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Investigação diagnóstica de doença concomitante babesiose e anaplasmose em rebanho eqüino, por técnicas de Nested PCR e c - ELISA ou ELISA indireto / Diagnostic investigation of concomitant disease babesiosis and anaplasmosis in equine herd by nested PCR e - ELISA or indirect ELISA

Andréa Cristina Parra 11 December 2009 (has links)
Em função da proximidade cada vez maior entre o cavalo e o homem, é de extrema importância ter conhecimentos das doenças que acometem os equinos, que por ventura, podem acometer seres humanos. Dentre muitas doenças, pode-se citar duas, que promovem grandes perdas econômicas aos rebanhos eqüinos, tanto no tratamento desses rebanhos, como com a morte dos mesmos, dificultando a importação e exportação de animais: a babesiose e a erliquiose (anaplasmose), que podem estar ou não associadas, acometendo um animal, concomitantemente. A presente pesquisa teve como objetivo investigar e diagnosticar doença concomitante babesiose (por Babesia equi ou Theileria equi) e Erliquiose (por Erliquia equi ou Anaplasma phagocytophilum), no estado de São Paulo, em rebanhos eqüinos, utilizando as técnicas de Nested PCR (Nested polymerase chain reaction reação em cadeia pela polimerase para diagnóstico de T. equi e A. phagocytophilum) e c-ELISA (competitive enzyme-linked immunosorbent assay para diagnóstico de T. equi) ou ELISA indireto (para diagnóstico de A. phagocytophilum) e comparar os resultados obtidos nas diferentes técnicas em 250 amostras de eqüino (sangue total e soro). Como resultado, obteve-se 38,4%, 46% e 36% de positividade, respectivamente, nos testes de pesquisa de hematozoário, c-ELISA e Nested PCR para Theileria equi e 0%, 3% e 0% de positividade, respectivamente, nos testes de pesquisa de hemoparasita, ELISA indireto e Nested PCR para Anaplasma phagocytophilum, não sendo observada a co-infecção de Babesiose e Anaplasmose no rebanho estudo / Due to the increasing proximity between horse and man, it is of extreme importance to understand the diseases that affect horses which by chance may affect humans. Among many diseases, babesiosis and ehrlichiosis (anaplasmosis) promote high economic losses to horses herds in consequence of costs of treatment and also death, making it difficult to import and export animals: They can or not be linked affecting an animal at the same time. This study aimed to investigate and diagnose concomitant babesiosis (Babesia equi and Theileria equi) and ehrlichiosis (for ehrlichia equipment or Anaplasma phagocytophilum) in equine herds of the state of Sao Paulo, using the techniques of Nested PCR (Nested polymerase chain reaction for the diagnosis of T. equi and A. phagocytophilum) and c-ELISA (competitive enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosis of T. equi) or ELISA (for diagnosis of A. phagocytophilum). Also to compare results obtained in these different techniques in 250 samples of horse (whole blood and serum). Results showed 38.4%, 46% and 36% positivity, respectively, in tests for the detection of Theileria equi through hematozoan, c-ELISA and Nested PCR and 0%, 3% and 0% positivity, respectively, in tests for the detection of Anaplasma phagocytophilum through blood parasites, indirect ELISA and Nested PCR. It was not observed co-infection Babesiosis and anaplasmosis in the herd study
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Termite Ectoparasitic Fungi in Japan: Distribution, Prevalence, and Molecular Detection / 日本におけるシロアリ外部寄生菌 : 分布、感染率および分子生物学的検出法

Ikhsan, Guswenrivo 26 March 2018 (has links)
京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(農学) / 甲第21156号 / 農博第2282号 / 新制||農||1059(附属図書館) / 学位論文||H30||N5130(農学部図書室) / 京都大学大学院農学研究科森林科学専攻 / (主査)教授 吉村 剛, 教授 杉山 淳司, 教授 本田 与一 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Agricultural Science / Kyoto University / DFAM
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Pesquisa molecular de fungos patogênicos em quirópteros da região de Botucatu-SP

Paz, Giselle Souza da January 2017 (has links)
