Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 14/08/2015 / Inclui referências : f. 81-95 / Área de concentração / Resumo: Em um ramo novo da ciência como a imunologia, poucos modelos são capazes de resistir por tanto tempo quanto o modelo de sinalização dupla, proposto por Bretcher e Cohn em 1970. Atualmente, entende-se que a dupla sinalização atua de forma sinérgica para a ativação dos linfócitos T e que a via do CD28 é apenas uma parte de uma grande rede de controle incluindo diversas outras vias que atuam em conjunto para controlar a ativação de linfócitos. Tanto do ponto de vista funcional, assim como do ponto de vista estrutural, a abordagem da via de CD28-CD80/86 na maioria dos casos tem um enfoque sobre a via de ativação de linfócitos, a qual é bastante descrita enquanto as APCs aparecem apenas como coadjuvantes nessa interação. Essa perspectiva começou a mudar em 2004 quando foi descrito que células dendríticas de camundongo, quando estimuladas com LPS e CD28 sofrem uma ativação e iniciam a secreção de interleucinas. Num contexto no qual o efeito das vias de sinalização sobre os APCs começa a ser compreendido, torna-se importante o estabelecimento de modelos adequados a esse estudo. Frangos são um modelo clássico para o estudo em imunologia, desde o início do desenvolvimento desse campo de conhecimento. Não foi descrita na literatura, até o momento, a sinalização CD28-CD80/86 em macrófagos de aves, as quais podem apresentar diferenças fisiológicas e funcionais quando comparadas às de mamíferos. Desta forma, este estudo pretende estabelecer se os mecanismos de sinalização reversa presentes em mamíferos e aves foi conservado durante a evolução, avaliando ainda a hipótese de que macrófagos possam ser artífices da sinalização reversa, fato observado apenas para células dendríticas. Este trabalho tem como objetivo avaliar a ativação de macrófagos de frango frente ao estímulo com CD28 recombinante. Às células previamente estimuladas com LPS, foram adicionados meios de cultivo com LPS, CD28 e CD28 deletada (com uma deleção em seu sítio MYPPPY de ligação com CD80/86) e os estímulos mensurados através de qPCR para diversas citocinas em diferentes tempos experimentais. Para o primeiro estimulo com LPS, houve uma redução na produção de IL-4, IL-2 e IFN-? e uma alteração sugerida para a expressão reduzida de IL-6, IL-12, IL-1? e aumentada de TNF?. Na segunda estimulação apenas com LPS, pode-se concluir que o ambiente resultante é pró-inflamatório, uma vez que a expressão das interleucinas com características anti-inflamatórias, IL-4 e IL-10, está diminuída ou ausente, enquanto IL-2, IL-18 e IL-12 estão aumentadas. Sugere-se que o estimulo com CD28 produz uma ativação de macrófagos que tem característica pró-inflamatória, porém sem direcionamento M1 ou M2. Essa polarização provavelmente advém de uma interação com os outros atores do sistema imune por diversos mecanismos de troca de informação, como citocinas, quimiocinas e outras moléculas sinalizadoras. Este trabalho mostrou pela primeira vez o mecanismo de sinalização reversa mediado por células apresentadoras de antígeno profissionais em macrófagos de aves. Palavras-chave: imunologia; aves; gallus; macrófago; CD28; sinalização reversa; citocinas. / Abstract: In a new branch of science such as immunology, just a few models are able to resist for as long as the dual signaling model proposed by Bretcher and Cohn in 1970. Currently, it is known that the double signaling acts synergistically to activate T lymphocytes and that the path of CD28 is only one part of a large network control including several other ways that work together to control the activation of lymphocytes. In a functional point of view as well as from a structural point of view, the approach of CD28-CD80 / 86 in most cases has a focus on the activation pathway of lymphocytes, which is detailed described as the APCs appear only with a secondary role in this interaction. This perspective started to change in 2004 when it was reported that mouse dendritic cells when stimulated with LPS and CD28 undergoes activation and start to secrete interleukins. In a context that the effect of signaling pathways on APCs begins to be understood, it is important to establish suitable models in this study. Chickens are a classic model for the study in immunology, since the beginning of development of this field of knowledge. It has not been described in so far, CD28-CD80/86 signaling in avian macrophage, which may have physiological and functional differences compared to mammal ones. Thus, this study aims to establish if the mechanisms of reverse signaling present in mammals has been conserved during evolution and is similar in birds, also evaluating the hypothesis that macrophages can be passive of reverse signaling, which was observed only for dendritic cells. This project aims to evaluate the activation of chicken macrophages front of the stimulation with recombinant CD28. The cells previously stimulated with LPS, received culture media containing LPS, CD28 and deleted CD28 (with a deletion on the MYPPY CD80/86 binding site) the stimuli was measured by qPCR for different cytokines under different experimental times. For the first stimulation with LPS, there was a reduction in the production of IL4, IL2 and IFN-? and a modification on the expression was suggested with an increase for IL6, IL12, IL-1? and decreased for TNF. In the second stimulation with LPS, one may conclude that the resulting environment was pro-inflammatory, since the expression of interleukins with anti-inflammatory characteristics, IL-4 and IL-10, is decreased or absent, while IL-2 IL-18 and IL-12 are increased. It is suggested that CD28 stimulation generate an activation of macrophages that has pro-inflammatory characteristic but without polarization M1 or M2. This bias probably comes from an interaction with other actors of the immune system through several mechanisms of signaling such as cytokines, chemokines, and other signaling molecules. This study showed for the first time the reverse signaling mechanism mediated by professional antigen presenting cells in avian macrophage. Key words: immunology; birds; gallus; macrophage; CD28; reverse signaling; cytokines.