Introdução: O declínio cognitivo relacionado à neurocisticercose (NC) ainda permanece mal caracterizado e pouco diagnosticado. Recentemente, nosso grupo mostrou que uma significativa parcela de pacientes com NC na fase cística ativa apresenta-se com declínio cognitivo e comprometimento funcional (Ciampi de Andrade et al., 2010). Não existem estudos controlados que avaliem essas alterações em pacientes com NC na fase calcificada na literatura até presente momento. Objetivos: Avaliar o desempenho cognitivo do maior subgrupo de NC, constituído de pacientes com NC na fase estritamente calcificada (C-NC). Verificar a presença de demência e comprometimento cognitivo sem demência (CCSD) nesses pacientes e tentar correlacionar os resultados obtidos a achados de neuroimagem. Investigar se existe presença de um espectro de anormalidade cognitiva na NC conforme a fase da doença. Metódos e Casuística: Quarenta pacientes (média de idade = 37,6+ 11,3 anos e escolaridade média= 7,0+ 3,5 anos), com critérios diagnósticos absolutos de C-NC foram submetidos à avaliação cognitiva e funcional, sendo comparados a 40 pacientes controles saudáveis (CS) e 40 pacientes com NC ativa (A-NC), emparelhados por idade e nível educacional. Todos os pacientes do grupo C-NC foram submetidos a estudo de RM de encéfalo, a fim de excluir outras causas de epilepsia e sinais de atividade inflamatória. Resultados: Os doentes C-NC apresentaram uma média de 9,40 ± 3,13 testes alterados dos 30 da bateria de avaliação cognitiva quando comparados aos CS. Nenhum paciente C-NC mostrou critérios para demência e 10 (25%) tiveram critérios para CCSD. O grupo ANC tinha 5 pacientes (12,5%) com demência e 11 (27,5%) com CCSD. Mais de 50% dos doentes C-NC apresentaram desempenho inferior em memória verbal, atenção e função executiva em comparação aos CS. Não se encontrou correlação entre as alterações nos testes cognitivos nos pacientes C-NC e A-NC e os achados de neuroimagem e a frequência de crises epilépticas. Dos 4 pacientes reavaliados com demência do grupo A-NC após 2 anos, 3 deles ainda mantinham critérios de demência e na reavaliação por neuroimagem ainda apresentavam cistos. O único que não mais preenchia critérios para demência ou CCSD, exibia apenas calcificações na neuroimagem controle. Conclusões: Os resultados do presente estudo controlado indicaram que a NC independente de sua fase leva a um espectro de alterações cognitivas que varia de comprometimento em um simples domínio, CCSD até, ocasionalmente, demência. Estes achados parecem ser mais intensos durante a fase ativa cística da doença e menos proeminentes no estágio calcificado / Introduction: Cognitive decline related to neurocysticercosis (NC) remains poorly characterized and underdiagnosed. We have previously shown that a significant proportion of active NC patients (A-NC) present cognitive and functional impairment. Until now, there is no control study that have evaluated cognitive abnormalities in patients in the calcified phase of NC. Objective: To evaluate the cognitive performance of the largest subgroup of NC, the strict calcified patients (C-NC). Check the presence of dementia and cognitive impairment no-dementia (CIND) and correlate the results with neuroimaging findings. To investigate whether there is a spectrum of cognitive abnormalities in the disease according to disease phase. Methods and participants: Forty treatment-naive patients with C-NC aged 37.6 ± 11.3 years and fulfilling absolute criteria for definitive C-NC were submitted to a comprehensive cognitive and functional evaluation and were compared with 40 active NC patients (A-NC) and 40 healthy controls (HC) matched for age and education. All patients of C-NC group underwent brain MRI study in order to exclude other causes of epilepsy and signs of inflammatory activity. Results: Patients with C-NC presented 9.4 ± 3.1 altered test scores out of the 30 from the cognitive battery when compared to HC. No C-NC patient had dementia and 10 patients (25%) presented CIND. The A-NCYST group had five patients (12.5%) with dementia and 11 patients (27.5%) with CIND. More than 50% of C-NC patients had low performance in verbal memory, attention and executive functions in comparison to CS. No significant correlation was found between cognitive performance and the number of lesions and seizure frequency. On follow-up, three out of five previously demented A-NCYST patients still presented cystic lesions with scolex on MRI and were still demented. One patient died and the remaining patient no longer fulfilled criteria for neither dementia nor CIND, presenting exclusively calcified lesions on neuroimaging. Conclusion: The results of our controlled study shows that NC, independently of its phase, leads to a spectrum of cognitive abnormalities, ranging from impairment in a single domain, to CIND and, occasionally, to dementia. These findings are more conspicuous during active vesicular phase and less prominent in calcified stages

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIA SOCORRO DE SOUZA MELO.pdf: 829546 bytes, checksum: aedaeeeaab31a7fc6d79b11cf6de46d3 (MD5) Previous issue date: 2011-12-12 / The complex teníase-cisticercose/neurocisticercose the condition is caused by central nervous system infection by Cysticercus cellulosae, the larval form of Taenia solium. She is probably the main reason for high prevalence of epilepsy in Brazil and has endemic. The objectives of this study were to analyze the environmental conditions, habits and quality of life of patients with neurocysticercosis, check the features of the crises in terms of environmental conditions, dietary habits, origin of patients and quality of life according to the characteristics of the habits of age, sex and origin of the patients. Thus, we selected 102 patients with neurocysticercosis and epilepsy assessed by three instruments: Epidemiological Questionnaire; Economic Classification Criteria and Quality of Life Questionnaire. According to the results obtained, there was a predominance of females, the level of education ranging from elementary school and the average age of 16 to 68 years of age, coming, mostly in urban areas and Class D besides having basic sanitation (79.6%). However, (69.8%) usually consumed water from other sources (74.8%) of them are eating pork, and, of respondents (62.1%) preparing raw meat (4.8% ) or undercooked (44.7%) reported intake of raw vegetables (62.1%) and almost all make a meal out of the house. In