Orientador: Helio Langoni / Resumo: Atualmente dentre as doenças emergentes a maioria são zoonoses, e os morcegos desempenham papel importante como fonte de infecção e transmissão de agentes infecciosos. Histoplasmose e criptococose são doenças fúngicas relatadas em diversas espécies animais, podendo seus agentes serem isolados de grutas, cavernas, solo e fezes de animais. Paracoccidioidomicose, doença fúngica mais importante no Brasil, acomete principalmente populações de baixa renda, na zona rural e já foi relatada em animais silvestres e domésticos. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi realizar a detecção molecular dos fungos Histoplasma capsulatum, Cryptococcus spp. e Paracoccidioides brasiliensis em quirópteros no município de Botucatu e região, SP. O delineamento do estudo foi de série de casos, a partir de morcegos recolhidos e enviados pela Vigilância Epidemiológica municipal de 12 cidades da região Centro-Oeste de São Paulo para o diagnóstico de raiva, no período de abril de 2015 a maio de 2016. Foram coletados pulmão, baço, fígado e intestino de 172 quirópteros, e avaliados pelas técnicas de nested-PCR e cultivo microbiológico. A prevalência encontrada para H. capsulatum foi de 8,14% (14/172), com um morcego positivo somente no cultivo microbiológico, 12 na técnica de nested-PCR, e um animal positivo em ambos os métodos. Dois morcegos foram positivos para Cryptococcus spp. e dois para P. brasiliensis pela técnica de nested-PCR. Como auxílio do software Autocad® foi realizado georreferenciame... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre
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Pesquisa molecular de fungos patogênicos em quirópteros da região de Botucatu-SP / Research molecular of pathogenic fungi in bats from Botucatu region

Paz, Giselle Souza da [UNESP] 16 February 2017 (has links)
Submitted by Giselle Souza da Paz null (giselle.spaz@yahoo.com.br) on 2017-02-24T03:10:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação.pdf: 1081711 bytes, checksum: 854b92b0e4655258cb81dd326f478bd5 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-02T18:12:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paz_gs_me_bot.pdf: 1081711 bytes, checksum: 854b92b0e4655258cb81dd326f478bd5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-02T18:12:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paz_gs_me_bot.pdf: 1081711 bytes, checksum: 854b92b0e4655258cb81dd326f478bd5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Atualmente dentre as doenças emergentes a maioria são zoonoses, e os morcegos desempenham papel importante como fonte de infecção e transmissão de agentes infecciosos. Histoplasmose e criptococose são doenças fúngicas relatadas em diversas espécies animais, podendo seus agentes serem isolados de grutas, cavernas, solo e fezes de animais. Paracoccidioidomicose, doença fúngica mais importante no Brasil, acomete principalmente populações de baixa renda, na zona rural e já foi relatada em animais silvestres e domésticos. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi realizar a detecção molecular dos fungos Histoplasma capsulatum, Cryptococcus spp. e Paracoccidioides brasiliensis em quirópteros no município de Botucatu e região, SP. O delineamento do estudo foi de série de casos, a partir de morcegos recolhidos e enviados pela Vigilância Epidemiológica municipal de 12 cidades da região Centro-Oeste de São Paulo para o diagnóstico de raiva, no período de abril de 2015 a maio de 2016. Foram coletados pulmão, baço, fígado e intestino de 172 quirópteros, e avaliados pelas técnicas de nested-PCR e cultivo microbiológico. A prevalência encontrada para H. capsulatum foi de 8,14% (14/172), com um morcego positivo somente no cultivo microbiológico, 12 na técnica de nested-PCR, e um animal positivo em ambos os métodos. Dois morcegos foram positivos para Cryptococcus spp. e dois para P. brasiliensis pela técnica de nested-PCR. Como auxílio do software Autocad® foi realizado georreferenciamento dos pontos de recolhimento dos animais, verificando quirópteros positivos em escolas, praças, residências e hospitais. Conclui-se que a presença de morcegos positivos para fungos patogênicos em áreas urbanas, é um risco para a saúde pública, visto que estes animais podem favorecer a manutenção e transmissão de patógenos em ambientes caseiros. Medidas de manejo ambiental devem ser orientadas a população pelo Serviço de Vigilância Epidemiológica Municipal, visando diminuir a população de morcegos em ambientes domésticos e minimizar os riscos de transmissão de fungos patogênicos. / Currently, among the emerging diseases, most are zoonosis, and baths play an important role as source of infection and transmission of infectious