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:36:14Z : No. of bitstreams: 1 arenasvelasquez_am_me_araiq.pdf: 997352 bytes, checksum: 9599053b27f7ec5bce201d3d5079009a (MD5) / Trypanosoma brucei é o agente etiológico da tripanossomíase africana ou doença do sono, transmitida por dípteros do gênero Glossina, conhecidos como moscas tsé-tsé. O diagnóstico e tratamento da doença não são satisfatórios, uma vez que para o tratamento está disponível um número de drogas altamente tóxicas e com um efeito limitado, pois dependem da fase da doença, das condições fisiológicas do hospedeiro, da suscetibilidade e variabilidade genética da cepa. Além do alto custo, o tratamento é potencialmente perigoso e está limitado ao surgimento de resistência generalizada aos fármacos utilizados. O diagnóstico é limitado à associação dos sintomas com a doença, muitas vezes é confundido com outras doenças pelo que o paciente não recebe o tratamento adequado. Por isso, tem-se a necessidade de buscar novos fármacos com melhor atividade tripanocida. Neste trabalho, avaliou-se a atividade tripanocida de 38 compostos diferentes e inéditos, como N1,N2-dibenziletano-1,2-diamina (cloridratos de benzil diaminas), N1-benzil,N2-metilferroceniletano-1,2-diamina (cloridratos de diaminas de ferroceno), 2-metoxi/hidroxi-3-(1-alquenil)-1,4-naftoquinonas e seus derivados 2-amina-1,4-naftoquinonas contra as cepas 427 e 29-13 de T. brucei. A eficácia dos compostos foi avaliada pelo método colorimétrico do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoliom]. Os resultados encontrados foram similares aos das atividades metabólicas das células (parasitas e/ou células HepG2 - linhagem de células de hepatoma, usada como modelo para simular funções hepáticas humanas in vitro), sendo o IC50 (metade da concentração inibitória máxima) calculado por regressão linear para cada composto. Da série anterior, o composto cloridrato de... / Trypanosoma brucei is the etiologic agent of sleeping sickness (Human African Trypanosomiasis [HAT]), transmitted by flies of Glossina genus, known as tsetse flies. The diagnostic and treatment of this disease are not satisfactory, since the treatment uses many toxicity drugs with limited effects, because depend on the stage of the disease, morphological diversity, heterogeneous biological behaviour, different clinical courses and the virulence appears to be an intrinsic property of each strain and high genetic variability. Besides the high cost, the treatment is potentially dangerous and limited the emergence of widespread drug resistance. The diagnosis is limited to the association of symptoms with the disease, is often confused with other diseases so the patient does not receive adequate treatment. Thus, the development of new research is necessary in order to generate new drugs with trypanocidal activity. In this work, we evaluated the trypanocidal activity of 38 inedited compounds of N1,N2-dibenzylethane-1,2-diamine hydrochlorides, N1-benzyl,N2-methyferrocenylethane-1,2-diamine hydrochlorides, 2-metoxy/hydroxy-3-(1-alquenyl)-1,4-naphtoquinones and amine derivatives of this compounds (2-amine-1,4-naphtoquinones) against 427 and 29-13 T. brucei parasite strains. The efficacy of these compounds was also measured using the reduction of MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]. The results were similar to the metabolic activity of cells (parasites and/or HepG2 - hepatoma cell line used as a model to simulate human hepatic functions in vitro), being the IC50 (half of the maximum inhibitory concentration) calculated by linear regression for each sample. The compounds N-(ferrocenylmetyl)-N’-(4-metoxybenzyl)ethane-1,2-diamine) hydrochlorides and 2-metoxy-3-(2-phenylethenyl)-1,4-naphtoquinone... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-30Bitstream added on 2014-06-13T19:08:44Z : No. of bitstreams: 1 amorim_ja_me_botib.pdf: 950896 bytes, checksum: 510efe38e747c38b3b0503fe22f6fe0a (MD5) / Tendo em vista a grande similaridade interespecífica, a identificação de muitos sarcofagídeos usando os caracteres morfológicos é complicada e, sob este aspecto, o desenvolvimento e a aplicação de ferramentas moleculares se mostram cada vez mais necessários à resolução taxonômica e sistemática de diversas espécies. Os dípteros da família Sarcophagidae, especialmente os de hábito necrófilo, têm recebido destaque no campo forense devido à constância com que são encontrados associados a cadáveres, podendo contribuir de forma relevante na estimativa do intervalo pós-morte (IPM), descoberta do local e causa da morte, entre outros. No entanto, para que os espécimes coletados sejam usados de forma apropriada na obtenção de informações para auxiliar o trabalho de perícia, é primordial a identificação correta dos organismos, já que o IPM pode ser calculado com base na taxa de desenvolvimento que varia entre as diferentes espécies. Neste estudo, 194 espécies pertencentes à subfamília Sarcophaginae (Diptera), incluídas em 30 gêneros, são listadas levando em conta suas respectivas distribuições geográficas registradas no território brasileiro. Os gêneros que apresentaram uma grande diversidade de espécies foram Oxysarcodexia (24,7%), Lepidodexia (10,9%), Peckia (10,3%) e Dexosarcophaga (8%). Oxysarcodexia amorosa, O. thornax, Peckia (Euboettcheria) collusor, Peckia (Pattonella) intermutans e Sarcodexia lambens são encontradas na maioria dos estados brasileiros. No arquipélago de Fernando de Noronha, além de Nephochaetopteryx calida, que não apresenta até o momento registro de ocorrência para as localidades continentais, foram encontradas espécies de ampla distribuição no Brasil: O.thornax, (Peckia) chrysostoma e Tricharae (Sarcophagula) occidua. Adicionalmente, a análise da variabilidade genética entre representantes de populações de Peckia... / Due to high interspecific similarity, the identification of many sarcophagids by morphological characters is complicated and, in this way, the development and application of molecular tools have been required to address taxonomic and systematic species. The flies of the Sarcophagidae family, especially necrophagous species, have received attention in the forensic field because of the frequence with which