the mean age of onset of epileptic seizures, diet related, those who had ingestion of raw age of onset of seizures significantly lower (p = 0.006) than those who do not consume raw meat. However, when analyzing the domains of WHOQOLBREF, it was found that the most affected was the environmental domain (43.65%), while the physical domain had the highest average score (53.03%). Regarding the analysis of quality of life compared to the habits of life, it was noted that none of the variables contributed significantly to improving the quality of life of patients. It is suggested that urgent actions are taken because of the need for prophylactic measures which may occur through programs of Public Health. / O complexo teníase-cisticercose/neurocisticercose é a condição provocada pela infecção do sistema nervoso central pelo Cysticercus cellulosae, a forma larvária da Taenia solium. Ela é, provavelmente, a principal responsável pela elevada prevalência da epilepsia no Brasil e possui caráter endêmico. Os objetivos do presente estudo foram analisar as condições ambientais, hábitos e qualidade de vida de pacientes com diagnóstico de Neurocisticercose; verificar as características das crises em função das condições ambientais, hábitos alimentares, procedência dos pacientes e a qualidade de vida em função das características dos hábitos de vida, sexo e procedência dos pacientes. Dessa forma, foram selecionados 102 pacientes com diagnóstico de neurocisticercose epiléptica e avaliados por três instrumentos: Questionário Epidemiológico; Critério de Classificação Econômica e Questionário de Qualidade de Vida. Segundo os resultados obtidos, verificou-se o predomínio do sexo feminino, o nível de escolaridade oscilando entre o ensino fundamental e o médio, faixa etária dos 16 aos 68 anos de idade, procedentes, em sua maioria, da zona urbana e da classe D, além de possuírem saneamento básico (79,6%). Todavia, (69,8%) costumam consumir água de outras fontes, (74,8%) deles, fazem ingestão de carne de porco, sendo que, dos entrevistados, (62,1%) preparam carne crua (4,8%) ou malpassada (44,7%) fazem ingestão de verdura crua (62,1%) e quase todos fazem alguma refeição fora de casa. Em relação à média de idade de início das crises epilépticas, relacionada aos hábitos alimentares, os que fazem ingestão de carne crua apresentaram idade de início das crises significativamente menor (p=0,006) em relação aos que não consomem carne crua. Entretanto, ao analisar os domínios do WHOQOL-BREF, verificou-se que o mais comprometido foi o domínio ambiental (43,65%), ao passo que o domínio físico apresentou a melhor média de escore (53,03%). Já em relação a análise da qualidade de vida, comparada aos hábitos de vida, notou-se que nenhuma das variáveis contribuiu de forma significativa para a melhora da qualidade de vida dos pacientes. Sugere-se que ações urgentes sejam tomadas, devido à necessidade de medidas profiláticas o que pode ocorrer através de programas de Saúde Pública.

Introdução: Neurocisticercose (NCC) é a principal causa evitável de epilepsia adquirida no mundo. NCC, além de ser, a doença parasitária mais comum do SNC, representa um importante problema de saúde pública, especialmente em países em desenvolvimento. Estudos de neuroimagem são cruciais no diagnóstico e planejamento terapêutico da NCC. Apesar da ressonância magnética (RM) fornecer maior número e detalhe de informações sobre a doença, a tomografia computadorizada (TC) ainda é o método mais sensível na detecção de calcificação intracraniana, o achado radiológico mais comum da NCC. Objetivo: Comparar performance das sequências de RM ponderadas em suscetibilidade magnética na identificação de calcificações intracranianas em pacientes com NCC. Métodos: Estudo prospectivo, unicêntrico, no qual 57 indivíduos foram submetidos a TC e RM de crânio. Todos os indivíduos foram provenientes do Ambulatório de Doenças Infecciosas do Departamento de Neurologia do Hospital das Clínicas - Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP), com diagnóstico confirmado de NCC. O protocolo de RM incluiu uma sequência convencional 2D gradiente eco (2D-GRE) e duas relativamente novas sequências de suscetibilidade magnética: susceptibilityweighted imaging (SWI) e principles of echo shifting with a train of observations (PRESTO). A TC foi considerada método padrão de referência. Dois neurorradiologistas, cegos para os dados clínicos e demais achados radiológicos, analisaram independentemente as sequências 2D-GRE, SWI e PRESTO quanto à presença, número e localizações de calcificações intracranianas atribuídas a NCC. Resultados: Foram identificadas, pela TC, 739 lesões calcificadas relacionadas a NCC em 50 dos 57 indivíduos incluídos no estudo. A média de lesões calcificadas por paciente foi de 12,9 (± 19,8). A médias de lesões encontradas pelas sequências de suscetibilidade magnética, obtido através da média dos resultados dos observadores, foi de 10,8 (± 17,5) para PRESTO, 10,6 (± 17,3) para SWI e 8,3 (± 13,6) para 2D-GRE. Neste quesito não houve diferença estaticamente significativa entre PRESTO e SWI (p = 0,359) e ambos foram superiores a 2D-GRE (p < 0,05). A concordância foi fraca a moderada, provavelmente devido ao alto número de lesões falso-positivas encontradas (490), das quais 53,9% representavam lesões relacionadas a NCC em estágios não calcificados. A sensibilidade e especificidade das sequências estudadas em identificar corretamente indivíduos com NCC em estágio calcificado foi respectivamente de 85% e 100% para 2D-GRE, 90% e 100% para SWI e 93% e 100% para PRESTO. Conclusão: As sequências SWI, PRESTO e 2D-GRE apresentam boa sensibilidade na identificação de lesões calcificadas em pacientes com NCC. As sequências SWI e PRESTO tiveram melhor performance do que 2D-GRE. Todas as sequências estudadas mostrarem-se apropriadas para identificar indivíduos com NCC no estágio de calcificação. Sequências ponderadas em suscetibilidade magnética podem ajudar no entendimento da história natural, fisiopatologia e achados de imagem da NCC / Background: Neurocysticercosis (NCC) is the main preventable cause of acquired epilepsy. NCC, besides being the most common parasitic disease of the CNS, is an important public health problem, mainly in developing countries. Neuroimaging studies are crucial in the diagnosis and therapeutic planning of NCC. Although magnetic resonance imaging (MRI) provides countless and more detailed information about the disease, computed