agents. Histoplasmosis, criptococcosis and paracoccidioidomicosis are fungal diseases reported in several animal species, and their agents can be isolated in grottos, caverns, soils and feces of animals. Paracoccidioidomycosis, the most important fungal disease in Brazil, affects mainly low-income populations in rural areas and has been reported in wild and domestic animals. Thus, the objective of the present study was performing the molecular detection of the fungi Histoplasma capsulatum, Cryptococcus spp. and Paracoccidioides brasiliensis in bats from the city of Botucatu and region, state of São Paulo.The study was delineated with a series of cases, from bats collected and sent by the Municipal Epidemiologic Surveillance of 12 cities from the Midwest region of São Paulo for the rabies diagnosis, within the time period from April 2015 to May 2016. Lung, spleen, liver and intestine were collected from 172 bats and assessed by nested-PCR and microbiological cultive techniques.The prevalence found for H. capsulatum was 8.14% (14/172), with one positive bath only by culturing the fungus, 12 in the nested-PCR technique and a positive animal in both methods. Two bats were positive for Cryptococcus spp. and two for P. brasiliensis by nested-PCR. With the aid of Autocad® software, the georeferencing of the animals’collection spots was performed, verifying positive bats in schools, squares, residences and hospitals. We conclude that the presence of positive baths for pathogenic fungi in urban areas is a risk to public health, since these animals can help on the maintenance and transmission of pathogens in domestic environments. Environmental management measures must be conducted to the population by the Municipal Service of Epidemiologic Surveillance, with the purpose of decreasing the baths population in domestic environments and minimizing the risk of transmitting pathogenic fungi. / FAPESP: 2014/23234-0
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Epidemiological Features of natural Mycoplasma hyopneumoniae infection in pigs in Spain

Sibila Vidal, Marina 27 July 2004 (has links)
En aquesta Tesis, s'ha estudiat per una banda, 1) la dinàmica de infecció de Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) a nivell de granja i la seva relació amb els diferents sistemes de producció i 2) la correlació entre la detecció d'aquest patogen a diferents nivells del tracte respiratori (cavitat nasal, tonsil.la, i bronqui) amb la seroconversió, i presència de lesions macroscópiques i microscópiques suggestives de la Pneumònia Enzoòtica (PE) a nivell de casos clínics i nivell d'animals de camp. Del estudi de la dinàmica de infecció en vam concloure que característiques inherents de cada granja tenien un efecte molt important en el patró de circulació de M.hyopneumoniae. Fins i tot dins d'una mateixa granja, es podien trobar dinàmiques de infecció diferents entre diferents lots d'animals, repercutint en diferents graus i moments d'aparició de les lesions. A més a més, el tipus de producció utilitzat (1-2 llocs versus 3 llocs) també influenciava la dinàmica de infecció del patogen. Els resultats obtinguts en les granges en 3 llocs, clarament donen suport a la característica tardana aparició del complex respiratori porcí en els sistemes de producció en múltiples fases. De fet, la colonització en transició era menor i més tardana en els sistemes en 3 llocs comparats amb en 1-2 llocs. A més a més, en els sistemes de producció en múltiples fases, s'observava un increment molt brusc de la proporció d'animals infectats associat a brot respiratoris tardans.Malgrat que la infecció per M.hyopneumoniae es va detectar en totes les granges, aquest patogen no estava sempre involucrat en els problemes respiratoris observats. De fet, es van observar garnges infectades clínica i subclínicament per M.hyopneumoniae Aquest fet pot ser important en el moment de prendre decisions sobre les estratègies de prevenció i control de malalties. Els seroperfils no van resultar ser discriminatius per determinar el paper del agent en els problemes respiratoris observats. Els bacterioperfils van ser més útils per determinar el paper del patogen, ja que l'aparició de la simptomatologia clínica estava estretament lligada a un increment de la proporció d'animals infectats (basat en la detecció de M.hyopneumoniae en hisops nasals). Tot i no ser discriminatiu, la proporció