A integridade da cromatina espermática é fundamental para a transmissão das informações genéticas paternas, sendo que alterações de DNA podem levar a falhas no processo reprodutivo. Danos na cromatina espermática podem ocorrer por diversos motivos, sendo que os mais importantes são a apoptose, a deficiência de protamina e os danos causados pelas espécies reativas de oxigênio (EROs). Os danos de DNA espermático não impedem que o espermatozóide fecunde o oócito, entretanto podem causar perda embrionária por apoptose. A importância da integridade da cromatina espermática no desenvolvimento embrionário já foi descrita em humanos, sendo que pode ser atribuída como uma das causas de infertilidade masculina, quando está alterada. Contudo, as informações sobre a influência da integridade do DNA espermático no processo de fecundação e do desenvolvimento embrionário na espécie bovina são muito escassas. Devido à falta de informação sobre a relação da fragmentação de DNA e conseqüente alteração nos índices de desenvolvimento embrionário nessa espécie, este trabalho teve como objetivo avaliar o índice de fragmentação de DNA espermático em uma população de touros e verificar a influência dos possíveis danos de DNA espermático na produção in vitro (PIV) de embriões. Para isto, o sêmen congelado de 221 touros foi avaliado pelo ensaio de estrutura de cromatina espermática (SCSA). Após o ensaio, os animais foram divididos em seis grupos experimentais de acordo com o índice de fragmentação de DNA apresentado, sendo sete animais de cada grupo, escolhidos aleatoriamente para as avaliações espermáticas: motilidade, fragmentação de DNA espermático pelos ensaios SCSA e Cometa Alcalino e estresse oxidativo pelo ensaio de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Posteriormente foi realizada a PIV de embriões, sendo avaliados os índices de clivagem e de blastocisto e realizado o ensaio de TUNEL para a avaliação da apoptose dos blastocistos produzidos. Em relação à motilidade espermática, o grupo 1 apresentou menor motilidade em relação ao grupo 4 (p<0,05). Não foi verificada diferença significativa da motilidade entre os outros grupos experimentais. O ensaio SCSA revelou que o grupo 1 apresentou menor susceptibilidade à fragmentação de DNA espermático quando comparado com o grupo 5 (p< 0,05). O grupo 2 apresentou susceptibilidade à fragmentação de DNA espermático inferior, quando comparado aos grupos 3, 4, 5 e 6 (p<0,05). Em relação ao ensaio Cometa Alcalino, a avaliação do estresse oxidativo e a PIV de embriões, não houve diferença significativa entre os grupos experimentais. Além disso, foi observada correlação negativa entre a intensidade média do Cometa e o índice de blastocisto produzido in vitro. O índice de blastocisto também apresentou correlação negativa com a intensidade média da cabeça do Cometa e ao ensaio TBARS. O ensaio TBARS apresentou correlação negativa com o índice de clivagem dos embriões PIV. Por outro lado, o ensaio TBARS apresentou correlação positiva com os ensaios SCSA e TUNEL. Considerando as condições experimentais, a fragmentação de DNA espermático não influenciou a PIV de embriões bovinos. / Sperm chromatin integrity is essential for the transmission of paternal genetic information. Changes in sperm DNA can lead to failures in the reproductive process. Loss of chromatin integrity may occur for several reasons, and the most important are apoptosis, protamine deficiency and damages caused by reactive oxygen species (ROS). The sperm DNA damage does not prevent the sperm to fertilize the oocyte, however it can cause embryonic loss by apoptosis. The importance of sperm chromatin integrity in embryonic development has been described in humans, and can be considered a cause of male infertility when it is disrupted. However, information on the influence of sperm DNA integrity in the process of fertilization and embryonic development in cattle are very scarce. Due to the lack of information on the relationship between DNA fragmentation and its consequence on embryonic development rates in this species, this study aimed to evaluate the sperm DNA fragmentation rate in a population of bulls and the influence of possible sperm DNA damage on in vitro production (IVP). For this, frozen semen from 221 bulls was evaluated by sperm chromatin structure assay (SCSA). After that, animals were divided into six groups, according to the DNA fragmentation rate observed. Then seven animals from each group were randomly chosen for sperm evaluation: motility, sperm DNA fragmentation by the SCSA and Alkaline Comet assay and oxidative stress by tiobarbituric acid reactive substances (TBARS). After sperm evaluations embryo IVP was performed. Cleavage and blastocyst rates were assessed and the obtained blastocysts were submitted to TUNEL assay for apoptosis evaluation. Regarding sperm motility, group 1 had lower motility compared to group 4 (p <0.05). There was no significant difference in motility between the other experimental groups. The SCSA revealed that group 1 showed lower susceptibility to sperm DNA fragmentation when compared to group 5 (p <0.05). Group 2 was less susceptible to sperm DNA fragmentation, when compared to groups 3, 4, 5 and 6 (p <0.05). For the alkaline comet assay, the assessment of oxidative stress and embryo IVP, no significant difference was shown between en experimental groups. Moreover, there was a negative correlation between the comet mean intensity and the blastocyst rate. The blastocyst rate also negatively correlated to the comet head mean intensity and TBARS. The TBARS was negatively correlated to cleavage rate. In addition, TBARS correlated positively to TUNEL assay and SCSA. Considering the experimental conditions, the sperm DNA fragmentation did not influence the IVP of bovine embryos.

