorso de camundongos e dorso de ratos evidenciaram o efeito angiogênico das micro e nanopartículas formadas com indução da formação de novos vasos sanguíneos, imprescindível para o processo de cicatrização. Concluímos assim que a encapsulação beneficiou e potencializou a atividade cicatrizante do extrato bruto da A. chica contribuindo para o desenvolvimento de novas formulações para aplicações farmacêuticas e cosméticas / Abstract: The hyaluronic acid (HA) is a natural polysaccharide composed of alternating units dissacarídeas between the N-acetyl-D-glucosamine and Dglucuronic acid. HA plays a key role in the maintenance of tissue integrity, facilitating adhesion and cell differentiation during inflammation, wound repair, and with the formation of blood vessels. The vegetable species Arrabidaea chica (Humb. & Bonpl.) Verlot is found throughout Brazil and it is assigned therapeutic properties for skin diseases. The Micro and nanoencapsulation of active compounds tend to increase their efficiency of action for providing protection and greater interaction with tissues due to its high surface area. In this work we studied the influence of operational variables for the production of micro and nanoparticles of HA through of w / o emulsification and crosslinking with adipic dihydrazide (ADH). The Arrabidaea chica vegetable extract was encapsulated in HA micro and nanoparticles and the angiogenic activity and healing evaluated. The results showed that the formation and physicochemical properties of HA particles produced by emulsification are directly related to the stirring still, pH and both ratios ADH and crude extract with AH. In vitro assays in human fibroblast cells with empty or encapsulating the A. Chica extract showed no cellular toxicity. In vivo assays performed in CAM, mouse back tegument and mice demonstrated the angiogenic effect of micro and nanoparticles formed with induction of the formation of new blood vessels essential to the healing process.From these results we conclude that the encapsulation benefited and enhanced the healing activity of the crude extract of A. chica contributing to the development of new formulations for pharmaceutical and cosmetic applications / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutora em Engenharia Quimica

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