d'animals seropositius va ser major també en les granges afectades clínicament que en les subclinicament. La seroconversió en front a aquest agent ha estat descrita com lenta, retardada i molt variable. Ens els estudis de camp presentats en aquesta Tesis, la seroconversió també va ser variable. Sembla ser, que la seroconversió estava més relacionada amb la detecció de M.hyopneumoniae en els hisops bronquials que en els nasal o tonsil.lars, i a la vegada amb el percentatge d'animals amb els hisops bronquials positius.Tal i com s'esperava, l'hisop bronquial va ser el millor en predir la presencia de lesions macroscópiques i microscópiques de PE coincidint amb els treball prèviament publicats. Sorprenentment, la proporció relativa de detecció de M.hyopneumoniae en hisops nasals va ser menor en l'estudi de camp que en l'estudi on les mostres de diagnòstic. La major proporció d'hisops positius en els animals de diagnòstic es podria explicar per: un increment de l'excreció de M. hyopneumoniae degut a situacions estressants (tal com el transport) o el increment de la multiplicació de les bactèries després d'unes hores de la mort de l'animal. Els resultats d'aquesta Tesis, han demostrat que M. hyopneumoniae es pot detectar en tonsil.la, on no hi ha cèl·lules epitelials. Malgrat el mostreig d'hisops tonsil.lar en animals vius es possible però molt laboriós, pot esdevenir un lloc de mostreig més adequat per monitorejar la infecció per M.hyopneumoniae a nivell de granja. Per altre banda, el resultats obtinguts, demostren que quan l'hisop bronchial és positiu, la probabilitat de tenir lesions macroscópiqes i microscópiques compatibles amb PE és alta. Tanmateix, la presencia d'aquestes lesions no sempre implica la detecció de M.hyopneumoniae en bronqui, ja que poden ser causades per altres patògens com pot ser SIV. / The research presented in this Thesis assessed 1) the dynamics of infection of M. hyopneumoniae at a herd level and its relationship with production systems and 2) its detection in three respiratory levels (nasal cavities, tonsil and bronchi), taking into account the presence of seroconversion and macroscopic and microscopic lung lesions suggestive of Enzootic Pneumonia (EP)The studies on infection dynamics showed that the factor with greatest effect on M. hyopneumoniae circulation pattern was the farm. Even within a farm, significant differences in the dynamics of infection between different batches were observed, which were also related with different degrees and timings of M. hyopneumoniae -related lesions appearance.Moreover, the type of production system (1/2-site versus 3-site herds) was another factor that influenced M.hyopneumoniae infection dynamics. Results of our field trial in regards M.hyopneumoniae, involving 12 Spanish herds clearly support the characteristic late appearance of Porcine Respiratory Disease Complex (PRDC) in multisite production systems. M. hyopneumoniae colonization in nurseries was lower and occurred later in time in 3-site versus in 1/2-site production systems. Moreover, an abrupt increase in the proportion of infected animals, associated with late respiratory outbreaks was seen in the multisite production systems. Although M. hyopneumoniae infection was detected in all farms, it was not always involved in the respiratory disease. An important contribution of this work is that, although seroconversion and M. hyopneumoniae infection were detected in all herds, clinical and subclinical infections were described. This is important for decision making on the control strategies to implement at the farm. Serumprofiles were not discriminative to determine the involvement of M. hyopneumoniae in a clinical outbreak. Bacteriumprofiles were more useful in determining M. hyopneumoniae involvement in respiratory disease, since an increase of the proportion of infected pigs (based on detection of M. hyopneumoniae in nasal swabs) was clearly related with appearance of the clinical outbreak. Although not discriminative, the proportion of seropositive pigs was also greater in clinically than in subclinically infected herds. Dynamics of serocoversion against M. hyopneumoniae was another issue addressed in both, transversal and longitudinal field trials. Several authors have described the time of seroconversion under field conditions as slow, delayed and vaery variable. In field studies presented here time of