Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-12T14:39:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TAIANE ACUNHA ESCOBAR.pdf: 973361 bytes, checksum: 098a27b7377e80f12957e7c2e3378ef3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-12T14:39:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TAIANE ACUNHA ESCOBAR.pdf: 973361 bytes, checksum: 098a27b7377e80f12957e7c2e3378ef3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-12T14:39:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TAIANE ACUNHA ESCOBAR.pdf: 973361 bytes, checksum: 098a27b7377e80f12957e7c2e3378ef3 (MD5) Previous issue date: 2015-04-16 / A Leishmaniose é uma doença parasitária infeciosa, causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida pelo vetor flebótomo. Caracterizada como Doença Tropical Negligenciada, acomete diversas espécies de mamíferos, sendo o cão, atualmente, o principal reservatório em área urbanas. Os equinos também podem ser infectados, especialmente quando estão em contato com reservatórios ou vetores. No município de Uruguaiana – RS há um expressivo número de equinos utilizados na tração de cargas e como meio de transporte, com constante movimentação dentro do perímetro urbano. Esses animais vivem em condições precárias, submetidos a trabalhos excessivos e má nutrição. Frente a estes fatores somados à atual situação epidemiológica da leishmaniose visceral canina no município, o presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar a presença de Leishmania sp em equinos urbanos do município de Uruguaiana-RS. Para a condução do experimento foram utilizadas amostras sanguíneas de 192 equinos testadas em três técnicas: sorológica (ELISA), imunocromatográfica (TR-DPP) e molecular (PCR). Na técnica de ELISA foi utilizado soro, testado com o Kit Ensaio Imunoenzimático para Diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina – Bio-Manguinhos e para o teste imunocromatográfico Teste Rápido Dual Path Platform utilizaram-se amostras de sangue total. As reações de PCR, após extração de DNA de sangue periférico dos animais, foram realizadas com quatro pares de iniciadores distintos. Todas as amostras testadas apresentaram-se não reagentes nos ensaios imunológicos. Entretanto, com o emprego da técnica PCR, mais sensível, houveram amostras positivas. Dos quatro pares de iniciadores testados, 75 amostras foram positivas, 52 com pelo menos um dos pares. Contudo, ao analisarmos individualmente os iniciadores, 58,6% foram positivos para LITSV/L5.8SR, 44% para LITSV/LISTSR, 28% para RV1/RV2, e 4% LITSR/L5.8S. Os resultados apresentados no experimento indicam a possibilidade de existência de Leishmania em equinos na região de Uruguaiana, embora os testes sorológicos não tenham apresentado reatividade para Leishmania. A técnica molecular possibilitou a detecção do gênero Leishmania nas amostras de sangue periférico dos equinos. Este foi o primeiro relato da infecção na espécie equina na região do extremo oeste do estado do Rio Grande do Sul. Contudo, se faz importante a realização de sequenciamento do fragmento para que se possa confirmar a identidade genética de Leishmania sp. / Leishmaniasis is an parasitic infectious disease caused by protozoa genus Leishmania and transmitted by the sandfly vector. Characterized as Neglected Tropical Disease, affects several species of mammals, and the dog are main reservoir in urban areas. The horses can also be infected especially when they are in contact with reservoirs or vectors. In Uruguaiana’s city, there is a significant number of horses used in the tensile loads and means of transport, with constant movement within the city, living in precarious work’s conditions, subjected to excessive and poor nutrition. In view of these factors added to the current epidemiological situation of LVC in the city, the present study aim to identify the presence of Leishmania in urban horses the municipality of Uruguaiana-RS. For the experiment, blood samples from 192 horses were used for holding three techniques: serological (ELISA), immunochromatographic (TR-DPP) and molecular (PCR). For conducting ELISA’s Test serum was used and tested with Bio-Manguinhos kit and for TR-Dual Path Platform Rapid Test whole blood samples were employed. In the PCR technique, DNA was extracted from peripheral blood of animals and amplifications were performed with primers RV1 / RV2, LITSR / LITSV, LITSR / L5.8S / LITSV / L5.8SR.. All tested samples showed negative results in immunoassays. However, employing sensitive techniques such as PCR, positive samples were detected. Considering the four primer pairs tested, 75 animals were positive, 52 with at least one of the pairs. However, when analyzing the individual primers, 58.6% were positive for LITSV/L5.8SR, 44% to LITSV/LISTSR, 28% for RV1/RV2, and 4% LITSR/L5.8S.In The results presented in the experiment indicate the possibility of Leishmania in horses in the region of Uruguaiana city, although serological tests have not submitted reactivity to Leishmania. Molecular technich shows results to consider the Leishmania’s presence in horse’s peripheral blood samples. This was the first report of infection in equine species in westernmost region of the Rio Grande do Sul state. However, it is important to conduct sequencing of the fragment so that we can confirm the genetic identity of Leishmania sp.