they are found associated with cadavers, thus may contribute to estimate the post-mortem interval (:eMI), the discovery of place and cause of death, among other. However, for the specimens collected are used properly in obtaining information to assist the investigation, the correct identification of species is essential, since the PMI can based on the development rate that varies among different species. In this study, 194 species belonging to the Sarcophaginae subtribe (Diptera), included in 30 genus, are listed taking into account their geographic distribution throughout the Brazilian territory. The genus that showed a great species diversity were: Oxysarcodexia (24.7%), Lepidodexia (10.9%), Peckia (10.3%) and Dexosarcophaga (8%). Oxysarcodexia amorosa, 0. thornax, Peckia (Euboettcheria) collusor, Peckia (Pattonella) intermutans and Sarcodexia lambens are found in most Brazilian states, and only 3 of these were recorded in Fernando de Noronha archipelago, including Nephochaetopteryx calida, which until now has no record of occurrence for continental locations. Furthermore, genetic variability analysis among population of Peckia (Pattonella) intermutans (Walker) from Campinas, Jundiai, Mogi Guayu, Ubatuba (all cities located in Sao Paulo State) and Salvador (Bahia State) were performed based on sequences of carboxy-terminal region of the Cytochrome Oxidase I (COl) mitochondrial gene. This latter approach may help to validate a methodology for molecular identification of species... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:11:40Z : No. of bitstreams: 1 santos_kr_me_botfmvz.pdf: 577779 bytes, checksum: f6cb1f6609857301bad4076f3bd221a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / A criação de serpentes em cativeiro vem se tornando atividade cada vez mais relevante, inicialmente para obtenção do veneno para produção dos soros antiofídicos e, mais recentemente, para o estudo de suas propriedades farmacológicas. Esta atividade, porém, tem esbarrado em alguns problemas, dentre os quais estão as doenças parasitárias que podem acometer estes répteis. Em regime de criação semi-extensiva, uma importante alteração observada é a presença de nematódeos do gênero Rhabdias em pulmão de serpentes. Particularmente, em Crotalus durissus terrificus, altas taxas de infecção pulmonar por estes nematódeos têm sido relatadas. Estudos sobre os efeitos da presença destes helmintos nos órgãos respiratórios de serpentes são escassos. O objetivo deste trabalho foi estudar as implicações da presença de nematódeos do gênero Rhabdias no pulmão de serpentes C. d. terrificus, através de avaliação histopatológica, microbiológica e hematológica de serpentes parasitadas e não parasitadas. Na análise histopatológica das amostras de pulmões de serpentes parasitadas observou-se epitélio e parênquima pulmonar, apresentando infiltrado de células granulocíticas e infiltrado mononuclear. Essas alterações também foram observadas em alguns animais não parasitados, mas em menor grau (p < 0,05). Na análise microbiológica de animais parasitados, foram isoladas bactérias gram-negativas das seguintes espécies: Citrobacter divergens, Burlkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia, Proteus vulgaris, Enterobacter sakazakii, Enterobacter ammnigenus, Pseudomonas aeruginosa, Pantoea spp., Providencia rettgeri. Nos pulmões de animais não parasitados foram identificadas as seguintes espécies: Burlkholderia cepacia, Pseudomonas fluorescens, Acinetobacter baumanii. Em relação aos parâmetros hematológicos foi observado aumento... . / Snake breeding in captivity is becoming more and more important, initially to extract venoms for producing antivenom serum and, more recently, to study their pharmacological properties. This activity, however, has encountered some problems, including parasitic diseases that can attack them. In semi-extensive breeding systems, Rhabdias genus nematodes have been found in snake lung. High lung infection rates from these nematodes have been reported in Crotalus durissus terrificus. Studies on the effects of these helminths in the snake respiratory system are scarce. Our objective was to study the implications of nematodes of Rhabdias genus in C. d. terrificus lung through histopathological, microbiological, and hematological analysis of snakes with and without the parasite. Pulmonary parenchyma and epithelium with acidofilic granulocytic and mononuclear infiltrates were observed in histopathological analysis of parasite infested snake lung. These alterations were also observed in some non infested animals, but in a smaller degree (p<0.05). Microbiological analysis of infested animals revealed gram-negative bacteria: Citrobacter divergens, Burlkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia, Proteus vulgaris, Enterobacter sakazakii, Enterobacter ammnigenus, Pseudomonas aeruginosa, Pantoea spp., Providencia rettgeri. In non infested lungs, the following species were indentified: Burlkholderia cepacia, Pseudomonas fluorescens, Acinetobacter baumanii. In relation to hematological parameters, increased plasmatic protein, decreased lymphocytes and normal red blood cell values were observed in parasite infested animals. We concluded that the nematodes of the genus Rhabdias cause significant health problems in snakes and so, all infected animal should be treated when they are maintained in captivity.