seroconversion was also variable. Seroconversion was more related to detection of M. hyopneumoniae in bronchial swabs rather than in nasal or tonsillar swabs, and to the detection of a higher percentage of pigs with a positive nPCR bronchial swab. As expected, bronchial swabs were the best predictors of presence of microscopic and gross EP lesions coinciding with previously published studies. However, to sample bronchial swabs from live animals is not possible. Surprisingly, the relative proportion of nasal detection was lower in the field study than in the study using pigs received at the diagnostic laboratory. An increase of M.hyopneumoniae shedding in nasal cavities due to stressful situations (such as transport) or due to increase multiplication of bacteria after the animal's death have been proposed as potential explanations for a larger proportion nPCR positive nasal samples obtained in diagnostic samples.Results of this study demonstrated that detection of M.hyopneumoniae in tonsil where no ciliated epithelial cells exists, is possible. Although tonsillar sampling in live animals is more laborious than nasal samplings, it is possibly more adequate to monitor M. hyopneumoniae detection at a farm level. Results obtained in this Thesis and from previous works, showed that when bronchial swabs are positive the probability to show EP-compatible microscopic lesions in the animal is high. However, presence of EP-compatible lesions does not always imply M. hyopneumoniae detection in bronchi, and that may be caused by other pathogens such as SIV.
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Identificação de bocavírus humano em amostras fecais de crianças com gastroenterite aguda

Sampaio, Madina Lyve da Silva 31 October 2014 (has links)
Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-09-12T13:18:14Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - Madina Lyve.pdf: 1838310 bytes, checksum: 0edc784fb4493f69c9c8d82247d22030 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-09-19T18:53:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - Madina Lyve.pdf: 1838310 bytes, checksum: 0edc784fb4493f69c9c8d82247d22030 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T18:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - Madina Lyve.pdf: 1838310 bytes, checksum: 0edc784fb4493f69c9c8d82247d22030 (MD5) / FAPESB / A gastroenterite aguda é considerada uma importante causa de morbidade e mortalidade entre crianças em todo o mundo, especialmente nos primeiros anos de vida. Tal doença pode ser provocada por infecções causadas por bactérias, fungos, protozoários e, principalmente, vírus. Dentre as infecções virais, destacam-se: Norovírus (NoV), Rotavírus (HRV), Adenovírus (AdV) e, mais recentemente identificado, o Bocavírus Humano (HBoV). O HBoV possui DNA de fita simples, não envelopado e pertencente à família Parvoviridae, gênero Bocavírus. Apresenta quatro proteínas, sendo estas VP1 e VP2, proteínas estruturais, NS1, proteína não estrutural e a nucleoproteína NP1 com função desconhecida. Com o intuito de verificar a existência e determinar as espécies circulantes do HBoV em Salvador-Bahia, no período de Janeiro a Julho de 2012, o presente estudo analisou 105 amostras fecais de crianças menores de 5 anos de idade que deram entrada na emergência de uma Unidade Hospitalar com quadro clínico de gastroenterite aguda. Através da extração do DNA e posterior reação do nested-PCR foi possível observar que o HBoV estava presente em 42% das amostras testadas, percentual de positividade considerado alto quando comparado a outros estudos onde a frequência do vírus havia sido menor. Além disso, testes imunoenzimáticos também foram realizados nessas amostras para verificar a presença de viroses entéricas (NoV, HRV e AdV), revelando que 27% das amostras positivas para HBoV estavam co-infectadas com NoV e AdV, enquanto a maior parte tratava-se de infecção apenas por HBoV. O sequenciamento e análise filogenética das sequências virais mostraram que estas pertencem as espécies HBoV-1 e HBoV-2A, sendo esta última, até o momento, nunca relatada no Brasil. Por fim, o presente trabalho busca, de forma inovadora e pioneira no estado da Bahia, direcionar as pesquisas para este novo agente etiológico que vem sendo identificado em pacientes com sintomas de gastroenterite aguda em todo o mundo e que agora também foi detectado na população de Salvador.