Submitted by Ottilie Carolina Forster (ocforster@gmail.com) on 2017-12-05T21:44:44Z No. of bitstreams: 1 Tese_Ottilie_Versão Final 22 11 2017.pdf: 1968251 bytes, checksum: 8cbd67380fedecc14e72be85ed42be54 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSEMEIRE APARECIDA VICENTE null (rose@btu.unesp.br) on 2017-12-07T13:23:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 forster_oc_dr_bot.pdf: 1968251 bytes, checksum: 8cbd67380fedecc14e72be85ed42be54 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-07T13:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 forster_oc_dr_bot.pdf: 1968251 bytes, checksum: 8cbd67380fedecc14e72be85ed42be54 (MD5) Previous issue date: 2017-08-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A referida tese é o resultado de um trabalho que buscou discutir, como tema geral, o impacto que os parasitas podem causar na ecologia de seus hospedeiros. Ela foi divida em dois capítulos: o primeiro capítulo é uma revisão bibliográfica que discute sobre como os parasitas podem influenciar no desempenho reprodutivo de seus hospedeiros; e o segundo capítulo investigou em três espécies de anfíbios anuros (Leptodactylus chaquensis, Leptodactylus podicipinus, e Hypsiboas raniceps), se os indivíduos parasitados por helmintos são acometidos por alterações em aspectos da reprodução. As três espécies de anuros estudadas, não apresentaram evidências que possam ter alguma relação entre a intensidade parasitária de helmintos e caracteres morfológicos associados à reprodução. O que sugere que estas espécies estudadas apresentem respostas imunológicas e/ou adaptações fisiológicas mediante infecção parasitária. / This thesis is the result of a work that sought to discuss, as a general theme, the impact that parasites can have on the ecology of their hosts. It was divided into two chapters: the first chapter is a literature review that discusses how the parasites can influence the reproductive performance of their hosts; and the second chapter investigated in three species of anuran amphibians (Leptodactylus chaquensis, Leptodactylus podicipinus, and Hypsiboas raniceps), if the individuals parasitized by helminths are affected by changes in aspects of reproduction. The three species of anurans studied didn’t present evidence that could have any relation between the parasite intensity of helminths and morphological characters associated to reproduction. This suggests that these species studied present immunological responses and/or physiological adaptations through parasitic infection.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-07T16:33:35Z No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-07T16:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil. / No Novo Mundo, a leishmaniose visceral (LV) é causada pela Leishmania infantum, que tem como vetor o inseto flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. Os cães são considerados o principal reservatório urbano da infecção. Devido ao fato do controle da LV se basear, principalmente, no controle da leishmaniose visceral canina (LVC), é importante estudar o papel dos cães na transmissão da infecção. Foi demonstrado que cães apresentando diferentes apresentações clínicas da LV, inclusive os assintomáticos transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. Nenhum estudo sistemático avaliou a associação direta entre a carga parasitária em diferentes tecidos e a transmissão do parasito. A hipótese desse estudo é que cães com baixa carga parasitária na pele e no sangue não transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. O objetivo deste estudo foi analisar se há correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes apresentações clínicas da LV e a transmissão ao vetor Lutzomyia longipalpis. Foram selecionados 35 cães de dois canis, locazidos em area endêmica (n=23) e não endêmica (n=12) para LV. Os animais foram classificados de acordo com o número de sinais clínicos em: assintomáticos (sem sinais; n=12), oligossintomáticos (1-3 sinais; n=15) e polissintomático (<3 sinais; n =8). Todos os 35 cães foram positivos em pelo menos um dos testes diagnósticos: ELISA (n=8), cultura de aspirado esplênico (n=9) e qPCR (n=35) dos tecidos avaliados. Diferentes tecidos (sangue periférico, aspirado esplênico e biópsia de pele) foram coletados para quantificação do DNA do parasito pela qPCR. Para avaliar a capacidade de transmissão dos cães, foi realizado xenodiagnóstico, seguido de determinação da carga parasitária em cada flebótomo utilizando qPCR. Finalmente, a capacidade de transmissão de Leishmania foi estimada pela determinação, após o xenodiagnóstico, da infectividade de cães ao flebótomo, da taxa de infecção de flebótomos, e da carga parasitária transmitida aos flebótomos. Baixa carga parasitária na pele e no sangue foi detectada em aproximadamente 85% dos cães assintomáticos. A infectividade de cães ao flebótomo variou de 60 a 90%, e foi similar entre animais apresentando diferentes números de sinais clínicos. Foi identificado que o maior percentual (51%) de cães transmite parasitos a um pequeno número de flebótomos (de 1 a 5 em 30 flebótomos utilizados no xenodiagnóstico). Entre os tecidos analisados, correlação positiva foi detectada entre a infectividade de cães ao vetor e a carga parasitária nas amostras de sangue (r = 0.50, p<0.01). Adicionalmente, foi observada, correlação positiva entre menor taxa de infecção dos flebótomos e baixa carga parasitária no sangue (r = 0.53, p<0.01). Em conjunto, estes dados mostram que cães com baixa carga parasitária são capazes de transmitir o parasito, porém a um pequeno número de flebótomos e com uma baixa carga parasitária. / In the New World, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum and is usually transmitted by Lutzomyia longipalpis. Dogs are considered the main urban reservoir of the parasite. Evaluation of the importance of dogs in Leishmania transmission in VL is well established. Dogs with different clinical forms of VL have shown to transmit the infection to the sandfly vector, even those with no clinical signs of the disease. Comprehensive studies that correlate transmission and parasite load in different tissues are scarce. Our hypothesis is that dogs with low parasite load in the skin and blood do not transmit the infection to the sandfly vector. We aimed to analyze the correlation between parasite load of dogs with different clinical forms of CVL and transmission to the vector Lutzomyia longipalpis. Thirty five dogs were selected from two canine kennels, located in an endemic (n=23) and non-endemic area (n=12) for VL. These animals were classified according to the clinical signs into asymptomatic (no signs; n=12), olygosymptomatic (1-3 signs; n=15) and polysymptomatic (>3 signs; n=8). All the 35 dogs tested positive for at least one of the diagnostic tests: ELISA (n=8), culture in splenic aspirates (n=9) and qPCR for Leishmania DNA detection (n=35). Different tissues (blood, splenic aspirate and skin biopsy) were collected for quantification of parasite load using qPCR. To evaluate the infectivity of the dogs to vector, first we performed the xenodiagnosis, then we quantified parasite load in each sandfly using qPCR. Finally, transmission of Leishmania was estimated by determining infectivity to sandflies, and the infection rate, and the parasite load transmitted to sandflies. Low parasite load in the skin and blood was detected in approximately 85% of asymptomatic dogs. Infectivity to sandflies varied from 60 to 90%, and shown to be similar among animals presenting different number of clinical signs. It was noted that the highest percentage (51%) of dogs transmitted infection to a small number of sandflies (from 1 to 5 in 30 sandflies used in xenodiagnosis). Positive correlation between infectivity to sandflies and parasite load was only detected in blood among the tissues analyzed (r = 0.50, p <0.01). Additionally, a lower parasite load in blood (r = 0.53, p <0.01) were correlated to the presence of lower number of positive sandflies in xenodiagnosis. These findings indicate that animals with low parasite load are capable to transmit Leishmania to sandflies, although to a lower number of sandflies and with a low parasite load.