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-13Bitstream added on 2014-06-13T20:11:41Z : No. of bitstreams: 1 ramalho_aco_me_botfmvz.pdf: 342562 bytes, checksum: a6ecc38c53cead55d2426fd3f3ffcb1a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo relata a ocorrência de helmintos na espécie exótica Tupinambis merianae, e nas espécies endêmicas Trachylepis atlantica e Amphisbaena ridleyi procedentes do arquipélago de Fernando de Noronha, Estado do Pernambuco, Brasil. Ao todo nove espécies de helmintos foram identificadas, principalmente, no trato digestivo e órgãos acessórios, com as seguintes prevalências (P) e intensidade média de infecção (IMI): T. merianae - Diaphanocephalus galeatus (P=96%; IMI=20,5), Spinicauda spinicauda (P=100%; IMI=197,8) e Oochoristica iguanae (P=20%; IMI=4,4); T. atlantica - Moaciria alvarengai (P=20%; IMI=1,0), S. spinicauda (P=92%; IMI=22,1), Mesocoelium monas (P=4%; IMI=3,0), Platynosomum sp. (P=8%; IMI=7,0) e Oochoristica travassosi (P=24%; IMI=1,7); e A. ridleyi - Aplectana albae (P= 96%; IMI= 143,4), Thelandros alvarengai (P=8%; IMI=1,0), M. monas (P=44%; IMI=2,8), Platynosomum sp. (P=36%; IMI= 13,8) e Oochoristica travassosi (P=56%; IMI=2,6). Em T. merianae foi observado que mais de 80% dos animais possuíam associação entre duas espécies de helmintos. Em T. atlântica o parasitismo foi monoespecífico em 50% dos animais, mas a associação entre dois parasitas também foi alta (41.7%). Em A. ridleyi houve maior dispersão de associação, foi observado desde parasitismo monoespecífico até associação entre 5 parasitas. A helmintofauna observada neste trabalho permite concluir que helmintos podem ser carreados com seus hospedeiros quando introduzidos numa nova localidade, e também que os helmintos introduzidos podem infectar os animais endêmicos dessa nova localidade. / This study reports the occurrence of helminths in the introduced specie Tupinambis merianae, and in the endemic species Trachylepis atlantica and Amphisbaena ridleyi from Fernando de Noronha archipelago, State of Pernambuco, Brazil. Nine species of helminths were found mainly in the digestive tract and accessory organs, with the follow prevalence (P) and mean infection intensity (MII): T. merianae - Diaphanocephalus galeatus (P=96%, IMI=20.5), Spinicauda spinicauda (P=100%, IMI=197.8) and Oochoristica iguanae (P=20%, MII=4.4); T. atlantica - Moaciria alvarengai (P=20%, MII=1.0), S. spinicauda (P=92%, MII=22.1), Mesocoelium monas (P=4%, MII=3.0), Platynosomum sp. (P=8%, MII=7.0) and Oochoristica travassosi (24%, MII=1.7); and A. ridleyi - Aplectana albae (P= 96%, MII= 143.4), Thelandros alvarengai (P=8%, MII=1.0), M. monas (P=44%, MII=2.8), Platynosomum sp. (P=36%; MII= 13.8) and O. travassosi (P=56%; MII=2.6). In T. merianae was observed that more than 80% of the animals had association between 2 helminth species. In species T. atlantica the parasitism was monospecific in 50% of specimens, but association between 2 parasites also was high (41.7%). In A. ridleyi there was greater dispersion of association, and monospecific parasitism until association among 5 parasites were observed. The helminth fauna observed allowed to conclude that helminthes can be carried together with their host when they are introduced in a new geographical place and also that these introduced helminthes can infect endemic or native hosts.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-20Bitstream added on 2014-06-13T19:30:26Z : No. of bitstreams: 1 katagiri_s_me_botfmvz.pdf: 167133 bytes, checksum: ef0b4cbbb690eba49ecb859a6ee7a778 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As técnicas coproparasitológicas de concentração por sedimentação e por flutuação e o kit TF-Test® foram utilizadas na investigação da epidemiologia dos parasitas gastrintestinais de cães no Estado de São Paulo. Amostras de fezes de 129 cães errantes e de 125 domiciliados foram colhidas de outubro de 2004 a setembro de 2005 e processadas de acordo com os protocolos do kit TF Test® e dos métodos de centrífugo-sedimentação e centrífugo-flutuação. Os seguintes parasitas e suas respectivas freqüências foram detectados: Ancylostoma spp. (38,2%), Giardia sp. (16,9%), Toxocara canis (8,7%), Tnchuns vulpis (7,1%), Isospora spp. (3,5%), Sarcocystís spp. (2,7%) e Dipy!idium caninum (2,4%). Dos 132 animais parasitados, 79 apresentaram parasitismo único e 53 estavam parasitados por dois ou mais gêneros e/ou espécies. Em cães errantes a prevalência de Ancylostoma spp., T. canis e Giardia sp. e a ocorrência de poliparasitismo foi maior (P < 0,01) que em animais domiciliados. Não houve diferença na freqüência de parasitas intestinais relacionada ao sexo, raça ou ao tratamento anti-helmíntico dos animais (P > 0,05), no entanto a freqüência de T. canis foi maior (P < 0,05) em cães jovens. Com relação à sazonalidade, a detecção de cistos de Giardia sp. foi mais freqüente nos meses de outubro a março. A sensibilidade diagnóstica do método de centrífugo-flutuação foi maior para todos os parasitas intestinais diagnosticados, porém somente no caso de Ancylostoma spp. essa diferença (P <0,05) se expressou em termos de uma maior freqüência de detecção de cães infectados. O elenco de parasitas diagnosticados na região estudada faz com que a técnica de centrifugo-flutuação com sulfato de zinco seja a mais apropriada tanto para os estudos epidemiológicos como para o diagnóstico individual, especialmente nas infecções subclínicas. / The sedimentation and flotation procedures for concentration of fecal specimens and the commercial device TF were used, in an epidemiological investigation of gastrointestinal parasites of dogs in São Paulo state. Fecal samples from 129 stray dogs and 125 dogs with an owner were collected from October 2004 to September 2005. AlI samples were concentrated by the sedimentation and flotation methods and by TF-Test® device. The following parasites, and their respective frequency were diagnosed in fecal samples : Ancylostoma spp. (38,2%), Giardia sp. (16,9%), Toxocara canis (8,7%), Tnchuris vulpis (7,1%), Isospora spp. (3,5%), Sarcocystis spp. (2,7%) and Dipylidium caninum (2,4%). Fifty-three out of 132 infected animais had mixed infection with two or more parasite genera. The prevalence of Ancy!ostoma spp., 1 canis and Giardia sp. as well as the occurrence of mixed infections were significantly higher in stray dogs (P <0,01) than in dogs with an owner. No effect of gender, breed and anti-helminthic treatment (P> 0,05) on the parasite frequency was observed, but the frequency of T. canis was higher (P < 0,05) in young animais. Giardia sp. cysts were more frequently detected from October to March. The centrifugation-flotation method was generally more accurate in the diagnosis of ali intestinal parasites of dogs, but only for Ancylostoma spp. this difference was observed in terms of prevalence. The species of parasites found in the studied region make the zinc sulfate flotation the most appropriate method not only to epidemiological studies, but also to individual diagnosis, speciaily in subciinical infections.