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Estudos moleculares aplicados ao circovírus suíno tipo 2: desenvolvimento da técnica de Nested-PCR em tubo único (STNPCR) e descrição das variantes virais em Pernambuco

PONTES, Nayara Evaristo de 31 January 2014 (has links)
Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T15:17:34Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Nayara Evaristo Pontes.pdf: 1260344 bytes, checksum: 91a47c546488e8c96e02bf7cbc6d3631 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T15:17:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Nayara Evaristo Pontes.pdf: 1260344 bytes, checksum: 91a47c546488e8c96e02bf7cbc6d3631 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CNPq; CAPES / O Circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus sem envelope e contém um DNA fita simples circular com 1,7 kb de tamanho. O vírus pertence ao gênero Circovírus da família Circoviridae. O PCV2 é o agente etiológico da Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (PMWS), doença que causa grande impacto econômico na suinocultura mundial. O objetivo deste trabalho foi desenvolver a técnica de STNPCR para detecção do Circovírus suíno tipo 2 (PCV2) bem como avaliar a presença de diferentes variantes virais em Pernambuco. Foram utilizados controles positivos, negativos, e 55 amostras de tecidos de animais clinicamente normais obtidas em abatedouro. Para o desenvolvimento da STNPCR foram avaliadas diferentes temperaturas de anelamento para os primers externos e internos. A atuação de ambos os pares de primers foi realizada de forma independente, sendo que o segundo par de primers foi imobilizado na parte interna da tampa do microtubo e após a primeira etapa de amplificação os primers foram eluídos por inversão do microtubo. Além disso, foi realizada a análise de achado técnico buscando encontrar os genótipos do PCV2 já descritos no Brasil e mundialmente, os subtipos PCV2a e PCV2b. Na aplicação clínica, a STNPCR foi comparada com a NPCR e resultaram em reações positivas para o PCV2 em 100% (55/55) das amostras analisadas, revelando igual sensibilidade e especificidade, porém, com menor risco de contaminação cruzada. Na análise de achado técnico (sequências da ORF2 do PCV2), foi possível identificar os genótipos PCV2a e PCV2b. A técnica molecular STNPCR demonstrou ser eficaz para detecção do DNA viral e pode ser aplicada em estudos epidemiológicos para o PCV2 e auxiliar no diagnóstico laboratorial da PMWS.
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Diagnóstico molecular para malária por nestedpcr e pcr em tempo real.