Introduction: Numerous studies have found associations between exposure to airborne particulate matter and respiratory morbidity and mortality. However, the varying composition, dependant on the different sources of particulate matter, and its effect on processes of inflammation and oxidative stress in the airways has not been completely elucidated. The use of airway biomarkers, fractional exhaled nitric oxide (FENO) and exhaled breath condensate (EBC), can provide valuable insight into processes of inflammation and oxidative stress in the airways. In these studies we sought to characterize the associations between airborne pollutant exposures and their sources and airway biomarkers. Methods:The study population of interest for Chapters III-V is a subset of children currently enrolled in a birth cohort under the Columbia Children's Center for Environmental Health. Chapter III refers to the validation in this population of a method for partitioning FENO contributions from the proximal and distal airways. Chapters IV and V refer to the implementation of this method in the study of ambient metals and residential proximity to relevant sources of particulate matter (PM) and black carbon (BC). Briefly, the children of African-American and Dominican mothers living in low-income NYC neighborhoods had FENO samples collected offline at constant flow rates of 50, 83 and 100 mL/sec at ages 9 and/or 11. Surrogate measures for bronchial flux NO (JNO) and alveolar (Calv) NO concentrations were estimated using a previously validated mathematical model. Wheeze in the last 12 months was assessed by the International Study of Asthma and Allergies in Childhood (ISAAC) questionnaire. Seroatopy was determined by specific IgE at age 9. For Chapter IV, in order to examine the associations between metal fractions of particulate matter and airway inflammation, ambient measures of Ni, V, Zn and Fe were obtained from a local central monitoring site and averaged over nine days based on three 24 hour measures every third day. Seroatopy was determined by specific IgE at age 7. For Chapter V, residential distance to a major road, truck route and bus stop density, area covered by major roads, stationary point sources (SPS), toxic release inventory sites (TRIS) and commercial buildings, and number of buildings burning residual oil within 250-meters of each child's home were determined. These variables were selected a priori as potential important sources or airborne PM and BC. For Chapter VI, the study population was comprised of seven- and eight-year-old children enrolled in an asthma case-control study in New York City. Seven day averages of domestic levels of particulate matter <2.5 microns (PM2.5), BC and environmental tobacco smoke (ETS) were measured. Urea and 8-isoprostane were measured by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) in EBC collected during home visits. All data were analyzed with SPSS. Results: In our first study, children with seroatopy had significantly higher median JNO p<0.001) when compared to non-seroatopic children; however, median Calv was not significantly different between these two groups (p=0.644). Children with wheeze in the past year had significantly higher median Calv (p<0.001), but not JNO (295 vs. 165 pL/s, p=0.241) when compared with children without wheeze. In our second study, ambient V and Fe concentrations were associated positively with FENO50 (p=0.018, p=0.027). Ambient Fe was associated positively with JNO (p=0.017). Ambient Ni and V concentrations were associated positively with Calv (p=0.004, p=0.018 respectively). A stronger association of Ni concentrations with Calv was observed among the children with seroatopy. In our third study, there were no significant associations between any of the air pollution indicator variables and FENO parameters in adjusted models. In our final study, PM2.5and BC, but not ETS, were significantly associated with increases in 8-isoprostane (p<0.05 for both) after adjustment for covariates. In a co-pollutant model including PM2.5, BC and ETS, only BC remained a statistically significant predictor of 8-isoprostane. Discussion: Recent exposure to airborne pollutants was associated with increased levels of biomarkers of airway inflammation and oxidative stress measured in exhaled breath. The metal and BC fractions of PM might be more relevant to the understanding adverse respiratory outcomes related to air pollution exposure.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-26Bitstream added on 2014-06-13T21:01:33Z : No. of bitstreams: 1 araujo_gg_dr_rcla.pdf: 1209295 bytes, checksum: 6b2253b3f887077f0efc0d6e008d593a (MD5) / O objetivo foi avaliar antes, durante e após 4 modelos de treinamento (contínuo aeróbio, anaeróbio intermitente, periodizado linear e periodizado em blocos) as performances aeróbia e anaeróbia bem como as respostas de biomarcadores de overtraining em ratos Wistar. Os ratos (60 dias de idade) foram divididos em grupos: Controle/Sedentário, treinamento periodizado linear, periodizado em blocos, contínuo aeróbio e anaeróbio intermitente. Todos os animais foram avaliados por meio do teste de lactato mínimo para determinação da performance aeróbia (limiar anaeróbio – % do peso corporal- PC) e anaeróbia (Tempo de Exaustão a 13% do PC - seg – Tlim). Os protocolos de treinamento tiveram duração de 12 semanas e freqüência de 6 dias/semana. O treinamento periodizado linear foi dividido em período Básico (6 semanas), Específico (4,5 semanas) e Polimento (1,5 semanas), tendo como estímulos intensidades equivalentes ao peso corporal dos animais (% do PC) variando entre 80 e 240% do limiar anaeróbio individual. O treinamento periodizado em blocos também foi dividido em três períodos com duração de 