Made available in DSpace on 2014-03-18T17:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf: 1050545 bytes, checksum: 214327e202e5f77522b5e0c404d3b245 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença endêmica, causada por diferentes espécies de Leishmania e distribuída por todos os estados brasileiros. No entanto, não estão estabelecidos os critérios de cura clínica definitiva, nem a participação da resposta imunológica na manutenção do estado de cura, na reativação de lesões e no desenvolvimento da forma mucosa. A persistência parasitária após a cura clínica, já demonstrada anteriormente, poderia estar relacionada a estes fenômenos. Este estudo objetivou identificar DNA de Leishmania e a presença de parasitas através do cultivo, do exame direto e do exame histopatológico, em cicatrizes cutâneas e em pele sadia de pacientes com LTA tratados e clinicamente curados. Cinquenta pacientes com LTA e 30 com esporotricose (grupo controle) foram submetidos a avaliação dermatológica, avaliação otorrinolaringológica com fibra óptica, intradermorreação de Montenegro (IDRM), e sorologia para leishmaniose por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) Após consentimento livre e esclarecido, fragmentos de cicatriz e de pele sadia foram obtidos por biópsia, com o auxílio de "punch" 6mm. O tempo mediano decorrido entre a cicatrização da lesão e entrada no projeto foi de 25 (LTA) e 46 meses (controle) respectivamente. Os fragmentos teciduais, cujo peso mediano foi de 7,1mg, foram subdivididos em pequenas amostras submetidas à: a) extração de DNA e amplificação genérica e subgenérica por reação em cadeia da polimerase (PCR) com revelação em gel de agarose dos produtos amplificados; b) isolamento de formas promastigotas em meio de cultura bifásico (NNN enriquecido com meio Schneider e soro fetal bovino); c) investigação de formas amastigotas por exame direto corado pelo Giemsa; e d) exame histopatológico. Todos os pacientes encontravam-se clinicamente curados, com lesões cutâneas cicatrizadas e sem lesões mucosas em atividade. A IDRM foi positiva em 88% dos pacientes, a sorologia por ELISA em 44% e a RIFI em 26%. Foram encontradas duas amostras de cicatriz cutânea positivas para Leishmania, uma na PCR e outra no "imprint", ambas do grupo de LTA. As demais amostras de cicatriz e de pele sadia foram negativas Os presentes resultados confirmam achados anteriores que Leishmania pode persistir em lesões cicatrizadas. A negatividade para Leishmania nas amostras de pele sadia não apóia a hipótese do ser humano como fonte de infecção. A baixa frequência de positividade encontrada nas cicatrizes pode ser parcialmente explicada pela realização das biópsias no bordo da cicatriz, região por onde se inicia o processo de cicatrização durante o tratamento, pelo tamanho diminuto dos fragmentos cutâneos estudados e pela baixa carga parasitária / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is an endemic disease caused by different species of Leishmania and distributed in all Brazilian states. However, there are neither established criteria for definitive clinical cure, nor on the immune response participation in the maintenance of the state of cu re, in the reactivation of the lesions, and in the development of the mucosal form. The parasite persistence after clinical cure, previously demonstrated, could be related to these phenomena. This study aimed to identify Leishmania DNA and the presence of parasites through cultivation, direct examination and histopathology studies on skin scars and healthy skin of patients with ACL treated and clinically cured. Fifty patients with ACL and 30 with s porotrichosis (control group) underwent dermatologic assessm ent, EENT fiber optics evaluation, Montenegro skin test (MST), and leishmaniasis serology by enzyme immunoassay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). After informed consent, fragments of scarred and healthy skin were obtained by punch 6 mm b iopsy. The median time between the healing of the lesion and study entry was 25 (ACL) and 46 months (control) respectively. The tissue samples, whose average weight was 7.1 mg, were further divided into small samples submitted to: a) DNA extraction and gen eric and subgeneric amplification by polymerase chain reaction (PCR) with in agarose gel revelation of amplified products, b) isolation of promastigotes in biphasic medium (NNN medium enriched with fetal calf serum in Schneider media), c) investigation of amastigotes forms by Giemsa - stained direct examination, and d) histopathological studies. All patients were clinically cured, with healed skin lesions and no mucosal lesions in activity. The MST was positive in 88% of patients, ELISA serology in 44% and IF AT in 26%. Two cutaneous scarring samples were found positive for Leishmania , one by PCR and one in the "imprint" , both ACL group . Additional samples of scarred and healthy skin were negative. The present results confirm earlier findings that Leishmania ma y persist in healed lesions. The samples negative for Leishmania in the healthy skin does not support the hypothesis of human beings as a source of infection. The low frequency of positivity found in the scarred tissues may be partially explained by the pe rformance of biopsies at the edge of the scarred region, where the healing process begins during treatment, and the extremely small size of the skin fragments studied and low parasite load