Hipólito, Janayna Roriz 28 July 2006 (has links)
Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao-Janaina Roriz Hipolito.pdf: 4312682 bytes, checksum: ecb7ef268b16e006660e9770d5f663b4 (MD5) Previous issue date: 2006-07-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / A malária é um problema de saúde pública na região Amazônica, mais de 200 mil casos dessa doença ocorrem anualmente no Amazonas, sendo 80% deles causados pelo P. vivax, que vem apresentando índices crescentes de morbidade, principalmente associados à diminuição da sensibilidade aos antimaláricos. Dentre as estratégias para combate e controle da doença, a identificação rápida e precisa da espécie é ferramenta indispensável para um tratamento apropriado, diminuição do risco de transmissão e melhor entendimento da epidemiologia desses parasitas. A técnica microscópica da gota espessa é a principal para diagnóstico da malária, entretanto, outros métodos vêm sendo testados, principalmente os moleculares que tem se mostrado mais sensíveis e específicos para detectar e diferenciar as espécies em baixas parasitemias. Avanços desse método, como a PCR em tempo real, permitem que o resultado do teste seja detectado simultaneamente a amplificação, diminuindo o tempo gasto para a realização do diagnóstico. Com o intuito de detectar molecularmente a malária, verificando a presença de plasmódios, o diagnóstico molecular foi realizado através das técnicas de PCR em tempo real e nested-PCR, para se fazer uma comparação desses dois métodos com o diagnóstico microscópico da gota espessa em 300 amostras criopreservadas, 200 coletadas no dia inicial do tratamento (D0), das quais 88% (176/200) eram provenientes de pacientes de Manaus, as 24 amostras restantes (12%) eram provenientes de localidades do interior do Amazonas: São Gabriel da Cachoeira (09), Tefé (08), Humaitá (04) e Careiro (03). Apenas 9% dessas amostras tinham diagnóstico microscópico de monoinfecção por P. falciparum e 91% (182/200) por P. vivax, não havia nenhuma amostra mista pelo diagnóstico microscópico. O diagnóstico molecular por nested-PCR confirmou a presença de DNA de plasmódio em 100% das amostras monoinfectadas. Adicionalmente, foram observadas infecções mistas, co-infecção de P. falciparum e P. vivax, em 19% (38/200) destas amostras. O diagnóstico molecular por PCR em tempo real (Lightcycler, Roche®) foi realizado em apenas 17% (34/200) dessas amostras. A co-positividade (sensibilidade) dos testes para P. vivax foi em média 71% e a co-negatividade (especificidade) 92%, para P. falciparum a co-positividade foi 91% e a conegatividade 79%. A concordância entre os testes foi regular. As 100 amostras restantes haviam sido coletadas no sétimo dia (D7) de tratamento e eram negativas pela microscopia. O diagnóstico molecular demonstrou 21% de positividade. Este estudo mostrou que muitas infecções mistas vêm sendo subestimadas para fins de avaliação epidemiológica, demonstrando que a sensibilidade e especificidade do diagnóstico molecular são superiores a do teste microscópico. O diagnóstico molecular seria então mais indicado como teste complementar no diagnóstico de pacientes com baixas parasitemias, na análise da quantidade de portadores assintomáticos, em estudo de infecções criptônicas e na avaliação da negativação da parasitemia para monitoramento terapêutico, e em estudos que visem a diminuição da transmissão pela existência de prováveis gametócitos persistentes após o tratamento. Entretanto, esse método não é indicado para rotina de diagnóstico de malária, uma vez que os resultados positivos por essa técnica não significam necessariamente que o paciente desenvolva a doença.