6 semanas (Bloco 1), 4,5 semanas (Bloco 2) e 1,5 semanas (Bloco 3) sendo que em cada bloco conteve os períodos básico, específico e polimento com intensidades equivalentes ao peso corporal dos animais (% do PC) variando entre 80 e 240% do limiar anaeróbio individual. O treinamento aeróbio realizou natação contínua com duração de 60 min/dia em intensidade correspondente ao limiar anaeróbio (100% do limiar anaeróbio) e abaixo do limiar anaeróbio (80 e 90%). O treinamento anaeróbio intermitente realizou 4 séries x 10 saltos com sobrecarga equivalente a 50% do PC. As análises bioquímicas, enzimáticas e hormonais bem como as variáveis de performance aeróbia e anaeróbia e supercompensação dos substratos energéticos (glicogênio muscular e hepático) foram... / The objective of this study was to determine in rats the effects of 4 training models (endurance monotonous training, anaerobic intermittent training, linear periodization training and block periodization training) on anaerobic and aerobic performance, creatine kinase, muscle and liver glycogen, antioxidants and hormones. The rats (60 days old) were separated in: sedentary, endurance monotonous training, anaerobic intermittent training, linear periodization training and block periodization training groups. The aerobic and anaerobic performance was evaluated by lactate minimum test. The exercise groups were submitted to 6 day/wk, 12 wk. The endurance monotonous training was constant and equivalent to 100%, 90% and 80% of aerobic capacity determined by minimum lactate test. The anaerobic intermittent training had 4 sets x 10 jumps with a load corresponding to 50% of the body weight (bw). The linear periodized training was divided into Basic (6 weeks), specific (4.5 weeks) and taper (1.5 weeks), with intensities (% bw) ranging between 80 and 240 % of individual anaerobic threshold. The block training was divided into three periods lasting from 6 weeks (Block 1), 4.5 weeks (Block 2) and 1.5 weeks (Block 3) and in each block contained the basic periods, specific and taper with intensities (% bw) ranging between 80 and 240% of individual anaerobic threshold. The results in all tests were expressed as mean ± standard error and had the statistical procedure tests: Three Way ANOVA, with significance levels prefixed at P <0.05. The anaerobic performance improved after linear periodization training while aerobic capacity increased after anaerobic intermittent training. The endurance monotonous training did not affect aerobic performance, but reduced the anaerobic performance after 12 weeks. The aerobic and anaerobic decadence in the sedentary group was attenuated with linear periodization... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Priscila Rezeck Nunes null (priscilarezeck@aluno.ibb.unesp.br) on 2017-03-08T14:58:45Z No. of bitstreams: 1 Versão final dissertação Priscila Rezeck Nunes.pdf: 4789833 bytes, checksum: 772d289b789606f7e85653d2c289a43a (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-13T14:38:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nunes_pr_me_bot.pdf: 4789833 bytes, checksum: 772d289b789606f7e85653d2c289a43a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T14:38:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nunes_pr_me_bot.pdf: 4789833 bytes, checksum: 772d289b789606f7e85653d2c289a43a (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A gestação é uma condição fisiológica que pode apresentar maior suscetibilidade ao desequilíbrio entre fatores pró e antioxidativos, evoluindo assim com dano celular e resposta inflamatória. A autofagia é um processo que elimina organelas e proteínas danificadas do citoplasma, com potente mecanismo anti-inflamatório responsável pela manutenção da homeostase celular. A autofagia pode controlar a inflamação por meio da inibição da ativação do inflamassoma, complexo essencial para a liberação de citocinas pró-inflamatórias. Assim, alterações nesses processos podem relacionar-se com disfunções celulares e doenças sistêmicas. Objetivos: Este projeto teve como objetivo avaliar se a exposição de explantes placentários a diferentes concentrações de peróxido de hidrogênio (H2O2) é capaz de induzir autofagia e levar a ativação do inflamassoma NLRP3. Métodos: Explantes placentários de gestantes normais obtidos após o parto foram cultivados em diferentes concentrações de H2O2 por 4 e 24 h após a avaliação da viabilidade dos mesmos nesses períodos. As enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase foram avaliadas nos sobrenadantes das culturas após 4 h. As expressões gênicas de marcadores de autofagia (LC3-II, beclin-1 e p62), do inflamassoma (NLRP3 e caspase-1) e das citocinas IL-1β, IL-10 e TNF-α foram avaliadas por RT-qPCR. Os níveis de gonadotrofina coriônica (hCG), proteína de choque térmico 70 (Hsp70) e citocinas IL-1β, IL-10 e TNF-α foram determinados por ensaio imunoenzimático (ELISA) após 24 h de cultura. Resultados: Os níveis de LDH foram crescentes conforme o tempo de cultura, sendo que as culturas de 24 h apresentaram-se com viabilidade celular adequada para o estudo. Os níveis proteicos de catalase e Hsp70, bem como a expressão gênica de LC3-II, beclin-1 e p62 apresentaram níveis crescentes e relacionados às maiores concentrações de H2O2. As concentrações proteicas de SOD, hCG e TNF-α foram maiores nas culturas com 100 µM de H2O2. A expressão gênica de TNF-α, IL-1β, NLRP3 e caspase-1 foram elevadas em 1000 µM de H2O2. Além disso, a expressão proteica de IL-1β também foi maior nessa concentração. As concentrações gênicas e proteicas de IL-10 decresceram de acordo com o aumento da concentração de H2O2. Conclusões: Os resultados obtidos demonstraram que o H2O2 é capaz de induzir o estado de estresse oxidativo placentário, induzir