Orientadora : Profª Drª Giseli Klassen / Coorientadora : Profª Drª Edneia A. S. R. Cavalieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa: Curitiba, 29/03/2017 / Inclui referências : f. 52-58 / Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer mais incidente em cadelas não castradas e dentre os fatores envolvidos em sua patogênese está a exposição ao estrógeno e a ação de seu receptor. O receptor de estrógeno-? (RE?) é uma proteína, codificada pelo gene ESR1, amplamente utilizada como marcador molecular de prognóstico para o câncer de mama em mulher, porém na cadela ainda é pouco utilizado. Um dos mecanismos envolvidos na regulação do gene ESR1 em neoplasias mamárias em mulheres é a metilação do DNA, um evento epigenético onde há a adição de um grupamento metil em citosinas ao lado de guaninas. Nos últimos anos vem aumentando o número de trabalhos investigando a expressão da proteína RE? em cadelas, entretanto, ainda são poucos os estudos buscando entender os mecanismos moleculares de regulação do gene ESR1 nestes animais. Neste trabalho, foi avaliada a expressão do gene ESR1 e da proteína em amostras de mama normal, tumores mamários benignos e malignos, bem como verificada a influência da metilação na regulação da expressão deste gene. Neste estudo foram utilizadas quatro amostras de mama normal, oito tumores benignos e nove malignos. Observou-se uma menor expressão do gene ESR1 (p < 0,05) e da proteína RE? (p=0,0037) nos tumores malignos em relação às mamas normais e aos tumores benignos. Embora a correlação encontrada entre mRNA e proteína seja forte e positiva (rho=0,72 e p < 0,05), três das seis amostras RE? negativas (escore zero) apresentaram níveis de mRNA semelhantes aos das amostras RE? positivas classificadas como escore 2 na imuno-histoquímica. Os resultados do sequenciamento evidenciaram um baixo percentual de metilação, sendo observados 2,5% no grupo de mamas normais, 1,9% no grupo receptor de estrógeno positivo e 2,6% no grupo receptor de estrógeno negativo, não havendo diferença estatística entre os grupos (p>0,05). Como não foi evidenciada diferença significativa na metilação entre os três grupos é possível inferir que no câncer de mama canino o gene ESR1 provavelmente não é silenciado por metilação, entretanto estudos com maior número amostral são necessários. Palavras chave: câncer de mama canino, receptor de estrógeno ?, ESR1, metilação do DNA, epigenética / Abstract: The mammary cancer is the most prevalent cancer type in no spayed bitches. Exposure to estrogen and its receptor action is a factor involved in mammary carcinogenesis. The estrogen receptor-? (ER?) is a protein encoded by the gene ESR1 widely used as prognostic biomarker in women breast cancer but poorly used in canine mammary tumor. The DNA methylation is a regulatory mechanism of the gene ESR1 in women breast cancer. It is an epigenetic event where the methyl group is added to a cytosine next to a guanine. In the past few years it has been increasing the number of studies about the ER? expression in bitches, however it still few researches investigating the molecular mechanisms of the ESR1 gene regulation in these animals. The goal of this study was to evaluate the protein and mRNA expression of the ESR1 gene in samples of normal mammary gland, benign and malignant tumors and identify the role of DNA methylation in this gene regulation. It was used samples of four normal mammary gland, eight benign tumors and nine malignant tumors. It was observed a significant lower expression of ER? mRNA (p<0.05) and protein (p=0,0037) in malignant tumors when compared to normal mammary glands and to benign tumors. Although the correlation between mRNA and protein levels was strong and positive (rho=0,72 e p<0,05), three of the six ER? negative samples (score zero) presented mRNA levels similar to ER? positive samples classified as score 2 by immunohistochemistry. The sequencing results showed a low methylation percentage in all samples: 2,5% in normal mammary gland group, 1,9% in positive estrogen receptor group and 2,6% in negative estrogen receptor group. It was not observed significant difference of methylation among the groups (p>0,05). We can infer that in canine mammary tumors the gene ESR1 probably is not silenced by DNA methylation. Further studies with higher number of samples are needed. Key words: canine mammary cancer, estrogen receptor ?, ESR1, DNA methylation, epigenetic

Orientadora : Profª Drª Andréa Emilia Marques Stinghen / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 02/08/2013 / Inclui referências / Área de concentração: Microbiologia / Resumo: O p-cresol (PC) e seu conjugado p-cresilsulfato (PCS) sao toxinas uremicas de baixo peso molecular que quando ligadas a proteinas, sobretudo a albumina, podem desencadear via NF-ƒÈB a producao da quimiocina monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1). Essa quimiocina e responsavel pela quimioatracao de monocitos para a camada intima do vaso durante os eventos que precedem a aterosclerose. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi investigar in vitro o papel do PC e PCS na expressao de MCP-1, via fator de transcricao NF-ƒÈB p65. O PCS foi sintetizado a partir da sulfatacao do PC com acido clorosulfonico e caracterizado por cromatografia de camada delgada (CCD). As concentracoes de PC e PCS utilizadas nos experimentos seguiu o preconizado pelo European Group of Uremic Toxins (EuTox). Sendo assim, utilizaram-se as concentracoes normais, PC1 (0,60 mg/L) e PCS1 (2,87 mg/L), minimas uremicas PC2 (20,10 mg/L) e PCS2 (15,60 mg/L) e maximas uremicas PC3 (40,70 mg/L) e PCS3 (47,20 mg/L). Como modelo experimental foram utilizadas celulas musculares lisas humanas (VSMC) extraidas atraves de digestao enzimatica de veia de cordao umbilical. A fim de avaliar a viabilidade das celulas frente as toxinas foi realizado o ensaio de MTT. Para verificar a expressao de MCP-1, as celulas foram tratadas com PC e PCS em cinetica de 0 e 3 horas nas concentracoes descritas acima. Para fins de comparacao, as VSMC tambem foram tratadas com 1 ƒÊg/mL de lipopolissacarideo (LPS), outra conhecida toxina uremica de baixo peso molecular. Todos os ensaios foram realizados na presenca e ausencia de inibidor da via NF-ƒÈB p65. Atraves do ensaio de MTT verificou-se que nao houve diferenca significativa na viabilidade celular entre o controle e todas as concentracoes testadas de PC e PCS. As VSMC expostas a PC2 e PC3 produziram niveis significativos de MCP-1 apos 3h de tratamento (149,8 } 16 pg/mL, p<0,001 e 143,5 } 28,7 pg/mL, p<0,05 respectivamente) quando comparados ao tempo 0h. PCS3 estimulou de forma mais intensa a producao de MCP-1 do que as VSMC tratadas com PC3 (162,7 } 7,5 pg/mL vs 143,7 } 28 pg/mL, p<0,005) em 3h. Na presenca do inibidor de NF-ƒÈB p65, houve uma diminuicao significativa na producao de MCP-1 apos o tratamento por 3h com PC2 (149,8 } 16 pg/mL vs 36,4 } 10,5 pg/mL; p<0,001) e PC3 (143,6 } 28 pg/mL vs 50 } 18 pg/mL; p<0,05). Apos tratamento com PCS1 houve diferenca significativa nos niveis de MCP-1 na presenca de inibidor (156,49 } 15,9 pg/mL vs 102,3 } 4,6 pg/mL; p<0,05). Apos 3h de tratamento com LPS, nao houve producao significativa de MCP-1 em relacao ao controle (35,5 } 8,9 pg/mL vs 34 } 8,9 pg/mL). Ainda, na presenca do inibidor, verificou-se uma leve diminuicao nos niveis de MCP-1, porem nao significativa (35,5 } 8,9 pg/mL vs 25,6 } 6,5 pg/mL). Com base em nossos resultados, concluimos que apesar de PC e PCS nao serem citotoxicas, induzem a expressao de niveis significativos de MCP-1, sendo o PCS mais efetivo na inducao da expressao de MCP-1 que seu precursor PC. Assim como PC e PCS, LPS tambem ativa a producao de MCP-1 via NF-ƒÈB. Desta forma sugerimos que a inibicao da via NF-ƒÈB p65 poderia diminuir niveis de MCP-1 e consequentemente a progressao do desenvolvimento da aterosclerose na DRC. Palavras chave: doenca renal cronica, toxicidade uremica, p-cresol, p-cresilsulfato, LPS, MCP-1 e NF-ƒÈB. / Abstract: p-cresol (PC) and its conjugate p-cresyl sulfate are low molecular weight uremic toxins that when attached to proteins, especially albumin, can trigger via NF-êB the production of chemokine monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1). This chemokine is responsible for monocytes chemoattraction to the vessel intimal layer during the events that precede atherosclerosis. Thus, the aim of this study was to investigate the in vitro role of PC and PCS in MCP-1 expression via transcription factor NF-êB p65. PCS was synthesized from PC sulfation with chlorosulphonic acid and characterized by thin layer chromatography (TLC). The PCS and PC concentrations were used according to the recommendations of the European Uremic Toxins Work Group (EuTox). So we used normal, PC1 (0.60 mg/L) and PCS1 (2.87 mg/L), uremic minimum PC2 (20.10 mg/L) and PCS2 (15.60 mg/L) and maximum uremic concentrations PC3 (40.70 mg/L) and PCS3 (47.20 mg/L). As experimental model we used human smooth muscle cells (VSMC) extracted by enzymatic digestion of umbilical cord vein. In order to assess the cells viability after toxins treatment, MTT assay was performed. To verify MCP-1 expression, cells were treated with PC or PCS in a kinetics of 0 and 3 h using the concentrations described above. For comparison purposes, the VSMC were also treated with lipopolysaccharide (LPS) (1 ìg/mL), other low molecular weight uremic toxin. All assays were performed in the presence and absence of NF-êB p65 inhibitor pathway. MTT assay showed that there was no significant difference in cell viability between control and all concentrations of PC and PCS tested. VSMC exposed to PC2 and PC3 produced significant levels of MCP-1 after 3h treatment (149.8 ± 16 pg/mL, p<0.001, and 143.5 ± 28.7 pg/mL, p<0.05 respectively) when compared to time 0h. PCS3 stimulated more intensively MCP-1 production in VSMC treated with the PC3 (162.7 ± 7.5 pg/mL vs 143.7 ± 28 pg/mL, p<0.005) after 3h. In the presence of NF-êB p65 inhibitor, there was a significant decrease in MCP-1 production after 3h treatment with PC2 (149.8 ± 16 pg/mL vs 36.4 ± 10.5 pg/mL, p<0.001) and PC3 (143.6 ± 28 pg/mL vs 50 ± 18 pg/mL, p<0.05). After PCS1 treatment there was a significant difference in MCP-1 levels in the presence of inhibitor (156.49 ± 15.9 pg/mL vs 102.3 ± 4.6 pg/mL, p<0.05). Finally after 3h treatment with LPS, there was no significant production of MCP-1 compared to control (35.5 ± 8.9 pg/mL vs 34 ± 8.9 pg/mL), and , in the presence of the inhibitor, there was a slightly decrease in MCP-1 levels, but not significantly (35.5 ± 8.9 pg/mL vs. 25.6 ± 6.5 pg/mL). Based on our findings, we concluded that in spite of PCS and PC are not cytotoxic, they induce significantly MCP-1expression and PCS is more effective than its precursor PC. As PC and PCS, LPS also activates MCP-1 production via NF-êB. Therefore, we suggest that the inhibition of NF-êB could decrease MCP-1 levels and hence the development of atherosclerosis progression of CKD. Keywords: chronic kidney disease, uremic toxicity, p-cresol, p-cresyl sulfate, LPS, MCP-1 and NF-êB.