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:21Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf: 1050545 bytes, checksum: 214327e202e5f77522b5e0c404d3b245 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf.txt: 135213 bytes, checksum: 5eb01e27d296b3812060dc1731d17b03 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf.jpg: 1359 bytes, checksum: cdb43a52a4259c711a5d91bfbc82d127 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença endêmica, causada por diferentes espécies de Leishmania e distribuída por todos os estados brasileiros. No entanto, não estão estabelecidos os critérios de cura clínica definitiva, nem a participação da resposta imunológica na manutenção do estado de cura, na reativação de lesões e no desenvolvimento da forma mucosa. A persistência parasitária após a cura clínica, já demonstrada anteriormente, poderia estar relacionada a estes fenômenos. Este estudo objetivou identificar DNA de Leishmania e a presença de parasitas através do cultivo, do exame direto e do exame histopatológico, em cicatrizes cutâneas e em pele sadia de pacientes com LTA tratados e clinicamente curados. Cinquenta pacientes com LTA e 30 com esporotricose (grupo controle) foram submetidos a avaliação dermatológica, avaliação otorrinolaringológica com fibra óptica, intradermorreação de Montenegro (IDRM), e sorologia para leishmaniose por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) Após consentimento livre e esclarecido, fragmentos de cicatriz e de pele sadia foram obtidos por biópsia, com o auxílio de "punch" 6mm. O tempo mediano decorrido entre a cicatrização da lesão e entrada no projeto foi de 25 (LTA) e 46 meses (controle) respectivamente. Os fragmentos teciduais, cujo peso mediano foi de 7,1mg, foram subdivididos em pequenas amostras submetidas à: a) extração de DNA e amplificação genérica e subgenérica por reação em cadeia da polimerase (PCR) com revelação em gel de agarose dos produtos amplificados; b) isolamento de formas promastigotas em meio de cultura bifásico (NNN enriquecido com meio Schneider e soro fetal bovino); c) investigação de formas amastigotas por exame direto corado pelo Giemsa; e d) exame histopatológico. Todos os pacientes encontravam-se clinicamente curados, com lesões cutâneas cicatrizadas e sem lesões mucosas em atividade. A IDRM foi positiva em 88% dos pacientes, a sorologia por ELISA em 44% e a RIFI em 26%. Foram encontradas duas amostras de cicatriz cutânea positivas para Leishmania, uma na PCR e outra no "imprint", ambas do grupo de LTA. As demais amostras de cicatriz e de pele sadia foram negativas Os presentes resultados confirmam achados anteriores que Leishmania pode persistir em lesões cicatrizadas. A negatividade para Leishmania nas amostras de pele sadia não apóia a hipótese do ser humano como fonte de infecção. A baixa frequência de positividade encontrada nas cicatrizes pode ser parcialmente explicada pela realização das biópsias no bordo da cicatriz, região por onde se inicia o processo de cicatrização durante o tratamento, pelo tamanho diminuto dos fragmentos cutâneos estudados e pela baixa carga parasitária / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is an endemic disease caused by different species of Leishmania and distributed in all Brazilian states. However, there are neither established criteria for definitive clinical cure, nor on the immune response participation in the maintenance of the state of cu re, in the reactivation of the lesions, and in the development of the mucosal form. The parasite persistence after clinical cure, previously demonstrated, could be related to these phenomena. This study aimed to identify Leishmania DNA and the presence of parasites through cultivation, direct examination and histopathology studies on skin scars and healthy skin of patients with ACL treated and clinically cured. Fifty patients with ACL and 30 with s porotrichosis (control group) underwent dermatologic assessm ent, EENT fiber optics evaluation, Montenegro skin test (MST), and leishmaniasis serology by enzyme immunoassay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). After informed consent, fragments of scarred and healthy skin were obtained by punch 6 mm b iopsy. The median time between the healing of the lesion and study entry was 25 (ACL) and 46 months (control) respectively. The tissue samples, whose average weight was 7.1 mg, were further divided into small samples submitted to: a) DNA extraction and gen eric and subgeneric amplification by polymerase chain reaction (PCR) with in agarose gel revelation of amplified products, b) isolation of promastigotes in biphasic medium (NNN medium enriched with fetal calf serum in Schneider media), c) investigation of amastigotes forms by Giemsa - stained direct examination, and d) histopathological studies. All patients were clinically cured, with healed skin lesions and no mucosal lesions in activity. The MST was positive in 88% of patients, ELISA serology in 44% and IF AT in 26%. Two cutaneous scarring samples were found positive for Leishmania , one by PCR and one in the "imprint" , both ACL group . Additional samples of scarred and healthy skin were negative. The present results confirm earlier findings that Leishmania ma y persist in healed lesions. The samples negative for Leishmania in the healthy skin does not support the hypothesis of human beings as a source of infection. The low frequency of positivity found in the scarred tissues may be partially explained by the pe rformance of biopsies at the edge of the scarred region, where the healing process begins during treatment, and the extremely small size of the skin fragments studied and low parasite load