autofagia, ativar o inflamassoma e assim aumentar a produção de citocinas inflamatórias. / Introduction: Pregnancy is a physiological condition characterized by increased susceptibility to oxidative stress, which can lead to cell damage and inflammatory response. Autophagy is a process that removes damaged organelles and proteins from the cytoplasm. It works as potent anti-inflammatory mechanism, responsible for maintaining cellular homeostasis. Autophagy can control inflammatory responses by regulating the activation of inflammasome, an essential complex for pro-inflammatory cytokine release. Objectives: The aim of this study was to evaluate whether placental explants exposure to hydrogen peroxide (H2O2) is able to induce autophagy and inflammasome activation. Methods: Placental explants achieved from normal pregnant women after delivery were cultured in different concentrations of H2O2 for 4 and 24 h after viability evaluation for these periods. Superoxide dismutase (SOD) and catalase were evaluated in culture supernatants after 4 h. Gene expressions of autophagy markers (LC3-II, beclin-1 and p62), inflammasome (NLRP3 and caspase-1) and IL-1β, IL-10 and TNF-α were assessed by RT-qPCR. Levels of chorionic gonadotrophin (hCG), heat shock protein (Hsp70) and IL-1β, IL-10 and TNF-α were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) after 24 h of culture. Results: LDH levels were increased according to culture time, and the 24 h cultures presented adequate cell viability for the study. The protein levels of catalase and Hsp70, as well as the gene expression of LC3-II, beclin-1 and p62 presented increasing levels and related to the higher concentrations of H2O2. Protein concentrations of SOD, hCG and TNF-α were higher in cultures with 100 μM of H2O2. Gene expression of TNF-α, IL-1β, NLRP3 and caspase-1 were raised in 1000 μM of H2O2. In addition, IL-1β protein expression was also higher at this concentration. Gene and protein concentrations of IL-10 decreased as the H2O2 concentration increased. Conclusions: Our results demonstrate that H2O2 is able to induce a state of placental oxidative stress, induce autophagy, activate the inflammasome and then increase the production of inflammatory cytokines. / FAPESP: 2014/25611-5

Submitted by CLEBSON GOMES GONÇALVES null (goncalvescg.agro@hotmail.com) on 2017-03-14T21:30:30Z No. of bitstreams: 1 Clebson_Gomes_Gonçalves.pdf: 4338436 bytes, checksum: 5b3165c52c4014dd4f0d507cda926f92 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-21T20:24:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 goncalves_cg_dr_jabo.pdf: 4338436 bytes, checksum: 5b3165c52c4014dd4f0d507cda926f92 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T20:24:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 goncalves_cg_dr_jabo.pdf: 4338436 bytes, checksum: 5b3165c52c4014dd4f0d507cda926f92 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O déficit hídrico é o estresse abiótico mais limitante e severo para as culturas agrícolas, pois desencadeia uma série de adaptações fisiológicas e modificações anatômicas nas plantas como um processo adaptativo em resposta ao déficit hídrico e que regula a redução das perdas de água da planta para a atmosfera. A fim de esclarecer o efeito do estresse hídrico sobre as características anatômicas e fisiológicas da soja, bem como a seletividade de herbicidas, o presente trabalho teve como objetivo examinar as alterações morfológicas e enzimáticas das cultivares de soja: MG / BR 46 Conquista (convencional) e a BRS Valiosa (transgênica) por meio de resposta a diferentes manejos de água no solo, em dois estádios vegetativos de desenvolvimento. As plantas foram submetidas a diferentes manejos de água no solo, nos estádio de desenvolvimento vegetativo V2 e V4. Foram realizadas avaliações de condutância estomática, área foliar, medidas de anatomia foliar e caulinar. Também foram avaliados os mecanismos de resposta ao estresse antioxidante pelas medições de, peroxidação lipídica, teor de H2O2, prolina, superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e ascorbato peroxidase (APX), além de avaliar o comportamento dos herbicidas fomesafen a 250 g i.a. ha-1 e chlorimuron-ethyl 20 g i.a. ha-1 em plantas de soja submetidas a diferentes restrições hídricas. A cultivar BRS Valiosa RR apresentou melhor resposta adaptativa morfológica e anatômica quando submetida a uma restrição hídrica moderada de até (-0,07 MPa) quando ocorrida nas primeiras semanas de desenvolvimento das plantas. A atividade da SOD, CAT e APX das plantas transgênicas apresentaram um intenso aumento no estádio V4, enquanto que a cultivar convencional não superou a condição de estresse nesse período. Estas respostas determinaram que a BRS Valiosa (transgênica) apresentou uma resposta tardia que aumentou a sobrevivência a longos períodos de escassez de água. A escassez hídrica reduz a fitointoxicação visual quando submetida à pulverização dos herbicidas fomesafen e chlorimuron-ethyl. Constatou-se que o fomesafen e chlorimuron-ethyl proporcionaram um efeito negativo na infecção pelos rizóbios, assim como o déficit hídrico reduziu drasticamente a fixação biológica de nitrogênio e o crescimento das plantas de soja. Quando as plantas de soja foram submetidas a uma condição de escassez hídrica moderada (-0,07 MPa) a cultivar convencional teve o seu desenvolvimento mais afetado em comparação com a cultivar transgênica. Evidenciou-se, ainda, que a cultivar transgênica mostrou ter uma maior capacidade em sustentar a fixação biológica de nitrogênio quando submetida a uma condição de escassez hídrica moderada (-0,07 MPa) em comparação com a cultivar convencional. / The drought is the most limiting and severe abiotic stress for agricultural crops, because