tomography (CT) is still the most sensitive method for detecting intracranial calcification, the most common radiological finding of NCC. Purpose: To compare the diagnostic performance of susceptibility-weighted MRI sequences in identification of intracranial calcifications in patients with NCC. Methods: A prospective study with 57 subjects who underwent CT and MRI of the brain. All individuals came from Department of Neurology of the Hospital das Clínicas - Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP), with a stablished diagnosis of NCC. The MRI protocol included a conventional 2D gradient echo sequence (2D-GRE) and two relatively new susceptibility-weighted sequences: susceptibility-weighted imaging (SWI) and principles of echo shifting with a train of observations (PRESTO). CT was considered the standard reference method. Two neuroradiologists, blinded to clinical data and other radiological findings, independently analyzed the 2D-GRE, SWI and PRESTO sequences on behalf to presence, number and sites of intracranial calcifications attributed to NCC. Results: A total of 739 NCC-related calcified lesions were identified by CT in 50 of the 57 subjects included in the study. The mean number of calcified lesions per patient was 12.9 (± 19.8). The mean number of lesions found by the susceptibility-weighted MRI sequences, obtained through the mean of the observers\' results, was 10.8 (± 17.5) for PRESTO, 10.6 (± 17.3) for SWI and 8.3 (± 13.6) for 2D-GRE. There was no statistically significant difference between PRESTO and SWI (p = 0.359) and both were superior to 2D-GRE (p < 0.05). The concordance was weak to moderate, probably due to the high number of false-positive lesions found (490), of which 53.9% represented NCC-related lesions in non-calcified stages. The sensitivity and specificity of the sequences studied in correctly identifying individuals with calcified NCC were 85% and 100% respectively for 2D-GRE, 90% and 100% for SWI and 93% and 100% for PRESTO. Conclusion: SWI, PRESTO and 2D-GRE sequences have good sensitivity in the identification of calcified lesions in patients with NCC. SWI and PRESTO performed better than 2DGRE. All sequences studied are suitable for identifying individuals with NCC in the calcified stage. The new susceptibility-weighted MRI sequences may help in understanding the natural history, pathophysiology and imaging findings of NCC

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-16T13:07:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-16T13:10:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T13:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Abstract: Toxoplasma gondii is a pathogenic agente capable o causing both local and systemic disease in immunocompetent and immunocompromised individuals. It can be agressive inducing lesions in the central nervous system, viscera, eye globe and/or lymohatic ganglia. Neurocysticercosis is the most severe form of cysticercosis. It is the one of the main helminthiasis of the central nervous system leasing to varied symptoms. During toxoplasmosis infection the inflammatory response is typically pro-inflammatory. When there is co-infection between these two agents, this typical pro-inflammatory response may lead to the death of the parasites resulting in the release of antigens. Therefore an experimental model using T. gondii cysts and T. crassiceps antigens was developed. The aim of this study was to evaluate the influence of T. crassiceps cysticerci antigens in the modulation of the inflammatory response of the experimental neurotoxoplasmosis. BALB/c mice were inoculated with T. gondii cysts and/or T. crassiceps cysticerci antigens. The animals were euthanized 60 or 90 days after the inoculation. The histopathologic analysis and the cytokine dosage from spleen cell culture were performed. The animals from the neurotoxoplasmosis group at 90 DAI (NT90) presented greater intensity of the lesions such as vasculitis, meningitis and microgliosis alongside with a Th1 immune profile with high dosages of IFNγ. While in the neurocysticercosis group at 60 DAI (NCC60) the lesions were more discrete with high dosages of IL4 displaying a Th2 immune profile. In the co-infected group the parenchyma lesions were more discrete. Also in the co-infected group there were lower dosages of IFNγ and higher dosages of IL4 in comparison to the NT90 group. It is possible to conclude that the T. crassiceps cysticerci antigens decreased the intensity of the lesions caused by the T. gondii infection inducing a Th2 immune response. / Resumo: O Toxoplasma gondii é um agente patogênico que pode causar doença sistêmica e local em indivíduos imunocompetentes e imunossuprimidos, podendo se mostrar agressivo, causando lesões no sistema nervoso central, órgãos viscerais, olhos e/ou gânglios linfáticos. A Neurocisticercose é a forma mais grave de cisticercose, sendo uma das principais helmintoses do sistema nervoso central, e podendo causar sintomas variados. Na infecção pela toxoplasmose, a resposta imunológica é tipicamente pró-inflamatória. Durante a coinfecção, este tipo de resposta pode causar a morte do parasito, causando a liberação dos antígenos. Desta forma, tornou-se necessário o desenvolvimento de um modelo experimental utilizando o T. gondii e os antígenos de cisticerco de T. crassiceps. O objetivo deste trabalho foi avaliar influência dos antígenos do cisticerco de Taenia crassiceps na modulação da resposta inflamatória na neurotoxoplasmose experimental. Para isso camundongos BALB/c foram inoculados com cistos de T. gondii e/ou antígenos de cisticercos e eutanasiados aos 60 ou 90 dias após a inoculação. Foi realizada análise histopatológica dos encéfalos e dosagem de citocinas a partir de cultura de células do baço. Os animais do grupo neurotoxoplasmose aos 90DAI (NT90) apresentaram maior intensidade de lesões, como vasculite, meningite e microgliose e perfil imune do tipo Th1, com dosagens elevadas de IFNγ, enquanto que o grupo neurocisticercose aos 60DAI (NCC60), as lesões foram mais discretas e dosagens elevadas de IL4, revelando perfil imune do tipo Th2. No grupo de animais coinfectados as lesões no parênquima foram mais discretas. Além disso, o grupo co-inoculado NT e NCC (COINF) apresentou dosagens baixas de IFNγ e aumentadas de IL4 em relação ao grupo NT90. Conclui-se que a inoculação de antígenos de T. crassiceps amenizou as lesões causadas pelo T. gondii induzindo uma resposta imunológica do tipo Th2.