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luana_lourenco_ioc_mest_2015.pdf: 2708180 bytes, checksum: 1ba7e6b26d3cc94cbe2e47f016f3d912 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos prévios sobre os aspectos histopatológicos da leishmaniose tegumentar americana (LTA) causada por Leishmania (Viannia) braziliensis indicam que a carga parasitária, apesar de baixa, variava de acordo não só com a forma clínica, mas também com o tempo de evolução da doença. O insucesso do tratamento e a evolução para formas mais graves dependem de características do parasita e de aspectos da resposta imune do paciente, dentre outros. Os pacientes com a forma cutânea tendem a responder de forma satisfatória, mesmo com protocolo em que se usa baixa dose de antimoniato de meglumina. Entretanto, alguns desses casos demoram mais tempo para atingir a cura clínica ou recidivam ou ainda desenvolvem a forma mucosa. Este projeto teve como meta avaliar a carga parasitária inicial e fatores de virulência em lesões de pacientes com LTA, correlacionando com a forma clínica e resposta à terapêutica. Foram selecionados 82 pacientes com diagnóstico confirmado de LTA. A carga parasitária foi avaliada por PCR quantitativo (qPCR), utilizando-se como alvo genes de subunidade menor de RNA ribossomal (SSR). A análise da expressão gênica de GP63 deu-se pelo uso de RT-PCR e a imunolocalização de GP63 e LPG nas lesões foi conduzida por ensaios de imunoperoxidase. Os dados de quantificação da carga parasitária mostraram parasitismo maior nas lesões que evoluíram com boa resposta ao tratamento, enquanto que a expressão gênica de GP63 e a produção \201Cin situ\201D de GP63 e LPG foram mais significativas nos casos que evoluíram de forma desfavorável ao tratamento. Com isso podemos concluir que mais que a carga parasitária, a regulação de fatores de virulência no infiltrado inflamatório pode influenciar na evolução clínica da LTA causada por L.(V.) braziliensis / Previous studies on the histopathological aspects o f american cutaneous leishmaniasis (ACL) caused by Leishmania (V.) braziliensis indicate that the parasite load, although low, varied according not only to th e clinical form, but also with the disease progression. Treatment failure and progress ion to more severe forms depend on parasite characteristics and the aspects of pati ent immune response, among other factors. Patients with cutaneous form tend to respo nd satisfactorily, even with protocols that use low-dose meglumine antimoniate. However, some of these cases either take longer to reach clinical cure, relapse or even develop to mucosal form. This project aims to assess the initial parasite load an d virulence factors in patients with ACL injuries, correlating with the clinical present ation and response to therapy. We selected 82 patients with confirmed diagnosis of LT A. The parasitic load was measured by quantitative PCR (qPCR), using small su bunit ribosomal RNA (SSR) genes as targets. Analysis of GP63 gene expression was done by RT-PCR and immunolocalization of GP63 and LPG lesions was cond ucted by immunoperoxidase assays. The quantification of the parasite load dat a showed higher parasitism in lesions that evolved with good response to treatmen t, whereas gene expression of GP63 and "in situ" production of GP63 and LPG were more significant in cases that evolved unfavorably to treatment. Thus, we conclude d that rather than the parasite load, the regulation of virulence factors in the in flammatory infiltrate may be influencing the clinical course of ACL caused by L. (V.) braziliensis .

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 amanda_cavalcanti_ioc_dout_2014.pdf: 8125448 bytes, checksum: a21804f13675939416a209e2c1250af8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Visceral causada pela Leishmania infantum é uma doença zoonótica no Novo Mundo em que o cão é o principal hospedeiro doméstico. O conhecimento prévio dos mecanismos imunopatogênicos associados à infecção por L. infantum é necessário para o desenvolvimento de vacinas e outras estratégias de controle. O objetivo geral desta tese foi correlacionar a expressão clínica, a carga parasitária, a resposta imunológica do hospedeiro e a diversidade genética dos parasitos em cães naturalmente infectados por L. infantum. O presente estudo é uma avaliação transversal de noventa e dois cães naturalmente infectados por L. infantum provenientes do estado do Mato Grosso. A infecção dos animais incluídos no estudo foi confirmada por sorologia, cultura e /ou PCR. O diagnóstico etiológico foi realizado por PCR-RFLP para o gene hsp70 e por eletroforese de enzimas nos parasitos isolados. Foram ainda analisados os sinais clínicos, a resposta imune pela expressão gênica de citocinas, a carga parasitária por qPCR, as alterações histológicas no baço e fígado e a as populações e genótipos de L. infantum circulantes por meio da análise do polimorfismo de microssatélites. Foram definidos grupos de acordo com a carga parasitária esplênica e hepática. Os animais com alta carga parasitária apresentaram altos títulos de anticorpos específicos anti-Leishmania e mais sinais clínicos da doença A carga parasitária no baço foi maior do que no fígado e houve correlação com o rompimento da arquitetura esplênica, caracterizado principalmente pela desorganização da polpa branca. No fígado, a carga parasitária foi correlacionada positivamente à ocorrência de granulomas, à degeneração dos hepatócitos bem como à intensidade do infiltrado inflamatório. Mostramos que a maior carga parasitária promoveu menor expressão gênica de IL-12, IFN\03B3, TNF, IL-6, TGF\03B2 e IL-10 no baço e maior expressão de CCL2, CXCL8 e MAP4K4 no fígado. A análise genética dos parasitos é indicativa de que há infecção policlonal e tropismo tissular de alguns clones, mais evidente na análise das amostras pareadas (tecidos e isolados do tecido). Foi observada baixa variabilidade genética em que a maioria (96%, 49/51) das amostras foi caracterizada como pertencente a POP2, dentre as populações circulantes no Brasil previamente descritas pelo nosso grupo. Não houve associação entre a variabilidade genética dos parasitos e os parâmetros clínicos, parasitológicos ou imunológicos. Apesar disso, os dados gerados pelos ensaios in vitro com