it triggers a number of physiological adaptations and anatomical modifications in the plants as an adaptive process in response to the water deficit and which regulates the reduction of water losses from the plant to the atmosphere. In order to know the effect of water stress on the anatomical and physiological characteristics of soybean, as well as the selectivity of herbicides, the present work had as objective to examine the morphological and enzymatic alterations of soybean cultivars: MG / BR 46 Conquista (conventional) and BRS Valiosa (transgenic) by means of response to different water management in the soil, in two stages of vegetative development. The plants were submitted to different soil water management, in the vegetative development stage V2 and V4. Stomatal conductance, foliar area, and leaf and stem anatomy measurements were performed. The antioxidant stress was measured by lipid peroxidation, H2O2 content, proline, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APX). The spraying of fomesafen at rate 250 g a.i ha-1 and chlorimuron-ethyl at rate 20 g a.i ha-1 in soybean plants under different water restrictions was also evaluated. BRS Valiosa RR has a better adaptive morphological and anatomical performance in response to a moderate water restriction up to (-0.07 MPa) when it occurs in the first weeks of plant development. SOD, CAT and APX activity of transgenic plants showed an intense increase in the V4 stage, while the conventional cultivar did not overcome the stress condition in this period. These responses appoint that BRS Valiosa (transgenic) has a late response, which increases survival at long periods of water scarcity. Drought reduces visual phytointoxication when sprayed with the herbicides fomesafen and chlorimuron-ethyl. It was found that the spraying of the herbicide fomesafen and chlorimuron-ethyl has a negative effect on rhizobia infection, as well as the water deficit drastically reduced the biological nitrogen fixation and the growth of the soybean plants. When soybean plants were submitted to a moderate drought condition (-0.07 MPa) the conventional cultivar had its development more affected compared to the transgenic cultivar. It was also evidenced that the transgenic cultivar showed to have a greater capacity to support the biological fixation of nitrogen when submitted to a condition of moderate drought (-0.07 MPa) in comparison to the conventional cultivar.

Orientador: José Reinaldo Cerqueira Braz / Coorientador: Marne Carvalho de Vasconcellos / Banca: Norma Sueli Pinheiro Módolo / Banca: Camila Renata Corrêa / Banca: Luís Vicente Garcia / Banca: João Abrão / Resumo: Profissionais expostos ocupacionalmente a longos períodos de exposição aos resíduos de gases anestésicos apresentam alterações no genoma. Os dados existentes na literatura em relação ao estresse oxidativo desses profissionais são escassos. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar a genotoxicidade e o estresse oxidativo em profissionais recém-expostos aos resíduos de gases anestésicos. O estudo foi realizado em 15 médicos residentes da Anestesiologia e Cirurgia, de ambos os sexos, os quais estiveram sob exposição aos resíduos de gases anestésicos isoflurano, sevoflurano e óxido nitroso (N2O). Como grupo controle, 15 voluntários que não frequentavam o ambiente hospitalar foram avaliados. Coletas de sangue foram realizadas após oito, 16 e 22 meses de exposição no grupo exposto e uma vez no grupo controle. Para avaliação da genotoxicidade, utilizou-se o teste do cometa para detecção de quebras de fitas no DNA. Para avaliação de estresse oxidativo foram determinados o conteúdo total de tióis e as proteínas carboniladas, além das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GSH-Px). A exposição ocupacional aos resíduos de gases anestésicos mostrou-se genotóxica nos três períodos de exposição avaliados em relação ao grupo controle. Quanto às proteínas carboniladas, houve diminuição significativa de seus valores no grupo de residentes após 16 meses de exposição em relação ao grupo controle. O conteúdo total de tióis foi significativamente maior no grupo exposto após 22 meses de exposição, quando comparado ao grupo controle. Em relação ao sistema de defesa antioxidante, não foram detectadas diferenças significativas de SOD e CAT entre os grupos. A GSH-Px aumentou no grupo exposto nos dois últimos períodos de avaliação dos residentes, comparado ao grupo controle. Em conclusão, o presente estudo mostrou, pela ... / Abstract: Professionals occupationally exposed for several years to waste anesthetic gases present damages in the genome. Literature data regarding oxidative stress in operating room personnel are scarce. The aim of this study was to evaluate the genotoxicity and oxidative stress in professionals newly exposed to waste anesthetic gases. The study was conducted in 15 residents of Anesthesiology and Surgery, of both sexes, who were exposed to the following waste anesthetic gases: isoflurane, sevoflurane and nitrous oxide (N2O). As a control group, 15 volunteers who did not attend to the hospital were evaluated. Blood samples were collected after eight, 16 and 22 months of exposure in the medical residents and at once in the control group. For genotoxicity, the comet assay was utilized to detect DNA breaks. For oxidative stress, carbonyl protein and total thiols, besides antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-Px) were evaluated. Occupational exposure to waste anesthetic gases shown to be genotoxic in all exposure times compared to the control. A significant decrease of carbonyl proteins after 16 months of exposure was detected in the group of residents, when compared to the control group. The thiols were significantly higher in the exposed group after 22 months of exposure, when compared to the control group. Regarding the antioxidant defense system, no significant differences were found in SOD and CAT between groups. GSH Px increased in the exposed group after 16 and 22 months compared to the control group. The current study showed for the first time that waste anesthetic gases increased DNA damage and changed antioxidant defense in medical residents exposed up to 2 years / Doutor