Orientadora : Profª Drª Giseli Klassen / Co-orientadora : Profª Drª Edneia A. S. R. Cavalieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa: Curitiba, 02/12/2014 / Inclui referências / Área de concentração / Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer mais frequente entre as mulheres em todo o mundo. A enzima MMP-2 é uma metaloprotease capaz de degradar o colágeno tipo IV, um dos principais constituintes da matriz extracelular (MEC). Sua função é amplamente descrita por atuar no mecanismo de metástases em diversos tipos de câncer. Estudos recentes demonstraram que a linhagem tumoral de mama MCF7 possui o gene MMP2 regulado por metilação do DNA. Além disso, alguns estudos têm demonstrado que a fibronectina, uma importante proteína constituinte da MEC, é capaz de promover a expressão de MMP-2 em linhagens tumorais de mama. Resultados recentes do nosso grupo mostraram que a linhagem tumoral MCF7 quando tratada com fibronectina por 5 horas sofre 30% de desmetilação da região promotora do gene MMP2. Entretanto, observou-se também que tal processo foi transitório, porque houve a remetilação parcial do promotor quando o estímulo foi retirado. Ainda, a fibronectina induziu o aumento de uma marca de histona no promotor de MMP2 que sinaliza para a ativação da transcrição gênica. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi dar continuidade a esse estudo, avaliando a regulação epigenética do gene MMP2 em linhagens tumorais de mama após o cultivo com fibronectina em diferentes tempos. Para isso, células da linhagem MCF7 submetidas ao tratamento com fibronectina por 8, 12 e 24 horas, e da linhagem MDA-MB-436 por 24 horas, tiveram seus níveis de expressão de MMP2, metilação do DNA e modificações de histonas do promotor do gene avaliados. Na linhagem MCF7, o tratamento por 8, 12 e 24 horas foi capaz de promover o aumento da expressão de MMP2 em 7, 25 e 9 vezes, respectivamente, comparado com o controle, assim como a redução da metilação do promotor de 90% (controle) para 70%, 40% e 52%, respectivamente. O tratamento por 24h também promoveu o aumento da marca de ativação gênica H3K4me3. Ainda, após 12h de cultivo com fibronectina, a linhagem MCF7 aumentou sua capacidade migratória. A fim de verificar se o efeito observado não era exclusivo da linhagem MCF7, foi incluída no estudo a linhagem MDA-MB-436 que foi submetida ao tratamento por 24h, e apresentou aumento na expressão gênica de MMP2 (4 vezes) e redução da metilação do promotor (de 90% para 22%). Por fim, as células tratadas foram mantidas em cultivo sem a fibronectina para avaliar a estabilidade das modificações. Essas células, chamadas de recultivo, apresentaram uma redução na expressão gênica e aumento na metilação do promotor quando comparadas com as células logo após os tratamentos, confirmando o efeito transitório da fibronectina nos eventos epigenéticos, que já tinha sido observado após 5 horas de tratamento. Esses dados corroboram e complementam os mecanismos observados pelo nosso grupo de pesquisa e contribuem para a compreensão dos mecanismos epigenéticos que regulam a expressão de um importante gene associado às metástases tumorais. Palavras-chave: Câncer de mama, MMP-2, epigenética, metilação do DNA. / Abstract: Breast cancer is the most common cancer worldwide among women. The MMP- 2 enzyme is a metalloprotease capable of degrading type IV collagen, a major constituent of the extracellular matrix (ECM). Its function is widely described by acting in the mechanism of metastasis in various cancers. Recent data has shown that the MCF7 breast tumor cell line has the MMP2 gene regulated by DNA methylation. In addition, some studies have shown that fibronectin, an important constituent of the extracellular matrix, is capable of promoting MMP-2 expression in breast tumor cell lines. Recent results from our group showed that fibronectin was able to induce MMP2 expression by a 30% decrease in its promoter methylation in MCF7 tumor cell line. However, it was also noted that this process was transient, because a partial promoter remethylation was observed when the stimulus was removed. Moreover, a histone marker for an open chromatin conformation was significantly increased. Therefore, the aim of this work was to continue evaluating the epigenetic regulation of the MMP2 gene after cultivation of breast tumor cell lines with fibronectin at different times. To this reason, MCF7 cells subjected to treatment with fibronectin for 8, 12 and 24 hours and MDA-MB-436 cells subjected to treatment for 24 hours, were evaluated by the levels of MMP2 expression, gene promoter DNA methylation and histone modifications. In the MCF7 cell line, treatments for 8, 12 and 24 hours were able to promote 7, 9 and 25-fold increase in MMP2 expression, respectively, compared with the mock. In addition, promoter methylation was reduced from 90% (control) to 70%, 40% and 52%, respectively. Treatment for 24h also promoted an increase of the histone open chromatin conformation marker H3K4me3. Moreover, the migratory capacity of MCF7 cells treated for 12h was increased. In order to confirm the fibronectin effect, the MDA-MB-436 cell line was subjected to 24h fibronectin treatment, which showed an increase in MMP2 gene expression (4-fold) and a reduction of promoter methylation (from 90% to 22%). Finally, the treated cells were kept in culture without fibronectin to evaluate the modifications stability. These cells (recultivation) showed a gene expression reduction and promoter methylation increased when compared to the cells after treatments, confirming the fibronectin transient effect observed after the 5h treatment. These data support and complement the mechanisms observed by our research group and contribute to understand the epigenetic mechanisms that regulate the expression of an important gene associated with tumor metastasis. Keywords: Breast cancer, MMP-2, epigenetics, DNA methylation.