as cepas de diferentes populações sugerem que há sim diferenças na infectividade entre cepas com genótipos de microssatélites distintos. Foi reunida uma série de dados que, em conjunto, mostram que na região estudada a Leishmanise Canina é causada por população geneticamente homogênea não tendo sido observada nenhuma correlação entre genótipos específicos e o fenótipo da infecção canina / Visceral leishmaniasis is a zoonotic disease in the New World and the domestic dog is the main host of Leishmania infantum . Prior knowledge of the immunopathogenic mechanisms associated with infection by L. infantum is required for the development of vaccines and other control strategies. The overall aim of this thesis was to compare the clinical expression, parasite load, the host immune response and genetic diversity of parasites in dogs naturally infected with L. infantum . This study is a cross - sect ional assessment of ninety - two dogs naturally infected by L. infantum . Infection was confirmed by serology, parasite culture and / or PCR. The etiology was assessed by hsp70 PCR - RFLP and MLEE . We further analyzed clinical signs , immune response by cytokine gene expression, molecular parasite load by qPCR, histological changes in sple nic and hepatic compartments and also L. infantum populations and genotypes through microsatellite analysis. Groups according to the spleen and liver parasite load were defined. Animals with high parasite load had high titers of anti - Leishmania antibodies and more clinical signs. The paras ite load in the spleen was higher than in liver and correlated with disruption of splenic architecture, mainly characterized by white pulp diso rganization. Liver parasite load was correlated with the occurrence of granulomas, degeneration and intensity of the inflammatory infiltrate. We show that the higher parasite load promoted lower gene expression o f IL - 12, IFNγ, TNF, IL - 6, IL - 10 and TGFβ in the spleen and increased expression of CCL2, CXCL8 MAP4K4 in the liver. Genetic analysis of parasites is indicative of polyclonal infection and tissue tropism of some clones, more evident in the analysis of paire d samples ( strain isolated and tissue). We also found l ow genetic variability , in which the majority (96%, 49/51) of the samples was characterized as belonging to POP2, among tree populations previously described by our group. There was no association betw een the genetic variability of the parasites and the clinical, parasitological and immunological parameters. Nevertheless, the data generated by in vitro assays with strains from different populations suggest that there are differences in infectivity betwe en strains with distinct m icrosatellite genotypes. Taken together, these results show that in the region studied Canine Leishmaniasis is caused by genetically homogeneous population without any correlation between specific genotypes and the phenotype of ca nine infection .

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-03T13:18:02Z No. of bitstreams: 1 BrendaElenBizerraAlves_DISSERT.pdf: 3244212 bytes, checksum: 077cf03fb7b9e93a47f38daacdb53df7 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-10T14:13:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 BrendaElenBizerraAlves_DISSERT.pdf: 3244212 bytes, checksum: 077cf03fb7b9e93a47f38daacdb53df7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T14:13:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BrendaElenBizerraAlves_DISSERT.pdf: 3244212 bytes, checksum: 077cf03fb7b9e93a47f38daacdb53df7 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / O Rio Grande do Norte (RN) foi um dos primeiros Estados onde o vírus Zika foi incialmente detectado no Brasil, provavelmente devido ao fluxo de turistas, ao alto grau de infestação do Aedes aegypti e a precariedade do saneamento ambiental. A presença desse arbovírus no RN, a notificação de casos graves, a escassez de trabalhos disponíveis sobre esse tema e sua possível introdução do vírus no Brasil durante a Copa das Confederações de 2013, serviram de motivação para a realização desse estudo que buscou investigar a circulação do vírus Zika no Estado do Rio Grande do Norte e realizar a caracterização molecular dos vírus isolados durante o período de junho de 2013 a dezembro de 2016. Durante esse período, amostras de pacientes foram analisadas através da técnica de transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR) para a detecção do genoma viral. A infecção pelo ZIKV foi confirmada em 8,97% (73/814) dos casos estudados. A análise da distribuição espacial do vírus pelas diferentes microrregiões do Estado, mostrou sua circulação em 16 municípios. Os municípios com maior número de casos confirmados foram Natal e Parnamirim. O período com maior incidência da infecção ocorreu nos meses de março, abril e maio de 2015, entretanto, as maiores proporções de casos positivos ocorreram nos meses de novembro e dezembro de 2014 e fevereiro de 2015. A maioria dos casos de infecção por Zika ocorreu em pacientes do sexo feminino, mas sem diferença significativa em relação ao sexo masculino. A infecção pelo vírus Zika atingiu todas as faixas etárias com praticamente as mesmas taxas de incidência da infecção. Nenhuma correlação entre a estimativa de viremia e o tempo de doença nos pacientes foi encontrada, assim como, não foram encontradas diferenças significativas na viremia de acordo com o tipo de amostra analisada (soro/sangue total), mas houve uma diferença significativa na viremia entre o quarto e quinto dia de sintomas analisados. A análise filogenética indicou que a linhagem do ZIKV circulante no estado do Rio Grande do Norte pertence ao genótipo Asiático. Ao comparar os vírus isolados nesse estudo com as cepas ascestrais isoladas na Malásia foram identificadas três mutações