Orientador: Antônio José Maria Cataneo / Banca: Érika Veruska Paiva Ortolan / Banca: Deilson Elgui de Oliveira / Banca: Paulo Eduardo Oliveira Carvalho / Banca: Olavo Ribeiro Rodrigues / Resumo: Evidências histopatológicas em pulmões de homens e animais sugerem que o sistema respiratório é igualmente afetado pelo diabetes mellitus (DM). Todavia, a julgar pela defasagem nos conhecimentos em relação às outras lesões diabéticas crônicas, observa-se que os pulmões têm sido negligenciados, principalmente no que se refere aos estudos que visam à melhor caracterização das alterações diabéticas que afetam estes órgãos, bem como os mecanismos possivelmente implicados em sua gênese e evolução. Este estudo foi realizado com os seguintes objetivos: 1- Caracterizar as alterações morfológicas, morfométricas e ultraestruturais determinadas pelo DM, nos pulmões de ratos diabéticos induzidos pela aloxana, tendo como parâmetro de comparação ratos normais não-diabéticos, de mesmo período de seguimento; 2- Estabelecer uma possível correlação entre a evolução dessas alterações com a intensidade do estresse oxidativo pulmonar. Cento e vinte ratos Lewis, machos, pesando entre 250 - 280g, foram distribuídos em 2 lotes de animais, com 60 ratos cada um. Cada um destes lotes foi dividido, por sorteio, em 2 grupos experimentais: GN - 30 ratos não-diabéticos controles; GD - 30 ratos diabéticos sem qualquer tratamento da doença. Cada grupo experimental, dentro dos seus respectivos lotes, foi posteriormente dividido em 3 subgrupos de animais, com 10 ratos cada, para serem sacrificados após 1, 3 e 6 meses de seguimento, respectivamente. O diabetes foi induzido pela administração endovenosa de aloxana a 2%, na dose única de 42mg/kg de peso corporal, tendo sido utilizados no experimento somente animais diabéticos com sinais clínicos evidentes de diabetes grave, associados a níveis glicêmicos >250mg/dl. Parâmetros clínicos, tais como: peso corporal, ingestão hídrica, ingestão alimentar e diurese foram obtidos de todos os animais de um dos lotes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Histopathological evidences in human and animal lungs suggest that the respiratory system is equally affected by diabetes mellitus (DM). However, judging from the gap in the knowledge of other chronic diabetic lesions, it is observed that the lungs have been neglected, particularly as regards studies aiming at a better characterization of diabetic alterations that affect such organs as well as of mechanisms possibly implicated in their genesis and development.This study was conducted with the following objectives: 1- To characterize morphological, morphometric and ultrastructural alterations determined by DM in the lungs of alloxan-induced diabetic rats using normal non-diabetic rats followed during the same period of time as a comparison parameter; 2- To establish a possible correlation between the development of such alterations with the intensity of pulmonary oxidative stress. One hundred and twenty male Lewis rats weighing 250 - 280g were distributed into 2 animal lots with 60 rats each. Also, each of such lots was randomly divided into 2 experimental groups: GN - 30 non-diabetic control rats; GD - 30 diabetic rats without any treatment for the disease. Each experimental group, within each respective lot, was later divided into 3 subgroups of animals, each comprising 10 rats, to be sacrificed after 1, 3 and 6 months of follow-up, respectively. Diabetes was induced by intravenous administration of 2% alloxan at a single dose of 42mg/kg of body weight. Only diabetic animals with evident clinical signs of severe diabetes associated with glycemic levels > 250mg/dl were used. Clinical parameters, such as body weight, water intake, food intake and urine output, were obtained from all animals from the one of animal lots in all follow-up periods by using metabolic cages. Blood glucose, urinary glucose, glycosilated hemoglobin and plasma insulin were also determined in these... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Estresse oxidativo e inflamação são importantes mecanismos na fisiopatologia da pré-eclâmpsia e das doenças dos prematuros, entretanto, não está estabelecido se o prognóstico de prematuros de mães hipertensas é decorrente de efeito direto da doença materna ou devido à prematuridade. Determinar as concentrações de marcadores de estresse oxidativo e de inflamação em vias aéreas de prematuros de mães hipertensas e normotensas nos primeiros 3 dias de vida, investigar a influência do tipo de assistência respiratória e a relação dos biomarcadores com o prognóstico respiratório neonatal. Estudo prospectivo com prematuros < 34 semanas, nascidos no serviço e submetidos ao CPAP nasal ou ventilação mecânica no 1o dia de vida, estratificados em 2 grupos: mães hipertensas e mães normotensas. Critério de exclusão: diabete melito, corioamnioite, malformação, infecção congênita, óbito < 24 horas. No aspirado de vias aéreas, do 1o e 3o dias de vida foram dosados malondialdeído (MDA), óxido nítrico (NO) e interleucina 8 (IL-8). Além dos biomarcadores foram avaliadas variáveis gestacionais, do parto e da evolução neonatal. Desfecho: alta sem displasia broncopulmonar (DBP) ou DBP/morte. Realizada análise estatística uni e multivariada. Foram