Introdução: Neurocisticercose (NCC) é a principal causa evitável de epilepsia adquirida no mundo. NCC, além de ser, a doença parasitária mais comum do SNC, representa um importante problema de saúde pública, especialmente em países em desenvolvimento. Estudos de neuroimagem são cruciais no diagnóstico e planejamento terapêutico da NCC. Apesar da ressonância magnética (RM) fornecer maior número e detalhe de informações sobre a doença, a tomografia computadorizada (TC) ainda é o método mais sensível na detecção de calcificação intracraniana, o achado radiológico mais comum da NCC. Objetivo: Comparar performance das sequências de RM ponderadas em suscetibilidade magnética na identificação de calcificações intracranianas em pacientes com NCC. Métodos: Estudo prospectivo, unicêntrico, no qual 57 indivíduos foram submetidos a TC e RM de crânio. Todos os indivíduos foram provenientes do Ambulatório de Doenças Infecciosas do Departamento de Neurologia do Hospital das Clínicas - Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP), com diagnóstico confirmado de NCC. O protocolo de RM incluiu uma sequência convencional 2D gradiente eco (2D-GRE) e duas relativamente novas sequências de suscetibilidade magnética: susceptibilityweighted imaging (SWI) e principles of echo shifting with a train of observations (PRESTO). A TC foi considerada método padrão de referência. Dois neurorradiologistas, cegos para os dados clínicos e demais achados radiológicos, analisaram independentemente as sequências 2D-GRE, SWI e PRESTO quanto à presença, número e localizações de calcificações intracranianas atribuídas a NCC. Resultados: Foram identificadas, pela TC, 739 lesões calcificadas relacionadas a NCC em 50 dos 57 indivíduos incluídos no estudo. A média de lesões calcificadas por paciente foi de 12,9 (± 19,8). A médias de lesões encontradas pelas sequências de suscetibilidade magnética, obtido através da média dos resultados dos observadores, foi de 10,8 (± 17,5) para PRESTO, 10,6 (± 17,3) para SWI e 8,3 (± 13,6) para 2D-GRE. Neste quesito não houve diferença estaticamente significativa entre PRESTO e SWI (p = 0,359) e ambos foram superiores a 2D-GRE (p < 0,05). A concordância foi fraca a moderada, provavelmente devido ao alto número de lesões falso-positivas encontradas (490), das quais 53,9% representavam lesões relacionadas a NCC em estágios não calcificados. A sensibilidade e especificidade das sequências estudadas em identificar corretamente indivíduos com NCC em estágio calcificado foi respectivamente de 85% e 100% para 2D-GRE, 90% e 100% para SWI e 93% e 100% para PRESTO. Conclusão: As sequências SWI, PRESTO e 2D-GRE apresentam boa sensibilidade na identificação de lesões calcificadas em pacientes com NCC. As sequências SWI e PRESTO tiveram melhor performance do que 2D-GRE. Todas as sequências estudadas mostrarem-se apropriadas para identificar indivíduos com NCC no estágio de calcificação. Sequências ponderadas em suscetibilidade magnética podem ajudar no entendimento da história natural, fisiopatologia e achados de imagem da NCC / Background: Neurocysticercosis (NCC) is the main preventable cause of acquired epilepsy. NCC, besides being the most common parasitic disease of the CNS, is an important public health problem, mainly in developing countries. Neuroimaging studies are crucial in the diagnosis and therapeutic planning of NCC. Although magnetic resonance imaging (MRI) provides countless and more detailed information about the disease, computed tomography (CT) is still the most sensitive method for detecting intracranial calcification, the most common radiological finding of NCC. Purpose: To compare the diagnostic performance of susceptibility-weighted MRI sequences in identification of intracranial calcifications in patients with NCC. Methods: A prospective study with 57 subjects who underwent CT and MRI of the brain. All individuals came from Department of Neurology of the Hospital das Clínicas - Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP), with a stablished diagnosis of NCC. The MRI protocol included a conventional 2D gradient echo sequence (2D-GRE) and two relatively new susceptibility-weighted sequences: susceptibility-weighted imaging (SWI) and principles of echo shifting with a train of observations (PRESTO). CT was considered the standard reference method. Two neuroradiologists, blinded to clinical data and other radiological findings, independently analyzed the 2D-GRE, SWI and PRESTO sequences on behalf to presence, number and sites of intracranial calcifications attributed to NCC. Results: A total of 739 NCC-related calcified lesions were identified by CT in 50 of the 57 subjects included in the study. The mean number of calcified lesions per patient was 12.9 (± 19.8). The mean number of lesions found by the susceptibility-weighted MRI sequences, obtained through the mean of the observers\' results, was 10.8 (± 17.5) for PRESTO, 10.6 (± 17.3) for SWI and 8.3 (± 13.6) for 2D-GRE. There was no statistically significant difference between PRESTO and SWI (p = 0.359) and both were superior to 2D-GRE (p < 0.05). The