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Co-infecção do papilomavírus humano e chlamydia trachomatis em mulheres com citologia normal e alterada

Lira, Evelyn Costa 10 December 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2015-04-22T22:14:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Evelyn Costa Lira.pdf: 1005417 bytes, checksum: 3bedf4425cb61a6cb9ef7da53b2dd67f (MD5) Previous issue date: 2010-12-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The cervical cancer is the second most common type of cancer between women worldwide. In Brazil, 18.430 new cases of the disease are expected through 2010. Its incidence is greater in the North region. One of the most crucial factors to the spawning of this kind of cancer is the presence of an infection caused by the HPV (Human Papillomavirus). By itself, this virus can t lead to carcinogenesis. Some studies suggest the presence of Chlamydia trachomatis as a co-factor in its development. This study s goal was to investigate the co-infection of HPV and C. trachomatis in cervical samples with normal and altered cell biologies. Its consisted of a transversal study, where two groups were applied: GROUP I, made of 152 women who showed pre-malignant and malignant cervical injuries, and GROUP II, of 164 women who showed inflammatory cell biology. The HPV/C. trachomatis co-infection was detected through PCR and the two HPV types were detected by sequencing. Co-infection was found in 27,1% (41/152) of women in GROUP I and 3,75% in GROUP II s. The connection between the co-infection and the environmental, socio-economic and clinical factors was observed only to the variable HPV type (p=0,0424) which associates HPV 16 to 64,1% of co-infected women. / O câncer de colo do útero é o segundo tipo de câncer mais comum entre as mulheres no mundo inteiro. Para o Brasil, o número de novos casos esperados, em 2010, é de 18.430. Na região Norte é o mais incidente. Um dos fatores mais importantes para o surgimento deste tipo de câncer é a presença da infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV). Sozinho, este vírus não pode levar à carcinogênese. Alguns estudos sugerem a presença da Chlamydia trachomatis como co-fator em seu desenvolvimento. Este estudo teve como objetivo investigar a co-infecção de HPV e C. trachomatis em amostras cervicais com citologia normal e alterada. Trata-se de um estudo transversal, onde foram utilizados dois grupos: o GRUPO I, constituído de 152 mulheres que apresentaram lesões pré-malignas e malignas do colo do útero e o GRUPO II, constituído de 164 mulheres que apresentaram citologia inflamatória. A co-infecção HPV/C. trachomatis foi detectada através da PCR e os tipos de HPV foram identificados via seqüenciamento. Foi encontrada co-infecção em 27,1% (41/152) das mulheres do GRUPO I e em 3,75% das mulheres do GRUPO II. A associação entre a co-infecção e os fatores sócio-econômicos-ambientais e clínicos foi observada apenas para a variável Tipo de HPV (p=0,0424) que associa o HPV 16 a 64,1% das mulheres co-infectadas.
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Prevalência de Ehrlichia canis pela técnica de nested-PCR e correlação com a presença de mórula e trombocitopenia em cães de Alegre-ES

Sales, Mara Rúbia Rocha Pereira 26 June 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mara Rubia Rocha Pereira Sales.pdf: 980226 bytes, checksum: 42a133fd63917e32301d6df4c9b4fca5 (MD5) Previous issue date: 2012-06-26 / The aim of this study was determined by nested-PCR the presence of Ehrlichia canis in dogs located in the municipality of Alegre-ES and evaluate its correlation with morulae and thrombocytopenia. For this purpose blood samples were collected from 85 dogs, regardless of race, age, sex or health status. With these, slides were obtained for the detection of morulae, thrombocytopenia, and execution of nested-PCR technique. We verified a prevalence of 1.17% to investigated the presence of morulae, 5.6% when using the technique of nested-PCR, and was verified that 17.64% of the CBCs were thrombocytopenia. However, only 40% of positive samples by nested-PCR showed thrombocytopenia. The results presented in this study demonstrate that the introduction of molecular diagnostic techniques such as nested-PCR is an important method to aid in the early diagnosis of diseases / Objetivou-se com este estudo determinar por meio da nested-PCR a prevalência da Ehrlichia canis em cães da região de Alegre-ES, e avaliar sua correlação com a presença de mórulas e trombocitopenia. Para isso, foram colhidas amostras sanguíneas de 85 cães, independente de raça, sexo, idade e estado de saúde. Com estas, foram confeccionadas lâminas para a pesquisa de mórulas, trombocitopenia, e execução da técnica de nested-PCR. Foi verificada uma prevalência de 1,17% ao pesquisar a presença de mórulas, 5,6% ao utilizar a técnica da nested-PCR, e foi verificada que 17,64% dos hemogramas apresentavam trombocitopenia. No entanto, somente 40% das amostras positivas pela nested-PCR, apresentaram trombocitopenia. Os resultados apresentados neste estudo demonstram que a introdução de técnicas de diagnóstico molecular como a nested-PCR é um método importante para o auxílio no diagnóstico precoce de patologias

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