estudados 73 prematuros com idade gestacional média de 29 semanas, sendo 32 de mães hipertensas e 41 de normotensas. Nos 2 momentos de avaliação as concentrações de MDA, NO e IL-8 não diferiram entre os prematuros de mães hipertensas e normotensas. Ao comparar os prematuros em ventilação mecânica versus CPAP nasal não houve diferença nos valores de MDA e NO, mas a IL-8 foi maior no 1o dia de ventilação mecânica. Os prematuros que evoluíram com DBP/óbito tiveram maiores níveis de IL-8 nos primeiros 3 dias de vida. A idade gestacional e o uso de ventilação mecânica foram fatores de risco para DBP/óbito ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Oxidative stress and inflammation are important mechanisms in the pathophysiology of preeclampsia and neonatal diseases, however, it is unclear whether the outcome of preterm infants of hypertensive mothers is due to a direct effect of maternal disease or to short gestation. To determine the levels of oxidative stress markers and inflammation in the airways of preterm infants of hypertensive mothers and normotensive ones in the first three days of life; to evaluate the influence of the respiratory support and the relationship between the biomarkers and neonatal respiratory outcome. A prospective study of inborn preterm infants <34 weeks gestation, requiring nasal CPAP or mechanical ventilation in the first day of life, stratified into two groups: hypertensive mothers and normotensive ones. Exclusion criteria: diabetes mellitus, chorioamnionitis, congenital malformation or infection, death <24 hours. Determination of malondialdehyde (MDA), nitric oxide (NO) and interleukin 8 (IL-8) levels were carried out in airway aspirate samples at the first and third days of life. Gestational, delivery and neonatal data were evaluated. Outcome: discharge without bronchopulmonary dysplasia (BPD) or BPD/ death. Data were analyzed by univariate and multivariate statistical analysis. We studied 73 preterm infants, mean gestational age of 29 weeks, 32 infants were born to hypertensive mothers and 41 born to normotensive mothers. There were no differences in the MDA, NO and IL-8 levels between the two groups, in day 1 and day 3. By comparing neonates on mechanical ventilation versus nasal CPAP the concentrations of MDA and NO didn't differ, but the IL-8 was higher in the first day of mechanical ventilation. Preterm infants with BPD / death had higher levels of IL-8 in the first 3 days of life. Gestational age and mechanical ventilation were risk factors for BPD / death ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Lígia Maria Suppo de Souza Rugolo / Coorientador: Cilmery Suemi Kurokawa / Banca: Paulo Roberto Pachi / Banca: João Cesar Lyra / Mestre

Fusarium graminearum est un champignon phytopathogène responsable de la fusariose de l’épi, maladie affectant les céréales telles que le blé ou le maïs. Le champignon peut également produire des métabolites secondaires toxiques ou mycotoxines, tels que les trichothécènes de type B qui sont stables d’un point de vue chimique et thermique. Ces mycotoxines peuvent contaminer les grains avant récolte. Aucun procédé à l’heure actuelle ne permet de les éliminer ou de limiter leur toxicité. Un moyen de lutte efficace est donc de limiter la biosynthèse de ces toxines. Cette voie implique les gènes Tri qui sont regroupés dans un cluster dont la régulation est complexe. Lors de l’infection de la plante hôte, le champignon se retrouve potentiellement en contact avec des molécules pro ou antioxydantes intervenant dans les mécanismes de défense de la plante. In vitro, ces molécules prooxydantesactivent la production de trichothécènes via la surexpression des gènes Tri alors que les composés antioxydants la répriment, via la répression des gènes Tri.Le facteur de transcription Fgap1, homologue au facteur Yap1 de levure impliqué dans la réponse austress oxydant, a été identifié chez F. graminearum et son rôle potentiel dans la régulation de labiosynthèse des trichothecenes a été étudié. Des souches recombinantes ont été construites et ontpermis de montrer l’implication de ce facteur non seulement dans l’activation de l’expression des gènes de détoxification, mais aussi dans la modulation de la production de trichothécènes en réponseau stress oxydant. Ce facteur n’intervient cependant pas dans la réponse aux composés antioxydants.Une analyse RNA-seq a été entreprise pour identifier plus globalement les réseaux de régulation impliqués en réponse aux variations redox. / Fusarium graminearum is a pathogenic fungus responsible for “Fusarium Head Blight”, a diseaseaffecting cereals, including wheat or maize. The fungus can produce toxic secondary metabolitesbelonging to the type B trichothecene family. These metabolites are heat and chemically stablemolecules. These toxins can be found in grains before harvest and no available decontaminationprocess can eliminate or detoxify trichothecenes. The best way to restrict their occurrence is to limittheir biosynthesis. The Tri genes involved in the biosynthetic pathway are clustered and theirregulation is complex. During plant/pathogen interaction, the fungus must cope with pro orantioxidants, involved in plant defense mechanisms. In vitro, prooxidant molecules stimulatetrichothecenes biosynthesis via Tri genes overexpression, whereas antioxidants compounds repress Trigenes expression and toxin accumulation.The transcription factor Fgap1, homologous to Yap1 in yeast and involved in response to oxidativestress, was identified in F. graminearum and its potential role in the regulation of trichothecenesbiosynthesis was investigated. Using recombinant strains, we demonstrated that, in response tooxidative stress, Fgap1 is not only involved in expression of detoxifying activities, but also in themodulation of trichothecene accumulation. Nonetheless, Fgap1 is not involved in response toantioxidant compounds. RNA-seq analysis has been initiated to identify regulatory network involvedin response to redox variations.