concordance was weak to moderate, probably due to the high number of false-positive lesions found (490), of which 53.9% represented NCC-related lesions in non-calcified stages. The sensitivity and specificity of the sequences studied in correctly identifying individuals with calcified NCC were 85% and 100% respectively for 2D-GRE, 90% and 100% for SWI and 93% and 100% for PRESTO. Conclusion: SWI, PRESTO and 2D-GRE sequences have good sensitivity in the identification of calcified lesions in patients with NCC. SWI and PRESTO performed better than 2DGRE. All sequences studied are suitable for identifying individuals with NCC in the calcified stage. The new susceptibility-weighted MRI sequences may help in understanding the natural history, pathophysiology and imaging findings of NCC

Human neurocysticercosis (NC) is an important but neglected cause of epilepsy in developing countries where the parasite occurs. Expression of single-chain variable fragment (scFv) antibodies on the surface of bacteriophage is widely used to prepare antibodies with pre-defined specificities. A phage antibody library was selected against peptides displayed on phages coupled to beads and total saline extract of Taenia solium metacestodes immobilized on microtiter plate wells. After two rounds of selection 96 phage clones of each panning were selected, tested for scFv expression and specificity to each target. Specific clones were further analyzed by ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), Dot-blot, sequencing and immunofluorescence. After selection, three clones were used for antigen capture to characterize its targets for future immunodiagnostic assays development. Total saline extract was fractionated on ion exchange resin diethylaminoethyl (DEAE), and fractions were tested by ELISA to detect sera IgG from: NC, other parasites and health controls (40 each). The fractions with best diagnostic parameters (sensitivity, specificity, area under curve and likelihood ratio, calculated by TG-ROC) were selected and subjected to antigen capture using each purified scFv clone. Each captured fraction was tested by ELISA to detect IgG in 30 serum samples from each group. In immunofluorescence tests, no fluorescence was observed in negative controls, and all clones showed a non-uniform staining profile, and their targets were elucidated through mass spectrometry. After ion exchange fractionation and ELISA tests, DEAE S2 fraction showed to be the best one and was used to capture new antigens. DEAE S2 showed 93.3% specificity. Among all clones, A4 and B6 captured antigens from saline extract and DEAE S2 fraction, respectively, with the best diagnostic parameters. In conclusion, antibody phage display technology is a potential approach for the study of antigen-antibody interactions, which can be used to further elucidate the biology of interaction on neurocysticercosis and to capture new antigens with potential applications in NC diagnosis and therapeutics. / A neurocistocercose humana (NC) é uma doença muito importante, porém negligenciada e é a maior causa de epilepsia em países em desenvolvimento onde a parasitose ocorre. A expressão de fragmentos de cadeia única das regiões variáveis de anticorpo (scFv) na superfície de bacteriófagos é amplamente utilizada para obter anticorpos com especificidades pré-definidas. Uma biblioteca de anticorpos foi utilizada para a seleção de clones específicos à peptídeos expostos em fagos acoplados a beads e ao extrato salino total de Taenia solium (S) imobilizado em placas de microtitulação. Após dois ciclos de seleção, 96 clones de anticorpos foram selecionados contra cada alvo, testados para expressão do scFv e especificidade pelo alvo. Aqueles clones que se mostraram específicos foram melhor analisados por ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay), Dot blot, sequenciamento e imunofluorescência. Três clones foram selecionados para serem utilizados na captura antigênica e caracterização do antígeno verdadeiro e para captura de novos antígenos com potencial aplicação em testes diagnósticos. O extrato S foi fracionado em resina de troca iônica diethylaminoethyl (DEAE) para obter frações que foram posteriormente testadas por ELISA para detectar IgG em amostras de soro de pacientes: com NC, outras parasitoses e saudáveis, 40 amostras cada grupo. A fração com melhores parâmetros diagnósticos (sensibilidade, especificidade, área sob a curva e likelihood ratio, calculadas por TG-ROC) foi selecionada e sujeita à captura antigênica usando cada clone de scFv purificado. Cada fração capturada foi testada por ELISA para detectar IgG em 30 amostras de soro de cada grupo. Nos testes de imunofluorescência, nenhuma fluorescência foi observada com os controles negativos e todos os clones mostraram um padrão de marcação não uniforme, seus antígenos alvo foram elucidados por espectrometria de massas. Após fracionamento por troca iônica e ELISA, a fração DEAE S2 se mostrou a melhor e foi utilizada para a captura de novos antígenos. A fração DEAE S2 mostrou especificidade de 93,3%. Dentre todos os clones, o A4 e o B6 capturaram antígenos do extrato S e fração DEAE S2, respectivamente, com os melhores parâmetros diagnósticos. Em conclusão a tecnologia de exposição de anticorpos em fagos é uma técnica potencial para o estudo de interações antígeno-anticorpo utilizadas para melhor elucidar a a biologia da interação na NC e para capturar novos antígenos potencialmente aplicáveis para o diagnóstico da NC. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Neurocysticercosis (NC) is a polymorphic disease and the immune response in human carrier is heterogenic. In this study, 35 primers were used for amplifications by Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) of Taenia solium metacestodes, from five different geographic areas in Brazil: 1) Distrito Federal (DF), Center West; 2) Barreiras (BA), Northeast and Southeast; 3) Hydro Basin of the Mosquito River (North of Minas Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) and 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG). Metacestodes saline crude extracts of four populations (DF, BA, RM-MG e SP) were used for the detection of specific IgG antibodies by ELISA and Western Blotting (WB). A total of 157 serum samples of three groups, (G1): 49 NC patients; (G2): 68 patients with other helminthiasis: hydatidosis (10), taeniasis (20), strongyloidiasis (20), schistosomiasis (10) and hymenolepiasis (8); and (G3): 40 healthy individuals; were analyzed by ELISA. From these, the 98 serum samples were assayed by WB; G1 (49), G2 (39) and G3 (10). The genetic distances, in disagreement percentage, between the metacestode populations were calculated from of 15 RAPD markers and showed 49.5% (DF), 48% (BA), 38.5% (UBMG) and 28% (RM-MG and SP) of genetic distances. Six primers identified polymorphic fragments and the primers 26 (GGGTTTGGCA) and 29 (TCGCCAGCCA) allowed a better differentiation of populations. The fragments of 1000, 500 and 326 pb (pairs of bases) in the UB-MG and of 600 and 244 pb in RM-MG were amplified by primer 26. The fragments generated by primer 29 were 500, 800 and 1191 pb, 300 and 1377 pb, 1000 pb and 244 and 434 pb in SP, UB-MG, DF and BA populations, respectively. In G1, the positivity by ELISA was: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) and 67% (SP). The DF extract was more antigenic than others (p=0.02). In WB, the 64-68 kDa antigens were recognized in all extracts, exclusively, in serum samples from active NC patients (p=0.001). Variation in banding pattern was detected between the extracts (p<0.05). In G2, the serum samples of hydatidosis patients presented from 70 to 90% positivity by ELISA in antigenic extracts (p<0.05); however, the bands recognition pattern in WB was different from that presented in G1 samples. The 77 kDa band was significantly identified in hydatidosis samples (p=0.0001). In conclusion, the T. solium populations analyzed showed genetic variability and antigenic differences. / A neurocisticercose (NC) constitui doença polimórfica, apresentando heterogeneidade da resposta imune no hospedeiro humano. Nesse estudo, o teste Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) foi utilizado com 35 primers na detecção de polimorfismo em metacestódeos de Taenia solium provenientes de cinco áreas geográficas distintas do Brasil: 1) Distrito Federal (DF), região Centro-Oeste; 2) Barreiras (BA), região nordeste e da região sudeste: 3) Bacia Hidrográfica do Rio Mosquito (norte de Minas Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) e 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG). Os extratos salinos totais de metacestódeos de quatro populações (DF, BA, RM-MG e SP) foram utilizados na detecção de anticorpos IgG específicos pelo ELISA e Western Blotting (WB). As 157 amostras de soro de três grupos (G) de indivíduos: G1: 49 pacientes com NC; G2: 68 pacientes com outras helmintíases, sendo hidatidose (10), teníase (20), estrongiloidíase (20), esquistossomose (10) e himenolepíase (8) e G3: 40 indivíduos saudáveis (controles); foram analisadas pelo ELISA. Foram ensaiadas 98 amostras de soro: G1 (49), G2 (39) e G3 (10) pelo WB. As distâncias genéticas, por porcentagem de desacordo, foram de 49,5% (DF), 48% (BA), 38,5% (UB-MG) e 28% (RM-MG e SP) nas populações de metacestódeos, calculadas a partir de 15 marcadores de RAPD. Seis primers geraram fragmentos polimórficos nos isolados analisados, sendo que os primers 26 (GGGTTTGGCA) e 29 (TCGCCAGCCA) permitiram melhor diferenciação entre as populações, o primer 26 gerou os fragmentos de 1000, 500 e 326 pb (pares de bases) na amostra de UB-MG, e de 600 e 244 pb em RM-MG. O 29 gerou fragmentos em quatro das populações analisadas, sendo 500, 800 e 1191 pb em SP, 300 e 1377 pb em UBMG, 1000 pb no DF e 244 e 434 pb na BA. No G1, as freqüências de positividade no ELISA, foram: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) e 67% (SP), sendo o extrato do DF mais antigênico que os demais (p = 0,02). No WB, o peptídeo de 64-68 kDa foi reconhecido em todos os extratos, exclusivamente, em amostras de pacientes com NC ativa (p=0,001). Detectou-se variação no padrão de reconhecimento de bandas entre os extratos (p<0,05). No G2, as amostras de soro de pacientes com hidatidose apresentaram de 70 a 90% de positividade no ELISA frente aos extratos analisados (p<0,05); porém, o padrão de reconhecimento de bandas no WB diferiu do apresentado pelas amostras do G1, sendo que a banda de 77 kDa foi significativamente identificada pelas amostras de pacientes com hidatidose (p=0,0001). Concluiu-se que as populações de T. solium analisadas nesse estudo, apresentaram variabilidade genética e diferenças de antigenicidade. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-12T11:58:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-12T11:58:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T11:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anália Cirqueira Milhomem - 2017.pdf: 1969169 bytes, checksum: 990bb0603cc940e039264e7209f95907 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Neurocysticercosis (NCC) is one of the diseases neglected by the World Health Organization (WHO), and the parasitic infection that most affects the Central Nervous System (CNS) throughout the world. Thus, it is necessary to deepen the knowledge regarding its immunopathogenesis and physiopathology in order to elucidate mechanisms by which NCC causes tissue injury in infected patients. With the advent of this necessity the search for ways to facilitate the experimental study of this disease has arisen, and today, the use of the cysticercus species of Taenia crassiceps is well diffused in the scientific environment. The objective of this work was to describe the general pathological processes and the profile of systemic and in situ cytokines in C57BL / 6 mice after intracranial inoculation of viable cysticerci of T. crassiceps. Three experimental groups were used: healthy control, surgical control and infected group. After 90 days of infection, mice were euthanized and histopathological analysis of the brain, spleen cell culture, homogenate production and ELISA for IL-4, IL10 and IFN-γ were performed. The histopathological analysis of the encephalus allowed to verify the presence of cysticercus in the lateral ventricles or in the extraparenchymal region, presence of mononuclear inflammatory infiltrate (MN) around the parasite, microgliosis and meningitis. The analysis of the systemic and in situ immune profiles of the infected mice showed a predominance of Th2-type response, with high IL-4 concentration, low IFN-γ and IL-10 levels modulating the two responses, but mainly Th1. The in situ cytokine dosage was similar between the experimental groups, which leads us to conclude that the cysticercus exerts immunomodulation for its survival, in addition to which it also benefits from the cerebral immunoprivilege. In conclusion, correlating the immune and histological aspects described after the analysis, we can suggest that T. crassiceps cysticercosis infection in C57BL / 6 mice triggers an inflammatory response, a predominance of Th2 type profile with MN inflammatory infiltrate presence, Meningitis and microgliosis. / A neurocisticercose (NCC) é uma das doenças negligenciadas pela Organização Mundial de Saúde (OMS), e a infecção parasitária que mais acomete o Sistema Nervoso Central (SNC) em todo o mundo. Dessa forma, faz-se necessário aprofundar os conhecimentos quanto a sua imunopatogênese e fisiopatologia com o intuito de elucidar mecanismos pelos quais a NCC provoca lesão tecidual nos pacientes infectados. Com o advento desta necessidade a busca por formas de facilitar o estudo experimental desta doença surgiram, e hoje, a utilização da espécie de cisticercos de Taenia crassiceps está bem difundida no meio científico. O objetivo deste trabalho foi descrever os processos patológicos gerais e o perfil de citocinas sistêmicas e in situ em camundongos C57BL/6, após inoculação intracraniana de cisticercos viáveis de T. crassiceps. Para isso foram utilizados três grupos experimentais: controle saudável, controle cirúrgico e grupo infectado. Após 90 dias de infecção foi realizada eutanásia dos camundongos e posteriormente foi realizada análise histopatológica dos encéfalos, cultura de células do baço, produção de homogenato e ELISA para dosagem de IL-4, IL10 e IFN-γ. A análise histopatológica dos encéfalos permitiu comprovar a presença do cisticerco, nos ventrículos laterais ou na região extraparenquimal, presença de infiltrado inflamatório mononuclear (MN) ao redor do parasito, microgliose e meningite discretas. As análises dos perfis imunes sistêmico e in situ dos camundongos infectados não apresentou diferenças estatisticamente significativas entre os grupos analisados, o que nos fazer deduzir que o cisticerco exerce imunomodulação buscando sua sobrevivência, além do que se beneficia também do imunoprivilégio cerebral. Em conclusão, correlacionando os aspectos imunes e histológicos descritos após as análises realizadas, podemos sugerir que a infecção por cisticercos de T. crassiceps em camundongos C57BL/6, desencadeia resposta inflamatória com a presença infiltrado inflamatório MN, meningite e microgliose.