Orientadora : Profª Drª Edilene Alcântara de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica. Defesa: Curitiba, 11/10/2011 / Inclui referências : f. 55-70 / Resumo: Existe uma preocupação com a poluição ambiental provocada pelo descarte de resíduos urbanos, principalmente o lodo de esgoto (LE). Uma alternativa seria utilizá-lo na agricultura como fertilizante. A Resolução Nº375 do CONAMA define critérios para o uso agrícola de LE em relação a sua contaminação por patógenos. O objetivo deste trabalho foi determinar a viabilidade dos ovos de helmintos pesquisados em lodo de esgoto bruto (LB) e caleado (LC), solo com lodo e alfaceadubada com este solo. O lodo de esgoto foi obtido na Estação de Tratamento de Esgoto Belém (ETE-Belém) em quatro amostras (primavera, verão, outono e inverno). O alface foi cultivado em casa-de-vegetação em vasos com três tipos de solo: controle (solo+húmus de minhoca); solo+LB; solo+LC, com cinco repetições cada. O solo foi analisado em três profundidades: 5 cm; 10 cm e 15cm após colheita dos pés de alface. Para detecção e viabilidade dos ovos de helmintos foi utilizado o método de Yanko modificado por Thomaz-Soccol et al. (2000). A alface foi analisada também pelo método de Oliveira e Germano (1992). A análise estatística foi realizada pelo método não paramétrico de Mann-Whitney. Não foram encontrados ovos de helmintos nas amostras de alface cultivadas em nenhum dos solos, nos dois métodos. No lodo de esgoto coletado no verão foi detectado maior número de ovos de helmintos por grama de matéria seca (24,08 ovos/gMS no LB e 6,02 ovos/gMS no LC) e maior variabilidade de helmintos: Ascaris lumbricoides (18,86 no LB e 4,86 no LC);Hymenolepis diminuta (2,24 no LB e 0,02 no LC) Toxocara canis (1,64 no LB e 0,24 no LC);Trichuroidea (0,5 no LB e 0,36 no LC);Trichuris vulpis (0,45 no LB e 0,28 no LC) e Trichuris trichiura (0,4 no LB e 0,26 no LC).Porém, o maior percentual de ovos viáveis de helmintos foi no inverno (33,3% LB; 31,5% LC), seguido pela primavera (16,7% LB; 23,1% LC), outono (27,5% LB; 3,57% LC) e verão (14,46% LB; 2,99% LC). Não houve diferença estatística significativa entre a média de ovos de helmintos encontrados no solo+LC e controle, em nenhuma profundidade, tanto para ovos viáveis quanto para o total de ovos de helmintos, em nenhuma estação do ano. Já no solo+LB a média de ovos de helmintos foi de 0,260 ovos/gMS, sendo significativamente superior (p=0,008) ao solo+LC (0,033ovos/gMS). No solo controle, não houve diferença estatística quando comparadas as profundidades, porém, no verão e outono observa-se um aumento do número de ovos conforme aumenta a profundidade. No outono, no solo+LB, a média total de ovos de helmintos na profundidade 15 cm (0,359) foi superior e significativo ao da profundidade de 5 cm (0,185). No solo+LC, na primavera, nas profundidades 10 cm e 15 cm, as médias de ovos viáveis (0,151 e 0,172) e totais (0,289 e0,304)encontrados foram significativamente superiores àquelas encontradas na profundidade de 5 cm (0,005 viáveis; 0,099 totais). Nas demais estações não foi encontrado o mesmo padrão. Nas condições estabelecidas para este trabalho, quanto maior a profundidade do solo (15cm), maior foi a chance de encontrar os ovos de helmintos. Podemos concluir que, embora no verão tenha sido encontrado maior número de ovos de helmintos, foi no inverno que ocorreu o maior percentual de viabilidade. Com este trabalho, não podemos concluir que a alface adubada com lodo não representa risco,apesar de não terem sido encontrados ovos de helmintos nesta. São necessárias mais pesquisas em condições de campo para acrescentar dados que permitam, após ampla discussão dos pesquisadores, analisar o impacto para a contaminação ambiental e para a Saúde Pública. Palavras chave: Lodo de esgoto, Helmintos, Alface. / Abstract: There is concern about environmental pollution caused by the disposal of urban waste, mainly sewage sludge (LE). An alternative would be to use it in agriculture as fertilizer. Resolution No. 375 of CONAMA defines criterias for the agricultural use of LE in relation to its contamination by pathogens. The objective of this work was to determine the viability of the helminth eggs investigated in crude sewage sludge (LB) and litter (LC), soil with sludge and lettuce fertilized with this soil. The sewage sludge was obtained from the Belém Sewage Treatment Plant (ETE-Belém) in four samples (spring, summer, autumn and winter). The lettuce was cultivated in greenhouses in pots with three types of soil: control (soil + worm humus); soil + LB; soil + LC, with five replicates each. The soil was analyzed in three depths: 5 cm; 10 cm and 15 cm after harvesting lettuce feet. For the detection and viability of helminth eggs was utilized the Yanko method modified by Thomaz-Soccol et al. (2000). The lettuce was also analyzed by the method of Oliveira and Germano (1992). Statistical analysis was performed using the non-parametric Mann-Whitney method. No helminth eggs were found in the lettuce samples grown in any of the soils, in both methods. In the sewage sludge collected in the summer, a greater number of helminth eggs per gram of dry matter (24.08 eggs/gMS in LB and 6.02 eggs/gMS in LC) and greater variability of helminths were detected: Ascaris lumbricoides (18, 86 in LB and 4.86 in LC), Hymenolepis diminuta (2.24 in LB and 0.02 in LC) Toxocara canis (1.64 in LB and 0.24 in LC), Trichuroidea (0.5 in LB and 0,36 in LC); Trichuris vulpis (0.45 in LB and 0.28 in LC) and Trichuris trichiura (0.4 in LB and 0.26 in LC). However, the highest percentage of viable helminth eggs was in winter (33,3% LB, 31,5% LC), followed by spring (16,7% LB, 23,1% LC), autumn (27,5% LB, 3,57% LC) and summer (14,46% LB, 2,99% LC). There was no statistically significant difference between the mean number of helminth eggs found in the soil + LC and control, at no depth, for both viable eggs and total helminth eggs, in any season of the year. In the soil + LB the mean number of helminth eggs was 0,260 eggs/gMS, being significantly higher (p = 0.008) to the soil + LC (0,033 eggs/gMS). In the control soil, there was no statistical difference when comparing the depths, however, in the summer and autumn is observed an increase in the number of eggs as the depth increases. In autumn, in the soil + LB, the total average of helminth eggs at depth 15 cm (0,359) was superior and significant to the depth of 5 cm (0.185). In the soil + LC, in the spring, in depths 10 cm and 15 cm, the means of viable eggs (0,151 and 0,172) and total (0,289 and 0,304) found were significantly higher than those found in the depth of 5 cm (0.005 viable, 0.099 total). In the other stations the same pattern was not found. Under the conditions established for this work, the greater the soil depth (15cm), the greater the chance of finding helminth eggs. We can conclude that although in the summer we found more eggs of helminths, it was in winter that the highest percentage of viability occurred. With this work, we can not conclude that lettuce fertilized with sludge does not represent a risk, even though no helminth eggs were found in it. Further research is needed in field conditions to add data that allow, after extensive discussion of the researchers, to analyze the impact for environmental contamination and Public Health. Key words: Sewage sludge, Helminths, Lettuce.