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-05-04T13:04:42Z No. of bitstreams: 1 PDF - Anselmo Ferreira da Silva.pdf: 2123835 bytes, checksum: 802490409f94225220d7e56901b76a77 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-06-13T20:27:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Anselmo Ferreira da Silva.pdf: 2123835 bytes, checksum: 802490409f94225220d7e56901b76a77 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T20:29:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Anselmo Ferreira da Silva.pdf: 2123835 bytes, checksum: 802490409f94225220d7e56901b76a77 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Abiotic stresses are responsible for the loss of agricultural production worldwide especially in semiarid regions, where prevailing adverse conditions such as high temperatures associated with drought, salinity and excessive solar radiation. These factors, singly or in combination, causes severe disturbances in the plant metabolism. Salinity, specifically, trigger severe reduction in photosynthetic capacity, which is associated with the induction of cellular oxidative damage. In this context, it was proposed to evaluate the efficiency of photosynthesis and oxidative protection, essential metabolic processes for plant productivity in dwarf cashew seedlings subjected to salt stress. The study was conducted with seedlings obtained from seeds, using two progenies of dwarf cashew (CCP 09 and CCP 76). Seedlings were subjected to salt stress with increasing doses of NaCl (0 to 100 mM) for 30 days. During this period, it were evaluated photosynthetic capacity, measures gas exchange and photochemical activity, and at the end of the trial (30 days of exposure to salt) was evaluated the oxidative protection, based on biochemical indicators of damage and protection. So, it is possible understood that both clones + accumulate Na in all plant parts, promoting a reduction in fresh weight. However, the CCP 09 + clone accumulated K gradually in leaves, favoring better growth of the aerial part and restricting the deleterious effects caused by salt. Salt stress drastically affected the photosynthetic apparatus, highlighting the clone CCP 09, pointing the PN variables, PN/CI and PN/E, with the exception of CI and E in relation to CCP 76. The salt stress promoted the increase of H2O2, only in clone CCP 09 while lipid peroxidation was dramatically reduced in both clones. Clones present specific responses antioxidants, in view of the higher enzyme activity (SOD and APX POX) to the CCP 76 and non-enzymatic (ASC and GSH), in addition to the POX activity to CCP 09. Based on the results, it is suggested that the best performance of the relationship shoot/root in + the clone CCP 09 was caused by the protective effect of K in leaves and relevant non-enzymatic antioxidative protection promoted by ASC and GSH, besides the enzyme activity of POX. This protection was evidenced in clone CCP 09 due to this being more efficient in carbon assimilation and use of tissue water than CCP 76. / Os estresses abióticos são responsáveis pela perda de produção agrícola no mundo inteiro especialmente nas regiões semiáridas, onde prevalecem condições adversas como temperaturas elevadas associadas à seca, salinidade e radiação solar excessiva. Esses fatores, isoladamente ou em combinação, causam distúrbios intensos no metabolismo vegetal. A salinidade, especificamente, causa intensa redução da capacidade fotossintética, o que ocorre associado com a indução de danos oxidativos celulares. Nesse contexto, propôs-se avaliar a eficiência da fotossíntese e proteção oxidativa, processos metabólicos essenciais para a produtividade vegetal, em mudas de cajueiro anão precoce submetidos ao estresse salino. O estudo foi conduzido com plântulas, obtidas de sementes, utilizando duas progênies de cajueiro anão precoce (CCP 09 e CCP 76). As plântulas foram submetidas ao estresse salino com doses crescentes de NaCl (0 à 100 mM) por 30 dias. Durante esse período, foram avaliadas a capacidade fotossintética, por medidas de trocas gasosas e da atividade fotoquímica, e ao final do ensaio (30 dias de exposição ao sal) avaliou-se a proteção oxidativa, com base em indicadores bioquímicos de danos e + proteção. Assim, possibilitou-se compreender que ambos os clones acumularam Na em todas as partes vegetais, promovendo a redução da massa fresca. No entanto, o clone CCP 09 acumulou + K gradativamente em folha, favorecendo melhor crescimento da Parte aérea e restringindo os efeitos deletérios causados pelo sal. O estresse salino afetou drasticamente o aparato fotossintético, destacando-se o clone CCP 09, sobressaindo-se nas variáveis PN, PN/CI e PN/E, com exceção da CI e E em relação ao CCP 76. O estresse salino promoveu o aumento de H2O2, apenas para o clone CCP 09, enquanto que a peroxidação lipídica, reduziu drasticamente em ambos os clones. Os clones apresentam respostas antioxidantes especificas, tendo em vista a maior atividade enzimática (SOD, APX e POX) para o CCP 76 e não enzimática (ASC, GSH), além da atividade da POX para o CCP 09. Com base nos resultados, sugere-se que o melhor desempenho da relação Parte aérea/raiz no clone CCP 09 tenha sido causado pelo efeito protetor + do K em folhas e da relevante proteção antioxidativa não-enzimática promovida pelo ASC e GSH, além da atividade enzimática de POX. Essa proteção foi evidenciada no clone CCP09 devido a este ser mais eficiente na assimilação de carbono e no uso da água tecidual do que o CCP 76.