Neurocisticercose (NC) é a doença parasitária mais comum do SNC, representando grave problema de saúde pública em nosso país. O diagnóstico da NC é baseado em dados clínicos e epidemiológicos, reações sorológicas no soro e LCR, além de exames de neuroimagem. A detecção de antígenos de Taenia através de teste de ELISA, mediante a utilização de anticorpos altamente purificados, constitui metodologia recente capaz de informar sobre a vigência de atividade clínica da doença. O objetivo deste estudo foi determinar a relação entre a dosagem de antígenos de Taenia mo LCR com as imagens obtidas através da RM, em pacientes com o diagnóstico definido de NC segundo os critérios diagnósticos atuais. Sessenta e três pacientes foram submetidos a exame detalhado do LCR, além de pesquisa de antígeno de Taenia através de teste de ELISA, utilizando anticorpos de soro de coelhos imunizados com líquido vesicular de Taenia crassiceps. Uma amostra de sangue foi colhida simultaneamente à coleta do LCR, e um exame de RM encefálica foi realizado em todos os pacientes. Observamos relação significativa entre a detecção de antígenos de Taenia e o número total de lesões e do número de cistos íntegros detectados pela RM. Quando comparados dois ou mais cistos em degeneração com apenas um cisto, observamos detecção significativamente mais alta no primeiro grupo. Encontramos também detecção de antígenos significativamente mais alta quando as lesões se localizavam na profundidade dos hemisférios cererbrais, mas não na presença de cistos calcificados. Os resultados demonstram que a detecção de antígenos de Taenia se mostra congruente com os achados de neuroimagem. Algumas outras variáveis estudadas no LCR, como número de células, teor de globulinas gama e teste de ELISA, também se mostraram concordantes, demonstrando que a resposta inflamatória na NC mobiliza tanto a imunidade celular quanto a imunidade humoral. / Neurocysticercosis (NC) is the most common parasitic infection of the nervous system, remaining a serious public health in our country. NC diagnosis is supported by clinical and epidemiological data, specific serological reactions in the blood and CSF, and neuroimaging findings. Detection of anti-Taenia antigens using ELISA techniques is a recent methodology that provides information about clinical activity of the disease. The objective of the study was to determine relationship between Taenia antigen detection in the CSF and MRI in patients with definite diagnosis of NC according to current diagnostic criteria. Sixty-three patients were submitted to a thorough CSF examination and Taenia antigen research. Antigens were detected in CSF samples by ELISA assay obtained from rabbit sera antibodies immunized with Taenia crassiceps cysticerci vesicular fluid. A blood sample was simultaneously collected and a MRI was performed in every patient. We observed a significant relationship between Taenia antigen detection and the total number of lesions and intact cysts detected by MRI. When comparing two or more degenerating cysts with only one we observed a significant higher antigen detection in the first group. We also found a significant higher antigen detection when cysts were deeply located in the cerebral hemispheres, but not in the presence of calcified cysts. Results demonstrate that Taenia antigen detection is congruent with neuroimaging findings. Some CSF characteristics, like number of cells, gamma globulin concentration and ELISA assay were also concordant with Taenia antigen detection, indicating that inflammatory reaction in NC comprise cellular and humoral immunological factors.

Larvas de cisticercos de Taenia crassiceps foram deixadas em repouso em TRIS 9mM pH 7,2 com 1mM EDTA até 180 minutos, os sobrenadantes coletados e processados nos 30, 60, 120 e 180 minutos, dando origem aos antígenos de excreção e secreção (ES 30; ES 60; ES 120 e ES 180). A caracterização do antígeno de excreção e secreção de larvas de Taenia crassiceps foi feito por SDS-PAGE e imunoblot utilizando anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps e anti-T. solium e anticorpos humanos. Os resultados mostraram que o rendimento do antígeno ES foi menor nos primeiros 30 minutos (0,4 &#181;g) por larva quando comparado os demais ES (ES 60: 2,4 &#181;g; ES 120: 2,9 &#181;g; ES 180: 2,5 &#181;g). O SDS-PAGE confirmou que no ES 30 há menos proteínas. No imunoblot, o ES 180 mostrou que 6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra; anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 e A6) reconheceram apenas as frações 18- e 14-kDa do antígeno ES 180. Os AcMos anti-E-Tso (B8) e anti-LV-Tso (B6) não reconheceram frações do antígeno ES 180. Anticorpos presentes em amostras humanas de pacientes com NC reconheceram as frações protéicas entre 94- a 30-kDa e as de 18- e 14-kDa. Utilizando antígeno ES 180 e amostras de soros de pacientes supostamente saudáveis (GC), foram identificadas proteínas acima de 30-kDa e somente uma amostra reconheceu a de 16- kDa, anômala em relação ao perfil 18- e 14-kDa. As amostras de soro de pacientes com outras parasitoses mostraram reatividade com frações &#8805; de 30-kDa do ES 180 e o maior índice de reatividade foi com a proteína 71-KDa. Um total de 77%; 70%; 60% e 70% das amostras de pacientes com toxocaríase, esquistossomose mansônica, hidatidose e Chagas, respectivamente, reconheceram a fração 71-kDa do ES 180. O antígeno ES pode contribuir com futuros estudos abordando a complexa relação parasito hospedeiro na cisticercose e na produção de vacinas para o uso em suínos. / Cysticercus Larvae of Taenia crassiceps were maintained in TRIS 9mM pH 7,2 with 1mM EDTA for 180 minutes; the supernatant was collected and processed at 30; 60; 120 and 180 minutes, originating excretion-secretion antigens (ES 30; ES 60; ES 120 and ES 180). The characterization of the ES antigen was conducted through SDS-PAGE and immunoblot using anti-T. crassiceps and anti-T. solium monoclonal antibodies (AcMos) and human antibodies. The results showed that the production of ES antigen was lower in the first 30 min. (0,4 &#181;g) compared with the others (ES 60: 2,4 &#181;g; ES 120: 2,9 &#181;g; ES 180: 2,5 &#181;g). The SDS-PAGE confirmed that ES 30 presented less protein. By immunoblot,6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra;anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 and A6) have recognized only the 18- and 14-kDa fractions of the ES 180. The anti-E-Tso (B8) and the anti-LV-Tso (B6) AcMos did not recognize any fractions. Antibodies from human samples NC recognized the proteins from 94- to 30-kDa and from 18- and 14-kDa. Using serum samples of apparently healthy individuals (GC), the ES 180 antigen showed proteins &#62; 30-kDa and one sample recognized the 16-kDa fraction, anomalous when compared to the 18- and 14-kDa fractions. The serum samples of subjects with other parasitoses showed reactivity &#8805; 30-kDa, more frequently with 71-KDa protein. A total of 77%; 70%; 60% and 70% of the samples from subjects presenting toxocariasis, esquistossomose mansonic, hydatidosis and Chagas disease, respectively, recognized the 71-kDa fraction of ES 180. The ES antigen may contribute to further studies on the complex cysticercosis parasite/host relation as well as for the production of vaccines for swine.