que geraram mudanças de aminoácidos: D393E, V473M e T487M. Essas mutações foram encontradas no domínio III da proteína (E) e provavelmente, influenciam na patogenicidade das cepas dos vírus Zika circulantes no Estado do RN. Esse estudo fornece subsídios necessários para compreender a distribuição e a dinâmica da doença no estado do Rio Grande do Norte e a caracterização genética é fundamental para a compreensão dos aspectos biológicos do vírus. / Rio Grande do Norte (RN) was one of the first states where the virus was initially detected in Brazil, probably due to the tourists flow, the high degree of Aedes aegypti infestation and the precariousness of environmental sanitation.The presence of this arbovirus in RN, the notification of severe cases, the scarcity of available works on this subject and its possible introduction of the virus in Brazil during the Confederations Cup 2013, served as motivation for the accomplishment of this study that sought to investigate the circulation of the Zika virus in the State of Rio Grande do Norte and to perform the molecular characterization of the isolated viruses during the period from June 2013 to December 2016. In this period, patient samples were analyzed using the reverse transcription technique followed by real-time polymerase chain reaction (qRTPCR) for the detection of the viral genome. ZIKV infection was confirmed in 8.97% (73/814) of the cases studied. The analysis of the spatial distribution of the virus by the different micro regions of the State showed its circulation in 16 municipalities. The municipalities with the highest number of confirmed cases were Natal and Parnamirim. The period with the highest incidence of infection occurred in the months of March, April and May of 2015 however, the highest proportions of positive cases occurred in the months of November and December of 2014 and February of 2015. The majority of cases of Zika infection occurred in female patients, but without significant difference in relation to males. Zika virus infection reached all age groups with practically the same infection incidence rates. No correlation between viremia estimation and disease time in patients was found, as well as, no significant differences in viremia according to the type of sample analyzed (serum/whole blood), but there was a significant difference in viremia between the fourth and fifth day of symptoms analyzed. Phylogenetic analysis indicated that the circulating ZIKV in the state belong to the Asian genotype.The amino acid comparison between ZIKV identified in this study and the ancestral strains isolated in Malaysia showed three mutations with amino acid changes: D393E, V473M and T487M. These mutations were found in domain III of the protein (E), and probably influence the pathogenicity of Zika virus strains circulating in Rio Grande do Norte. This study provides the necessary inputs to understand the distribution and dynamics of the disease in the State of Rio Grande do Norte and the genetic analyses are fundamental for understanding the biological aspects of the virus.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-22Bitstream added on 2014-06-13T18:56:55Z : No. of bitstreams: 1 bandarra_mb_me_jabo.pdf: 1017344 bytes, checksum: e535ebeb65428859bad53de71a4fb528 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose de interesse em saúde pública e o cão é o principal reservatório doméstico de Leishmania chagasi. Este protozoário modula a resposta imune do hospedeiro. A citocina MIF favorece a permanência do macrófago no sítio da injúria e protege-o da apoptose. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de MIF nos linfonodos de cães com LV, comparando estes achados com a densidade de macrófagos parasitados nos linfonodos e com o estadiamento clínico dos cães. Neste estudo utilizou-se 33 cães oriundos de Araçatuba, município endêmico para a LV. Os cães foram distribuídos nos grupos assintomático (A), oligossintomático (O) e sintomático (S). As alterações morfológicas dos linfonodos poplíteo, subescapular, ilíaco e mesentérico foram avaliadas quanto ao perfil celular, determinado por escores. A carga parasitária e a imunodetecção de MIF foi feita pela técnica de imuno-histoquímica. Nos cães dos grupos com sinais clínicos (O e S), as reações inflamatória granulomatosa e plasmocitária foram predominantes. No grupo S, a atrofia linfóide predominou e associou-se ao maior número de granulomas e a maior carga parasitária. A densidade de parasitos nos linfonodos periféricos diferiu significativamente do grupo S para os demais grupos (P<0,05). A densidade de macrófagos imunomarcados com MIF foi maior no grupo S e apresentou uma correlação significativa com a carga parasitária no linfonodo poplíteo (P<0,05). Conclui-se que macrófagos são uma das células mais envolvidas na resposta ao parasito. O protozoário utiliza MIF para manter o macrófago no sítio de infecção, favorecendo a sua sobrevivência no hospedeiro / Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease critical for the public health and the dog is the main Leishmania chagasi„s domestic reservoir. This protozoan modulates the immune response of the host. The MIF cytokine facilitates the permanence of the macrophage in the site of injury and protects it from apoptosis. The aim of this study was to evaluate the MIF presence in the lymph nodes of dogs with VL, comparing these findings with the parasite density in the lymph nodes and with the clinical outcome of the dogs. Third three dogs from Araçatuba, an endemic city for VL, were used in this study. Dogs were distributed in the asymptomatic (A), oligosymptomatic (O) and symptomatic (S) groups. The cellular profile of the morphologic changes of the popliteal, subscapular, iliac and mesenteric lymph nodes were evaluated and scored. Immunohistochemistry did the parasite load and the MIF immunodetection technique. Granulomatous and plasmocitary inflammatory reaction predominated in the groups with clinical signs (O and S). In the S group, lymphoid atrophy predominated and was associated with high number of granulomas and high parasite load. Comparing the groups, the density of the parasites in the peripheral lymph nodes was significantly different for the S group (P<0.05). The density of the immunolabeling MIF macrophages was higher in the S group and had a significant positive correlation with the parasite load in the popliteal lymph node (P<0.05). In conclusion, the macrophages are the most involved cells, and the protozoan uses the MIF to keep the macrophage in the infection site, helping its survival in the host

Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / Gastrointestinal worms are the main obstacle in the production of sheep. The helminth Haemonchus contortus is the species that most parasites sheep in Brazil. It is located in the abomaso of the host and has a habit of blood feeding. Considering clinical signs, the animals present anemia and hypoproteinemia, which reduces the productivity of animals; it can lead to death and causes serious damage to the activity. Iron supplementation in parasitized sheep assists in the hematopoietic process, although further studies are needed to assess the iron metabolism in such animals. Given the above, the following study aimed to evaluate the effects of injectable iron supplementation in sheep experimentally infected with Haemonchus contortusTwenty-four lambs have been used, divided into four groups, being Group 1 - uninfected animals, Group 2 - animals infected with 10000 third stage larvae of H. contortus and treated with three doses of 20mg/kg of body weight of dextran iron intramuscularly, one dose every seven days, Group 3 - non-infected animals and treated with three doses of 20mg/kg body weight iron dextran intramuscularly, one dose every seven days, and Group 4 - animals infected with 10000 third stage larvae of H. contortus. The experiment has lasted 21 days. Blood samples were collected on days 10 (D10), 17 (D17), 24 (D24), and 31 (D31) after parasitic infection to assess the metabolism of iron (ferritin, transferrin, Serum Iron, saturation index to transferrin, Iron Connection Total Capacity, and Spinal Cord Iron stocks) and erythrocyte (red blood cell count, Hematocrit, hemoglobin, reticulocytes, mean corpuscular hemoglobin concentration). Samples of feces for measuring the number of eggs per gram of feces (EPG) have been obtained at the same experimental time. OPG values were positive in Groups 2 and 4. Regarding hematological indices, groups of animals infected and treated with iron had higher values of hematocrit and hemoglobin compared to the group of animals infected and not treated with iron. The results showed that the spinal cord iron stocks were greater in the groups supplemented with iron. Sheep infected with H. contortus presented exhaustion of iron spinal cord reserves, thus the use of injectable iron aids in maintaining the stock and makes the mineral available for erythropoiesis by improving the organic response of animals against infection. / As verminoses gastro-intestinais é o principal entrave na produção de ovinos. O helminto Haemonchus contortus é a espécie que mais parasita ovinos no Brasil. Localiza-se no abomaso do hospedeiro e possui como hábito a hematofagia. Como sinais clínicos os animais apresentam anemia e hipoproteínemia, o que diminui a produtividade dos animais, pode levar a morte e traz sérios prejuízos para a atividade. A suplementação com ferro em ovinos parasitados auxilia no processo hematopoiético, porém ainda são necessários estudos para avaliar o metabolismo do ferro nestes animais. Diante do exposto, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da suplementação de ferro injetável em ovinos infectados experimentalmente com Haemonchus contortus. Utilizou-se 24 cordeiros divididos em quatro grupos experimentais, sendo o Grupo 1 animais não infectados, Grupo 2 animais infectados com 10000 larvas de terceiro estágio de H. contortus e tratados com três doses de 20mg /Kg de peso vivo de ferro dextrano por via intramuscular, um dose a cada sete dias, Grupo 3 animais não infectados e tratados com três doses de 20mg /Kg de peso vivo de ferro dextrano por via intramuscular, um dose a cada sete dias e Grupo 4 animais infectados com 10000 larvas de terceiro estágio de H. contortus. O período experimental foi de 21 dias. As amostras de sangue foram coletadas nos dias 10 (D10), 17 (D17), 24 (D24) e 31 (D31) pós-infecção parasitária para avaliação do metabolismo do ferro (Ferritina, Transferrina, Ferro Sérico, Índice de saturação à transferrina, Capacidade Total de Ligação do Ferro e estoques de Ferro Medular) e do eritrograma (Contagem de Hemácia, Hematócrito, Hemoglobina, Reticulócitos, Volume Corpuscular Médio e a Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média). Amostras de fezes para quantificar o número de ovos por grama de fezes (OPG) foram obtidas nos mesmos momentos experimentais. Valores de OPG foram positivos somente nos Grupos 2 e 4. Quanto aos índices hematológicos, os grupos de animais infectado e tratados com ferro apresentaram maiores valores de hematócrito e hemoglobina em relação ao grupo dos animais infectado e não tratado com ferro. Os resultados demonstraram que as reservas de ferro medular foram maiores nos grupos suplementados com ferro. Ovinos infectados com H. contortus apresentam exaustão das reservas medulares de ferro, com isso o uso de ferro injetável auxilia na manutenção de estoque e torna o mineral mais disponível para a eritropoiese, melhorando a resposta orgânica dos animais contra à infecção.